UNIVERSIDAD TECNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERIA EN ALIMENTOS

CARRERA DE BIOQUIMICA
Marzo-Agosto 2013
MARIA JOS BARRENO
22 de marzo de 2013
MICROSCOPIA
OBJETIVO GENERAL
El objetivo de este ensayo es familiarizarse con el mundo de la microscopa, haciendo un breve
recorrido por los orgenes histricos y evolucin del microscopio, para luego centrarnos en su
estudio describiendo sus partes, al igual que los tipos y principales funciones de los mismos y del
mismo modo investigar sus nuevos avances tecnolgicos.
INTRODUCCION
En su afn de llegan siempre ms lejos en la investigacin de la naturaleza de lo que los lmites de
sus rganos sensoriales le imponen, el hombre ha construido mltiples instrumentos que le han
permitido acceder all donde los sentidos no podan penetrar.
As como el telescopio abri a la humanidad las puertas de lo infinitamente grande, el microscopio
hizo posible conocer los mundos de dimensiones nfimas, entre ellos la clula, base de la vida. Se
contaban as las bases de las modernas ciencias biolgicas que hasta bien entrada la edad moderna
se haban fundado en las observaciones directas.
Los microscopios son aparatos que, en virtud de las leyes de formacin de imgenes pticas
aumentadas a travs de lentes convergentes, permiten la observacin de pequeos detalles de una
muestra dada que a simple vista no se percibiran.
HISTORIA DE LA MICROSCOPIA
Las fuentes histricas procedentes de civilizaciones antiguas como la asiria,la clsica o la rabe, nos
hablan ya del poder amplificador de las lentes biconvexas yde la utilizacin de tcnicas de
ampliacin de la imagen. El trmino microscopioderiva etimolgicamente del griego mikrs
(pequeo) y skoopo (observar) y fueacuado por Jean Faber en 1624. Sin embargo, el impulsor
ms significativo de lamicroscopa fue el holands Anton Van Leeuwenhoek (1632-1723).
Anatomista yfisilogo, Leeuwenhoek construy sus propios microscopios con lentes convexasque
l mismo pula. Entre sus aportaciones ms importantes est la de ser uno de losprimeros en
estudiar la composicin de la sangre y en observar y dibujar protozoos;en 1676 descubri las
bacterias.
Los primeros microscopios denominados simples constaban solamente deuna lente, la cual se
sostena con la mano y se diriga hacia la fuente de luz para questa atravesara la lente y el objeto.
Estos microscopios producan, no obstante,difracciones y aberraciones, que se corrigieron gracias a
la tcnica del Doblete, aportada por Wollastone (1766-1826), aplicando al microscopio un ocular

astronmico. A principios del siglo XVIII, el microscopio sufre sus modificaciones ms

importantes, no slo en lo referente a ptica, sino tambin, en la mecnica. Enrelacin a sta ltima,
cabe mencionar el de Hooke en 1667, con una bola de vidrioque condensaba los rayos luminosos; el
microscopio de trpode de Von Asch (1687), el de columna de Bonnani (1691) y el de Joblot (1716)
con cristal de campo. Una de las aportaciones ms interesantes fue la de Cuff-Baker (1744) que
confeccion un aparato de columna con movimiento rpido y movimientomicromtrico y con un
espejo fijo para concentrar la luz. Este sera el precedente delactual microscopio compuesto y
produca defectos y aberraciones cromticas y esfricas, a pesar de dar buenas ampliaciones, por lo
que se regres al estudio delmicroscopio simple, ms sencillo que ste y ms efectivo por aquel
entonces.
El descubrimiento del microscopio compuesto es contemporneo al de laslupas y se debe
principalmente a Zacarias Janssen, su primer constructor (1590). Elgran paso en el
perfeccionamiento de ste se debe a Dolland, que con su objetivoapocromtico compuesto de dos
lentes superpuestas, una convergente y otradivergente logr mejorar en gran medida las
observaciones. A partir de entonces, laevolucin del microscopio compuesto ha sido progresiva,
destacando Alemania,Inglaterra y Francia como principales pases impulsores. As, hoy podemos
hablar deavances tales como: la aplicacin de la tecnologa lser y de la informtica a la
microscopa.
DESCRIPCIN DEL MICROSCOPIO.
En este punto vamos a describir las partes de un microscopio atendiendo a las clasificaciones que
tradicionalmente se han realizado, clasificaciones que distinguen dentro del microscopio una parte
mecnica y una parte ptica. Es una clasificacin bastante general ya que no incluimos en ella la
gran cantidad de accesorios y suplementos que se pueden aadir o acoplar a un microscopio.
COMPONENTES MECNICOS DEL MICROSCOPIO.
El ESTATIVO O SOPORTE Est formado por un pie pesado
que sostiene un brazo inclinado del cual salen tanto la platina
como el tubo del microscopio.
La PLATINA es la pieza sobre la que se colocan las diferentes
preparaciones que deseamos observar. La forma de la platina
es variada y puede ser tanto fija como mvil. Prcticamente,
todos los microscopios profesionales actuales poseen un carro
mvil graduado, que hace posible el movimiento y la
localizacin precisa de reas de inters en la preparacin.
El TUBO lleva, en la parte inferior, el revlver con los
objetivos, y en la superior, los oculares cambiables.
El REVLVER es una pieza que lleva varios objetivos intercambiables y
permite adaptar stos al tubo del microscopio.

