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DEPARTAMENTO DE FARMACOLOGIA
DISCIPLINAS DE FARMACOLOGIA E FARMACOLOGIA CELULAR
Chefe do Departamento:
CORPO DOCENTE
Disciplina de Farmacologia
Afonso Caricati Neto
Aron Jurkiewicz
Lcia Garcez do Carmo
Miriam Galvonas Jasiulionis
Neide Hyppolito Jurkiewicz
Roberto Frussa Filho
Rosana de Alencar Ribeiro
Soraya Soubhi Smaili
Vanessa Costhek Abilio
Prof. Adjunto
Prof. Titular
Prof. Associado
Prof. Adjunto
Prof. Afiliado
Prof. Associado / Livre Docente
Prof. Adjunto
Prof. Associado / Livre Docente
Prof. Adjunto
Prof. Titular
Prof. Titular
Prof. Associado / Livre Docente
Prof. Associado
Prof. Adjunto
Prof. Associado
Prof. Adjunto
Prof. Associado
Tcnicos
Hanako Hirata
Maria do Carmo Gonalo
Maria Emlia H. Yamamoto
Mirtes Midori Tanae
Secretria
Rosngela Rapacci
SEMANA TIPO
ASSUNTO
11.02.2008
T1
14.02.2008
T2
Farmacocintica I
15.02.2008
T3
18.02.2008
T4
21.02.2008
T5
Farmacocintica II
Mecanismo de Ao de Drogas: Receptores Farmacolgicos
e Sistemas de Transduo
Fatores que Influenciam a Ao de Drogas
22.02.2008
P1
INTERAO DROGA-RECEPTOR
25.02.2008
T6
28.02.2008
P2
29.02.2008
T7
SNA: Simpatomimticos
T8
SNA: Simpatolticos
06.03.2008
P3
07.03.2008
T9
SNA: Parasssimpatomimticos
10.03.2008
T10
SNA: Parassimpatolticos
T11
Farmacologia do Gnglio
03.03.2008
13.03.2008
6
2
2
5
14.03.2008
P4
17.03.2008
2a
T12
20.03.2008
P5
21.03.2008
24.03.2008
T13
27.03.2008
TP1
28.03.2008
PRI
AP
APRESENTAO DO BIOMDICO
03.04.2008
T14
04.04.2008
T15
07.04.2008
P6
T16
11.04.2008
T17
14.04.2008
T18
17.04.2008
P7
Andrgenos e Antiandrgenos
Estrgenos: Reposio Hormonal e Mecanismo de
Contracepo
ANDRGENOS E ANTIANDRGENOS
18.04.2008
6a
T19
Antiestrgenos e Antiprogestgenos
21.04.2008
24.04.2008
T20
25.04.2008
T21
FERIADO-TIRADENTES
Antitireoideanos e Fisiofarmacologia do Hormonio de
Crescimento
Farmacologia da Paratireide e Vitamina D
28.04.2008
T22
31.03.2008
10.04.2008
2
5
LOCAL
LAB. 1
LAB. 1
LAB. 1
LAB. 1
LAB. 1
INFAR
-
LAB.1
LAB. 1
DATA
SEMANA TIPO
ASSUNTO
LOCAL
01.05.2008
02.05.2008
TP2
INFAR
08.05.2008
PRII
09.05.2008
T23
Sistema Cardiovascular I
12.05.2008
T24
Sistema Cardiovascular II
T25
05.05.2008
15.05.2008
6
2
2
5
16.05.2008
T26
Diurticos e Antihipertensivos
19.05.2007
P8
LAB. 1
22.05.2008
26.05.2008
T27
Antilipidmicos
29.05.2008
T28
30.05.2008
T29
T30
23.05.2008
02.06.2008
6
2
05.06.2008
TP3
06.06.2008
PRIII
09.06.2008
T31
T32
Neurolpticos I
13.06.2008
T33
Neurolpticos II
16.06.2008
T34
Antiparkinsonianos
19.06.2008
T35
Ansiolticos
T36
Antidepressivos
12.06.2008
20.06.2008
2
5
5
6
23.06.2008
T37
Antiepilpticos
26.06.2008
P9
NEUROLPTICOS
27.06.2008
T38
Analgsicos Opiides
T39
Anestsicos Gerais
30.06.2008
6
2
03.07.2008
TP4
04.07.2008
PRIV
07.07.2008
PRSB
PROVA SUBSTITUTIVA
11.07.2008
EX 1
EXAME DE 1 POCA
11.08.2008
EX 2
EXAME DE 2 POCA
INFAR
LAB. 1
LEAL PRADO
AULA
DATA DA AULA
ENTREGA DO RELATRIO
INTERAO DROGA-RECEPTOR
EFEITO COMBINADO DE DROGAS
SISTEMA NERVOSO SIMPTICO
SISTEMA NERVOSO PARASSIMPTICO
FARMACOLOGIA DO NERVO PERIFRICO
SISTEMA RECEPTOR: UMA VISO INTEGRADA
ANDRGENOS E ANTIANDRGENOS
REGULAO DA CONTRATILIDADE DO MIOCRDIO
NEUROLPTICOS
22.02.2008
28.02.2008
06.03.2008
14.03.2008
17.03.2008
07.04.2008
17.04.2008
19.05.2008
26.06.2007
29.02.2008
07.03.2008
14.03.2008
24.03.2008
27.03.2008
14.04.2008
25.04.2008
26.05.2008
30.06.2007
OBJETIVO DO CURSO
O Curso de Farmacologia tem como objetivo introduzir os conceitos bsicos de Farmacologia Geral
visando a capacitao do aluno para o entendimento da teraputica medicamentosa. Durante o curso, dse nfase aos mecanismos de ao das principais drogas e medicamentos, relacionando-os
fisiopatologia das principais doenas sistmicas.
