Professional Documents
Culture Documents
AMIRAH AMATULLAH
1206262071, Teknologi Bioproses,
Departemen Teknik Kimia, Fakultas Teknik Universitas Indonesia
ABSTRAK
Dalam melakukan kloning terhadap suatu sel organisme dibutuhkan vektor. Vektor adalah
molekul DNA yang berfungsi sebagai wahana atau kendaraan yang akan membawa suatu
fragmen DNA masuk ke dalam sel inang dan memungkinkan terjadinya replikasi dan
ekspresi DNA asing tersebut. Vektor yang dapat digunakan pada sel inang prokariot seperti
E. coli (selain plasmid) adalah bakteriofage dan kosmid.
Kata Kunci
vektor, kloning, BAC, bakteriofage, kosmid, sisipan, restriksi, lisogenik, genom
1. PENDAHULUAN
Sejauh ini, penggunaan plasmid kecil
sebagai vektor kloning untuk E. coli telah
dipertimbangkan. Namun, plasmid kecil
bukanlah satu-satunya molekul yang dapat
bereplikasi dalam sel bakteri. Contohnya, E.
coli faktor F (fertilitas) adalah plasmid besar
yang dapat bereplikasi secara independen
terhadap kromosom bakteri, seperti plasmid
lain. F faktor digunakan sebagai dasar
vektor bakteri kromosom buatan (BAC),
untuk kloning potongan yang sangat besar
dari DNA. Virus bakteriofage juga dapat
bereplikasi dalam sel bakteri, dan beberapa
dari mereka telah dikembangkan untuk
digunakan sebagai vektor kloning. Ini
Tabel 1. Jenis-jenis vektor beserta jumlah DNA yang dapat disisipkan vektor
(Sumber: http://digilib.itb.ac.id/files/disk1/628/jbptitbpp-gdl-tinadewiro-31390-3-2008ts-2.pdf)
hibrida
antara
2. VEKTOR BAC
Vektor
BAC
(Bacterial
Artifical
Chromosome) didasarkan pada faktor F
(fertilitas) yang diidentifikasi pada E. coli
sebagai katalisator pertukaran genetik antar
sel. Faktor F adalah plasmid yang dapat
mengarahkan transfernya sendiri ke dalam
sel yang belum mengandung plasmid. Sel
yang mengandung plasmid F kadang-
DNA
rekombinan
untai
tunggal.
Endonuklease restriksi akan bekerja
hanya pada molekul beruntai ganda, dan
plasmid yang ditemui sejauh ini juga
beruntai gada; cara terbaik untuk
mendapatkan kloning DNA untai tunggal
adalab mencairkan dua helai terpisah dan
menggunakan mereka sebelum mereka
menyatu kembali.
Namun, jika molekul beruntai ganda
dapat dibuat menggunakan M13 RF
sebagai vektor dan digunakan pada E.
coli melalui transformasi, maka mereka
akan berperilaku di sana seperti DNA RF
normal dan menghasilkan salinan untai
tunggal dari molekul yang sama, yang
akan dikemas dan dilepaskan dari sel.
Jadi M13 menawarkan cara mengubah
dsDNA menjadi DNA untai tunggal. Hal
ini biasanya jauh lebih mudah dan lebih
dapat diandalkan untuk menggunakan
M13 daripada untuk mempersiapkan
DNA untai tunggal dari plasmid untai
ganda dengan denaturasi mereka.
3.2 Desain Vektor M13
Prinsip-prinsip yang sama yang kita
lihat dalam Bab 3 diterapkan pada desain
vektor plasmid juga berlaku untuk desain
vektor M13. Kita membutuhkan origin
replikasi. Fage memiliki origin nya sendiri,
sehingga tidak menimbulkan kesulitan.
Tidak ada masalah juga selama penanda
dipilih, sebagai fage adalah penanda
yang telah dipilih sendiri. Sel yang
mengambil DNA fage akan menghasilkan
lebih banyak fage dan menjadi fokus
untuk infeksi sel-sel lain. Penadahan sel
dari transformasi akan, oleh karena itu,
menghasilkan rumput (lapisan seragam
sel) yang bertabur lubang (plak) yang
timbul dari sel yang terinfeksi yang telah
mengambil molekul DNA fage dan
menghasilkan lebih banyak fage, yang
telah menginfeksi sel-sel di sekitarnya.
Meskipun M13 tidak benar-benar melisis
sel yang terinfeksi, itu menghambat
pertumbuhan mereka; sehingga plak
yang terlihat bukan merupakan plak yang
sebenarnya (yang timbul dari lisis sel),
tetapi daerah pertumbuhan yang lambat.
Waktu pembelahan sel dari terinfeksi E.
coli meningkat dari 20 menit dalam
5. KOSMID
Sebagaimana
yang
telah
dilihat,
konkatemer satuan panjang molekul DNA
dapat dikemas dengan efisien jika situs cos,
substrat untuk pembelahan bergantung
kemasan, terpisah dengan jarak 37-52 kb
(75-105% ukuran + DNA). Bahkan, hanya
daerah kecil di dekat situs cos yang
diperlukan untuk pengenalan oleh sistem
kemasan (Hohn 1975). Plasmid telah dibuat
mengandung fragmen DNA termasuk situs
cos (Collins & Bruning 1978, Collins & Hohn
1979, Wahl et al. 1987, Evans et al. 1989).
Plasmid ini telah disebut kosmid dan dapat
digunakan sebagai vektor kloning gen dalam
hubungannya dengan sistem kemasan in-
10. KESIMPULAN
Ada tiga macam vektor yang telah dikembangkan untuk kloning DNA dalam Escheria
coli, yaitu plasmid, fage, dan kosmid. Sebagian besar DNA fage tidak penting untuk infeksi
dan dapat diganti dengan DNA asing. Mutan-mutan fage yang dirancang untuk kloning DNA
telah dikonstruksi. Hampir semua partikel-partikel fage yang dibentuk akan mengandung
DNA asing yang disisipkan. Kelebihan penggunaan virion-virion ini sebagai vektor ialah
bahwa virion akan memasuki bakteri dengan frekuensi lebih tinggi dari plasmid. Molekulmolekul DNA rekombinan dapat dikemas in vitro untuk membawa virion-virion yang infektif.
Kosmid adalah vektor lain yang dikonstruksikan dari plasmid normal dan tempat cos (ujung
kohesif) dari fage .
REFERENSI
Anonim, 2011.
Phage P1. [online] http://ecoliwiki.net/colipedia/index.php/Phage_P1
[diakses pada 5 Oktober 2014].
Anonim,
2012
Bacterial
Artificial
Chromosomes
(BAC).
[online]
.
http://en.wikibooks.org/wiki/Structural_Biochemistry/DNA_recombinant_techniques/Artifi
cial_Chromosomes/Bacterial_Artificial_Chromosomes_(BAC) [diakses pada 3 Oktober
2014].
Anonim, 2012. Mu: A Double-Stranded Transposable DNA Bacteriophage. ). [online]
https://www.boundless.com/microbiology/textbooks/boundless-microbiologytextbook/viruses-9/viral-diversity-123/mu-a-double-stranded-transposable-dnabacteriophage-635-52/ [diakses pada 5 Oktober 2014].
10
11