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UNIVERSIDAD
ANDINA DE
CUSCO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGA
GUA DE PRACTICAS DE
BIOLOGA GENERAL Y DE LA
BOCA
JOS FRANCO
NAVIA
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2010 - I1
Gua de Practicas
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INDICE DE PRACTICAS
PROLOGO
PAG. a
INFORMACIN GENERAL
PAG. aa
INSTRUMENTOS
LABORATORIO
PAG. 08
CARBOHIDRATOS Y LPIDOS
PAG. 13
PROTENAS Y ENZIMAS
PAG.
18
CIDOS NUCLEICOS
PAG.
23
MICROSCOPIA OPTICA
PAG.
28
PAG.
35
PAG.
44
PAG
52
PAG
60
APARATOS
DE PAG. 05
DIVISIN MEIOTICA
ESPERMATOGENESIS.
65
71
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PROLOGO
Gua de Practicas
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INFORMACIN GENERAL
Las practicas de la asignatura de Biologa general y de la
Boca, estn programadas como complemento de la asignatura
terica impartida en la curricular bsica de la carrera profesional
de estomatologa. El laboratorio es curso experimental diseado
para la mencionada carrera el mismo que introduce a las tcnicas
bsicas de manejo de equipo de laboratorio y material biolgico;
adems, motiva al estudiante a la observacin y a la bsqueda de
respuestas a travs del mtodo cientfico.
El laboratorio de
Biologa General y de la Boca es complemento del curso de
teora; por consiguiente es obligatorio que el estudiante
desarrolle ambos en forma paralela.
Las prcticas estn conformadas por 14 experimentos
secuenciales correlacionados en orden didctico que tienen como
objetivos servir de complemento a los diferentes captulos
tericos.
En trminos generales el peso de las prcticas constituirn
un 30% que ser complementado con los 70% de la teora, para
la evaluacin se tomara en cuenta los siguientes aspectos:
a). Exmenes prcticos:
02
Parciales
b). Informes de Practicas:
14
Informes
c). Asistencia :
Obligatoria
d). Seminario de Practica :
Opcional
e). La nota final ser el promedio de todas las evaluaciones,
siendo la nota aprobatoria mnima de 14 puntos y la mxima de
20 puntos.
Los informes de cada prctica se entregaran en un cuaderno
anillado
Desarrollado ntegramente a mano alzada, no se aceptaran
trabajos en
Computadora.
Asistencia obligatoria con mandil blanco y materiales
requeridos.
Seminarios y trabajos grupales son opcionales
f). Se ha creado la pagina:
http://biologiagenralestomatologia.ning.com/ que navega en
INTERNET, en la cual se ha colgado una biblioteca digital,
imgenes, blogs, videos y material didctico, exclusivo para el
uso de los alumnos, el cual es utilizado permanentemente para
motivar e incentivar el mejor rendimiento acadmico.OBJETIV0S
DE LAS PRACTICAS:
1.- Complementar los conocimientos tericos, con
demostraciones experimentales que ratifican los diferentes
fenmenos biolgicos en los seres vivvos.
2.- Ensear las practicas con un enfoque de investigacin, en el
que la observacin, planteamiento de hiptesis y la
experimentacin forman parte del mtodo mismo de enseanza.
3.- Capacitar al alumno en el adecuado manejo de aparatos y
reactivos de laboratorio.
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AGRADECIMIENTOS:
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I Sesin de
Laboratorio:
Normas de
Laboratorio.
Materiales e
Instrumentos de
Laboratorio.
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NORMAS DE LABORATORIO
INGRESO AL LABORATORIO:
* Los alumnos (as) deben esperar fuera del laboratorio hasta que llegue el maestro o
instructor (a). Una vez dentro del laboratorio los alumnos debern solicitar permiso al
instructor (a) para salir de este.
* Si el maestro o instructor, no se presentan al laboratorio, las prcticas no podrn
realizarse. Es responsabilidad de los tcnicos administrativos (as) que los alumnos
permanezcan fuera del laboratorio hasta la llegada del instructor, as como la de
comunicar al Departamento, por escrito la razn de la suspensin de prcticas.
* Una vez que el instructor ingrese al laboratorio se cerrarn las puertas y no se
permitir el acceso de alumnos.
* Al inicio del curso el alumno (a) deber aportar el material que le sea solicitado. El
material requerido, de acuerdo a la prctica.
* Los alumnos (as) que no aporten el material que les sea solicitado para alguna de
las prcticas no podrn entrar al laboratorio.
* Si faltan ms del 50% de alumnos de un grupo, no se realizara la prctica, por lo
que el profesor dara por dictada la practica y sancionara a los alumnos, si no
justifican su actitud
MEDIDAS DE SEGURIDAD:
*Los alumnos (as) deben usar mandil BLANCO, LARGO y LIMPIO para entrar al
laboratorio. Deben ponerse la bata en la zona designada para ello.
* Los alumnos (as) no debern comer, beber, masticar chicle, fumar y en general
llevarse objetos a la boca dentro del laboratorio. As como tampoco debern usar
telfonos inalmbricos dentro del laboratorio.
*El aseo del laboratorio es de primordial importancia, por lo que los alumnos (as)
debern cooperar en el mantenimiento de la limpieza de su mesa de trabajo y del
material que as lo requiera. Debern limpiar con solucin desinfectante (fenol,
benzal, presep, etc.) el rea de trabajo ANTES de empezar y al TERMINAR la
prctica.
* La basura debe colocarse en los recipientes correspondientes. No deber ser
guardada en cajones y/o vertederos. As como no debern tirarse residuos o
desperdicios a los lavabos.
Deposite los residuos peligrosos biolgico-infecciosos generados durante la prctica
en los recipientes adecuados y en las reas designadas al inicio del curso en
cumplimiento con la normatividad vigente. Todo el material no contaminante como
algodn, pipetas, envolturas, etc. deber ser depositado en los recipientes
destinados para este .
* Los alumnos (as) debern abstenerse de colocar sobre las mesas de trabajo
cualquier material que no sea el requerido para la realizacin de la prctica (por
ejemplo: ropa, bolsas de mano, libros, etc,) Todos los objetos personales debern
ser guardados en las reas designadas.
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*El reporte de prcticas se considera como un trabajo original generado por cada
alumno (a). El contenido de la prctica deber ser redactado ntegramente por el
alumno, cuando se utilicen citas textuales, deber indicarse la fuente.
ESTRUCTURA DEL INFORME DE PRACTICAS:
Los informes de practicas se desarrollaran ntegramente a mano alzada, no se
aceptara trabajos digitados en computadora, todas las graficas y dibujos se
desarrollara en el acto y se concluir en la casa. Toda prctica deber contener la
siguiente secuencia: Introduccin, Objetivos, Hiptesis, Materiales y Mtodos,
Resultados Conclusiones y Bibliografa consultada. El informe se entregara a la
siguiente prctica siendo esta personal.
SANCIONES:
El incumplimiento a estas normas ser sancionado por el profesor o instructor
(a).
La falta a tres practicas consecutivas por el alumno(a),inhabilitan
automticamente al alumno y por lo tanto no tiene derecho a continuar en la
asignatura, caso especial justificacin autorizada por el docente de teora, previa
evaluacin .
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13
II Sesin de Laboratorio.
* Medida del pH.
14
MEDIDA DEL pH
FUNDAMENTO
El termino pH es la expresin de la concentracin de H + por medio de una funcin
logartmica. El termino pH puede definirse as:
pH = log 1 H+
El pH 7 representa la neutralidad, un valor inferior a 7 representa solucin cido y superior
a 7 solucin alcalina. La escala pH es logartmica, en una solucin de pH 6 hay 10 veces
hidrogeniones que en una cuyo pH es 7, y un pH 5 indica que esa relacin es de 100 a 1
respecto a la solucin de pH 7. La diferencia de concentracin de hidrogeniones entre el
pH 5 y 5,1 es mucho mayor que la existente entre 5,9 y 6,0. Los mtodos que se utilizan
ms actualmente es mediante el papel indicador y el aparato (Potencimetro).
OBJETIVOS
Familiarizarse con el uso de la cinta indicadora del pH
* Familiarizarse con el manejo del Potencimetro..