ORIENTAO GERAL
O Curso de Farmacologia compreende aulas tericas, prticas e terico-prticas. A participao
direta dos alunos nas aulas prticas tem a finalidade de inici-los na experimentao farmacolgica,
realando as noes bsicas de Farmacologia, a administrao de medicamentos e as principais
interaes medicamentosas.
As AULAS TERICAS visam dar um conhecimento geral sobre o assunto em estudo, havendo
complementao das informaes fornecidas em aulas terico-prticas, prticas e multimdia.
As AULAS TERICO-PRTICAS constam de demonstraes, pelo professor, do estudo do
mecanismo de ao e efeito de drogas em diferentes modelos experimentais, com discusso e
comentrios dos resultados.
As AULAS PRTICAS foram planejadas para equipes de 4 a 5 alunos, de tal maneira que uma aula
bem executada durar no mximo 4 horas. sempre necessria a leitura prvia pelo aluno do roteiro a ser
executado anteriormente aula ministrada. Ao final de cada aula prtica, as equipes consolidam os
conceitos tericos e prticos desenvolvidos na aula pela elaborao de um relatrio que, posteriormente,
avaliado pelo docente responsvel pela aula (ver regras adiante).
As VISITAS AOS SETORES do Departamento foram planejadas para que os alunos possam
conhecer a infra-estrutura e as linhas de pesquisa desenvolvidas pelos docentes. As atividades a serem
desenvolvidas no perodo sero de responsabilidade de cada Setor do Departamento, tendo como objetivo
principal a demonstrao das estratgias experimentais e metodologias utilizadas dentro de suas linhas de
pesquisa.
A avaliao do aluno feita considerando-se as notas (0-10) obtidas nas 4 provas parciais. O
assunto de cada prova parcial refere-se somente matria ministrada a partir da primeira aula do perodo
precedente. Cada prova parcial constar de 25 questes de mltipla escolha e 5 questes escritas.
No final do curso h uma prova substitutiva para o aluno que, por qualquer motivo, no pde
comparecer a uma das provas parciais. Esta prova tambm pode ser utilizada por qualquer aluno que
queira repor uma nota de prova parcial na qual apresentou baixo desempenho. A prova substitutiva
constar de 10 questes escritas abordando temas das aulas ministradas em todo o curso. O aluno
interessado dever inscrever-se na Secretaria do Departamento de Farmacologia (Ed. INFAR, andar
trreo) at 2 dias antes da aplicao da prova substitutiva. O aluno dever indicar, quando for o caso, qual
a prova parcial cuja nota ser reposta pela nota obtida na prova substitutiva.
O conceito final ser calculado pela mdia das notas obtidas pelo aluno nas 4 provas parciais,
seguindo o critrio de 0 a 10,0. Os critrios de aprovao e a realizao de exames de 1a e 2a poca
seguiro o regulamento aprovado na 59a Reunio Extraordinria do Conselho de graduao da
UNIFESP/Escola Paulista de Medicina realizada em 18 de dezembro de 2002. Quando necessrio, a
participao do aluno durante o curso e, principalmente, em aulas prticas e na confeco de relatrios
podero ser levados em conta para fins de aprovao final.
2.
3.
No incio do curso os alunos devero se organizar em grupos de 4-5 alunos que, ao longo do curso,
estaro realizando o trabalho experimental aplicado em cada aula prtica.
4.
5.
Qualquer material danificado pelo aluno dever ser substitudo dentro do prazo de uma semana.
6.
No ser computada a presena, na aula prtica, dos alunos que assinarem a lista de chamada no
incio da aula e no apresentarem relatrio da mesma. O controle da presena de alunos ser feito
rigorosamente no incio da aula, havendo 10 minutos de tolerncia.
7.
Ao final de cada aula, a equipe dever elaborar e apresentar por escrito um relatrio descrevendo
os experimentos realizados, apresentando os resultados, figuras, grficos (quando for o caso) e
concluses.
8.
Os relatrios devero ser entregues dentro de uma pasta com elstico, na Secretaria do
Departamento de Farmacologia, (Ed. INFAR) no prazo estipulado. Os relatrios sero corrigidos
pelo docente responsvel pela aula prtica que aplicar conceito de avaliao (insuficiente, regular,
bom e timo) de acordo com a nota recebida.
9.
