INTRODUCCIN

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Un correcto aprendizaje, no slo se basa en la parte terica,

necesita

tambin

de

una

prctica,

que

para

el

curso

de

Microbiologa se llevar a cabo en laboratorio.

Es por esa razn la necesidad de conocer correctamente el uso y
aplicacin de cada material de laboratorio; as como tambin los
cuidados que se deben tener para que no sean daados.
Un aspecto a tener cuenta corresponde a la limpieza de las
materiales y su respectiva esterilizacin, para lo cual conoceremos
la instrumentacin adecuada y la forma en que se debe llevar a
cabo.

Gracias
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OBJETIVOS

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Entre los objetivos ms destacados, tenemos los siguientes:

Reconocer el material y equipo utilizados en el laboratorio de Microbiologa.
Aprender a utilizar los equipos en el laboratorio de Microbiologa.
Aprender a esterilizar el material en el laboratorio de Microbiologa.

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MARCO TERICO

Y
DESARROLLO

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1.

Tubos de ensayo

Existe una gran variedad de tubos, pero se prefieren los de vidrio neutro, paredes gruesas y sin
rebordes para facilitar el taponamiento. Para estudios bioqumicos se usan tubos de 13 X 100 mm. y
para diluciones tubos de 16 X 150 mm y de 15 X 125 mm.

2.

Placas de Petri

Estn compuestas por dos cristalizadores, de los cuales el ms grande hace de tapa. Se emplean para el
aislamiento y cultivo de microorganismos.

3.

Tubos de Smith

Son utilizados para cuantificar el gas producido en los procesos de fermentacin.

4.

Campanas de Durham

Son tubos de vidrio huecos con uno de sus extremos cerrado y dilatado y permiten detectar la
produccin de gas en los procesos de fermentacin. 8

5.

Pipetas serolgicas o de medida

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Presentan subdivisiones de su capacidad total y se calibran en mL a 20C. Las marcas ms conocidas

son PYREX, NORMAX y CORNING. Las pipetas NORMAX se usan para trabajos de precisin, son
contrastadas individualmente por la Oficina Nacional de Patrones en Norteamrica y tienen las siglas
NBS y el ao de control. Por ejemplo, una pipeta NORMAX serolgica de 1 mL de capacidad tiene un
error tolerable (ET) de 0,01 (1%), mientras que una pipeta PIREX del mismo volumen tiene un ET de
0.02 (2%).
Las pipetas graduadas pueden ser terminales, cuando el vaciado del lquido se realiza hasta la punta de
la pipeta y pipetas no terminales cuando el vaciado del lquido se realiza hasta la ltima lnea de
graduacin.

6.

Pipetas Pasteur

Son confeccionadas de varillas de vidrio de dimetro de 4 X 20 mm. y de 30 40 cm. de longitud. La

calidad del vidrio debe facilitar el reblandecimiento a la accin directa de la llama del mechero, para
conseguir un estiramiento a la capilaridad deseada. Se emplean para la toma de pequeos inculos de
siembra.

Modo de emplear la pipeta Pasteur

- La pipeta se sujeta con el pulgar y el dedo medio. Se coloca la punta de la pipeta en el lquido por
medir, bastante profundo, para que se pueda aspirar el volumen necesario sin aire. Con aspiracin
suave, se llena el lquido por encima de la marca de calibracin. Se cierra la pieza de la boca con el
dedo ndice.
- Se seca el exceso del lquido en el exterior de la pipeta con un pao o un papel limpio, y colocando la
punta de la pipeta contra el recipiente, se deja que el nivel del lquido baje hasta la marca de
calibracin moviendo con suavidad el ndice sobre la pieza de boca. El dedo no debe retirarse.
- Ahora la pipeta se pasa al recipiente de recepcin, colocando su punta contra la pared.
- Se levanta el dedo de la pieza de boca y se deja que la pipeta se vace durante el tiempo necesario.
No se debe soplar para hacer salir la ltima gota al emplear una pipeta volumtrica o cualquier pipeta
calibrada. Es importante que la pipeta se mantenga vertical para que el vaciamiento sea correcto.

