Recueil 2013 Volume1 PDF

RECUEIL DES METHODES
INTERNATIONALES DANALYSE
DES VINS ET DES MOUTS
ORGANISATION INTERNATIONALE
DE LA VIGNE ET DU VIN
ORGANISATION INTERNATIONALE DE LA VIGNE ET DU VIN
RECUEIL
DES METHODES
INTERNATIONALES
DANALYSE DES
VINS ET DES MOUTS
EDITION 2013
VOLUME 1
INCLUSES:
Rsolutions adoptes Izmir (Turquie)
10me A.G. 22 juin 2012
OIV - 18, RUE DAGUESSEAU - 75008 PARIS
RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSES OIV

Table des matires
Plan gnral du Recueil

Table des matires
Avant-propos
ANNEXE A METHODES D'ANALYSE DES VINS ET DES MOUTS

SECTION 1 DEFINITIONS ET PRINCIPES GENERAUX
SECTION 2 ANALYSES PHYSIQUES
SECTION 3 ANALYSES CHIMIQUES
SECTION 3.1 COMPOSS ORGANIQUES
SECTION 3.1.1 SUCRES
SECTION 3.1.2 ALCOOLS
SECTION 3.1.3 ACIDES
SECTION 3.1.4 GAZ
SECTION 3.1.5 AUTRES COMPOSS ORGANIQUES
SECTION 3.2 COMPOSS NON ORGANIQUES
SECTION 3.2.1 ANIONS
SECTION 3.2.2 CATIONS
SECTION 3.2.3 AUTRES COMPOSS NON ORGANIQUES
SECTION 4 ANALYSES MICROBIOLOGIQUES
SECTION 5 AUTRES ANALYSES
ANNEXE B - MODELES DE CERTIFICATS D'ANALYSE
ANNEXE C - LIMITES MAXIMALES ACCEPTABLES DE DIVERS ELEMENTS
ANNEXE D AVIS
ANNEXE E ASSURANCE QUALITE DANS LES LABORATOIRES
ANNEXE F - METHODES SPECIFIQUES POUR LANALYSE DU SUCRE DE
RAISIN (MOUTS DE RAISIN CONCENTRES RECTIFIES)
OIV-MA-INT-00-2013

Table des matires
NB: La rfrence de chaque mthode se trouve entre parenthse (rsolutions, mthodes de

rfrence du Recueil des mthodes internationales danalyse des vins et des mot 1990 =
Recueil OIV ed. 1990; mthodes du Recueil des mthodes internationales danalyse des
vins 1978 = A et chiffre i.e. A1, A2 )
Titre
- Table des matires
Rfrence
Type de
mthode
OIV-MA-INT-00
VOLUME 1
- Avant-propos
- Mode rdactionnel dune mthode danalyse OIV
OIV-MA-INT-01
OIV-MA-INT-04
ANNEXE A METHODES D'ANALYSE DES

VINS ET DES MOUTS
SECTION 1 DEFINITIONS ET PRINCIPES
GENERAUX
- Remarques gnrales (eco 3/2003)
OIV-MA-AS1-02
- Classification des mthodes danalyse (oeno 9/2000) OIV-MA-AS1-03
Effet matrice pour le dosage des mtaux (oeno
5/2000)
OIV-MA-AS1-04
SECTION 2 ANALYSES PHYSIQUES
- Masse volumique (A 1, rvision par 377/2009)

- Masse volumique (A 1, rvision par 377/2009)
-
Evaluation de la teneur en sucres des mots, des

mots concentrs et du raisin par rfractomtrie
(Recueil OIV ed. 1990, rvision par 377/2009)
Extrait sec total (gravimtrie) (A 3, rvision par
377/2009 et 387/2009)
Extrait sec total (densimtrie) (A 3, rvision par
377/2009 et 387/2009)
Cendres (A 6, rvision par 377/2009)
- Alcalinit des cendres (A 7, rvision par 377/2009)

- Potentiel d'oxydorduction (oeno 3/2000)
- Caractristiques chromatiques (A0 mod.)
Caractristiques chromatiques (A0 revised by
377/2009)
OIV-MA-INT-00-2013
OIV-MA-AS2-01A
OIV-MA-AS2-01B
IV
OIV-MA-AS2-02
OIV-MA-AS2-03A
OIV-MA-AS2-03B
IV
OIV-MA-AS2-04
OIV-MA-AS2-05
IV
OIV-MA-AS2-06
IV
OIV-MA-AS2-07A
Supprime
OIV-MA-AS2-07B
IV

Table des matires
-
Turbidit des vins (Oeno 4/2000, rvision par

377/2009)
Mouillage - rapport isotopique 18O/16O (Oeno
2/96)
Indice de Folin-Ciocalteu (Recueil OIV ed. 1990,
rvision par 377/2009)
Caractristiques chromatiques (Oeno 1/2006)
Dtermination du rapport isotopique 18O/16O de leau
(Oeno 353/2009)
Dtermination de la taille des morceaux de bois de
chne par tamisage (Oeno 406-2011)
OIV-MA-AS2-08
IV
OIV-MA-AS2-09
Supprime
OIV-MA-AS2-10
IV
OIV-MA-AS2-11
OIV-MA-AS2-12
II
OIV-MA-AS2-13
SECTION 3 ANALYSES CHIMIQUES

SECTION 3.1 COMPOSS ORGANIQUES
SECTION 3.1.1 SUCRES
- Substances rductrices (A 4, rvision par 377/2009)

- Sucres rducteurs (clarification) (type IV)
- Sucres rducteurs (A 4) (titrimtrie) (type II)
-
Glucose et fructose (mthode enzymatique) (rvision

par 377/2009)
Dosage des sucres par CLHP (Oeno 23/2003)
Stabilisation des mots en vue de la recherche du
saccharose (A 5)
Dtermination de la rpartition du deutrium dans
l'thanol issu de mots de raisins ferments, mots
de raisins concentrs, sucre de raisin (mots de
raisins concentrs rectifis) et de vins par rsonance
magntique nuclaire (SNIF-NMR / RMN-FINS)
(Oeno 426-2011)
Polyols drivant des sucres (Oeno 9/2006)
Glucose et fructose (pHmtrie) (Oeno 10/2006,
Glucose, fructose et saccharose (pHmtrie) (Oeno
11/2006, rvision par 377/2009)
OIV-MA-AS311-01A
IV
OIV-MA-AS311-01B
Supprime
OIV-MA-AS311-01C
Supprime
OIV-MA-AS311-02
II
OIV-MA-AS311-03
II
OIV-MA-AS311-04
OIV-MA-AS311-05
II
OIV-MA-AS311-06
IV
OIV-MA-AS311-07
III
OIV-MA-AS311-08
IV
SECTION 3.1.2 ALCOOLS
- Titre alcoomtrique volumique (pycnomtrie,

rsonateur de flexion, balance hydrostatique) (A2;
8/2000; 24/2003 ; rvision par 377/2009)
- Titre alcoomtrique volumique (hydromtre,
rfractomtrie) (A2, rvision par 377/2009)
- Tables de conversion (A2)
- Mthanol (CG) (A 41, rvision par 377/2009)
OIV-MA-INT-00-2013
OIV-MA-AS312-01A
OIV-MA-AS312-01B
IV
OIV-MA-AS312-02
OIV-MA-AS312-03A
IV

Table des matires
-
Mthanol (colorimtrie) (A 41, rvision par

377/2009)
Glycrol et butane-2,3-diol (A 21, rvision par
377/2009)
Glycrol (mthode enzymatique) (Recueil OIV ed.
1990, rvision par 377/2009)
Dtermination du rapport isotopique de l'thanol
(Oeno 17/2001)
Glycrol (mthode GC-C-IRMS ou HPLC-IRMS)
(OIV-Oeno 343-2010)
OIV-MA-AS312-03B
IV
OIV-MA-AS312-04
IV
OIV-MA-AS312-05
IV
OIV-MA-AS312-06
II
OIV-MA-AS312-07
IV
OIV-MA-AS313-01
OIV-MA-AS313-02
OIV-MA-AS313-03
OIV-MA-AS313-04
IV
SECTION 3.1.3 ACIDES
- Acidit totale (A 10, rvision par 377/2009)

- Acidit volatile (A 11, rvision par 377/2009)
- Acidit fixe (A 11, rvision par 377/2009)
Acides organiques (mthode gnrale HPLC)
(Recueil OIV ed. 1990, rvision par 377/2009)
Acide tartrique (gravimtrie) (A 12, rvision par
377/2009)
- Acide tartrique (colorimtrie) (A 12)
- Acide lactique - mthode chimique (A 27)

-
Acide lactique -mthode enzymatique (Recueil OIV

ed. 1990, rvision par 377/2009)
Acide citrique - mthode chimique (A 29)
Acide citrique - mthode enzymatique (Recueil OIV
ed. 1990, rvision par 377/2009)
Acide malique total (A 33, rvision par 377/2009)
Acide L-malique : mthode enzymatique (Recueil
OIV ed. 1990, rvision par 377/2009)
Acide D-malique : mthode enzymatique (Oeno
6/98, rvision par 377/2009)
Acide D-malique - mthode enzymatique faibles
teneurs (Oeno 16/2002, rvision par 377/2009)
Acide L-ascorbique (spectrofluorimtrie) (A 28,
Acide L-ascorbique (spectrophotomtrie) (A 28)
Acide sorbique (spectrophotomtrie) (A 30, rvision
par 377/2009)
Sorbic Acid (GC ) (A 30, rvision par 377/2009)
OIV-MA-AS313-05A
IV
OIV-MA-AS313-05B
Supprime
OIV-MA-AS313-06
Supprime
OIV-MA-AS313-07
II
OIV-MA-AS313-08
IV
OIV-MA-AS313-09
II
OIV-MA-AS313-10
IV
OIV-MA-AS313-11
II
OIV-MA-AS313-12A
II
OIV-MA-AS313-12B
IV
OIV-MA-AS313-13A
IV
OIV-MA-AS313-13B
Supprime
OIV-MA-AS313-14A
IV
- Sorbic Acid (TLC) (A 30, rvision par 377/2009)

- pH (A 31, rvision par Oeno 438-2011)
- Acide organique : chromatographie ionique (Oeno
OIV-MA-AS313-14B
IV
OIV-MA-AS313-14C
IV
OIV-MA-AS313-15
23/2004)
- Acide shikimique (Oeno 33/2004)
OIV-MA-AS313-16
IV
OIV-MA-AS313-17
II
OIV-MA-INT-00-2013

Table des matires
- Acide sorbique (lectrophorse capillaire) (Oeno
4/2006)
OIV-MA-AS313-18
IV
OIV-MA-AS313-19
II et III
OIV-MA-AS313-20
IV
OIV-MA-AS313-21
IV
l'acide D-isoascorbique par HLPC (Oeno 11/2008)
OIV-MA-AS313-22
II
- Identification de lacide L- tartrique (Oeno 12/2008)
OIV-MA-AS313-23
IV
OIV-MA-AS314-01
II
OIV-MA-AS314-02
OIV-MA-AS314-03
II
OIV-MA-AS314-04
II
OIV-MA-AS315-01
IV
OIV-MA-AS315-02A
IV
OIV-MA-AS315-02B
IV
OIV-MA-AS315-03
IV
OIV-MA-AS315-04
II
OIV-MA-AS315-05A
IV
OIV-MA-AS315-05B
IV
OIV-MA-AS315-06
II
OIV-MA-AS315-07A
IV
OIV-MA-AS315-07B
IV
- Acides organiques et sulphates (lectrophorse

capillaire) (Oeno 5/2006 et Oeno 407-2011)
- Acide sorbique, benzoque, salicylique (Oeno

6/2006)
- Acide mtatartrique (Oeno 10/2007)

- Dosage simultan de l'acide L-ascorbique et de
SECTION 3.1.4 GAZ
- Dioxyde de carbone (A 39 modifie par Oeno

21/2003 et complte par la rsolution Oeno 3/2006,
- Mthode de mesure de la surpression des vins
effervescents (Oeno 21/2003)
- Dtermination du rapport isotopique 13C/12C du CO2

dans les vins mousseux (Oeno 7/2005)
- Dioxyde de carbone (mthode manomtrique) (Oeno

2/2006)
VOLUME 2
SECTION
3.1.5
AUTRES
COMPOSS
ORGANIQUES
Ethanal (A 37, rvision par 377/2009)
Actate d'thyle (GC) (Recueil OIV ed. 1990,
Actate d'thyle (titrimtrie) rvision par 377/2009
Diglucoside de malvidol (A 18, rvision par
377/2009)
Carbamate d'thyle (Oeno 8/98, rvision par
377/2009)
5-(Hydroxymthyl)furfural (colorimtrie) (A 19,
Hydroxymethylfurfural (HPLC) (A 19, rvision par
377/2009)
Drivs cyans (oeno 4/94, rvision par 377/2009)
Edulcorants de synthse (TLC: saccharine,
cyclamate, dulcin et P-4000) (A 36, rvision par
377/2009)
Edulcorants de synthse (TLC: saccharine,
cyclamate and Dulcin) (A 36, rvision par
OIV-MA-INT-00-2013

Table des matires
377/2009)
- Colorants de synthse (A 43, rvision par 377/2009)

-
Dithylneglycol (Recueil OIV ed. 1990, rvision

par 377/2009)
Ochratoxine A (Oeno 16/2001, rvision par Oeno
349-2011)
Dtermination par CLHP de neuf Anthocyanes
principales dans le vin rouge et ros (Oeno 22/2003,
Oeno 12/2007)
Matires protiques dorigine vgtale (Oeno
24/2004)
Polychlorophnols et polychloroanisoles (Oeno
8/2006)
Dtermination du lysozyme par HPLC (Oeno 8/2007
OIV-MA-AS315-08
IV
OIV-MA-AS315-09
IV
OIV-MA-AS315-10
II
OIV-MA-AS315-11
II
OIV-MA-AS315-12
IV
OIV-MA-AS315-13
Supprime
OIV-MA-AS315-14
- Dtermination du 3-Methoxypropane-1,2-diols et des
glycrols cycliques (Oeno 11/2007)
IV
OIV-MA-AS315-15
II
OIV-MA-AS315-16
IV
- Dosage du 2,4,6-trichloroanisole relargable dans le

vin (Oeno 296/2009)
- Recherche et dosage des polychlorophenols et des

polychloroanisoles (Oeno 374/2009)
Analyse des amines biognes par HPLC (Oeno
346/2009)
- Dosage du glutathion (Oeno 345/2009)
- Dtermination des composes -dicarbonyls du vin

par HPLC aprs drivation (Oeno 386A-2010)
- Dtermination des composes -dicarbonyls du vin
par GC aprs drivation (Oeno 386B-2010)
- Dosage de la carboxymethylcellulose dans les vins
blancs (Oeno 404-2010)
- Quantification des rsidus potentiellement
allergniques de protines de collage dans le vin
(Oeno 427-2010)
- Dosage du lysozyme dans le vin par lectrophorse
capillaire haute performance (Oeno 385-2012)
OIV-MA-AS315-17
OIV-MA-AS315-18
IV
II
OIV-MA-AS315-19
IV
OIV-MA-AS315-20
IV
OIV-MA-AS315-21
IV
IV
OIV-MA-AS315-22
criteria
OIV-MA-AS315-23
OIV-MA-AS315-24
IV
Brome total (A 23, rvision par 377/2009)
OIV-MA-AS321-01
IV
Chlorures (A 15, rvision par 377/2009)
OIV-MA-SA321-02
II
Fluorures (A22 ; Oeno 22/2004)
OIV-MA-AS321-03
II
Phosphore total (A 16, rvision par 377/2009)
OIV-MA-AS321-04
IV
SECTION 3.2 COMPOSS NON ORGANIQUES

SECTION 3.2.1 ANIONS
OIV-MA-INT-00-2013

Table des matires
- Sulfates (gravimtrie) (A 14, rvision par 377/2009)
- Sulfates (titrimtrie) (A 14)
OIV-MA-AS321-05A
II
OIV-MA-AS321-05B
Supprime
SECTION 3.2.2 CATIONS
- Ammonium (A 20, rvision par 377/2009)

- Potassium (SAA) (A 8, rvision par 377/2009)
OIV-MA-AS322-01
IV
OIV-MA-AS322-02A
II
Potassium (photomtrie de flamme) (A 8, rvision

par 377/2009)
OIV-MA-AS322-02B
- Potassium (gravimtrie) (A 8, rvision par 377/2009) OIV-MA-AS322-02C
- Sodium (SAA) (A 25, rvision par 377/2009)
OIV-MA-AS322-03A
Sodium (photomtrie de flamme) (A 25, rvision par
377/2009)
OIV-MA-AS322-03B
- Calcium (A 26, rvision par 377/2009)
OIV-MA-AS322-04
- Fer (AAS) (A 9, rvision par 377/2009))

- Fer (colorimtrie) (A 9, rvision par 377/2009)
III
Supprime
II
III
II
OIV-MA-AS322-05A
IV
OIV-MA-AS322-05B
IV
Cuivre (Recueil OIV ed. 1990, rvision par

377/2009)
- Magnsium (A 26)
OIV-MA-AS322-06
IV
OIV-MA-AS322-07
II
- Zinc (A 45)
OIV-MA-AS322-08
IV
OIV-MA-AS322-09
IV
OIV-MA-AS322-10
IV
OIV-MA-AS322-11
Supprime
OIV-MA-AS322-12
II
Argent (Recueil OIV ed. 1990, rvision par

377/2009)
Cadmium (Recueil OIV ed. 1990, rvision par
377/2009)
- Plomb
- Plomb (critres pour mthodes) (Oeno 7/2006)
SECTION 3.2.3 AUTRES COMPOSS NON

ORGANIQUES
Arsenic (SAA) (Oeno 14/2002, rvision par
377/2009)
OIV-MA-AS323-01A
- Arsenic (SAA) (A 34, rvision par 377/2009)
OIV-MA-AS323-01B
- Arsenic (colorimtrie) (A 34)
OIV-MA-AS323-01C
- Azote total (A 40, rvision par 377/2009)

-
Azote total - Mthode Dumas (Oeno 13/2002,

Bore (A 44, rvision par 377/2009)
Dioxyde de soufre (titrimtrie) (A17, rvision par
377/2009)
Dioxyde de soufre (Iodomtrie) (A17, rvision par
OIV-MA-INT-00-2013
IV
IV
Supprime
OIV-MA-AS323-02A
IV
OIV-MA-AS323-02B
II
OIV-MA-AS323-03
IV
OIV-MA-AS323-04A
II
OIV-MA-AS323-04B
IV

Table des matires
377/2009)
Dioxyde de soufre (mthode moleculaire) (A17,

Dioxyde de soufre - jus de raisin (A17, rvision par
377/2009)
Mercure - Fluorescence atomique (Oeno 15/2002,
Analyse multi-lmentaire par ICP-MS (Oeno 3442010)
Dosage de rsidus de pesticides dans le vin aprs
extraction par la mthode Quechers (Oeno 436/2012)
- Dtermination de la natamycine dans le vins (Oeno

461/2012)
SECTION 4 ANALYSES
MICROBIOLOGIQUES
Analyse microbiologique (Oeno 206-2010)
Recherche des antiseptiques et des inhibiteurs de
fermentation (Test de fermentescibilit) (A35; Oeno
6/2006 ; rvision par 377/2009)
fermentation (Recherche des acides sorbique,
benzoque, p chlorobenzoque, salicylique, p
hydroxybenzoque et ses esters) (A35; Oeno 6/2006 ;
fermentation (Recherche des drivs monohalogns
de l'acide actique) (A35; Oeno 6/2006 ; rvision par
377/2009)
fermentation (Recherche et dosage du pyrocarbonate
d'thyle) (A35; Oeno 6/2006 ; rvision par 377/2009)
fermentation (Recherche de l'acide dhydroactique)
(A35; Oeno 6/2006 ; rvision par 377/2009)
fermentation (Azothydrate de sodium par HPLC)
(A35; Oeno 6/2006 ; rvision par 377/2009)
Numration des Levures de lespce Brettanomyces
bruxellensis par qPCR (Oeno 414-2011)
SECTION 5 AUTRES ANALYSES

- Diffrentiation des mistelles et des vins de liqueur
doux (rvision par 377/2009)
OIV-MA-INT-00-2013
OIV-MA-AS323-04C
IV
OIV-MA-AS323-05
IV
OIV-MA-AS323-06
IV
OIV-MA-AS323-07
II
OIV-MA-AS323-08
II
OIV-MA-AS323-08
IV
OIV-MA-AS4-01
IV
OIV-MA-AS4-02A
IV
OIV-MA-AS4-02B
IV
OIV-MA-AS4-02C
IV
OIV-MA-AS4-02D
IV
OIV-MA-AS4-02E
IV
OIV-MA-AS4-02F
OIV-MA-AS4-03
IV
IV
OIV-MA-AS5-01

Table des matires
ANNEXE B - CERTIFICATS D'ANALYSE
- Rgles d'application des mthodes d'analyse

- Modles de certificats d'analyse
OIV-MA-B1-02
ANNEXE C - LIMITES MAXIMALES

ACCEPTABLES
- Limites maximales acceptables de divers lments
contenus dans le vin
OIV-MA-C1-01
OIV-MA-B1-01
ANNEXE D AVIS
- Acide gluconique (oeno 4/91)

OIV-MA-D1-01
- Caractrisation des vins issus du surpressurage (oeno
5/91)
OIV-MA-D1-02
- Teneur en ions chlorures et en ions sodium des vins

(oeno 6/91)
ANNEXE E ASSURANCE QUALITE DANS
LES LABORATOIRES
- Principe de validation (oeno 7/98)
- Etude collaborative
- Fidlit des mthodes (oeno 5/99)
- Protocole pour la planification, la conduite et
-
linterprtation des tudes de performance des

mthodes danalyse (oeno 6/2000)
Estimation limite de dtection et limite de
quantification (oeno 7/2000)
Contrle interne de qualit dans les laboratoires
d'analyse (oeno 19/2002)
Guide de validation (oeno 10/05)
Recommandations pour la validation par un seul
laboratoire (Oeno 8/05)
Recommandations sur lincertitude de mesure (Oeno
9/05)
Recommendations sur le taux de recouvrement
(392/2009)
ANNEXE F - METHODES SPECIFIQUES

POUR LANALYSE DU SUCRE DE RAISIN
(MOUTS DE RAISIN CONCENTRES
RECTIFIES
- Conductivit (Oeno 419A-2011)
Hydroxymethylfurfural (HMF) par la mthode par
- chromatographie liquide haute performance (Oeno
419A-2011)
OIV-MA-INT-00-2013
OIV-MA-D1-03
OIV-MA-AS1-05
OIV-MA-AS1-07
OIV-MA-AS1-08
OIV-MA-AS1-09
OIV-MA-AS1-10
OIV-MA-AS1-11
OIV-MA-AS1-12
OIV-MA-AS1-13
OIV-MA-AS1-14
OIV-MA-AS1-15
OIV-MA-F1-01
IV
OIV-MA-F1-02
IV

Table des matires
Dtermination du titre alcoomtrique volumique

acquis (TAV) des mouts concentres (MC) et du
sucre de raisin (mouts concentres rectifies, MCR)
(Oeno 419A-2011)
Saccharose (chromatographie liquide a haute
performance) (Oeno 419A-2011)
Acidit totale (Oeno 419A-2011)
pH (Oeno 419A-2011)
Dioxyde de soufre (Oeno 419A-2011)
Caractristiques chromatiques (Oeno 419A-2011)
Cations totaux (Oeno 419B-2012)
Mtaux lourds par ETAAS (Oeno 419B-2012)
Mtaux lourds par ICP-MS (Oeno 419B-2012)
OIV-MA-INT-00-2013
OIV-MA-F1-03
IV
OIV-MA-F1-04
OIV-MA-F1-05
OIV-MA-F1-06
OIV-MA-F1-07
OIV-MA-F1-08
OIV-MA-F1-09
OIV-MA-F1-10
OIV-MA-F1-11
IV
IV
IV
IV
IV
I
IV
IV
10

Avant-propos
Avant-propos
Le Recueil des mthodes internationales danalyse des vins a t publi pour la
premire fois en 1962. Il a t rdit en 1965, en 1972, en 1978, en 1990 et
nouveau en 2000, intgrant chaque fois les textes complmentaires approuvs par
lAssemble gnrale et tablis annuellement par la Sous-commission des
mthodes danalyse.
La prsente dition du Recueil des mthodes internationales danalyse des vins et
des mots comprend tous les textes approuvs par lAssemble gnrale des
reprsentants des gouvernements membres de lOIV, rviss et mis jour depuis
2000.
Le Recueil joue un grand rle pour lharmonisation des mthodes danalyse.
Beaucoup de pays viticoles ont introduit dans leur propre rglementation ses
dfinitions et ses mthodes.
Par ailleurs, certains accords bilatraux relatifs au commerce du vin reconnaissent
que les mthodes danalyse publies par lOIV, prvalent comme mthodes de
rfrence pour la dtermination de la composition analytique du vin dans le cadre
des operations de contrle.
Le rglement CE no 479/2008 prvoit que les mthodes danalyse permettant
dtablir la composition des produits relevant dudit rglement et les rgles
permettant dtablir si ces produits ont fait lobjet de traitements en violation des
pratiques nologiques autorises sont celles qui sont recommandes et publies
par lOIV dans le Recueil des mthodes internationales danalyse des vins et des
mots de lOIV. Dans le rglement CE no 606/2009 pour assurer une meilleure
transparence, il a t tabli de publier au niveau communautaire (Journal officiel de
lUnion europenne, srie C) la liste et la description des mthodes danalyses
dcrites dans le Recueil des mthodes internationales danalyse des vins et des
mots de lOIV qui sont applicables pour le contrle des produits vitivinicoles. De
cette faon lUE reconnat les mthodes qui font lobjet de ce Recueil, leur confre,
un caractre obligatoire dans tous les tats-membres et consacre la collaboration
troite qui sest tablie entre lUE et lOIV.
Ainsi, le Recueil, par son rle minent dans lharmonisation des mthodes
danalyse contribue faciliter les changes internationaux. Avec le Code
International des Pratiques Oenologiques et le Codex Oenologique International,
il constitue un ensemble dont lintrt scientifique, juridique et pratique est vident.
OIV-MA-INT-01
RECUEIL INTERNATIONAL DES METHODES DANALYSES OIV
Mode rdactionnel mthode danalyse OIV
MODE REDACTIONNEL DUNE METHODE DANALYSE OIV

extrait de la norme ISO 78-2:1999
1. Titre
2. Introduction
facultatif
3. Domaine dapplication
Cet article doit indiquer succinctement la mthode danalyse chimique et
notamment les produits auxquels elle sapplique.
4. Dfinition
5. Principe
Cet article facultatif indique les phases essentielles de la mthode utilise ainsi
que les principes de base.
6. Ractifs et produits
Cet article doit donner la liste ainsi que les caractristiques essentielles de tous
les ractifs et produits utiliss au cours de lessai et, au besoin, prciser leur
degr de puret.
Doivent tre indiqus :
les produits utiliss tels qu ils sont commercialiss
Les solutions concentration dfinie
solution titre
solution talon de rfrence
solution talon
solution tmoin
note chaque ractif achet ou prpar doit faire l'objet d'un alina numrot
7. Appareillage
Cet article doit numrer les noms et les caractristiques utiles de tous les
appareils et quipements qui doivent tre utiliss au cours de l analyse ou de
lessai.
OIV-MA-INT-04
8. Echantillonnage (Prparation de lchantillon)

Doivent tre indiques :
les procdures dchantillonnage
La prparation de lchantillon pour lessai
9. Mode opratoire
Chacune des oprations doit tre dcrite sans ambigut et de faon concise.
Cet article doit normalement comporter les paragraphes suivants :
Prise dessai (ce paragraphe doit donner tous les renseignements ncessaire
la prparation de la prise dessai partir de lchantillon pour essai.
Dosage(s), dtermination(s) ou essai(s) ( ce paragraphe doit tre dcrit avec
prcision pour faciliter la description, la comprhension et lapplication du
mode opratoire
Etalonnage (si ncessaire).
10. Calculs (Rsultats)
Cet article doit indiquer le mode de calcul des rsultats. Doivent tre prciss
les units, lquation utilise, la signification des symboles, le nombre de
dcimales donner dans les rsultats.
11. Fidlit (si validation interlaboratoire)
Les valeurs de fidlit doivent indiquer notamment :
Le nombre de laboratoire
Les valeurs moyenne de la concentration
Lcart type de rptabilit
Lcart type de reproductibilit
La rfrence du document contenant les rsultats publis des essais
interlaboratoires.
12. Annexes
Annexe relatifs la fidlit
Annexe relatives aux donnes statistiques et autres donnes obtenues partir
des rsultats des essais interlaboratoires.
13. Bibliographie
OIV-MA-INT-04

Annexe relative la fidlit
Cette annexe doit indiquer notamment

- les indications de la rptabilit
- les indications de la reproductibilit
Annexe relative aux donnes statistiques et autres donnes obtenues
partir des rsultats des essais interlaboratoires.
Les donnes statistiques et autres donnes drives des rsultats des
essais interlaboratoires peuvent figurer dans une annexe informative
Exemple de tableau donnant des rsultats statistiques
Il peut ne pas tre jug ncessaire de faire figurer toutes les donnes
prsentes dans le tableau, il est toutefois recommand de donner au
moins les donnes suivantes :
-
Le nombre de laboratoire
Les valeurs moyenne de la concentration en lment analyser
Lcart type de rptabilit
Lcart type de reproductibilit
La rfrence du document contenant les rsultats publis des
essais interlaboratoires
OIV-MA-INT-04
Annexe A
Mthodes dAnalyse des
vins et des mots
OIV-MA-ANNEXE-A

Remarques gnrales
Remarques gnrales
1/ Lanalyse physique et chimique doit tre faite sur du vin ou du mot limpide.
Si le vin ou le mot est trouble, il sera pralablement filtr sur papier en
entonnoir couvert ou centrifug en rcipient ferm. Mention de cette opration
devra figurer sur le certificat danalyse.
2/ La rfrence de la mthode employe pour chaque dtermination doit figurer
sur le certificat danalyse.
3/ Les units de mesure des diffrentes grandeurs (volume, masse, concentration,
temprature, pression, etc.) sont conformes aux recommandations de lUnion
internationale de chimie pure et applique (I.U.P.A.C.).
4/ En ce qui concerne les ractifs et solutions titres utilises, sauf prescription
contraire dans le texte, les produits chimiques employs sont de qualit pour
analyse et leau est de leau distille ou de puret quivalente.
5/ Les mthodes enzymatiques ainsi que la dtermination de plusieurs paramtres
reposent sur des mesures absolues dabsorbance, ce qui implique ltalonnage
des spectrophotomtres en longueurs donde et en absorbances au moyen de
solutions de rfrence commercialises.
6/ Les rfrences bibliographiques essentielles sont donnes. Les rfrences
relatives aux documents de travail de la Sous-Commission sont notes F.V.
O.I.V. (feuillets verts) suivies de lanne de publication et du numro du
document.
7/ Conformment la Rsolution ECO 3/2003, lAssemble Gnrale a dcid :
- de remplacer dans les codes, normes et textes apparents de lO.I.V. les

rfrences aux teneurs en sucres rducteurs , sucres rsiduels ou
sucres invertis par la rfrence la teneur glucose plus fructose et
de faire rfrence la mthode danalyse dcrite au Recueil International
des Mthodes dAnalyse ;
- de complter dans la Partie I Dfinition du Code International des
Pratiques nologiques (dition 2001), le texte du point 3.2 Dfinitions
relatives la teneur en sucre par la note de bas de page suivante : la
OIV-MA-AS1-02

Remarques gnrales
teneur en sucre est dtermine par la mthode danalyse glucose +

fructose dcrite au Recueil International des Mthodes dAnalyse ;
- de complter dans la Partie 3 Indications facultatives de la Norme
Internationale pour ltiquetage des vins , le texte du point 3.1.6. Type de
vin par la note suivante : la teneur en sucre est dtermine par la
mthode danalyse glucose + fructose dcrite au Recueil International
des Mthodes dAnalyse ;
et a recoomand aux Etats membres de lOIV dadapter leurs rfrences dans le
mme sens et que la dtermination glucose + fructose remplace la
dtermination des sucres rducteurs pour viter des distorsions dans la
classification des types de vins en fonction de leur teneur en sucre.
OIV-MA-AS1-02

Classification des mthodes d'analyse

(Rsolution oeno 9/2000)
TYPE I* (METHODE DE REFERENCE CRITERE) : Mthode qui dfinit une

valeur qu'il n'est possible d'tablir qu'aux termes de la mthode per se et qui est, par
dfinition, la seule utilise pour tablir la valeur accepte du paramtre mesur
(Titre alcoomtrique volumique, acidit totale, acidit volatile).
TYPE II* (METHODE DE REFERENCE) : une mthode de type II est celle que
l'on dsigne comme Mthode de Rfrence, lorsque les mthodes du type I ne sont
pas applicables. On devrait la choisir parmi les mthodes de type III (dfinies ciaprs). On devrait recommander son emploi dans les cas de litige et aux fins
d'talonnage (Potassium, acide citrique).
TYPE III* (METHODES DE REMPLACEMENT APPROUVEES) : les mthodes
de type III rpondent tous les critres dfinis par la Sous-Commission des
Mthodes d'Analyse aux fins de contrle, d'inspection ou de rglementation
(Glucose et fructose par voie enzymatique).
TYPE IV (METHODE PROVISOIRE) : une mthode de type IV est une mthode
traditionnelle ou encore une mthode d'application rcente, mais pour laquelle on
n'a pas encore dtermin les critres exigs par la Sous-Commission des Mthodes
d'Analyse (Recherche des colorants de synthse, mesure du potentiel
d'oxydorduction).
_______________
* Mthodes qui ncessitent la validation formelle selon les procdures en vigueur
la Sous-Commission des Mthodes d'Analyse
OIV-MA-AS1-03 : R2000

OIV-MA-AS1-03 : R2000

Effet matrice pour le dosage des mtaux par absorption atomique
Effet matrice pour le dosage des mtaux

par absorption atomique
LASSEMBLEE GENERALE,
Vu larticle 5, alina 4 de la Convention internationale dunification des mthodes
danalyse et dapprciation des vins du 13 octobre 1954,
Sur proposition de la Sous-Commission des mthodes internationales danalyse et
dapprciation des vins,
CONSIDERANT que les mthodes dcrites au Recueil international des mthodes
danalyse des vins et des mots avec utilisation des solutions de rfrence
concernent les vins secs,
ATTIRE lattention des utilisateurs sur le fait que des dviations peuvent tre
observes dans dautres cas : prsence de sucres ou de drivs des sucres,
DECIDE quil sera alors ncessaire de procder la mesure en utilisant la mthode
des ajouts doss. Au minimum, trois aliquotes de l'chantillon contenant des ajouts
diffrents devront tre mis en oeuvre.
DECIDE de complter les mthodes danalyse des mtaux (fer, plomb, zinc,
argent, cadmium) et de larsenic par la description de la technique des ajouts
doss, lorsque l'effet matrice la rend ncessaire.
OIV-MA-AS1-04 : R2000

Masse volumique et densit relative 20C Mthodes Type I
Mthode OIV-MA-AS2-01A
Mthodes Type I
Masse volumique et densit relative 20 C

1. Dfinition
La masse volumique est le quotient de la masse d'un certain volume de vin ou de
mot 20 C par ce volume. Elle s'exprime en grammes par millilitre et son
symbole est 20 C.
La densit relative 20 C ou densit 20 C/20 C est le rapport exprim en
nombre dcimal, de la masse volumique du vin ou de mot 20 C la masse
20C
volumique de leau la mme temprature. Son symbole est : d20
C
2. Principe des mthodes

La masse volumique et la densit relative 20 C sont dtermines sur l'chantillon
pour essai :
A. soit par pycnomtrie,
B. Soit par densimtrie lectronique utilisant un rsonateur de flexion
C. Soit par densimtrie utilisant la balance hydrostatique
Remarque : Pour les dterminations trs prcises, la masse volumique doit tre
corrige de l'action du dioxyde de soufre.
20
20
'20
S
=
=
=
=
'20 - 0.0006 x S
masse volumique corrige
masse volumique observe
dioxyde de soufre total en g/l
3. Traitement pralable de l'chantillon

Si le vin ou le mot contient des quantits notables de dioxyde de carbone, en
chasser la plus grande quantit par agitation de 250 ml de vin dans un flacon de
1000 ml, ou par filtration sous pression rduite sur 2 g de coton plac dans une
allonge.
OIV-MA-AS2-01A : R2012

4. Masse volumique 20 C et densit relative 20 C par pycnomtrie

(Mthode de type I)
4.1. Appareillage
Matriel courant de laboratoire, et notamment :
4.1.1. Pycnomtre, en verre pyrex de 100 ml de capacit environ avec un
thermomtre mobile rodage meri gradu par dixime de degr de 10 30 C.
Ce thermomtre doit tre contrl (fig. 1).
Tout pycnomtre de caractristiques quivalentes peut tre employ.
FIGURE 1: Pycnomtre et son flacon tare
Ce pycnomtre comporte un tube latral de 25 mm de longueur, de 1 mm au

plus de diamtre intrieur, termin par une partie conique rode. Ce tube latral
peut tre coiff par un bouchon rcepteur constitu par un tube conique rod,
termin par une partie effile. Ce bouchon sert de chambre de dilatation.
Les deux rodages de l'appareil doivent tre faits avec un trs grand soin.

