ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN MOLECULAR EN

EL RANGO UV-VISIBLE

I.OBJETIVOS

Conocer el manejo y cuidado del material o instrumento a emplear en el

laboratorio en este caso un espectrofotmetro.

2.FUNDAMENTO
La espectrofotometra UV-visible es una tcnica analtica que permite
determinar la concentracin de un compuesto en solucin. Se basa en que las
molculas absorben las radiaciones electromagnticas y a su vez que la
cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentracin. Para
hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotmetro, en el que se
puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solucin y
medir la cantidad de luz absorbida por la misma.
Aplicaciones:
-Determinar la cantidad de concentracin en una solucin de algn compuesto
utilizando.
-Para la determinacin de estructuras moleculares.
-La identificacin de unidades estructurales especificas ya que estas tienen
distintos tipos de absorbencia (grupos funcionales o isomeras).
COMPONENTES DEL ESPECTROFOTMETRO
1. Fuente de luz: proporciona energa radiante en forma de luz visible o no
visible.
Tipos de lmparas:
-Lmparas de filamento de tungsteno: se utilizan para longitudes de onda del
espectro visible y el ultravioleta prximo. Son fuentes de un espectro continuo
de energa radiante entre 360-950 nm.
- Lmparas de filamentos de haluros de tungsteno: son de mayor duracin y
emiten energa radiante de mayor intensidad.

- Lmparas de Hidrgeno y Deuterio: producen un espectro continuo en la

regin ultravioleta entre 220-360 nm.
2. Rendija de entrada: tiene como funcin reducir al mximo la luz difusa y
evitar que la luz dispersa entre en el sistema de seleccin de longitud de onda.
3. Monocromadores.
Pueden ser:
-Prismas: son fragmentos con forma de cua de un material que permite el
paso de la luz. Ej. De vidrio para trabajar en el espectro visible o cuarzo para
trabajar en el ultravioleta lejano.
- Redes de difraccin: son un gran nmero de lneas paralelas situadas a
distancias iguales entre s y son hendiduras sobre un vidrio o una superficie
metlica. Cada una de estas hendiduras se comporta como un pequeo
prisma.
4. Rendija de salida: tiene como funcin impedir que la luz difusa atraviese
la cubeta de la muestra, que provocara desviaciones a la Ley de Beer.
5. Cubeta: es el recipiente donde se coloca la muestra para la medicin.
Pueden ser de distintos tipos y tamaos (cuadradas, rectangulares, redondas).
Se obtienen mejores resultados usando cubetas de bordes paralelos. Si se
utilizan cubetas redondas se deben marcar e introducir en el aparato siempre
en la misma posicin. Suelen estar fabricadas en vidrio o en plstico.
6. Detector. Puede ser de dos tipos: Fotoclulas o clulas fotovoltaicas.
7. Medidor: son sistemas de lectura de la Energa elctrica que recoge el
detector y que puede ser lectura directa (se utiliza una clula fotovoltaica) o
puede ser amplificadores de seal como en el caso del fototubo multiplicador.
Los actuales aparatos incorporan lectura digital y clculos automticos de
concentraciones con relacin a las curvas de calibracin.

3.DESARROLLO
La prctica consisti en aprender el adecuado uso del espectrofotmetro
adems de medir los espectros de absorcin de dos sustancias (sulfato de
cobre y anaranjado de metilo en medio cido y neutro) donde determinaremos
la longitud optima de absorcin, caracterstica especfica de cada sustancia
para ello se empez a trabajar con el espectrofotmetro UNICO UV-2100
SPECTROPHOTOMETER-.

UNICO UV-2100 SPECTROPHOTOMETER-

Al momento de empezar a desarrollar la prctica es importante que el

espectrofotmetro se caliente por un espacio de 5 a 15 minutos para que
pueda calibrarse adems debe iniciarse siempre calibrando con el solvente o
blanco con 0 de absorbancia y 100% de transmitancia adems como ya
sabemos el espectrofotmetro est compuesto por dos lmparas una de
wolframio o tungsteno y otra de deuterio como trabajamos solo con la primera
lmpara es importante apagar la otra para evitar que se pierda el deuterio ya
que es un gas.
La primera sustancia a trabajar fue el sulfato de cobre (CuSO 4) el cual se
diluyo en agua destilada para luego escoger el rango de longitud de onda con
el cual se va a trabajar en este caso se escogi de acuerdo a su color

complementario un barrido o escner de longitud de onda de 600 a 920 nm.

En cuanto a la segunda sustancia fue anaranjado de metilo primero en medio
acido con un pH~1 con una coloracin rojiza para la cual se trabaja con el color
complementario verde azulado y un rango de 450 a 590 nm, mientras que en
medio neutro con un pH~3.7 presentando una coloracin anaranjada
ligeramente amarillenta con un color complementario azul y un rango de 400 a
520nm.
Al analizar las sustancias se obtuvieron los siguientes datos:

Tabla 1
Sulfato de cobre

anaranjado de metilo
(Medio acido pH~1)

%T

A
600
96.7
0.0145
610
95.5 0.0199
620
94.3 0.0254
630
92.7
0.0329
640
90.8
0.0419
650
88.8
0.0545
660
86.8
0.0614
670
84.5
0.0731
680
81.9
0.0867
690
79.5
0.0996
700
76.7
0.1157
710
74.3
0.1290
720
72.0
0.1426
730
69.8
0.1561
740
67.9
0.1681
750
66.3
0.1784
760
65.0
0.1870
770
64.0