O aluno deve ter cincia da importncia do relatrio para a consolidao dos conceitos tericos
pretendidos a cada aula e que sero temas cobrados em questes das provas parciais
ministradas. .
CUIDADOS COM OS ANIMAIS DE LABORATRIO
"Somente animais criados nas melhores condies, obtidos legalmente ou doados por
Instituies congneres sero usados nestes Laboratrios".
Seja qual for a sua procedncia, os animais destinados ao ensaio e pesquisa, em
experincias agudas ou crnicas, sero tratados com bondade, mantidos em condies satisfatrias
e alimentados corretamente. O mau trato infringido a esses animais, por elementos estranhos ou
no ao quadro destes Laboratrios ser motivo de advertncia e, quando o caso, de excluso.
absolutamente proibido operar os animais sem anestesia conveniente e satisfatria. Se a
natureza do estudo exigir a sobrevivncia do animal, a operao dever ser feita dentro das normas
tcnicas seguidas em tais casos.
Quando a natureza da experincia ou a finalidade das observaes implicarem no sacrifcio
do animal, este dever ser feito piedosa e rapidamente.
Os cuidados ps-operatrios com os animais de experimentao devero ser tomados de
maneira a serem evitados sofrimentos inteis ou convalescena penosa.
no trato dos animais de experincia que o aluno e o professor revelam o seu carter e o
seu apreo "VIDA".
LITERATURA SUGERIDA
1. Goodman and Gilman As Bases Farmacolgicas da Teraputica 11 edio, Editora Guanabara Koogan 2007
(edio em portugus).
-
Goodman & Gilmans Hardman, Limbird, Gilman The Pharmacological Basis of Therapeutics 11 edition,
2006 (edio em ingls).
2. Rang, Dale e Ritter Farmacologia 5 edio Elsevier Editora Ltda 2004 (3 Tiragem Revista)
3. De Lcia, R.; Oliveira-Filho, R.M. Farmacologia Aplicada. 3 edio, Livraria e Editora REVINER,
2007.
4. Penildon Silva Farmacologia 6 edio Editora Guanabara Koogan 2002.
5. Brody, Larner Minneman, Neu Farmacologia Humana, da Molecular Clnica 2 edio- Editora
Guanabara-Kogan 1997.
6. Katzung B. G. Basic & Clinical Pharmacology Appleton & Lange, Norwalk, Connecticut 6a edition
1995.
7. Craig C. e Stitzel R. Farmacologia Moderna Editora Roca.
Objetivos:
Animal:
Preparao:
Jejuno de rato.
Lquido Nutritivo:
Lquido Tyrode com a seguinte composio (g/l): NaCl, 8; NaH2PO4, 0,05; KCl, 0,2; NaHCO3,
1; CaCl2, 0,2; Glicose, 1; MgCl2, 0,2.
Drogas:
Acetilcolina
- Frascos numerados, podendo conter em seu interior drogas que interagem ou no com os
receptores muscarnicos da acetilcolina, no intestino. Quanto ao tipo de ao, essas drogas
podero ser:
Agonistas totais:
Agonistas parciais:
Antagonistas competitivos:
Antagonistas no competitivos:
Incuas:
Aparelhagem:
O rgo isolado ser adaptado a uma cuba de vidro contendo lquido nutritivo aquecido a
37oC. A cuba de vidro apresenta em sua poro inferior duas sadas: uma delas, a lateral,
serve para a entrada de lquido nutritivo e a outra, a inferior, serve para o seu esvaziamento.
Uma haste de vidro colocada dentro da cuba serve para fixar uma das extremidades muscular
a uma alavanca isotnica de inscrio frontal e para a aerao (ver figura 1A).
Figura 1A
Figura 1A
Figura 1B
10
11
comparar as alturas mximas das duas curvas e as doses necessrias para produzir efeitos iguais.
Em caso das duas (curva 1 - com desconhecido e curva 2 - sem desconhecido) serem iguais, a droga
desconhecida incua. Em caso de curvas com o mesmo aspecto, porm com necessidade de doses
maiores para a curva 1, o antagonismo competitivo. Em caso de diminuio na altura mxima da curva
1, o antagonismo no competitivo.
4) Preencher o Quadro II com os resultados encontrados.
5) Fazer um grfico a partir dos dados do Quadro II (logartmo da dose em abcissas e efeito em ordenadas).
6) Repetir com a segunda droga desconhecida a conduta descrita em 3. Preencher o Quadro III e fazer o grfico
correspondente.
7) Solicitar ao assistente a identificao das drogas usadas, colocando os resultados nos Quadros II e III.