4.1.2 . Flacon tare de mme volume extrieur ( moins de 1 ml prs) que le

pycnomtre et de masse gale la masse du pycnomtre plein d'un liquide de
densit 1,01 [solution 2 pour 100 (m/v) de chlorure de sodium 2 p. 100, m/v).
Enceinte calorifuge s'adaptant exactement au corps du pycnomtre.
4.1.3. Balance deux plateaux, sensible au dixime de milligramme
ou
balance monoplateau, sensible au dixime de milligramme.
4.2. talonnage du pycnomtre
L'talonnage du pycnomtre comporte la dtermination des caractristiques
suivantes :
- tare vide,
- volume 20 C,
- masse en eau 20 C.
4.2.1. Utilisation d'une balance deux plateaux

Le flacon tare tant plac sur le plateau de gauche de la balance et le
pycnomtre propre et sec muni de son bouchon rcepteur sur le plateau droit,
raliser l'quilibre en plaant ct du pycnomtre des masses marques : soit
p grammes.
Remplir avec soin le pycnomtre avec de l'eau distille la temprature
ambiante, mettre en place le thermomtre ; essuyer soigneusement le
pycnomtre et le placer dans l'enceinte calorifuge ; agiter par retournement
jusqu' ce que la temprature lue sur le thermomtre soit constante. Affleurer
exactement au bord suprieur du tube latral. Essuyer ce tube latral, placer le
bouchon rcepteur ; lire la temprature t C avec soin et la corriger
ventuellement de l'inexactitude de l'chelle du thermomtre. Peser le
pycnomtre plein d'eau, soit p la masse en grammes qui ralise l'quilibre.
Calculs : *
Tare du pycnomtre vide :
Tare vide = p + m
m = masse d'air contenue dans le pycnomtre
m = 0,0012 (p- p).
Volume 20 C :
V20 C = (p + m - p') x Ft
Ft = facteur relev dans la table I pour la temprature t C
V20 C doit tre connu 0.001 ml prs
Masse en eau 20 C :

M20 C = V20 C x 0,998203

0.998203 = masse volumique de leau 20 C.
4.2.2. Utilisation dune balance monoplateau
Dterminer :
- la masse du pycnomtre propre et sec : P
- la masse du pycnomtre plein d'eau t C : P1 en suivant les indications
dcrites en 4.2.1
- la masse du flacon tare T0
Calculs *
Tare du pycnomtre vide :
Tare vide : P m
m = masse d'air contenue dans le pycnomtre
m = 0,0012 (P1 - P).
Volume 20 C :
V20 C = [P1 - (P - m)] x Ft
Ft = facteur relev dans la table I pour la temprature t C
V20 C doit tre connu 0.001 ml prs.
Masse en eau 20 C :
M20 C = V20 C x 0,998203
0,998203 = masse volumique de leau 20 C.
4.3. Technique d'une mesure : *
4.3.1. Utilisation d'une balance deux plateaux
Peser le pycnomtre plein de l'chantillon prpar pour essais (3) en suivant les
indications dcrites en 4.2.1.
Soit p" la masse en grammes qui ralise l'quilibre t C.
Masse du liquide contenu dans le pycnomtre = p + m - p"
Masse volumique apparente t C :
t oC =
p + m p
V 20oC
Calculer la masse volumique 20 C l'aide d'une des tables de correction ciaprs, suivant la nature du liquide tudi : vin sec (table II), mot naturel ou
concentr (table III), vin doux (table IV).
On exprime la densit 20 C/20 C du vin en divisant la masse volumique
20 C par 0,998203.
* Un exemple numrique est donn en annexe


4.3.2. Utilisation d'une balance monoplateau *

Peser le flacon tare, soit T1 sa masse
Calculer dT = T1 To
Masse du pycnomtre vide au moment de la mesure = P - m + dT
Peser le pycnomtre plein de l'chantillon prpar pour essais en suivant les
indications dcrites en 4.2.1.
Soit P2 sa masse t C.
Masse du liquide contenu dans le pycnomtre t C = P2 (P - m + dT)
Masse volumique apparente t C :
t C =
P2 (P m + dT )
V 20C
Calculer la masse volumique 20 C du liquide tudi : vin sec, mot naturel et

concentr, vin doux, comme il est indiqu en 4.3.1.
La densit 20 C/20 C est obtenue en divisant la masse volumique 20 C par
0,998203.
4.3.3. Rptabilit sur la masse volumique :
pour les vins secs et moelleux : r = 0,00010
pour les vins doux : r = 0,00018
4.3.4. Reproductibilit sur la masse volumique :
pour les vins secs et moelleux : R = 0,00037
pour les vins doux : R = 0,00045.
5. Masse volumique 20 C et densit relative 20 C

mesures par densimtrie lectronique utilisant un
rsonateur de flexion
5.1 Principe
La masse volumique du vin est mesure par densimtrie lectronique utilisant un
rsonateur de flexion. Le principe consiste mesurer la priode doscillation dun
tube contenant lchantillon soumis une excitation lectromagntique. La masse
volumique est lie la priode doscillation par la formule suivante :
C M

2
4 V V
= T 2
(1)

= masse volumique de lchantillon

T = priode de vibration induite
M = masse du tube vide
C = constante de rappel
V = volume de lchantillon en vibration
Cette relation est de la forme, = A T2 B(2), il existe donc une relation linaire
entre la masse volumique et la priode leve au carr. Les constantes A et B sont
spcifiques pour chaque oscillateur et sont estimes en mesurant la priode de
fluides de masse volumique connue.
5.2. Appareillage
5.2.1. Densimtre lectronique rsonateur de flexion
Le densimtre lectronique comporte les lments suivants :
- une cellule de mesure comportant le tube de mesure et un contrleur de
temprature,
- un systme de mise en oscillation du tube et de mesure de la priode doscillation,
- une horloge,
- un afficheur numrique et ventuellement un calculateur.
Le densimtre est plac sur un support parfaitement stable et isol de toutes
vibrations.
5.3. Ractifs et produits
5.3.1 Fluides de rfrence
Deux fluides de rfrence servent ajuster le densimtre. Les masses volumiques
des fluides de rfrence doivent inclure celles des vins mesurer. Un cart de
masse volumique entre les fluides de rfrence suprieur 0,01000 g/ml est
recommand. Leur masse volumique doit tre connue avec une incertitude
infrieure +/- 0,00005 g/ml, pour une temprature de 20,00 +/- 0,05 C.
Les fluides de rfrence pour la mesure de la masse volumique des vins par
densimtre lectronique, sont :
- lair sec (non pollu),
- leau bi-distille ou de puret analytique quivalente,
- des solutions hydroalcooliques ou des vins de masse volumique
dtermine par pycnomtrie,

- des solutions raccordes aux talons nationaux de viscosit infrieure 2

mm2/s.
5.3.2 Produits de nettoyage et de schage
- dtergents, acides, etc.
- solvants organiques : thanol 96 % vol., actone pure, etc.
5.4 Contrle et calibration de lappareil
5.4.1 Contrle de la temprature de la cellule de mesure
Le tube de mesure est situ dans un dispositif thermostat. La variation de la
temprature doit tre infrieure +/- 0,02 C.
Lorsque le densimtre le permet, il est ncessaire de contrler la temprature de la
cellule de mesure car celle-ci influence fortement les rsultats des dterminations.
La masse volumique dune solution hydroalcoolique de titre alcoomtrique
volumique (TAV) 10 % vol. est de 0,98471 g/ml 20C et de 0,98447 g/ml
21C, soit un cart de 0,00024 g/ml.
La temprature dessai est de 20 C. La mesure de la temprature dans la cellule est
ralise avec un thermomtre dune rsolution de moins de 0,01C et raccord aux
talons nationaux. Il convient de garantir une mesure de temprature dincertitude
infrieure +/- 0,07C.
5.4.2 Calibration de lappareil
Lappareil doit tre calibr avant sa premire utilisation, puis tous les six mois ou si
la vrification ne donne pas satisfaction. Lobjectif est dutiliser deux fluides de
rfrence pour calculer les constantes A et B (cf. (2)). Pour la ralisation de la
calibration, se rfrer au mode demploi de lappareil. En principe cette calibration
est effectue avec de lair sec (tenir compte de la pression atmosphrique) et de
leau trs pure (bi-distille et/ou microfiltre de rsistivit trs leve, par exemple
> 18 M.cm).
5.4.3 Vrification de la calibration
Pour vrifier la calibration, on mesure la masse volumique des fluides de

rfrence.
- Chaque jour, une vrification de la masse volumique de lair est ralise. Un
cart entre la masse volumique thorique et celle observe suprieur
0,00008 g/ml peut indiquer que le tube est encrass. Il faut alors le nettoyer.
Aprs nettoyage, on vrifie nouveau la masse volumique de lair, si cette
vrification nest pas concluante, il faut ajuster lappareil.
- On vrifie galement la masse volumique de leau ; si lcart entre la masse
volumique thorique et celle observe est suprieur 0,00008 g/ml, on ajuste
lappareil.

Si la vrification de la temprature de la cellule est difficile, il est

possible de vrifier directement la masse volumique dune solution
hydroalcoolique dont la masse volumique est comparable celle des
vins analyss.
5.4.4 Contrle
Lorsque la diffrence entre la masse volumique thorique d'une solution de
rfrence (connue avec une incertitude de +/- 0,00005 g/ml) et la mesure est
suprieure 0,00008 g/ml il est ncessaire de vrifier ltalonnage de lappareil.
5.5 Mode opratoire
Loprateur sassure de la stabilit de la temprature de la cellule de mesure. Le vin
dans la cellule du densimtre ne doit pas contenir de bulles de gaz et doit tre
homogne. Si lon dispose dun systme dclairage qui permet de vrifier
labsence de bulles, lteindre rapidement aprs la vrification car la chaleur
gnre par la lampe influe sur la temprature de mesure.
Si lappareil ne donne que la priode, on calcule la masse volumique grce aux
constantes A et B (voir la notice de lappareil).
5.6 Paramtres de prcision de la mthode de mesure de la masse volumique
par le rsonateur de flexion
n
3800
min
0,99187
max
1,01233
0.00011
r%
0.011
sr
0,000038
0,00025
sR
0,000091
R%
0,025
Lgende :
n : nombre de valeurs retenues
min : limite infrieure de la plage de mesure
max : limite suprieure de la plage de mesure
r : rptabilit
sr : cart-type de rptabilit
r% : rptabilit relative (sr x 100 / valeur moyenne)
R : reproductibilit

sR : cart-type de reproductibilit
R% : reproductibilit relative (sR x 100 / valeur moyenne)
6. Masse volumique 20 C et densit relative 20 C

mesures par la balance hydrostatique
6.1 Principe
La masse volumique des vins peut tre mesure par densimtrie avec une balance
hydrostatique suivant le principe d'Archimde selon lequel tout corps plong dans
un fluide subit une pousse verticale, dirige de bas en haut, gale au poids du
fluide dplac.
6.2 Appareillage et matriel
Appareillage de laboratoire courant, et notamment :

6.2.1
Balance hydrostatique monoplateau d'une sensibilit de 1 mg.
6.2.2 Flotteur d'un volume d'au moins 20 ml, spcialement adapt la balance,
suspendu par un fil d'un diamtre infrieur ou gal 0,1 mm.
6.2.3 prouvette cylindrique comportant un repre de niveau. Le flotteur doit
pouvoir rentrer entirement dans le volume de l'prouvette situ au-dessous du
repre; la surface du liquide ntant traverse que par le fil de suspension.
L'prouvette cylindrique doit avoir un diamtre intrieur suprieur d'au moins 6
mm celui du flotteur.
6.2.4 Thermomtre (ou sonde de mesure de la temprature) gradu en degrs et
diximes de degr, de 10 40 C, talonn 0,06 C prs.
6.2.5
Poids talonns par un organisme de certification reconnu.
6.3 Ractifs
Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, n'utiliser que des ractifs de qualit
analytique reconnue et de l'eau au minimum de classe 3, rpondant la dfinition
de la norme ISO 3696:1987.
6.3.1 Solution de lavage du flotteur (hydroxyde de sodium, 30 % m/v).
Pour prparer une solution de 100 ml, peser 30 g d'hydroxyde de sodium et porter
au volume l'aide d'thanol 96 % vol.

6.4 Mode opratoire

Entre chaque mesure, le flotteur et l'prouvette doivent tre nettoys l'eau
distille, essuys avec un papier de laboratoire doux ne perdant pas ses fibres et
rincs avec la solution dont la masse volumique est dterminer. Les mesures
doivent tre effectues lorsque l'appareil est stabilis afin de minimiser les pertes
d'alcool par vaporation.
6.4.1 talonnage de la balance
Bien que les balances soient gnralement pourvues d'un systme d'talonnage
interne, la balance hydrostatique doit pouvoir tre talonne avec des poids
contrls par un organisme de certification officiel.
6.4.2 talonnage du flotteur
Remplir l'prouvette cylindrique jusqu'au repre avec de l'eau bidistille (ou d'une
puret quivalente, par exemple de l'eau microfiltre d'une conductivit de 18,2
M.cm), dont la temprature sera comprise entre 15 et 25 C, mais se situera de
prfrence 20 C.
Plonger le flotteur et le thermomtre dans le liquide, agiter, lire la masse volumique
du liquide sur l'appareil et, si ncessaire, corriger cette lecture pour qu'elle soit
gale celle de l'eau la temprature de la mesure.
6.4.3 Contrle l'aide d'une solution de masse volumique connue
Remplir l'prouvette cylindrique jusqu'au repre avec une solution de masse
volumique connue, dont la temprature sera comprise entre 15 et 25 C, mais se
situera de prfrence 20 C.
du liquide sur l'appareil ; noter la masse volumique et la temprature si la masse
volumique est mesure t C ( t)
6.4.4 Si ncessaire, corriger l'aide de la table des masses
t des m
langes
hydroalcooliques [table II de l'annexe II du recueil des mthodes d'analyse de
l'OIV.
La masse volumique ainsi tablie doit tre identique celle qui est connue.
Remarque 2 : cette solution de masse volumique connue peut galement
remplacer l'eau bidistille pour l'talonnage du flotteur.
6.4.5 Mesure de la masse volumique d'un vin
Verser l'chantillon pour essai dans l'prouvette cylindrique jusqu'au repre de
niveau.
10


du liquide sur l'appareil. Noter la temprature si la masse volumique est mesure t
C ( t).
Corriger l'aide de la table des masses t des mlanges hydroalcooliques [table
II de l'annexe II du recueil des mthodes d'analyse de l'OIV].
6.4.6 Nettoyage du flotteur et de l'prouvette cylindrique.
Plonger le flotteur dans la solution de lavage verse dans l'prouvette.
Laisser tremper une heure en tournant le flotteur rgulirement.
Rincer abondamment l'eau du robinet, puis l'eau distille.
Essuyer avec un papier de laboratoire doux ne perdant pas ses fibres.
Raliser ces oprations lors de la premire utilisation du flotteur, puis
rgulirement ds que ncessaire.
6.5 Paramtres de prcision pour la mesure de la masse volumique par la
balance hydrostatique
n
4347
min
0,99189
max
r
1,01229
0,00025
sr
0,000090
r%
0,025
0,00067
sR
0,00024
R%
0,067
Lgende :
n : nombre de valeurs retenues
min : limite infrieure de la plage de mesure
max : limite suprieure de la plage de mesure
r : rptabilit
sr : cart-type de rptabilit
r% : rptabilit relative (sr x 100 / valeur moyenne)
R : reproductibilit
sR : cart-type de reproductibilit
R% : reproductibilit relative (sR x 100 / valeur moyenne)
11

6.6 Comparaison des rsultats pour les mthodes de mesure de la masse

volumique par le rsonateur de flexion et la balance hydrostatique
partir d'chantillons dont la masse volumique est comprise entre 0,992 et 1,012
g/ml, il a t procd la mesure de la rptabilit et de la reproductibilit lors
dun essai inter laboratoire. Une comparaison a t effectue entre la masse
volumique de diffrents chantillons mesurs par la balance hydrostatique et par le
densimtre lectronique, incluant les valeurs de rptabilit et de reproductibilit
drives des essais d'intercomparaison pluriannuels effectus sur une grande
chelle.
6.6.1 chantillons
Des vins de diffrentes masses volumiques et titres alcoomtriques prpars
mensuellement une chelle industrielle, tirs d'un stock de bouteilles conserves
dans des conditions normales, et fournis de manire anonyme aux laboratoires.
6.6.2 Laboratoires
Laboratoires participant aux essais mensuels organiss par Unione Italiana Vini
(Vrone, Italie) d'aprs la rglementation ISO 5725 (UNI 9225) et le
International Protocol of Proficiency test for chemical analysis laboratories
tabli par l'AOAC, l'ISO et l'IUPAC, et d'aprs les lignes directrices ISO 43 et
ILAC G13. Un rapport annuel est fourni par lorganisation cite tous les
participants.
6.6.3 Appareils
6.6.3.1 Une balance hydrostatique lectronique (dont la prcision permet de donner
la 5me dcimale), si possible quipe d'un appareil de traitement de donnes.
6.6.3.2 Un densimtre lectronique, quip si possible d'un chantillonneur
automatique.
6.6.4 Analyses
D'aprs les rgles de validation des mthodes d'analyse, chaque chantillon est
analys deux fois conscutives pour dterminer le titre alcoomtrique.
6.6.5 Rsultats
Le tableau 1 montre les rsultats des mesures obtenues par les laboratoires utilisant
une balance hydrostatique.
Le tableau 2 montre les rsultats obtenus par les laboratoires utilisant un
densimtre lectronique.
12

6.6.6 Evaluations des rsultats

6.6.6.1 Les rsultats des essais ont t examins pour mettre en vidence l'erreur
systmatique individuelle (p < 0,025) en utilisant successivement les tests de
Cochran et de Grubbs, selon les procdures internationalement acceptes dcrites
dans le Protocol for the Design, Conduct and Interpretation of MethodPerformance Studies (protocole pour la conception, la conduite et l'interprtation
des tudes de performance des mthodes).
6.6.6.2 Rptabilit (r) et reproductibilit (R)
Les calculs de rptabilit (r) et reproductibilit (R) dfinies par le protocole ont
t effectus sur les rsultats restant aprs limination des valeurs aberrantes. Lors
de l'valuation d'une nouvelle mthode, il est frquent qu'il n'existe pas de mthode
de rfrence valide ou de mthode statutaire pour comparer les critres de
prcision ; pour comparer les donnes de prcision obtenues lors des essais
collaboratifs on se rfre donc des niveaux de prcision estims . Ces niveaux
estims sont calculs d'aprs la formule d'Horwitz. La comparaison des
rsultats d'essais et les niveaux prvus indiquent si la mthode est suffisamment
prcise pour le niveau d'analyte mesur. La valeur prdite d'Horwitz est calcule
par la formule d'Horwitz.
RSDR = 2(1-0,5 log C)
o C est la concentration mesure d'analyte exprime en dcimales (par ex. 1 g/100
g = 0,01).
La valeur Horrat donne une comparaison de la prcision actuelle dtermine avec
la prcision prdite par la formule d'Horwitz pour la mthode et au niveau
particulier de concentration de l'analyte ; elle est calcule comme suit :
HoR = RSDR(mesure)/RSDR(Horwitz)
6.6.6.3 Prcision inter laboratoires
Une valeur Horrat de 1 indique normalement une prcision inter laboratoires
satisfaisante, alors qu'une valeur suprieure 2 indique normalement une prcision
non satisfaisante, i.e. une prcision trop variable pour des raisons analytiques ou
quand la variation obtenue est plus leve que celle estime pour la mthode
employe. Hor est aussi calcul et utilis pour dterminer la prcision intra
laboratoire en utilisant l'approximation suivante :
RSDr(Horwitz) = 0,66 RSDR(Horwitz) (ce qui suppose l'approximation suivante: r
= 0,66 R)
Le tableau 3 montre les diffrences entre les mesures obtenues par les laboratoires
utilisant le densimtre lectronique et ceux utilisant la balance hydrostatique.
6.6.6.4 Paramtres de prcision
13

Le tableau 4 montre la moyenne gnrale des paramtres de prcision calcule

partir de tous les essais mensuels qui se sont drouls entre janvier 2008 et
dcembre
2010.
14
chantill
on
Moyenne
Valeurs
totales
Valeurs
retenues
rptabilit
sr
RSDr
Hor
Reproductibili
t
sR
RSDRcalc
HoR
01/08
02/08
03/08
04/08
05/08
06/08
07/08
08/08
09/08
10/08
11/08
01/09
02/09
03/09
04/09
05/09
06/09
07/09
08/09
09/09
10/09
11/09
01/10
02/10
03/10
04/10
05/10
06/10
07/10
08/10
09/10
10/10
11/10
0,995491
1,011475
0,992473
0,993147
1,004836
0,993992
0,992447
0,992210
1,002600
0,994482
0,992010
0,994184
0,992266
0,991886
0,993632
1,011061
0,992063
0,992708
0,993064
1,005285
0,992905
0,994016
0,994734
0,993177
0,992799
0,995420
1,002963
0,992546
0,992831
0,993184
1,012293
0,992289
0,994649
130
146
174
172
150
152
162
162
148
174
136
174
118
164
180
116
114
172
136
118
150
142
170
120
148
172
120
120
174
144
114
154
130
120
125
161
155
138
136
150
151
131
152
125
152
101
135
150
100
105
155
127
110
132
127
152
110
136
157
108
113
152
130
103
136
112
0,0001701
0,0004714
0,0001470
0,0002761
0,0001882
0,0001486
0,0002660
0,0002619
0,0001093
0,0001228
0,0000909
0,0001655
0,0001742
0,0001850
0,0001523
0,0003659
0,0002923
0,0002892
0,0002926
0,0002946
0,0002234
0,0001896
0,0002125
0,0002210
0,0002277
0,0002644
0,0007086
0,0001737
0,0003003
0,0001799
0,0002265
0,0006386
0,0002902
0,0000607
0,0001684
0,0000525
0,0000986
0,0000672
0,0000531
0,0000950
0,0000935
0,0000390
0,0000439
0,0000325
0,0000591
0,0000622
0,0000661
0,0000544
0,0001307
0,0001044
0,0001033
0,0001045
0,0001052
0,0000798
0,0000677
0,0000759
0,0000789
0,0000813
0,0000944
0,0002531
0,0000620
0,0001073
0,0000642
0,0000809
0,0002281
0,0001036
0,0061016
0,0166457
0,0052898
0,0099274
0,0066905
0,0053391
0,0095709
0,0094281
0,0038920
0,0044105
0,0032742
0,0059435
0,0062682
0,0066603
0,0054754
0,0129234
0,0105238
0,0104040
0,0105224
0,0104661
0,0080358
0,0068114
0,0076288
0,0079467
0,0081923
0,0094866
0,0252330
0,0062506
0,0108031
0,0064674
0,0079907
0,0229860
0,0104200
0,0046193
0,0126320
0,0040029
0,0075130
0,0050723
0,0040411
0,0072424
0,0071341
0,0029496
0,0033385
0,0024775
0,0044987
0,0047431
0,0050395
0,0041440
0,0098067
0,0079631
0,0078732
0,0079632
0,0079352
0,0060812
0,0051555
0,0057748
0,0060140
0,0061995
0,0071819
0,0191244
0,0047300
0,0081753
0,0048945
0,0060647
0,0173933
0,0078876
0,0005979
0,0008705
0,0004311
0,0005446
0,0007495
0,0005302
0,0006046
0,0006309
0,0007000
0,0004250
0,0004256
0,0005439
0,0005210
0,0004781
0,0004270
0,0008338
0,0005257
0,0006156
0,0007520
0,0007226
0,0004498
0,0004739
0,0005406
0,0005800
0,0015157
0,0006286
0,0013667
0,0005435
0,0006976
0,0005951
0,0014586
0,0007033
0,0005287
0,0002135
0,0003109
0,0001540
0,0001945
0,0002677
0,0001894
0,0002159
0,0002253
0,0002500
0,0001518
0,0001520
0,0001942
0,0001861
0,0001707
0,0001525
0,0002978
0,0001877
0,0002199
0,0002686
0,0002581
0,0001607
0,0001693
0,0001931
0,0002071
0,0005413
0,0002245
0,0004881
0,0001941
0,0002492
0,0002125
0,0005209
0,0002512
0,0001888
0,0214502
0,0307366
0,0155140
0,0195839
0,0266373
0,0190506
0,0217575
0,0227108
0,0249341
0,0152645
0,0153217
0,0195384
0,0187534
0,0172136
0,0153476
0,0294527
0,0189240
0,0221478
0,0270446
0,0256704
0,0161803
0,0170278
0,0194104
0,0208565
0,0545262
0,0225542
0,0486677
0,0195567
0,0250959
0,0213984
0,0514596
0,0253124
0,0189830
0,0107178
0,0153947
0,0077482
0,0097818
0,0133283
0,0095167
0,0108664
0,0113420
0,0124719
0,0076259
0,0076516
0,0097606
0,0093658
0,0085963
0,0076664
0,0147508
0,0094507
0,0110617
0,0135081
0,0128454
0,0080815
0,0085062
0,0096975
0,0104175
0,0272335
0,0112693
0,0243447
0,0097673
0,0125344
0,0106882
0,0257772
0,0126415
0,0094838
n
rpt
.
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
CrD95
0,0004141
0,0005686
0,0002959
0,0003595
0,0005215
0,0003675
0,0004063
0,0004265
0,0004919
0,0002942
0,0002975
0,0003756
0,0003580
0,0003251
0,0002922
0,0005605
0,0003418
0,0004106
0,0005112
0,0004892
0,0002978
0,0003214
0,0003672
0,0003950
0,0010657
0,0004244
0,0008991
0,0003744
0,0004699
0,0004111
0,0010251
0,0003812
0,0003445

OIV-MA-AS2-01A
Tableau 1 : Balance hydrostatique (BH)
15
chantillon
01/08
02/08
03/08
04/08
05/08
06/08
07/08
08/08
09/08
10/08
11/08
01/09
02/09
03/09
04/09
05/09
06/09
07/09
08/09
09/09
10/09
11/09
01/10
02/10
03/10
04/10
05/10
06/10
07/10
08/10
09/10
10/10
11/10
Moyenne
0,995504
1,011493
0,992491
0,993129
1,004892
0,994063
0,992498
0,992270
1,002603
0,994493
0,992017
0,994216
0,992251
0,991875
0,993654
1,011035
0,992104
0,992720
0,993139
1,005276
0,992912
0,994031
0,994752
0,993181
0,992665
0,995502
1,002851
0,992607
0,992871
0,993235
1,012328
0,992308
0,994683
Valeurs
retenues
108
125
118
120
116
123
125
115
121
117
104
131
88
108
114
104
106
140
102
108
111
118
136
98
127
128
119
99
150
93
105
115
108
rptabilit
0,0000755
0,0001921
0,0000746
0,0001230
0,0000926
0,0000558
0,0000822
0,0000515
0,0000821
0,0000667
0,0000842
0,0000830
0,0000947
0,0001271
0,0001166
0,0002388
0,0001005
0,0001579
0,0001175
0,0001100
0,0000705
0,0000718
0,0000773
0,0001471
0,0001714
0,0001175
0,0001195
0,0001228
0,0001438
0,0000895
0,0000870
0,0000606
0,0001127
sr
0,0000270
0,0000686
0,0000266
0,0000439
0,0000331
0,0000199
0,0000294
0,0000184
0,0000293
0,0000238
0,0000301
0,0000297
0,0000338
0,0000454
0,0000416
0,0000853
0,0000359
0,0000564
0,0000420
0,0000393
0,0000252
0,0000256
0,0000276
0,0000525
0,0000612
0,0000419
0,0000427
0,0000438
0,0000513
0,0000320
0,0000311
0,0000216
0,0000402
RSDr
0,0027085
0,0067837
0,0026830
0,0044247
0,0032893
0,0020051
0,0029576
0,0018537
0,0029236
0,0023954
0,0030309
0,0029832
0,0034097
0,0045777
0,0041899
0,0084361
0,0036178
0,0056815
0,0042242
0,0039070
0,0025365
0,0025784
0,0027765
0,0052893
0,0061683
0,0042138
0,0042555
0,0044172
0,0051712
0,0032182
0,0030692
0,0021811
0,0040450
Hor
0,0020505
0,0051480
0,0020303
0,0033486
0,0024937
0,0015177
0,0022381
0,0014027
0,0022157
0,0018132
0,0022933
0,0022580
0,0025801
0,0034637
0,0031711
0,0064016
0,0027375
0,0042995
0,0031969
0,0029622
0,0019195
0,0019516
0,0021017
0,0040029
0,0046678
0,0031901
0,0032253
0,0033427
0,0039134
0,0024356
0,0023295
0,0016504
0,0030620
Reproductibilit
0,0001571
0,0004435
0,0002745
0,0002863
0,0004777
0,0001776
0,0002094
0,0001665
0,0003328
0,0001429
0,0001962
0,0001551
0,0002846
0,0002067
0,0002043
0,0003554
0,0003169
0,0002916
0,0003603
0,0003522
0,0002122
0,0001639
0,0001787
0,0001693
0,0002378
0,0002320
0,0002971
0,0002226
0,0003732
0,0002458
0,0003395
0,0001635
0,0001597
sR
0,0000561
0,0001584
0,0000980
0,0001023
0,0001706
0,0000634
0,0000748
0,0000595
0,0001189
0,0000510
0,0000701
0,0000554
0,0001017
0,0000738
0,0000730
0,0001269
0,0001132
0,0001042
0,0001287
0,0001258
0,0000758
0,0000585
0,0000638
0,0000605
0,0000849
0,0000829
0,0001061
0,0000795
0,0001333
0,0000878
0,0001213
0,0000584
0,0000570
RSDRcalc
0,0056361
0,0156582
0,0098776
0,0102965
0,0169785
0,0063791
0,0075368
0,0059940
0,0118565
0,0051309
0,0070644
0,0055712
0,0102451
0,0074421
0,0073417
0,0125542
0,0114088
0,0104923
0,0129577
0,0125134
0,0076315
0,0058883
0,0064144
0,0060884
0,0085559
0,0083248
0,0105815
0,0080092
0,0134258
0,0088399
0,0119781
0,0058845
0,0057339
HoR
0,0028162
0,0078426
0,0049332
0,0051429
0,0084955
0,0031867
0,0037641
0,0029935
0,0059306
0,0025633
0,0035279
0,0027832
0,0051165
0,0037165
0,0036673
0,0062875
0,0056976
0,0052404
0,0064721
0,0062617
0,0038117
0,0029415
0,0032046
0,0030410
0,0042732
0,0041596
0,0052930
0,0040001
0,0067057
0,0044154
0,0060001
0,0029388
0,0028647
n
rpt.
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
CrD95
0,0001045
0,0002985
0,0001905
0,0001929
0,0003346
0,0001224
0,0001423
0,0001149
0,0002318
0,0000954
0,0001322
0,0001015
0,0001956
0,0001316
0,0001322
0,0002211
0,0002184
0,0001905
0,0002479
0,0002429
0,0001458
0,0001102
0,0001203
0,0000945
0,0001447
0,0001532
0,0002014
0,0001449
0,0002539
0,0001680
0,0002361
0,0001116
0,0000979
16

OIV-MA-AS2-01A
Tableau 2 : Densimtre lectronique (DE)

Valeurs
totales
114
132
138
132
136
142
136
130
136
128
118
148
104
126
134
128
116
144
110
112
122
128
144
108
140
142
130
106
160
104
112
128
120

Tableau 3 : Comparaison des rsultats entre la balance hydrostatique (BH) et la

densimtrie lectronique (DE)
Masse volumique - Balance hydrostatique
Valeur
Valeurs
Valeurs
moyenne
totales
retenues
chantillon
Masse volumique - Rsonateur de flexion

Valeur
Valeurs
Valeurs
moyenne
totales
retenues
chantillon
Comparaison
(Bi-DE)
01/08
0,995491
130
120
01/08
0,995504
114
108
-0,000013
02/08
1,011475
146
125
02/08
1,011493
132
125
-0,000018
03/08
0,992473
174
161
03/08
0,992491
138
118
-0,000018
04/08
0,993147
172
155
04/08
0,993129
132
120
0,000018
05/08
1,004836
150
138
05/08
1,004892
136
116
-0,000056
06/08
0,993992
152
136
06/08
0,994063
142
123
-0,000071
07/08
0,992447
162
150
07/08
0,992498
136
125
-0,000051
08/08
0,992210
162
151
08/08
0,992270
130
115
-0,000060
09/08
1,002600
148
131
09/08
1,002603
136
121
-0,000003
10/08
0,994482
174
152
10/08
0,994493
128
117
-0,000011
11/08
0,992010
136
125
11/08
0,992017
118
104
-0,000007
01/09
0,994184
174
152
01/09
0,994216
148
131
-0,000031
02/09
0,992266
118
101
02/09
0,992251
104
88
0,000015
03/09
0,991886
164
135
03/09
0,991875
126
108
0,000011
04/09
0,993632
180
150
04/09
0,993654
134
114
-0,000022
05/09
1,011061
116
100
05/09
1,011035
128
104
0,000026
06/09
0,992063
114
105
06/09
0,992104
116
106
-0,000041
07/09
0,992708
172
155
07/09
0,992720
144
140
-0,000012
08/09
0,993064
136
127
08/09
0,993139
110
102
-0,000075
09/09
1,005285
118
110
09/09
1,005276
112
108
0,000009
10/09
0,992905
150
132
10/09
0,992912
122
111
-0,000008
11/09
0,994016
142
127
11/09
0,994031
128
118
-0,000015
01/10
0,994734
170
152
01/10
0,994752
144
136
-0,000018
02/10
0,993177
120
110
02/10
0,993181
108
98
-0,000005
03/10
0,992799
148
136
03/10
0,992665
140
127
0,000134
04/10
0,995420
172
157
04/10
0,995502
142
128
-0,000082
05/10
1,002963
120
108
05/10
1,002851
130
119
0,000112
06/10
0,992546
120
113
06/10
0,992607
106
99
-0,000061
07/10
0,992831
174
152
07/10
0,992871
160
150
-0,000040
08/10
0,993184
144
130
08/10
0,993235
104
93
-0,000052
09/10
1,012293
114
103
09/10
1,012328
112
105
-0,000035
10/10
0,992289
154
136
10/10
0,992308
128
115
-0,000019
11/10
0,994649
130
112
11/10
0,994683
120
108
(BiDE)
(BiDE)
-0,0000162
moyenne
carttype.
-0,000035
0,0000447
17

Tableau 4: Paramtres de prcision

balance hydrostatique (BH)
n valeurs retenues
densimtrie lectronique (DE)
4347
3800
min
0,99189
0,99187
max
1,01229
1,01233
0,00067
0,00025
sR
0,00024
0,000091
R%
0,067
0,025
0,00025
0,00011
sr
0,000090
0,000038
r%
0,025
0,011
18
OIV-MA-AS2-01A R2012

ANNEXE I
Mthode de rfrence : exemple numrique
I. Pycnomtrie sur balance deux plateaux
A/
tablissement des constantes du pycnomtre

1. Pese du pycnomtre propre et sec :
Tare = pycnomtre + p
p = 104,9454 g
2. Pese du pycnomtre plein deau la temprature t C :
Tare = pycnomtre + eau + p'
p' = 1,2396 g pour t = 20,5 C
3. Calcul de la masse daire contenue dans le pycnomtre :
m = 0,0012 (p - p')
m = 0,0012 (104,9454 1,2396)
m = 0,1244
4. Caractristiques retenir :
Tare du pycnomtre vide : p + m
p + m = 104,9454 + 0,1244
p + m = 105,0698 g
Volume 20 C = (p + m - p') x Ft C
F20,50 C = 1.001900
V20 C
= (105,0698 1,2396) x 1,001900
= 104,0275 mL
V20 C
Masse en eau 20 C = V20 C x 0,998203

M20 C = 103,8405 g
B/ Dtermination de la masse volumique 20 C et de la densit 20 C/20 C dun vin sec :
p" = 1,2622 17,80 C
105, 0698 1, 2622
17, 80 C =
104, 0275
17,80 C = 0,99788
La table II permet de calculer 20 C partir de t C laide de la relation :
20 C = t C c
1000
Pour t = 17,80 C et pour un titre alcoomtrique de 11% vol., on trouve c = 0,54 :
20 C = 0, 99788 0, 54
1000
20 C = 0,99734 g/ml
0, 99734 = 0, 99913
20 C
d 20
C =
0, 998203
19

II. Pycnomtre sur balance monoplateau

A/ tablissement des constantes du pycnomtre
1. Pese du pycnomtre propre et sec :
P = 67,7913 g
2. Pese du pycnomtre plein deau la temprature t C :
P1 = 169,2715g at 21,65 C
3. Calcul de la masse dair contenue dans le pycnomtre :
m = 0,0012 (P1 - P)
m = 0,0012 x 101,4802
m = 0,1218g
4. Caractristique retenir :
Tare du pycnomtre vide : P - m
P - m = 67,7913 0,1218
P - m = 67,6695 g
Volume 20 C = [P1 - (P - m)] x Ft C
F21,65 C = 1,002140
V20 C = (169,2715 67,6695) x 1,002140
V20 C = 101,8194 ml
Masse en eau 20 C = V20 C x 0,998203
M20 C = 101,6364 g
Masse du flacon tare : T0
T0 = 171,9160 g
B/ Dtermination de la masse volumique 20 C et de la densit 20 C/20 C
dun vin sec :
T1 = 171,9178
dT = 171,9178 171,9160 = +0,0018 g
P - m + dT = 67,6695 + 0,0018 = 67,6713 g
P2 = 169,2799 18 C
169, 2799 67, 6713
18C =
101, 8194
18C = 0, 99793 g/ ml
La Table II permet de calculer 20 C partir de t C laide de la relation :
20 C = t C c
1000
Pour t = 18 C et pour un titre alcoomtrique de 11% vol., on trouve c = 0,49 :
20C = 0, 99793 0. 49
1000
20C = 0, 99744 g/ ml
0, 99744 = 0, 99923
20 C
d20
C =
0, 998203
20

