UPSJB.

Escuela Medicina Humana

Curso Biologa Celular y Molecular
Seminario #5
CULTIVO DE CLULAS EN 3D.
LA NUEVA DIMENSIN DE LOS CULTIVOS CELULARES
CULTIVOS CELULARES EN 3D
El cultivo celular en 3D est en auge, se est convirtiendo en una tcnica esencial en
mltiples reas de la biologa celular. Esta nueva tcnica de cultivo constituye un paso
imprescindible en campos como la ingeniera tisular, medicina regenerativa15 o desarrollo de
nuevos frmacos16. Las clulas cultivadas en 3D se comportan de manera ms parecida a
como lo hacen en sus organismos de origen. La calidad y cantidad de informacin obtenida es
mayor en aquellos ensayos en los cuales se utilizan tcnicas de cultivo de clulas en 3D,
porque hay una gran similitud con los organismos de origen. La importancia del cultivo
tridimensional reside en que las clulas se encuentran en un sistema que mantiene la
integridad de un rgano, de forma que las interacciones entre clulas estn garantizadas. Las
clulas cultivadas en ambientes 3D muestran diferencias, en comparacin con las clulas
cultivadas en ambientes 2D, en metabolismo, diferenciacin, expresin de genes y protenas,
proliferacin, viabilidad y respuesta a diferentes estmulos. La aparicin de los cultivos en tres
dimensiones requiere experiencia multidisciplinar y un enfoque multidisciplinario. Los
cientficos deben disear andamios para que apoyen y se organicen correctamente las
clulas. Las condiciones de cultivo sern estrictamente controladas mediante el uso de
biorreactores17. stos mantendrn el control de nutrientes y el intercambio de productos de
desecho. Si utilizamos en cultivos 3D las condiciones de cultivo estticas que
convencionalmente se aplican en 2D tradicionales, se obtienen resultados pobres. El motivo
es muy sencillo, aquellas clulas situadas en la superficie exterior estn en contacto con el
medio de cultivo, y por tanto, tienen acceso directo al oxgeno y a los nutrientes. Aquellas
situadas en el interior del sustrato, a varios milmetros, no tienen acceso a los nutrientes y al
oxgeno. Suelen morir relativamente pronto, debido a una insuficiencia de nutrientes. Una
forma de solucionar este problema es aplicando perfusin al medio de cultivo a travs del
sustrato. El uso de esta tcnica garantiza una distribucin adecuada de nutrientes en todo el
cultivo. De esta forma, tambin se consigue eliminarde forma eficiente los productos de
desecho de naturaleza metablica generados por las clulas. Esta tcnica es eficiente incluso
en cultivos 3D en los cuales el sustrato es de varios centmetros de tamao. Los cultivos en
3D permiten analizar las caractersticas de desarrollo y diferenciacin de distintos tipos de
clulas. Adems nos permiten analizar la interaccin entre clulas. Son muchas las ventajas
que aportan los cultivos en 3D, pero tambin presen- tan carencias. Las clulas cultivadas con
tcnicas de 3D no tienen tendencia a proliferar, normalmente mantienen su diferenciacin e
interaccin intercelular. Esta es la razn por la cual este modelo no se utiliza para estudiar los
factores que inter- vienen en procesos de emigracin o proliferacin celular. En los ltimos
aos, el auge de esta nueva tcnica de cultivo ha propiciado que el nmero de prototipos
diseados mediante ordenador para la fabricacin de andamios se dispare19. Los prototipos
diseados suelen ser estructuras que poseen una geometra ordenada. Las propiedades del
material y las caractersticas que forman estas estructuras son especialmente importantes en
la relacin entre las clulas y el andamio. De ellas depende la adhesin celular y la
proliferacin de las clulas. Los materiales de los andamios deben de ser biocompatibles e
inducir el biorreconocimiento molecular de las clulas. La distribucin de los poros en los
andamios, el rea superficial expuesta y la porosidad tambin desempean un papel
relevante en la relacin entre las clulas y el andamio. La cantidad y distribucin de los poros
influyen de manera determinante en la penetracin de las clulas dentro del volumen del
andamio20. Actualmente son muchos los tipos celulares cultivados con xito mediante esta
tcnica (regeneracin de hueso, vasos sanguneos, cartlago o trquea). Pero la adopcin de