Los MANDOS DE ENFOQUE manejan el enfoque bien sea por el

movimiento vertical de la platina o del tubo, segn el tipo de microscopio.
Habitualmente se colocan a ambos lados del estativo. Para una mayor
precisin en el enfoque es necesario un mando micromtrico para ajuste
fino, resultando ms cmodos si ambos mandos (macro y micro) actan
sobre el mismo eje (co-axiales).Actualmente los microscopios profesionales
llevan estos mandos graduados, as como control de tensin o pre enfoque
rpido.
COMPONENTES PTICOS DEL MICROSCOPIO
Los OBJETIVOS constan de un sistema de lentes. Podemos
hablar de objetivos secos, que son aquellos en los que entre
el objetivo y la preparacin slo hay aire, y tambin
podemos hablar de objetivos de inmersin, cuando es
necesario colocar entre la lente y la preparacin un
elemento lquido, que permite una mayor luminosidad.
sta y otras caractersticas como: aumento del objetivo, apertura numrica, longitud del tubo y
espesor del cubreobjetos, vienen indicadas mediante unas marcas en el objetivo.
Los OCULARES estn formados por dos lentes que se encuentran
separadas por un diafragma. Para hacer ms cmoda la observacin,
existen microscopios que tienen dos oculares en lugar de uno. Ello
permite observar con los dos ojos a la vez. Actualmente existen cabezales
mltiples, que permiten que varias personas puedan observar una misma
muestra a la vez.
La FUENTE DE LUZ es muy importante ya que una correcta iluminacin
de la preparacin que deseamos observar es una condicin necesaria para
poder realizar una buena observacin. Podemos obtener la fuente de luz a
travs de un espejo situado debajo de la platina, que recoge tanto la luz
natural como la luz elctrica, o a travs de lmparas incorporadas al pie del
microscopio.
El CONDENSADOR es una lente o sistema de lentes situadas debajo de la
platina y que permite concentrar la luz en la muestra que se observa
Existen distintos tipos de condensadores, dependiendo de las necesidades y
requerimientos de nuestra observacin: abbe, de campo oscuro,
acromtico, etc.
El DIAFRAGMA est situado debajo de la platina y del condensador, siendo el encargado de
regular la entrada de luz al condensador. En algunos modelos se acciona por medio de una palanca
y en otros mediante una rueda con orificios de distintos dimetros. Actualmente, las numerosas
innovaciones tecnolgicas en los campos de la informtica y la electrnica han influido
notablemente en el mundo de la microscopia. sta ha mejorado mucho con la utilizacin de nuevos