ANNEXE II
Tables
TABLE I
Facteurs F
par lesquels il faut multiplier la masse de leau contenue dans le pycnomtre en
pyrex t C pour calculer le volume du pycnomtre 20 C.
t oC
t oC
t oC
t oC
t oC
t oC
t oC
10,0 1,000398 13,0 1,000691 16,0 1,001097 19,0 1,001608 22,0 1,002215 25,0 1,002916 28,0 1,003704
,1 1,000406
,2 1,000414
,3 1,000422
,4 1,000430
,1 1,000703
,2 1,000714
,3 1,000726
,4 1,000738
,1 1,001113
,2 1,001128
,3 1,001144
,4 1,001159
,1 1,001627
,2 1,001646
,3 1,001665
,4 1,001684
,1 1,002238
,2 1,002260
,3 1,002282
,4 1,002304
,1 1,002941
,2 1,002966
,3 1,002990
,4 1,003015
,1 1,003731
,2 1,003759
,3 1,003797
,4 1,003815
10,5 1,000439 13,5 1,000752 16,5 1,001175 19,5 1,001703 22,5 1,002326 25,5 1,003041 28,5 1,003843
,6 1,000447
,7 1,000456
,8 1,000465
,9 1,000474
,6 1,000764
,7 1,000777
,8 1,000789
,9 1,000803
,6 1,001191
,7 1,001207
,8 1,001223
,9 1,001239
,6 1,001722
,7 1,001741
,8 1,001761
9 1,001780
,6 1,002349
,7 1,002372
,8 1,002394
,9 1,002417
,6 1,003066
3 1,003092
,8 1,003117
,9 1,003143
,6 1,003871
,7 1,003899
,8 1,003928
,9 1,003956
11,0 1,000483 14,0 1,000816 17,0 1,001257 20,0 1,001800 23,0 1,002439 26,0 1,003168 29,0 1,003984
,1 1,000492
,2 1,000501
3 1,000511
,4 1,000520
,1 1,000829
,2 1,000842
3 1,000855
,4 1,000868
,1 1,001273
,2 1,001286
3 1,001306
,4 1,001323
,1 1,001819
,2 1,001839
,3 1,001959
,4 1,001880
,1 1,002462
,2 1,002485
,3 1,002508
,4 1,002531
,1 1,003194
1 1,003222
,3 1,003247
,4 1,003273
,1 1,004013
2 1,004042
,3 1,004071
,4 1,004099
11,5 1,000530 14,5 1,000882 17,5 1,001340 20,5 1,001900 23,5 1,002555 26,5 1,003299 29,5 1,004128
,6 1,000540
,7 1,000550
,8 1,000560
,9 1,000570
,6 1,000895
,7 1,000909
,8 1,000923
,9 1,000937
,6 1,001357
,7 1,001374
,8 1,001391
,9 1,001409
,6 1,001920
,7 1,001941
,8 1,001961
,9 1,001982
,6 1,002578
3 1,002602
,8 1,002625
,9 1,002649
,6 1,003326
,7 1,003352
,8 1,003379
,9 1,003405
,6 1,004158
,7 1,004187
, 8 1,004216
,9 1,004245
12,0 1,000580 15,0 1,000951 18,0 1,001427 21,0 1,002002 24,0 1,002672 27,0 1,003432 30,0 1,004275
,1 1,000591
,2 1,000601
,3 1,000612
,4 1,000623
,1 1,000965
,2 1,000979
,3 1,000993
,4 1,001008
,1 1,001445
,2 1,001462
,3 1,001480
,4 1,001498
,1 1,002023
,2 1,002044
,3 1,002065
,4 1,002086
,1 1,002696
,2 1,002720
,3 1,002745
,4 1,002769
,1 1,003459
,2 1,003485
,3 1,003513
,4 1,003540
12,5 1,000634 15,5 1,001022 18,5 1,001516 21,5 1,002107 24,5 1,002793 27,5 1,003567
,6 1,000645
,7 1,000656
,8 1,000668
,6 1,001037
,7 1,0010 52
,8 1,001067
,6 1,001534
,7 1,001552
,8 1,001570
,6 1,002129
,7 1,002151
,8 1,002172
,6 1,002817
,7 1,002842
,8 1,002866
,6 1,003594
,7 1,003621
,8 1,003649
,9 1,000679
,9 1,001082
,9 1,001589
,9 1,002194
,9 1,002891
,9 1,003676
21
Titres alcoomtriques
Tempratures en C
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
22
10
1,59 1,64 1,67 1,71 1,77 1,84 1,91 2,01 2,11 2,22 2,34 2,46 2,60 2,73 2,88 3,03 3,19 3,35 3,52 3,70 3,87 4,06 4,25 4,44
11
12
13
14
1,48
1,36
1,22
1,08
15
0,92 0,96 0,97 0,99 1,02 1,05 1,09 1,13 1,19 1,24 1,30 1,36 1,42 1,48 1,55 1,63 1,70 1,78 1,86 1,95 2,03 2,12 2,21 2,30
16
17
18
19
0,76
0,59
0,40
0,21
0,79
0,61
0,42
0,21
0,80
0,62
0,42
0,22
0,81
0,63
0,43
0,22
0,94
0,65
0,44
0,23
0,86
0,67
0,46
0,23
0,89
0,69
0,47
0,24
0,93
0,72
0,49
0,25
0,97
0,75
0,51
0,26
1,01
0,78
0,53
0,27
1,06
0,81
0,55
0,28
1,10
0,85
0,57
0,29
1,16
0,88
0,60
0,30
1,21
0,95
0,63
0,32
1,26
0,96
0,65
0,33
1,32
1,01
0,68
0,34
1,38
1,05
0,71
0,36
1,44
1,11
0,74
0,37
1,51
1,15
0,77
0,39
1,57
1,20
0,81
0,41
1,64
1,25
0,84
0,42
1,71
1,30
0,87
0,44
1,78
1,35
0,91
0,46
1,85
1,40
0,94
0,47
21
22
23
24
0,21
0,44
0,68
0,93
0,22
0,45
0,70
0,96
0,22
0,46
0,71
0,97
0,23
0,47
0,72
0,99
0,23
0,48
0,74
1,01
0,24
0,49
0,76
1,03
0,25
0,51
0,78
1,06
0,26
0,52
0,80
1,10
0,27
0,54
0,83
1,13
0,28
0,56
0,86
1,18
0,29
0,59
0,90
1,22
0,30
0,61
0,93
1,26
0,31
0,63
0,96
1,31
0,32
0,66
1,00
1,36
0,34
0,69
1,03
1,41
0,36
0,71
1,08
1,47
0,37
0,74
1,13
1,52
0,38
0,77
1,17
1,58
0,40
0,80
1,22
1,64
0,41
0,83
1,26
1,71
0,43
0,87
1,31
1,77
0,44
0,90
1,37
1,84
0,46
0,93
1,41
1,90
0,48
0,97
1,46
1,97
25
1,19 1,23 1,25 1,27 1,29 1,32 1,36 1,40 1,45 1,50 1,55 1,61 1,67 1,73 1,80 1,86 1,93 2,00 2,08 2,16 2,24 2,32 2,40 2,48
26
27
28
29
1,47
1,75
2,04
2,34
30
2,66 2,73 2,77 2,81 2,86 2,92 3,00 3,08 3,17 3,27 3,37 3,48 3,59 3,72 3,84 3,97 4,11 4,25 4,40 4,55 4,70 4,85 4,92 5,17
1,53
1,40
1,26
1,11
1,56
1,43
1,28
1,13
1,60
1,46
1,32
1,16
1,64
1,50
1,35
1,19
1,70
1,56
1,40
1,23
1,77
1,62
1,45
1,27
1,86
1,69
1,52
1,33
1,95
1,78
1,59
1,39
2,05
1,86
1,67
1,46
2,16
1,96
1,75
1,52
2,27
2,05
1,83
1,60
2,38
2,16
1,92
1,67
2,51
2,27
2,01
1,75
2,63
2,38
2,11
1,94
2,77
2,50
2,22
1,93
2,91
2,62
2,32
2,03
3,06
2,75
2,44
2,11
3,21
2,88
2,55
2,21
3,36
3,02
2,67
2,31
3,53
3,16
2,79
2,42
3,69
3,31
2,92
2,52
3,86
3,46
3,05
2,63
4,03
3,61
3,18
2,74,
20
1,51
1,80
2,10
2,41
1,53
1,82
2,13
2,44
1,56
1,85
2,16
2,48
1,59
1,89
2,20
2,53
1,62
1,93
2,25
2,58
1,67
1,98
2,31
2,65
1,72
2,04
2,38
2,72
1,77
2,11
2,45
2,81
1,83
2,18
2,53
2,89
1,90
2,25
2,62
2,99
1,96
2,33
2,70
3,09
2,03
2,41
2,80
3,19
2,11
2,50
2,89
3,30
t
Note : On peut utiliser cette table pour transformer la densit d 20
en d 20
20
2,19
2,59
3,00
3,42
2,27
2,68
3,10
3,53
2,35
2,78
3,21
3,65
2,44
2,88
3,32
3,78
2,53
2,98
3,45
3,92
2,62
3,09
3,57
4,05
2,72
3,20
3,69
4,19
2,81
3,31
3,82
4,33
2,91
3,42
3,94
4,47
3,01
3,33
4,07
4,61

TABLE II
Corrections de temprature sur la masse volumique des vins secs et des vins secs dbarrasss dalcool,
mesure dans un pycnomtre en verre pyrex t C pour la ramener 20 C,
c
si t oC est infrieure 20 C
20 = t 1000 + si t oC est suprieure 20 C
Masses volumiques
Tempratures en C
1,05 1,06 1,07 1,08 1,09 1,10 1,11 1,12 1,13 1,14 1,15 1,16 1,18 1,20 1,22 1,24 1,26 1,28 1,30 1,32 1,34 1,36
23
10
11
12
13
14
2,31
2,12
1,92
1,72
1,52
2,48
2,28
2,06
1,84
1,62
2,66
2,42
2,19
1,95
1,72
2,82
2,57
2,32
2,06
1,81
2,99
2,72
2,45
2,17
1,90
3,13
2,86
2,58
2,27
2,00
3,30
2,99
2,70
2,38
2,09
3,44
3,12
2,92
2,48
2,17
3,59
3,25
2,94
2,58
2,26
3,73
3,37
3,04
2,69
2,34
3,88
3,50
3,15
2,78
2,43
4,01
3,62
3,26
2,89
2,51
4,28
3,85
3,47
3,05
2,66
4,52
4,08
3,67
3,22
2,82
4,76
4,29
3,85
3,39
2,96
4,98
4148
4,03
3,55
3,09
5,18
4,67
4,20
3,65
3,22
5,42
4,84
4,36
3,84
3,34
5,56
5,00
4,51
3,98
3,45
5,73
5,16
4,65
4,11
3,56
5,90
5,31
478
4,24
3,67
6,05
5,45
4,91
4,36
3,76
15
1,28 1,36 1,44 1,52 1,60 1,67 1,75 1,82 1,89 1,96 2,04 2,11 2,24 2,36 2,48 2,59 2,69 2,79 2,88 2,97 3,03 3,10
16
17
18
19
1,05
0,80
0,56
0,29
1,12
0,86
0,59
0,31
1,18
0,90
0,62
0,32
1,25
0,95
0,66
0,34
1,31
1,00
0,68
0,36
1,37
1,04
0,72
0,37
1,43
1,09
0,75
0,39
1,49
1,13
0,77
0,40
1,55
1,18
0,80
0,42
1,60
1,22
0,83
0,43
1,66
1,26
0,85
0,44
1,71
1,30
0,88
0,45
1,81
1,37
0,93
0,48
1,90
1,44
0,98
0,50
2,00
1,51
1,02
0,52
2,08
1,57
1,05
0,54
2,16
1,62
1,09
0,56
2,24
1,68
1,12
0,57
2,30
1,72
1,16
0,59
2,37
1,76
1,19
0,60
2,43
1,80
1,21
0,61
2,49
1,84
1,24
0,62
21
22
23
24
0,29
0,58
0,89
1,20
0,30
0,61
0,94
1,25
0,32
0,64
0,99
1,31
0,34
0,67
1,03
1,37
0,35
0,70
1,08
1,43
0,37
0,73
1,12
1,49
0,38
0,76
1,16
1,54
0,40
0,79
1,20
1,60
0,41
0,81
1,25
1,66
0,42
0,84
1,29
1,71
0,44
0,87
1,33
1,77
0,46
0,90
1,37
1,82
0,48
0,96
1,44
1,92
0,50
1,03
1,51
2,01
0,53
1,05
1,57
2,10
0,56
1,09
1,63
2,17
0,58
1,12
1,67
2,24
0,59
1,15
1,73
2,30
0,60
1,18
1,77
2,36
0,61
1,20
1,80
2,40
0,62
1,22
1,82
2,42
0,62
1,23
1,94
2,44
25
1,51 1,59 1,66 1,74 1,81 1,88 1,95 2,02 2,09 2,16 2,23 2,30 2,42 2,53 2,63 2,72 2,82 2,89 2,95 2,99 3,01 3,05
26
27
28
29
1,84
2,17
2,50
2,86
30
3,20 3,35 3,49 3,64 3,77 3,91 4,05 4,17 4,30 4,43 4,55 4,67 4,90 5,12 5,39 5,51 5,68 5,94 5,96 6,09 6,16 6,22
20
1,92
2,26
2,62
2,98
2,01
2,36
2,74
3,10
2,10
2,46
2,85
3,22
2,18
2,56
2,96
3,35
2,26
2,66
3,07
3,47
2,34
2,75
3,18
3,59
2,42
2,84
3,28
3,70
2,50
2,93
3,40
3,82
2,58
3,01
3,50
3,93
2,65
3,10
3,60
4,03
2,73
3,18
3,69
4,14
2,87
3,35
3,87
4,34
t
en d 20
20
3,00
3,50
4,04
4,53
3,13
3,66
4,21
4,72
3,25
3,80
4,36
4,89
3,36
3,93
4,50
5,05
3,47
4,06
4,64
5,20
3,57
4,16
4,75
5,34
3,65
4,26
4,86
5,46
372
4,35
4,94
5,56
3,79
4,42
5,00
5,64

TABLE III
Corrections c de temprature sur la masse volumique des mots naturels et des mots concentrs
mesure t o laide dun pycnomtre en verre pyrex, pour ramener les rsultats 20 oC,
si to est infrieur 20 oC
20 = t c
1000 + si to est suprieure 20 oC
Vins de 13% vol,

Masses volumiques
Vins de 15% vol,

Masses volumiques
Vins de 17% vol,

Masses volumiques
Tempratures en C
1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120
24
10
2,36 2,71 3,06 3,42 3,72 3,96 4,32 2,64 2,99 3,36 3,68 3,99 4,30 4,59 2,94 3,29 3,64 3,98 4,29 4,60 4,89
11
12
13
14
2,17
1,97
1,78
1,57
15
1,32 1,49 1,66 1,82 1,97 2,12 2,26 1,46 1,63 1,79 1,95 2,10 2,25 2,39 1,60 1,77 1,93 2,09 2,24 2,39 2,53
16
17
18
19
20
21
22
23
24
1,08
0,83
0,58
0,30
1,22
0,94
0,64
0,34
1,36
1,04
0,71
0,37
1,48
1,13
0,78
0,40
1,61
1,22
0,84
0,43
1,73
1,31
0,89
0,46
1,84
1,40
0,95
0,49
1,18
0,91
0,63
0,33
1,32
1,02
0,69
0,37
1,46
1,12
0,76
0,40
1,59
1,21
0,83
0,43
1,71
1,30
0,89
0,46
1,83
1,39
0,94
0,49
1,94
1,48
1,00
0,52
1,30
1,00
0,69
0,36
1,44
1,10
0,75
0,39
1,58
1,20
0,82
0,42
1,71
1,30
0,89
0,46
1,83
1,39
0,95
0,49
1,95
1,48
1,00
0,52
2,06
1,56
1,06
0,54
0,30
0,60
0,93
1,27
0,33
0,67
1,02
1,39
0,36
0,73
1,12
1,50
0,40
0,80
1,22
1,61
0,43
0,85
1,30
1,74
0,46
0,91
1,39
1,84
0,49
0,98
1,49
1,95
0,33
0,65
1,01
1,37
0,36
0,72
1,10
1,49
0,39
0,78
1,20
1,59
0,43
0,84
1,29
1,72
0,46
0,90
1,38
1,84
0,49
0,96
1,46
1,95
0,51
1,01
1,55
2,06
0,35
0,71
1,10
1,48
0,39
0,78
1,19
1,60
0,42
0,84
1,29
1,71
0,45
0,90
1,38
1,83
0,48
0,96
1,46
1,95
0,51
1,01
1,55
2,06
0,54
1,07
1,63
2,17
25
1,61 1,75 1,90 2,05 2,19 2,33 2,47 1,73 1,87 2,02 2,17 2,31 2,45 2,59 1,87 2,01 2,16 2,31 2,45 2,59 2,73
26
27
28
29
1,94
2,30
2,66
3,05
30
3,44 3,70 3,99 4,28 4,54 4,80 5,06 3,68 3,94 4,23 4,52 4,79 5,05 5,30 3,95 4,22 4,51 4,79 5,07 5,32 5,57
2,49
2,25
2,02
1,78
2,12
2,51
2,90
3,31
2,80
2,53
2,25
1,98
2,29
2,70
3,13
3,56
2,99
2,79
2,47
2,16
2,47
2,90
3,35
3,79
3,39
3,05
2,69
2,35
2,63
3,09
3,57
4,04
3,65
3,29
2,89
2,53
2,79
3,27
3,86
4,27
3,90
3,52
3,09
2,70
2,95
3,44
4,00
4,49
2,42
2,19
1,97
1,74
2,09
2,48
2,86
3,28
2,73
2,47
2,21
1,94
2,27
2,68
3,10
3,53
3,05
2,75
2,44
2,14
2,44
2,87
3,23
3,77
3,34
3,01
2,66
2,32
2,62
3,07
3,55
4,02
3,63
3,27
2,87
2,52
2,78
3,27
3,77
4,26
3,89
3,51
3,08
2,69
2,94
3,45
3,99
4,49
4,15
3,73
3,29
2,86
3,10
3,62
4,20
4,71
2,69
2,42
2,18
1,91
2,26
2,67
3,08
3,52
3,00
2,70
2,42
2,11
2,44
2,88
3,31
3,77
3,32
2,98
2,64
2,31
2,61
3,07
3,55
4,01
3,61
3,24
2,87
2,50
2,79
3,27
3,76
4,26
3,90
3,50
3,08
2,69
2,95
3,46
3,99
4,50
4,16
3,74
3,29
2,86
3,11
3,64
4,21
4,73
4,41
3,96
3,49
3,03
3,26
3,81
4,41
4,95

TABLE IV
Corrections de tempratures sur la masse volumique des vins de liqueur
mesure l'aide d'un pycnomtre en verre pyrex, t o pour la ramener 20 oC,
o
o
20 = t __c___ si to est infrieure 20 oC
1000
+ if t est suprieure 20 C

TABLE IV (suite)
corrections c de temprature sur la masse volumique des vins de liqueur
mesure laide dun pycnomtre en verre pyrex, t pour la ramener 20 oC,
__c___ si to est infrieure 20 oC
20 = 1000 + if to est suprieure 20 oC
Vins de 19% vol,
Vins de 21% vol,
Masses volumiques
Masses volumiques
Tempratures en C
1,000 1,020 1,040 1,060 1,000 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120
10
11
12
13
14
3,27
2,99
2,68
2,68
2,11
3,62
3,30
2,96
2,96
2,31
3,97
3,61
3,24
3,24
2,51
4,30
3,90
3,50
3,50
2,69
4,62
4,19
3,76
3,76
2,88
4,92
4,45
4,00
4,00
3,05
5,21
4,70
4,21
4,21
3,22
3,62
3,28
2,96
2,96
2,31
3,97
3,61
3,24
3,24
2,51
4,32
3,92
3,52
3,52
2,71
4,66
4,22
3,78
3,78
2,89
4,97
4,50
4,03
4,03
3,08
5,27
4,76
4,27
4,27
3,25
5,56
5,01
4,49
4,49
3,43
15
1,76 1,93 2,09 2,25 2,40 2,55 2,69 1,93 2,10 2,26 2,42 2,57 2,72 2,86
16
17
18
19
1,43
1,09
0,76
0,39
1,57
1,20
0,82
0,42
1,70
1,30
0,88
0,45
1,83
1,39
0,95
0,49
1,95
1,48
1,01
0,52
2,08
1,57
1,06
0,55
2,18
1,65
1,12
0,57
1,56
1,20
0,82
0,42
1,70
1,31
0,88
0,46
1,84
1,41
0,95
0,49
1,97
1,50
1,01
0,52
2,09
1,59
1,08
0,55
2,21
1,68
1,13
0,58
2,32
1,77
1,18
0,61
21
22
23
24
0,38
0,78
1,19
1,60
0,42
0,84
1,28
1,72
0,45
0,90
1,38
1,83
0,48
0,96
1,47
1,95
0,51
1,02
1,55
2,06
0,54
1,07
1,64
2,18
0,57
1,13
1,72
2,29
0,41
0,84
1,29
1,73
0,45
0,90
1,39
1,85
0,48
0,96
1,48
1,96
0,51
1,02
1,57
2,08
0,54
1,08
1,65
2,19
0,57
1,14
1,74
2,31
0,60
1,19
1,82
2,42
25
2,02 2,16 2,31 2,46 2,60 2,74 2,88 2,18 2,32 2,47 2,62 2,76 2,90 3,04
26
27
28
29
2,44
2,88
3,31
3,78
30
4,24 4,51 4,80 5,08 5,36 5,61 5,86 4,54 4,82 5,11 5,39 5,66 5,91 6,16
20
2,62
3,08
3,54
4,03
2,79
3,27
3,78
4,27
2,96
3,42
4,00
4,52
3,12
3,66
4,22
4,76
3,28
3,84
4,44
4,99
3,43
4,01
4,64
5,21
2,53
3,10
3,56
4,06
2,81
3,30
3,79
4,31
2,97
3,47
4,03
4,55
3,15
3,69
4,25
4,80
3,31
3,88
4,47
5,04
3,47
4,06
4,69
5,27
3,62
4,23
4,89
5,48
25
Tempratures en C
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27
26
10
11
12
13
14
1,45
1,35
1,24
1,12
0,99
1,51
1,40
1,28
1,16
1,03
1,55
1,43
1,31
1,18
1,05
1,58
1,47
1,34
1,21
1,07
1,64
1,52
1,39
1,25
1,11
1,76
1,58
1,44
1,30
1,14
15
0,86 0,89 0,90 0,92 0,95 0,98 1,02 1,07 1,12 1,17 1,23 1,29 1,35 1,42 1,49 1,56 1,63 1,71 1,80 1,88 1,96 2,05 2,14 2,23
16
17
18
19
20
21
22
23
24
0,71
0,55
0,38
0,19
0,73
0,57
0,39
0,20
0,74
0,57
0,39
0,20
0,76
0,59
0,40
0,21
0,78
0,60
0,41
0,21
0,81
0,62
0,43
0,22
0,84
0,65
0,44
0,23
0,87
0,67
0,46
0,24
0,91
0,70
0,48
0,25
0,95
0,74
0,50
0,26
0,99
0,77
0,52
0,27
1,05
0,81
0,55
0,28
1,10
0,84
0,57
0,29
1,15
0,88
0,60
0,30
1,21
0,92
0,62
0,32
1,27
0,96
0,65
0,33
1,33
1,01
0,68
0,34
1,39
1,05
0,71
0,36
1,45
1,10
0,74
0,38
1,52
1,15
0,78
0,39
1,59
1,20
0,81
0,41
1,66
1,26
0,85
0,43
1,73
1,31
0,88
0,44
1,80
1,36
0,91
0,46
0,21
0,43
0,67
0,91
0,22
0,45
0,69
0,93
0,22
0,45
0,70
0,95
0,23
0,46
0,71
0,97
0,23
0,47
0,72
0,99
0,24
0,49
0,74
1,01
0,25
0,50
0,77
1,04
0,25
0,52
0,79
1,07
0,26
0,54
0,82
1,11
0,27
0,56
0,85
1,15
0,28
0,58
0,88
1,20
0,29
0,60
0,91
1,24
0,31
0,62
0,95
1,29
0,32
0,65
0,99
1,34
0,34
0,68
1,03
1,39
0,35
0,71
1,07
1,45
0,36
0,73
1,12
1,50
0,38
0,77
1,16
1,56
0,39
0,80
1,21
1,62
0,41
0,83
1,25
1,69
0,43
0,86
1,30
1,76
0,44
0,89
1,35
1,82
0,46
0,93
1,40
1,88
0,48
0,96
1,45
1,95
25
1,16 1,19 1,21 1,23 1,26 1,29 1,33 1,37 1,42 1,47 1,52 1,57 1,63 1,70 1,76 1,83 1,90 1,97 2,05 2,13 2,21 2,29 2,37 2,45
26
27
28
29
1,42
1,69
1,97
2,26
30
2,56 2,64 2,67 2,72 2,77 2,83 2,90 2,98 3,08 3,18 3,28 3,38 3,50 3,62 3,75 3,88 4,02 4,16 4,30 4,46 4,61 4,76 4,92 5,07
1,46
1,74
2,03
2,33
1,49
1,77
2,06
2,37
1,51
1,80
2,09
2,41
1,54
1,83
2,14
2,45
1,58
1,88
2,19
2,50
1,78
1,65
1,50
1,35
1,19
1,62
1,93
2,24
2,57
1,89
1,73
1,58
1,42
1,24
1,67
1,98
2,31
2,64
1,98
1,83
1,66
1,49
1,31
1,73
2,05
2,38
2,73
2,09
1,93
1,75
1,56
1,37
1,79
2,12
2,46
2,82
2,21
2,03
1,84
1,64
1,44
1,85
2,20
2,55
2,91
2,34
2,15
1,94
1,73
1,52
1,92
2,27
2,63
2,99
2,47
2,26
2,04
1,82
1,59
1,99
2,35
2,73
3,11
2,60
2,38
2,15
1,91
1,67
2,07
2,44
2,83
3,22
t
en d 20
20
2,75
2,51
2,26
2,01
1,75
2,14
2,53
2,93
3,34
2,93
2,65
2,38
2,11
1,84
2,22
2,63
3,03
3,46
3,06
2,78
2,51
2,22
1,93
2,31
2 72
3,14
3,58
3,22
2,93
2,63
2,33
2,03
2,40
2,82
3,26
3,70
3,39
3,08
2,77
2,45
2,13
2,49
2,93
3,38
3,84
3,57
3,24
2,91
2,57
2,23
2,58
3,04
3,50
3,97
3,75
3,40
3,05
2,69
2,33
2,67
3,14
3,62
4,11
3,93
3,57
3,19
2,81
2,44
2,77
3,25
3,75
4,25
4,12
3,73
3,34
2,95
2,55
2,86
3,37
3,85
4,39
4,31
3,90
3,49
3,07
2,66
2,96
3,48
4,00
4,54

14
TABLE V
Corrections c de temprature sur la masse volumique des vins secs et des vins
secs dbarrasss d'alcool
Mesure l'aide d'un pycnomtre ou d'un aromtre en verre ordinaire, t oC, pour la ramener 20oC,
c__ si too est infrieur 20 oC
20 = _1000
+ si t est suprieur 20 oC
Masses volumiques
1,05 1 ,06 1,07 1,08 1,09 1,10 1,11 1,12 1,13 1,14 1,15 1,16 1,18 1,20 1,22 1,24 1,26 1,28 1,30 1,32 1,34 1,36
10
11
12
13
14
2,17
2,00
1,81
1,62
1,44
2,34
2,16
1,95
1,74
1,54
2,52
2,29
2,08
1,85
1,64
2,68
2,44
2,21
1,96
1,73
2,85
2,59
2,34
2,07
1,82
2,99
2,73
2,47
2,17
1,92
3,16
2,86
2,58
2,28
2,00
3,29
2,99
2,70
2,38
2,08
3,44
3,12
2,82
2,48
2,17
3,58
3,24
2,92
2,59
2,25
3,73
3,37
3,03
2,68
2,34
3,86
3,48
3,14
2,77
2,42
4,13
3,71
3,35
2,94
2,57
4,36
3,94
3,55
3,11
2,73
4,60
4,15
3,72
3,28
2,86
4,82
4,33
3,90
3,44
2,99
5,02
4,52
4,07
3,54
3,12
5,25
4,69
4,23
3,72
3,24
5,39
4,85
4,37
3,86
3,35
5,56
5,01
4,52
3,99
3,46
-5,73
5,15
4,64
4,12
3,57
5,87
5,29
4,77
4,24
3,65
Temprature en C
15 1,21 1,29 1,37 1,45 1,53 1,60 1,68 1,75 1,82 1,89 1,97 2,03 2,16 2,28 2,40 2,51 2,61 2,71 2,80 2,89 2,94 3,01
16
17
18
19
1,00
0,76
0,53
0,28
1,06
0,82
0,56
0,30
1,12
0,86
0,59
0,31
1,19
0,91
0,63
0,33
1,25
0,96
0,65
0,35
1,31
1,00
0,69
0,36
1,37
1,05
0,72
0,38
1,43
1,09
0,74
0,39
1,49
1,14
0,77
0,41
1,54
1,18
0,80
0,42
1,60
1,22
0,82
0,43
1,65
1,25
0,85
0,43
1,75
1,32
0,90
0,46
1,84
1,39
0,95
0,48
1,94
1,46
0,99
0,50
2,02
1,52
1,02
0,52
2,09
1,57
1,05
0,54
2,17
1,63
1,09
0,55
2,23
1,67
1,13
0,57
2,30
1,71
1,16
0,58
2,36
1,75
1,18
0,59
2,42
1,79
1,20
0,60
20
21
22
23
24
0,28
0,55
0,85
1,15
0,29
0,58
0,90
1,19
0,31
0,61
0,95
1,25
0,33
0,64
0,99
1,31
0,34
0,67
1,04
1,37
0,36
0,70
1,08
1,43
0,37
0,73
1,12
1,48
0,39
0,76
1,16
1,54
0,40
0,78
1,21
1,60
0,41
0,81
1,25
1,65
0,43
0,84
1,29
1,71
0,44
0,87
1,32
1,76
0,46
0,93
1,39
1,86
0,48
0,97
1,46
1,95
0,51
1,02
1,52
2,04
0,54
1,06
1,58
2,11
0,56
1,09
1,62
2,17
0,57
1,12
1,68
2,23
0,58
1,15
1,72
2,29
0,59
1,17
1,75
2,33
0,60
1,19
1,77
2,35
0,60
1,19
1,79
2,37
25 1,44 1,52 1,59 1,67 1,74 1,81 1,88 1,95 2,02 2,09 2,16 2,22 2,34 2,45 2,55 2,64 2,74 2,81 7,87 2,90 2,92 2,96
26
27
28
29
1,76
2,07
2,39
2,74
1,84
2,16
2,51
2,86
1,93
2,26
2,63
2,97
2,02
2,36
2,74
3,09
2,10
2,46
2,85
3,22
2,18
2,56
2,96
3,34
2,25
2,65
3,06
3,46
2,33
2,74
3,16
3,57
2,41
2,83
3,28
3,69
2,49
2,91
3,38
3,90
2,56
3,00
3,48
3,90
2,64
3,07
3,57
4,00
2,78
3,24
3,75
4,20
2,91
3,39
3,92
4,39
3,03
3,55
4,08
4,58
3,15
3,69
4,23
4,74
3,26
3,82
4,37
4,90
3,37
3,94
4,51
5,05
3,47
4,04
4,62
5,19
3,55
4,14
4,73
5,31
3,62
4,23
4,80
5,40
3,60
4,30
4,86
5,48
27
30 3,06 3,21 3,35 3,50 3,63 3,77 3,91 4,02 4,15 4,28 4,40 4,52 4,75 4,96 5,16 5,35 5,52 5,67 5,79 5,91 5,99 6,04
t
en d 20
Note : n peut utiliser cette table pour transformer la densit d 20
20

TABLE VI
Corrections c de temprature sur la masse volumique des mots concentrs
mesure t l'aide d'un pycnomtre ou d'un aromtre en verre ordinaire, t o pour la ramener 20 oC,
c
20 =
1000 + si to est suprieur 20 oC
Vins de 13% volume
Vins de 15% volume
Vins de 17% volume
Masses volumiques
Masses volumiques
Masses volumiques
Temprature en C
1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120
10
2,24 2,58 2,93 3,27 3,59 3,89 4,18 2,51 2,85 3,20 3,54 3,85 4,02 4,46 2,81 3,15 3,50 3,84 4,15 4,45 4,74
11
12
13
14
2,06
1,87
1,69
1,49
15
1,25 1,42 1,59 1,75 1,90 2,05 2,19 1,39 1,56 1,72 1,88 2,03 2,11 2,32 1,54 1,71 1,87 2,03 2,18 2,32 2,47
16
17
18
19
1,03
0,80
0,54
0,29
1,17
0,90
0,61
0,33
1,30
1,00
0,68
0,36
1,43
1,09
0,75
0,39
1,55
1,17
0,81
0,42
1,67
1,27
0,86
0,45
1,78
1,36
0,92
0,48
1,06
0,87
0,60
0,32
1,27
0,98
0,66
0,36
1,40
1,08
0,73
0,39
1,53
1,17
0,80
0,42
1,65
1,26
0,85
0,45
1,77
1,35
0,91
0,48
1,88
1,44
0,97
0,51
1,25
0,96
0,66
0,35
1,39
1,06
0,72
0,38
1,52
1,16
0,79
0,41
1,65
1,26
0,86
0,45
1,77
1,35
0,92
0,48
1,89
1,44
0,97
0,51
2,00
1,52
1,03
0,53
0,29
0,57
0,89
1,22
0,32
0,64
0,98
1,34
0,35
0,70
1,08
1,44
0,39
0,76
1,17
1,56
0,42
0,82
1,26
1,68
0,45
0,88
1,34
1,79
0,47
0,93
1,43
1,90
0,32
0,63
0,97
1,32
0,35
0,69
1,06
1,44
0,38
0,75
1,16
1,54
0,42
0,81
1,25
1,66
0,45
0,87
1,34
1,78
0,48
0,93
1,42
1,89
0,50
0,99
1,51
2,00
0,34
0,68
1,06
1,43
0,38
0,75
1,15
1,56
0,41
0,81
1,25
1,65
0,44
0,87
1,34
1,77
0,47
0,93
1,42
1,89
0,50
0,99
1,51
2,00
0,53
1,04
1,59
2,11
2,37
2,14
1,93
1,70
2,69
2,42
2,14
1,90
2,97
2,67
2,37
2,09
3,26
2,94
2,59
2,27
3,53
3,17
2,80
2,44
3,78
3,40
3,00
2,61
2,31
2,09
1,88
1,67
2,61
2,36
2,12
1,86
2,93
2,64
2,34
2,06
3,21
2,90
2,56
2,25
3,51
3,16
2,78
2,45
3,64
3,27
2,88
2,51
4,02
3,61
3,19
2,77
2,57
2,32
2,09
1,83
2,89
2,60
2,33
2,03
3,20
2,87
2,55
2,23
3,49
3,13
2,77
2,42
3,77
3,39
2,98
2,61
4,03
3,63
3,19
2,77
4,28
3,84
3,39
2,94
20
21
22
23
24
28
25
1,61 1,68 1,83 1,98 2,12 2,26 2,40 1,66 1,81 1,96 2,11 2,25 2,39 2,52 1,80 1,94 2,09 2,24 2,39 2,52 2,66
26
27
28
29
1,87
2,21
2,56
2,93
30
3,31 3,57 3,86 4,15 4,41 4,66 4,92 3,55 3,81 4,10 4,38 4,66 4,90 5,16 3,82 4,08 4,37 4,65 4,93 5,17 5,42
2,05
2,42
2,80
3,19
2,22
2,60
3,02
3,43
2,40
2,80
3,25
3,66
2,56
3,00
3,47
3,91
2,71
3,18
3,67
4,14
2,87
3,35
3,89
4,37
2,02
2,39
2,75
3,16
2,20
2,59
2,89
3,41
2,37
2,78
3,22
3,65
2,54
2,98
3,44
3,89
2,70
3,17
3,66
4,13
2,85
3,35
3,96
4,36
3,01
3,52
4,07
4,59
2,18
2,58
2,97
3,40
2,36
2,78
3,21
3,66
2,53
2,97
3,44
3,89
2,71
3,17
3,66
4,13
2,86
3,36
3,88
4,38
3,02
3,54
4,09
4,61
3,17
3,71
4,30
4,82

TABLE VII
Corrections c de temprature sur la masse volumique des vins de liqueur
mesure t l'aide d'un aromtre ou d'un pycnomtre en verre ordinaire, t o pour la ramener 20 oC,
o
o
20 = __c___ si to est infrieur 20 oC
1000 + si t est suprieur 20 C
Tempratures en C
Vins de 19% volume
Vins de 21% volume
Masses volumiques
Masses volumiques
29
1,000
1,020
1,040
1,060
1,080
1,100
1,120
1,000
1,020
1,040
1,060
1,080
1,100
1,120
10
11
12
13
14
3,14
2,87
2,58
2,31
2,03
3,48
3,18
2,96
2,55
2,23
3,83
3,49
3,13
2,77
2,43
4,17
3,78
3,39
2,99
2,61
4,48
4,06
3,65
3,20
2,80
4,78
4,32
3,88
3,41
2,96
5,07
4,57
4,10
3,61
3,13
3,50
3,18
2,86
2,56
2,23
3,84
3,49
3,13
2,79
2,43
4,19
3,80
3,41
3,01
2,63
4,52
4,09
3,67
3,23
2,81
4,83
4,34
3,92
3,44
3,00
5,12
4,63
4,15
3,65
3,16
5,41
4,88
4,37
3,85
3,33
15
1,69
1,86
2,02
2,18
2,33
2,48
2,62
1,86
2,03
2,19
2,35
2,50
2,65
2,80
16
17
18
19
20
21
22
23
24
1,38
1,06
0,73
0,38
1,52
1,16
0,79
0,41
1,65
1,26
0,85
0,44
1,78
1 ,35
0,92
0,48
1,90
1,44
0,98
0,51
2,02
1,53
1,03
0,52
2,13
1,62
1,09
0,56
1,51
1,15
0,79
0,41
1,65
1,25
0,85
0,44
1,78
1,35
0,92
0,47
1,91
1,45
0,98
0,51
2,03
1,54
1,05
0,54
2,15
1,63
1,10
0,57
2,26
1,71
1,15
0,59
0,37
0,75
1,15
1,55
0,41
0,81
1,30
1,67
0,44
0,87
1,34
1,77
0,47
0,93
1,43
1,89
0,50
0,99
1,51
2,00
0,53
1,04
1,60
2,11
0,56
1,10
1,68
2,23
0,41
0,81
1,25
1,68
0,44
0,88
1,34
1,80
0,47
0,94
1,44
1,90
0,51
1,00
1,63
2,02
0,54
1,06
1,61
2,13
0,57
1,10
1,70
2,25
0,59
1,17
1,78
2,36
25
1,95
2,09
2,24
2,39
2,53
2,67
2,71
2,11
2,25
2,40
2,55
2,69
2,83
2,97
26
27
28
29
2,36
2,79
3,20
3,66
2,54
2,99
3,44
3,92
2,71
3,18
3,66
4,15
2,89
3,38
3,89
4,40
3,04
3,57
4,11
4,64
3,20
3,75
4,32
4,87
3,35
3,92
4,53
5,08
2,55
3,01
3,46
3,95
2,73
3,20
3,69
4,20
2,90
3,40
3,93
4,43
3,07
3,59
4,15
4,68
3,22
3,78
4,36
4,92
3,38
3,96
4,58
5,15
3,54
4,13
4,77
5,36
30
4,11
4,37
4,66
4,94
5,22
5,46
5,71
4,42
4,68
4,97
5,25
5,53
5,77
6,02

TABLE VII (suite)

20 = __c__

BIBLIOGRAPHIE
JAULMES P,, Bull, O,I,V,, 1953, 26, No 274, 6,

JAULMES P,, BRUN Mme S,, Trav, Soc, Pharm,, Montpellier, 1956, 16, 115 ;
1960,
20, 137 ; Ann, Fals, Exp, Chim,, 1963, 46, 129 et 143,
BRUN Mme S, et TEP Y,, Ann, Fals, Exp, Chim,, 37-40 ; F,V,, O,I,V,, 1975, No
539,
30

