UNIVERSIDAD AUTNOMA DE QUERTARO

DIRECCIN DE INVESTIGACIN Y POSGRADO

MEMORIAS DEL VIII VERANO DE LA CIENCIA DE LA REGIN CENTRO Y V VERANO DE LA CIENCIA DE
LA UAQ

EFECTO DEL CHOQUE TRMICO EN CANALES INICOS ENDGENOS EN

OVOCITOS DE Xenopus laevis
Salazar Soto, D. B. (1); Martnez Torres A. (2); Ochoa de la Paz L. (2);
(1)
Facultad de Qumica
Universidad Autnoma de Quertaro
(2)

Instituto de Neurobiologa

Universidad Nacional Autnoma de Mxico

RESUMEN
Se indujo la maduracin de ovocitos de la rana Xenopus laevis por la accin de un choque
trmico a 40C durante 10 minutos. Aplicando mtodos electrofisiolgicos se registraron los
cambios ocurridos en las corrientes elctricas generadas por canales inicos dependientes de
voltaje. Se estudiaron especficamente las corrientes inicas inducidas por el flujo de cloro,
sodio y potasio.
Se encontr que el potencial de membrana en reposo de los ovocitos disminuye
dramticamente de -25 a -14mV. Sin embargo, las corrientes generadas por los canales
dependientes de voltaje se mantuvieron relativamente constantes.

INTRODUCCIN
Los ovocitos de Xenopus laevis han sido empleados en estudios biolgicos y farmacolgicos,
dado su fcil manejo se han empleado para la expresin heterloga de protenas de transporte,
receptores y canales inicos ya que al expresar la protena exhiben las propiedades
farmacolgicas y electrofisiolgicas propias .
La ovognesis se compone de seis estadios (I-VI), la principal diferencia entre ellos est en su
variacin en el tamao el cual va desde 100 m hasta 1300m. Por otra parte la coloracin de
sus hemisferios se modifica ya que en las fases inmaduras hay una coloracin casi homognea
entre los hemisferios animal y vegetal hasta que se observa una diferenciacin ecuatorial
entre los hemisferios donde el vegetal es claro y el animal es oscuro. Se pueden encontrar a un
mismo tiempo toda la diversidad de los estadios simultneamente; sin embargo, al llegar al
estadio VI ya no crece el ovocito sino que se mantiene en la fase G2/M de la profase de la
meiosis.
La liberacin de gonadotropina estimula a las clulas foliculares a producir progesterona, e
inicia el ciclo de la meiosis el cual es sealado unas horas despus por la desintegracin de la
vescula germinal, (Weber, 1999), el cual se puede observar en el hemisferio animal a causa
de una decoloracin. La maduracin del ovocito puede producirse por variaciones en las
condiciones ambientales, como lo es la temperatura. En base a estudios realizados en el
laboratorio se ha encontrado que la temperatura de activacin de dicha seal es optima a 40C
durante una exposicin de 10 minutos (Snchez, no publicado).
Durante la maduracin las propiedades bioelctricas de la membrana plasmtica cambian, el
potencial de membrana se despolariza, debido a que pocos son los sistemas que se mantienen
activados como el caso de los canales de cloro independientes de calcio, as como la
inactivacin de la bomba de sodio-potasio la cual contribuye en el proceso de despolarizacin.

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El objetivo de este trabajo consisti en determinar si existen cambios en las propiedades de

los canales inicos activados por voltaje durante la induccin de la maduracin del ovocito.
METODOLOGA
Se operaron tres ranas hembras Xenopus laevis las cuales fueron anestesiadas por hipotermia
para extraer un folculo de ovocitos, posteriormente se dejaron para su recuperacin en agua a
temperatura ambiente. Los ovocitos fueron desfoliculados y tratados con colagenasa (SIGMA,
lote 055K1676) a una concentracin de 0.05 M para eliminar las clulas foliculares durante
30 minutos y lavados con solucin Barth (la cual contiene una concentracin de: 88mM de
cloruro de sodio, 1mM de cloruro de potasio, 2.4mM de bicarbonato de sodio, 0.82mM de
sulfato de magnesio, 0.33mM de nitrato de sodio, 0.041mM de cloruro de calcio, 5mM de
cido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetano sulfnico (HEPES) y 50g/ml de gentamicina) por
10 minutos dos veces; se almacenaron a 14C en solucin Barth toda la noche para su
recuperacin.
Posteriormente fueron separados en dos grupos: un control los cuales se hizo fijacin de
voltaje directamente y el grupo tratado el cual fue sometido a un choque trmico en bao
Mara en solucin Barth a 40 C durante 10 minutos, posteriormente fueron registrados
fijndose el potencial de membrana a -60mV y se corrieron los 4 protocolos respectivamente
a cada ovocito, cuyos programas se muestran en la tabla 1
Tabla 1: Programa de los protocolos para activar los voltajes
Nombre del
protocolo
Calcium
independent Cl