accesorios como cmaras fotogrficas, monitores, vdeos o vdeo-impresoras, que es necesario tener
en cuenta a la hora de hablar de los componentes del microscopio.
TIPOS DE MICROSCOPIO Y FUNCIONES.
Hay varios tipos de microscopios disponibles en el mercado. Seleccionar un tipo adecuado no es
una tarea simple, ya que tienes la necesidad de determinar para qu fin ser utilizado exactamente.
Abajo podrs ver los tipos de microscopios modernos.
MICROSCOPIA PTICA:
M. Simple:
- Lupas: monoculares
- Lupas binoculares
M. Compuesto:
Estereomicroscopios
De luz ultravioleta
De fluorescencia
De contraste de fases
De campo oscuro
De polarizacin Estereomicroscopio
Microscopia por luz reflejada
MICROSCOPIA ELECTRNICA:
De Barrido (MEB)
De Transmisin (TEM)
Microscopio confocal de barrido lser Microscopio Clsico 7
MICROSCOPIO PTICO (o de campo luminoso).
En estos tipos de microscopios, el rea observada est ampliamente iluminada y los objetos que se
estudian aparecen ms oscuros que el fondo. Normalmente alcanzan hasta unos 1000 aumentos,
aunque con oculares poderosos esta cifra puede llegar a incrementarse en dos veces. El lmite til de
este aumento es de 2000 y la razn de este lmite de amplificacin, se debe al poder de resolucin,
entendido como la capacidad de distinguir dos puntos adyacentes como distintos y separados. Este
poder de resolucin se da en funcin de la longitud de onda de la luz utilizada y de la apertura
numrica que posea el sistema de lentes empleado.
As, puede afirmarse que no siempre las amplificaciones mayores son las de ms utilidad, ya que
pueden no ser tan claras como otras menores. Dentro de la microscopa ptica podemos distinguir,
segn el nmero y posicin de las lentes, el microscopio simple y el compuesto.

Microscopio simple.
Est provisto de una lente o sistema de lentes convergentes dispuestas de manera que proporcionan
una imagen virtual, derecha y mayor que el objeto, que as u vez est situado entre la lente y el foco.
La ampliacin del microscopio simple es bastante limitada y suele utilizarse para la diseccin de
pequeos animales o para la disociacin de piezas histolgicas. Este tipo de microscopio se
denomina tambin lupa. Las lupas pueden ser monoculares o binoculares.
Microscopio compuesto.
A diferencia del simple, en este tipo de microscopios se combinan dos lentes o sistemas de lentes
convergentes de amplificacin de imagen, colocados en los extremos del tubo: el denominado
objetivo, situado ms cerca del objeto a observar; y el ocular, ms cercano al ojo del observador.
Antes de pasar a hablar de los diferentes tipos de microscopios compuestos consideramos
importante hacer referencia a los cabezales monoculares, binoculares y trioculares, en orden de
menor a mayor especializacin en este tipo de tcnica.
El cabezal MONOCULAR consta de un solo ocular, llevando consigo el inconveniente de producir
la fatiga visual en observaciones prolongadas. Este problema se solvent con la aparicin del
cabezal BINOCULAR, el cual permite la visin con los dos ojos, siendo importante alcanzar una
adecuada fusin de la imagen. El cabezal TRIOCULAR adems de poseer las ventajas del anterior,
posibilita el fotografiar el objeto de estudio.
ESTEREOMICROSCOPIOS.
Son microscopios dobles, errneamente denominados "lupas binoculares", con dos objetivos y dos
oculares que poseen un doble prisma, el cual permite enderezar las imgenes y conservar el relieve.
La iluminacin del objeto en estos microscopios se hace por transparencia o por incidencia, siendo
esta ltima ms frecuente. Estn dotados de accesorios de investigacin tales como: equipo
microfotogrfico, doble dispositivo de observacin para poder trabajar dos observadores
simultneamente, cmaras claras y micro disectores.
A continuacin sealaremos otros tipos de microscopios que sirven para efectuar observaciones
especiales atendiendo a diferentes mtodos instrumentales.
DE LUZ ULTRAVIOLETA.
La longitud de onda ms corta corresponde al espectro ultravioleta (180-400nanmetros). Por este
motivo y teniendo en cuenta que el poder de resolucin del microscopio est en razn inversa a la
longitud de onda utilizada, ste ser mayor en una preparacin con radiacin ultravioleta que con
radiacin visible.
Esta tcnica posee la ventaja de que muchas sustancias estudiadas en biologa tienen bandas de
absorcin ultravioleta, con lo que su observacin microscpica no requerir el uso de una tincin.
Para este tipo de observaciones es necesario un microscopio con caractersticas determinadas.
Normalmente se trata de microscopios con una construccin de lentes de cuarzo y hay que sealar
que la imagen ultravioleta slo es visible a travs de fotografas, fluorescencia o fotoemisin. Esta