QUADRO I
- Curva dose-resposta de Acetilcolina
Dose (log)
Efeito (mm)
Efeito (%)
QUADRO II
A) Em caso de contrao do intestino com o uso da primeira droga desconhecida:
- Curva dose-resposta da primeira droga desconhecida
Dose (log)
Efeito (mm)
Efeito (%)
12
QUADRO III
A) Em caso de contrao do intestino com o uso da segunda droga desconhecida:
- Curva dose-resposta da segunda droga desconhecida
Dose (log)
Efeito (mm)
Efeito (%)
13
Acetilcolina 10-1 M e
Atropina 10-3 M
Lquido Nutritivo
TcnicaSacrificar o animal, aprofundando a anestesia com ter. Abrir o animal e retirar um segmento de mais ou
menos 10 cm de jejuno. Lavar a luz intestinal com Tyrode aquecido a 37o C. Adaptar o rgo
aparelhagem, conforme descrito na Aula Prtica 1. A preparao, depois de montada, deve
ficar em repouso por 15 minutos.
Diluies
Experimento
1. Fazer uma curva cumulativa de Acetilcolina iniciando com a dose que no produza efeito e
ir aumentando as doses at obteno do efeito mximo. Lavar a preparao e esperar a volta
linha de base.
2. Colocar Atropina para uma concentrao final no banho de 10-8 M. Esperar 3 minutos e,
sem lavar a preparao, repetir a curva de acetilcolina. Lavar a preparao e esperar a volta
linha de base.
3. Colocar Atropina para uma concentrao final no banho de 3.10 -8 M. Esperar 3 minutos e,
sem lavar a preparao, repetir a curva de acetilcolina. Lavar a preparao e esperar o
relaxamento.
4. Colocar Atropina para uma concentrao final no banho de 10 -7 M. Esperar 3 minutos e,
sem lavar a preparao, repetir a curva de acetilcolina.
5. Fixar o grfico em verniz.
6. Medir os efeitos em milmetros (mm). Transformar as medidas em porcentagem,
considerando o efeito mximo da primeira curva de Acetilcolina como 100% para ela prpria e
para todas as curvas seguintes. Fazer um grfico em papel milimetrado mostrando as curvas
dose-efeito.
Mecolil 1 M e Butirilcolina 1 M
TcnicaSacrificar o animal, aprofundando a anestesia com ter. Abrir o animal e retirar o estmago. Cortar o fundus e
lavar com Tyrode aquecido a 37o C. Colocar o fundus sobre um basto de vidro e retirar uma
faixa de 1 a 2 cm de comprimento e cerca de 0,5 cm de largura. A preparao, depois de
montada, deve ficar em repouso por 30 minutos.
Diluies
14
Experimento
1. Fazer uma curva cumulativa de mecolil at a dose que no produza mais efeito adicional e,
sem lavar a preparao, iniciar a curva cumulativa de butirilcolina. Lavar a preparao e
esperar o relaxamento.
2. Fazer uma curva cumulativa de butirilcolina. Lavar a preparao e esperar o relaxamento.
3. Fazer uma curva cumulativa de Mecolil at a dose que produza um efeito um pouco menor
que a altura mxima da curva anterior de butirilcolina, e, sem lavar a preparao, iniciar a
curva cumulativa de butirilcolina.
4. Fazer uma curva de mecolil somente at a primeira dose que produza efeito e, sem lavar a
preparao, iniciar a curva de butirilcolina.
5. Fixar o grfico em verniz.
6. Medir os efeitos em milmetros (mm) e transform-los, em seguida, em porcentagem,
considerando como 100% e efeito mximo da primeira curva de mecolil. Fazer um grfico em
papel milimetrado mostrando as curvas dose-efeito.
Acetilcolina 10-1 M e
Papaverina 10-3 M
TcnicaAps o sacrifcio, abrir o animal e retirar um segmento de mais ou menos 10 cm de leo, prximo ao ceco.
Lavar a luz intestinal com Tyrode aquecido a 37oC. Adaptar o rgo aparelhagem, conforme
descrito no roteiro da Aula Prtica 1. A preparao, depois de montada, deve ficar em repouso
por 10 minutos.
Diluies
Experimento
1. Fazer uma curva de acetilcolina iniciando com uma dose que no produza efeito e ir
aumentando a dose at o efeito mximo. Lavar a preparao e esperar o relaxamento.
2. Colocar papaverina numa concentrao final de 10-6 M. Esperar 3 minutos e, sem lavar a
preparao, iniciar a curva de acetilcolina. Lavar a preparao e esperar o relaxamento.
3. Colocar papaverina numa concentrao final de 3.10-6 M. Esperar 3 minutos e, sem lavar a
preparao, iniciar a curva de Acetilcolina.
4. Colocar papaverina numa concentrao final de 10-5 M. Esperar 3 minutos e, sem lavar a
preparao, iniciar a curva de Acetilcolina.
5. Fixar o grfico em verniz.
6. Medir os efeitos em milmetros (mm), transformando-os em seguida em porcentagem,
considerando o efeito mximo da primeira curva de Acetilcolina como 100% para ela prpria e
para todas as curvas seguintes. Fazer um grfico em papel milimetrado mostrando as curvas
dose-efeito.
15
Preparao
Lquido Nutritivo
Tyrode modificado, LNV (mM): NaCl 138; KCl 5,7; CaCl2 1,8; NaH2PO4 0,36; NaHCO3 15 e
glicose 5,5.