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7.

Buretas

Son tubos largos de vidrio con una llave de descarga en uno de sus extremos o bien con un tubo corto
de jebe que termina en un pico de vidrio. Las ms comunes son de 50 mL y estn graduadas al dcimo
de mL. Las buretas se emplean para descargar distintas cantidades de lquidos o soluciones y se las usa
mayormente en las titulaciones volumtricas.

Modo de usar la bureta

- La bureta limpia y vaca se mantiene en posicin vertical mediante un soporte adecuado.

- Se enjuaga la bureta con el mismo lquido que se va a descargar.
- Se llena la bureta con el lquido hasta un poco ms arriba de la graduacin y se descarga el lquido de
modo que la parte inferior del menisco coincida con el comienzo de la graduacin y el pico de la bureta
debe quedar completamente lleno de solucin.
- Al efectuar las lecturas con la bureta, el ojo debe estar al nivel del menisco para evitar errores.
- Despus de su uso las pipetas se deben lavar con agua destilada y cubrir con un tubo de ensayo corto,
invertido para preservarlas del polvo, o tambin pueden colocarse en el soporte con las puntas hacia
arriba.
- Las llaves de vidrio de las buretas se lubrican con grasa, vaselina pura o mezclada con cera y resina. La
lubricacin adecuada de la llave evita que se pegue o endurezca.

8.

Matraces

Son recipientes volumtricos muy tiles en la preparacin y almacenamiento de soluciones,

colorantes, reactivos, medios de cultivo, etc. Su forma y tamao son muy variables.

- Matraces cnicos (Erlenmeyers): Se utilizan para hervir soluciones cuando hay que reducir a un
mnimo la evaporacin; son tiles para las titulaciones. En Microbiologa sirven para la preparacin de

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medios de cultivo. Es necesario emplear una tela de asbesto o una tela de alambre cuando se realiza el
calentamiento evitando as el contacto directo entre el matraz y la llama.
- Matraces de fondo redondo: Estos matraces soportan mejor el calor directo sobre el mechero. Para
calentar solventes orgnicos, o para manipulaciones muy prolongadas, es preferible emplear matraces
con cuello esmerilado que pueden recibir los condensadores correspondientes y permiten un cierre
mucho ms hermtico que los tapones de caucho o de corcho.
- Matraces aforados o fiolas: Idnticos a los matraces erlenmeyer. Estn calibrados a medidas exactas
mediante un aforo en la parte media del cuello del recipiente en el que se indica la medida. Se
emplean para la preparacin de reactivos y de soluciones buffer.

9.

Esptulas de Drigalsky

Se confeccionan a partir de las pipetas Pasteur. La fraccin recta y horizontal facilita la siembra y
aislamiento de bacterias por diseminacin.

10. Probetas

Recipientes cilndricos con base para la estabilidad. Pueden estar graduadas y tener capacidad de 10
mL hasta 2 000 mL. Las ms utilizadas son las de 100, 250, 500 y 1000 mL.

11. Beacker o vasos de precipitacin

Recipientes cilndricos y cortos, con una depresin en el margen de la boca. El vidrio debe ser
necesariamente resistente al calor. Existen desde 1 mL hasta 4 000 mL de capacidad.

12. Varillas de vidrio macizo

Fragmentos de 30 a 60 cm, que sirven para la confeccin de agitadores o baguetas. Las varillas cortas
de 20 cm pueden utilizarse como mangos para las asas de siembra.

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13. Frascos reactivos

Frascos de vidrio de paredes gruesas, transparentes o de color mbar. Son cilndricos, tienen cuello
estrecho y tapones de cristal esmerilado (algunos con tapas especiales para facilitar su vaciado y su
tamao vara de 25 mL a 1000 mL).En los frascos pequeos se pueden almacenar HCl, H2SO4, CCl4,
etc. En los frascos grandes se pueden almacenar reactivos desinfectantes u otros reactivos.

