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MORELOS
FACULTAD DE MEDICINA
LICENCIATURA MDICO CIRUJANO
1 B
T. L. LETICIA GARCA GMEZ
PRACTICA No. 3
FRAGILIDAD OSMTICA DE LOS ERITROCITOS Y DIALISIS
(MTODO DE DACIE Y LEWIS)
OBJETIVOS.
Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de:
1.- Explicar en qu consiste el fenmeno de la osmosis
2.- Deducir el movimiento del solvente cuando se utilizan soluciones de diferente
concentracin, separadas por una membrana semipermeable.
3.- Valorar el grado de hemlisis que sufren los glbulos rojos cuando se ponen
en contacto con soluciones salinas de diferente concentracin.
HIPTESIS
Al cambiar la concentracin del medio donde se encuentran los eritrocitos, stos
debern sufrir cambios en su estructura, como es la plasmlisis(disminucin del
volumen interno) cuando el medio es hipertnico y la turgencia (aumento del
volumen interno) cuando el medio es hipotnico.
INTRODUCCIN.
Las membranas celulares cumplen muchas funciones: sirven de lmite a la clula y
permite un intercambio de materiales entre la clula y los lquidos que la rodean.
El proceso de seleccin es sumamente refinado para que solo pasen los
materiales apropiados; esta seleccin se logra por transporte activo y por la
naturaleza de las membranas, de modo que solo permiten el paso de ciertas
clulas; por esto las membranas se les consideran semipermeables. Las
membranas permiten el paso de molculas de agua; pero no de los solutos de
cualquier tipo.
Si se usa una membrana para separar una solucin diluida de otra concentrada,
se registrar un flujo neto de solvente hacia el lado mas concentrado, el sistema
se mueve para igualar las concentraciones. Cuando las concentraciones lleguen a
ser iguales ya no se registra un flujo neto de solvente en ningn sentido a travs
de la membrana. Al flujo neto del solvente que va de la solucin diluida (o solvente
puro), hacia la mas concentrada, atravesando una membrana semipermeable lo
conocemos con el nombre de osmosis, y a la presin que hay que ejercer sobre la
solucin concentrada, para mantener el equilibrio en la diluida, se la llama presin
osmtica. La presin osmtica es directamente proporcional al nmero de
partculas en solucin.
Cuando un liquido tiene la misma concentracin de partculas que el plasma, se le
llama isosmotico o isotnico; las soluciones con mayor concentracin de partculas
son hipertnicas y las que tienen menor concentracin, son hipotnicas. El termino
osmolaridad se refiere a la concentracin molar de solutos que ejercen una
presin osmtica.
FUNDAMENTO.
Si se colocan glbulos rojos normales en soluciones hipotnicas, con menor
concentracin de solutos, con respecto al interior de la clula estos sufrirn un
MATERIAL.
Material de vidriara
Espectrofotmetro digital
Centrfuga clnica
Muestra de sangre con anticoagulante (EDTA)
Solucin salina al 1 % amortiguada con fosfato a pH 7.4
Pipeta de 0.2 mL
Pipeta pasteur.
MTODO.
1.- Obtener una muestra de 2 mL de sangre y recibirla en un tubo con una gota de
EDTA.
2.- Preparar la siguiente serie de soluciones de Cloruro de Sodio.
TUBOS
1
Sol. NaCl 1% pH 7.4 0
(mL)
H2O Destilada ( mL)
5
Mezclar por inversin
LA concentracin % 0
del NaCl en cada
tubo es:
Sangre total con 0.05
EDTA. (mL)
Mezclar por inversin
2
0.5
3
2.0
4
2.3
5
2.5
6
3.0
7
4.3
8
4.5
9
5.0
4.5
3.0
2.7
2.5
2.0
0.7
0.5
0.10
0.40
0.46
0.5
0.60
0.89
0.90 1.0
0.05
0.05
0.05
0.05
0.05
0.05
0.05 0.05
3.- Utilizando la pipeta Pasteur, agregar a cada tubo una gota de sangre
(Equivalente a 0.05 mL), dejndola caer lentamente.
4.- Dejar en reposo a temperatura ambiente durante 30 minutos.
5.- Mezclar y centrifugar 5 minutos a 2000 rpm
6.- Extraer el sobrenadante de cada tubo, pasndolo a un tubo de ensaye grande
y leerlo en el espectrofotmetro longitud de onda a 520 nm. usando el tubo No 7
como blanco.