1. POTENCIOMETRO
En 1909, el qumico dans Sorensen defini el potencial hidrgeno ( pH ) como
el logaritmo negativo de la concentracin molar ( mas exactamente de la actividad
molar ) de los iones hidrgeno. Esto es:
pH = - log [H + ]
Desde entonces, el trmino pH ha sido universalmente utilizado por la facilidad de su uso,
evitando asi el manejo de cifras largas y complejas. Por ejemplo, una concentracin de
[H+] = 1x10-8 M ( 0.00000001) es simplemente un pH de 8 ya que : pH= - log[10 -8] = 8 La
relacin entre pH y concentracin de iones H se puede ver en la siguiente tabla, en la que
se incluyen valores tpicos de algunas sustancias conocidas:
DETERMINACIN DE pH
El electrodo de vidrio es relativamente inmune a las interferencias del color, turbidez,
material coloidal, cloro libre, oxidantes y reductores. La medicin se afecta cuando la
superficie de la membrana de vidrio esta sucia con grasa o material orgnico insoluble en
agua, que le impide hacer contacto con la muestra, por lo anterior se recomienda la
limpieza escrupulosa de los electrodos.
La temperatura tiene dos efectos de interferencia, el potencial de los electrodos y la
ionizacin de la muestra varan. El primer efecto puede compensarse haciendo un ajuste
en el botn de la " temperatura" que tienen todos los aparatos. El segundo efecto es
inherente de la muestra y solo se toma en consideracin, anotando la temperatura de la
muestra y su pH; para ms exactitud, se recomienda que la muestra est a 25 C, que es
la temperatura de referencia para la medicin del pH.
. PAPEL INDICADOR DE pH
Para la determinacin de pH el papel indicador con el papel indicador. Este mtodo se
basa en el cambio de color de ciertas sustancias en funcin de la variacin de la magnitud
del pH. El uso del papel indicador de pH es un valor cercano a lo real. Se emplea
generalmente papeles o cartulinas con los colores patrn para efectuar la comparacin.
Estos abarcan valores de pH de 1- 14.
15
INDICADORES DE pH CASEROS
A continuacin se describe el procedimiento para obtener un indicador de pH, basado en
la diferente coloracin que adquieren algunos compuestos naturales (antocianinas,
curcumina) o sintticos (fenolftalena) en funcin del pH. Con este indicador casero se
puede determinar el carcter cido o bsico de muchas sustancias y realizar algunas
experiencias curiosas y sencillas, relacionadas con las reacciones cido-base.
Antocianinas
Las antocianinas (o antocianos) constituyen un grupo de pigmentos hidrosolubles (son
solubles en agua, en cido actico y en alcohol, pero no en aceites) responsables de la
coloracin roja, azul o violeta de muchas flores, frutas, hortalizas, etc. Se usan como
colorantes en la alimentacin (E-163), obtenindose, en este caso, slo a partir de
comestibles, tales como fresas, cerezas, ciruelas, col lombarda, cebollas rojas,
berenjenas, uvas, etc (BOE, 1996). Las antocianinas son muy sensibles a las variaciones
de pH. En general, adquieren un color rojo en medio cido y cambian de color a azul
oscuro cuando el pH se hace bsico, pasando por el color violeta. De hecho,
antiguamente se empleaban estas sustancias naturales como indicadores del pH (Accum,
1836).
En los extractos vegetales pueden encontrarse varios tipos de antocianinas juntas, las
cuales confieren a cada extracto particular diferentes cambios de color frente al pH.
Seguidamente se describe el procedimiento a seguir para obtener el indicador de pH
basado en las antocianinas obtenidas a partir de col lombarda (brssica olercea capitata
rubra) y el Lirio Inka Speroccyphyun herrera estudiado por el Dr. Oswaldo Baca Mendoza.
En la figura se muestra una col lombarda. Esta hortaliza es similar a la col normal
(orepollo) pero de color morado. Es ms fcil encontrarla en el mercado durante los
meses de invierno, aunque actualmente puede adquirirse durante casi todo el ao.
REPOLLO MORADO
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Es conveniente observar los colores de estos extractos con la luz solar o con la luz de una
bombilla de filamento incandescente (normal o halgena), ya que la luz de las bombillas
de bajo consumo o la de los tubos fluorescentes puede alterar el tono del color. Para
obtener el extracto de col lombarda y determinar posteriormente el carcter cido o bsico
de algunas sustancias slo se necesitan un par de hojas de col lombarda y agua o alcohol
etlico, dependiendo de cmo se vaya a obtener el extracto; en esta experiencia y en las
sucesivas no es necesario usar alcohol etlico farmacutico, se puede usar el cosmtico,
que se vende en supermercados y es bastante ms barato.
Lgicamente, para observar los cambios de color del extracto se necesitan sustancias
bsicas, tales como amoniaco (NH3), sosa custica (hidrxido sdico, NaOH), leja
(hipoclorito sdico, NaClO), etc., y sustancias cidas, tales como agua fuerte (cido
clorhdrico, HCl), vinagre (cido actico, CH3-COOH), etc. Tambin conviene disponer 92
de varios vasos, un cuchillo, una cucharilla de acero inoxidable, papel de filtro de caf y
un embudo. Adems, si se obtiene el extracto con agua hirviendo se necesita un cazo y
un hornillo, mientras que si se obtiene el
extracto con alcohol etlico se necesitar una maza y un mortero. Conviene que los vasos
usados sean incoloros y transparentes con el fin de observar claramente los colores del
indicador.
El procedimiento a seguir es el siguiente. En primer lugar se trocea finamente un par de
hojas de col lombarda y se introducen en el cazo. Se agrega agua y se calienta al fuego.
Se mantiene en ebullicin durante unos 10 minutos y posteriormente se retira del fuego
para dejarla enfriar. A continuacin se filtra el lquido de las hojas usando un embudo con
papel de filtro. El lquido que se ha obtenido es el indicador de pH, que tendr un intenso
color violeta. Los restos de las hojas de col lombarda han perdido el color violeta y ahora
tienen una tonalidad verdosa; principalmente las hojas externas, que son las expuestas a
la luz y las que poseen ms clorofilas. El extracto obtenido mediante este procedimiento
es algo turbio debido a que el agua ha extrado de la col lombarda otras sustancias
adems de las antocianinas. Otra forma de obtener el extracto es machacar con un
mortero las hojas de col lombarda finamente troceadas con unos 100 ml de alcohol etlico,
en lugar de hervirlas con agua. Luego se filtra el extracto con el embudo y el papel de
filtro. De esta forma el extracto que se obtiene no tiene turbidez. Aunque el procedimiento
en el que se hierve la col con agua tiene la ventaja de que se puede cocer una col entera,
obtener una gran cantidad de extracto y luego podemos comernos la col; incluso puede
hervirse usando una olla a presin.
Conviene destacar que si se obtiene el extracto con agua hirviendo, al dejarlo unos das a
temperatura ambiente comenzar a descomponerse y perder el color debido a la accin
de microorganismos. Para conservarlo ms tiempo se puede congelar o bien agregarle
una octava parte de su volumen de alcohol etlico. Se puede impregnar tiras de papel de
filtro de caf con el extracto y dejarlo secar. Tambin se puede concentrar el extracto
hirviendo la disolucin o ponindola al bao Mara. Si concentramos el extracto hasta que
se vuelva slido podemos extraer con alcohol etlico el colorante y separarlo de aquellas
sustancias no solubles en alcohol que s estaban presentes en el agua. Esta disolucin
ser mucho ms estable, ya que a los microorganismos les cuesta ms desarrollarse en
ella. Adems se han eliminado sustancias que enturbian la disolucin. En cualquier caso,
con el paso del tiempo estos indicadores de pH se degradan y pierden su color.
Comprobacin del carcter cido o bsico de algunas sustancias
Para observar los cambios de color que se producen en los extractos obtenidos al variar
el pH, se coloca un poco de agua en tres vasos transparentes e incoloros. A continuacin
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se agrega a cada uno de los vasos un poco del extracto que queramos estudiar. El vaso
central se usar como patrn, mientras que los dos vasos restantes se usarn para
determinar las variaciones de color al agregarles diversas sustancias, tanto cidas como
bsicas. En principio, no tiene por qu conocerse el carcter de las sustancias
empleadas. Conviene destacar que es ms fcil observar los colores colocando un folio
blanco debajo de los vasos.
