PROTOCOLO DE VALIDACIN DEL MTODO ANALTICO PARA LA

DETERMINACIN DE CIDO ACETILSALICLICO EN ORINA

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TABLA DE CONTENIDO

I.

OBJETIVO .............................................................................................. .2

II.

ALCANCE .............................................................................................. .2

III.

RESPONSABILIDADES ........................................................................ .2

IV.

PARAMETROS DE VALIDACIN 2

V.

METODOLOGIA...3

VI.

CRITERIOS DE ACEPTACION..7

VII.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS..8

VIII.

ANEXOS......8

Elabor
Nombre: Perla Ivonne Hernndez Correa
Firma:
Fecha:14/08/20014

Revis: Supervisor
Nombre: Sal de Jess Daz Ramrez
Firma:
Fecha:16/08/2014

Autoriz: Asesor
Nombre: Hernan I. Cortes
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DETERMINACIN DE CIDO ACETILSALICLICO EN ORINA
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I.

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OBJETIVO

Evaluar estadsticamente, la confiabilidad del mtodo espectrofotomtrico utilizado para la

cuantificacin del cido acetil saliclico en orina; mediante una validacin parcial de acuerdo a la
NOM-177-SSA1-2013.

II.

ALCANCE

Este protocolo de validacin es aplicable al mtodo analtico para la determinacin de cido acetil
saliclico en orina mediante espectrofotometra UV.

lll. RESPONSABILIDADES
Es responsabilidad del asesor del mdulo del Laboratorio de Biofarmacia del rea de Farmacia
clnica autorizar el presente protocolo.
El supervisor es responsable de la realizacin, revisin y aplicacin de este protocolo. As como
de supervisar que cada actividad indicada en este documento se lleve a cabo conforme lo indicado
en este documento.
Los qumicos analistas tienen la responsabilidad de conocer y aplicar los procedimientos para la
validacin del mtodo analtico conforme lo indica este protocolo.

IV. PARMETROS DE VALIDACIN

Linealidad
Precisin (Repetibilidad y Reproducibilidad)
Exactitud
Lmite de cuantificacin
Lmite de deteccin

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Nombre: Perla Ivonne Hernndez Correa
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Fecha:14/08/20014

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V. METODOLOGA
Mtodo analtico a validar: Ver anexo 1
Reactivos
Fe (NO3)3
HNO3

HCl
HgCl2

Equipos
Centrifuga
Instrumentos
Espectrofotmetro UV

1. LINEALIDAD DEL MTODO

La linealidad es la capacidad de un mtodo analtico, en un intervalo de trabajo, para obtener
resultados que sean directamente proporcionales a la concentracin del compuesto en la
muestra. Deben ser evaluadas un mnimo de 3 curvas de calibracin.
Para evaluar la linealidad del mtodo, preparar 3 soluciones patrn en orina a partir de 3
pesadas independientes, como se indica en la tabla siguiente:
ml de la solucin patrn
de salicilato de sodio en
orina (1000 g/ml)

ml de orina diluida
(aadir con bureta)

Concentracin
(g/ml)
-----------------------10
Blanco
0.1
9.9
10
0.5
9.5
50
1
9
100
2
8
200
3
7
300
5
5
500
TABLA 1. Soluciones para la curva estndar.

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Nombre: Perla Ivonne Hernndez Correa
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Solucin estndar de referencia de salicilato de sodio en orina con concentracin de 1000

g/ml: Pesar con exactitud 50 mg de salicilato de sodio y depositarlos en un matraz volumtrico de 50 ml,
disolver totalmente en 20 ml de orina libre de medicamentos diluida 1:10 con agua destilada y llevarla al
aforo con la misma orina.
Procedimiento:
1) Preparar la Solucin estndar de referencia de salicilato de sodio en orina con concentracin
de 1000 g/ml.
2) Realizar las soluciones para la curva estndar, descritas en la tabla 1.
3) Realizar el mtodo analtico para la determinacin de cido acetilsaliclico, en el Anexo 1.
4) Leer a una longitud de onda 530 nm.