Masse volumique et densit relative 20C Mthode Type IV
Mthode OIV-MA-AS2-01B
Mthode Type IV
Masse volumique et densit relative 20 C

1. Dfinition
La masse volumique est le quotient de la masse d'un certain volume de vin ou de
mot 20 C par ce volume. Elle s'exprime en grammes par millilitre et son
symbole est 20 C.
La densit relative 20 C ou densit 20 C/20 C est le rapport exprim en
nombre dcimal, de la masse volumique du vin ou de mot 20 C la masse
20C
volumique de leau la mme temprature. Son symbole est : d20
C
La masse volumique et la densit relative 20 C sont dtermines sur l'chantillon
pour essai :
- par aromtrie ou densimtrie par la balance hydrostatique : mthodes
usuelles.
Remarque : Pour les dterminations trs prcises, la masse volumique doit tre
corrige de l'action du dioxyde de soufre.
20
20
'20
S
=
=
=
=
'20 - 0.0006 x S
masse volumique corrige
masse volumique observe
dioxyde de soufre total en g/l
3. Traitement pralable de l'chantillon

Si le vin ou le mot contient des quantits notables de dioxyde de carbone, en
chasser la plus grande quantit par agitation de 250 ml de vin dans un flacon de
1000 ml, ou par filtration sous pression rduite sur 2 g de coton plac dans une
allonge.
4. Mthode
4.1. Aromtrie
4.1.1. Appareillage
4.1.1.1. Aromtre
Les aromtres doivent rpondre aux prescriptions de l'ISO en ce qui concerne
leurs dimensions et leurs graduations.
OIV-MA-AS2-01B : R2009

Ils doivent avoir une carne cylindrique, une tige de section circulaire de 3 mm
de diamtre au moins. Pour les vins secs, ils doivent tre gradus de 0,983
1,003 par millime et cinquime de millime. Chaque millime doit tre spar
par 5 mm au moins du millime suivant. Pour la mesure de la densit des vins
dsalcooliss, des vins doux et des mots, il sera fait usage d'un jeu de cinq
aromtres gradus de 1,000 1,030 ; 1,030 1,060 ; 1,060 1,090 ; 1,090 1,120 ;
1,120 1,150. Ces appareils seront gradus en masses volumiques 20 C par
millime et demi-millime au moins, chaque millime tant spar par 3 mm
au moins du millime suivant.
Ces aromtres doivent tre gradus de manire tre lus au sommet du
mnisque. L'indication de la graduation en masse volumique 20 C ou en
densit relative 20 C et de la lecture au niveau du sommet du mnisque sera
porte soit sur l'chelle gradue, soit sur une bande de papier incluse dans la
carne.
Ces appareils doivent tre contrls par un service officiel.
4.1.1.2. Thermomtre contrl gradu par demi degr Celsius au moins.
4.1.1.3. prouvette cylindrique de 36 mm de diamtre intrieur et de 320 mm
de hauteur, tenue verticalement grce un support vis calantes.
4.1.2. Technique d'une mesure
Dans l'prouvette 4.1.1.3, placer 250 ml d'chantillon prpar pour essais (3),
introduire l'aromtre et le thermomtre. Lire le thermomtre une minute aprs
avoir agit pour raliser l'quilibre de temprature. Retirer le thermomtre et
lire la masse volumique apparente t C sur la tige de l'aromtre aprs une
minute de repos.
Corriger la masse volumique apparente lue t C de l'action de la temprature
l'aide de tables qui s'appliquent aux cas des vins secs (table V), des mots
(table VI) et des vins contenant du sucre (table VII).
La densit 20 C/20 C est obtenue en divisant la masse volumique 20 C par
0,998203.
Tempratures en C
10
11
12
13
14
1,45
1,35
1,24
1,12
0,99
1,51
1,40
1,28
1,16
1,03
1,55
1,43
1,31
1,18
1,05
1,58
1,47
1,34
1,21
1,07
1,64
1,52
1,39
1,25
1,11
1,76
1,58
1,44
1,30
1,14
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27
1,78
1,65
1,50
1,35
1,19
1,89
1,73
1,58
1,42
1,24
1,98
1,83
1,66
1,49
1,31
2,09
1,93
1,75
1,56
1,37
2,21
2,03
1,84
1,64
1,44
2,34
2,15
1,94
1,73
1,52
2,47
2,26
2,04
1,82
1,59
2,60
2,38
2,15
1,91
1,67
2,75
2,51
2,26
2,01
1,75
2,93
2,65
2,38
2,11
1,84
3,06
2,78
2,51
2,22
1,93
3,22
2,93
2,63
2,33
2,03
3,39
3,08
2,77
2,45
2,13
3,57
3,24
2,91
2,57
2,23
3,75
3,40
3,05
2,69
2,33
3,93
3,57
3,19
2,81
2,44
4,12
3,73
3,34
2,95
2,55
4,31
3,90
3,49
3,07
2,66
15
0,86 0,89 0,90 0,92 0,95 0,98 1,02 1,07 1,12 1,17 1,23 1,29 1,35 1,42 1,49 1,56 1,63 1,71 1,80 1,88 1,96 2,05 2,14 2,23
16
17
18
19
20
21
22
23
24
0,71
0,55
0,38
0,19
0,73
0,57
0,39
0,20
0,74
0,57
0,39
0,20
0,76
0,59
0,40
0,21
0,78
0,60
0,41
0,21
0,81
0,62
0,43
0,22
0,84
0,65
0,44
0,23
0,87
0,67
0,46
0,24
0,91
0,70
0,48
0,25
0,95
0,74
0,50
0,26
0,99
0,77
0,52
0,27
1,05
0,81
0,55
0,28
1,10
0,84
0,57
0,29
1,15
0,88
0,60
0,30
1,21
0,92
0,62
0,32
1,27
0,96
0,65
0,33
1,33
1,01
0,68
0,34
1,39
1,05
0,71
0,36
1,45
1,10
0,74
0,38
1,52
1,15
0,78
0,39
1,59
1,20
0,81
0,41
1,66
1,26
0,85
0,43
1,73
1,31
0,88
0,44
1,80
1,36
0,91
0,46
0,21
0,43
0,67
0,91
0,22
0,45
0,69
0,93
0,22
0,45
0,70
0,95
0,23
0,46
0,71
0,97
0,23
0,47
0,72
0,99
0,24
0,49
0,74
1,01
0,25
0,50
0,77
1,04
0,25
0,52
0,79
1,07
0,26
0,54
0,82
1,11
0,27
0,56
0,85
1,15
0,28
0,58
0,88
1,20
0,29
0,60
0,91
1,24
0,31
0,62
0,95
1,29
0,32
0,65
0,99
1,34
0,34
0,68
1,03
1,39
0,35
0,71
1,07
1,45
0,36
0,73
1,12
1,50
0,38
0,77
1,16
1,56
0,39
0,80
1,21
1,62
0,41
0,83
1,25
1,69
0,43
0,86
1,30
1,76
0,44
0,89
1,35
1,82
0,46
0,93
1,40
1,88
0,48
0,96
1,45
1,95
25
1,16 1,19 1,21 1,23 1,26 1,29 1,33 1,37 1,42 1,47 1,52 1,57 1,63 1,70 1,76 1,83 1,90 1,97 2,05 2,13 2,21 2,29 2,37 2,45
26
27
28
29
1,42
1,69
1,97
2,26
30
2,56 2,64 2,67 2,72 2,77 2,83 2,90 2,98 3,08 3,18 3,28 3,38 3,50 3,62 3,75 3,88 4,02 4,16 4,30 4,46 4,61 4,76 4,92 5,07
1,46
1,74
2,03
2,33
1,49
1,77
2,06
2,37
1,51
1,80
2,09
2,41
1,54
1,83
2,14
2,45
1,58
1,88
2,19
2,50
1,62
1,93
2,24
2,57
1,67
1,98
2,31
2,64
1,73
2,05
2,38
2,73
1,79
2,12
2,46
2,82
1,85
2,20
2,55
2,91
1,92
2,27
2,63
2,99
1,99
2,35
2,73
3,11
2,07
2,44
2,83
3,22
t
en d 20
20
2,14
2,53
2,93
3,34
2,22
2,63
3,03
3,46
2,31
2 72
3,14
3,58
2,40
2,82
3,26
3,70
2,49
2,93
3,38
3,84
2,58
3,04
3,50
3,97
2,67
3,14
3,62
4,11
2,77
3,25
3,75
4,25
2,86
3,37
3,85
4,39
2,96
3,48
4,00
4,54

Masse volumique et densit relative 20 C Mthode Type IV
OIV-MA-AS2-01B
TABLE V
Corrections c de temprature sur la masse volumique des vins secs et des vins
secs dbarrasss d'alcool
Mesure l'aide d'un pycnomtre ou d'un aromtre en verre ordinaire, t oC, pour la ramener 20oC,
c__ si too est infrieur 20 oC
_1000
+ si t est suprieur 20 oC
Masses volumiques
1,05 1 ,06 1,07 1,08 1,09 1,10 1,11 1,12 1,13 1,14 1,15 1,16 1,18 1,20 1,22 1,24 1,26 1,28 1,30 1,32 1,34 1,36
10
11
12
13
14
2,17
2,00
1,81
1,62
1,44
2,34
2,16
1,95
1,74
1,54
2,52
2,29
2,08
1,85
1,64
2,68
2,44
2,21
1,96
1,73
2,85
2,59
2,34
2,07
1,82
2,99
2,73
2,47
2,17
1,92
3,16
2,86
2,58
2,28
2,00
3,29
2,99
2,70
2,38
2,08
3,44
3,12
2,82
2,48
2,17
3,58
3,24
2,92
2,59
2,25
3,73
3,37
3,03
2,68
2,34
3,86
3,48
3,14
2,77
2,42
4,13
3,71
3,35
2,94
2,57
4,36
3,94
3,55
3,11
2,73
4,60
4,15
3,72
3,28
2,86
4,82
4,33
3,90
3,44
2,99
5,02
4,52
4,07
3,54
3,12
5,25
4,69
4,23
3,72
3,24
5,39
4,85
4,37
3,86
3,35
5,56
5,01
4,52
3,99
3,46
-5,73
5,15
4,64
4,12
3,57
5,87
5,29
4,77
4,24
3,65
Temprature en C
15 1,21 1,29 1,37 1,45 1,53 1,60 1,68 1,75 1,82 1,89 1,97 2,03 2,16 2,28 2,40 2,51 2,61 2,71 2,80 2,89 2,94 3,01
16
17
18
19
1,00
0,76
0,53
0,28
1,06
0,82
0,56
0,30
1,12
0,86
0,59
0,31
1,19
0,91
0,63
0,33
1,25
0,96
0,65
0,35
1,31
1,00
0,69
0,36
1,37
1,05
0,72
0,38
1,43
1,09
0,74
0,39
1,49
1,14
0,77
0,41
1,54
1,18
0,80
0,42
1,60
1,22
0,82
0,43
1,65
1,25
0,85
0,43
1,75
1,32
0,90
0,46
1,84
1,39
0,95
0,48
1,94
1,46
0,99
0,50
2,02
1,52
1,02
0,52
2,09
1,57
1,05
0,54
2,17
1,63
1,09
0,55
2,23
1,67
1,13
0,57
2,30
1,71
1,16
0,58
2,36
1,75
1,18
0,59
2,42
1,79
1,20
0,60
20
21
22
23
24
0,28
0,55
0,85
1,15
0,29
0,58
0,90
1,19
0,31
0,61
0,95
1,25
0,33
0,64
0,99
1,31
0,34
0,67
1,04
1,37
0,36
0,70
1,08
1,43
0,37
0,73
1,12
1,48
0,39
0,76
1,16
1,54
0,40
0,78
1,21
1,60
0,41
0,81
1,25
1,65
0,43
0,84
1,29
1,71
0,44
0,87
1,32
1,76
0,46
0,93
1,39
1,86
0,48
0,97
1,46
1,95
0,51
1,02
1,52
2,04
0,54
1,06
1,58
2,11
0,56
1,09
1,62
2,17
0,57
1,12
1,68
2,23
0,58
1,15
1,72
2,29
0,59
1,17
1,75
2,33
0,60
1,19
1,77
2,35
0,60
1,19
1,79
2,37
25 1,44 1,52 1,59 1,67 1,74 1,81 1,88 1,95 2,02 2,09 2,16 2,22 2,34 2,45 2,55 2,64 2,74 2,81 7,87 2,90 2,92 2,96
26
27
28
29
1,76
2,07
2,39
2,74
1,84
2,16
2,51
2,86
1,93
2,26
2,63
2,97
2,02
2,36
2,74
3,09
2,10
2,46
2,85
3,22
2,18
2,56
2,96
3,34
2,25
2,65
3,06
3,46
2,33
2,74
3,16
3,57
2,41
2,83
3,28
3,69
2,49
2,91
3,38
3,90
2,56
3,00
3,48
3,90
2,64
3,07
3,57
4,00
2,78
3,24
3,75
4,20
2,91
3,39
3,92
4,39
3,03
3,55
4,08
4,58
3,15
3,69
4,23
4,74
3,26
3,82
4,37
4,90
3,37
3,94
4,51
5,05
3,47
4,04
4,62
5,19
3,55
4,14
4,73
5,31
3,62
4,23
4,80
5,40
3,60
4,30
4,86
5,48
30 3,06 3,21 3,35 3,50 3,63 3,77 3,91 4,02 4,15 4,28 4,40 4,52 4,75 4,96 5,16 5,35 5,52 5,67 5,79 5,91 5,99 6,04
t
Note : n peut utiliser cette table pour transformer la densit d 20
en d 20
20

OIV-MA-AS2-01B
TABLE VI
Corrections c de temprature sur la masse volumique des mots concentrs
mesure t l'aide d'un pycnomtre ou d'un aromtre en verre ordinaire, t o pour la ramener 20 oC,
c
Vins de 13% volume
Vins de 15% volume
Vins de 17% volume
Masses volumiques
Masses volumiques
Masses volumiques
Temprature en C
1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120
10
2,24 2,58 2,93 3,27 3,59 3,89 4,18 2,51 2,85 3,20 3,54 3,85 4,02 4,46 2,81 3,15 3,50 3,84 4,15 4,45 4,74
11
12
13
14
2,06
1,87
1,69
1,49
15
1,25 1,42 1,59 1,75 1,90 2,05 2,19 1,39 1,56 1,72 1,88 2,03 2,11 2,32 1,54 1,71 1,87 2,03 2,18 2,32 2,47
16
17
18
19
1,03
0,80
0,54
0,29
1,17
0,90
0,61
0,33
1,30
1,00
0,68
0,36
1,43
1,09
0,75
0,39
1,55
1,17
0,81
0,42
1,67
1,27
0,86
0,45
1,78
1,36
0,92
0,48
1,06
0,87
0,60
0,32
1,27
0,98
0,66
0,36
1,40
1,08
0,73
0,39
1,53
1,17
0,80
0,42
1,65
1,26
0,85
0,45
1,77
1,35
0,91
0,48
1,88
1,44
0,97
0,51
1,25
0,96
0,66
0,35
1,39
1,06
0,72
0,38
1,52
1,16
0,79
0,41
1,65
1,26
0,86
0,45
1,77
1,35
0,92
0,48
1,89
1,44
0,97
0,51
2,00
1,52
1,03
0,53
21
22
23
24
0,29
0,57
0,89
1,22
0,32
0,64
0,98
1,34
0,35
0,70
1,08
1,44
0,39
0,76
1,17
1,56
0,42
0,82
1,26
1,68
0,45
0,88
1,34
1,79
0,47
0,93
1,43
1,90
0,32
0,63
0,97
1,32
0,35
0,69
1,06
1,44
0,38
0,75
1,16
1,54
0,42
0,81
1,25
1,66
0,45
0,87
1,34
1,78
0,48
0,93
1,42
1,89
0,50
0,99
1,51
2,00
0,34
0,68
1,06
1,43
0,38
0,75
1,15
1,56
0,41
0,81
1,25
1,65
0,44
0,87
1,34
1,77
0,47
0,93
1,42
1,89
0,50
0,99
1,51
2,00
0,53
1,04
1,59
2,11
25
1,61 1,68 1,83 1,98 2,12 2,26 2,40 1,66 1,81 1,96 2,11 2,25 2,39 2,52 1,80 1,94 2,09 2,24 2,39 2,52 2,66
26
27
28
29
1,87
2,21
2,56
2,93
30
3,31 3,57 3,86 4,15 4,41 4,66 4,92 3,55 3,81 4,10 4,38 4,66 4,90 5,16 3,82 4,08 4,37 4,65 4,93 5,17 5,42
2,37
2,14
1,93
1,70
2,69
2,42
2,14
1,90
2,97
2,67
2,37
2,09
3,26
2,94
2,59
2,27
3,53
3,17
2,80
2,44
3,78
3,40
3,00
2,61
2,31
2,09
1,88
1,67
2,61
2,36
2,12
1,86
2,93
2,64
2,34
2,06
3,21
2,90
2,56
2,25
3,51
3,16
2,78
2,45
3,64
3,27
2,88
2,51
4,02
3,61
3,19
2,77
2,57
2,32
2,09
1,83
2,89
2,60
2,33
2,03
3,20
2,87
2,55
2,23
3,49
3,13
2,77
2,42
3,77
3,39
2,98
2,61
4,03
3,63
3,19
2,77
4,28
3,84
3,39
2,94
20
2,05
2,42
2,80
3,19
2,22
2,60
3,02
3,43
2,40
2,80
3,25
3,66
2,56
3,00
3,47
3,91
2,71
3,18
3,67
4,14
2,87
3,35
3,89
4,37
2,02
2,39
2,75
3,16
2,20
2,59
2,89
3,41
2,37
2,78
3,22
3,65
2,54
2,98
3,44
3,89
2,70
3,17
3,66
4,13
2,85
3,35
3,96
4,36
3,01
3,52
4,07
4,59
2,18
2,58
2,97
3,40
2,36
2,78
3,21
3,66
2,53
2,97
3,44
3,89
2,71
3,17
3,66
4,13
2,86
3,36
3,88
4,38
3,02
3,54
4,09
4,61
3,17
3,71
4,30
4,82

OIV-MA-AS2-01B
TABLE VII
o
o
__c___ si to est infrieur 20 oC
1000 + si t est suprieur 20 C
Tempratures en C
Vins de 19% volume
Vins de 21% volume
Masses volumiques
Masses volumiques
1,000
1,020
1,040
1,060
1,080
1,100
1,120
1,000
1,020
1,040
1,060
1,080
1,100
1,120
10
11
12
13
14
3,14
2,87
2,58
2,31
2,03
3,48
3,18
2,96
2,55
2,23
3,83
3,49
3,13
2,77
2,43
4,17
3,78
3,39
2,99
2,61
4,48
4,06
3,65
3,20
2,80
4,78
4,32
3,88
3,41
2,96
5,07
4,57
4,10
3,61
3,13
3,50
3,18
2,86
2,56
2,23
3,84
3,49
3,13
2,79
2,43
4,19
3,80
3,41
3,01
2,63
4,52
4,09
3,67
3,23
2,81
4,83
4,34
3,92
3,44
3,00
5,12
4,63
4,15
3,65
3,16
5,41
4,88
4,37
3,85
3,33
15
1,69
1,86
2,02
2,18
2,33
2,48
2,62
1,86
2,03
2,19
2,35
2,50
2,65
2,80
16
17
18
19
20
21
22
23
24
1,38
1,06
0,73
0,38
1,52
1,16
0,79
0,41
1,65
1,26
0,85
0,44
1,78
1 ,35
0,92
0,48
1,90
1,44
0,98
0,51
2,02
1,53
1,03
0,52
2,13
1,62
1,09
0,56
1,51
1,15
0,79
0,41
1,65
1,25
0,85
0,44
1,78
1,35
0,92
0,47
1,91
1,45
0,98
0,51
2,03
1,54
1,05
0,54
2,15
1,63
1,10
0,57
2,26
1,71
1,15
0,59
0,37
0,75
1,15
1,55
0,41
0,81
1,30
1,67
0,44
0,87
1,34
1,77
0,47
0,93
1,43
1,89
0,50
0,99
1,51
2,00
0,53
1,04
1,60
2,11
0,56
1,10
1,68
2,23
0,41
0,81
1,25
1,68
0,44
0,88
1,34
1,80
0,47
0,94
1,44
1,90
0,51
1,00
1,63
2,02
0,54
1,06
1,61
2,13
0,57
1,10
1,70
2,25
0,59
1,17
1,78
2,36
25
1,95
2,09
2,24
2,39
2,53
2,67
2,71
2,11
2,25
2,40
2,55
2,69
2,83
2,97
26
27
28
29
2,36
2,79
3,20
3,66
2,54
2,99
3,44
3,92
2,71
3,18
3,66
4,15
2,89
3,38
3,89
4,40
3,04
3,57
4,11
4,64
3,20
3,75
4,32
4,87
3,35
3,92
4,53
5,08
2,55
3,01
3,46
3,95
2,73
3,20
3,69
4,20
2,90
3,40
3,93
4,43
3,07
3,59
4,15
4,68
3,22
3,78
4,36
4,92
3,38
3,96
4,58
5,15
3,54
4,13
4,77
5,36
30
4,11
4,37
4,66
4,94
5,22
5,46
5,71
4,42
4,68
4,97
5,25
5,53
5,77
6,02

OIV-MA-AS2-01B
TABLE VII (suite)

o
est infrieur 20 oC
__c__ si to est
suprieur 20 oC
1000 + si t

BIBLIOGRAPHIE
JAULMES P,, Bull, O,I,V,, 1953, 26, No 274, 6,

JAULMES P,, BRUN Mme S,, Trav, Soc, Pharm,, Montpellier, 1956, 16, 115 ;
1960,
20, 137 ; Ann, Fals, Exp, Chim,, 1963, 46, 129 et 143,
BRUN Mme S, et TEP Y,, Ann, Fals, Exp, Chim,, 37-40 ; F,V,, O,I,V,, 1975, No
539,
OIV-MA-AS2-01B

Evaluation de la teneur en sucre - rfractomtrie
Mthode OIV-MA-AS2-02
Mthode Type I
valuation de la teneur en sucres des mots, des mots

concentrs et du sucre de raisin par rfractomtrie
(OENO 21/2004)
1. Principe de la mthode
L'indice de rfraction 20 C, exprim en indice absolu ou en pourcentage en
masse de saccharose, est report dans la table correspondante pour obtenir la teneur
en sucres en grammes par litre et en grammes par kilogramme des mots, des
mots concentrs et du sucre de raisin.
2. Appareillage
Rfractomtre du type Abb.
Le rfractomtre utilis doit tre pourvu d'une chelle indiquant :
- soit les pourcentages en masse de saccharose 0,1 % prs,
- soit les indices de rfraction avec 4 dcimales.
Le rfractomtre doit tre pourvu d'un thermomtre dont l'chelle s'tendra au
moins de + 15 C + 25 C et d'un dispositif de circulation d'eau permettant de
faire les mesures une temprature de 20 C 5 C.
Les instructions opratoires de cet instrument doivent tre strictement suivies,
notamment en ce qui concerne l'talonnage et la source lumineuse.
3. Prparation de lchantillon
3.1. Mots et mots concentrs
Passer les mots ventuellement travers une gaze sche plie en quatre et, aprs
avoir limin les premires gouttes de filtrat, faire la dtermination sur le produit
filtr.
3.2. Sucre de raisin
Utiliser, selon sa concentration, soit le sucre de raisin, soit la solution obtenue en
portant 500 g, avec de l'eau, 200 g du sucre de raisin exactement pess.
4. Mode opratoire
Amener l'chantillon une temprature voisine de 20 C.
Dposer une petite prise d'essai sur le prisme infrieur du rfractomtre en veillant
ce que, les prismes tant presss l'un contre l'autre, la prise d'essai couvre
uniformment la surface du verre, et effectuer la mesure conformment aux
instructions opratoires de l'appareil utilis. Lire le pourcentage en masse de
saccharose 0,1 % prs ou relever l'indice de rfraction avec quatre dcimales.
OIV-MA-AS2-02 : R2012

Effectuer au moins deux dterminations sur le mme chantillon prpar. Relever

la temprature t C.
5. Calculs
5.1. Correction de temprature
- Appareils gradus en % en masse de saccharose : utiliser la Table I pour la
correction de temprature.
- Appareils gradus en indices de rfraction; reporter l'indice mesur t C
dans la Table II pour obtenir (colonne 1) la valeur correspondante du
pourcentage en masse de saccharose t C. Cette valeur est corrige de la
temprature et exprime 20 C au moyen de la Table I.
5.2. Teneur en sucres des mots et des mots concentrs
Reporter le pourcentage en masse de saccharose 20 C dans la Table II pour
obtenir la teneur en sucres en grammes par litre et en grammes par kilogramme.
La teneur en sucres est exprime en sucre interverti avec une dcimale.
5.3. Teneur en sucres du sucre de raisin
Reporter le pourcentage en masse de saccharose 20 C dans la table III pour
obtenir la teneur en sucres en grammes par litre et en grammes par kilogramme.
La teneur en sucre est exprime en sucre interverti avec une dcimale.
Si la mesure a t effectue sur le sucre de raisin dilu, multiplier le rsultat par
le facteur de dilution.
5.4. Indice de rfraction des mots, des mots concentrs et du sucre de raisin
Reporter le pourcentage en masse de saccharose 20 C dans la Table II pour
obtenir l'indice de rfraction 20 C. Cet indice est exprim avec quatre
dcimales.
OIV-MA-AS2-02 : R2012
2

Table I
Correction apporter dans le cas o le pourcentage en masse de saccharose a t
dtermin une temprature diffrente de 20 C.
Temprat
ure
C
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
Titre massique mesur en %
10
15
20
0,82
0,80
0,74
0,69
0,64
0,59
0,54
0,49
0,43
0,38
0,32
0,26
0,20
0,13
0,07
0
+0,07
+0,14
+0,21
+0,29
+0,36
+0,44
+0,52
+0,60
+0,68
+0,77
+0,85
+0,94
+1,03
+1,12
+1,22
+1,31
+1,41
+1,51
+1,61
+1,71
0,87
0,82
0,78
0,73
0,67
0,62
0,57
0,51
0,45
0,39
0,33
0,27
0,20
0,14
0,07
0,92
0,87
0,82
0,76
0,71
0,65
0,59
0,53
0,47
0,40
0,34
0,28
0,21
0,14
0,07
+0,07
+0,14
+0,22
+0,29
+0,37
+0,45
+0,53
+0,61
+0,69
+0,78
+0,87
+0,95
+1,04
+1,19
+1,23
+1,32
+1,42
+1,52
+1,62
+1,72
+0,07
+0,15
+0,22
+0,30
+0,38
+0,46
+0,54
+0,62
+0,70
+0,79
+0,88
+0,96
+1,05
+1,15
+1,24
+1,33
+1,43
+1,53
+1,62
+1,72
25
30
35
40
0,95 0,99
0,90 0,94
0,84 0,88
0,79 0,82
0,73 0,75
0,67 0,69 0,71 0,72
0,61 0,63 0,64 0,65
0,55 0,56 0,57 0,58
0,48 0,50 0,51 0,52
0,42 0,43 0,44 0,44
0,35 0,36 0,37 0,37
0,28 0,29 0,30 0,30
0,21 0,22 0,22 0,23
0,14 0,15 0,15 0,15
0,07 0,07 0,08 0,08
RFREN CE
+0,07 +0,08 +0,08 +0,08
+0,15 +0,15 +0,15 +0,16
+0,23 +0,23 +0,23 +0,23
+0,30 +0,31 +0,31 +0,31
+0,38 +0,39 +0,39 +0,40
+0,46 +0,47 +0,47 +0,48
+0,55 +0,55 +0,56 +0,56
+0,63 +0,64 +0,64 +0,64
+0,71 +0,72 +0,73 +0,73
+0,80 +0,81 +0,81 +0,81
+0,89 +0,89 +0,90 +0,90
+0,97 +0,98 +0,99 +0,99
+1,06 +1,07 +1,08 +1,08
+1,15 +1,16 +1,17 +1,17
+1,25 +1,25 +1,26 +1,26
+1,34 +1,35 +1,35 +1,35
+1,44 +1,44 +1,44 +1,44
+1,53 +1,54 +1,54 +1,53
+1,63 +1,63 +1,63 +1,63
+1,73 +1,73 +1,73 +1,72
45
50
55
60
65
70
75
0,73
0,66
0,59
0,52
0,45
0,38
0,30
0,23
0,15
0,08
0,74
0,67
0,60
0,53
0,45
0,38
0,31
0,23
0,15
0,08
0,75
0,68
0,60
0,53
0,46
0,38
0,31
0,23
0,15
0,08
0,75
0,68
0,61
0,53
0,46
0,38
0,31
0,23
0,15
0,08
0,75
0,68
0,61
0,53
0,46
0,38
0,31
0,23
0,15
0,08
0,75
0,67
0,60
0,53
0,45
0,38
0,30
0,23
0,15
0,08
+0,08
+0,16
+0,24
+0,32
+0,40
+0,48
+0,56
+0,65
+0,73
+0,82
+0,90
+0,99
+1,08
+1,17
+1,25
+1,35
+1,44
+1,53
+1,62
+1,71
+0,08
+0,16
+0,24
+0,32
+0,40
+0,48
+0,56
+0,65
+0,73
+0,81
+0,90
+0,99
+1,07
+1,16
+1,25
+1,34
+1,43
+1,52
+1,61
+1,70
+0,08
+0,16
+0,24
+0,32
+0,40
+0,48
+0,56
+0,64
+0,73
+0,81
+0,90
+0,98
+1,07
+1,15
+1,24
+1,33
+1,42
+1,51
+1,60
+1,69
+0,08
+0,16
+0,24
+0,32
+0,40
+0,48
+0,56
+0,64
+0,72
+0,81
+0,89
+0,97
+1,06
+1,14
+1,23
+1,32
+1,40
+1,49
+1,58
+1,67
+0,08
+0,16
+0,23
+0,31
+0,39
+0,47
+0,55
+0,64
+0,72
+0,80
+0,88
+0,96
+1,05
+1,13
+1,21
+1,30
+1,38
+1,47
+1,56
+1,64
0,75
0,68
0,60
0,53
0,46
0,38
0,31
0,23
0,15
0,08
0
+0,08
+0,15
+0,23
+0,31
+0,39
+0,47
+0,55
+0,63
+0,71
+0,79
+0,87
+0,95
+1,03
+1,12
+1,20
+1,28
+1,36
+1,45
+1,53
+1,62
+0,08
+0,15
+0,23
+0,31
+0,39
+0,46
+0,54
+0,62
+0,70
+0,78
+0,86
+0,94
+1,02
+1,10
+1,18
+1,26
+1,34
+1,42
+1,50
+1,59
Il est prfrable que les variations de temprature par rapport 20 C nexcdent

pas 5 C.
OIV-MA-AS2-02 : R2012
3

TABLEAU II
Tableau donnant la teneur en sucres des mots et des mots concentrs en grammes par litre et en
grammes par kilogramme, dtermine au moyen d'un rfractomtre gradu, soit en pourcentage en
masse de saccharose 20 C, soit en indice de rfraction 20 C. La masse volumique et le titre
alcoomtrique volumique en puissance %vol 20 C sont galement donns.
Saccharose
% (m/m)
Indice de
rfraction 20 C
Masse
volumique 20 C
Sucres en
g/l
Sucres en
g/kg
TAV
% vol 20 C
10.0
10.1
10.2
10.3
10.4
10.5
10.6
10.7
10.8
10.9
11.0
11.1
11.2
11.3
11.4
11.5
11.6
11.7
11.8
11.9
12.0
12.1
12.2
12.3
12.4
12.5
12.6
12.7
12.8
12.9
13.0
13.1
13.2
13.3
13.4
13.5
13.6
13.7
13.8
13.9
14.0
14.1
14.2
14.3
14.4
14.5
14.6
14.7
14.8
14.9
1.34782
1.34798
1.34813
1.34829
1.34844
1.34860
1.34875
1.34891
1.34906
1.34922
1.34937
1.34953
1.34968
1.34984
1.34999
1.35015
1.35031
1.35046
1.35062
1.35077
1.35093
1.35109
1.35124
1.35140
1.35156
1.35171
1.35187
1.35203
1.35219
1.35234
1.35250
1.35266
1.35282
1.35298
1.35313
1.35329
1.35345
1.35361
1.35377
1.35393
1.35408
1.35424
1.35440
1.35456
1.35472
1.35488
1.35504
1.35520
1.35536
1.35552
1.0391
1.0395
1.0399
1.0403
1.0407
1.0411
1.0415
1.0419
1.0423
1.0427
1.0431
1.0436
1.0440
1.0444
1.0448
1.0452
1.0456
1.0460
1.0464
1.0468
1.0472
1.0477
1.0481
1.0485
1.0489
1.0493
1.0497
1.0501
1.0506
1.0510
1.0514
1.0518
1.0522
1.0527
1.0531
1.0535
1.0539
1.0543
1.0548
1.0552
1.0556
1.0560
1.0564
1.0569
1.0573
1.0577
1.0581
1.0586
1.0590
1.0594
82.2
83.3
84.3
85.4
86.5
87.5
88.6
89.6
90.7
91.8
92.8
93.9
95.0
96.0
97.1
98.2
99.3
100.3
101.4
102.5
103.5
104.6
105.7
106.8
107.8
108.9
110.0
111.1
112.2
113.2
114.3
115.4
116.5
117.6
118.7
119.7
120.8
121.9
123.0
124.1
125.2
126.3
127.4
128.5
129.6
130.6
131.7
132.8
133.9
135.0
79.1
80.1
81.1
82.1
83.1
84.1
85.0
86.0
87.0
88.0
89.0
90.0
91.0
92.0
92.9
93.9
94.9
95.9
96.9
97.9
98.9
99.9
100.8
101.8
102.8
103.8
104.8
105.8
106.8
107.8
108.7
109.7
110.7
111.7
112.7
113.7
114.7
115.6
116.6
117.6
118.6
119.6
120.6
121.6
122.5
123.5
124.5
125.5
126.5
127.5
4.89
4.95
5.01
5.08
5.14
5.20
5.27
5.32
5.39
5.46
5.52
5.58
5.65
5.71
5.77
5.84
5.90
5.96
6.03
6.09
6.15
6.22
6.28
6.35
6.41
6.47
6.54
6.60
6.67
6.73
6.79
6.86
6.92
6.99
7.05
7.11
7.18
7.24
7.31
7.38
7.44
7.51
7.57
7.64
7.70
7.76
7.83
7.89
7.96
8.02
OIV-MA-AS2-02 : R2012
4

TABLEAU II - (suite)
Saccharose
% (m/m)
15.0
15.1
15.2
15.3
15.4
15.5
15.6
15.7
15.8
15.9
16.0
16.1
16.2
16.3
16.4
16.5
16.6
16.7
16.8
16.9
17.0
17.1
17.2
17.3
17.4
17.5
17.6
17.7
17.8
17.9
18.0
18.1
18.2
18.3
18.4
18.5
18.6
18.7
18.8
18.9
19.0
19.1
19.2
19.3
19.4
19.5
19.6
19.7
19.8
19.9
Indice de
rfraction 20 C
1.35568
1.35584
1.35600
1.35616
1.35632
1.35648
1.35664
1.35680
1.35696
1.35713
1.35729
1.35745
1.35761
1.35777
1.35793
1.35810
1.35826
1.35842
1.35858
1.35874
1.35891
1.35907
1.35923
1.35940
1.35956
1.35972
1.35989
1.36005
1.36021
1.36038
1.36054
1.36070
1.36087
1.36103
1.36120
1.36136
1.36153
1.36169
1.36185
1.36202
1.36219
1.36235
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11.27
11.34
OIV-MA-AS2-02 : R2012
5

Saccharose
% (m/m)
Indice de
rfraction 20 C
Masse
volumique 20 C
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g/l
Sucres en
g/kg
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TAV
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20.1
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14.62
14.69
14.76
OIV-MA-AS2-02 : R2012
6

Saccharose
% (m/m)
Refractive Index
at 20C
Mass
Density at 20C
Sugars
In g/l
Sugars
In g/Kg
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At 20C
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25.1
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OIV-MA-AS2-02 : R2012
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34.8
34.9
Indice de
rfraction 20 C
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OIV-MA-AS2-02 : R2012
8

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OIV-MA-AS2-02 : R2012
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OIV-MA-AS2-02 : R2012
11

Saccharose
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Indice de
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OIV-MA-AS2-02 : R2012
12

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Indice de
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580.3
581.2
582.1
583.0
583.9
584.8
585.7
586.6
587.5
588.4
589.3
590.2
591.1
592.0
592.9
593.8
594.7
595.6
596.5
597.4
598.3
TAV
% vol 20 C
42.59
42.68
42.77
42.85
42.95
43.04
43.13
43.22
43.31
43.40
43.49
43.59
43.68
43.76
43.86
43.95
44.04
44.13
44.22
44.32
44.41
44.50
44.59
44.69
44.77
44.87
44.96
45.05
45.14
45.24
45.33
45.42
45.51
45.61
45.70
45.79
45.89
45.98
46.07
46.17
46.25
46.35
46.44
46.53
46.63
46.72
46.82
46.91
47.00
47.10
OIV-MA-AS2-02 : R2012
14