tcnica ha tenido una difusin limitada debido a los inconvenientes prcticos que conlleva su
utilizacin.
DE FLUORESCENCIA.
Entendemos por fluorescencia, la propiedad que poseen determinadas sustancias, las denominadas
fluorescentes, de emitir, bajo la accin de radiaciones de onda corta, otras radiaciones de longitud
de onda ms largas, denominadas de fluorescencia.
La luz ultravioleta concretamente, excita en los materiales fluorescentes, radiaciones visibles, por
eso estos materiales expuestos a este tipo de luz, se perciben como brillantes sobre un fondo oscuro.
Los componentes de este tipo de microscopio son:
-Una fuente de luz que emite en una banda de longitudes de onda desde el ultravioleta al infrarrojo.
-Un filtro que delimita la banda de excitacin, que normalmente es la ultravioleta.
-Una muestra fluorescente, despus de la cual, encontramos un segundo filtro (filtro de barrera"),
que corta los restos de la luz de excitacin y deja pasar slo la fluorescencia.
Este tipo de microscopia puede ser:
-Primaria: En la que la propia muestra posee fluorescencia.
-Secundaria: La muestra est marcada con colorantes fluorescentes.
-Inmunofluorescencia: La fijacin del colorante se realiza con un anticuerpo marcado. Este es el
principal uso de la microscopia de fluorescencia y tiene como finalidad detectar reacciones
inmunolgicas. Los anticuerpos se pueden hacer intensamente fluorescentes al conjugarse
qumicamente con un colorante fluorescente y al combinarse con un antgeno especfico, ste
tambin se puede hacer fluorescente. El anlisis microscpico permite descubrir la combinacin
realizada.
DE CONTRASTE DE FASES.
Esta tcnica se utiliza para estudiar aquellas preparaciones de densidadhomognica y transparentes,
como son las de bacterias, clulas, etc., en las que labaja capacidad de absorcin hace que la imagen
obtenida no presente diferencia deluminosidad entre sus elementos, permaneciendo prcticamente
invisibles los detalles.
Para aumentar el contraste de la imagen la preparacin con un coloranteadecuado, aunque esto no
siempre es til ya que dificulta la observacin "in vivo"del elemento estudiado.
Bsicamente, el microscopio de contraste de fases consiste en undispositivo de iluminacin por el
cual, una parte del haz luminoso es tratada demodo diferente al resto. Estas variantes en el
tratamiento se combinanposteriormente y producen por interferencia grandes aumentos en contraste
declulas y de estructuras intracelulares, cuyo ndice de refraccin es diferente al de suentorno.

Gracias al contraste de fases se pueden observar diferencias en las clulas yen sus estructuras que
con otras tcnicas no seran discernibles.
Se utilizan especialmente en examen de preparaciones hmedas y de gotapendiente.
DE CAMPO OSCURO.
Este tipo de microscopios producen un efecto consistente en un
fondo oscuro sobre el que se ven los objetos intensamente
iluminados. El poder ver un objeto depende del contraste
existente entre l y el medio que le rodea. El condensador
comn es sustituido por uno de campo oscuro, a travs del cual
pasa solamente un cilindro hueco de luz.
Hay objetos y estructuras de clulas que resultan invisibles,
pero que se hacen visibles cuando se recurre a esta tcnica de
iluminacin. El objeto aparece como una mancha brillante sobre
un fondo oscuro.
Se utilizan especialmente para observar microorganismos sin teir suspendidos en lquido
(preparaciones hmedas y de gota pendiente).
DE POLARIZACIN.
Son microscopios de luz polarizada, que se construyen a partir de unmicroscopio ordinario,
colocando un polarizador entre la fuente de luz y elcondensador, y un analizador entre el objetivo y
el ocular.
Se utilizan muchas veces para la observacin de sustancias birrefringentes.Al hacer rotar el objeto
birrefringente con relacin a los filtros cruzados, ste se verbrillante sobre un campo oscuro.
Se utilizan estos microscopios normalmente, en Petrografa y Mineraloga.Concretamente, esta
tcnica es usada para minerales transparentes, los cuales recibenla luz polarizada desde el lado
diametralmente opuesto al de observacin y suelencolocarse entre un portaobjetos y un
cubreobjetos.
DE LUZ REFLEJADA.
Este tipo de microscopa es utilizada en el estudio de los
minerales metlicos u opacos. Por este motivo los
microscopios especiales que requiere esta tcnica reciben el
nombre de METALOGRFICOS. La diferencia entre stos
y los de polarizacin (por transparencia) radica en un
diferente sistema de iluminacin.
Para el estudio de los minerales opacos se necesita un foco
de luz polarizada que incida de manera perpendicular sobre
la superficie finamente pulida, con intenso brillo y sin