%T

A
450

77.7
0.1095
460
71.4
0.1463
470
64.5
0.1904
480
58.5
0.2328
490
53.8
0.2692
500
50.3
0.2984
510
50.2
0.2992
520
52.2
0.2823
530
54.4
0.2644
540
59.4
0.2262
550
70.6
0.1511
560
84.5
0.0731
570
92.8
0.0324
580
96.5
0.1547
590
98.0

anaranjado de metilo
(Medio
neutropH~3.8) )

%T
A
400
81.5
0.0888
410
78.8
0.1034
420
76.5
0.1163
430
74.6
0.1272
440
72.7
0.1384
450
71.4
0.1463
460
69.8
0.1561
470
70.3
0.1530
480
72.0
0.1426
490
75.2
0.1237
500
79.4
0.1001
510
84.3
0.0741
520
88.9
0.0510
530
93.4
0.0296
540
96.2

0.1938
780
63.3
0.1985
790
62.8
0.2020
800
62.5
0.2041
810
62.4
0.2048
820
62.5
0.2041
830
62.8
0.2020
840
63.2
0.1992
850
63.6
0.1965
860
64.3
0.1917
870
64.9
0.1877
880
65.6
0.1830
890
66.4
0.1778
900
67.2
0.1726
910
68.0
0.1674
920
68.5
0.1643

0.0087

0.0168
550
98.1
0.0083

Tambin se trabaj con otro espectrofotmetro (GENESYS 10S UV-VIS, Thermo

Scientific) el cual es ms moderno, adems de estar conectado a una
computadora.
A continuacin los datos obtenidos:

Sulfato de cobre

anaranjado de metilo
(Medio acido pH~1)
%T

%T

A
745

63.1

466

63.9

anaranjado de metilo
(Medio neutropH~3.8)
)

%T
A
415
74.6

0.1999
755

61.9
0.2083
780
59.0
0.2291
790
61.6
0.2104
815
61.2
0.2132
825
61.7
0.2097
835
59.8
0.2232
845
60.7
0.2168
855
65.0
0.1870
865
63.7
0.1958
875
63.9
0.1944
905
65.2
0.1857

0.1944
58.2
0.2350
506
48.1
0.3178
510
48.3
0.3160
530
52.4
0.2806
478

Tabla 2

0.1272
417

72.0
0.1426
435
70.3
0.1530
450
67.3
0.1719
452
67.8
0.1687
458
67.1
0.1732
460
66.9
0.1745
462
66.7
0.1758
466
67.0
0.1739
475
67.9
0.1681
482
69.3
0.1592

4.DISCUSIN Y RESULTADOS
La espectrofotometra es una tcnica de anlisis que hace uso de la interaccin
radiacin electromagntica con la materia para determinar la composicin de
la misma, en el laboratorio como mencion lneas arriba se trabaj con dos
sustancias la primera de ellas sulfato de cobre la cual analizamos en dos
espectrofotmetros
el
primero
de
ellos
UNICO
UV-2100
SPECTROPHOTOMETER- , en el que obtuvimos los siguientes datos que se
muestran en la Tabla 1 en donde podemos observar que su longitud optima de
absorbancia es de 810 nm. la cual difiere bastante del valor terico que se
seala para dicha sustancia la cual es de 822nm, mientras que al analizarla en
el segundo espectrofotmetro GENESYS 10S UV-VIS, Thermo Scientific se
obtuvieron los datos sealados en la tabla 2, adems de poder observar los
picos que se forman ya que este est conectado a una computadora donde el
valor que se asume como longitud optima de absorcin es de 815nm ya que es
la ms prxima al valor terico aunque si nos ceimos a las reglas para
determinar el valor de longitud optima debera ser el pico ms bajo que
corresponde 780 nm.
En cuanto a la segunda sustancia el anaranjado de metilo, el cual fue primero
trabajado en su forma acida (rojo, pH~1) los datos obtenidos en el primer caso
nos indica que su longitud optima es de 520nm mientras que al trabajarlo en
su forma neutra es decir en el intervalo en el que se produce el cambio de
color del indicador (pH~3.7) se obtiene el valor de 460 nm mientras que en el
segundo anlisis se obtuvieron los valores de 506 nm y 462 nm
respectivamente lo cual tambin difiere del valor indicado por la teora que
es de aproximadamente 530 nm. Estos erros presentados en el laboratorio
pudo deberse a muchos factores como al uso inadecuado de las cubetas de
absorcin ya que estas no deben presentar burbujas de aire ni huellas
dactilares, tambin a que la sustancia se haya degradado o est contaminada
o que el instrumento este mal calibrado.

6.CONCLUSIONES

El manejo del espectrofotmetro es muy til y practico para para

analizar determinadas sustancias, sin embargo, se debe ser muy
cuidadoso al momento de manipularlo ya que es un instrumento muy
delicado y sumamente costoso.

La importancia del pH en esta tcnica de anlisis es muy importa a

considerar ya que este factor origina variaciones en el momento de
determinar la longitud optima de absorcin como se puede observar en
las grficas adjuntas donde podemos ver que el anaranjado d metilo

(Medio acido pH~1) presenta una longitud optima mayor que la misma
sustancia en medio neutro (Medio neutropH~3.8).

Se concluye que los datos arrojados por ambos espectrofotmetro no

concuerdan entre s ni con los datos encontrados en la bibliografa
revisada con respecto a su longitud optima salvo el caso del sulfato de
cobre en los que en ambos resultados se acerca bastante as como
tambin en el caso del anaranjado de metilo (pH~1) que en el primer
anlisis se acerca bastante.