Saccharose
% (m/m)
55.0
55.1
55.2
55.3
55.4
55.5
55.6
55.7
55.8
55.9
56.0
56.1
56.2
56.3
56.4
56.5
56.6
56.7
56.8
56.9
57.0
57.1
57.2
57.3
57.4
57.5
57.6
57.7
57.8
57.9
58.0
58.1
58.2
58.3
58.4
58.5
58.6
58.7
58.8
58.9
59.0
59.1
59.2
59.3
59.4
59.5
59.6
59.7
59.8
59.9
Indice de
rfraction 20 C
1.43080
1.43102
1.43124
1.43146
1.43168
1.43189
1.43211
1.43233
1.43255
1.43277
1.43299
1.43321
1.43343
1.43365
1.43387
1.43410
1.43432
1.43454
1.43476
1.43498
1.43520
1.43542
1.43565
1.43587
1.43609
1.43631
1.43653
1.43676
1.43698
1.43720
1.43743
1.43765
1.43787
1.43810
1.43832
1.43855
1.43877
1.43899
1.43922
1.43944
1.43967
1.43989
1.44012
1.44035
1.44057
1.44080
1.44102
1.44125
1.44148
1.44170
Masse
volumique 20 C
1.2635
1.2641
1.2647
1.2653
1.2659
1.2665
1.2671
1.2677
1.2683
1.2689
1.2695
1.2701
1.2706
1.2712
1.2718
1.2724
1.2730
1.2736
1.2742
1.2748
1.2754
1.2760
1.2766
1.2773
1.2779
1.2785
1.2791
1.2797
1.2803
1.2809
1.2815
1.2821
1.2827
1.2833
1.2839
1.2845
1.2851
1.2857
1.2863
1.2870
1.2876
1.2882
1.2888
1.2894
1.2900
1.2906
1.2912
1.2919
1.2925
1.2931
Sucres en
g/l
641.9
643.4
644.8
646.3
647.8
649.2
650.7
652.2
653.7
655.1
656.6
658.1
659.6
661.0
662.5
664.0
665.5
667.0
668.5
669.9
671.4
672.9
674.4
675.9
677.4
678.9
680.4
681.9
683.4
684.9
686.4
687.9
689.4
690.9
692.4
693.9
695.4
696.9
698.4
699.9
701.4
702.9
704.4
706.0
707.5
709.0
710.5
712.0
713.5
715.1
Sucres en
g/kg
508.0
508.9
509.9
510.8
511.7
512.6
513.5
514.5
515.4
516.3
517.2
518.1
519.1
520.0
520.9
521.8
522.7
523.7
524.6
525.5
526.4
527.3
528.3
529.2
530.1
531.0
531.9
532.8
533.8
534.7
535.6
536.5
537.4
538.3
539.3
540.2
541.1
542.0
542.9
543.8
544.8
545.7
546.6
547.5
548.4
549.3
550.2
551.1
552.1
553.0
TAV
% vol 20 C
38.15
38.24
38.32
38.41
38.50
38.58
38.67
38.76
38.85
38.93
39.02
39.11
39.20
39.28
39.37
39.46
39.55
39.64
39.73
39.81
39.90
39.99
40.08
40.17
40.26
40.35
40.44
40.53
40.61
40.70
40.79
40.88
40.97
41.06
41.15
41.24
41.33
41.42
41.51
41.60
41.68
41.77
41.86
41.96
42.05
42.14
42.23
42.31
42.40
42.50
OIV-MA-AS2-02 : R2012
15

Saccharose
% (m/m)
Indice de
rfraction 20 C
Masse
volumique 20 C
Sucres en
g/l
Sucres en
g/kg
TAV
% vol 20 C
70.0
70.1
70.2
70.3
70.4
70.5
70.6
70.7
70.8
70.9
71.0
71.1
71.2
71.3
71.4
71.5
71.6
71.7
71.8
71.9
72.0
72.1
72.2
72.3
72.4
72.5
72.6
72.7
72.8
72.9
73.0
73.1
73.2
73.3
73.4
73.5
73.6
73.7
73.8
73.9
74.0
74.1
74.2
74.3
74.4
74.5
74.6
74.7
74.8
74.9
1.46546
1.46570
1.46594
1.46619
1.46643
1.46668
1.46692
1.46717
1.46741
1.46766
1.46790
1.46815
1.46840
1.46864
1.46889
1.46913
1.46938
1.46963
1.46987
1.47012
1.47037
1.47062
1.47086
1.47111
1.47136
1.47161
1.47186
1.47210
1.47235
1.47260
1.47285
1.47310
1.47335
1.47360
1.47385
1.47410
1.47435
1.47460
1.47485
1.47510
1.47535
1.47560
1.47585
1.47610
1.47635
1.47661
1.47686
1.47711
1.47736
1.47761
1.3576
1.3583
1.3590
1.3596
1.3603
1.3610
1.3616
1.3623
1.3630
1.3636
1.3643
1.3650
1.3656
1.3663
1.3670
1.3676
1.3683
1.3690
1.3696
1.3703
1.3710
1.3717
1.3723
1.3730
1.3737
1.3743
1.3750
1.3757
1.3764
1.3770
1.3777
1.3784
1.3791
1.3797
1.3804
1.3811
1.3818
1.3825
1.3831
1.3838
1.3845
1.3852
1.3859
1.3865
1.3872
1.3879
1.3886
1.3893
1.3899
1.3906
874.5
876.1
877.7
879.4
881.0
882.7
884.3
886.0
887.6
889.3
890.9
892.6
894.2
895.9
897.5
899.2
900.8
902.5
904.1
905.8
907.5
909.1
910.8
912.5
914.1
915.8
917.5
919.1
920.8
922.5
924.2
925.8
927.5
929.2
930.9
932.6
934.3
935.9
937.6
939.3
941.0
942.7
944.4
946.1
947.8
949.5
951.2
952.9
954.6
956.3
644.1
645.0
645.9
646.8
647.7
648.5
649.4
650.3
651.2
652.1
653.0
653.9
654.8
655.7
656.6
657.5
658.3
659.2
660.1
661.0
661.9
662.8
663.7
664.6
665.5
666.3
667.2
668.1
669.0
669.9
670.8
671.7
672.6
673.5
674.3
675.2
676.1
677.0
677.9
678.8
679.7
680.6
681.4
682.3
683.2
684.1
685.0
685.9
686.8
687.7
51.97
52.07
52.16
52.26
52.36
52.46
52.55
52.65
52.75
52.85
52.95
53.05
53.14
53.24
53.34
53.44
53.53
53.64
53.73
53.83
53.93
54.03
54.13
54.23
54.32
54.43
54.53
54.62
54.72
54.82
54.93
55.02
55.12
55.22
55.32
55.42
55.53
55.62
55.72
55.82
55.92
56.02
56.13
56.23
56.33
56.43
56.53
56.63
56.73
56.83
OIV-MA-AS2-02 : R2012
16

TABLEAU III
Tableau donnant la teneur en sucres, exprime en sucre interverti, du sucre de raisin en

grammes par litre et en grammes par kilogramme, dtermine au moyen d'un rfractomtre
gradu, soit en pourcentage en masse de saccharose 20 C, soit en indice de rfraction
20 C. La masse volumique et le titre alcoomtrique volumique en puissance (%vol 20
C) sont galement donns.
OIV-MA-AS2-02 : R2012
17

TABLEAU III
Saccharose Indice de rfraction
Masse
% (m/m)
20 C
volumique 20 C
50,0
50,1
50,2
50,3
50,4
50,5
50,6
50,7
50,8
50,9
51,0
51,1
51,2
51,3
51,4
51,5
51,6
51,7
51,8
51,9
52,0
52,1
52,2
52,3
52,4
52,5
52,6
52,7
52,8
52,9
53,0
53,1
53,2
53,3
53,4
53,5
53,6
53,7
53,8
53,9
54,0
54,1
54,2
54,3
54,4
54,5
54,6
54,7
54,8
54,9
1,42008
1,42029
1,42050
1,42071
1,42092
1,42113
1,42135
1,42156
1,42177
1,42198
1,42219
1,42240
1,42261
1,42282
1,42304
1,42325
1,42347
1,42368
1,42389
1,42410
1,42432
1,42453
1,42475
1,42496
1,42517
1,42538
1,42560
1,42581
1,42603
1,42624
1,42645
1,42667
1,42689
1,42711
1,42733
1,42754
1,42776
1,42797
1,42819
1,42840
1,42861
1,42884
1,42906
1,42927
1,42949
1,42971
1,42993
1,43014
1,43036
1,43058
1,2342
1,2348
1,2355
1,2362
1,2367
1,2374
1,2381
1,2386
1,2391
1,2396
1,2401
1,2406
1,2411
1,2416
1,2421
1,2427
1,2434
1,2441
1,2447
1,2454
1,2461
1,2466
1,2470
1,2475
1,2480
1,2486
1,2493
1,2500
1,2506
1,2513
1,2520
1,2525
1,2530
1,2535
1,2540
1,2546
1,2553
1,2560
1,2566
1,2573
1,2580
1,2585
1,2590
1,2595
1,2600
1,2606
1,2613
1,2620
1,2625
1,2630
Sucre en
g/l
Sucre en
g/kg
% vol. 20 C
TAV
627,6
629,3
630,9
632,4
634,1
635,7
637,3
638,7
640,4
641,9
643,4
645,0
646,5
648,1
649,6
651,2
652,9
654,5
656,1
657,8
659,4
661,0
662,5
664,1
665,6
667,2
668,9
670,5
672,2
673,8
675,5
677,1
678,5
680,2
681,8
683,4
685,1
686,7
688,4
690,1
691,7
693,3
694,9
696,5
698,1
699,7
701,4
703,1
704,7
706,2
508,5
509,6
510,6
511,6
512,7
513,7
514,7
515,7
516,8
517,8
518,8
519,9
520,9
522,0
523,0
524,0
525,1
526,1
527,1
528,2
529,2
530,2
531,3
532,3
533,3
534,4
535,4
536,4
537,5
538,5
539,5
540,6
541,5
542,6
543,7
544,7
545,8
546,7
547,8
548,9
549,8
550,9
551,9
553,0
554,0
555,1
556,1
557,1
558,2
559,1
37,30
37,40
37,49
37,58
37,68
37,78
37,87
37,96
38,06
38,15
38,24
38,33
38,42
38,52
38,61
38,70
38,80
38,90
38,99
39,09
39,19
39,28
39,37
39,47
39,56
39,65
39,75
39,85
39,95
40,04
40,14
40,24
40,32
40,42
40,52
40,61
40.72
40,81
40,91
41,01
41,11
41,20
41,30
41,39
41,49
41,58
41,68
41,79
41,88
41,97
OIV-MA-AS2-02 : R2012
18

TABLEAU III (suite)
Saccharose
% (m/m)
Indice de
rfraction 20 C
Masse
volumique 20 C
Sucres en
g/l
Sucres en
g/kg
TAV % vol.
55,0
55,1
55,2
55,3
55,4
55,5
55,6
55,7
55,8
55,9
56,0
56,1
56,2
56,3
56,4
56,5
56,6
56,7
56,8
56,9
57,0
57,1
57,2
57,3
57,4
57,5
57,6
57,7
57,8
57,9
58,0
58,1
58,2
58,3
58,4
58,5
58,6
58,7
58,8
58,9
59,0
59,1
59,2
59,3
59,4
59,5
59,6
59,7
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1,43586
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1,43698
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1,43741
1,43764
1,43784
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1,44079
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1,2639
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1,2685
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1,2699
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1,2751
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1,2763
1,2768
1,2773
1,2778
1,2784
1,2791
1,2798
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1,2810
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1,2832
1,2837
1,2843
1,2850
1,2857
1,2863
1,2869
1,2876
1,2882
1,2889
1,2896
1,2902
1,2909
1,2916
1,2921
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709,4
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569,5
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42,96
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43,15
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43,34
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43,54
43,64
43,74
43,84
43,94
44,04
44,14
44,24
44,33
44,43
44,53
44,63
44,73
44,83
44,94
45,04
45,14
45,23
45,32
45,42
45,52
45,63
45,73
45,83
45,93
46,03
46,14
46,24
46,34
46,45
46,55
46,66
46,76
46,85
59,9
1,44169
1,2931
790,0
610,9
46,95
20 C
OIV-MA-AS2-02 : R2012
19

TABLEAU III - (suite)
Saccharose
% (m/m)
Indice de
rfraction 20 C
Masse
volumique 20 C
Sucres en
g/l
Sucres en
g/kg
TAV % vol.
60,0
60,1
60,2
60,3
60,4
60,5
60,6
60,7
60,8
60,9
61,0
61,1
61,2
61,3
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61,7
61,8
61,9
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62,1
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62,6
62,7
62,8
62,9
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64,2
64,3
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64,6
64,7
64,8
64,9
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1,44215
1,44238
1,44260
1,44283
1,44305
1,44328
1,44351
1,44374
1,44397
1,44419
1,44442
1,44465
1,44488
1,44511
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1,44580
1,44603
1,44626
1,44648
1,44672
1,44695
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1,44741
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1,44787
1,44810
1,44833
1,44856
1,44879
1,44902
1,44926
1,44949
1,44972
1,44995
1,45019
1,45042
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1,45181
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1,2986
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1,2996
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1,3009
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1,3080
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1,3090
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1,3161
1,3168
1,3175
1,3180
1,3185
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1,3195
1,3201
1,3208
1,3215
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1,3228
1,3235
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793,3
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47,57
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47,87
47,97
48,06
48,17
48,27
48,39
48,48
48,60
48,70
48,81
48,91
49,02
49,12
49,23
49,33
49,43
49,53
49,63
49,73
49,83
49,93
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50,15
50,26
50,37
50,47
50,58
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50,79
50,90
51,01
51,11
51,20
51,31
51,41
51,52
51,63
51,74
51,84
51,95
52,06
52,17
20 C
OIV-MA-AS2-02 : R2012
20

Saccharose
% (m/m)
65,0
65,1
65,2
65,3
65,4
65,5
65,6
65,7
65,8
65,9
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67,9
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68,4
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68,7
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69,0
69,1
69,2
69,3
69,4
69,5
69,6
69,7
69,8
69,9
Indice de
rfraction 20
C
1,45347
1,45369
1,45393
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1,45747
1,45771
1,45795
1,45820
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1,45867
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1,46301
1,46323
1,46347
1,46371
1,46396
1,46420
1,46444
1,46468
1,46493
1,46517
Masse
volumique 20
C
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1,3255
1,3261
1,3268
1,3275
1,3281
1,3288
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1,3308
1,3315
1,3320
1,3325
1,3330
1,3335
1,3341
1,3348
1,3355
1,3361
1,3367
1,3374
1,3380
1,3387
1,3395
1,3400
1,3407
1,3415
1,3420
1,3427
1,3434
1,3440
1,3447
1,3454
1,3460
1,3466
1,3473
1,3479
1,3486
1,3493
1,3499
1,3506
1,3513
1,3519
1,3526
1,3533
1,3539
1,3546
1,3553
1,3560
1,3566
Sucres
en
g/l
879,7
881,5
883,2
885,0
886,9
888,8
890,6
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894,2
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898,0
899,6
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962,4
964,3
966,2
968,2
970,0
Sucres
en
g/kg
664,0
665,0
666,0
667,0
668,1
669,2
670,2
671,2
672,3
673,3
674,4
675,4
676,4
677,5
678,5
679,6
680,6
681,7
682,7
683,7
684,8
685,8
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688,9
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697,2
698,3
699,4
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701,4
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704,6
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706,6
707,7
708,7
709,8
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711,9
712,9
714,0
715,0
TAV % vol.
20 C
52,28
52,39
52,49
52,60
52,71
52,82
52,93
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53,14
53,25
53,37
53,46
53,56
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53,77
53,89
53,99
54,11
54,21
54,31
54,43
54,53
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55,31
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55,53
55,64
55,75
55,86
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57,20
57,31
57,42
57,54
57,65
OIV-MA-AS2-02 : R2012
21

Saccharose
% (m/m)
Indice de
rfraction 20 C
Masse
volumique 20 C
Sucres en
g/l
Sucres en
g/kg
TAV % vol.
70,0
70,1
70,2
70,3
70,4
70,5
70,6
70,7
70,8
70,9
71,0
71,1
71,2
71,3
71,4
71,5
71,6
71,7
71,8
71,9
72,0
72,1
72,2
72,3
72,4
72,5
72,6
72,7
72,8
72,9
73,0
73,1
73,2
73,3
73,4
73,5
73,6
73,7
73,8
73,9
74,0
74,1
74,2
74,3
74,4
74,5
74,6
74,7
74,8
74,9
75,0
1,46544
1,46565
1,46590
1,46614
1,46639
1,46663
1,46688
1,46712
1,46737
1,46761
1,46789
1,46810
1,46835
1,46859
1,46884
1,46908
1,46933
1,46957
1,46982
1,47007
1,47036
1,47056
1,47081
1,47106
1,47131
1,47155
1,47180
1,47205
1,47230
1,47254
1,47284
1,47304
1,47329
1,47354
1,47379
1,47404
1,47429
1,47454
1,47479
1,47504
1,47534
1,47554
1,47579
1,47604
1,47629
1,47654
1,47679
1,47704
1,47730
1,47755
1,47785
1,3573
1,3579
1,3586
1,3593
1,3599
1,3606
1,3613
1,3619
1,3626
1,3633
1,3639
1,3646
1,3653
1,3659
1,3665
1,3672
1,3678
1,3685
1,3692
1,3698
1,3705
1,3712
1,3718
1,3725
1,3732
1,3738
1,3745
1,3752
1,3758
1,3765
1,3772
1,3778
1,3785
1,3792
1,3798
1,3805
1,3812
1,3818
1,3825
1,3832
1,3838
1,3845
1,3852
1,3858
1,3865
1,3871
1,3878
1,3885
1,3892
1,3898
1,3905
971,8
973,8
975,6
977,6
979,4
981,3
983,3
985,2
987,1
988,9
990,9
992,8
994,8
996,6
998,5
1000,4
1002,2
1004,2
1006,1
1008,0
1009,9
1012,0
1013,8
1015,7
1017,7
1019,5
1021,5
1023,4
1025,4
1027,3
1029,3
1031,2
1033,2
1035,1
1037,1
1039,0
1040,9
1042,8
1044,8
1046,8
1048,6
1050,7
1052,6
1054,6
1056,5
1058,5
1060,4
1062,3
1064,4
1066,3
1068,3
716,0
717,1
718,1
719,2
720,2
721,2
722,3
723,4
724,4
725,4
726,5
727,5
728,6
729,6
730,7
731,7
732,7
733,8
734,8
735,9
736,9
738,0
739,0
740,0
741,1
742,1
743,2
744,2
745,3
746,3
747,4
748,4
749,5
750,5
751,6
752,6
753,6
754,7
755,7
756,8
757,8
758,9
759,9
761,0
762,0
763,1
764,1
765,1
766,2
767,2
768,3
57,75
57,87
57,98
58,10
58,21
58,32
58,44
58,55
58,66
58,77
58,89
59,00
59,12
59,23
59,34
59,45
59,56
59,68
59,79
59,91
60,02
60,14
60,25
60,36
60,48
60,59
60,71
60,82
60,94
61,05
61,17
61,28
61,40
61,52
61,63
61,75
61,86
61,97
62,09
62,21
62,32
62,44
62,56
62,67
62,79
62,91
63,02
63,13
63,26
63,37
63,49
20 C
OIV-MA-AS2-02 : R2012
22

Extrait sec total
Mthode Type IV
Extrait sec total

Matires sches totales
(modifie par rsolution OIV-Oeno 387/2009)
1. Dfinition
L'extrait sec total ou matires sches totales est l'ensemble de toutes les substances
qui, dans des conditions physiques dtermines, ne se volatilisent pas. Ces
conditions physiques doivent tre fixes de telle manire que les substances
composant cet extrait subissent le minimum d'altration.
L'extrait non rducteur est l'extrait sec total diminu des sucres totaux.
L'extrait rduit est l'extrait sec total diminu des sucres totaux excdant 1 g/l, du
sulfate de potassium excdant 1 g/l, du mannitol s'il y en a, et de toutes les
substances chimiques ventuellement ajoutes au vin.
Le reste d'extrait est l'extrait non rducteur diminu de l'acidit fixe, exprime en
acide tartrique.
2. Principe des Mthodes
Pese du rsidu laiss par lvaporation du vin, pralablement rparti sur une
spirale de papier buvard, dans un courant dair sec sous la pression de 20 25 mm
de mercure, 70 C, dans des conditions codifies.
3. Mthode
3.1. Appareillage
3.1.1. tuve :
Cuve cylindrique en aluminium (diamtre intrieur : 27 cm, hauteur : 6 cm) munie
dun couvercle en aluminium ; la cuve et son couvercle sont chauffs par des
rsistances lectriques une temprature de 70C rgule 1C prs.
Une tubulure (diamtre intrieur : 25 mm) relie ltuve une pompe vide assurant
un dbit dau moins 50 l/h.
De lair pralablement dshydrat par barbotage dans de lacide sulfurique 98 p.
100 pntre dans ltuve au moyen dun dispositif de circulation dans le couvercle
assurant son rchauffement et sa rpartition homogne sur toute la surface interne
de ltuve. Le dbit dair, rgl par un robinet pointeau, est de 30-40 l par heure
et la pression rsiduelle dans ltuve de 25 mm de mercure.
Toute tuve est utilisable condition quelle satisfasse aux essais de contrle
donns en 3.1.3.
3.1.2. Capsules :

Extrait sec total
Capsules en acier inoxydable (60 mm de diamtre intrieur, 25 mm de hauteur),

obtures par un couvercle daluminium exactement ajust.
Chaque capsule est garnie de 4 4,5 g de papier buvard, dcoup en bandes de 22
mm de hauteur, plies en accordon.
Ce papier buvard doit tre lav lacide chlorhydrique dilu 2 g/l pendant 8 h,
rinc cinq fois leau et sch lair.
3.1.3. Contrle de lappareillage et de la technique
a) Vrification de lobturation des capsules. Une capsule contenant du papier
buvard dessch, ferme par son couvercle, abandonne lair du laboratoire
aprs son refroidissement dans un dessiccateur acide sulfurique, ne doit pas
augmenter de poids de plus de 1 mg/h.
b) Vrification du degr de dessiccation. Une solution de saccharose pur 100g/l
doit laisser un extrait de 100 g 1 g/l.
c) Une solution dacide lactique pur 10 g/l doit laisser un extrait sec dau moins
9,5 g/l.
Augmenter ou diminuer la dure du sjour dans ltuve, le dbit du courant
dair sec, ou la pression intrieure pour que ces deux conditions soient
remplies.
NOTA La solution dacide lactique doit tre prpare ainsi : 10 ml dacide
lactique sont dilus dans 100 ml deau environ. Cette solution, place dans une
capsule, est chauffe sur un bain-marie bouillant pendant 4 h en ajoutant de
l'eau distille si le volume diminue en dessous de 50 ml environ. Porter au litre
le rsidu et titrer l'acide lactique sur 10 ml de cette solution par une solution
alcaline 0,1 M. Ajuster la liqueur 10 g/l.
3.1. Mode opratoire
3.2.1. Tarage de la capsule
Placer la capsule garnie de papier dans ltuve pendant 1 h. Arrter la machine
vide et obturer la capsule avec son couvercle, immdiatement louverture de
ltuve. La tarer 0,1 mg prs, aprs refroidissement au dessiccateur : soit po g.
la masse de la capsule vide.
3.2.2. Mesure proprement dite
Introduire 10 ml de mot ou de vin dans la capsule tare. Ils doivent tre
entirement absorbs par le papier buvard. Placer la capsule ltuve pendant
2 h (ou le temps indiqu par lessai de contrle dcrit en 3.1.3.). Procder
ensuite la pese de la capsule comme indiqu en 3.2.1, soit p g sa masse.
Remarque : Dans le cas des mots et des vins trs sucrs, il est recommand de
procder par pese de la prise dessai.
3.3. Calculs
Lextrait sec total en gramme par litre est donn par :

Extrait sec total
(p - po) x 100
Si, dans le cas des mots et des vins trs sucrs, la prise dessai a t pese,
lextrait sec total en grammes par litre est donn par :
(p - po) x
20
P
x 1000
P = masse de la prise dessai en grammes

20 = masse volumique du mot ou du vin en g/ml.
3.4. Expression des rsultats
Lextrait sec total est exprim en grammes par litre avec 1 dcimale.
Remarque:
Calculer lextrait sec total en prenant sparment en compte les quantits de
glucose et fructose (sucres rducteurs) et la quantit de saccharose, savoir:
Extrait non rducteur = Extrait sec total sucres rducteurs (glucose + fructose)
saccharose
Si la mthode danalyse prvoit une inversion des sucres, utiliser la formule
suivante pour le calcul:
Extrait non rducteur = Extrait sec total Sucres rducteurs (glucose + fructose) [(Sucres aprs inversion Sucres avant inversion) x 0,95]

Extrait sec total
TABLE I
Pour le calcul de la teneur en extrait (g/l)
3e dcimale de la densit
Densit avec
2 dcimales
18,0
43,9
69,9
95,9
122,0
148,1
174,3
200,5
226,8
253,1
279,5
305,9
332,4
359,0
385,6
412,3
439,0
465,9
492,8
519,7
-
20,6
46,5
72,5
98,5
124,6
150,7
176,9
203,1
229,4
255,7
282,1
308,6
335,1
361,6
388,3
415,0
441,7
468,6
495,5
522,4
-
23,2
49,1
75,1
101,1
127,2
153,3
179,5
205,8
232,0
258,4
284,8
311,2
337,8
364,3
390,9
417,6
444,4
471,3
498,2
525,1
-
Grammes dextrait par litre

1,00
1,01
1,02
1,03
1,04
1,05
1,06
1,07
1,08
1,09
1,10
1,11
1,12
1,13
1,14
1,15
1,16
1,17
1,18
1,19
1,20
0
25,8
51,7
77,7
103,7
129,8
155,9
182,1
208,4
234,7
261,0
287,4
313,9
340,4
366,9
393,6
420,3
447,1
473,9
500,9
527,8
2,6
28,4
54,3
80,3
106,3
132,4
158,6
184,8
211,0
237,3
263,6
290,0
316,5
343,0
369,6
396,2
423,0
449,8
476,6
503,5
-
5,1
31,0
56,9
82,9
109,0
135,0
161,2
,187,4
213,6
239,9
266,3
292,7
319,2
345,7
372,3
398,9
425,7
452,4
479,3
506,2
-
7,7
33,6
59,5
85,5
111,6
137,6
163,8
190,0
216,2
242,5
268,9
295,3
321,8
348,3
375,0
401,6
428,3
455,2
482,0
508,9
-
10,3
36,2
62,1
88,1
114,2
140,3
166,4
192,6
218,9
245,2
271,5
298,0
324,5
351,0
377,6
404,3
431,0
457,8
484,7
511,6
-
12,9
38,8
64,7
90,7
116,8
142,9
169,0
195,2
221,5
247,8
274,2
300,6
327,1
353,7
380,3
406,9
433,7
460,5
487,4
514,3
-
15,4
41,3
67,3
93,3
119,4
145,5
171,6
197,8
224,1
250,4
276,8
303,3
329,8
356,3
382,9
409,6
436,4
463,2
490,1
517,0
-

Extrait sec total
TABLE INTERCALAIRE
4e dcimale
de la
densit
1
2
3
Grammes
dextrait
par litre
0,3
0,5
0,8
4e dcimale
de la
densit
4
5
6
Grammes
dextrait
par litre
1,0
1,3
1,6
4th decimal
de la
densit
7
8
9
Grammes
dextrait
par litre
1,8
2,1
2,3
BIBLIOGRAPHIE
PIEN J., MEINRATH H., Ann. Fals. Fraudes, 1938, 30, 282.
DUPAIGNE P., Bull. Inst. Jus Fruits, 1947, No 4.
TAVERNIER J., JACQUIN P., Ind. Agric. Alim., 1947, 64, 379.
JAULMES P., HAMELLE Mlle G., Bull. O.I.V., 1954, 27, 276.
JAULMES P., HAMELLE Mlle G., Mise au point de chimie analytique pure et
applique, et d'analyse bromatologique, 1956, par J.A. GAUTIER, Paris,
4e srie.
JAULMES P., HAMELLE Mlle G., Trav. Soc. Pharm. Montpellier, 1963, 243.
HAMELLE Mlle G., Extrait sec des vins et des mots de raisin, 1965, Thse
Doct. Pharm. Montpellier.

Extrait sec total
Mthode Type IV
Extrait sec total

Matires sches totales
(Modifie par rsolution OIV/Oeno 387/2009)
1. Dfinition
L'extrait sec total ou matires sches totales est l'ensemble de toutes les substances
qui, dans des conditions physiques dtermines, ne se volatilisent pas. Ces
conditions physiques doivent tre fixes de telle manire que les substances
composant cet extrait subissent le minimum d'altration.
L'extrait non rducteur est l'extrait sec total diminu des sucres totaux.
L'extrait rduit est l'extrait sec total diminu des sucres totaux excdant 1 g/l, du
sulfate de potassium excdant 1 g/l, du mannitol s'il y en a, et de toutes les
substances chimiques ventuellement ajoutes au vin.
Le reste d'extrait est l'extrait non rducteur diminu de l'acidit fixe, exprime en
acide tartrique.
2. Principe des Mthodes
Mthode densimtrique
L'extrait sec total est calcul indirectement d'aprs la valeur de la densit du mot
et, dans le cas du vin, d'aprs la densit du vin dsalcoolis.
Cet extrait est exprim par la quantit de saccharose qui, dissoute dans une quantit
d'eau suffisante pour avoir un litre, donne une solution de mme densit que le
mot ou que le vin dsalcoolis.
3. Mthode
3.1. Mode opratoire
Dterminer la densit 20/20 du mot ou du vin.
Dans le cas du vin, calculer la densit, dr, du vin dsalcoolis par la relation
dr = dv da + 1,000
o
dv = densit 20/20 du vin (corrig par lacidit volatil*)
* Avant de faire ce calcul, la densit (ou la masse volumique) du vin mesur comme il est
indiqu plus haut doit tre corrige de laction de lacidit volatile suivant la formule :
d v = d 20
20
0,0000086 a
ou
v = 20 0,0000086 a
a tant la quantit dacidit volatile en milliquivalents par litre.


Extrait sec total
da = densit 20/20 du mlange hydroalcoolique de mme titre que le vin ou

encore par la relation :
dr = 1,00180** (v a) + 1,000
o
v = masse volumique du vin 20C (corrige de lacidit volatile*)
a = masse volumique 20C du mlange hydroalcoolique de mme titre
alcoomtrique que le vin, obtenu sur la Table I du chapitre Titre
alcoomtrique pour la temprature 20C.
3.2. Calculs
Reporter la densit 20/20 du mot ou du vin dsalcoolis dans la Table I pour
obtenir lextrait sec total en grammes par litre.
Lextrait sec total est exprim en grammes par litre avec 1 dcimale.
Remarque:
Calculer lextrait sec total en prenant sparment en compte les quantits de
glucose et fructose (sucres rducteurs) et la quantit de saccharose, savoir:
Extrait non rducteur = Extrait sec total sucres rducteurs (glucose + fructose)
saccharose
Si la mthode danalyse prvoit une inversion des sucres, utiliser la formule
suivante pour le calcul:
Extrait non rducteur = Extrait sec total Sucres rducteurs (glucose + fructose) [(Sucres aprs inversion Sucres avant inversion) x 0,95]
Par inversion il faut entendre le processus qui entrane la conversion d'un stroisomre en composs de stro-isomrie inverse. En particulier, le procd bas sur
la scission du saccharose en fructose et en glucose, qui consiste maintenir des
solutions sucres acidifies (100 ml de solution sucre + 5 ml dacide
chlorhydrique concentr) pendant au moins 15 min 50C ou plus dans un bain
deau (le bain deau est maintenu 60C jusqu ce que la temprature de la
solution atteigne 50C) est appel inversion du sucre. La solution d'arrive est
lvogyre du fait de la prsence de fructose, tandis que la solution de dpart est
dextrogyre du fait de la prsence de saccharose.
** Le coefficient 1,00180 peut pratiquement tre assimil 1 lorsque v est infrieure
1.05, ce qui est le cas le plus frquent.

Extrait sec total
TABLE I
Pour le calcul de la teneur en extrait (g/l)
3e dcimale de la densit
Densit avec
2 dcimales
18,0
43,9
69,9
95,9
122,0
148,1
174,3
200,5
226,8
253,1
279,5
305,9
332,4
359,0
385,6
412,3
439,0
465,9
492,8
519,7
-
20,6
46,5
72,5
98,5
124,6
150,7
176,9
203,1
229,4
255,7
282,1
308,6
335,1
361,6
388,3
415,0
441,7
468,6
495,5
522,4
-
23,2
49,1
75,1
101,1
127,2
153,3
179,5
205,8
232,0
258,4
284,8
311,2
337,8
364,3
390,9
417,6
444,4
471,3
498,2
525,1
-
Grammes dextrait par litre

1,00
1,01
1,02
1,03
1,04
1,05
1,06
1,07
1,08
1,09
1,10
1,11
1,12
1,13
1,14
1,15
1,16
1,17
1,18
1,19
1,20
0
25,8
51,7
77,7
103,7
129,8
155,9
182,1
208,4
234,7
261,0
287,4
313,9
340,4
366,9
393,6
420,3
447,1
473,9
500,9
527,8
2,6
28,4
54,3
80,3
106,3
132,4
158,6
184,8
211,0
237,3
263,6
290,0
316,5
343,0
369,6
396,2
423,0
449,8
476,6
503,5
-
5,1
31,0
56,9
82,9
109,0
135,0
161,2
,187,4
213,6
239,9
266,3
292,7
319,2
345,7
372,3
398,9
425,7
452,4
479,3
506,2
-
7,7
33,6
59,5
85,5
111,6
137,6
163,8
190,0
216,2
242,5
268,9
295,3
321,8
348,3
375,0
401,6
428,3
455,2
482,0
508,9
-
10,3
36,2
62,1
88,1
114,2
140,3
166,4
192,6
218,9
245,2
271,5
298,0
324,5
351,0
377,6
404,3
431,0
457,8
484,7
511,6
-
12,9
38,8
64,7
90,7
116,8
142,9
169,0
195,2
221,5
247,8
274,2
300,6
327,1
353,7
380,3
406,9
433,7
460,5
487,4
514,3
-
15,4
41,3
67,3
93,3
119,4
145,5
171,6
197,8
224,1
250,4
276,8
303,3
329,8
356,3
382,9
409,6
436,4
463,2
490,1
517,0
-

Extrait sec total
TABLE INTERCALAIRE
4e dcimale
de la
densit
1
2
3
Grammes
dextrait
par litre
0,3
0,5
0,8
4e dcimale
de la
densit
4
5
6
Grammes
dextrait
par litre
1,0
1,3
1,6
4th decimal
de la
densit
7
8
9
Grammes
dextrait
par litre
1,8
2,1
2,3
BIBLIOGRAPHIE
TABLE DE PLATO, d'aprs Allgemeine Verwaltungsvorschrift fr die

Untersuchung von Wein und hnlichen alkoholischen Erzeugnissen sowie von
Fruchtsften, vom April 1960, Bundesanzeiger Nr. 86 vom 5. Mai 1960. - Une
table trs voisine se trouve dans Official and Tentative Methods of Analysis of
the Association of Official Agricultural Chemists, Ed. A.O.A.C., Washington
1945, 815.

Cendres
Mthode Type I
Cendres
1 Dfinition
On appelle cendres l'ensemble des produits de l'incinration du rsidu
d'vaporation du vin, conduite de faon obtenir la totalit des cations (ammonium
exclu) sous forme de carbonates et autres sels minraux anhydres.
Incinration de l'extrait du vin conduite entre 500 C et 550 C jusqu' combustion
complte du carbone.
3. Appareillage
3.1. Bain d'eau 100 C.
3.2. Balance sensible au 1/10e de milligramme.
3.3. Plaque chauffante ou vaporateur infrarouge.
3.4. Four lectrique rgulation de temprature.
3.5. Dessiccateur.
3.6. Capsule de platine de 70 mm de diamtre et de 25 mm de hauteur fond plat.
4. Mode opratoire
Placer 20 ml de vin dans la capsule de platine pralablement tare (p0). vaporer sur
bain d'eau 100 C, chauffer le rsidu sur la plaque chauffante 200 C ou sous
l'vaporateur infrarouge jusqu' carbonisation. Lorsque le rsidu n'met plus de
vapeur, placer la capsule dans le four lectrique port 525 C 25 C. Aprs 15 min.
de carbonisation, retirer la capsule du four, ajouter 5 ml d'eau distille que l'on vapore
ensuite sur le bain d'eau ou sous l'vaporateur infrarouge et chauffer nouveau
525 C pendant une dizaine de minutes.
Si la combustion des particules carbones n'est pas totale, recommencer les oprations
de lavage des particules carbones, d'vaporation de l'eau et d'incinration.
Pour les vins riches en sucres, il est commode d'ajouter l'extrait quelques gouttes
d'huile vgtale pure avant la premire incinration, pour empcher le dbordement du
contenu.
Aprs refroidissement dans le dessiccateur, la capsule est pese, soit p1.
Le poids de cendres correspondant la prise d'essai est : p = (p1 p0).
5. Expression des rsultats
Le poids P des cendres exprim en grammes par litre avec 2 dcimales est :
P = 50 p
OIV-MA-AS2-04 : R2009

Alcalinit des cendres
Mthode Type IV
Alcalinit des cendres

1. Dfinition
On appelle alcalinit des cendres la somme des cations, autres que l'ammonium,
combins aux acides organiques du vin.
Titrimtrie en prsence de mthylorange sur les cendres solubilises chaud par un
excs connu d'acide titr.
3. Appareillage et ractifs
3.1. Solution 0,05 M d'acide sulfurique
3.2. Solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium
3.3. Solution de mthylorange 0,1 g p. 100 ml dans l'eau distille
4. Mode opratoire
Dans la capsule de platine contenant les cendres de 20 ml de vin ajouter 10 ml de
solution 0,05 M d'acide sulfurique ; la placer sur un bain d'eau 100 C pendant
15 min. environ, en crasant le rsidu avec une baguette de verre pour activer la
dissolution. Ajouter ensuite 2 gouttes de solution de mthylorange et titrer l'excs
d'acide sulfurique par la solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium jusqu' virage au
jaune de l'indicateur.
5.1. Mode de calcul
L'alcalinit des cendres exprime en milliquivalents par litre, avec 1
dcimale sera :
A = 5 (10 n)
n = nombre de millilitres d'hydroxyde de sodium 0,1 M.
5.2. Autre expression :
L'alcalinit des cendres exprime en grammes de carbonate de potassium par
litre, avec deux dcimales sera :
A = 0,345 (10 n)
BIBLIOGRAPHIE
JAULMES P., Analyse des vins, Librairie Poulain, Montpellier, d., 1951, 107.
OIV-MA-AS2-05 : R2009

Mesure du potentiel d'oxydorduction dans les vins
Mthode Type IV

1. Objet, Domaine dapplication
Le potentiel d'oxydorduction (EH) est une mesure de l'tat d'oxydation ou de
rduction d'un milieu. En nologie, l'oxygne et le potentiel d'oxydorduction sont
deux lments importants pour conduire la fois le traitement prfermentaire de la
vendange, la vinification, l'levage et la conservation des vins.
Il est propos un matriel de mesure du Potentiel d'oxydorduction dans les vins et un
mode opratoire permettant de raliser des mesures dans des conditions standards.
La mthode na pas fait lobjet dune analyse collaborative en raison du caractre
trs variable de ltat doxydorduction dun vin, ce qui rend difficile cette tape de
la validation. En consquence il sagit dune mthode de type 4 destine
essentiellement la production.
2. Principe
Le potentiel d'oxydorduction d'un milieu est dfini comme la diffrence de
potentiel entre une lectrode inattaquable plongeant dans ce milieu et l'lectrode
hydrogne de rfrence, couple avec le milieu. En fait, on ne peut connatre que la
diffrence entre les potentiels d'oxydorduction de deux systmes coupls. Pour
cette raison, le potentiel d'oxydorduction de l'lectrode hydrogne est considr
comme gal zro ; tous les potentiels d'oxydorduction sont valus par rapport
celui-ci. Le potentiel d'oxydorduction est une mesure relative l'expression d'tat
physicochimique instantan d'une solution. Seul un titrage potentiomtrique des
couples oxydorducteurs totaux ainsi que l'estimation du rapport [Oxydants
/Rducteurs] pourrait conduire une mesure rellement quantitative. La mesure du
potentiel d'oxydorduction, soit dans le vin, soit dans d'autres milieux, est ralise
avec des lectrodes combines. Habituellement le systme comprend une lectrode
de platine (l'lectrode de mesure) et une lectrode de rfrence (lectrode d'argent
ou au calomel).
3. Matriel
Plusieurs types d'lectrodes existent, il est cependant conseill d'employer des
lectrodes adaptes la mesure du EH dans les vins. Il est recommand dutiliser
une lectrode combine, double jaquette, couple une lectrode de rfrence
(Figure). Il s'agit d'une lectrode de mesure et d'une lectrode de rfrence double
jaquette ; elles sont couples un ionomtre. Pour la jaquette interne de l'lectrode
de rfrence, la Composition de la solution de remplissage est la suivante : KNO3,
17,1% ; AgCl, traces ; Triton X-100, traces ; KCl, 5% ; eau dsionise, 77,9% et
OIV-MA-AS2-06 : R2009

pour l'lectrode de mesure la Composition est la suivante : AgCl, <1% ; KCl,

29,8% ; eau dsionise, 70%.
4. Nettoyage et talonnage des lectrodes

4.1. Etalonnage
L'talonnage est ralis partir de solutions prsentant un potentiel
d'oxydorduction connu et constant. Le mlange quimolaire (10 mM/l) de
ferrocyanure et de hexacyanoferrate (II) de potassium a t retenu. Il a pour
composition : 0,329g de K3Fe(CN)6 ; 0,422g de K4Fe (CN)6 ; 0,149g de KCl et H2O
qsp 1000 ml. A 20 C le potentiel de cette solution est de 406 mV ( 5mV), mais il
OIV-MA-AS2-06 : R2009

volue dans le temps et la dure de conservation de la solution ne doit pas excder

15 jours l'obscurit.
4.2. Nettoyage du platine de l'lectrode
Le nettoyage du platine de l'lectrode est assur par trempage dans du peroxyde
d'hydrogne 30% vol. pendant 1 heure, suivi d'un rinage l'eau. Le systme
ncessite un nettoyage complet leau aprs chaque srie de mesure, le systme est
en gnral nettoy aprs une semaine d'utilisation.
5. Mode opratoire
5.1. Remplissage de la jaquette interne.
En fonction du milieu de mesure du EH, la composition de la double jaquette est
variable (Tableau ci-dessous).
Tableau
Composition de la solution de remplissage de la double jaquette de l'lectrode en
fonction du milieu de mesure.
Milieu de mesure
Solution 1 pour Vins secs
Solution 2 pour Vins doux
Composition de la solution de la jaquette

Ethanol 12% vol., 5 g ac. tartrique, NaOH N qsp pH
3,5, Eau distille qsp 1000 ml.
Solution 1 laquelle on ajoute 20 g/l de saccharose.
Solution 3 pour Vins doux spciaux solution 2 laquelle on ajoute 100 mg/l de SO2
(KHSO3).
Solution 4 pour Eaux-de-vie
Ethanol 50 % vol., ac. actique qsp pH 5, eau distille

qsp 1000 ml.
5.2- Equilibrage de l'lectrode avec le milieu de mesure.