este tipo de cultivo como metodologa estndar en los laboratorios ha estado limitada por la
falta de instrumental especfico en este campo.
CULTIVOS TRIDIMENSIONALES PRIMARIOS
Cuando hablamos de cultivos tridimensionales primarios nos estamos refiriendo
principalmente al cultivo de rganos. Aunque no debemos pasar por alto, que existen
problemas de nomenclatura entre la literatura francesa y el mbito cientfico anglosajn estas
diferencias en la nomenclatura son aclaradas posteriormente en el presente artculo. En los
cultivos tridimensionales primarios se separa un fragmento tisular de un rgano vivo. Esta
accin supone la prdida de funcin del sistema vascular, ya que las clulas se encuentran
rodeadas por capilares sanguneos que garantizan la nutricin de cada una de ellas. El
espesor del fragmento orgnico est limitado por la difusin de nutrientes del medio a travs
de ese tejido. Evidentemente, el espesor depende de la densidad del rgano que queremos
estudiar, de su grado de compactacin, el hgado por ejemplo es muy compacto. Hay otros
rganos como el pulmn, que posee cavidades naturales, el espesor del fragmento orgnico
utilizado en un estudio podr ser mayor. Si la difusin de nutrientes no pasa a travs de todo
el tejido, este presentar degeneraciones necrticas en su centro. Normalmente no se
administra oxgeno adicional, porque no facilita el cultivo, por el contrario supone la aparicin
de diferentes alteraciones en el rgano que estamos cultivando. El cultivo de este tipo de
tejidos se realiza en la estufa con aire ambiente. El anclaje del tejido tambin es importante,
porque dependen directamente del anclaje para mantener su estructura tridimensional. Su
estudio se realiza mediante tcnicas histolgicas de tincin como Hematoxilina-eosina, PAS o
tricrmicos, tcnicas de hibridacin in situ, microscopa ptica o electrnica, etc.
CULTIVOS TRIDIMENSIONALES SECUNDARIOS
Dentro de los cultivos tridimensionales secundarios nos encontramos dos tipos de cultivos.
Por un lado tenemos los cultivos organotpicos22. Estos tipos de cultivo se caracterizan
porque constan de varios tipos celulares que interaccionan entre s de una forma que intenta
ser lo ms similar posible a la original. Este tipo de cultivos persigue la creacin in vitro de
tejidos u rganos completamente funciona- les que puedan ser utilizados en injertos o en
transplantes. Los cultivos organotpicos constituyen la base de una disciplina denominada
ingeniera de tejidos. El segundo tipo de cultivo tridimensional secundario son los cultivos
histotpicos. Estos cultivos estn formados por un solo tipo celular que consigue alcanzar una
elevada densidad celular. Las clulas son reagrupadas para recrear una estructura
tridimensional parecida al tejido original, este tipo de cultivo se asemeja mucho a lo que
realmente ocurre en los tejidos. Existe un problema de nomenclatura entre la literatura
francesa y el mbito cientfico anglosajn. Los cientficos franceses entienden por cultivo
organotpico al cultivo de rganos, sin embargo en el mbito cientfico anglosajn entienden
por cultivo organotpico a la reasociacin artificial de clulas, procedentes de distintas lneas
celulares, que se integran en una malla artificial, es decir, cultivo es un cultivo celular
tridimensional secundario. Mientras que el cultivo de rganos es un cultivo celular
tridimensional primario. Por otro lado, ambas tendencias coinciden en la definicin de cultivo
histotpico. La utilizacin de una amplia gama de matrices naturales o artificiales nos permite desarrollar tcnicas de cultivos tridimensionales secundarios. Dichas matrices nos
permiten reorganizar la estructura del tejido, o recrear otra de naturaleza artificial.
Normalmente se basan en una matriz de colgeno, en una esponja de celulosa o en una
gelatina a base de colgeno reabsorbible, denominada gelfoam en otras ocasiones se
utilizan andamios o matrices tridimensionales, formadas por polmeros artificiales, como son
las fibras sintticas, sobre las cuales son explantadas clulas.
CONCLUSIN
El cultivo de clulas en 3D se est convirtiendo en una tcnica esencial en mltiples reas de
investigacin como son la ingeniera tisular, medicina regenerativa o desarrollo de nuevos
frmacos. Este tipo de cultivo de clulas abre una nueva dimensin en los ensayos de
cultivos, ya que las clulas se comportan de manera ms parecida a como lo hacen en sus

organismos de origen. la informacin obtenida es de mejor calidad cuando se realizan

ensayos con cultivos celulares en 3D. Ya existen varias tecnologas que son utilizadas en el
cultivo de clulas en 3D, por ejemplo: esponjas y geles y microportadores. Los geles que se
utilizan comn- mente son el colgeno, la gelatina, y la laminina. esponjas, tales como
AlgiMa- trixTM, son generalmente geles liofilizados con grandes poros. Los microportadores
son pequeas esferas en las cuales puede cultivarse un gran nmero de clulas en un
volumen realmente pequeo. Las tecnologas de cultivo celular en 3D han revolucionado
nuestro entendimiento del comportamiento celular, tanto en cultivos in vitro, como en
ensayos in vivo. Pero actualmente la adopcin de este tipo de cultivo como metodologa
estndar en los laboratorios es escasa debido a problemas de consistencia, coste y falta de
instrumental.
Tomado de: Cultivo de clulas en 3D: la nueva dimensin de los cultivos celulares. Autor:
Sergio Calvo Garca
Localizacin: Cuadernos del Toms, ISSN 1889-5328, N. 5, 2013 , pgs. 215-232