14. Frascos goteros

Tienen una capacidad de 50 mL, pueden ser de vidrio claro o mbar, y sus tapones son ranurados para
que su contenido salga gota a gota cuando se inclinan. Se pueden utilizar para colorantes o para
indicadores.

15. Picetas

Son botellas plsticas de color blanco con una especie de cao que al presionar el frasco permite que
el lquido salga con fuerza. Se utilizan para lavar lminas portaobjetos con tinciones.

16. Portaobjetos y cubreobjetos

Los portaobjetos son lminas de vidrio transparente de forma rectangular y de mnimo grosor. Los
cubreobjetos son finsimas laminillas de mucho menor tamao que los portaobjetos y pueden ser de
forma rectangular, cuadrada o circular. Ambos son material indispensable para la observacin
microscpica de las bacterias u otros organismos.

17. Jarra de Brewer

Denominada tambin campana de anaerobiosis, est constituida por una tapa de baquelita en cuya
parte inferior presenta una canastilla conteniendo granos de paladio. El cuerpo es un cilindro de vidrio
en cuyo interior se colocan los tubos o placas de Petri. La jarra es cerrada hermticamente mediante
una abrazadera de metal. 11

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18. Asas de siembra

Con mango de vidrio o de metal aislante del calor y un alambre o aguja de micrn resistente a elevadas
temperaturas. Se usan en la siembra y trasplante de bacterias y hongos.

19. Mangos de Kolle

Vstagos de metal con una cubierta aislante del calor y en el extremo proximal, una tuerca para
insertar el alambre de platino o micrn en el asa de siembra. Pueden ser reemplazados por mangos de
vidrio.

20. Alambres de platino en aro y en punta

Pueden ser acoplados a los mangos de Kolle.

21. Canastillas o cestos de metal

Las mejores son de aluminio. Favorecen el almacenamiento de tubos de prueba en medidas conocidas,
sin riesgo de roturas.

22. Gradillas

Permiten una mayor estabilidad a los tubos de ensayo, evitando accidentes.

23. Soportes universales

Con tenazas y aros de metal, para asegurar cuellos y bases de matraces, beackers, etc. Son de metal de
preferencia de fierro y son muy buenos soportes de recipientes sometidos al calentamiento.

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24. Trpodes

Son de metal, de preferencia de fierro. Muy buenos soportes de recipientes sometidos al

calentamiento. De variada altura y dimetro.

25. Rejilla o malla metlica

Malla de alambre galvanizado, resistente a la corrosin a elevadas temperaturas. Se coloca sobre el

trpode.

26. Mecheros

- Mechero de alcohol: Constituido de un recipiente de vidrio borosilicato y una tapa de metal por
donde se introduce la mecha.
- Mechero Bunsen: Funciona a gas. Es uno de los instrumentos ms tiles en el laboratorio. Fue
inventado por el alemn Robert Bunsen en 1866. Existen diferentes tipos de mecheros, algunos tienen
regulacin de gas y otros no. Los que se usan en laboratorio son simples, no regulan el gas, y queman
gas propano.

27. Autoclave

Consta de una caldera de acero o de cobre batido estaado interiormente, protegida por una camisa
metlica de cobre; quedando formado de paredes dobles. En su base est instalada la fuente calrica
(gas o electricidad). A una distancia del fondo del recipiente, est la placa cribosa para apoyo del
material y para la salida del vapor; en la parte superior se halla la tapa que es pesada (de bronce
fundido) en cuyo borde interno est adaptado un arandel de caucho