2. PRECISION
Preparar por quintuplicado las soluciones a utilizar como muestras control de acuerdo a la
siguiente tabla:
Muestra
control

MCB
MCM
MCA

ml de la solucin patrn
de salicilato de sodio en
orina o agua (1000
g/ml)

ml de orina diluida o
agua (aadir con
bureta)

Concentracin
(g/ml)

-----------------------0.3
2.5
4.0

10
9.7
7.5
6

Blanco
30
250
400

TABLA 2. Preparacin de muestras control.

Solucin estndar de referencia de salicilato de sodio en agua destilada con concentracin
de 1000 g/ml: Pesar con exactitud 50 mg de salicilato de sodio y depositarlos en un matraz volumtrico
de 50 ml, disolver totalmente en 20 ml de agua destilada, y posteriormente llevarla al aforo.

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2.1 REPETIBILIDAD
Analizar en un mismo da al menos por quintuplicado las siguientes muestras control MCB,
MCM y MCA.
Con los datos obtenidos de las muestras control de calidad en orina, interpolar las
absorbancias de la curva de calibracin promedio para obtener los valores de la concentracin
experimental, evaluar la Repetibilidad calculando el CV% y DEA%.

Muestra

Control Bajo
(30 g/ml)

1
2
3
4
5
Promedio
D.E.
C.V. (%)
Conc. Nominal (g/ml)
DEA %

30

Control Medio
Control Alto
(250 g/ml)
(400 g/ml)
Concentracin recuperada (g/ml)

250

400

Tabla 3. Resultados de Repetibilidad.

2.2 REPRODUCIBILIDAD
Analizar al menos por quintuplicado en tres corridas analticas diferentes y en al menos 2 das,
las muestras control MCB, MCM y MCA.
Evaluar reproducibilidad con los datos de las muestras control de la tabla 2, en orina de dos de
los equipos.
Calcular la concentracin experimental, interpolando las absorbancias en la curva de
calibracin promedio en orina y obtener la media, desviacin estndar, coeficiente de variacin
y desviacin absoluta para cada nivel de concentracin.
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Equiop

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Control Bajo
(30 g/ml)

Control Medio
Control Alto
(250 g/ml)
(400 g/ml)
Concentracin recuperada (g/ml)

Equipo 1

Equipo 2

Promedio
D.E.
C.V. (%)
Conc. Nominal (g/ml)
DEA %

30

250

400

Tabla 4. Resultados de Reproducibilidad.

3. EXACTITUD
De los datos de repetibilidad y reproducibilidad calcular la desviacin de la concentracin
obtenida respecto al valor nominal (% de desviacin) empleando la siguiente ecuacin:
Concentracin adicionada Concentracin obtenida
% desviacin =
Concentracin adicionada

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Vl CRITERIOS DE ACEPTACIN

Parmetro

Criterio de aceptacin

Linealidad del mtodo

Los datos de concentracin recuperada de la

curva de calibracin deben estar dentro del
15% de la concentracin nominal en cada nivel
de concentracin, excepto para el lmite
inferior de cuantificacin, ya que puede ser
menor o igual que el 20%. Al menos el 75% de
las concentraciones de la curva de calibracin
con un mnimo de 6 puntos deben cumplir con
este criterio
El CV% del valor promedio no debe ser mayor
que el 15%, excepto para el lmite inferior de
cuantificacin, el cual debe ser menor o igual
que 20% para mtodos cromatogrficos y para
mtodos inmunolgicos, no debe ser mayor
que el 20%, excepto para el lmite inferior de
cuantificacin, el cual debe ser menor o igual
que 25%.
El CV% del valor promedio no debe ser mayor
que el 15%, excepto para el lmite inferior de
cuantificacin, el cual debe ser menor o igual
que 20% para mtodos cromatogrficos y para
mtodos inmunolgicos, no debe ser mayor
que el 20%, excepto para el lmite inferior de
cuantificacin, el cual debe ser menor o igual
que 25%.
El valor promedio del % de desviacin no debe
ser mayor que el 15%, excepto para el lmite
inferior de cuantificacin, el cual debe ser
menor o igual que 20%. Para mtodos
inmunolgicos, no debe ser mayor que el 20%,
excepto para el lmite inferior de cuantificacin,
el cual debe ser menor o igual que 25%.