Drogas
Tiramina
Adrenalina
Cocana
Diluio
Adrenalina
Concentrao
10-2 M
1M
100 g/ml
Concentrao no banho
10-4 M
1,5 g/ml
Tcnica
1. Montagem da aparelhagem:
a) Encher o frasco de Mariotte e as tubulaes com lquido nutritivo.
b) Colocar o lquido nutritivo em um becker e deix-lo aquecer. O experimento ser feito na temperatura de
30o C.
c) Equilibrar a alavanca e arrum-la para que d uma ampliao de 6 vezes, com carga de 1 g.
16
Experimento
Sero realizados dois ensaios diferentes, um com o ducto deferente de animal normal (A) e outro com o do
animal tratado com Reserpina (B).
A - GRUPO NORMAL
1. Adicionar por quatro (4) vezes sucessivas Tiramina ao banho nutritivo, na concentrao final de 10-4 M.
Entre uma dose e outra, lavar a preparao e deixar um intervalo de 10 a 15 minutos.
2. Fazer uma curva dose-efeito cumulativa para Adrenalina at obteno do efeito mximo. Lavar a
preparao e deixar em repouso de 10 a 15 minutos.
3. Repetir a adio de Tiramina de forma a obter a concentrao final de 10-4 M e observar os efeitos.
B - GRUPO TRATADO COM RESERPINA
1. Adicionar ao banho nutritivo Tiramina, de forma a obter a concentrao final de 10 -4 M e observar os efeitos.
Lavar a preparao e esperar a volta linha de base.
2. Fazer uma curva dose-efeito cumulativa para a Adrenalina at a obteno do efeito mximo. Lavar a
preparao e deixar em repouso de 10 a 15 minutos.
3. Repetir por duas vezes sucessivas a adio de Tiramina ao banho nutritivo, na concentrao final de 10-4 M.
Entre uma dose e outra lavar a preparao e deixar um intervalo de 10 a 15 minutos.
4. Adicionar Cocana ao banho nutritivo na concentrao final de 1,5 g/ml. Esperar 10 minutos e, sem lavar
a preparao, repetir a curva cumulativa de Adrenalina. Lavar a preparao e deixar em repouso durante mais
ou menos 10 a 15 minutos.
5. Repetir a adio de Tiramina ao banho nutritivo na concentrao final de 10-4 M e observar os efeitos.
No relatrio os resultados obtidos nos 2 grupos experimentais devem ser comparados e o mecanismo de ao das
drogas empregadas explicado.
17
Objetivo:
O duodeno de coelho apresenta tnus e automatismo tanto maiores quanto mais alta a
poro intestinal observada. Sua ocorrncia dependente, em grande parte, de arcos reflexos
intrnsecos originados em terminaes sensitivas da mucosa intestinal e mediados por uma
sinapse nos gnglios mioentricos. Nessa preparao o tnus e o automatismo so
conservados, pelo menos em parte, permitindo assim o estudo de drogas relaxantes e
espasmdicas que atuam por diferentes mecanismos de ao.
Lquido Nutritivo:
Drogas Acetilcolina (cloridrato) 50 g/ml; Adrenalina (bitartarato) 50 g/ml; Pilocarpina 50 g/ml; Atropina (sulfato)
500 g/ml; Nicotina 10 mg/ml; Papaverina (cloridrato) 1 mg/ml.
TcnicaAquecer Tyrode ( 200 ml) a 37oC. Sacrificar o animal, abrir o abdomem, identificar o duodeno a partir do
estmago e isolar cerca de 10 cm; desfazer as pregas do mesentrio e, com o auxlio de uma
pipeta, lavar a luz do rgo com 20 ml de soluo nutritiva aquecida. Mergulhar a preparao
no restante do lquido e deixar em repouso a 37 oC, at o aparecimento dos movimentos
pendulares. Retirar um segmento de mais ou menos 3 cm de comprimento. Usando uma
agulha de sutura, amarrar o rgo de modo a deixar as extremidades em forma de 8. Adaptar
o rgo aparelhagem.
Experimento
18
Animais
Experimento I:
Material
Soluo Nutritiva
Tyrode de mamfero. Composio (mM): NaCl 140; NaHCO3 10; KCl 2,7; NaH2PO4 0,4; MgCl2
2; Glicose 5 e CaCl2 1,8.
Drogas
d-tubocurarina 100 g/ml (= 1,4 x 10-4 M); Succinilcolina 100 g/ml; Neostigmina
0,5 mg/ml
Montagem:
a) Anestesiar o rato com ter e fix-lo o animal em placa de cortia. b) Retirar a pele do trax e abrir o
abdome cortando a parede muscular rente s costelas.
b) Segurar o processo xifide com pina dente de rato e abrir o trax, cortando costelas e esterno 0,5
cm acima do diafragma.
c) Identificar o frnico esquerdo e dissec-lo em toda sua extenso. Cuidado para no estirar o
nervo.
d) Cortar lateralmente o gradeado costal e remov-lo de tal forma a visualizar o nervo desde sua
entrada no trax.
e) Cortar as estruturas do mediastino e as ligaes do frnico com o fgado e isolar a preparao
cortando o msculo o mais dorsalmente possvel.