ACIDO
NEUTRO
ALCALINO
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III Sesin de
Laboratorio
Carbohidratos
Lpidos
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CARBOHIDRATOS
Fundamento
Los carbohidratos son los compuestos orgnicos ms abundantes de la biosfera. La
mayora pueden ser representados con la frmula general C x(H2O)y por lo que son
literalmente, hidratos de carbono. Gran parte de sus funciones biolgicas dependen de
esta estructura qumica tan particular y verstil. Ellos son componentes fundamentales de
muchos alimentos y su degradacin durante el proceso de digestin genera la energa
necesaria para las funciones vitales del organismo. Cuando se encuentran combinados
con otras biomolculas, dan origen a molculas ms complejas cuyas funciones pueden
ser estructurales o de soporte celular y tisular, de comunicacin entre clulas, de
reconocimiento o de sealizacin. Qumicamente se definen como polihidroxialdehdos o
polihidroxiacetonas cclicas o sustancias que luego de hidrolizarse dan origen a los
mismos. Un carbohidrato que no puede ser hidrolizado en uno ms simple es llamado
monosacrido. Los monosacridos ms comunes son la glucosa, la fructosa, la galactosa
y la manosa. Un carbohidrato que puede ser hidrolizado en dos molculas de
monosacridos es llamado disacrido. Los ms importantes son la lactosa (presente en la
leche), la sacarosa (presente en el azcar comn) y la maltosa. Por su parte, aquellos
carbohidratos que pueden ser hidrolizados en varias molculas de monosacridos son
llamados polisacridos. Los ms comunes son el almidn y la celulosa, ste ltimo es
componente estructural de las plantas.
La determinacin de glucosa es de importancia mdica ya que niveles sanguneos
alterados pueden ser signo de una enfermedad metablica comn conocida como
diabetes mellitus.
Objetivo:
que el estudiante refuerce los conocimientos adquiridos acerca de los carbohidratos
mediante la demostracin experimental de algunas de sus propiedades.
MATERIALES
Tubos de ensayo
Gradilla
Pinzas
Mechero
Pipetas
Solucin de Lugol
Solucin de Fehling A y B (Opcional)
Solucin alcalina (sosa, potasa, bicarbonato, etc.)
ClH diluido
Solucin de Benedic
TCNICA
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.
.
.
.
.
.
Poner en los tubos de ensayo 3ml de la solucin de glucosa, maltosa, lactosa fructosa
o sacarosa (segn indique el profesor).
Aadir 1ml de solucin de Fehling A (contiene CuSO 4) y 1ml de Fehling B (lleva NaOH
para alcalinizar el medio y permitir la reaccin)
Calentar los tubos a la llama del mechero hasta que hiervan.
La reaccin ser positiva si la muestra se vuelve de color rojo y ser negativa si queda
azul o cambia a un tono azul-verdoso.
Observar y anotar los resultados de los diferentes grupos de prcticas con las distintas
muestras de glcidos.
Mesclar una solucin de glucosa con reactivo de Benedit, anotar el cambio de
coloracin.
Glcido
Glucosa
Maltosa
Lactosa
Fructosa Sacarosa
Reductor
INVESTIGACIN DE POLISACRIDOS (ALMIDN)
FUNDAMENTO
El almidn es un polisacrido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y la
amilopectina. La primera se colorea de azul en presencia de yodo debido no a una
reaccin qumica sino a la adsorcin o fijacin de yodo en la superficie de la molcula
de amilosa, lo cual slo ocurre en fro. Como reactivo se usa una solucin denominada
lugol que contiene yodo y yoduro potsico. Como los polisacridos no tienen poder
reductor, la reaccin de Fehling da negativa.
TCNICA
. Colocar en un tubo de ensayo 3ml de la solucin de almidn.
. Aadir 3 gotas de la solucin de lugol.
. Observar y anotar los resultados.
. Calentar suavemente, sin que llegue a hervir, hasta que pierda el color.
. Enfriar el tubo de ensayo al grifo y observar cmo, a los 2-3 minutos, reaparece el
color azul.
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RECONOCIMIENTO DE LPIDOS
MATERIALES
-
Tubos de ensayo
Gradilla
Varillas de vidrio
Mechero
Vasos de precipitados
Pipetas
TCNICA
Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%.
Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos.
Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara
que contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra
intermedia semislida que es el jabn formado y una superior lipdica de aceite
inalterado.
TINCIN
FUNDAMENTO
Los lpidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante Sudn
III.
TCNICA
.
.
.
.
.
22
SOLUBILIDAD
FUNDAMENTO
Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se
dividen en pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso, que
es transitoria, pues desaparece en reposo por reagrupacin de las gotitas de
grasa en una capa que, por su menor densidad, se sita sobre el agua.
Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgnicos, como el ter,
cloroformo, acetona, benceno, etc.
TCNICA
. Poner 2 ml de aceite en dos tubos de ensayo.
. Aadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de ter u otro disolvente
orgnico,
. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.
. Observar los resultados: Se ver cmo el aceite se ha disuelto en el ter y, en
cambio no lo hace en el agua y el aceite subir debido a su menor densidad.
CUESTIONES
1.
2.
3.
4.
5.
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IV sesin de
Laboratorio.
Proteinas
Enzimas
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PROTENAS
DEFINICIN Y CONCEPTO
OBJETIVOS
Determinar algunas propiedades de las protenas
Demostrar la desnaturalizacin de una protena.
Reconocer la actividad enzimtica frente a un sustrato.
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DESNATURALIZACIN DE PROTENAS
MATERIALES
-
Tubos de ensayo
Gradilla
Mechero
Vasos de precipitados
Pipetas
FUNDAMENTO
Las protenas debido al gran tamao de sus molculas forman con el
agua soluciones coloidales que pueden precipitar formndose cogulos al ser
calentadas a temperaturas superiores a 70C o al ser tratadas con soluciones
salinas, cidos, alcohol, etc.
La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su
desnaturalizacin por los agentes indicados que al actuar sobre la protena la
desordenan por destruccin de sus estructuras secundaria y terciaria.
.
.
TCNICA
Colocar en tres tubos de ensayo una pequea cantidad de clara de huevo (puede
diluirse en un poco de agua para obtener una mezcla espesa) o 2-3ml de leche.
Calentar uno de los tubos al bao Mara, aadir a otro 2-3ml de HCl concentrado
y al otro aadir solucion de K (OH) concentrada
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ENZIMAS
FUNDAMENTO
En los seres vivos se estn desarrollando continuamente una serie de
reacciones qumicas que, si se realizaran en un laboratorio, slo podran
llevarse a cabo mediante altas temperaturas, descargas elctricas u otras
fuentes de energa que las clulas no podran resistir. Por ello, las reacciones
que tienen lugar en los organismos no pueden ser violentas, lo cual se consigue
gracias a la existencia de los biocatalizadores, entre los cuales el lugar ms
destacado lo ocupan los enzimas.
Para que una reaccin se lleve a cabo es necesario que la/s sustancia/s que
van a reaccionar (sustratos) reciban una determinada cantidad de energa que
las active, denominada energa de activacin. Los catalizadores son pues
aquellas sustancias que, al disminuir las necesidades de energa de activacin
de una reaccin, la facilitan y la aceleran. Los catalizadores no intervienen en la
reaccin que catalizan, de tal manera que, una vez terminada sta, quedan
libres y pueden volver a ser utilizados, no se consumen durante la reaccin.
Todos los enzimas conocidos son protenas de gran solubilidad en los medios
lquidos del organismo. Salvo raras excepciones son solubles en agua. Segn
su composicin se clasifican en dos grupos:
DEMOSTRACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
MATERIALES:
A). Tubos de ensayo
B). Pipetas Pasteur
C). Almidon de trigo
D). Agua destilada
E). Saliva humana
F). Lugol
G). Incubadora a 37C
PROCEDIMIENTO
EXPERIMENTO COMPLEMENTARIO
ACTIVIDAD DE LA CATALASA EN HGADO DE POLLO:
*En un tubo de Ensayo que contiene 10 a 20 ml de Perxido de Hidrogeno
*Coloque un trozo de hgado de pollo cosido.
* En otro tubo similar introduzca en el perxido de hidrogeno un trozo de
*Hgado de pollo crudo
V. Sesin de Laboratorio
cidos nucledos
ACIDOS NUCLEICOS
FUNDAMENTO
La moderna ciencia de la Gentica se origin cuando Gregor Mendel descubri
que las caractersticas hereditarias estaban determinadas por unidades
hereditarias que se transmitan de una generacin a la siguiente de manera
uniforme y predecible. Se inici en este momento (finales s.XIX) una carrera
cientfica cuyo objeto primordial era solucionar dos problemas, en principio muy
distintos, pero, como se vio ms tarde, muy relacionados entre s.