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para el cierre hermtico del aparato. Los tornillos o bulones en el margen superior refuerzan el cierre,
evitndose el escape del vapor. Presenta adems, un manmetro (que marca las libras de presin),
una vlvula de seguridad, un termmetro y una llave o espita (para la salida del aire y vapor al empezar
a hervir el agua).
El vapor de agua se aplica en una cmara cerrada en la que existe un generador de vapor; cuando ste
se produce, desplaza el aire, que sale por un orificio que se cierra en el momento en que ya sale vapor.
Posteriormente se consigue la presin deseada, teniendo en cuenta que el vapor a 1 atm. de presin
corresponde a 121C de temperatura. Esta temperatura, aplicada durante 15 o 20 minutos, una
temperatura de 134 C durante 7 minutos destruye todas las formas vegetativas y esporuladas.
El autoclave requiere de indicadores, que comprueben que en el interior del recipiente se han dado las
condiciones deseadas de temperatura y tiempo. Los indicadores de esterilizacin ms usados son
productos qumicos (que cambian de color segn los niveles alcanzados) y esporas de ciertas bacterias.

28. Horno Pasteur

Es un aparato muy utilizado en la esterilizacin por calor seco. Es cilndrico, de metal, de triple pared;
la intermedia ms corta que las otras dos, quedando formada por dos cajas paralelas (concntricas)
que se comunican por la parte superior. La parte inferior del cilindro hace fondo. Las paredes son
metlicas y revestidas de planchas de asbesto al igual que la puerta. Por los lados o al fondo, entre las
paredes media y externa se halla un colector de mechero mltiple o juego de resistencia (fuente
calorfica).

29. Espectrofotmetro

Es un instrumento que permite medir la intensidad de la luz transmitida y se utiliza mucho en anlisis
bioqumicos. Las sustancias disueltas tienen determinados colores porque absorben ciertas longitudes
de onda de luz y dejan pasar otras. Ejemplo: La hemoglobina tiene color rojo porque absorbe los
colores complementarios del rojo, es decir las longitudes de onda ms cortas del azul y el verde.

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30. Potencimetro

Es un aparato utilizado para medir el pH de soluciones buffer, fluidos biolgicos, medios de cultivo, etc.

31. Contador de colonias

Lo ms difcil en la determinacin de una colonia es el conteo en las placas de Petri. El contador de

colonias soluciona este problema convirtindose en un auxiliar indispensable para todo laboratorio
microbiolgico y adems no ocasiona problemas con su mecanismo de conteo. 13

32. Refrigeradoras y congeladoras

Son incubadoras de temperaturas fras. Se requieren para almacenar medios de cultivo, sueros y
reactivos especiales. Las congeladoras se requieren para almacenamiento ms prolongado de sueros,
enzimas, etc.
Deben localizarse lejos de los hornos de aire caliente, de radiadores de tuberas de agua caliente.

33. Estufas de cultivo

Sirven para realizar el proceso de incubacin, que brinda una temperatura adecuada para que los
microorganismos permanezcan viables y se desarrollen. Existen dos mtodos de incubacin:
: Se realiza en incubadoras e incluso en hornos. Las incubadoras y los
hornos se basan en los mismos principios y la diferencia entre stos radica en la temperatura que
puede obtenerse en su interior. Usualmente se denomina horno al aparato que es capaz de soportar
temperaturas de 100 C ms. El ms conocido es el horno Pasteur.
o enrollable
que es sumergido en el agua y la calienta. La fuente de calor es por medio de una corriente de
conveccin, lo que permite que el agua se caliente en forma ms uniforme.

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34. Microscopio ptico

La Microbiologa se ha podido desarrollar a partir de la aparicin y progreso del microscopio. Podemos

encontrar un microscopio simple que no es ms que una lente biconvexa, o un microscopio
compuesto, que emplea dos sistemas de lentes separadas, consiguiendo con ello mayor aumento.
Los microscopios se clasifican bsicamente en dos grupos en funcin del tipo de luz utilizada y
amplificacin: microscopio de luz ptica y microscopio electrnico. El microscopio mediante el cual la
amplificacin de la imagen se obtiene por un sistema de lentes pticas, corresponde a los microscopios
de luz. El microscopio mediante el cual la amplificacin de la imagen se hace a travs de un haz de
electrones en lugar de ondas luminosas corresponde al microscopio electrnico.
Los diversos componentes del microscopio ptico pueden ser agrupados en cuatro sistemas:
a) Sistema de soporte: Pie, bastidor, revlver portaobjetivos, platina.
b) Sistema de aumento : Objetivos, oculares
c) Sistema de iluminacin: Fuente luminosa, espejo, condensador, diafragma, filtros.
d) Sistema de ajuste: Tornillo macromtrico, tornillo micromtrico, condensador, elevador del
diafragma iris, reguladores de la platina mecnica, tornillos para centrar el condensador.