Canal inico de estudio

Programa

Canal de cloro
independiente de calcio

Inicia en un voltaje de -140mV,

incrementando 20 veces 10 mV con
duracin de 1 segundo cada uno
Inicia en un voltaje de 0mV,
incrementando 8 veces 20 mV con
duracin de 2 segundos cada uno
Inicia en un voltaje de 0mV,
incrementando 11 veces 10 mV con
duracin de 12 milisegundos cada uno
Inicia en un voltaje de 0mV,
incrementando 10 veces 10 mV con
duracin de 5 milisegundos cada uno

Transient out

Canal de cloro activado por

calcio

Transient K

Canal de potasio

Sodium protocol

Canal de sodio

Posteriormente fueron analizados los datos en el programa ORIGIN 7.5.

RESULTADOS
Se registraron en total 30 ovocitos de los cuales 6 fueron controles y el resto fueron
registrados a diferentes tiempos a partir del momento en que finaliza el choque trmico
mientras que el resto fueron incubados a 14C, a cada uno de ellos se registro su potencial de
membrana inicial cuyo rango vario entre cada ovocito y los diferentes donadores.

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A continuacin en la tabla 2 se muestra el rango del potencial de membrana clasificados por

ovocitos tratados y controles,
Tabla 2: Variacin del potencial de membrana con respecto al tiempo despus del choque
trmico
Potencial 1 hora
de
membrana
-15.27
+2.16

2
horas

3 horas

-24.98 -15.33
+0
+3.34863

4 horas

5 horas 6 horas

7 horas control

-15.3
+0.8660

-16.45
+ 3.5

-41.85
+21.20

-13.77
+4.96681

-23-38
+5,337

As como los protocolos que se corrieron, la relacin corriente-voltaje y el potencial dado al

punto ms hiperpolarizante o despolarizante segn sea el caso
Tiempo (min)
0
120
240
360
480

Fig. 1 Cambios morfolgicos en un ovocito sometido a choque trmico entre 0 y 480 min. La
flecha indica la formacin de la vescula germinal.
A

Mean

0.4
0.2

intensidad nA

0.0
-0.2

0.25 s

-0.4

200 nA

-0.6
-0.8
-1.0

0.25 s

-1.2
-150

-100

-50

60 mV

50

voltaje mV

Figura 2: A) protocolo de los pulsos de voltaje para activar canal de cloro independiente de
calcio B) curva voltaje-corriente C) pulso hiperpolarizante a 140 mV
Mean

1.0

0.8

Intensidad nA

0.5 s

0.6

300 nA

0.4
70 mV

0.2

0.5 s

0.0

20

40

60

80

100

120

140

voltaje mV

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Figura 3: A) protocolo de los pulsos de voltaje para activar canal de cloro dependiente de
voltaje B) relacin corriente-voltaje C) pulso despolarizante a 140 mV.
A

Mean
1.2
1.1
1.0
0.9

0.1 s

0.8

2200 nA

intensidad nA

0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1

0.1 s

0.0

50 mV

-0.1
-0.2
0

20

40

60

80

100

voltaje mV

Figura 4: A) protocolo de los pulsos de voltaje para canal de potasio B) relacin corrientevoltaje C) pulso despolarizante a 100 mV
A

Mean

1.5

Intensidad nA

1.0

3600 nA
0.025 s
0.5

0.0

45 mV
0.025 s
-0.5

20

40

60

80

100

voltaje mV

Figura 5 A) protocolo de los pulsos de voltaje para canal de sodio B) relacin corrientevoltaje C) pulso despolarizante a 90 mV
CONCLUSIONES.
Existe un cambio en la pigmentacin del hemisferio animal despus del choque trmico.
Este cambio corresponde al desplazamiento de la vescula germinal.
Los cambios en el potencial de membrana en reposo indican que los ovocitos se
despolarizan elctricamente.
No se encontraron cambios en las corrientes generadas por canales de cloro, sodio o potasio.
BIBLIOGRAFIA.
Parker, I. y Miledi, R. A calcium independent chloride current activated by hyperpolarization
in Xenopus laevis, Proc. R. Soc. Lond.,233, 191-199.

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Parker, I. y Miledi, R. Transient potassium curent in native Xenopus laevis, Proc. R. Soc.
Lond.,234, 45-53.
Weber, W. M. Ion currents of Xenopus laevis oocytes: state of the art, BBA., 1421, 213233.

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