f) Colocar imediatamente o msculo em lquido nutritivo. Cuidado com o nervo.
g) Distender o msculo numa placa de parafina e fix-lo com alfinetes. Cortar em leque, 1 cm de cada
lado da entrada do nervo, uma linha nas costelas e formar um lao.
h) Amarrar uma linha nas costelas e formar um lao e outra de 20 cm no tendo.
i) Amarrar linha curta de mais ou menos 10 cm no nervo. Cuidado para no estir-lo.
j) Adaptar o msculo na haste de fixao na cuba e prend-lo alavanca inscritora ou ao transdutor.
k) Passar a linha do nervo por dentro do eletrdio. Fixar o eletrdio. Fixar o eletrdio e puxar o nervo
para o eletrdio.
l) Ligar o fio do eletrdio ao estimulador. No esquecer de terrar o aparelho antes de lig-lo.
m) Estimular o msculo a cada 10 segundos com pulsos supramximos de 0,5 ms.
n) Regular a inscrio da alavanca ou do polgrafo para mais ou menos 5 cm.
o) Registrar continuamente por 5 min e iniciar a administrao de drogas.
Execuo do Experimento:
a) Registrar as contraes por 5 min.
b) Pipetar a soluo de d-tubocurarina para obter na cuba uma concentrao final de 0,1 g/ml.
c) Registrar o efeito por 3 min.
d) Lavar a preparao, 3 vezes ou mais, at recuperar a contrao controle.
e) Dobrar a concentrao anterior do padro e repetir 3 e 4.
f) Dobrar a concentrao anterior e ir sucessivamente at obter bloqueio total em 3 min.
g) Escolher a concentrao que em 3 min reduz a contrao a 50% da inicial (CE50) e registrar os efeitos.
19
h) Aps 3 min, sem lavar a preparao, pipetar neostigmina (20 g/ml). Registrar por 3 min.
i) Lavar a preparao at recuperar a contrao controle.
j) Pipetar na cuba succinilcolina em concentrao final de 2.5 g/ml e registrar por 3 min.
k) Aps 3 min, sem lavar a preparao, pipetar neostgmina (20 g/ml) e registrar por 3 min.
l) Lavar a preparao.
m) Terminado o experimento, desmontar a preparao e limpar a mesa.
20
para
estudo
de
receptores
farmacolgicos,
envolvendo
conhecimentos
multidisciplinares.
Problema
Um pesquisador tem o seguinte problema: a estimulao do receptor R por um agonista D, acoplado protena G
(Gs), responsvel pela ativao da enzima adenililciclase (AC) e subsequente produo de AMPcclico e consequente
ativao da enzima protena quinase A (PKA), promove um efeito final aumentado em um tecido de um rato Wistar
3RC, quando comparado ao efeito obtido no mesmo tecido de um rato Wistar normal.
Lembrando que:
D + R
DR
Gs/AC
AMPc/PKA/ ...
Efeito
Farmacolgico
e, considerando as metodologias cientficas disponveis, como voc ajudaria o pesquisador a determinar qual (quais)
etapa(s) da cadeia acima poderia(m) estar alterada(s) no tecido do rato 3RC? Descreva sucintamente uma
metodologia para cada etapa (1, 2 e 3), indicando os resultados esperados.
Estratgia de trabalho
Os grupos tero o horrio relativo a duas aulas para a realizao das discusses em grupo, consulta a
material didtico e elaborao do relatrio final. Na terceira aula, alm da entrega do relatrio por escrito, cada grupo
ter aproximadamente 10 minutos para apresentar e justificar oralmente as metodologias escolhidas que devero, em
seguida, serem discutidas por toda a classe. O conceito final ser computado pela avaliao do relatrio,
apresentao oral e participao efetiva de cada grupo nas discusses.
21
Animais
Ratos, adultos, machos, com 3 meses e 15 dias de idade. Sem marcas (SM) sero os controles. DT,
orelha direita total; ET, orelha esquerda total e DET, orelha direita e esquerda total recebero
tratamentos que, at o final da aula, devero ser identificados.
Drogas - Durateston 250 (propionato de testosterona 30 mg, fenilpropionato de testosterona 60 mg, isocaproato de
testosterona 60 mg, caproato de testosterona 100 mg dissolvidos em leo de amendoim 1 ml);
Benzoginoestril (composto por hexahidrobenzoato de estradiol 5 mg/ml em leo de amendoim).
Castrao cirrgica:
O animal foi anestesiado por inalao de vapores de ter etlico, um dos testculos foi exposto,
ligado o pedculo vascular com um fio de algodo e seccionado. O mesmo procedimento foi repetido
para o testculo contralateral. Extirpadas as gnadas, as estruturas remanescentes foram recolocadas
no interior da bolsa escrotal e o animal suturado com fio de algodo.
Tratamentos:
Todos os tratamentos de animais sero mantidos por 15 dias. Portanto, os animais sero
sacrificados com 4 meses de idade.