El orden de la lectura ser del tubo No 7 al tubo No 1. El grado de hemlisis en
cada tubo es determinado por la cantidad de Hemoglobina libre en el
sobrenadante.
MTODO: DILISIS.
P.
ALBMINA
AGUA DESTILA DA
REALIZAR:
En una bolsa de dilisis (celofn), colocar solucin hipotnica y sangre incubar
durante 15 min. Y observar sus eritrocitos al microscopio.
RESULTADOS.
En los sujetos normales se obtiene una curva sigmoidea simtrica. El extremo
inferior de la curva corresponde a l comienzo de la hemlisis, la porcin media
corresponde a la salida de hemoglobina en gran cantidad y el extremo superior a
la hemlisis total. Un aumento de la fragilidad osmtica desplaza la curva hacia la
derecha, mientras que una disminucin la desplaza hacia la izquierda. Se ha
sugerido que los dos parmetros ms significativos son:
% HEMLISIS
97-100
90-99
50-95
5-45
0-6
0
RESULTADOS (Equipo 4)
1. Calcular los valores de hemlisis % en los tubos por una regla de tres.
Tubo
1
Lectura
espectrofotmetro
0.463
al Porcentaje
74.55
Concentracin
de NaCl (%)
0
2
3
4
5
6
7
8
9
0.621
0.591
0.211
0.004
0.001
0
0.013
0.016
-
100
95.17
33.97
0.64
0.16
0
2.09
2.57
0.1
0.4
0.46
0.5
0.6
0.89
0.9
1
120
Porcentaje de hemlisis
100
80
60
40
20
0
0
-20
0.2
0.4
0.6
0.8
[NaCl]
ESFEROCITOSIS CONGNITA:
- Frotis sanguneo
- Nivel de bilirrubina (0-0.3 mg/dL)
- Biometra hemtica
- Prueba de Coombs (ausencia de aglutinacin es lo normal)
- Conteo de reticulocitos
1.2
(muestra
una
forma
anormal
de
la
Bilirrubina
Oxgeno en la sangre
Biometra hemtica
Electroforesis de hemoglobina
Creatinina srica
Potasio srico
Examen de depranocitos
ICTERICIA:
-
Frotis sanguneo
Biometra hemtica
Electroforesis hemoglobnica
hemoglobina)
Biometra hemtica
Reticulocitos
Nivel de bilirrubina
Determinacin del grupo sanguneo
TALASEMIA:
-
Bilirrubina en orina
Bilirrubina en sangre
Examen de isoenzimas de la fosfatasa alcalina.
DISCUSIN
En los resultados se puede observar que conforme la concentracin de cloruro de
sodio aumentaba, el porcentaje de hemlisis es menor, puesto que el valor de la
concentracin era cada vez ms cercano al 0.89%, que es la concentracin del
suero fisiolgico. En los textos se refiere que la hemlisis es un fenmeno que se
produce al colocar a los eritrocitos en un medio hipotnico, puesto que stos
comienzan a absorber agua y llega un momento en el que estallan dejando salir la
hemoglobina.
La grfica obtenida es muy parecida a la descrita por las notas, una sigmoidea
simtrica, se observa que a concentracin de 0.85% el porcentaje de hemlisis es
cero, pues fue la solucin utilizada como blanco, adems de que es una
concentracin muy parecida a la del suero fisiolgico.
El mayor porcentaje de hemlisis es a la concentracin de 0.1% de NaCl, un dato
que fue obtenido experimentalmente. Muchos de los datos obtenidos se ven
ligeramente alterados, lo que puede ser causa de un mal manejo de volmenes al
momento de hacer las disoluciones, aunque, por lo general, la idea general de
hemlisis es bastante evidente. Lo ms evidente es que a una concentracin de
0% la hemlisis sea 100%, puesto que los eritrocitos comienzan a absorber agua
sin ningn lmite hasta que revientan. Cuando la concentracin va ms all de los
0.85 tambin se observa cierto grado de hemlisis, aunque no tan grande como a
la concentracin antes descrita.
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFA
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/001298.htm
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003641.htm
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BLOOM, Fawcett, Tratado de histologa, Ed. Interamericana, 11 edicin, 111-113