El primer problema fue el de identificar exactamente el material
gentico, su localizacin y su naturaleza qumica. El desarrollo de esta lnea de
investigacin ha dado lugar a una rama de la Gentica denominada Gentica
Molecular.
El segundo problema consista en descubrir el modo en que se
transmiten y se heredan de generacin en generacin las manifestaciones de ese
material hereditario, es decir, los caracteres biolgicos. Se cre as otra rama de la
Gentica llamada en honor de Mendel Gentica Mendeliana.
En cuanto al primer problema, un paso previo a iniciar la bsqueda e
identificacin del material gentico consiste en establecer los requisitos que debe
cumplir. Se establecen 4 requisitos generales que se espera que cumpla el
material gentico:
1.- Que se replique exactamente antes de la duplicacin celular.
2.- Que su estructura sea lo suficientemente estable para que los
cambios hereditarios (mutaciones) slo se produzcan raramente.
3.- Que pueda llevar cualquier tipo de informacin biolgica necesaria.
4.- Que transmita la informacin a la clula.
REPLICACIN DEL ADN
La necesidad de que el material gentico se autoduplique exactamente es la
primera exigencia que debe cumplir. Ya en el modelo de Watson y Crick se
planteaba la posibilidad de que las hebras de la doble hlice se separaran y cada
una sirviera de matriz para formar la cadena complementaria. Este proceso recibi
el nombre de replicacin. Tal y como se haba descrito hasta ese momento deba
ser semiconservativo, es decir, cada doble hlice de ADN resultante slo llevaba
una de las dos hebras del ADN original, mientras que la complementaria era de
nueva formacin. Esto se demostr concluyentemente con los experimentos de
Meselson y Stahl: cultivaron bacterias E.coli en un medio que contena como nica
fuente de nitrgeno cloruro amnico marcado con 15N hasta que lleg un momento
en que el ADN slo presentaba en sus bases nitrogenadas 15N. Posteriormente
cambiaron el medio de cultivo por otro con 14N normal. Las bacterias de la primera
generacin presentaban en su ADN 14N y 15N en igual cantidad.
VI. Sesin de
Laboratorio
Microscopia ptica.
MICROSCOPIA PTICA
FUNDAMENTO:
El microscopio es un instrumento ptico que amplifica la imagen de un objeto
pequeo, siendo el instrumento ms utilizado en los laboratorios donde se
estudian microorganismos. Si bien las lentes de aumento han sido conocidas
desde muy temprano en la historia, slo se le utiliz en biologa con el
advenimiento del microscopio de luz moderno. Desde su invencin, el microscopio
ha sido una herramienta valiosa en el desarrollo de la teora cientfica. En general,
un microscopio est compuesto de dos elementos, los cuales constituyen un
sistema similar a un telescopio: a) lentes primarias amplificadoras
y b) lentes secundarias. Estos sistemas se denominan objetivo y ocular,
respectivamente, y estn montados en los extremos opuestos de un tubo cerrado,
de forma que el primero se encuentra en el punto focal del segundo. Entonces, la
luz que pasa por un objeto es focalizada por ambos sistemas de lentes, de manera
que cuando se mira a travs del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la
imagen real (Figura 1).
Actualmente existen muchos tipos de microscopios, entre los que se cuentan el
microscopio ptico, el electrnico, el de sonda de barrido y el lser. No obstante, el
microscopio ms utilizado es el ptico, el cual se sirve de la luz visible para crear
una imagen aumentada del objeto.
OBJETIVOS: Al finalizar la prctica el estudiante conocer:
a) El manejo adecuado del microscopio ptico, observar laminillas e
identificar diferentes tipos de muestras biolgicas.
b) Estar en capacidad de ejecutar correctamente la limpieza del microscopio
ptico
EL MICROSCOPIO PTICO
Los microscopios pticos pueden clasificarse en simples y complejos,
diferencindose en su capacidad amplificadora y en la complejidad del sistema de
lentes asociado. La principal ventaja de un microscopio ptico es que permite
observar organismos vivos y tejidos. Su principal desventaja, es que su potencia
amplificadora est limitada por la longitud de onda de la luz visible.
MICROSCOPIO SIMPLE:
El microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble, cuya distancia focal
es corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Tambin se les
denomina microscopios de bajo poder. Existen al menos dos tipos de
microscopios de bajo poder: monoculares y binoculares (Figura 2). Los
microscopios monoculares tienen muy bajo poder amplificador, siendo utilizado
a)
b)
c)
d)
e)
f)
e)
f)
g)
h)
A.
B.
Mecanismo de evaluacin:
a) Conducta, actitud y destreza en la prctica
b) Calidad de las notas de su cuaderno de prcticas
c) Calidad del reporte.
Partes de un
microscopio ptico
[Escriba
o del
de
VII. Sesin de
Laboratorio
*Celula Procariotica
* Celula Eucariotica
de
para
de texto
Herramientas
cuadro de texto
cambiar el
formato del cuadro
de la cita.]
REALIZACIN
1. Preparar los frotis bacterianos.
2. Teir con cristal violeta 1min.
3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
4. Cubrir con Lugol 1min.
5. Lavar con agua el exceso de Lugol.
6. Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la
preparacin deje de perder color (30seg)
7. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
8. Teir con safranina 1min.
9. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
10. Secar la preparacin.
11. Examinar al microscopio fijndose sobre todo en el color de cada
preparacin.
Los tiempos de exposicin a los colorantes son orientativos. Cada vez que se
prepara la batera de colorantes para realizar la tincin Gram presentan algunas
diferencias respecto a los preparados en otro momento, por lo que puede ser
necesario
ajustar
los
tiempos.
En un laboratorio de Microbiologa, cada vez que se preparan los colorantes, se
suelen hacer pruebas con cultivos patrn de los dos tipos (Gram+ y Gram-) para
ajustar as los tiempos y tener la certeza de que el resultado de todas las tinciones
que se hagan mientras duren esos colorantes son fiables.
Otra posibilidad es adquirir el equipo completo de colorantes ya preparados, pero
es mucho ms caro.
CLULA EUCARIOTICA VEGETAL
MATERIALES SUMINISTRADOS AL ALUMNO
Microscopio, colorante, portaobjetos y cubreobjetos, tallo de planta verde, hojas de
afeitar.
Clulas Vegetal
- Haga una preparacin fresca de una hoja de Tradescantia virgineana. Observe
las vacolas (Aquellas que estn teidas de un color rosado-violeta, por la
presencia de un pigmento llamado Antociano).
Agregue gotas de agua de mar (solucin hipertnica) en un borde del cubreobjetos
y mediante un trozo de papel filtro aplicado al borde opuesto, extraiga el agua
haciendo penetrar de este modo, el agua de mar a la preparacin.
Observe las clulas. Reemplace el agua de mar por agua destilada usando el
mismo procedimiento anteriormente indicado. Note los cambios en la clula y
explquelos. Esquematice.
CUESTIONARIO
Para responder el cuestionario consulte la literatura necesaria. Recuerde que en
los controles futuros debe conocer la respuesta a estas preguntas.
1. Por qu el agua, siendo una molcula polar, puede difundir libremente a travs
de la membrana plasmtica?
2. Qu funciones puede cumplir la membrana plasmtica?
Microscopio
Portas y cubre-objetos
Soporte de preparaciones
Lanceta
Alcohol
Metanol
Cubeta
Giemsa
Sangre obtenida por un pinchazo en el pulpejo del dedo
TECNICA
1. Limpiar el pulpejo del dedo con una gota de alcohol, hacer una puncin
para conseguir una gota de sangre.
VIII. Sesin de
Laboratorio
*Divisin Celular
Mitosis
cual la clula se prepara para realizar la divisin celular formada por las dos
ltimas fases.
La funcin de las fases de la interfase quedan resumidas de la siguiente forma:
Fase G1.- Durante esta fase se desarrolla una alta actividad bioqumica
cumpliendo con las distintas funciones que la clula presente en el organismo.