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1. Microscopio

- Obtener una muestra de sarro dentario con asa bacteriolgica estril.

- Homogenizar la muestra en solucin salina fisiolgica estril (1 gota) sobre una lmina porta
objetos.
- Cubrir el preparado con laminilla. Tiene Ud. un preparado en fresco para examen directo.
- Enfoque y observe al microscopio con objetivos de: 3,5 X, 10 X y 40X.

2. Horno Pasteur

- Colocar en el horno el material a esterilizar debidamente acondicionado.

- Cerrar la puerta y encender la fuente calorfica.
- Graduar la temperatura del horno a 180 C y mantener el material por espacio de 2 horas.
Precauciones en el manejo

brusco de la temperatura puede causar destrozos del material de vidrio.

ta manera se evitar la carbonizacin del
papel y tapones de algodn.

3. Autoclave

- Depositar agua en la caldera hasta unos centmetros de la parrilla.

- Colocar el material a esterilizar en la canastilla.
- Cerrar la tapa y asegurar el cierre ajustando los tornillos o mariposas tomando de dos en dos tornillos
diagonalmente opuestos.

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- Dejar abierta la espita.

- Encender la fuente de calor.
- Cerrar la espita cuando se produzca un flujo de vapor continuo.
- Observar el manmetro y mantener la presin en 15 libras mediante el control de la temperatura
(121 C) durante 15 a 20 minutos.
- Iniciar la cuenta del tiempo en el momento que se consigue la temperatura y la presin deseada.
- Apagar el sistema de calefaccin, despus del tiempo de esterilizacin.
- Dejar enfriar hasta que el manmetro marque cero.
- Abrir la espita para que salga el exceso de vapor de agua.
- Aflojar los tornillos y levantar la tapa ponindose detrs del aparato para evitar que los vapores
lleguen a la cara del operador.
Precauciones en el manejo:

del vapor.

los recipientes de vidrio por el cambio brusco de la presin.

4. Estufa

- Colocar en la estufa el material a incubar: placas de Petri o tubos de ensayo con el medio de cultivo
inoculado.
- Cerrar la puerta y encender la fuente calorfica.
- Graduar la temperatura deseada y mantener el material en incubacin durante 24, 48 horas o ms
tiempo si es requerido.

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5. Bao Mara

- Colocar la cantidad de agua suficiente en la canastilla del equipo.

- Encender la fuente calorfica.
- Graduar la temperatura deseada.
- Colocar dentro del agua el material a calentar y mantenerlo durante el tiempo deseado.

1. Placas de Petri

autoclave a 121 C durante 20 minutos.

2. Tubos de ensayo

os sostenga depositar los tubos que contengan material

contaminado.

algodn no graso, de modo que el tapn ajuste perfectamente.

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3. Matraces

s matraces que contienen medios de cultivo recin preparados.

posterior.
erilizar en el horno a 180 C durante 2 horas.

4. Pipetas

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ILUSTRACIN

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CONCLUSIONES

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Entre las conclusiones ms importantes, encontramos:

1. Para poder hacer un trabajo eficiente en el laboratorio, debemos conocer el material con el que
trabajamos.
2. La esterilizacin de los instrumentos es muy importante, debido a que para realizar una nueva
prueba, se necesita corroborar que no queden rastros de contaminacin ocasionadas por
trabajos anteriores.
3. No slo se necesita un conocimiento terico de los instrumentos, sino tambin saber
manejarlos, por ejemplo: saber envolver nuestro material para que vaya a autoclave o al horno,
saber coger nuestra placa de Petri para que sea expuesta correctamente al calor, entre otros.

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