Avant les mesures, les lectrodes doivent tre talonnes dans la solution de
Michaelis, puis stabilises 15 min. dans un vin, si les mesures sont faire dans des
vins. Ensuite, la lecture peut tre ralise, pour des mesures sur le terrain, 5 min.
aprs que les lectrodes aient t plonges dans le milieu. On utilise comme indice
de stabilit, pour des mesures au laboratoire, le rapport EH (mV) / T (min.),
lorsque ce dernier est 0,2 la lecture du potentiel peut alors se pratiquer.
5.3. Mesures dans les conditions de la pratique.
Les mesures sont systmatiquement ralises in situ sans manipulation pouvant
entraner de modification des valeurs du potentiel doxydorduction. Lors des
mesures dans les chais, en barriques ou en cuves, on prendra soin de noter la
temprature, le pH et l'oxygne dissous (mthode en prparation) en mme temps
OIV-MA-AS2-06 : R2009

que le EH ; ces valeurs pouvant servir ultrieurement l'interprtation des rsultats.

Pour des bouteilles de vins, la mesure est pratique sur le vin aprs 2 heures
d'attente dans une pice 20 C, immdiatement aprs l'ouverture, sous un flux
constant d'azote et en plongeant lensemble de llectrode dans la bouteille.
5.4. Expression des rsultats.
Les rsultats sont donns en mV par rapport l'lectrode hydrogne.
OIV-MA-AS2-06 : R2009

Caractristiques Chromatiques
(Mthode A0 modifie par Oeno 1/2006)
Principe de la mthode
Mthode spectrophotomtrique qui permet le calcul des valeurs tristimulaires et des
coefficients trichromatiques ncessaires la spcification de la couleur dans les
termes de la Commission internationale de l'clairage (C.I.E.).
SUPPRIME
(remplace par OIV-MA-AS2-11)

Mthode Type IV
(Mthode A0 modifie par Oeno 1/2006)
1. Dfinitions
On appelle caractristiques chromatiques d'un vin sa luminosit et sa chromaticit.
La luminosit correspond la transmittance. Elle varie en raison inverse de
l'intensit colorante du vin. La chromaticit correspond la longueur d'onde
dominante (qui caractrise la nuance) et la puret.
Conventionnellement et pour des raisons de commodit, les caractristiques
chromatiques des vins rouges et ross sont nonces par l'intensit colorante et la
nuance, suivant un procd adopt comme mthode usuelle.
2.1. Mthode applicable aux vins rouges et ross
Mthode spectrophotomtrique selon laquelle les caractristiques chromatiques
sont exprimes conventionnellement comme ci-dessous :
- L'intensit est donne par la somme des absorbances sous 1 cm de trajet optique
pour les radiations de longueurs d'onde gales 420, 520 et 620 nm.
- La nuance est exprime par le rapport de l'absorbance 420 nm l'absorbance
520 nm.
3. Mthode
3.1.Appareils
3.1.1. Spectrophotomtre permettant des mesures entre 300 et 700 nm.
3.1.2. Cuves de verre disponibles par paires, de trajet optique, b, gal 0,1 - 0,2 0,5 et 1 cm.
3.2. Traitement pralable de l'chantillon
Si le vin est trouble, le clarifier par centrifugation. Les vins jeunes ou mousseux
doivent tre dbarrasss de la plus grande quantit de leur dioxyde de carbone par
agitation sous vide.
3.3. Mode opratoire
Le trajet optique, b, de la cuve de mesure doit tre choisi de manire que
l'absorbance A soit comprise entre 0,3 et 0,7.

Effectuer les mesures spectrophotomtriques en utilisant comme liquide de

rfrence l'eau distille place dans une cuve de mme trajet optique, b, pour rgler
le zro de l'chelle d'absorbances de l'appareil aux longueurs d'onde 420, 520 et
620 nm.
3.4. Calculs
Calculer les absorbances pour 1 cm de trajet optique pour les 3 longueurs d'onde en
divisant par b, exprim en cm, les absorbances releves, soit A420, A520, A620.
A625 A420, A520 et A620. L'intensit est conventionnellement donne par :
I = A420 + A520 + A620
Lintensit est conventionnellement donn par :
I = A420 + A520 + A620
Elle est exprime avec 3 dcimales.
La nuance est conventionnellement donne par :
N=
A420
A520
Elle est donne avec 3 dcimales.
BIBLIOGRAPHIE
- BOUTARIC A., FERRE L., ROY M., Ann. Fals. Fraudes, 1937, 30, 196.
- SUDRAUD P., Ann. Technol. Agric., 1958, no 2, 203.
- MARECA CORTES J., Atti Acc. Vite Vino, 1964, 16.
- GLORIES Y., Conn. vigne et Vin, 1984, 18, no 3, 195.

TABLEAU I
Transformation des absorbances en transmittances (T %)
Mode d'utilisation : Lire le premier chiffre dcimal de la valeur de l'absorbance
dans la colonne verticale 1 et le deuxime chiffre dcimal sur la ligne horizontale 2.
Relever le chiffre situ l'intersection. Pour obtenir la transmittance, ce chiffre
devra tre divis par 10 si l'absorbance a une valeur infrieure 1, par 100 si elle
est comprise entre 1 et 2, par 1 000 si elle est comprise entre 2 et 3.
Remarque : Le chiffre port en haut et droite de chaque case permet de tenir
compte par interpolation du troisime chiffre dcimal de la valeur de l'absorbance.
1
23
2
22
977
1000
794
631
501
398
316 309 71 302
251
199
158
126
18
955
18
776
14
17
14
11
11
11
245
4
195
3
123
Exemple :
117
219
178
174
3
141
339
331
6
Absorbance 0,47
1,47
T%
33,9 % 3,4 %
162
3
132
2
107
204
166
3
257
209
135
110
170
324
263
214
3
112
407
7
269
138
12
513
10
417
115
10
224
4
144
12
427
6
275
182
148
120
15
646
525
347
282
229
186
151
15
12
19
813
661
537
436
355
288
234
190
155
15
13
9
19
932
676
549
447
363
295
240
10
16
13
8
19
851
692
562
457
371
16
13
7
20
871
708
575
468
380
16
14
6
20
891
724
589
479
389
17
14
5
21
912
741
603
490
4
21
933
759
617
11
3
22
129
3
105
102
2,47 3,47
0,3% 0 %
Les transmittances T % seront exprimes 0,1 % prs.

Turbidit des vins
Mthode Type IV
Turbidit des vins

Mthode de dtermination par nphlomtrie.
1. Avertissement
La mesure de la turbidit est trs largement dpendante de la conception de
l'appareillage utilis. Ainsi, les mesures comparatives d'instrument instrument ne
sont possibles que si le mme principe de mesurage est appliqu.
Les principales sources d'erreur connues, lies au type de turbidimtre sont les
suivantes :
l'influence de la lumire parasite,
l'influence de la coloration du produit, notamment dans le cas de faibles valeurs
de turbidit,
la drive lectronique intervenant avec le vieillissement des composants
lectroniques,
le type de source lumineuse, de photodtecteur, les dimensions et le type de la
cellule de mesure.
La prsente mthode est base sur l'utilisation d'un nphlomtre dont la
conception technologique est du type : double faisceau compensation optique.
Cette classe d'instrument permet de compenser : la drive lectronique, les
variations de tension de l'alimentation lectrique et partiellement la coloration du
vin. Elle prsente, en outre, une grande stabilit d'talonnage.
Il convient de noter le caractre non contradictoire de la mthode, en raison de
l'impossibilit de raliser une analyse collaborative.
2. Objet
Le prsent document a pour objet de dcrire une mthode optique permettant de
dterminer l'indice de turbidit (ou indice de diffusion) des vins.
3. Domaine d'application
La mthode est applicable en l'absence d'une instrumentation permettant une
parfaite reproductibilit des mesures d'un appareil l'autre ainsi que la
compensation totale de la coloration des vins. En consquence les rsultats sont
donns titre indicatif, ils sont prendre avec rserve.
La mthode est surtout destine la production pour laquelle elle est le critre le
plus objectif de la mesure de la limpidit.
OIV-MA-AS2-08 : R2009

Turbidit des vins
Cette mthode, non susceptible dtre valide selon les critres internationalement
reconnus est de type 4.
4. Principe gnral
La turbidit est un effet optique.
L'indice de diffusion est une proprit intrinsque des liquides permettant de
caractriser leur aspect optique.
Cet effet optique est provoqu par la prsence de particules trs fines rparties dans
un milieu de dispersion liquide ; l'indice de rfraction de ces particules diffre de
celui du milieu de dispersion.
Si l'on claire de l'eau optiquement propre renferme dans un volume connu et si
l'on mesure le flux lumineux diffus par rapport au faisceau incident, la valeur
note de ce flux diffus caractrise la diffusion molculaire de l'eau.
Si la valeur obtenue avec l'eau tudie est suprieure celle correspondant la
diffusion molculaire qui est constante pour une mme longueur d'onde, un mme
flux incident sous un mme angle de mesure, une mme gomtrie de cuve et une
temprature donne, la diffrence est imputable la lumire diffuse par les
particules solides, liquides ou gazeuses en suspension dans l'eau.
La mesure du flux lumineux diffus, effectue comme indiqu, constitue une
mesure nphlomtrique.
5. Dfinitions
5.1. Turbidit :
Rduction de la transparence d'un liquide due la prsence de matires non
dissoutes.
5.2. Unit d'expression de l'indice de turbidit :
L'unit de turbidit utilise est le :
N T U - NEPHELOMETRIC TURBIDITY UNIT
(unit de turbidit nphlomtrique)
qui correspond la mesure de la lumire diffuse par une suspension talon de
formazine, prpare comme indiqu au point 6.2.2., sous un angle de 90 par
rapport la direction du faisceau incident.
6. Prparation de la suspension talon de formazine*1
6.1. Ractifs :
Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique reconnue.
Ils doivent tre conservs dans des flacons en verre.
6.1.1. Eau, pour la prparation de solutions tmoins.
*1 Attention aux prcautions d'usage car la Formazine prsente une certaine toxicit.
OIV-MA-AS2-08 : R2009

Turbidit des vins
Tremper une membrane filtrante de grosseur de pore 0,1 m (du type de celles
utilises en bactriologie) pendant 1 h dans 100 ml d'eau distille. Filtrer
travers celle-ci 250 ml d'eau distille deux fois sur la membrane et conserver
cette eau pour la prparation des solutions talons.
6.1.2. Formazine (C2H4N2), solutions.
La combinaison appele formazine, de formule C2H4N2 ne se trouve pas dans
le commerce. Elle est obtenue l'aide des solutions suivantes :
Solution A : Dissoudre 10,0 g d'hexamthylnettramine de formule (CH2)6N4
dans de l'eau distille prpare selon 6.1.1. Puis complter la solution 100 ml
l'aide d'eau distille prpare selon 6.1.1.
Solution B : Dissoudre 1,0 g de sulfate d'hydrazinium N2H6SO4 dans de l'eau
distille prpare selon 6.1.1. Puis complter la solution 100 ml l'aide d'eau
distille prpare selon 6.1.1.
AVERTISSEMENT : Le sulfate d'hydrazinium est un poison et peut tre
cancrogne.
6.2. Mode opratoire
Mlanger 5 ml de solution A et 5 ml de solution B. Aprs 24 h 25 C + 3 C,
diluer la solution 100 ml avec de l'eau. (6.1.1.).
La turbidit de cette solution standard est de : 400 NTU
Dans l'obscurit, cette suspension standard se conserve la temprature
ambiante pendant 4 semaines environ.
Par dilution 1/400 avec de l'eau distille de prparation rcente, on obtient
une turbidit de : 1 NTU.
Cette solution n'est stable qu'une semaine.
REMARQUE : Des standards de formazine ont t compars des standards
labors base de polymres. Les carts observs peuvent tre considrs
comme ngligeables. Les talons base de polymres prsentent nanmoins
les inconvnients suivants : leur cot est trs lev et leur dure dutilisation
limite. Ils doivent tre manipuls avec prcaution pour ne pas briser les
particules de polymres, ce qui modifierait la valeur de la turbidit. Cette
possibilit est propose en tant que solution alternative la formazine.
7. Principe optique de mesure

OIV-MA-AS2-08 : R2009

Turbidit des vins
L'observation de la lumire diffuse doit se faire 90 par rapport la direction du

faisceau incident.
8. Appareillage
8.1. Principe optique du turbidimtre double faisceau et compensation optique :
Une source lumineuse (1), alimente par le secteur, envoie un faisceau

lumineux sur le miroir oscillant (2) qui rflchit, alternativement, un rayon de
OIV-MA-AS2-08 : R2009

Turbidit des vins
mesure (3) et un rayon de comparaison (4) raison d'environ 600 fois par
seconde.
Le rayon de mesure (3) se propage dans le fluide mesurer (5), tandis que le
rayon de comparaison (4) se propage dans un standard de comparaison de
turbidit (6) optiquement stable.
La lumire diffuse produite dans le fluide (5) par les particules qui
engendrent la turbidit et la lumire diffuse par le standard de comparaison
(6) sont reues, alternativement, par une cellule photo-lectrique (7).
Cette cellule reoit donc, la mme frquence, d'une part un rayon de mesure
(3), d'autre part, un rayon de comparaison (4) dont les intensits lumineuses
sont diffrentes.
La cellule photo-lectrique (7) transforme alors ces intensits lumineuses
ingales en courants photolectriques qui sont ensuite amplifis (8) et
alimentent un moteur synchrone (9) jouant le rle de servomoteur.
Ce dernier fait varier, au moyen d'un diaphragme de mesure mcanique (10)
l'intensit du rayon de comparaison jusqu' ce que les deux rayons parviennent
la cellule photo-lectrique avec la mme intensit lumineuse.
Cet tat dquilibre permet de mesurer la teneur en particules solides du fluide
mesur.
La valeur absolue de la mesure dpend des dimensions du standard de
comparaison et de la position du diaphragme.
8.2. Caractristiques :
NOTE : Afin de pouvoir raliser les mesures, quelle que soit la couleur du vin,
le turbidimtre doit tre quip d'un filtre interfrentiel supplmentaire
permettant le mesurage la longueur d'onde de : 620 nm. Toutefois, ce filtre
interfrentiel n'est pas ncessaire si la source lumineuse est infrarouge.
8.2.1. La largeur de bande spectrale de la radiation incidente doit tre
infrieure ou gale 60 nm,
8.2.2. il ne doit pas y avoir de divergence au niveau du paralllisme de la
radiation incidente et la convergence ne doit pas dpasser 1,5 ,
8.2.3. l'angle de mesure entre l'axe optique de la radiation incidente et celui de
la radiation diffuse doit tre 90 + 2,5 ,
8.2.4. l'appareil ne doit pas induire d'erreur due la lumire parasite suprieure :
0,01 NTU
sur une plage de mesure de :
0 0,1 NTU
9. Mode opratoire de la mesure
9.1. Vrification de l'appareil
OIV-MA-AS2-08 : R2009

Turbidit des vins
Avant toute mesure ou srie de mesures, vrifier le fonctionnement lectrique

et mcanique de l'appareil conformment aux prconisations de son
constructeur.
9.2. Vrification du calage de l'chelle de mesure
Avant toute mesure ou srie de mesure, l'aide d'un appareil pralablement
talonn, vrifier le calage de son chelle de mesure conformment son
principe de construction.
9.3 Nettoyage de la cellule de mesure
Nettoyer avec le plus grand soin la cuve de mesure avant toute dtermination.
Prendre toutes les prcautions utiles pour viter l'introduction de poussires
dans l'appareil et plus forte raison dans la cellule de mesure avant et pendant
la dtermination de l'indice de turbidit.
9.4 Ralisation de la mesure
oprer une temprature comprise entre : 15 et 25 C (La temprature du
vin mesurer doit tre prise en considration pour obtenir une comparaison
correcte). Pralablement la mesure, homogniser avec soin, et sans
mouvement brusque pour ne pas crer dmulsion, le flacon contenant le
produit mesurer.
rincer consciencieusement, deux reprises, la cellule de mesure l'aide d'un
petit volume de produit mesurer,
introduire, avec prcautions, le produit mesurer dans la cellule de mesure
en vitant un coulement turbulent qui conduirait la formation de bulles
d'air et effectuer la mesure de l'essai,
attendre une minute si la valeur de l'indice est stable,
noter l'indice de turbidit obtenu.
L'indice de turbidit du vin examin est relev et exprim en :
* NTU
si la turbidit est infrieure 1 NTU arrondir 0,01 NTU
si la turbidit est entre 1 NTU et 10 NTU arrondir 0,1 NTU
si la turbidit est entre 10 NTU et 100 NTU arrondir 1 NTU
11. Rapport d'essai
Le rapport d'essai doit contenir les informations suivantes :
a) la rfrence la prsente mthode,
b) le rsultat exprim comme indiqu en 10,
c) tout dtail ou vnement susceptible d'avoir agi sur les rsultats.
OIV-MA-AS2-08 : R2009

Turbidit des vins
BIBLIOGRAPHIE
- AFNOR
Norme NF EN 27027 (ISO 7027) - Avril 1994
"Qualit de l'eau = Dtermination de la turbidit"
- OIV
Recueil des mthodes internationales des boissons spiritueuses, des alcools, de la
fraction aromatique des boissons - 1994
"Turbidit - Mthode de dtermination par nphlomtrie"
- SIGRIST PHOTOMETER S.A. CH. 6373 ENNETBURGEN
"Extraits de notices techniques de turbidimtres
OIV-MA-AS2-08 : R2009

Mouillage Rapport isotopique
Mthode Type IV
Dtermination du rapport isotopique

18
O/16O de l'eau des vins
Mouillage
SUPPRIME
(Remplace par mthode OIV-MA-AS2-12)
OIV-MA-AS2-09 : R2009

Indice de Folin-Ciocalteu
Mthode Type IV
1. Dfinition
L'indice de Folin-Ciocalteu est le rsultat obtenu par l'application de la mthode
dcrite ci-aprs.
2. Principe
L'ensemble des composs phnoliques du vin est oxyd par le ractif de FolinCiocalteu. Ce dernier est constitu par un mlange d'acide phosphotungstique
(H3PW12O40) et d'acide phosphomolybdique (H3PMo12O40) qui est rduit, lors de
l'oxydation des phnols, en mlange d'oxydes bleus de tungstne (W8O23) et de
molybdne (Mo8O23).
La coloration bleue produite possde une absorption maximum aux environs de
750 nm. Elle est proportionnelle au taux de composs phnoliques.
3. Appareillage
Matriel courant de laboratoire, et notamment :
3.1. Fioles jauges de 100 ml.
3.2. Spectrophotomtre permettant de travailler 750 nm.
4. Ractifs
4.1. Ractif de Folin-Ciocalteu
Ce ractif est disponible dans le commerce prt l'emploi. Il peut tre prpar
de la faon suivante: 100 g de tungstate de sodium et 25 g de molybdate de
sodium sont dissous dans 700 ml d'eau distille; ajouter 50 ml d'acide
phosphorique 85% (20 = 1,71 g/ml), 100 ml d'acide chlorhydrique concentr
(20 = 1,19 g/ml). Porter l'bullition sous reflux durant 10 heures, ajouter
ensuite 150 g de sulfate de lithium, quelques gouttes de brome et porter
nouveau l'bullition durant 15 min. Refroidir et complter 1 litre avec de
l'eau distille.
4.2. Carbonate de sodium (Na2CO3) anhydre en solution 20 % (m/v).
5. Mode opratoire
5.1. Cas des vins rouges
Dans une fiole jauge de 100 ml, introduire en respectant l'ordre suivant :
1 ml de vin dilu au 1/5,
50 ml d'eau distille,
5 ml de ractif de Folin-Ciocalteu,
OIV-MA-AS2-10 : R2009

20 ml de solution de carbonate de sodium.

Porter 100 ml avec de l'eau distille.
Agiter pour homogniser. Attendre 30 minutes pour avoir une stabilisation de
la raction. Dterminer l'absorbance 750 nm sous 1 cm par rapport un
tmoin prpar avec de l'eau distille la place du vin.
Si l'absorbance lue n'est pas voisine de 0,3, il convient de reprendre le mode
opratoire en modifiant la dilution du vin pour obtenir une telle absorbance.
5.2. Cas des vins blancs
Oprer dans les mmes conditions, sur 1 ml de vin non dilu.
6.1. Mode de calcul
Le rsultat est exprim sous forme d'un indice obtenu en multipliant
l'absorbance par 100 dans le cas des vins rouges dilus au 1/5e (ou par le
facteur correspondant la dilution employe) et par 20 dans le cas des vins
blancs.
6.2.Prcision
La diffrence entre les rsultats de 2 dterminations effectues simultanment
ou rapidement l'une aprs l'autre par le mme analyste, ne doit pas tre
suprieure 1.
Une bonne rptabilit des rsultats est lie l'utilisation d'un appareillage
(fioles jauges et cuves du spectrophotomtre) rigoureusement propre.
OIV-MA-AS2-10 : R2009

Mthode Type I
Dtermination des caractristiques chromatiques

selon Cielab
(Rsolution Oeno 1/2006)
1.
Introduction
La couleur du vin est lun des lments visuels les plus importants dont
nous disposons, en ce quelle nous apporte une multitude dinformations
de grande pertinence.
La couleur est une sensation que nous percevons visuellement par leffet
de la rfraction ou de la rflexion de la lumire sur la surface dun objet.
La couleur est lumire, elle est lie troitement la lumire et cest du type
de lumire (illumination ou stimulus lumineux) que dpend la perception
de couleurs diffrentes. La lumire est trs variable, tout comme la couleur
lorsquelle est mesure.
Le vin absorbe une partie seulement des radiations lumineuses quil reoit
et en rflchit une autre partie, laquelle parvient jusqu lil de
lobservateur, lui procurant une sensation de couleur. Par exemple, la
sensation induite par un vin de teinte rouge luminosit trs fonce est
due labsorption quasi complte par ce vin de la radiation incidente.
1.1.
Objet et champ dapplication

Cette mthode spectrophotomtrique a pour objet de dterminer le mode de
mesure et de calcul des caractristiques chromatiques des vins et autres
boissons drives, avec reproduction des sensations de couleur ressenties
par un observateur rel partir des composants trichromatiques X, Y, Z
dfinis par la Commission internationale de lclairage (CIE, 1976).
OIV-MA-AS2-11 : R2006

1.2.
Principe et dfinitions
La couleur dun vin peut tre dfinie par trois attributs ou qualits
spcifiques de la sensation visuelle : sa teinte, sa luminosit (ou luminance)
et son chromatisme.
La teinte, la plus caractristique, dsigne la couleur en soi : rouge, jaune,
vert ou bleu. La luminosit est lattribut de la sensation visuelle selon
laquelle un vin parat plus ou moins lumineux. Le chromatisme ou niveau
de coloration, pour sa part, est li lintensit plus ou moins forte de sa
couleur. La conjugaison de ces trois concepts permet didentifier les
multiples nuances de couleur des vins.
Les caractristiques chromatiques dun vin sont dfinies par les
coordonnes colorimtriques ou de chromacit (Fig. 1) correspondant la
clart (L*), composante de couleur rouge/vert (a*), composante de couleur
jaune/bleu (b*), et par les grandeurs drives, savoir la chroma (C*), le
ton (H*) et la chromacit [(a*,b*) ou (C*,H*)]. En dautres termes, ce
systme de couleur ou espace CIELab se fonde sur une reprsentation
cartsienne squentielle ou continue sur 3 axes orthogonaux L*, a* et b*
(Fig. 2 et 3). La coordonne L* dsigne la clart (L* = 0 noir et L* = 100
incolore), a* dsigne la composante de couleur rouge/vert (a*>0 rouge,
a*<0 vert) et b* la composante de couleur jaune/bleu (b*>0 jaune, b*<0
bleu).
1.2.1. Clart
Son symbole est L* et elle se dfinit par la fonction mathmatique
suivante :
L*=116(Y/Yn)1/3-16
(I)
Elle est directement lie la sensation visuelle de luminosit.
1.2.2.
Composante de couleur rouge/vert

Son symbole est a* et elle se dfinit par la fonction mathmatique
suivante :
a*=500[(X/Xn) -(Y/Yn)] (I)
OIV-MA-AS2-11 : R2006

1.2.3. Composante de couleur jaune/bleu

Son symbole est b* et elle se dfinit par la fonction mathmatique
suivante :
b*=200-[(Y/Yn)1/3-(Z/Zn)1/3 (I)
1.2.4. Chroma
Le symbole de la Chroma est C*, dfini par la fonction mathmatique
suivante :
C* =
(a *2 +b *2 )
1.2.5. Ton
Le symbole du ton est H*, son unit est le degr sexagsimal () et il est
dfini par la fonction mathmatique suivante :
H* = tg-1 (b*/a*)
1.2.6
Diffrence de ton entre deux vins

Le symbole est H*, dfini par la fonction mathmatique suivante :
H* = (E *)2 (L *)2
(I)
1.2.7.
(C *)2
Voir explication annexe I.
Diffrence colorimtrique globale entre deux vins

Le symbole est E*, dfini par les formules mathmatiques suivantes :
E* = (L *)2 + (a *)2 + (b *)2 = (L *)2 + (C *)2 + (H *)2
OIV-MA-AS2-11 : R2006

1.3.
Ractifs et produits
Eau distille.
1.4.
Appareillage et matriel
quipement et appareillage courants de laboratoire, notamment :
1.4.1.
Spectrophotomtre permettant deffectuer des mesures avec une longueur

donde de transmittance comprise entre 300 et 800 nm, avec illuminant
D65 et observateur 10. Utiliser des appareils rsolution gale ou
suprieure 5 nm et, si possible, balayage.
1.4.2. Matriel informatique et programme appropri permettant, en conjonction

avec le spectrophotomtre, de calculer les coordonnes colorimtriques
(L*, a* et b*) et leurs grandeurs drives (C* et H*).
1.4.3. Rcipients de verre, disponibles par paires, de trajet optique de 1, 2 et 10
mm.
1.4.4. Micropipettes permettant de prlever des volumes compris entre 0,020 et 2
ml.
1.5.
chantillonnage et prparation de lchantillon

La prise dessai doit respecter particulirement tous les concepts
dhomognit et de reprsentativit.
Si le vin est trouble, il doit tre clarifi par centrifugation. Concernant les
vins jeunes ou mousseux, la plus grande quantit possible de dioxyde de
carbone doit tre limine par agitation sous vide ou par le biais dun bain
ultrasons.
1.6.
Mode opratoire
Slectionner une paire de rcipients pour raliser la lecture

spectrophotomtrique en veillant ne pas dpasser le plafond de
mesure dans les limites de linarit du spectrophotomtre. titre
indicatif, il est conseill dutiliser pour les vins blancs et ross des
rcipients de 10 mm de trajet optique et d1 mm pour les vins
rouges.
-
Une fois lchantillon prlev et prpar, mesurer sa transmittance

entre 380 et 780 nm tous les 5 nm, en utilisant comme liquide de
rfrence de leau distille place dans un rcipient de mme trajet
optique de manire rgler la ligne de base ou le blanc.
Slectionner lilluminant D65 et un observateur 10.
OIV-MA-AS2-11 : R2006

Si le trajet optique du rcipient de lecture est infrieur 10 mm, il

convient alors de transformer la transmittance 10 mm avant de
procder au calcul de : L*, a*, b*, C* et H*.
Rsum :
Mesures spectrales des transmittances entre 780 et 380 nm
Intervalle : 5 nm
Rcipients : en fonction de lintensit du vin. 1 cm (vins blancs et
ross), 0,1 cm (vins rouges)
Illuminant D65
Observateur standard 10
1.7.
Calculs
Le spectrophotomtre doit tre utilis en conjonction avec un programme
informatique permettant de calculer facilement, au moyen des algorithmes
mathmatiques appropris, les coordonnes colorimtriques (L*, a* et b*) et
leurs grandeurs drives (C* et H*).
En labsence de programme informatique, les calculs seront effectus
conformment lAnnexe 1.
1.8.
Expression des rsultats

Les coordonnes colorimtriques du vin seront exprimes selon les
recommandations nonces au tableau suivant.
Coordonnes
colorimtriques
Symbole Unit
0-100
0 noir
100 incolore
>0 rouge
<0 verte
>0 jaune
<0 bleu
Clart
Composante rouge/vert
a*
Composante jaune/bleu
b*
Chroma
Ton
C*
H*
Intervalle
0-360
Dcimales
1
2
2
2
2
1.9. Exemple numrique

La figure 4 recense les valeurs des coordonnes colorimtriques et prsente
le diagramme de chromaticit dun vin rouge jeune pour les valeurs
suivantes :
OIV-MA-AS2-11 : R2006

X = 12,31 ; Y = 60,03 et Z = 10,24

L* = 29,2
a* = 55,08
b* = 36,10
C* = 66,00
H* = 33,26
2.
Fidlit
Les donnes ci-dessus ont t obtenues dans le cadre de deux essais

interlaboratoires excuts en double aveugle sur 8 chantillons de vin ayant des
caractristiques chromatiques progressives. Ces essais ont t conduits
conformment aux recommandations du Protocole harmonis pour les tudes
collectives en vue de la validation de la mthode danalyse.
2.1.
Coordonne colorimtrique L* (clart, 0-100)
Identification de
lchantillon
Anne de lessai
interlaboratoires
Nombre de laboratoires
participants
admis aprs limination
des valeurs aberrantes
Valeur moyenne ( x )
cart-type de rptabilit
(sr)
cart-type relatif de
rptabilit (RSDr) (%)
Limite de rptabilit (r)
(2,8 x sr)
cart-type de
reproductibilit
(sR)
reproductibilit (RSDR)
(%)
Limite de reproductibilit
(R) (2,8 x sR)
2004
2002
2004
2004
2004
2004
2002
2004
18
21
18
18
17
18
23
18
14
16
16
16
14
17
21
16
96,8
98,0
91,6
86,0
77,4
67,0
34,6
17,6
0,2
0,1
0,2
0,8
0,2
0,9
0,1
0,2
0,2
0,1
0,3
1,0
0,3
1,3
0,2
1,2
0,5
0,2
0,7
2,2
0,7
2,5
0,2
0,6
0,6
0,1
1,2
2,0
0,8
4,1
1,0
1,0
0,6
0,1
1,3
2,3
1,0
6,1
2,9
5,6
1,7
0,4
3,3
5,5
2,2
11,5
2,8
2,8
OIV-MA-AS2-11 : R2006

2.2.
Coordonne colorimtrique a* (vert/rouge)
Identification de
A
lchantillon
Anne de lessai
2004
interlaboratoires
Nombre de
laboratoires
18
participants
Nombre de
laboratoires admis
aprs limination
15
des valeurs
aberrantes
Valeur moyenne
-0,26
(x)
cart-type de
0,17
rptabilit (sr)
rptabilit (RSDr)
66,3
(%)
Limite de
rptabilit (r) (2,8 x 0,49
sr)
cart-type de
reproductibilit
0,30
(sR)
reproductibilit
116,0
(RSDR) (%)
Limite de
reproductibilit (R)
0,85
(2,8 x sR)
OIV-MA-AS2-11 : R2006
2002
2004
2004
2004
2004
2002
2004
21
18
18
17
18
23
18
15
14
15
13
16
23
17
-0,86
2,99
11,11 20,51 29,29 52,13 47,55
0,01
0,04
0,22
0,25
0,26
0,10
0,53
1,4
1,3
2.0
1,2
0,9
0,2
1,1
0,03
0,11
0,61
0,71
0,72
0,29
1,49
0,06
0,28
0,52
0,45
0,98
0,88
1,20
7,5
9,4
4,7
2,2
3,4
1,7
2,5
0,18
0,79
1,45
1,27
2,75
2,47
3,37

2.3.
Coordonne colorimtrique b* (bleu/jaune)
Identification de
lchantillon
Anne de lessai
interlaboratoires
Nombre de
laboratoires
participants
Nombre de
laboratoires admis
aprs limination des
valeurs aberrantes
Valeur moyenne ( x )
cart-type de
rptabilit (sr)
rptabilit (RSDr)
(%)
Limite de rptabilit
(r) (2,8 x sr)
cart-type de
reproductibilit (sR)
reproductibilit
(RSDR) (%)
Limite de
reproductibilit (R)
(2,8 x sR)
2004
2002
2004
2004
2004
2004
2002
2004
17
21
17
17
17
18
23
18
15
16
13
14
16
18
23
15
10,95
9,04
17,75 17,10 19,68 26,51 45,82 30,07
0,25
0,03
0,08
1,08
0,76
0,65
0,15
0,36
2,3
0,4
0,4
6,3
3,8
2,5
0,3
1,2
0,71
0,09
0,21
3,02
2,12
1,83
0,42
1,01
0,79
0,19
0,53
1,18
3,34
2,40
1,44
1,56
7,2
2,1
3,0
6,9
16,9
9,1
3,1
5,2
2,22
0,53
1,47
3,31
9,34
6,72
4,03
4,38
OIV-MA-AS2-11 : R2006

BIBLIOGRAPHIE
-
Vocabulaire International de l'clairage. Publication CIE 17.4.- Publication

I.E.C. 50(845). CEI(1987). Genve. Suisse.
Colorimetry, 2nd. Ed.- Publication CIE 15.2 (1986) Vienna.
Colorimetry, 2nd. Ed.- Publication CIE 15.2 (1986) Vienna.
Kowaliski P. Vision et mesure de la couleur. Masson ed. Paris 1990
Wiszecki G. And W.S.Stiles, Color Science, Concepts and

Methods,Quantitative Data and Formulae, 2end Ed.Wiley, New York 1982
Sve R. .- Physique de la couleur. Masson. Paris (1996)
Echvarri J.F., Ayala F. et Negueruela A.I. .-Influence du pas de mesure dans

le calcul des coordonnes de couleur du vin. Bulletin de l'OIV 831-832, 370378 (2000)
I.R.A.N.O.R . Magnitudes Colorimetricas. Norma UNE 72-031-83
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Fernndez, J.I.; Carceln, J.C.; Martnez, A. III Congreso Nacional De

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cosecha de 1996 en la region de murcia
Cagnaso E..- Metodi Oggettivi per la definizione del colore del vino. Quaderni
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Billmeyer, F.W. jr. And M. Saltzman: Principies of Color. Technology, 2.