Normalmente, en un organismo pluricelular, las clulas, que no se dividen
normalmente salvo en presencia de ciertos factores de crecimiento, se enquistan
en una subfase denominada G0. La fase G0 indica nicamente que las clulas no
se encuentran en un ciclo contnuo de crecimiento y duplicacin. En un organismo
diploide, la cantidad de ADN en el ncleo es de 2n.
Fase S.- Cuando las clulas se encuentran en un ciclo contnuo de crecimiento y
divisin celular o reciben una seal extracelular adecuada, pasan a duplicar la
cantidad de ADN y sintetizar una serie de protenas encargadas de la
compactacin del ADN. Por lo tanto, al final de la fase S, una clula de un
organismo diploide ha pasado a tener una dotacin doble de ADN. No se puede
decir que sea tetraploide (4n) sino que sigue siendo diploide pero con cada uno de
los cromosomas duplicados, las indicaremos como 4c.
Fase G2.- Las clulas han terminado la sntesis de ADN (4c) y se preparan para
sufrir el complejo proceso de la divisin celular. En esta fase se sintetizan las
protenas necesarias para llevar a cabo la mitosis y se concluye la duplicacin y
separacin del centriolo en clulas animales.
ETAPAS DE LA MITOS
4 Mitosis2.Citocinesis
La citocinesis es el proceso por el cual el citoplasma de la clula madre queda
distribuido entre las 2 clulas hijas y estas se independizan por la formacin de la
membrana celular. La separacin de las 2 clulas hijas es diferente en clulas
animales y vegetales.
En las clulas animales se produce la plasmocinesis, en la que a partir de la
periferia de la clula el citoplasma se va estrangulando hasta que las clulas hijas
se ponen en contacto.
En las clulas vegetales se forman vesculas membranosas en la zona
comprendida entre los ncleos hijos. Estas vesculas se fusionan unas con otras
dando origen a la membrana plasmtica, quedando entre las membranas el
contenido de las vesculas que constituir la pared celular.
Profase mittica
Anafase mittica
Metafase mittica
Telofase mittica
TRABAJO PRCTICO
Observacin de distintas fases de la mitosis en pices radiculares de cebolla.
5.Observacin.
Se observa al microscopio empezando con el objetivo de menor aumento. No es
necesario utilizar el objetivo de inmersin. Se deben distinguir y dibujar, tal y como
se ven, todas las fase s de la mitosis.
Cuestionario de practicas
1.Dibuje cada una de las distintas fases de la mitosis, adems de la interfase.
2.Por qu se encuentra mayor nmero de clulas en interfase que en divisin en
las preparaciones de raz de cebolla?
3.La cebolla Allium cepa es una especie vegetal con 2n=16 cromosomas
Cuntas cromtidas recibe cada polo en anafase?
4.Cuntas cromtidas tiene uno de los cromosomas de cebolla en telofase?
5.Un individuo diploide y homocigtico AA, Cuntas copias del alelo A tiene en el
periodo G1 de la interfase y cuntas en metafase?
6.Un individuo diploide y heterocigtico Aa, Cuntas copias del alelo A tiene en el
periodo G1 de la interfase y cuntas en metafase?
6.Existe alguna diferencia entre endomitosis y endorreduplicacin?
7.Por qu se bloquea la continuacin de la mitosis en metafase en especies que
presentan haplocromosomas?.
IX. Sesin de
Laboratorio
Meiosis
MEIOSIS
Fundamento:
La meiosis es un proceso celular, ligado a la reproduccin sexual, por el cual, la
clula madre de naturaleza diploide, da origen a los gametos de naturaleza
haploide, de tal manera que en la fecundacin se reestablece el nmero diploide
de cromosomas. As, mientras la mitosis es un proceso de divisin celular con
formacin de dos ncleos hijos con el mismo nmero de cromosomas que la
clula original, en la meiosis en cambio hay dos divisiones celulares con reduccin
del nmero de cromosomas a la mitad.
Fases de la meiosis
La meiosis es un proceso citolgico que comprende dos divisiones celulares. En la
primera divisin meitica ocurre una serie de intercambios de material gentico
entre los cromosomas homlogos. Este fenmeno es un proceso complejo que
comprende una larga profase en la que, para su mejor estudio y comprensin, se
distinguen los estados: Leptoteno, Cigoteno, Paquiteno, Diploteno y Diacinesis.
Profase I
Leptoteno. El comienzo de la profase I de la clula se caracteriza porque los
cromosomas que se encuentran completamente desenrollados en el ncleo,
debido a los procesos de sntesis de los momentos premeiticos, comienzan a
estructurarse segn un doble modelo de espiralizacin, que conduce en definitiva
a un aumento del volumen nuclear.
Cigoteno. La clula diploide presenta en estos momentos 2n cromosomas
homlogos completamente espiralizados (contrados), los cuales se aparean cada
uno con su homlogo. Es una sinapsis perfecta, crommero a crommero,
formando por tanto n bivalentes.
Paquiteno. En este estado se terminaliza el apareamiento de los cromosomas
homlogos n-bivalentes se visualizan engrosados, y cada uno de los cromosomas
compuestos de dos cromtidas, hace que el bivalente se presente como una
ttrada.
Diploteno. Las dobles parejas de cromtidas homlogas comienzan a separarse,
permaneciendo unidas por ciertos puntos que son los quiasmas, los cuales
constituyen la visualizacin citolgica del mecanismo de intercambio de material
gentico denominado sobrecruzamiento (crossing-over).
Diacinesis. En este estado las ttradas aparecen muy condensadas con bucles
unidos por los quiasmas; al mismo tiempo que se terminalizan hacia los extremos
de la ttrada
Metafase I
A lo largo de la profase I, los centriolos duplicados se orientan dos a dos, hacia
cada uno de los polos de la clula, visualizndose ya en la metafase I el aparato
mittico, al mismo tiempo que las ttradas se disponen en la placa ecuatorial del
aparato mittico.
Anafase I
En este estado ocurre la rotura y desaparicin de la membrana nuclear y la
migracin de n cromosomas a cada polo. Es importante sealar en primer lugar
que la reparticin de n cromosomas homlogos a cada polo ocurre al azar, y en
segundo lugar que a diferencia con la mitosis, en esta primera divisin meitica no
hay divisin longitudinal del centrmero, y por lo tanto separacin de las
cromtidas, sino que stas permanecen unidas por sus respectivos centrmeros.
Por lo tanto, esta divisin meitica I es una divisin reduccional
Telofase I
Ocurre la individualizacin de las dos clulas de la divisin meitica I, con la
aparicin de la membrana plasmtica que las separa, y la reaparicin de la
membrana nuclear.
Divisin meitica II
Entre la telofase I y el comienzo de la segunda divisin meitica, a diferencia con
la mitosis, no hay un perodo de sntesis y duplicacin del ADN, por lo dems la
divisin meitica II, tiene lugar como la mitosis normal en cada una de las clulas
haploides (meiocitos de segundo orden), resultantes de la divisin meitica I.
Profase II
En este estado los centriolos aparecen duplicados y migran dos a dos hacia los
polos, constituyendo el huso mittico.
Metafase II
Los n cromosomas de cada una de las clulas hijas, se disponen en la placa
ecuatorial del huso, al mismo tiempo que desaparece la membrana nuclear
Anafase II
Ocurre la divisin longitudinal del centrmero y reparticin al azar de n cromtidas
a cada uno de los polos, de modo que las cromtidas hermanas (que no sern
idnticas por el sobrecruzamiento) van siempre a lados opuestos.
Telofase II
En esta fase tiene lugar la individualizacin de las cuatro clulas hijas, con
aparicin de las membranas plasmticas y nuclear. Ahora bien, a diferencia con la
mitosis, las dos clulas resultantes de cada meiocito de segundo orden son
diferentes, porque sus cromtidas han intercambiado material gentico
previamente en la profase I. A continuacin, ocurre la desespiralizacin de las
cromtidas y el periodo de sntesis y duplicacin del ADN. No obstante, se
presentan numerosas excepciones a este esquema general de la meiosis, segn
sean los ciclos haplontes, diplontes o diplohaplontes de las especies, o en una
misma especie en la espermatognesis y ovognesis.
