UNIVERSIDAD AUTNOMA DEL ESTADO DE

MORELOS

FACULTAD DE MEDICINA

LICENCIATURA MDICO CIRUJANO

1 B

T. L. LETICIA GARCA GMEZ

PRCTICA No.9
DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA EN SANGRE Y LOS
DIFERENTES GRADOS DE ANEMIAS.

OBJETIVOS
Al finalizar la prctica el alumno ser capaz:
1. Conocer la estructura de la hemoglobina como ejemplo de protena, la funcin
de la hemoglobina en el transporte de oxgeno en el organismo y los factores
que pueden alterar el transporte de oxgeno por la hemoglobina.
2. Definir la funcin de la hemoglobina como amortiguador y el concepto de
anemia y conocer la clasificacin general de las mismas.
3. Conocer algunas de las formas anormales de la hemoglobina y sus
implicaciones clnicas.

Uso correcto del espectrofotmetro

Mtodo Factor para inclusin de constantes simples.

Un punto de calibracin con una muestra estndar y punto a travs del origen.
Curva de calibracin multipunto de aplicaciones que requieren varios patrones.
Polinomios de primer, segundo y tercer grado que ajusta para que la
calibracin se haga patrn.
Dos o tres anlisis cuantitativos de longitud de onda para mediciones de
muestras coloridas.

Aplicaciones Estndar con Espectrofotmetro UV

Modo fotomtrico para longitud de onda fijo: Con el modo le permite a Ud.
puede medir la absorbancia o transmitancia en la longitud de onda fijan anlisis
cuantitativo fijo usando el mtodo factor K puede tambin ser usado.
Modo cuantificacin para anlisis de longitud simples: Este modo le permite a
Ud. preparar curva de calibracin para determinar fciles concentraciones de
muestras desconocidas. Estn disponibles modos de uno, dos o tres longitudes de
onda. Mtodos cuantitativos posibles de seleccionar incluyendo el factor K.

HIPTESIS

Con la concentracin de hemoglobina se puede obtener uno de los parmetros

para la tipificacin de las anemias; sin embargo, por regla general, una
disminucin de la concentracin de hemoglobina es indicativo de una anemia,
mientras que un incremento de la concentracin de hemoglobina es indicativo de
una policitemia.

INTRODUCCIN
La hemoglobina es una ferroprotena presente en el interior de los eritrocitos en
donde ocupa de un 35 a 38% del volumen total de estas clulas, cuya funcin
principal es el transporte de oxgeno a los pulmones de los tejidos.
La hemoglobina de los mamferos es un tetrmero, constituido por 4 subunidades
pilopeptdicas cada una con un grupo prosttico, llamado HEMO por esta razn
se comprende que la hemoglobina es una protena conjugada o compuesta, a la
cual dividiremos para su estudio en su porcin proteica propiamente dicha y a la
no proteica o grupo prosttico HEMO.
PORCIN PROTEICA
Est formada por 4 cadenas o subunidades polipeptdicas, cada una puede tener
diferente composicin de aminocidos y en conjunto forman la protena llamada
globina, la cual contiene 2 cadenas alfa y 2 cadenas beta en la hemoglobina A 1 y
puede tener otro tipo de cadenas de otros tipos de hemoglobina.
La hemoglobina tiene un peso molecular de 64,000 daltons 16,750 de cadena alfa
con 141 aminocidos y 16,500 de cadena beta con 146 aminocidos.
Para poderse imaginar la posicin en el espacio de la molcula se debe considerar
un tetraedro, con una cadena polipeptdica enrollada sobre s misma en forma
esfrica (ver esquema).

GRUPO PROSTETICO (HEMO)

Este grupo es un tetrapirrol o sea, cuatro anillos pirrlicos unidos entre s por
puentes de metano, que en su centro posee un tomo de fierro en forma ferrosa
(Fe++), recibiendo el nombre en conjunto de ferroprotoporfirina IX.

Este grupo HEMO, dentro de la molcula de hemoglobina, es el directamente

encargado de trasportar el oxgeno de los pulmones hasta los tejidos. Existe un
grupo HEMO para cada cadena polipeptdica de la hemoglobina, por lo tanto cada
molcula de hemoglobina tiene cuatros grupos HEMO, unidos cada uno mediante
su tomo de fierro, a la cadena polipeptdica correspondiente.
ORIGEN Y FUNCIN DE LA HEMOGLOBINA
La hemoglobina se sintetiza en la mdula sea roja, en el interior de los
eritroblastos a partir de loa aminocidos, 4 molculas de protoporfirina III y 4
tomos de Fe. El eritrocito sufre cambios en la maduracin hasta llegar a la forma
de eritrocito que sale de la mdula hacia la circulacin general, este eritrocito
circula 120 das en el torrente sanguneo despus de los cuales es captado por
las clulas del sistema retculo endotelial que destruye el eritrocito, liberndose
sus componentes, entre ellos la hemoglobina. El hierro liberado de estas
molculas as como el grupo prosttico son reutilizados, no siendo as con el
grupo prosttico ahora sin hierro, que pasa a formar parte de los pigmentos
biliares ya excretados.