Auflage, New York; J. Wiley and Sons, 1981.
OIV-MA-AS2-11 : R2006

ANNEXE 1
Formellement, les composantes trichromatiques X, Y, Z dun stimulus de couleur
rsultent de l'intgration, sur tout le spectre, des fonctions obtenues en multipliant
la courbe spectrale relative du stimulus de couleur par les fonctions colorimtriques
de l'observateur de rfrence. Il sagit toujours des fonctions obtenues
exprimentalement. Il nest donc pas possible de calculer les composants
trichromatiques directement par intgration. En consquence, on doit dterminer
les valeurs approches en remplaant ces intgrales par des sommations des
intervalles des longueurs donde.
K ( ) ( ) S ( ) X 10( ) ( )
T() est la mesure de la transmitance

du vin mesure a la longueur donde
exprime a 1 cm de trajet optique.
K ( ) ( ) S ( ) Y 10( ) ( )
() est lintervalle entre le valeur

de auxquelles on mesure T()
K ( ) ( ) S ( ) Z 10( ) ( )
S(): coefficients fonction de et de

lilluminant. (Tableau 1).
K 100
( )
S ( ) Y 10( ) ( )
X 10( ) ; Y 10( ) ; Z 10( ) : coefficients

fonction de et de lobservateur.
(Tableau 1)
Les formules pour les calculs font rfrence aux valeurs Xn, Yn, y Zn, qui
correspondent au diffuseur parfait pour les conditions dillumination et de
lobservateur de rfrence donns. Ici, lilluminant est D65 et lobservateur 10.
Xn = 94,825; Yn = 100; Zn = 107,381
Cet espace approximativement uniforme est driv de l'espace CIEYxy, o sont
dfinies les composantes trichromatiques X, Y, Z.
OIV-MA-AS2-11 : R2006
10

Les calculs des coordonnes L*, a* y b* son effectus a partir des valeurs des
composants Trichromatiques X, Y, Z, en utilisant les formules suivantes.
L* = 116 (Y / Yn)1/3 16
para Y / Yn > 0,008856
L* = 903,3 (Y / Yn)
para Y / Yn < = 0,008856
a* = 500 [ f(X / Xn) f(Y / Yn)

b* = 200 [f(Y / Yn) f(Z / Zn)
f(X / Xn) = (X / Xn)1/3
para (X / Xn) > 0,008856
f(X / Xn) = 7,787 (X / Xn) + 16 / 166
para (X / Xn) < = 0,008856
f(Y / Yn) = (Y / Yn)1/3
para (Y / Yn) > 0,008856
f(Y / Yn) = 7,787 (Y / Yn) + 16 / 116
para (Y / Yn) < = 0,008856
f(Z / Zn) = (Z / Zn)
1/3
para (Z / Zn) > 0,008856
f(Z / Zn) = 7,787 (Z / Zn) + 16 / 116
para (Z / Zn) < = 0,008856
L'cart colorimtrique global entre deux couleurs est donn par la diffrence de
couleur CIELAB
E* = [( L*)2 + ( a*)2 + ( b*)2]1/2
Dans l'espace CIELAB il est possible d'exprimer des carts de couleur non
seulement globaux, mais aussi suivant un ou plusieurs des paramtres L*, a* et b*.
Cela permet de dfinir de nouveaux paramtres et les relier avec les attributs de la
sensation visuelle.
La clart, relie la luminosit, est directement reprsent par la valeur de L*.
La chroma:C* = (a* 2 + b* 2)1/2 dfinit la chromie.
Langle de teinte: H*= tg-1 (b*/a*) (exprime en degrs). Est reli la teinte.
La diffrence de teinte : H*= [( E*)2 - ( L*)2 - ( C*)2]1/2
Pour deux couleurs quelconques, C* reprsente leur diffrence de chromaticit;
L*, leur diffrence de clart, et E*, leur cart de couleur global. Nous avons
donc:
E* = [( L*)2 + ( a*)2 + ( b*)2]1/2 = [( L*)2 + ( C*)2 + ( H*)2]1/2
OIV-MA-AS2-11 : R2006
11

Tableau 1. Coefficients appliquer dans les formules

Long. d () nm.
S()
10( )
10( )
10( )
380
385
390
395
400
405
410
50,0
52,3
54,6
68,7
82,8
87,1
91,5
0,0002
0,0007
0,0024
0,0072
0,0191
0,0434
0,0847
0,0000
0,0001
0,0003
0,0008
0,0020
0,0045
0,0088
0,0007
0,0029
0,0105
0,0323
0,0860
0,1971
0,3894
415
420
425
430
92,5
93,4
90,1
86,7
0,1406
0,2045
0,2647
0,3147
0,0145
0,0214
0,0295
0,0387
0,6568
0,9725
1,2825
1,5535
435
440
445
450
455
460
465
470
475
480
485
490
495
500
505
510
515
520
525
530
535
540
545
550
555
560
565
95,8
104,9
110,9
117,0
117,4
117,8
116,3
114,9
115,4
115,9
112,4
108,8
109,1
109,4
108,6
107,8
106,3
104,8
106,2
107,7
106,0
104,4
104,2
104,0
102,0
100,0
98,2
0,3577
0,3837
0,3867
0,3707
0,3430
0,3023
0,2541
0,1956
0,1323
0,0805
0,0411
0,0162
0,0051
0,0038
0,0154
0,0375
0,0714
0,1177
0,1730
0,2365
0,3042
0,3768
0,4516
0,5298
0,6161
0,7052
0,7938
0,0496
0,0621
0,0747
0,0895
0,1063
0,1282
0,1528
0,1852
0,2199
0,2536
0,2977
0,3391
0,3954
0,4608
0,5314
0,6067
0,6857
0,7618
0,8233
0,8752
0,9238
0,9620
0,9822
0,9918
0,9991
0,9973
0,9824
1,7985
1,9673
2,0273
1,9948
1,9007
1,7454
1,5549
1,3176
1,0302
0,7721
0,5701
0,4153
0,3024
0,2185
0,1592
0,1120
0,0822
0,0607
0,0431
0,0305
0,0206
0,0137
0,0079
0,0040
0,0011
0,0000
0,0000
OIV-MA-AS2-11 : R2006
12

570
575
580
585
590
595
600
605
610
615
620
625
630
635
640
645
650
655
660
665
670
675
680
685
690
695
700
705
710
715
720
725
730
735
740
745
750
755
760
765
770
775
780
96,3
96,1
95,8
92,2
88,7
89,3
90,0
89,8
89,6
88,6
87,7
85,5
83,3
83,5
83,7
81,9
80,0
80,1
80,2
81,2
82,3
80,3
78,3
74,0
69,7
70,7
71,6
73,0
74,3
68,0
61,6
65,7
69,9
72,5
75,1
69,3
63,6
55,0
46,4
56,6
66,8
65,1
63,4
OIV-MA-AS2-11 : R2006
0,8787
0,9512
1,0142
1,0743
1,1185
1,1343
1,1240
1,0891
1,0305
0,9507
0,8563
0,7549
0,6475
0,5351
0,4316
0,3437
0,2683
0,2043
0,1526
0,1122
0,0813
0,0579
0,0409
0,0286
0,0199
0,0138
0,0096
0,0066
0,0046
0,0031
0,0022
0,0015
0,0010
0,0007
0,0005
0,0004
0,0003
0,0002
0,0001
0,0001
0,0001
0,0000
0,0000
0,9556
0,9152
0,8689
0,8256
0,7774
0,7204
0,6583
0,5939
0,5280
0,4618
0,3981
0,3396
0,2835
0,2283
0,1798
0,1402
0,1076
0,0812
0,0603
0,0441
0,0318
0,0226
0,0159
0,0111
0,0077
0,0054
0,0037
0,0026
0,0018
0,0012
0,0008
0,0006
0,0004
0,0003
0,0002
0,0001
0,0001
0,0001
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
0,0000
13

L* (clarte)
b* (bleu)
- a* (vert)
+ a** (rouge)
(r
+b* (jaune)
Figure 1 : Diagramme des coordonnes colorimtriques selon la Commission

Internationale de lEclairage (CIE, 1976)
OIV-MA-AS2-11 : R2006
14

L*
-b*
-a*
+a *
+b*
C*
(
cr
om
a)
Figure 2. Espace CIELab de couleur partir dune reprsentation cartsienne

squentielle ou continue des 3 axes orthogonaux L, a et b.
OIV-MA-AS2-11 : R2006
15
-b*

+a*
+b*
-a*
H* o
n
To
Figure 3. Diagramme squentiel et/ou continu des coordonnes colorimtriques a et

b et de magnitude drive comme le ton (H).
OIV-MA-AS2-11 : R2006
16

Exemple:
ROUGE
Ejemplo: VIN
VINO
TINTOJEUNE
JOVEN
OBTENTION DES PARAMETRES ANALYTIQUES:

1.- Valeurs triestmulos
2.- Coordonnes CIELab
X = 12,31
Y = 60,03
Z = 10,24
a* = 55,08
b* = 36,10
L* = 29,20
REPRESENTATION GRAPHIQUE ET
CHROMATICITE
EXPRESSION DES RESULTATS:
b*, jaune
C*, chroma
b* = 36,10
C* = 66,00
H* = 33,26
- a*, vert
a* rouge
H*, ton
a* = 55,08
- b*, bleu
L*, Clart = 100

LUMINOSITE
L* = 29,20
b*, jaune
- a*, vert
a*,rouge
Figure 4. Reprsentation de la couleur dun vin rouge jeune, utilis comme

exemple dans le chapitre 1.8, par un diagramme tridimensionnel de lespace
CIELab.
OIV-MA-AS2-11 : R2006
17

Mthode Type II
Mthode de dtermination du rapport isotopique 18O/16O

de leau dans le vin et le mot
(Rsolution OIV-Oeno 353/2009)
1.
CHAMP DAPPLICATION
La mthode permet la dtermination du rapport isotopique 18O/16O de leau dans le
vin et le mot aprs quilibrage avec du CO2, par spectromtrie de masse
isotopique (SMRI).
2.
NORMES DE RFRENCE
ISO 5725:1994 :
Exactitude (justesse et fidlit) des rsultats et mthodes de
mesure : mthode de base pour la dtermination de la
rptabilit et de la reproductibilit dune mthode de mesure
normalise.
V-SMOW :
Vienna-Standard Mean Ocean Water (18O/16O = RV-SMOW =
0,0020052).
GISP
Greenland Ice Sheet Precipitation
SLAP
Standard Light Antarctic Precipitation
3.
DFINITIONS
18
O/16O
Rapport isotopique entre loxygne 18 et loxygne 16 pour un
chantillon donn
18OV-SMOW
chelle relative pour lexpression du rapport isotopique entre
loxygne 18 et loxygne 16 pour un chantillon donn. 18OVSMOW se calcule par lquation suivante :
18O V SMOW
18 O
18 O
16
16
O sample O s tan dard
1000
18 O
16
O
s tan dard
OIV-MA-AS2-12 : R2009

avec V-SMOW comme talon et point de rfrence pour lchelle relative .

BCR
AIEA
IRMM
SMRI
m/z
NIST
MR
Bureau communautaire de rfrence

Agence internationale de lnergie atomique (Vienne, Autriche)
Institut des matriaux et mesures de rfrence
Spectromtrie de masse isotopique
Rapport masse sur charge
National Institute of Standards & Technology
matriau de rfrence
4.
PRINCIPE
La technique dcrite ci-aprs est fonde sur lquilibrage isotopique de leau dans
des chantillons de vin ou de mot avec un gaz-type CO2 selon la raction
dchange isotopique suivante :
C16O 2 H 2 18 O C16 O18 O H 2 16 O

Aprs quilibrage, le dioxyde de carbone dans la phase gazeuse est utilis pour
analyse par spectromtrie de masse isotopique (SMRI), o le rapport isotopique
18
O/16O est dtermin sur le CO2 rsultant de lquilibrage.
5.
RACTIFS ET MATRIAUX
Les matriaux et consommables sont fonction de la mthode employe (voir la
section 6). Les systmes gnralement utiliss sont fonds sur lquilibrage de
leau dans du vin ou du mot avec du CO2.
Les matriaux de rfrence, talons de travail et consommables suivants peuvent
tre utiliss :
5.1 Matriaux de rfrence
Nom
V-SMOW, MR 8535
BCR-659
GISP, MR 8536
SLAP, MR 8537
diteur/Auteur
AIEA / NIST
IRMM
AIEA / NIST
AIEA / NIST
18O versus V-SMOW

0
- 7,18
- 24,78
- 55,5
5.2 talons de travail

5.2.1 Dioxyde de carbone employ pour lquilibrage et comme gaz de rfrence
secondaire pour la mesure (CAS 00124-38-9).
OIV-MA-AS2-12 : R2009

5.2.2 Le dioxyde de carbone utilis pour lquilibrage (selon linstrumentation, le

le gaz pourrait tre identique celui en 5.2.1 ou dans le cas dun systme de
cylindres flux continu, ,un mlange gazeux dhlium- et de dioxyde carbone peut
aussi tre utilis.
5.2.3 talons de travail avec des valeurs 18OV-SMOW calibrs par rapport des
matriaux de rfrence internationaux.
5.3 Consommables
Hlium pour analyse (CAS 07440-59-7).
6.
APPAREILLAGE
6.1 Spectromtrie de masse isotopique (SMRI)
Le spectromtre de masse isotopique (SMRI) permet la dtermination des teneurs
relatives en 18O de gaz CO2 en abondance naturelle avec une prcision interne de
0,05 . La prcision interne se dfinit ici comme la diffrence entre deux mesures
du mme chantillon de CO2.
Le spectromtre de masse utilis pour dterminer la composition isotopique du gaz
CO2 est gnralement quip dun collecteur triple afin de mesurer simultanment
les courants ioniques suivants :
- m/z = 44 (12C16O16O)
- m/z = 45 (13C16O16O et 12C17O16O)
- m/z = 46 (12C16O18O, 12C17O17O et 13C17O16O)
En mesurant les intensits correspondantes, le rapport isotopique 18O/16O est
dtermin partir du rapport des intensits de m/z = 46 et m/z = 44 aprs
corrections pour les espces isobariques (12C17O17O et 13C17O16O) dont les
contributions peuvent tre calcules partir de lintensit effective observe pour
m/z = 45 et des abondances isotopiques habituelles de 13C et 17O dans la nature.
Le spectromtre de masse isotopique doit tre quip dun des systmes suivants :
- systme double introduction (double entre) pour mesurer en alternance
lchantillon inconnu et ltalon de rfrence.
- ou systme flux continu qui transfre quantitativement dans le spectromtre de
masse le CO2 depuis les fioles dchantillon aprs quilibrage, mais aussi le CO2,
gaz de rfrence,
6.2 Equipement et matriel
Tout le matriel doit satisfaire aux exigences de la mthode ou de lappareillage
utilis (spcifies par le fabricant). Cependant, les matriels pourront tre
remplacs par des lments aux performances analogues.
OIV-MA-AS2-12 : R2009

6.2.1
6.2.2
6.2.3
6.2.4
6.2.5
6.2.6
6.2.7
6.2.8
Fioles avec des septums adapts au systme employ.

Pipettes volumtriques avec des cnes adapts.
Systme thermiquement rgul pour effectuer lquilibrage
temprature constante, gnralement 1 C.
Pompe vide (si le systme employ lexige).
Passeur dchantillons (si le systme employ lexige).
Seringues pour lchantillonnage (si le systme employ lexige).
Colonne CG pour sparer le CO2 dautres gaz lmentaires (si le
systme employ lexige).
Dispositif dlimination deau (ex. : cryopige, membranes
permables slectives).
7.
CHANTILLONNAGE
Les chantillons de vin et de mot, ainsi que les matriaux de rfrence, sont
utiliss pour lanalyse sans prtraitement. En cas dune possible fermentation de
lchantillon, il faudrait ajouter de lacide benzoque (ou un autre antiferment) ou
filtrer avec un filtre de diamtre de pore de 0,22 m.
Les matriaux de rfrence utiliss pour le calibrage et la correction des drives
doivent, de prfrence, tre placs au dbut et la fin de la squence et tre insrs
des intervalles de dix chantillons.
8.
PROCDURE
Les descriptions ci-aprs renvoient aux procdures gnralement appliques pour
la dtermination des rapports isotopiques 18O/16O par quilibrage de leau avec un
talon de travail de CO2 et mesure par SMRI. Ces procdures peuvent tre
adaptes en fonction des modifications apportes aux matriels et instruments par
les fabricants ainsi diffrents appareils dquilibre sont disponibles, exigeant
diffrentes conditions de fonctionnement. Deux principales procdures techniques
peuvent tre utilises pour introduire le CO2 dans l IRMS soit par un systme de
double orifice soit par lutilisation du systme en flux continu. La description de
ces systmes techniques ainsi que les conditions de lopration correspondantes
nest pas possible.
Remarque : toutes les valeurs mentionnes pour les volumes, les tempratures, les
pressions et les dlais sont fournies titre purement indicatif. Les valeurs exactes
doivent tre spcifies sur la base des caractristiques techniques des fabricants
et/ou dtermines de manire exprimentale.
OIV-MA-AS2-12 : R2009

8.1 quilibrage manuel

Un volume dfini de lchantillon/talon est transfr dans un flacon au moyen
dune pipette. Le flacon est ensuite solidement fix au collecteur.
Chaque collecteur est refroidi une temprature infrieure - 80 C de manire
congeler les chantillons. (un collecteur muni dune tube capillaire ne ncessite
pas cette tape de conglation) Par la suite, le vide est fait dans tout le systme.
Une fois quun vide stable est tabli, le CO2 gazeux servant dtalon de travail est
introduit dans les diffrents flacons. Pour le processus dquilibrage, chaque
collecteur est plac dans un bain d'eau thermiquement rgul 25 C (1 C)
pendant 12 heures (jusquau lendemain). Il est crucial que la temprature du bain
d'eau soit maintenue constante et homogne.
Une fois le processus dquilibrage achev, le CO2 obtenu est transfr depuis les
flacons vers le ct chantillon sous le systme dintroduction double,. Les
mesures sont prises en comparant plusieurs fois les rapports du CO2 contenus ct
chantillon et ct talon (gaz talon de rfrence : CO2) du systme
dintroduction double. Cette approche est rpte jusqu ce que le dernier
chantillon de la squence soit mesur.
8.2 Utilisation dun appareil dquilibrage automatique
Un volume dfini de lchantillon/talon est transfr dans une fiole au moyen
dune pipette. Les fioles dchantillon sont fixes au systme dquilibrage et
refroidies une temprature infrieure - 80 C de manire congeler les
chantillons. (un collecteur muni dune tube capillaire ne ncessite pas cette tape
de conglation) Par la suite, le vide est fait dans tout le systme.
Une fois quun vide stable est tabli, le CO2 gazeux servant dtalon de travail est
introduit dans les fioles. Lquilibre est gnralement atteint une temprature de
22 0,5 C lissue dun dlai minimal de 5 heures, avec une agitation modre
(le cas chant). Comme la dure de lquilibrage est fonction de divers
paramtres (ex. : la gomtrie de la fiole, la temprature, lagitation, etc.), la dure
minimale dquilibre doit tre dtermine de manire exprimentale.
Une fois le processus dquilibrage achev, le CO2 obtenu est transfr depuis les
fioles vers le ct chantillon du systme dintroduction double,. Les mesures sont
prises en comparant plusieurs fois les rapports du CO2 contenus ct chantillon et
ct talon (gaz talon de rfrence : CO2) du systme dintroduction double. Cette
approche est rpte jusqu ce que le dernier chantillon de la squence soit
mesur.
8.3 Prparation manuelle et dquilibrage automatique et analyse dune systme de
double orifice coupl un systme flux continu IRMS
Un volume dfini de lchantillon/talon (200 ul par exemple) est transfr dans
une fiole au moyen dune pipette. Les fioles ouvertes sont places dans une
OIV-MA-AS2-12 : R2009

chambre ferme remplie de CO2 utilise pour lquilibrage (5.2.2). Aprs plusieurs
purges pour liminer toute trace dair, les fioles sont fermes et places sur un
plateau thermiquement rgul du passeur dchantillons. Lquilibrage est atteint
aprs au moins 8 heures 40C. Une fois le processus dquilibrage termin, le
CO2 obtenu est sch et transfr du ct chantillon du systme de double orifice.
Les dterminations sont effectues plusieurs reprises par la comparaison des
pourcentages de CO2 contenus du ct chantillon et du ct talon (le CO2
rfrence du gaz talon) du double orifice. Cette approche est rpt jusqu la
dtermination du dernier chantillon de la squence.
8.3 Utilisation dun appareil dquilibrage automatique coupl un systme flux
continu
Un volume dfini de lchantillon/talon est transfr dans une fiole au moyen
dune pipette. Les fioles dchantillon sont places sur un plateau thermiquement
rgul.
laide dune seringue gaz, les fioles sont rinces avec un mlange de He et de
CO2. Le CO2 demeure dans lespace de tte des fioles pour lquilibrage.
Lquilibre est gnralement atteint une temprature de 30 1 C lissue dun
dlai minimal de 18 heures.
Une fois le processus dquilibrage achev, le CO2 obtenu est transfr par le
systme flux continu vers la source ionique du spectromtre de masse. Du gaz de
rfrence CO2 est galement introduit dans le SMRI par le systme flux continu.
La mesure est prise en fonction du protocole spcifique du matriel employ.
9.
CALCULS
Les intensits pour m/z = 44, 45, 46 sont consignes pour chaque chantillon et
pour les matriaux de rfrence analyss dans un lot de mesures. Les rapports
isotopiques 18O/16O sont ensuite calculs par lordinateur et le logiciel du SMRI
suivant les principes noncs au paragraphe 6.1. Dans la pratique, les rapports
isotopiques 18O/16O sont mesurs par rapport un talon de travail pralablement
calibr par rapport au V-SMOW. De lgres variations peuvent se produire
pendant la mesure en ligne du fait des modifications dues aux conditions
instrumentales. Dans ce cas, le 18O des chantillons doit tre corrig en fonction
de la diffrence entre la valeur 18O de ltalon de travail et sa valeur assigne,
pralablement calibre par rapport au V-SMOW. Entre deux mesures de ltalon
de travail, la variation est la correction applique aux rsultats de lchantillon, qui
sont supposes linaires. En effet, ltalon de travail doit tre mesur au dbut et
la fin de toutes les sries dchantillons. De ce fait, une correction peut tre
calcule pour chaque chantillon au moyen dune interpolation linaire entre deux
valeurs (la diffrence entre la valeur assigne de ltalon de travail et les mesures
des valeurs obtenues).
OIV-MA-AS2-12 : R2009

Les rsultats finaux sont prsents comme des valeurs relatives 18OV-SMOW
exprimes en .
Les valeurs 18OV-SMOW se calculent par lquation suivante :
18OV SMOW
18O
18O
16
16
O sample O V SMOW

1000
18O
16
O V SMOW
Lavaleur 18O normalise versus lchelle V-SMOW/SLAP se calcule par

lquation suivante :
O V SMOW / SLAP
18
18O sample 18O V SMOW

18
55.5
18
O V SMOW O SLAP
La valeur 18OV-SMOW admise pour SLAP est de -55,5 (voir aussi 5.2).
10.
PRCISION
La rptabilit (r) est gale 0,24 .

La reproductibilit (R) est gale 0,50 .
OIV-MA-AS2-12 : R2009

Rsum des rsultats statistiques
Moy
gnrale
()
Ecart type
de
rptabilit
() sr
Repetabilit
() r
Ecart type de
reproductibilit
() sR
Reproducibilit
() R
Echantillon 1
-8,20
0,068
0,19
0,171
0,48
Echantillon 2
-8,22
0,096
0,27
0,136
0,38
Echantillon 5
6,87
0,098
0,27
0,220
0,62
Echantillon 8
6,02
0,074
0,21
0,167
0,47
Echantillon 9
5,19
0,094
0,26
0,194
0,54
Echantillon 4
3,59
0,106
0,30
0,205
0,57
Echantillon 3
-1,54
0,065
0,18
0,165
0,46
Echantillon 6
-1,79
0,078
0,22
0,141
0,40
Echantillon 7
-2,04
0,089
0,25
0,173
0,49
Echantillon
-2,61
0,103
0,29
0,200
0,56
Eau
Vin N 1
Vin N 2
10
11.
TUDES INTERLABORATOIRES
Bulletin de lO.I.V. janvier-fvrier 1997, 791-792, pp.53 65.
OIV-MA-AS2-12 : R2009

12.
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lexprimentation et du traitement de lchantillon sur la prcision et la justesse
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[23 ] Breas, O., Schultheis G., Reniero F., and GuillouC. Method for 18O/16O
isotope ratio determination of water in wine and must OIV FV 1261
OIV-MA-AS2-12 : R2009
10

Taille des morceaux de bois de chne
Mthode Type I
Mthode pour la dtermination de la taille

des morceaux de bois de chne par tamisage
Resolution OIV-Oeno 406-2011
1. Introduction
Lutilisation de morceaux de bois de chne, dnomms communment copeaux,
pour traiter le vin est autorise sous rserve quils respectent les spcifications du
Codex nologique (rsolution oeno 3/2005). En particulier, les copeaux mis en
uvre doivent rpondre une exigence en matire dedimensions. Il est prcis
que les dimensions des particules sont telles quau moins 95% en poids sont
retenues par le tamis dont les mailles sont de 2 mm (soit 9 mesh) . Le mode
opratoire suivant donne une mthode de division de lchantillon puis de tamisage
permettant de vrifier cette exigence.
2. Domaine dapplication
La mthode sapplique aux chantillons de plus 0,5 kg de copeaux de bois.
3. Principe
Aprs division de lchantillon de dpart, une quantit connue de copeaux (200 g
environ) est place sur un tamis vibrant. La pese des copeaux restants sur le tamis
aprs agitation permet de dterminer le pourcentage en poids de particules retenues
par le tamis.
4. Matriel
- Matriel courant de laboratoire.
OIV-MA-AS2-13 : R2011

- Tamis de maille carre de 2 mm (soit 9 mesh), de 30 cm de diamtre,

mont sur un plateau vibrant muni dun bac de rcupration.
- Balance permettant des peses 0,1 g prs.
- Diviseur dchantillon fentes (voir figure ci-dessous a titre indicatif).
Diviseur dchantillon fentes (EN 1482-1 : 2007)

Schma donn a titre Indicatif
5. Division de lchantillon
Lorsquil est ncessaire de rduire la taille de l'chantillon pour obtenir des souschantillons de 200 g qui conservent un caractre homogne et reprsentatif de
lchantillon de dpart, on peut utiliser un diviseur d'chantillon fentes qui permet
de sparer de manire alatoire un chantillon en 2.
OIV-MA-AS2-13 : R2011

Lchantillon prlev est entirement vers dans le diviseur de manire le sparer

en deux parties statistiquement quivalentes. Une moiti est mise de ct, lautre
moiti subit nouveau un fractionnement grce au rpartiteur de chute. Cette
opration est renouvele aussi souvent que ncessaire, une moiti tant limine
chaque tape, lobjectif final tant dobtenir 2 sous-chantillons denviron 200 g
chacun.
6. Mode opratoire
-
Peser le tamis vide (P TV ).
Peser le bac de rcupration vide (P BV ).
Tarer lensemble tamis + bac de rcupration et y dposer environ 200g
de copeaux pess 0,1 g prs. Soit P COP le poids des copeaux tamiser.
Placer lensemble sur le plateau vibrant et fermer le couvercle au

moyen des boucles de serrage.
Mettre lappareil en route et laisser vibrer pendant 15 minutes.
Peser le tamis contenant les particules restantes qui ne sont pas passes
travers les mailles de 2mm (P TP ).
Peser le bac de rcupration contenant les particules ayant travers le

tamis (P BP )
Un deuxime essai est ralis dans ces conditions sur le deuxime souschantillon de copeaux issu du mme chantillon de dpart.
Remarque : les peses du bac de rcupration avant et aprs tamisage (P BV

et P BP ) servent vrifier quil ny a pas eu de perte dchantillon durant
lopration.
On doit avoir : P TV + P BV + P COP
OIV-MA-AS2-13 : R2011
P TP + P BP

7. Calcul
Le pourcentage (en poids) de particules retenues par le tamis dont les mailles sont
de 2mm est donn par la formule suivante :
% de particules retenues
(P TP P TV ) X 100
P COP
Ce calcul est effectu pour chacun des 2 sous-chantillons issus de lchantillon de

dpart, le pourcentage de particules retenues correspond la moyenne des 2
rsultats.
8. Bibliographie
Rsolution oeno 3/2005 : MORCEAUX DE BOIS DE CHENE
EN 1482-1- Engrais et amendements minraux basiques- Echantillonage et

prparation de lchantillon- Partie 1 : chantillonage.
OIV-MA-AS2-13 : R2011

OIV-MA-AS2-13 : R2011

Sucres rducteurs
Mthode Type IV
Substances rductrices
(Rsolution OIV/Oeno 377/2009)
1. Dfinition
Les substances rductrices sont constitus par l'ensemble des sucres fonction
ctonique ou aldhydique doss par leur action rductrice sur la solution cuproalcaline.
Dfcation
Mthodes usuelles : le vin est trait par l'un des ractifs suivants:
- Actate neutre de plomb
- Hexacyanoferrate (II) de zinc
3.
Dfcation
Le liquide dans lequel les sucres seront doss doit prsenter une teneur en
sucres comprise entre 0,5 et 5 g/l.
Si le vin est sec, il faut viter de le diluer pendant la dfcation; s'il est doux, il
faut le diluer tout en le dfquant, de manire amener la teneur en sucres
entre ces limites, suivant le tableau ci-dessous.
Dnomination
Teneur en sucres
comprise entre
(g/l)
Masse
volumique
comprise entre
Dilution
prvoir
(%)
> 125
> 1,038
25 125
1,005 1,038
5 25
0,997 1,005
20
<5
< 0,997
pas de dilution
Mots et mistelles
Vins doux spiritueux ou non
Vins moelleux
Vins secs
3.1. Mthodes
3.1.1. Dfcation l'actate neutre de plomb
3.1.1.1. Ractifs
- Solution d'actate neutre de plomb (approximativement sature):
Actate neutre de plomb, Pb (CH3COO)2.3H2O .. 250 g
Eau trs chaude q.s.p. ....................................... . 500 mL
OIV-MA-AS311-01A : R2009

Sucres rducteurs
Agiter jusqu' dissolution.

- Solution d'hydroxyde de sodium, 1M
- Carbonate de calcium.
3.1.1.2. Mode opratoire
- Vins secs
50 ml de vin sont placs dans une fiole jauge de 100 ml ; ajouter 0,5 (n-0,5)
ml de solution M d'hydroxyde de sodium, n tant le volume de solution
dhydroxyde de sodium 0,1 M utilis pour doser l'acidit totale de 10 ml de
vin. Ajouter en agitant 2,5 ml de solution sature d'actate de plomb et 0,5 g
de carbonate de calcium, agiter plusieurs reprises et abandonner au moins
15 min ; porter au trait de jauge avec de l'eau. Filtrer.
1 ml de filtrat correspond 0,5 ml de vin.
- Mots, mistelles, vins doux et vins moelleux
Dans une fiole jauge de 100 ml, placer un volume de vin (ou de mots ou
de mistelles) ainsi dfini, les dilutions ci-dessous tant donnes titre
indicatif:
1er cas - Mots et mistelles : diluer 10 p. 100 le liquide analyser, prlever
10 ml de cette dilution.
2me cas - Vins doux, vins ou non, dont la masse volumique est comprise
entre 1,005 et 1,038. Diluer 20 p. 1000 de liquide analyser, prlever 20
ml de cette solution.
3me cas - Vins moelleux, dont la masse volumique est comprise entre 0,997
et 1,005. Prlever 20 ml de vin non dilu.
Ajouter 60 ml deau environ, 0,5, 1 ou 2 ml dactate de plomb en solution
sature et 0,5 g de carbonate de calcium ; agiter et laisser au repos pendant
15 min . au moins en agitant de temps en temps. Porter au trait de jauge avec
de l'eau. Filtrer.
1er cas - 1 ml de filtrat correspond 0,01 ml de mot ou de mistelle;
2me cas - 1 ml de filtrat correspond 0,04 ml de vin doux;
3me cas - 1 ml de filtrat correspond 0,20 ml de vin moelleux.
3.2.2. Dfcation par l'hexacyanoferrate (II) de zinc
Ce procd de dfcation ne devra tre utilis que pour les vins blancs, les vins
doux peu colors et les mots
OIV-MA-AS311-01A : R2009

Sucres rducteurs
3.2.2.1. Ractifs
Solution I d'hexacyanoferrate (II) de potassium
Hexacyanoferrate (II) de potassium (II), K4Fe(CN)6.3H2O ....... 150 g
Eau q.s.p. ............................................................................................................... 1000 ml
Solution II de sulfate de zinc :
300 g
Sulfate de zinc ZnSO4.7H2O ..............................................................................
Eau q.s.p. .........................................................................................................1000 ml
3.2.2.2. Mode opratoire

Dans une fiole jauge de 100 ml, placer un volume de vin (ou de mot ou de
mistelle) ainsi dfini, les dilutions ci-dessous tant donnes titre indicatif:
1er cas - Mots et mistelles : diluer 10 p. 100 le liquide analyser, prlever
10 ml de cette dilution.
2e cas - Vins doux, vins ou non, dont la masse volumique est comprise entre
1,005 et 1,038. Diluer 20 p. 1000 de liquide analyser, prlever 20 ml de
cette solution.
3me cas - Vins moelleux, dont la masse volumique est comprise entre 0,997 et
1,005. Prlever 20 ml de vin non dilu.
4me cas : Vins secs, prlever 50 ml de vin non dilu.
Ajouter 5 ml de solution I dhexacyanoferrate (II) de potassium et 5 ml de
solution II de sulfate de zinc. Mlanger. Porter au trait de jauge avec de leau.
Attendre 10 min. filtrer.
1er cas - 1 ml de filtrat correspond 0,01 ml de mot ou de mistelle;
2me cas - 1 ml de filtrat correspond 0,04 ml de vin doux;
3me cas - 1 ml de filtrat correspond 0,20 ml de vin moelleux.
4me cas - 1 ml de filtrat correspond 0,50 ml de vin sec.
4. Dosage
4.1. Ractifs
- Solution cupro-alcaline :
Sulfate de cuivre pur (CuSO4,5 H2O) ........ 25 g
Acide citrique (C6 H8 O7, H2O) . 50 g
Carbonate de sodium cristallis (Na2 CO3,10 H2O) .. 388 g
Eau q.s.p. ...... 1000 ml
Dissoudre le sulfate de cuivre dans 100 ml d'eau, l'acide citrique dans 300 ml
d'eau et le carbonate de sodium dans 300 400 ml d'eau chaude. Mlanger la
solution d'acide citrique et la solution de carbonate de sodium. Ajouter
ensuite la solution de sulfate de cuivre et porter au litre.
OIV-MA-AS311-01A : R2009

Sucres rducteurs
- Solution d'iodure de potassium 30 p. 100

30 g
Iodure de potassium (KI) ......
Eau q.s.p. . 100 ml
Conserver en flacon de verre teint.
- Acide sulfurique 25 p. 100
Acide sulfurique pur 20 = 1,84 g/ml .... 25 g
Eau q.s.p. 100 ml
Verser l'acide dans l'eau, laisser refroidir et porter 100 ml.
- Empois d'amidon 5 g/l
Dlayer 5 g d'amidon dans 500 ml d'eau environ. Porter bullition en
agitant et maintenir l'bullition pendant 10 min. Ajouter 200 g de chlorure de
sodium. Porter au litre aprs refroidissement.
- Thiosulfate de sodium solution 0,1 M
- Solution de sucre interverti 5 g/l, solution utiliser pour vrifier la
technique du dosage.
Dans une fiole jauge de 200 ml, placer :
Saccharose pur et sec ........................................................ 4,75 g
Eau environ ............................................. 100 mL
Acide chlorhydrique pur (20 = 1,16 1,19 g/mL) ...... 5 mL
Plonger la fiole dans un bain d'eau 60 C pendant un temps suffisant pour
que la temprature de la solution atteigne 50 C, temprature que l'on
maintient durant 15 min. Abandonner ensuite la fiole au refroidissement
spontan durant 30 min. puis refroidir par immersion dans un bain d'eau
froide. Transvaser dans une fiole jauge de 1 l, porter au litre. Cette solution
se conserve bien durant un mois. Au moment de l'emploi neutraliser la prise
d'essai (cette solution est approximativement 0,06 M acide), avec une
solution d'hydroxyde de sodium.
4.2. Mode opratoire
Dans une fiole conique de 300 ml, placer 25 ml de solution cupro-alcaline, 15
ml d'eau et 10 ml de solution de dfcation. Ce volume de solution sucre ne
doit pas contenir plus de 60 mg de sucre inverti.
Ajouter quelques grains de pierre ponce. Adapter la fiole un rfrigrant
reflux et porter l'bullition qui doit tre atteinte en 2 minutes. Maintenir
l'bullition pendant 10 min. exactement.
Refroidir immdiatement sous un courant d'eau froide. Aprs refroidissement
complet, ajouter 10 ml de solution d'iodure de potassium 30 p. 100, 25 ml
d'acide sulfurique 25 p. 100 et 2 ml d'empois d'amidon.
OIV-MA-AS311-01A : R2009

Sucres rducteurs
Titrer par la solution 0,1 M de thiosulfate de sodium. Soit n le nombre de

millilitres utiliss.
Par ailleurs, effectuer un dosage tmoin dans lequel 25 ml d'eau distille
remplacent les 25 ml de solution sucre. Soit n le volume de thiosulfate
employ.
4.3.Expression des rsultats
4.3.1. Calculs
La quantit de sucre, exprime en sucre inverti, contenue dans la prise d'essai,
est donne dans le tableau ci-aprs en fonction du nombre n - n de millilitres
de thiosulfate utiliss.
Exprimer la teneur du vin en grammes de sucre inverti par litre avec une
dcimale en tenant compte des dilutions effectues au cours de la dfcation et
du volume de la prise d'essai.
Tableau de correspondance entre le volume de solution 0,1 M de thiosulfate de

sodium: (n'-n) ml, et la quantit de sucres rducteurs en mg,
Na2S2O3 Sucres rducteurs
Diff,
(mg)
(ml 0,1 M)
1
2,4
2,4
2
4,8
2,4
3
7,2
2,5
4
9,7
2,5
5
12,2
2,5
6
14,7
2,6
7
17,2
2,6
8
19,8
2,6
9
22,4
2,6
10
25,0
2,6
11
27,6
2,7
12
30,3
2,7
Na2S2O3
(ml 0,1 M)
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
Sucres rducteurs
(mg)
33,0
35,7
38,5
41,3
44,2
47,2
50,0
53,0
56,0
59,1
62,2
Diff,
2,7
2,8
2,8
2,9
2,9
2,9
3,0
3,0
3,1
3,1
BIBLIOGRAPHIE
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SCHNEYDER J., VLECK G., Mitt. Klosterneuburg, Rebe und Wein, 1961, sr. A,
135.
OIV-MA-AS311-01A : R2009

Sucres rducteurs
LUFF, Z. Ges. Braun., 1898, 21, 319; Chemiker Zentralblatt, 1898, II, 393.
SCHOORL N., Z. Lebensmit. Unters. Forsch., 1929, No. 566, 57.
OIV-MA-AS311-01A : R2009

Sucres rducteurs
Mthode Type IV
Sucres rducteurs
Dfcation
Mthode de rfrence : passage du vin neutralis et dsalcoolis sur une
colonne changeuse d'anions sous forme actate o ses anions sont changs
par les ions actiques, suivi de la dfcation par l'actate neutre de plomb.
SUPPRIME
OIV-MA-AS311-01B : R2009