Clulas del testculo de Chorthippus jucundus teidas con orcena lactopropinica. A.- Metafase-II. Se
observa la disposicin radial de los cromosomas. B.- Anafase-II. Las cromtidas
estn comenzando a separarse. C.Anafase-II. D.- Telofase-II. E.- Espermtidas tempranas. La situada en la parte
superior de la fotografa posee el
cromosoma sexual (X), mientras que la de la parte inferior carece de l. F,G,HEspermtidas en diferentes
estados de maduracin: redondeada, lanceolada, alargada
h.i.j.-
Diplonema de saltamontes
X. Sesin de
Laboratorio
* Espermatogenesis.
ESPERMATOGENESIS
Fundamento:
Existe un proceso celular destinado a producir clulas idnticas genticamente: la
mitosis. Por el contrario,la mayora de los organismos vivos utilizan parte de su
vida o tejidos especializados para producir clulas esencialmente diferentes de las
progenitoras en cuanto a las
combinaciones posibles de su material hereditario.
Este mecanismo celular est enclavado en un proceso especial de divisin
celular: la meiosis.
En organismos superiores la meiosis tiene lugar en los rganos sexuales tanto
masculinos como femeninos, dentro de un proceso general que se denomina
respectivamente espermatognesis y ovognesis. Tanto uno como otro no slo
producen clulas diferentes genticamente, sino que reducen el nmero de
cromosomas de las clulas a la mitad y las modifica para poder ser fecundadas o
fecundar dependiendo del sexo donde se realice.
ESPERMATOGNESIS
Ham, discpulo de Leuwenhoek, observa por primera vez en 1677 en el semen
humano la presencia de unos "animculos" mviles que muchos cientficos de la
poca consideraron como parsitos o simbiontes. En 1780 Spallanzani comprueba
que si del semen eran eliminados estos cuerpos mviles, ste perda su capacidad
fertilizante. Pero fue en la segunda mitad del siglo XIX cuando se concluy que
estos "animculos" eran los gametos masculinos, y se les denomin
espermatozoides.
De esta forma se estableci que los espermatozoides se originaban en los
testculos y que posean ncleo y citoplasma: eran clulas.
Desde este momento y hasta nuestros das la morfologa de los espermatozoides
y de las clulas que les dan origen ha sido ampliamente estudiada. En una
primera etapa de la citologa clsica, empleando cortes en parafina, no slo se
describen gran cantidad de formas distintas de espermatozoides, sino que tambin
se pone gran inters en el estudio de los tejidos en los que se originan.
Posteriormente, con el avance de la tcnica y la aparicin del microscopio
electrnico, se determina la ultraestructura de los espermatozoides y de las
clulas intermedias en su formacin.
La introduccin de nuevas tcnicas de estudio como pueden ser las citoqumicas
para microscopa ptica y electrnica, la aplicacin de microscopa de barrido, el
empleo de anticuerpos marcados a nivel morfolgico y ultraestructural, la
microscopa confocal o metodologas puramente bioqumicas han ayudado a un
mejor conocimiento del proceso de formacin de los gametos masculinos, la
espermatognesis.
A) ESPERMATOGONIAS B) Y C) ESPERMATOCITOS
D)ESPERMATIDES
algunas especies hasta ocho. As, partiendo de una espermatogonia inicial, van
surgiendo por divisiones sucesivas grupos de ellas que, normalmente, se
encuentran interconectadas por sus citoplasmas. El nmero final de gonias
presentes en un cisto, indicar por lo tanto las veces que se han dividido a partir
de la espermatogonia primordial. De esta forma un cisto con doscientas cincuenta
y seis gonias revela la existencia previa de ocho divisiones mitticas.
En esta fase de divisiones rpidas y continuas es fcil observar el cariotipo de la
especie.
b) Crecimiento y meiosis. La meiosis se caracteriza por presentar dos divisiones
sucesivas del material hereditario (Divisin I y Divisin II) precedidas por un nico
perodo S (de sntesis de ADN). La profase de la primera divisin meitica es
extremadamente larga pudiendo durar desde das (en machos) hasta aos
(generalmente en hembras). Para su estudio, se ha dividido en base a la
morfologa del ncleo celular en varias etapas:
. Durante la prometafase los bivalentes experimentan movimientos de congresin
hasta alinearse finalmente en placa en la metafase. En la primera anafase
meitica los cromosomas homlogos, que previamente se han recombinado,
migran completos a polos opuestos. Tras una interfase muy corta y a veces
inexistente denominada intercinesis, se efecta la segunda divisin meitica.
sta es esencialmente igual que una divisin mittica convencional con la
excepcin de que cada clula solamente posee un complemento cromosmico de
la especie ya recombinado. El resultado final es la formacin, por cada una de las
clulas que entr en la profase I, de cuatro clulas con n cromosomas y una
carga "c" de ADN: las espermtidas.
c) Espermiognesis. Se conoce con este nombre a toda la serie de cambios
tanto citoplsmicos como nucleares que sufren las espermtidas hasta convertirse
en espermatozoides. Estos cambios morfofuncionales son muy variables y
dependen de la especie estudiada. No obstante, y como rasgos generales,
podemos decir que se centran en la compactacin de la cromatina en el ncleo, la
prdida de casi la totalidad del citoplasma, la gnesis de una vescula acrosmica
y la adquisicin de un aparato locomotor por parte de la clula.
DESARROLLO DE LA PRCTICA
En esta prctica se utilizarn dos tipos diferentes de material de trabajo as como
dos metodologas completamente distintas. Por una parte se analizarn las
diferentes fases de la espermiognesis en preparaciones obtenidas mediante la
tcnica de aplastado a partir de testculos de ortpteros fijados en etanol y cido
actico en proporcin 3:1. Por otra, estudiaremos la organizacin de las clulas
que cursan la espermatognesis y el tbulo seminfero en cortes de testculo de
saltamontes fijado con Bouin e incluido en parafina.
Seleccionamos testculos de ortpteros fijados en etanol y cido actico 3:1 al
menos con una semana de antelacin y los colocamos en agua destilada para su
hidratacin durante 10 minutos. A partir de este momento conviene realizar todo el
e
XI. Sesin d
Laboratorio.
liana
e
d
n
e
m
a
i
c
Heren
sanguneo
po
Factor y Gru
Grupo sanguineo
AB
Glbulos rojos
En la membrana
En el plasma
Antgeno A
Anti-B
Antgeno B
Anti-A
Antgenos A y No antgenos
B
No anticuerpos
Anti-A y
Anti-B
De la misma manera, el factor Rh es otra protena que existe en los glbulos rojos
de algunas personas. Su nombre viene del mono en el que fue descubierta, el
macacco rhesus. El factor Rh positivo es un factor hereditario dominante.
Este asunto tiene especial importancia en donaciones de sangre. Como hemos
visto, un individuo A tiene en su plasma anticuerpos anti-B, as que no podr
recibir sangre de un individuo B, pues estos anticuerpos provocaran la
coagulacin de la sangre del donante en los vasos sanguineos de la persona
receptora.
En la siguiente tabla vemos las compatibilidades a la hora de donar y recibir
sangre.
Como vemos, el grupo AB puede recibir de cualquier otro grupo y de s mismo, as
que se llama "receptor universal". El grupo O ,sin embargo, puede donar a
cualquier grupo, as que se conoce como "donante universal"
RECEPTOR
D
grupo A grupo B grupo AB grupo O
O grupo A
SI
NO
SI
NO
N
NO
SI
SI
NO
A grupo B
N grupo AB
NO
NO
SI
NO
T
SI
SI
SI
SI
E grupo O
OBJETIVOS
1. Que cada alumno y alumna del grupo conozca su grupo sanguineo y el
factor rh.
2. Presenciar la tcnica que se utiliza para determinar el grupo sanguineo.
(Esta determinacin debe ser realizada por el profesor o profesora)
3. Interpretar dicha tcnica
MATERIALES
Solucin anti-A
Solucin anti-B
Solucin anti-D(anti Rh)
Tarjetas de identificacin
TECNICA
1. Colocar en la tarjeta una gota se suero anti-A, una de anti-B, una mezcla de
anti-A y anti-B, y una gota de anti-D, cada una en su casilla
correspondiente, como se indica en la FIGURA 1.
FIGURA 1
2. Pinchar la yema del dedo, previa desinfeccin con alcohol o agua
oxigenada. Depositar una gotita de sangre en cada casilla y mezclar con los
sueros. FIGURA 2.
FIGURA 2
3. Observar los resultados. El grupo sanguineo del individuo corresponder
con el de la casilla en la que la sangre haya coagulado. Si el individuo es
del grupo AB, la sangre coagular en las tres primeras casillas. Adems, si
la sangre coagula en la casilla "anti-D", el individuo ser Rh positivo, de lo
contrario
ser
Rh
negativo.