Grupos Experimentais:
I. Grupo Controle: Ratos tratados com 0,1 ml de leo de amendoim, por via subcutnea.
II. Grupo Castrado: Ratos castrados e tratados, a partir do dia da castrao, com 0,1 ml de leo
de amendoim, por via subcutnea.
III. Grupo Castrado e tratado com droga com Atividade Andrognica: Ratos castrados e
tratados, no primeiro dia da castrao e a cada 7 dias, com 0,1 ml de Durateston 250, por via subcutnea,
durante 15 dias.
IV. Grupo tratado com droga com Ao Antiandrognica: Ratos tratados 2 vezes por
semana, por 15 dias.por via, subcutnea com 0,2 ml Benzoginoestril.
Procedimento
1. Inicialmente, o rato controle (SM) dever ser pesado e o valor anotado na tabela de resultados.
2. Aps ser sacrificado por inalao de vapores de ter etlico, o animal dever ser fixado em decbito dorsal sobre
uma placa de cortia, a cavidade abdominal aberta e o intestino rebatido para exposio dos seguintes rgos
genitais acessrios: vesculas seminais, ductos deferentes e prstatas ventrais.
3. A ausncia ou presena de testculos, assim como o tamanho, a vascularizao, a presena e a quantidade de
secreo dos rgos genitais acessrios devero ser observados.
4. Os rgos genitais acessrios devero ser retirados do animal, separados dos tecidos adjacentes, lavados com
salina, secos entre folhas de papel de filtro e pesados em balana analtica.
5. O mesmo procedimento dever ser repetido para os demais grupos experimentais.
6. Os valores obtidos devero ser anotados na tabela de resultados. Ao final do experimento, a tabela de resultados
dever ser preenchida com os dados de todos os animais. Os grupos experimentais devero ser identificados. Os
resultados devero ser discutidos e interpretados.
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Tabela de resultados
Marca do
Animal
Grupo de
alunos
SM
Tratamento:
II
III
IV
V
VI
mdia EPM
DT
Tratamento:
II
III
IV
V
VI
mdia EPM
ET
Tratamento:
II
III
IV
V
VI
mdia EPM
DET
Tratamento:
II
III
IV
V
VI
mdia EPM
Peso do
animal
(g)
Presena
de
testculo
Ducto
deferente
Vescula
seminal
Secreo
(+ a ++++
+)
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Animal
Rato ou cobaia.
Lquido
Drogas
Adrenalina 2 x 10-5 M;
Acetilcolina 2 x 10-5 M;
Ouabana 2 x 10-5 M
Propranolol 2 x 10-5 M;
Atropina 2 x 10-5 M;
Cloreto de Clcio 10-1 M
Isoprenalina 2 x 10-5 M;
Isobutilmetilxantina (IBMX) 2 x 10-4 M
Procedimento Sacrificar o animal, expor a cavidade torcica, retirar o corao rapidamente e coloc-lo em recipiente
contendo lquido nutritivo aquecido. Isolar os trios direito e esquerdo e, por meio de amarras de linha
nas duas extremidades, suspender a preparao em cuba de vidro contendo Tyrode aerado com
carbognio a 370 C. Registrar a fora e a frequncia dos batimentos atriais em registrador poligrfico.
Aps 15 minutos de registro controle, observar os efeitos das drogas conforme a sequncia abaixo:
1. Adrenalina 10-7 a 10-6 M
2. Acetilcolina 10-7 a 10-6 M
3. Atropina 10-6 M - aguardar 5 minutos, sem lavar a preparao, injetar a dose mdia de
acetilcolina e esperar a recuperao do trio.
4. Isoprenalina 10-7 a 10-6 M
5. Adrenalina
dose mdia
6. Propranolol 10-6 M - aguardar 5 minutos sem lavar a preparao, injetar isoprenalina (dose
mdia), observar o efeito e lavar.
7. Isobutilmetilxantina (IBMX) 10-5 M
8. Ouabana 10-6 M - aps 30 segundos injetar Cloreto de Clcio (10-2 M)
9. Ouabana 10-6 M
10. Discutir os resultados.
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Objetivo
O objetivo geral desta aula prtica caracterizar experimentalmente diferentes aspectos do perfil
farmacolgico de drogas estimulantes e depressoras do Sistema Nervoso Central (SNC).
Experimento 1
Um meio comum para verificar se uma substncia tem ao sobre o sistema nervoso central estudar seus
efeitos sobre a movimentao espontnea (atividade motora) de animais. Um dos mtodos utilizados neste estudo
consiste em dividir uma determinada rea em quadrados e verificar o nmero de invases efetuadas pelo animal num
certo perodo de tempo. Este mtodo, chamado de campo aberto (open-field) alm de ser extremamente simples, tem
a vantagem de permitir a observao direta dos parmetros comportamentais do animal.
De um modo geral, drogas estimulantes do sistema nervoso central como a anfetamina, se caracterizam por
aumentar a movimentao espontnea. O efeito oposto observado para as drogas depressoras como os
neurolpticos e os benzodiazepnicos. Com relao s substncias depressoras, vale salientar que enquanto a
diminuio da funo motora promovida pelos neurolpticos acompanhada de rigidez, aquela produzida pelos
benzodiazepnicos no o . A rigidez, por sua vez, pode ser quantificada colocando-se as patas dianteiras do animal
sobre uma barra horizontal, registrando-se o tempo em que este permanece na posio vertical. Tal mtodo
denominado de catatonia experimental.