La funcin por excelencia de la hemoglobina es el transporte de oxgeno de los

pulmones a los tejidos formando un complejo disociable de Hb-O2.
Desoxihemoglobina + O2

Oxihemoglobina

Cuando exista una presin del oxigeno alta (pulmones) la Hb capta el O2 cuando
esta disminuye (tejido) lo libera La presin parcial del oxgeno (pO2) en el aire
alveolar es de 100 mm de Hg, en los tejidos perifricos es de solo 40 mm de Hg.
Es importante mencionar su funcionamiento en la curva de disociacin de la
hemoglobina para entender mejor su funcionamiento. Esta curva, en forma de S
itlica representa la afinidad de la Hb por el O2 a diferentes presiones de este
ltimo.

Esta curva relaciona el grado de saturacin de O2 con la presin parcial del

mismo, en la sangre arterial. La trayectoria particular de esta curva, que forma una
meseta en la parte superior, revela que una disminucin importante de la Po 2 solo
corresponde a una pequea disminucin de la saturacin (ver esquema). En la
figura se observa como una disminucin de 20 mm de Hg en la pO 2, solo
disminuye saturacin en 35 (de 98%).
Cercano todava a la saturacin mxima. Esta curva se ve alterada por muchos
factores; en los casos en que el pH sanguneo aumenta (alcalosis), la curva se
desplaza hacia la izquierda, aumentando as la afinidad de la hemoglobina con
menor presin de oxgeno (efecto de Bohr).
La hemoglobina transporta prcticamente el 100% del oxigeno presente en la
sangre, viajando un porcentaje en el plasma. Otras funciones del plasma son:

transporte del 25% del CO2 gracias a los residuos del aminocido histidina
presente en sus cadenas polipeptdicas.
Es importante recordar que la hemoglobina a al contacto con el O2 no se oxida, o
sea que no entra en unin covalente con el oxgeno, sino que solo se oxigena.

FUNDAMENTO
La mayor parte de los derivados de la hemoglobina y la hemoglobina misma en
presencia de soluciones alcalinas diluidas se oxigena rpidamente con el oxgeno
del aire y reacciona con el lcali formando oxihemoglobina de color rojo brillante
que colorea a la solucin de manera proporcional, este compuesto tiene un
espectro de absorcin cuya longitud de onda es de 540 nm. Pos lo tanto es
directamente proporcional a la cantidad de hemoglobina presente.
La identificacin de las densidades de hemoglobina est basado sobre las
caractersticas de los espectros de absorcin.

MATERIAL
Material de vidriera con un micro pipeta de 25 microlitos
Lanceta estril para puncin
Torundas con alcohol
Espectrofotmetro digital con filtro verde, azul y rojo
Solucin patrn de Hb con 0.1
Solucin de carbonato de sodio al 0.1%

MTODO

1. Preparacin de una solucin problema para su determinacin cuantitativa de

hemoglobina. Preparar un tubo de ensayo de 5 mL. de carbonato de sodio al
0.1%. desinfectar el pulpejo del dedo anular con un volumen de alcohol y
puncionarlo con lanceta estril. Con presin suave hasta obtener una o dos
gotas de sangre, secarlas y presionar de nuevo hasta obtener una gota gruesa
de sangre sobre el dedo. Llenar por micro capilaridad la pipeta por arriba de la
marca limpindola con el papel absorbente en el exterior de la pipeta. Vaciar la
pipeta en el tubo de ensayo antes preparado con bicarbonato de sodio,
enjuagarla aspirando y soplando en la misma solucin. se debe proceder con
rapidez para evitar que la sangre se coagule dentro de la pipeta. este tubo se
rotula con el nmero 7 y se coloca en la siguiente serie:
2. Curva de calibracin. disponer de una serie de tubos como sigue:
TUBOS
Sol. de Hb. (mL)
Na2CO 0.1 %( mL)
Sangre (Microlitros)

1
0
5
0

2
1
4
0

3
2
3
0

4
3
2
0

5
4
1
0

6
5
0
0

7
0
5
20

Dejar en reposo 5 minutos leer los tubos en espectrofotmetro en filtro verde a

540 nm, filtro rojo a 610 nm y filtro azul a 360 nm.

RESULTADOS
El tubo 1 es el blanco y tiene un valor de 0 gramos por decilitro; los tubos de 2 al 6
establecen los puntos de la curva de calibracin y sus valores estarn dados en
base a la concentracin del patrn de Hb 20 g/dl. El tubo 6 contiene
exclusivamente la solucin patrn si diluir; Calcule la concentracin de
hemoglobina en cada uno de ellos.

PARA CHECAR SU RESULTADO:

FACTOR =

[
]
D.O St

Hb = Factor x

D.O Problema.