Personalmente, prefiero hacer la determinacin del factor Rh en un porta,
en el que puedo observar mejor la coagulacin sanguinea. FIGURA 3.
FIGURA 3
En las tarjetas de la
FIGURA 4, se puede observar
el aspecto que presentan dos
casos opuestos. En la tarjeta
superior se observa que no
existe coagulacin en ninguna
casilla. Las tres primeras
corresponden a los sueros del
grupo sanguineo, por lo que
interpretamos que esta
persona pertenece al grupo
O, la cuarta es la del factor
Rh, y al no existir coagulacin
interpretamos que es Rh
negativo.
En la tarjeta inferior, vemos
coagulacion en todas las
casillas, por lo que de una
forma similar interpretamos
que el alumno es del grupo
sanguineo AB y Rh positivo.
(Nota: El grupo sanguineo AB
es poco frecuente, y en el
anlisis a 45 alumnos y
alumnas, solamente sali en
una alumno)
FIGURA 4
Grupo sanguineo
AB
Glbulos rojos
En la membrana
Antgeno A
Antgeno B
Antgenos A y No antgenos
B
Anti-A y
Anti-B
De la misma manera, el factor Rh es otra protena que existe en los glbulos rojos
de algunas personas. Su nombre viene del mono en el que fue descubierta, el
macacco rhesus. El factor Rh positivo es un factor hereditario dominante.
En el plasma
Anti-B
Anti-A
No anticuerpos
XII. Sesin de
Laboratorio
Experimentos con la
mosca de la fruta.
6
Color del cuerpo Tipo salvaje: bsicamente gris, con un patrn de reas claras y
oscuras. Mutantes: negro (variando los grados), amarillo, el color mutante puede
ser determinado mas
claramente observando el color de las venas de las alas, cetas del cuerpo y las
patas.
EL GENOMA DE DROSOPHILA
D. melanogaster tiene cuatro pares de cromosomas:
los cromosomas sexuales X/Y y los autosomas 2, 3 y 4.
El cuarto cromosoma (odot) es el ms pequeo.
El par sexual en hembras es XX, y en machos XY.
Individuos X0 son machos, pero estriles aunque su
aspecto sea normal, mientras que individuos XXY
producen hembras normales y frtiles
El tamao del genoma de Drosophila es alrededor de 165 millones de bases y
estimado unos 14.000 genes (por comparacin, el genoma humano tiene 3.300
mb y unos 70.000 genes). El genoma ha sido completamente secuenciado y esta
en curso la secuenciacin y anotacin del genoma de otras 11 especies de
Drosophila.
La posicin relativa de muchos genes de D. melanogaster a lo largo de los
cromosomas ha sido identificada y mapeada basndose en la frecuencia de
recombinacin con los genes vecinos. Esta ubicacin se denomina mapa de
ligamiento o mapa gentico.
CROMOSOMAS POLITENICOS
XIII. Sesin de
Laboratorio
Cromatina sexual
Cariotipo Humano
PROCEDIMIENTO
1. Limpie la mucosa de la cavidad oral con un pedazo de gasa. El paciente debe
mantener la boca abierta y disponer la lengua en el lado opuesto al que va a ser
frotado.
2. Para el frotis de la mucosa se utiliza la esptula. Este debe hacerse con presin
moderada, asegurndose de obtener una capa de material blanquecino.
3. El material de la esptula se extiende delgada y suavemente sobre una lmina y
sta se sumerge inmediatamente en la solucin fijadora. Pueden obtenerse tres
lminas de cada lado de la boca.
4. Las lminas pueden permanecer en el fijador entre un minuto y una semana.
5. Las lminas se colocan en una cubeta de coloracin y el colorante acetoorcena se aplica por 10 minutos. S solo cuenta con orcena en el laboratorio,
entonces adicione a 1gramo de esta 45 mL de cido actico concentrado; caliente
hasta ebullicin, deje enfriar y filtre para obtener la aceto-orcena.
6. Se dispone una laminilla sobre la lmina y el colorante en exceso se remueve
aplicando papel de filtro y ejerciendo firme presin.
7. Observe inmediatamente con el objetivo de menor aumento, para buscar reas
donde las clulas estn bien extendidas.
8. Observe con el objetivo de mayor aumento (o inmersin) e identifique las
estructuras ligeramente alargadas o plano-convexas, adyacentes a membrana
nuclear de coloracin oscura en comparacin con el resto del ncleo.
CUESTIONARIO
Consulta, que otras patologas diferentes a los sndromes de Turner y klinelfelter,
estn relacionados con la cromatina sexual.
Cual es el patrn de herencia de las patologas consultadas?.
Investiga acerca de los genes holndricos y su importancia Biomdica.
Que otros mtodos diferentes al utilizado en esta prctica, se pueden utilizar
para identificar cromatina sexual?.
Investiga sobre las aplicaciones que en medicina legal tiene la determinacin de
cromatina sexual.
CUERPO DE BAR
Cariotipo
Las caractersticas ms importantes que identifican los cromosomas durante la
mitosis son su nmero, tamao relativo, estructura, comportamiento y
organizacin interna.
Cariotipo es el complemento o conjunto cromosmico tpico del individuo o de la
especie en el que se describe el nmero, forma y tamao de los mismos. El
cariotipo se perpeta normalmente en la progenie (Battaglia, 1953). Es decir, en
trminos generales, se admite la constancia en forma, tamao y nmero de los
cromosomas, en todas las clulas que componen el ncleo de un individuo y en
los individuos de cada especie.
En el cariotipo se ordenan los pares de homlogos en series, de acuerdo a su
longitud, en forma creciente.
La representacin esquemtica del cariotipo se conoce con el nombre de
Idiograma.
c)
PRACTICA
.
.
.
.
.
.
PRACTICA
.
.
.
.
.
BIBLIOGRAFIA
- Iturra R. & J. Lafayet 2008. Manual de Laboratorio, Biologia.
Edith. Austral Univ. Catlica de Chile.
-Araujo D. 2006. Guia de Laboratorio Biologia II. Facultad de
Ciencias Biologicas. Universidad La repblica.
Uruguay. Ediciones Siglo XXI. Montevideo.
-Guevara M. R. 2005. Guia de Practicas . Biologia general.
Universidad Antenor Orrego. Facultad de
Ciencias Biologicas. Trujillo Per.
-Pinillos M., Amesquita R., Torres Z., Sacarias G. 2002.
Biologia Celular y Molecular. Manual Practico
de Laboratorio. Universidad de Chile.
-Lopreto M. 2000. Guia practica de Biologa Celular. Universidad
De Buenos Aires. Publicacion de CONYCET.
-De Robertis ,Rojas J. Saez F. 1995. Biologa celular y Molecular
Edith. El Ateneo. Buenos Aires. 956 pp.
-Bachmann K. 2003. Biologa para mdicos. Edith. Reverte
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-Berkaloff. A., 2000. Biologa y Fisiologa celular. I. Membrana
Plasmtica. Edit. OMEGA.
- Berkaloff. A., 2000. Biologa y Fisiologa celular. Il. Aparato
De Golgi,lisosomas,mitocondrias celulas
Y virus Edit. OMEGA.
-Berkaloff. A., 2000. Biologa y Fisiologa celular. Ill. CloroplasTos ,peroxisomas ,divisin celular Edit.
OMEGA.
--Berkaloff. A., 2000. Biologa y Fisiologa celular. IV. Cromosomas, nucleolo ,envoltura celular Edit.
OMEGA.
- Sousa J.
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http://www2.uah.es/biologia_celular/LaCelula/Celula.html
Pgina dedicada al estudio de los componentes celulares
http://www.life.uiuc.edu/plantbio/cell/
Visita virtual a una clula vegetal, recorriendo todos sus orgnulos
http://www-sci.lib.uci.edu/~martindale/MedicalAnatomy.html
Completa coleccin de enlaces con todo lo relacionado con histologa, anatoma,
tcnicas, etc
http://www.kumc.edu/instruction/medicine/anatomy/histoweb/
Pgina atlas de histologa con imgenes comentadas de diversos tejidos y rganos al
microscopio ptico
http://biodidac.bio.uottawa.ca/info/browse.htm
Coleccin de imgenes macro y microscpicas y esquemas de animales y vegetales
http://teaching.anhb.uwa.edu.au/mb140/
Completa pgina atlas de histologa con descripciones de las imgenes, acompaada
de preguntas de examen. Tambin incorpora un microscopio virtual para practicar el
manejo y un resumido curso de estereologa
http://www.uni-mainz.de/FB/Medizin/Anatomie/workshop/EM/EMAtlas.html
Atlas al microscopio electrnico de citologa, histologa y organografa microscpica.