Repetibilidad

Reproducibilidad

Exactitud

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VII. REFERENCIAS

Secretaria de Salud. Norma Oficial Mexicana NOM-177-SSA1-2013, que establece las

pruebas y procedimientos para demostrar que un medicamento es intercambiable.
Requisitos a que deben sujetarse los Secretaria de Salud. Norma Oficial Mexicana NOM177-SSA1-2013, que establece las pruebas y procedimientos para demostrar que un
medicamento es intercambiable. Requisitos a que deben sujetarse los terceros autorizados
que realicen las pruebas, 2013.
Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos. Mxico. Gua de validacin de
mtodos analticos. Ed. 2002. Colegio nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos
Mxico, A.C. Mxico.

VIII. ANEXOS
Anexo 1: METODO ANALITICO PARA LA DETERMINACIN DE ACIDO ACETIL SALICILICO
EN ORINA
Reactivo Trinder (para desarrollo de color):
Pesar con exactitud 4 g de cloruro mercrico, colocarlos en un matraz volumtrico de 100
ml, disolver en 12 ml de una solucin 1N de cido clorhdrico y disolver, ya disuelta la
mezcla aadir 4 g de nitrato frrico nonahidratado pesados con exactitud, mezclar y diluir
con agua destilada hasta el aforo.

Procedimiento:
En un tubo de centrifuga colocar 1 ml de muestra (utilice las soluciones de cada una de las
curvas y muestras control, tanto de agua como de orina) y utilizando una bureta adicionar 5
ml del reactivo de trinder para desarrollo de color. Agitar la muestra en vrtex durante 1 min.
Determinar la absorbancia utilizando un espectrofotmetro y celdas de cuarzo de 1 cm de
paso ptico a una longitud de onda de 540 nm, ajustando a cero con su blanco
correspondiente (orina diluida 1:10 o agua destilada segn el caso), preparando a las
mismas condiciones que la muestra.
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Anexo 2: Formato de registro de resultados

Parmetro

Linealidad del
mtodo

Repetibilidad

Reproducibilidad

Exactitud

Criterio de aceptacin

Resultados

Decisin

Los datos de concentracin recuperada de la

curva de calibracin deben estar dentro del
15% de la concentracin nominal en cada nivel
de concentracin, excepto para el lmite inferior
de cuantificacin, ya que puede ser menor o
igual que el 20%. Al menos el 75% de las
concentraciones de la curva de calibracin con
un mnimo de 6 puntos deben cumplir con este
criterio
El CV% del valor promedio no debe ser mayor
que el 15%, excepto para el lmite inferior de
cuantificacin, el cual debe ser menor o igual
que 20% para mtodos cromatogrficos y para
mtodos inmunolgicos, no debe ser mayor
que el 20%, excepto para el lmite inferior de
cuantificacin, el cual debe ser menor o igual
que 25%.
El CV% del valor promedio no debe ser mayor
que el 15%, excepto para el lmite inferior de
cuantificacin, el cual debe ser menor o igual
que 20% para mtodos cromatogrficos y para
mtodos inmunolgicos, no debe ser mayor
que el 20%, excepto para el lmite inferior de
cuantificacin, el cual debe ser menor o igual
que 25%.
El valor promedio del % de desviacin no debe
ser mayor que el 15%, excepto para el lmite
inferior de cuantificacin, el cual debe ser
menor o igual que 20%. Para mtodos
inmunolgicos, no debe ser mayor que el 20%,
excepto para el lmite inferior de cuantificacin,
el cual debe ser menor o igual que 25%.

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