O objetivo desse experimento possibilitar, atravs da utilizao destes mtodos, a identificao de solues
contendo anfetamina, um neurolptico (haloperidol) e um benzodiazepnico (diazepan), levando-se em considerao
as caractersticas farmacolgicas de cada droga.
Material Utilizado (por mesa)
8 camundongos
4 seringas de 1 ml com agulhas hipodrmicas
Soluo de NaCl 0,9%
Soluo de Haloperidol, Diazepam e Anfetamina
1 campo aberto
3 barras de catatonia
Procedimento
ANIMAL
TRATAMENTO
COMPORTAMENTO
1e2
3e4
5e6
7e8
Campo Aberto
Campo Aberto
Campo Aberto
Campo Aberto
1 min Catatonia
1 min Catatonia
1 min Catatonia
1 min Catatonia
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Observaes Importantes
1. No registro da atividade espontnea em campo aberto colocar os animais individualmente no centro da arena e
quantificar sua locomoo (nmero de quadrados em que o animal entra com as quatro patas) por 4 minutos.
Quantificar tambm o nmero de segundos que cada animal permanece parado.
2. No registro de catatonia experimental, o animal deve ser seguro pela cauda, suas patas dianteiras colocadas na
barra e depois, rpida e suavemente, as patas traseiras so levadas ao balco, de tal maneira que o animal fique em
posio quase vertical. Anotar o nmero de segundos em que o animal fica nesta posio. Repetir mais duas vezes o
processo imediatamente aps cada vez que o animal deixa a posio imposta. Tempo mximo de observao: 20
minutos.
Experimento 2
Numerosas evidncias clnicas e experimentais sugerem que os sintomas da esquizofrenia estejam
associados a um aumento da transmisso dopaminrgica no SNC. Neste aspecto, os neurolpticos, drogas
bloqueadoras de receptores dopaminrgicos centrais, vm a ser o tratamento farmacolgico praticamente nico dessa
patologia.
Em animais de laboratrio a administrao do agonista dopaminrgico apomorfina elicia a expresso de
comportamentos estereotipados (comportamentos repetitivos e sem finalidade) que podem ser considerados um
modelo animal de esquizofrenia, sendo, consequentemente abolidos pela administrao prvia de neurolpticos.
Material Utilizado (por mesa)
3 ratos
3 seringas de 1 ml com agulhas hipodrmicas
solues de NaCl 0.9%, Haloperidol , Clorpromazina e Apomorfina
3 gaiolas metlicas
Procedimento
Trs ratos sero injetados intraperitonealmente com solues de NaCl 0.9% (soluo controle) ou com os
neurolpticos Haloperidol e Clorpromazina. Trinta minutos mais aps, os trs animais recebero, subcutaneamente,
soluo de Apomorfina, sendo imediatamente aps, observados para o registro do comportamento estereotipado.
O comportamento estereotipado ser quantificado aps observaes de 10 segundos, realizadas de 5 em 5
minutos, por 60 minutos. A cada observao o animal ser avaliado de acordo com a seguinte escala de escores:
ESCORES
0
1
2
3
4
5
6
COMPORTAMENTO
Adormecido ou parado.
Ativo
Predominantemente ativo, mas com curtos perodos de farejar e/ou levantar
estereotipado.
Atividade estereotipada constante tal como farejar, levantar ou balanar a
cabea, mas com atividade locomotora ainda presente.
Atividade estereotipada constante tal como farejar, levantar ou balanar a
cabea, mas realizada em um s local.
Atividade estereotipada constante, mas com perodos curtos de lamber e/ou
roer e morder as barras da gaiola.
Lamber e/ou roer as barras da gaiola de maneira compulsiva
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Material Utilizado
2 ratos
2 seringas de 1 ml com agulhas hipodrmicas
solues de NaCl 0.9% e Diazepam
Caixa de Esquiva Passiva
Procedimento
Dois camundongos sero injetados com NaCl 0.9% ou Diazepam, respectivamente. Trinta minutos aps, cada
animal ser colocado no compartimento iluminado da caixa de esquiva passiva. Ao passar para o compartimento
escuro, uma porta-guilhotina entre os dois compartimentos ser imediatamente acionada ao mesmo tempo em que o
animal receber em suas patas um choque leve (0.4 mA por 2 segundo), aps o qual retornar para a sua gaiola
moradia. Noventa minutos aps, cada rato ser recolocado no compartimento iluminado da caixa de esquiva passiva
sendo quantificado o tempo (mximo de 5 minutos) par que o mesmo penetre no compartimento escuro. Desta forma,
a permanncia prolongada do animal no compartimento iluminado (e, portanto, incmodo) indica memria (esquiva do
choque), enquanto a passagem para o compartimento escuro indica amnsia.