Incluye imgenes y videos del Visible Human, as como un completo glosario. Algunas
de las subpginas estn en alemn.
http://www3.usal.es/histologia/histologia.htm
Completo programa para la enseanza de la histologa y organografa, a base de
dibujos y microfotografas
http://www.mc.vanderbilt.edu/histo/
Pgina con texto e imgenes comentadas al microscopio ptico y electrnico de
diversos tejidos y rganos
http://medocs.ucdavis.edu/CHA/402/course.htm
Atlas histolgico con variadas microfotografas comentadas. Contiene laboratorios c
imgenes interactivas al microscopio electrnico
http://www.unomaha.edu/~swick/index.html
Pgina para la enseanza de la histologa y organografa con texto e imgenes
comentadas
http://www.med.uiuc.edu/histo/atlas/index.htm
Completa pgina interactiva de enseanza de la histologa con numerosas imgenes
comentadas al microscopio ptico y electrnico, sobre las que se puede hacer zoom y
obtener informacin de cada zona, interactivamente con el ratn
http://www.meddean.luc.edu/lumen/index.html
Pgina para la enseanza de la histologa, mediante imgenes al microscopio ptico y
electrnico, con sus correspondientes comentarios
http://online-media.uni-marburg.de/histologie/introhis/HIS/his.htm
Muy buenas imgenes al microscopio electrnico de citologa e histologa humana.
Otras al ptico, a manera de atlas, con breves explicaciones de cada una
http://www.medinfo.ufl.edu/year1/histo/glossary.html - reticular_fiber
Completo glosario de trminos de histologa, con imgenes al microscopio ptico
http://www.uq.edu.au/nanoworld/images_1.html
Catlogo de numerosas imgenes, tanto de zoologa como de botnica, al microscopio
electrnico de transmisin y barrido, con sus comentarios
http://www.udel.edu/Biology/Wags/histopage/histopage.htm
Atlas de imgenes histolgicas al microscopio ptico y electrnico (numerosas),
adems de esquemas en dos y tres dimensiones de cada tejido y rgano
http://www.medinfo.ufl.edu/year1/histo/
Tutorial de histologa con texto e imgenes, expuesto en forma de preguntas de
examen
http://www.medsch.wisc.edu/anatomy/histo/htm/toc.htm
http://bugs.bio.usyd.edu.au/2003A+Pmodules/
Atlas de histologa vegetal
http://www.cas.muohio.edu/~meicenrd/ANATOMY/syllabus.html
Curso sobre histologa vegetal, con numerosos esquemas y microfotografas
http://www.cas.muohio.edu/~meicenrd/tcourses.htm
Acceso a varios cursos sobre botnica e histologa vegetal
http://157.88.160.17/web/materiales/web/histologia/inicio_real.htm
Atlas histolgico interactivo, en espaol, con abundante texto y numerosas imgenes
http://www.biologia.edu.ar/plantas/indplantas.htm
Curso sobre citologa, histologa, organografa y fisiologa vegetal, con texto
explicativo, esquemas, imgenes y algunas animaciones. En la misma pgina pueden
encontrarse varios cursos sobre otros temas biolgicos
http://www.dipbot.unict.it/tavole/index.html
Atlas interactivo con gran cantidad de imgenes e informacin complementaria. En
italiano
http://botit.botany.wisc.edu/images/130/
Completo atlas de histologa vegetal
http://www.inea.uva.es/web/materiales/web/histologia/inicio_real.htm
Completa pgina sobre citologa, histologa y organografa vegetal con muy buenas
imgenes
http://www.biologia.edu.ar/botanica/index.html
Completo curso sobre histologa y organografa vegetal
http://anubis.ru.ac.za/virtualplant/ANATOMY/B1PR2000.htm
Completo curso sobre citologa, histologa y organografa vegetal. Cuenta con
sesiones prcticas con imgenes comentadas de preparaciones microscpicas
http://botweb.uwsp.edu/anatomy/
Atlas fotogrfico de anatoma vegetal. Incluye numerosas macro y microfotografas
http://www.euita.upv.es/varios/biologia/programa.htm
Extensa coleccin de apuntes de histologa vegetal, con numerosos esquemas
ilustrados
INSTRUMENTOS Y TCNICAS
http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/
Microscopa confocal y de fluorescencia
http://www.leica-microsystems.com/llt_index.html
Pgina de la casa Leica, sobre fundamentos de este microscopio y modelos
http://www.denniskunkel.com/
Curiosas microfotografas con microscopa de barrido y posibilidad de manejar
virtualmente uno de estos microscopios
http://www.nottingham.ac.uk/pathology/default.html
Completa coleccin de tcnicas de tincin, con sus correspondientes protocolos
http://www.cs.ubc.ca/spider/ladic/intro.html
Pgina de introduccin al funcionamiento del microscopio confocal, preparacin de
muestras y procesado de las imgenes
http://bris.ac.uk/pathandmicro/cpl/lablinks.html
Manual de tcnicas de preparacin de muestras y tincin
http://wwwcivm.mc.duke.edu/civmGallery/L1Gallery.html
Fundamentos de la microscopa de resonancia magntica y completa galera de
imgenes animadas
http://micro.magnet.fsu.edu/primer/index.html
Una de las mejores pginas sobre microscopa, con amplios textos sobre los diversos
tipos de microscopios y su funcionamiento. Numerosos tutoriales en java sobre el
manejo de distintos microscopios. Se puede descargar un completo manual sobre
microscopa en formato Acrobat.
http://www.mos.org/sln/sem/
ANEXO
PREPARACION DE REACTIVOS
o Agua destilada...............................................................................100 ml
3. Azul de metileno de Loeffler: Tinciones simples.
o Solucin de hidrxido potsico al 1%.................................................1 ml
o Azul de metileno, sol. saturada en etanol al 95%...............................30 ml
o Agua destilada...............................................................................100 ml
4. Colorante para esporas:
o Solucin acuosa saturada de verde malaquita
5. Colorante para flagelos de Leifson:
o Solucin A
Fucsina bsica .........................................................................1,2 g
Etanol 95%.............................................................................100 ml
o Solucin B
cido tnico................................................................................3 g
Agua destilada.........................................................................100
ml
o Solucin C
Cloruro sdico..........................................................................1,5 g
Agua destilada.........................................................................100
ml
Para preparar la solucin de uso, se mezclan cantidades iguales de
las soluciones A, B y C y se guarda en frasco cerrado
hermticamente en la nevera donde es estable durante varias
semanas.
6. Cristal violeta: Para tincin Gram y tincin simple.
o Cristal violeta (violeta de genciana)....................................................0,5 g
o Agua destilada.................................................................................100 ml
7. Eosina: Para observacin de clulas sanguneas.
o Eosina...............................................................................................0,3 g
o cido actico glacial......................................................................0,025 ml
o Agua destilada...................................................................................100
ml
8. Fucsina diluida: Para tincin Gram y tincin simple.
o Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen......................................................10 ml
o Agua destilada.................................................................................100 ml
9. Fucsina fenicada de Ziehl-Neelsen: Para tincin cido-alcohol resistente.
o Fucsina bsica......................................................................................1 g
o Etanol 95%........................................................................................10 ml
o Fenol 5% en solucin acuosa............................................................100 ml
10.Hematoxilina: Para observacin de clulas sanguneas.
o Hematoxilina.........................................................................................2 g
o Agua destilada......................................................................................1 l
11.Lactofenol: Para preparaciones microscpicas en fresco de mohos.
o cido lctico.....................................................................................100 ml
o Fenol................................................................................................100 g
o Glicerol.............................................................................................200 ml
o Agua.................................................................................................100 ml
12.Lactofenol al Azul Algodn: Para preparaciones en fresco y tinciones de
mohos.
o Solucin de azul algodn
Sol. saturada de azul algodn (azul anilina soluble)......................10
ml
Glicerol.....................................................................................10 ml
Agua.........................................................................................80 ml