interposicin de cubreobjetos. Adems de esto, requerirn un iluminador de opacos acoplado

adecuadamente al microscopio, para que a travs de un polarizador, los rayos de luz se dirijan
perpendicularmente sobre la superficie del mineral, siendo reflejados entonces en sentido opuesto al
ocular.
MICROSCOPIO ELECTRNICO.
El microscopio electrnico ha revolucionado el conocimiento de cienciascomo la biologa o la
medicina. Tiene la ventaja de alcanzar una extraordinariaamplificacin. Puede dar un poder de
resolucin hasta mil veces mayor que elptico, debido a que emplea un haz de electrones en lugar
de un haz de fotones.
DE BARRIDO (MEB).
En el microscopio electrnico de barrido (MEB) o microscopia deexploracin electrnica (SEM),
los electrones inciden desde arriba sobre lapreparacin, por ello la muestra puede ser de cualquier
grosor o tamao.
Emplea dos tcnicas preparatorias:
a) Secado por congelacin.
b) Secado por punto crtico.
Despus se cubre la muestra con una capa de metal (oro o platino).
El microscopio electrnico de barrido no tiene la resolucin que se alcanzacon el microscopio
electrnico de transmisin, pero su ventaja es una excelenteimpresin tridimensional.
Este microscopio se basa en el principio de la amplificacin electrnica deseales que se generan al
irradiar la superficie de las muestras con un haz muyestrecho de electrones.
DE TRANSMISIN.
En este tipo de microscopa electrnica, el haz de electrones atraviesa almaterial que se desea
observar.
El modo de operar de este tipo de microscopio es similar al del microscopioptico, ya que est
basado en el hecho de que la manera de actuar de un campoelectromagntico sobre un haz de
electrones es anlogo a la accin de la lente decristal sobre el haz de fotones. La imagen, sin
embargo, se forma sobre una pantallafluorescente como lo hara en una pantalla de televisor.
El haz de electrones pasa a travs de la muestra estudiada y posteriormente,a travs de unas lentes
electromagnticas que dan lugar a una imagen amplificada.Esta imagen pasa a su vez por una lente
proyectora hasta una pantalla de materialfluorescente, que brilla al recibir el impacto de los
electrones. Debajo de la pantalla se sita la cmara para fotografiar la imagen.
No obstante, al igual que en el microscopio ptico, el microscopioelectrnico de transmisin tiene
la limitacin de ser til slo para un grosordeterminado del objeto. Las pelculas de muestra,
adems de ser delgadas, no debenposeer materiales que puedan dispersar o absorber electrones,

deben ser losuficientemente fuertes como para poderlas manipular, y lo bastante estables, comopara
no volatilizarse, a causa del bombardeo en el vaco.
El interior del microscopio debe hallarse en vaco, ya que el aire impide lamovilidad de los
electrones. Esto se efecta mediante las bombas de vaco. Estascondiciones imposibilitan la
observacin de microorganismos vivos, y de susprocesos fisiolgicos.
Las tcnicas que ms se utilizan para este tipo de microscopio electrnicoson: tincin negativa,
microtoma y congelacin.
MICROSCOPIO CONFOCAL DE BARRIDO LSER.
Este tipo de microscopio es sin duda uno de los ltimos avances enmicroscopia ya que permite,
utilizando la tecnologa lser, la observacin desecciones finsimas dentro de una espesa muestra
fluorescente, as como digitalizar yreconstruir a gran velocidad las imgenes de alta resolucin en
tres dimensiones.
AVANCES TECNOLOGICOS EN LA MICROSCOPIA
Avances En Microscopa De Fuerzas Atmicas Mejoran La Resolucin Nanomtrica
Un equipo del Consejo Superior de Investigaciones Cientficas (CSIC) ha impulsado el desarrollo
de un nuevo mtodo de microscopa de fuerzas atmicas, un instrumento mecano-ptico empleado
en nanociencia y nanotecnologa para tomar imgenes de los tomos y las molculas de la
superficie de un material. La tcnica, cuya patente ya est en fase de explotacin comercial,
aparece en el ltimo nmero de la revista NatureNanotechnology.