REPORTE
Tubo

Cantidad
sangre (L)

de D.O.

Concentracin de
hemoglobina.

2
3
4
5
6
7
8 - PB

5
10
15
20
25
30
20

(mg/dL)
6.98
14.11
20.94
29.12
32.27
40.9077
19.85

0.186
0.376
0.558
0.776
0.860
1.090
0.529

Factor= 37.53

1.2

Densidad ptica

1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0

10

15

20

Cantidad de sangre (microlitros)

25

30

35

45

Concentracin de hemoglobina

40
35
30
25
20
15
10
5
0
0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.2

Densidad ptica

DISCUSIN
De acuerdo con los resultados de la cantidad de sangre 20 L, el paciente
presenta una policitemia, sin embargo, para hacer un diagnstico se debe hacer
uso de otras herramientas como la biometra hemtica y el hematocrito.
En estos resultados se observ que todos obtuvieron un valor ms alto del normal,
lo cual posiblemente se deba al estndar; sin embargo, para hacer tal
aseveracin, debe compararse los resultados de todos los equipos.
De igual forma, la manera en la que se tom la muestra puede ser determinante,
aunque en este caso no interfiere mucho ya que lo que se buscaba era la
hemlisis de los eritrocitos para dejar libre toda la hemoglobina.

CONCLUSIN
La concentracin de hemoglobina es indicativo de ciertas enfermedades como es
la anemia y la policitemia, las cuales se pueden caracterizar gracias a ste y otros
parmetros como es el hematocrito y la biometra hemtica.
La hemoglobina es una protena muy importante, ya que gracias a ella se da el
transporte de gases en su forma de oxihemoglobina y carboxihemoglobina.

CUESTIONARIO

1.- Qu es la hemoglobina?
Pigmento que da color a la sangre, contenido en los hemates de todos los
vertebrados y disuelto en el plasma sanguneo de algunos invertebrados. Se oxida
fcilmente en contacto con el aire, ya atmosfrico, ya disuelto en agua, y se
reduce luego para proporcionar a las clulas el oxgeno que necesitan para su
respiracin.
2.- Cmo esta forma la molcula de HEMOGLOBINA?
Est formada por cuatro cadenas polipeptdicas (globinas) que se unen a un grupo
hemo, cuyo tomo de hierro es capaz de unir de forma reversible una molcula de
oxgeno.
3.- Cul es el peso molecular de la hemoglobina y como estn constituidas
sus cadenas?
Pesa 64 kDa.
Grupo Hemo: unin de protoporfirina unida a un ion ferroso.
Cuatro globinas.
4.- Qu es el grupo Prosttico (HEMO) y describe como est constituida
qumicamente?
Proviene de la unin del succinil-CoA a una glicina, formando un grupo pirrol.
Cuatro grupos pirrol se unen formando la protoporfirina IX. Despus la
protoporfirina IX se une a un ion ferroso.
5.- Cul es la funcin de Hemoglobina?
- Transporta el O2 del aparato respiratorio a los tejidos perifricos.
- Transporta el CO2 y los protones desde los tejidos perifricos hasta los
pulmones para ser excretados.
6.- Cul es el origen de la Hemoglobina?
7.- Qu es la Oxihemoglobina y cual es causa?
Es la hemoglobina que se une al oxgeno, cuando es transportada por los
eritrocitos hasta los alvolos donde se lleva a cabo la hematosis.
8.- Qu ocurre cuando hay una disminucin de hemoglobina?
Se presentan anemias. Esto quiere decir que va a haber una pobre oxigenacin, lo
que va a dar como resultado una hipoxia de los tejidos.
9.- Qu ocurre cuando hay un aumento de hemoglobina?

Policitemias, ya que el incremento de hemoglobina es consecuencia de un

aumento del nmero de glbulos rojos. Al haber un mayor nmero de glbulos
rojos, la sangre es ms espesa, adems de que no todos son oxidados, por lo que
tambin se presenta una pobre oxigenacin.
10.- En el primer caso cuales son las enfermedades principales y mencionar
algunas de su sintomatologa.
Sntomas
- Debilidad
- Dolor de cabeza
- Problemas de concentracin.
11.- En el segundo caso cual es la enfermedad principal y mencionar algunas
caractersticas generales del paciente.
Sntomas:
- Ortopnea
- Mareo
- Sangrado excesivo
- Hinchazn del bazo
- Dolor de cabeza
- Prurito
- Coloracin rojiza.
- Disnea
- Cianosis
- Fatiga
- Problemas de visin.
12.-Menciona en esta practicas las dificultades que se encontr en la
realizacin
-

Al momento de realizar la lectura en el espectrofotmetro, no limpiamos

adecuadamente los tubos.
El vaciado de la sangre en el tubo se hizo de forma incorrecta.

BIBLIOGRAFA
http://es.wikipedia.org/wiki/Hemoglobina
http://es.wikipedia.org/wiki/Oxihemoglobina
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000589.htm