Imagen izquierda de microscopa de fuerzas con molcula de ferritina (cubierta de pptidos

separada del ncleo de xido de hierro). A la derecha, esquema de la adquisicin de una imagen de
la morfologa y las propiedades mecnicas de un anticuerpo en lquido mediante la microscopa de
fuerzas en multifrecuencia. Imagen: Ricardo Garca/CSIC.
Una mircopalanca que tiene en su extremo una punta muy afilada es la principal caracterstica de un
microscopio de fuerzas, una herramienta que surgi hace 25 aos para escanear la superficie de
un material y examinar el modo en que sus tomos y molculas estn colocados. En la tcnica
convencional, esa micropalanca se hace vibrar a una frecuencia dada.
Ahora, lo que nosotros hemos desarrollado es un microscopio de fuerzas bimodal que, a diferencia
del convencional, introduce la excitacin y deteccin de dos frecuencias de resonancia de la punta

del microscopio", aclara el investigador del Instituto de Microelectrnica de Madrid (CSIC) Ricardo
Garca, coordinador del mtodo. "Al excitar y detectar dos frecuencias se multiplican por dos los
canales de informacin, lo que implica que, de forma simultnea, pueden obtenerse imgenes de
diferentes propiedades de la muestra.
El nuevo desarrollo permite reconstruir con mayor fidelidad la topografa y las propiedades
mecnicas del material examinado. La tcnica bimodal aumenta la capacidad para recoger y
separar informacin sobre la muestra. Adems, es menos invasiva porque se ejercen fuerzas ms
pequeas sobre el material durante la observacin, agrega Garca.
Avance En Microscopa: Cmo Escapan Las Molculas Del Ncleo
Mediante la construccin de un microscopio que logra una resolucin
nunca antes posible en las clulas vivas, investigadores de la Escuela de
Medicina Albert Einstein de la Universidad Yeshiva han iluminado las
interacciones moleculares que se producen durante uno de los ms
importantes viajes en toda la biologa: el viaje de individuales molculas
mensajeras de cido ribonucleico (ARN) desde el ncleo hacia el
citoplasma (el rea entre el ncleo y la membrana celular), de modo que las
protenas puedan hacerse.
Los resultados, publicados en la edicin en lnea del 15 de septiembre de
Nature, marcan un importante avance en el uso de microscopios para investigacin cientfica
(microscopa). Las conclusiones podran conducir a tratamientos para trastornos como la distrofia
miotnica en la que el ARN mensajero se queda atascado dentro del ncleo de las clulas.

CONCLUSIN
La curiosidad del hombre ha hecho que este haya intentado saber ms acerca de los objetos ms
lejanos, pero tambin de los ms prximos, es por eso que desde tiempos muy antiguos se ha
intentado acercarms y poder observar los objetos que a simple visto no se puede. Es por eso que
las lupas muy simples talladas sobre esferitas de cristal han ido avanzando hasta convertirse en los
microscopios mucho ms especializados con lentes tan potentes que pueden ver cosas realmente
pequeas, tanto as que en los ltimos aos se ha creado microscopios que pueden ver molculas y
sus tomos. Y as se encuentra en constante desarrollo.

BIBLIOGRAFIA
Einstein, E. d. (27 de septiembre de 2010). NANOTECNOLOGICA. Recuperado el 22 de Marzo de
2013, de Avances en Microscopia: http://www.nanotecnologica.com/avance-en-microscopia-comoescapan-las-moleculas-del-nucleo/
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Historia,
descripcion
y
uso
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microscopio:
http://pagina.jccm.es/museociencias/otras%20actividades%20web/material%20cnr%20web/manual
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William J. Payne, D. R. (1974). MICROBIOLOGIA: Una presentacion programada. Buenos Aires:
Editorial Medica Panamericana.