Sucres rducteurs
Mthode OIV-MA-AS311-01C
Mthode Type II
Sucres rducteurs
Dosage
Mthode unique: aprs avoir fait ragir le vin ou le mot dfqu sur une
quantit dtermine de solution cupro-alcaline, l'excs d'ions cuivriques est
dos par iodomtrie.
SUPPRIME
OIV-MA-AS311-01C : R2009

Glucose et fructose
Mthode Type II
Glucose et fructose
1. Dfinition
Le glucose et le fructose peuvent tre doss individuellement par une mthode
enzymatique, en vue seulement du calcul du rapport glucose/fructose.
2. Principe
Le glucose et le fructose sont phosphoryls par ladnosine triphosphate (ATP) au
cours dune raction enzymatique catalyse par lhexokinase (HK), et donnent du
glucose-6-phosphate (G6P) et du fructose-6-phosphate (F6P) :
HK
glucose + ATP
G6P + ADP
HK
fructose + ATP
F6P + ADP
dans un premier temps le glucose-6-phosphate est oxyd en gluconate-6-phosphate

par le nicotinamide-adnine-dinuclotide-phosphate (NADP) en prsence de
lenzyme glucose-6-phosphate-dhydrogenase (G6PDH). La quantit de
nicotinamide-adnine-dinuclotide-phosphate rduite (NADPH) qui prend
naissance correspond la quantit de glucose-6-phosphate et donc celle de
glucose.
G6PDH
+
gluconate-6-phosphate + NADPH + H
G6P + NADP+
Cest la nicotinamide-adnine-dinuclotide-phosphate rduit qui est dos daprs

son absorption 340 nm.
Lorsque cette raction est termine, le fructose-6-phosphate est transform sous
laction de la phosphoglucose-isomrase (PGI) en glucose-6-phospate :
PGI
F6P
G6P
Le glucose-6-phosphate ragit nouveau avec le nicotinamide-adninedinuclotide-phosphate pour donner du gluconate-6-phosphate et du nicotinamideadnine-dinucleotide-phosphate rduit ; celui-ci sera dos.
3. Appareillage
Spectrophotomtre permettant deffectuer la mesure 340 nm, maximum
dabsorption du NADPH. Sagissant de mesures absolues (pas de gamme
dtalonnage, mais rfrence au coefficient dextinction du NADPH), les
OIV-MA-AS311-02 : R2009

Glucose et fructose
chelles des longueurs donde et des absorbances de lappareil doivent tre

contrles.
A dfaut, utiliser un photomtre spectre discontinu permettant deffectuer les
mesures 334 nm ou 365 nm.
Cuves de verre de 1 cm de trajet optique ou cuves usage unique.
Pipettes pour test enzymatique de 0,02, 0,05, 0.1, 0,2 ml
4. Ractifs
Solution 1 : tampon (trithanolamine 0,3 M, pH 7,6, Mg2+ 4.10-3M): 11,2 g de
chlorhydrate de trithanolamine (C2H5HCl et 0,2 g de MgSO4.7H2O sont dissous
dans 150 ml deau bidistille; ajouter environ 4 ml de solution 5M dhydroxyde de
sodium pour obtenir un pH gal 7,6 et porter 200 ml.
Cette solution tampon se conserve 4 semaines + 4C.
Solution 2 : solution de nicotinamide-adnine-dinuclotide-phosphate (environ
11,5 10-3 M) : 50 mg de nicotinamide-adnine-dinuclotide-phosphate disodique
sont dissous dans 5 ml deau bidistille.
Cette solution se conserve 4 semaines +4C.
Solution 3 : solution dadnosine-5'-triphosphate disodique et 250 mg dhydrognocarbonate de sodium sont dissous dans 5 ml deau bidistille.
Cette solution se conserve 4 semaines +4C.
Solution 4 : hexokinase/glucose-6-phosphate-dshydrognase: mlanger 0,5 ml
dhexokinase (2 mg de protine/ml soit 280 U/ml) et 0,5 ml de
glucose-6-phosphate-dshydrognase (1 mg de protine/ml).
Le mlange se conserve un an +4C.
Solution 5 : phosphoglucose-isomrase (2 mg de protine/ml, soit 700 U/ml). La
suspension est utilise sans dilution.
Cette solution se conserve un an +4C.
Remarque: Lensemble des ractifs ncessaires pour ce dosage est commercialis.
OIV-MA-AS311-02 : R2009

Glucose et fructose
5. Mode opratoire
5.1. Prparation de lchantillon
En fonction de la quantit estime de glucose + fructose par litre (g/l) effectuer
les dilutions suivantes :
Mesure 340
et 344 nm
(g/l)
Jusqu 0,4
4,0
10,0
20,0
40,0
au-dessus de 40,0
Mesure
365 nm
(g/l)
0,8
8,0
20,0
40,0
80,0
80,0
Dilution
avec leau
Facteur F
de dilution
1+ 9
1 + 24
1 + 49
1 + 99
1 + 999
10
25
50
100
1000
5.2. Dosage
Le spectrophotomtre tant rgl sur la longueur donde 340 nm, effectuer les
mesures par rapport lair (pas de cuve dans le trajet optique) ou par rapport
leau.
Temprature 20 25C.
Dans 2 cuves de 1 cm de trajet optique, introduire :
Tmoin
Dosage
Solution 1 (ramene 20C) ....... 2,50 ml
2,50 ml
Solution 2 .......... 0,10 ml
0,10 ml
Solution 3 .......... 0,10 ml
0,10 ml
Echantillon doser ..........
0,20 ml
Eau bidistille ......... 0,20 ml
Mlanger et aprs environ 3 minutes, lire labsorbance des solutions (A1).
dclencher la raction en ajoutant :
Solution 4 ........ 0,02 ml
0,02 ml
Mlanger; attendre 1( minutes; effectuer la mesure de labsorbance et vrifier
larrt de la raction aprs 2 min. (A2).
Ajouter immdiatement :
0,02 ml
Solution 5 .......... 0,02 ml
Mlanger; effectuer la lecture au bout de 10 min ; vrifier larrte de la raction
aprs 2 min. (A3).
Dterminer les diffrences dabsorbance :
A2 A1 correspondant au glucose,
A3 A2 correspondant au fructose,
OIV-MA-AS311-02 : R2009

Glucose et fructose
Pour le tmoin et pour le dosage.

Dduire la diffrence dabsorbance du tmoin (AT) de celle du dosage (AD)
et tablir :
pour le glucose: AG = AD - AT
pour le fructose: AF = AD - AT
Remarque: Le temps ncessaire laction des enzymes peut varier dun lot
lautre. Il nest donn ci-dessus qu titre indicatif. Il est recommand de le
dterminer pour chaque lot.

5.3.1 Calcul
La formule gnrale pour le calcul des concentrations est la suivante :
V x PM
C=
A (g/l)
X d X v X 1000
V
v
PM
d
= volume du test (ml)

= volume de lchantillon (ml)
= masse molculaire de la substance doser
= trajet optique de la cuve (cm)
= coefficient dabsorption du NADPH 340 nm = 6,3
(mmole-1 x l cm-1)
V = 2,92 ml pour le dosage du glucose
V = 2,94 ml pour le dosage du fructose
v = 0,20 ml
PM = 180
d =1
On obtient :
Pour le glucose : C(g/l) = 0,417 AG
Pour le fructose : C(g/l) = 0,420 AF
Si une dilution a t effectue lors de la prparation de lchantillon, multiplier

le rsultat par le facteur F.
Remarque: si les mesures ont t faites aux longueurs donde 334 ou 365 nm,
on obtient :
mesure 334 nm : = 6,2 (mmole-1 l cm-1)
pour le glucose : C(g/l) = 0,425 AG
pour le fructose : C(g/l) = 0,428 AF
mesure 365 nm : = 3,4 (mmole-1 l cm-1)
pour le glucose : C(g/l) = 0,773 AG
OIV-MA-AS311-02 : R2009

Glucose et fructose
pour le fructose
: C(g/l) = 0,778 AF
5.3.2 Rptabilit (r):

r = 0,056 xi
xi = concentration en g/l de lchantillon.
5.3.3 Reproductibilit (R):
R = 0,12 + 0,076 xi
xi = concentration en g/l de lchantillon.
BIBLIOGRAPHIE
BERGMEYER H.U., BERNT E., SCHMIDT F. and STORK H., Mthodes
d'analyse enzymatique by BERGMEYER H.U., 2e d., p. 1163, Verlag-Chemie
Weinheim/Bergstrae, 1970.
BOEHRINGER Mannheim, Mthodes d'analyse enzymatique en chimie
alimentaire, documentation technique.
JUNGE Ch., F.V., O.I.V., 1973, No 438.
OIV-MA-AS311-02 : R2009
Sucres
Mthode Type II
Dosage des sucres par CLHP dans les vins

(Oeno 23/2003)
1. DOMAINE D'APPLICATION
Cette recommandation spcifie une mthode de dosage du fructose, du
glucose et du saccharose des mots et des vins par chromatographie liquide
haute performance.
2. PRINCIPE
Les sucres et le glycrol sont directement doss par CLHP et dtects par
rfractomtrie.
3. REACTIFS ET PREPARATION DES SOLUTIONS REACTIVES
3.1 Eau dminralise ;
3.2 Actonitrile - Minimum de
puret >99 % ;
3.3 Mthanol - puret >99 % ;
3.4 Ethanol - 95-96 % ;
3.5 Fructose - Puret > 99 % ;
3.6 Glucose - Puret > 99 % ;
3.7 Saccharose D(+) - Puret > 99 % ;
3.8 Glycrol - Puret > 99 % ;
3.9 Azote puret > 99% ;
3.10 Hlium puret > 99%.
transmission
200
nm
Prparation des solutions ractives

3.11 Eau dminralise (3.1) filtre sur membrane de cellulose 0,45 m
(4.13) l'aide du systme de filtration (4.11) ;
3.12 Eluant : A laide dune prouvette gradue pied de 1 litre (4.7)
verser 800 ml d'actonitrile (3.2) dans un flacon de 1 l (4.8), puis 200 ml
deau (3.11). Dgazer en permanence l'aide d'hlium (3.10). Dans le cas
OIV-MA-AS311-03 : R2003
Sucres
o le systme fonctionne en circuit ferm (retour de l'luant dans le flacon),

le mlange est renouvel toutes les semaines.
4. APPAREILLAGE
4.1. Fioles coniques de 100 ml ;
4.2. Vases cylindriques de 100 ml ;
4.3. Vases cylindriques de 50 ml ;
4.4. Pipette automatique de 10 ml ;
4.5. Cnes pour pipette de 10 ml ;
4.6. Fiole jauge de 100 ml ;
4.7. Eprouvette de 1 litre ;
4.8. Flacon de 1 litre ;
4.9. Seringue de 20 ml et aiguille;
4.10. Seringue de 10 ml et aiguille;
4.11. Systme de filtration ;
4.12. Porte-filtres ;
4.13. Membrane 0,45 m en cellulose ;
4.17. Prfiltres en cellulose ;
4.18. Cartouche de filtration de silice greffe par des groupes
octadcyles, (par exemple :Sep pack C18 ;)
4.19. Film tirable par exemple Parafilm ;
4.20. Fioles coniques de 10 ml ;
4.21. Appareillage courant de chromatographie liquide haute
performance
4.22. Colonne alkylamine de 5 m et 250 4 mm - Conditionnement des
colonnes : les colonnes sont gnralement remplies et testes l'hexane. Il
faut les laver avec 50 ml d'thanol (3.4), puis 50 ml de mthanol (3.3) avant
de passer au mlange acetonitrile/eau 80/20 (3.12). Dmarrer petit dbit,
c'est--dire 0,1 ml/mn, puis augmenter progressivement jusqu' 1 ml/mn
pour viter le tassement de la phase;
4.23. Dtecteur rfractomtrique - Rincer la cellule de rfrence une
deux fois par jour (entre deux analyses) avec de lluant actonitrile/eau
OIV-MA-AS311-03 : R2003
Sucres
(3.12). Attendre environ d'heure pour que la ligne de base se stabilise.

Rgler le zro du rfractomtre.
4.24. Bain ultrasons
5. ECHANTILLONNAGE
Les chantillons sont pralablement dgazs l'azote (3.9) ou dans un bain
ultrasons (4.24).
6. MODE OPERATOIRE
6.1 Prparation de l'chantillon
6.1.1 Filtration
6.1.1.1 Prlever 25 ml d'chantillon laide dune seringue de 20 ml (4.9)
munie d'une aiguille et filtrer
sur membrane de 0,45 m (4.13) pour un vin
sur un empilement de filtres 0,45 (4.13) - 0,8 (4.14) - 1,2

(4.15) - 5 (4.16) m + prfiltre (4.17) pour un mot ou un vin non
clarifi.
6.1.1.2 Diluer cinq fois pour les mots. Prlever 20 ml l'aide d'une
pipette automatique de 10 ml (4.4) munie dun cne (4.5), verser dans une
fiole jauge de 100 ml (4.6). Ajuster 100 ml avec de l'eau dminralise
(3.11), obturer la fiole avec du parafilm (4.19), homogniser.
6.1.2 Elimination des composs phnoliques
Pour un mot ou un vin : passer sur une cartouche de filtration C18 (4.18).
6.1.2.1 Prparation de la cartouche de filtration C18
Passer contre-sens (grand bout) 10 ml de mthanol (3.3), puis 10 ml d'eau
dminralise (3.11).
6.1.2.2 Passage sur la cartouche de filtration C18
Rincer la seringue de 10 ml (4.10) avec environ 2 ml d'chantillon. Prlever
environ 9 ml d'chantillon. Brancher la cartouche C18 (4.18) par le petit
bout sur la seringue de 10 ml (4.10), passer le vin travers la cartouche en
liminant les trois premiers ml. Recueillir les 6 ml restants dans un fiole
conique de 10 ml (4.20). Rincer la cartouche de filtration C18 contre-sens
avec 10 ml de mthanol (3.3), puis 10 ml d'eau dminralise (3.11) aprs
chaque chantillon. Dans ce cas, les cartouches peuvent tre rutilises.
6.1.3 Nettoyage courant
OIV-MA-AS311-03 : R2003
Sucres
Seringues (4.9), (4.10) et aiguille (4.11) rinces l'eau dminralise (3.1)

aprs chaque chantillon ;
Porte-filtre rinc l'eau chaude, puis au mthanol (3.3). Laisser scher
l'air.
6.2 Analyse
6.2.1 Conditions analytiques
Phase mobile : luant isocratique actonitrile/eau (80/20, v/v) (3.12) ;
Dbit : 1 ml/mn ;
Volume inject 20 l.
Dtecteur (4.23) paramtrer selon lappareil.
Des exemples de chromatogrammes sont montrs en annexe B, figures 1 et
2
6.2.2 Etalonnage externe
Mlange talon synthtique compos de :
fructose (3.5) 10 g/l 0,01 g/l ;
glucose (3.6) 10 g/l 0,01 g/l ;
saccharose (3.7) 10 g/l 0,01 g/l ;
auxquel il peut tre ajout du glycrol (3.8) (si on souhaite le quantifier) 10
g/l 0,01 g/l.
Calcul des facteurs de rponse
RFi = surface i/Ci
o
surface i = surface du pic du produit dans la solution de calibration
et Ci = quantit du produit prsent dans la solution de calibration
7. EXPRESSION DES RESULTATS
Calcul des concentrations
Ce = surface e/RFi
o
surface e = surface du pic du produit prsent dans l'chantillon.
Les rsultats sont exprims en g/l ;
Tenir compte des dilutions ventuelles.
OIV-MA-AS311-03 : R2003
Sucres
8. CONTROLE DES RESULTATS

Mthode comparative ;
Raccordement indirect par masse, volume et temprature ;
Des tmoins synthtiques et/ou de rfrence sont intercals parmi les
chantillons.
9. PERFORMANCES DE LA METHODE
Dure d'une analyse environ 50 mn ;
Influence de certains composants du vin : le glycrol est spar dans les
mmes conditions que les sucres. Il peut donc tre dos au cours de la
mme squence. Aucun compos connu ne colue avec le fructose, le
glucose ou le saccharose.
Robustesse : l'analyse est sensible de faibles variations de temprature.
Les colonnes sont entoures d'une gaine de mousse.
9.1 Limites de dtection et de quantification
LD fructose = 0,12 g/l
LD glucose = 0,18 g/l
LQ fructose = 0,4 g/l
LQ glucose = 0,6 g/l
voir annexe B.2
9.2 Fidlit
9.2.1 Rptabilit
La diffrence absolue entre deux rsultats individuels obtenus sur un vin
identique soumis essais, par un oprateur utilisant le mme appareillage
dans l'intervalle de temps le plus court ne dpassera pas la valeur de
rptabilit dans plus de 5 % des cas (voir annexe B.3).
OIV-MA-AS311-03 : R2003
Sucres
Les valeurs sont :

Pour G+F >5 g/l
RSDr = 1 %
Limite de rptabilit r = 3%
(2,8 RSDr)
Pour G+F compris entre 2 et 5 g/l

RSDr = 3%
Limite de rptabilit r = 8% (2,8 RSDr)
9.2.2 Reproductibilit
La diffrence absolue entre deux rsultats individuels obtenus sur un vin
identique soumis essais dans deux laboratoires ne dpassera pas la valeur
de rptabilit dans plus de 5 % des cas (voir annexe B.4).
Pour G + F >5 g/l
RSDR = 4 %
Limite de reproductibilit R= 10%
(2,8 RSDr)
Pour G + F compris entre 2 et 5 g/l

RSDR = 10%
Limite de reproductibilit R = 30% (2,8 RSDr)
OIV-MA-AS311-03 : R2003
Sucres
Annexe A
Bibliographie
TUSSEAU D. et BOUNIOL Cl. (1986), Sc. Alim., 6, 559-577 ;

TUSSEAU D., 1996. Limite de dtection - limite de quantification. Feuillet
Vert OIV 1000.
Protocole de validation des mthodes danalyse. Rsolution OIV OENO
6/2000
Exactitude des rsultats et mthodes de mesure. Norme NF ISO 5725
OIV-MA-AS311-03 : R2003
Sucres
Annexe B
RESULTATS STATISTIQUES DE L'ESSAI INTERLABORATOIRE
B.1 ECHANTILLONS DE LESSAI INTERLABORATOIRE

Cette tude a t conduite par le Laboratoire Interrgional de la Rpression de
Fraudes de Bordeaux. Lessai a port sur 12 chantillons identifis de A J (4
vins blancs et 4 vins rouges ; 2 vins de Porto blancs et 2 vins de Porto rouges)
contenant du glucose et du fructose et dont les teneurs en chaque sucre taient
comprises entre 2 et 65 g/l. Les vins provenant de la rgion de Bordeaux ont
t supplments en glucose et fructose et stabiliss par 100 mg/l de SO2.
En fait, il sagissait de 6 chantillons diffrents rpliqus en aveugle.
B.2 CONDITIONS CHROMATOGRAPHIQUES

Compte tenu des facteurs de rponse de ces deux sucres et des chelles des
chromatogrammes, le bruit de fond correspond une concentration en fructose
de 0,04 g/l et en glucose de 0,06 g/l (voir figure 3).
On obtient alors les seuils de dtection (3 fois le bruit de fond) et de
quantification (10 fois le bruit de fond) :
LD fructose = 0,12 g/l
LD glucose = 0,18 g/l
LQ fructose = 0,4 g/l
LQ glucose = 0,6 g/l
Ces rsultats sont conformes ceux dtermins par TUSSEAU et BOUNIOL
(1986) et rptables sur dautres chromatogrammes.
B.3 FIDELITE
Neuf laboratoires ont particip cette tude.
Les analyses des 3 points de gamme dtalonnage et des 12 chantillons ont
t ralises la suite en appliquant la mthode danalyse transmise.
Cinq laboratoires ont transmis les droites de rgression obtenues aprs
analyse des 3 points de la gamme dtalonnage.
OIV-MA-AS311-03 : R2003
Sucres
Quatre laboratoires ont transmis les rsultats des 12 chantillons rpts 3 fois,
les autres laboratoires nont transmis quun seul rsultat.
Les conditions chromatographiques ont t transmises par tous les
laboratoires. Lensemble des laboratoires applique le mme principe de
mthode et mme type de colonne chromatographique que ceux dfinis
prcdemment. Les seules diffrences portent sur :
Linjection de 50 l au lieu de 20 l pour un laboratoire
Ltalonnage avec une gamme plus large (de 5 30 g/l de chaque sucre) pour
un laboratoire.
Les rsultats ont t exploits selon le protocole OIV (Protocole de validation
des mthodes danalyse Rsolution OENO 6/1999).
Ce protocole demande que les analyses ne soient pas rptes ; or, 4
laboratoires ont transmis les rsultats des analyses rptes 3 fois. Une seule
srie a t choisie (la premire) pour lexploitation des rsultats conformment
au protocole OIV.
Les calculs de rptabilit selon Youden, de reproductibilit et les tests de
Cochran et de Grubbs ont t effectus.
Les donnes sur les rptitions ont permis de calculer dune autre manire les
carts-type de rptabilit (selon ISO 5725).
Un rsultat non valide a t identifi.
Les rsultats du test de Cochran nous ont conduit liminer les rsultats des
chantillons C et J pour le laboratoire 1.
Le test de Grubbs na pas dtect de rsultats exclure.
OIV-MA-AS311-03 : R2003
Sucres
Lensemble des rsultats rceptionns est rassembl dans le tableau I

Tableau I - RESULTATS DES TENEURS EN FRUCTOSE ET GLUCOSE DES 12 ECHANTILLONS ANALYSES
chantillon
Sucre
LABO 1
A
F
C
G
D
G
E
G
G
G
I
G
J
G
K
G
5,9 2,9
9,5
10,4 68,4 56,1 13,0 10,9 5,0
2,5
2,3
2,7
10,4 12,6 13,3 12,0 64,7 43,5 75,2 68,8 65,3 45,7 2,1
2,9
5,4 2,8
9,3
10,9 73,0 59,7 12,9 11,2 5,3
2,6
2,1
3,1
10,1 12,3 13,3 11,8 64,5 44,2 75,0 68,3 64,5 45,2 2,3
3,0
5,5 2,9
10,0 11,2 73,6 58,6 12,9 11,0 5,4
2,7
2,2
2,8
9,9
12,2 13,3 12,0 63,9 43,5 77,4 70,5 65,1 45,8 2,1
2,9
5,6 2,9
9,6
2,6
2,2
2,9
10,1 12,4 13,3 11,9 64,4 43,7 75,9 69,2 65,0 45,6 2,2
2,9
10,8 71,7 58,1 12,9 11,0 5,2
Xq
LABO 2
5,1 2,4
10,0 12,6 74,5 67,0 13,4 12,3 5,0
2,2
1,5
2,2
10,0 13,0 13,4 12,3 64,2 42,9 76,8 69,3 64,4 43,4 1,4
0,4*
LABO 3
5,3 3,0
9,8
12,6 72,5 66,3 13,0 12,6 5,4
3,4
1,9
3,1
10,4 14,2 13,4 13,4 63,9 45,0 73,8 69,9 65,6 47,3 2,0
3,3
LABO 4
5,1 3,2
10,3 12,7 71,6 68,2 12,9 12,6 5,0
3,0
1,9
2,9
9,6
12,6 12,7 12,5 62,5 45,4 73,3 70,3 63,4 45,9 1,9
3,0
5,3 3,0
9,7
12,6 74,0 69,8 12,9 12,6 5,1
2,9
1,8
3,1
10,0 12,7 13,1 13,0 63,0 46,4 74,2 70,6 62,1 46,2 1,9
2,8
5,2 3,2
9,5
12,5 73,1 69,7 12,8 12,7 5,2
2,9
2,0
2,9
9,7
12,7 13,1 12,8 62,6 45,7 75,0 70,9 61,8 45,3 2,0
2,8
5,2 3,1
9,8
12,6 72,9 69,2 12,9 12,6 5,1
2,9
1,9
3,0
9,8
12,7 13,0 12,8 62,7 45,8 74,2 70,6 62,4 45,8 1,9
2,9
LABO 5
5,4 3,2
9,8
11,3 76,1 67,5 13,3 12,0 5,1
2,9
1,9
2,5
10,0 11,6 13,1 11,8 61,6 43,4 72,1 65,3 62,5 42,5 2,0
2,3
LABO 6
5,6 2,9
10,5 13,0 72,2 67,9 13,5 12,1 5,2
3,0
2,0
3,1
10,4 12,9 13,3 12,4 66,8 46,9 73,9 70,3 63,6 44,1 2,2
3,1
LABO 7
5,1 2,9
9,8
13,6 72,0 65,4 13,1 12,6 5,1
3,0
1,6
3,9
9,7
13,9 13,3 12,7 61,8 42,9 71,5 65,9 61,7 43,5 1,6
3,9
LABO 8
LABO9
5,1 2,8
9,7
12,4 73,7 70,0 13,0 12,7 5,1
2,9
2,0
3,0
10,1 13,0 12,8 12,6 61,6 45,6 71,7 68,6 61,6 45,5 2,1
3,3
5,0 2,9
9,6
12,9 72,3 68,7 12,3 12,7 5,0
2,9
2,0
3,0
10,0 13,1 12,8 12,9 61,0 44,8 70,6 68,3 61,4 45,1 2,1
3,4
5,0 3,0
9,6
12,9 72,7 66,7 12,6 12,7 5,0
2,9
2,0
3,0
10,1 13,1 12,6 12,7 61,2 45,4 71,5 68,5 61,2 45,2 2,1
3,3
5,0 2,9
9,6
12,7 72,9 68,5 12,6 12,7 5,0
2,9
2,0
3,0
10,1 13,1 12,7 12,7 61,3 45,3 71,3 68,5 61,4 45,3 2,1
3,3
4,9 2,7
9,6
12,6 72,5 69,1 12,1 12,5 5,0
2,6
2,1
2,8
9,7
12,5 12,0 12,6 55,3 44,8 72,0 69,0 57,0 45,0 2,0
2,5
4,9 2,7
9,0
11,5 79,5 70,2 12,6 12,9 4,8
2,7
2,2
2,5
9,1
11,6 12,5 13,0 60,2 42,6 79,0 70,2 60,3 43,0 2,2
2,5
5,1 2,6
9,3
12,2 77,5 63,0 12,3 12,0 4,9
2,6
1,9
3,1
9,4
12,1 12,5 12,2 60,9 43,6 77,0 74,1 61,2 43,2 1,9
3,0
5,0 2,7
9,3
12,1 76,5 67,4 12,3 12,5 4,9
2,6
2,1
2,8
9,4
12,1 12,3 12,6 58,8 43,7 76,0 71,1 59,5 43,7 2,0
2,7
* rsultat non valide

Pour les 4 laboratoires qui ont transmis 3 rsultats, les moyennes sont
reportes en gras
Sucre : F fructose, G glucose
Rsultats globaux en glucose + fructose
Pour les 4 laboratoires qui ont effectu 3 rptitions, seule la premire srie de
donnes a t retenue.
Les chantillons rpliqus laveugle sont mentionns dans la premire
colonne et les rsultats respectifs dans les colonnes suivantes.
OIV-MA-AS311-03 : R2003
10
Sucres
Tableau II RESULTATS DES TENEURS EN G+F DANS LES 6

ECHANTILLONS REPLIQUES(en g/l)
Labo 1
Labo 2
Labo 3
A/E 8,8
7,5
7,5
7,2
8,3
B/G 20,3
23
22,6
23
22,4
142
146
139
C/J 125 144
D/H 23,9 25,3 25,7 25,7 25,6

F/l
I/K 108 111
3,8
1,8*
107
108
109
Labo 4
8,8
8,3
Labo 5
8,6
Labo 6
8,5
8,2
Labo 7
8
8,1
Labo 8
7,9
Labo 9
7,6
24, 23 22,2 21,1 21,6 23,5 23,3 23,4 23,6 22,1 23,1 22,2 22,2
6
144 140 144 144 137 140 144 137 137 144 140 142 141
26, 25,5 25,2 25,3 24,9 25,6 25,7 25,7 26 25,7 25,4 24,6 24,6
8
4,6 4,8 4,9 4,9 4,3 5,1
5,3
5,5 5,5
5
5,4 4,9 4,5
113 108
109
105
105
114
108
105 105 107
107
100
* rsultat non valide (mauvaise intgration de pics)

Les rsultats du laboratoire 1 pour les chantillons C/J nont pas t retenus
dans les tableaux suivants.
B.3.1 Rptabilit des rsultats des dosages de glucose et fructose
Les mesures de rptabilit ont t effectues selon 2 mthodes:
1 - rptitions des rsultats des 4 laboratoires sur les 12 chantillons (essais
dupliqus-ED). Les donnes prises en compte sont les 2 premires sries de
rsultats transmis par ces laboratoires.
Sr ED=
/ 2n.
O di est la diffrence obtenue partir des 2 premires rptitions des

analyses du mme chantillon par chaque laboratoire et n le nombre de
laboratoires dont les rsultats sont pris en compte.
RSDr ED (%) ; cest le coefficient de variation de lcart-type par rapport la
valeur moyenne, en %
Limite de rptabilit r = 2,8 Sr ED
2 rptitions des analyses sur un mme matriau analys en aveugle (Paire
de Youden-PY)
Sr =
7,6
d / 2(n-1).
O di est la diffrence des rsultats obtenus sur les 2 chantillons rpliqus en

aveugle par le mme laboratoire (exemple rsultats des chantillons A et E par
le laboratoire 3).
OIV-MA-AS311-03 : R2003
11
102
Sucres
Les rsultats sont rassembls tableau III et sont reprsents dans la figure 4.
Tableau III RESULTATS DES VALEURS DE REPETABILITE
4,9
4,6
8,2
7,9
22,3
23,0
25,3
25,5
107
107
141
142
Sr ED (g/l) 0,04
0,05
0,08
0,05
0,24
0,21
0,14
0,17
0,43
0,27
1,56
1,05
0,11
0,14
0,22
0,14
0,67
0,59
0,39
0,48
1,20
0,76
4,4
2,9
0,8
1,1
0,9
0,7
1,1
0,9
0,6
0,6
0,4
0,3
1,7
0,7
Echantillon
Teneur
moyenne
en G+F
(g/l)
r ED (g/l)
RSDrED
(%)
SrPY (g/l)
0,14
0,10
0,24
0,12
0,50
0,80
r PY (g/l)
0,39
0,28
0,67
0,34
1,4
2,2
2,5
1,3
1,0
0,5
0,5
0,6
RSDrPY
(%)
Les valeurs de rptabilit sont faibles et cohrentes selon les deux

modes destimation.
B.3.2 Reproductibilit des dosages de glucose et fructose

Les sucres dans les vins sont analyss depuis de nombreuses annes selon
cette mthode.
En routine, un contrle qualit interne est ralis laide dun matriau de
rfrence (par exemple : TITRIVINS DUJARDIN SALLERON).
Lexploitation des rsultats a permis destimer lcart-type de reproductibilit
sur une longue priode (estimation renouvele chaque anne).
SR intralaboratoire= 0,5 g/l pour une teneur en glucose+fructose gale
12 g/l
Le tableau IV rassemble les rsultats de reproductibilit obtenus lors de cet
essai dintercomparaison. On a pu en dduire leffet laboratoire SL prvue dans
la rsolution OIV.
OIV-MA-AS311-03 : R2003
12
Sucres
Echantillon
Teneur
moyenne
en G+F
(g/l)
4,9
4,6
8,2
7,9
SR inter
(g/l)
0,5
0,4
0,4
0,4
22,3 23,0 25,3 25,5
107
107
141
142
1,0
3,2
2,9
2,2
3,2
1,0
0,6
0,6
SL (g/l)
0,43
0,39
0,97
0,59
3,0
2,6
R inter
(g/l)
1,3
1,12
2,8
1,7
8,5
7,6
RSD R
inter (%)
9,5
4,4
2,4
2,9
1,9
Tableau IV RESULTATS DE REPRODUCTIBILITE ET EFFET LABORATOIRE
La figure 4 reprend les rsultats dcart-type de reproductibilit.

Il apparat que les valeurs de rptabilit tant faibles, cest leffet laboratoire
qui est lorigine de lessentiel de la dispersion des rsultats.
On observe aussi que sur une longue priode, comme il est prvu, la
reproductibilit intralaboratoire est de mme valeur que la reproductibilit
interlaboratoire.
En conclusion, on peut considrer au vu des courbes de tendance qui sont
reprsentes sur la figure 4, que la rptabilit est relativement stable sur toute
la zone dtude (5 150 g/l de glucose + fructose) , mais que la
reproductibilit est plus leve pour de faibles concentrations.
En moyenne, la rptabilit (r limite de rptabilit) est relativement constante
autour de 1% et la reproductibilit (R limite de reproductibilit) est comprise
entre 2 et 5% ; environ 10% pour des teneurs en glucose + fructose de lordre
de 5 g/l.
On retient donc conventionnellement comme valeurs de rptabilit et de
reproductibilit:
Pour G+F >5 g/l
OIV-MA-AS311-03 : R2003
13
Sucres
RSDr = 1 %
RSDR = 4 %
Limite de reproductibilit R= 10% (2,8 RSDr)
Pour G+F compris entre 2 et 5 g/l
RSDr = 3%
RSDR = 10%
Limite de reproductibilit R = 30% (2,8 RSDr)
mV
mV
GY
Gl
yc
r
ol
FR
SA
GL
GY
GL
FR
10
15
Temps (min)
Figure 1 - Chromatogramme
dune solution talon
(sucres et glycrol 10 g/l.)
SA
10
Temps (min)
Figure 2 Chromatogramme
dun vin ros
Glycrol (GY), fructose (FR), glucose (GL), saccharose (SA)
OIV-MA-AS311-03 : R2003
14
Sucres
mV
GY
FR
GL
Y1
Y3
Y4
Y2
Y5
Y6
R T 1 - 1 0 W 1 /2
RT1
RT2
R T 2 + 1 0 W 1 /2
fructose (FR), glucose (GL), saccharose (SA) Glycrol (GY),

Figure 3 - Mesure des hauteurs du bruit de fond aprs agrandissement du
chromatogramme
RT1 : temps de rtention du fructose
RT2 : temps de rtention du glucose
W1/2 : largeur du pic mi-hauteur
Yi : hauteur du bruit de fond au point i
Figure 4 Reprsentation des coefficients de variation des carts-type en
fonction des teneurs en glucose + fructose.
R S D % / te n e u r s e n G + F
1 0 ,0 0
8 ,0 0
6 ,0 0
RSDr PY
4 ,0 0
2 ,0 0
R S D R e p ro d .
0 ,0 0
0
50
100
150
g /l
OIV-MA-AS311-03 : R2003
15

Stabilisation des mots Recherche du saccharose
Stabilisation des mots en vue de la recherche

de laddition de saccharose
Lchantillon prlev est amen pH 7, par une solution dhydroxyde de sodium et
additionn dun volume gal de propanone.
La propanone est limine par distillation pralablement la recherche du
saccharose par chromatographie sur couche mine (CCM) et par chromatographie
liquide haute performance (HPLC) (voir fiche Saccharose).
2. Appareillage
Appareil distiller avec un ballon distiller de 100 ml.
3. Ractifs
3.1. Hydroxyde de sodium en solution 20 p. 100 (m/v).
3.2. Propanone (actone).
4. Mode opratoire
4.1. Stabilisation des chantillons
20 ml de mot sont placs dans un flacon de 100 ml aux parois rsistantes et
amens pH 7 avec la solution dhydroxyde de sodium 20 p. 100 (VI XII
gouttes). Ajouter 20 ml de propanone. Boucher et conserver basse
temprature.
Remarque : Prendre garde la tension de vapeur leve de la propanone et
linflammabilit de ses vapeurs.
4.2. Prparation de lchantillon pour la recherche du saccharose par CCM ou par
HPLC.
Placer le contenu du flacon dans le ballon de 100 ml de lappareil distiller.
Distiller et recueillir 20 ml environ de distillat que lon rejette. Ajouter au
contenu du ballon distiller 20 ml deau et distiller nouveau en recueillant
25 ml environ de distillat que lon rejette.
Transvaser le contenu du ballon distiller dans une fiole jauge de 20 ml et
complter au trait de jauge avec les eaux de rinage du ballon. Filtrer. Utiliser
le filtrat pour la recherche et ventuellement pour le dosage du saccharose par
CCM ou par HPLC.
BIBLIOGRAPHIE
TERCERO C., F.V. O.I.V., 1972, Ns 420 et 421
OIV-MA-AS311-04 : R2009

Dtermination de la rpartition du deutrium dans lthanol
Mthode Type II
Dtermination de la rpartition du deutrium dans

l'thanol issu de mots de raisins ferments, mots de
raisins concentrs, sucre de raisin (mots de raisins
concentrs rectifis) et de vins par rsonance magntique
nuclaire (SNIF-NMR / RMN-FINS 1)
Resolution OIV-Oeno 426-2011
1. Introduction
Le deutrium contenu dans les sucres et l'eau du mot de raisins est rparti de
nouveau aprs fermentation dans les molcules I, II, III et IV du vin :
CH2D CH2 OH
I
CH3 CHD OH
CH3 CH2 OD
II
III
HOD
IV
2. Champ d'application
La mthode permet de mesurer les rapports isotopiques du deutrium (D/H) dans
l'thanol du vin et dans l'thanol obtenu par fermentation de produits de la vigne
(mots, mots concentrs, mots concentrs rectifis).
3. Dfinitions
(D/H)I : Rapport isotopique associ la molcule I
1 Fractionnement Isotopique Naturel Spcifique tudi par Rsonance Magntique
Nuclaire (SiteSpecific Natural Isotope Fractionation studied by Nuclear Magnetic
Resonance). Brevet : France, 8122710 ; Europe, 824022099 ; Etats-Unis,
854550082 ; Japon 57123249.
OIV-MA-AS31105 : R2011
1

(D/H)I : Rapport isotopique associ la molcule II

(D/H)QW : Rapport isotopique de l'eau dans le vin (ou dans des produits ferments)
R = 2(D/H)II/(D/H)I
R exprime la rpartition relative du deutrium dans les molcules I et II ; R est
mesur directement partir de l'intensit h (hauteur maximale) des signaux et donc
R = 3hII/hI.
4. Principe
Les paramtres dfinis ci-dessus R, (D/H) I et (D/H) II sont dtermins par la
rsonance magntique nuclaire du deutrium dans l'thanol extrait partir du vin
ou de produits de fermentation du mot, de mot concentr ou de sucre de raisin
(mot concentr rectifi) obtenu dans des conditions donnes.
5. Ractifs et matriaux
5.1 Ractifs :
5.1.1 Ractifs pour la dtermination de l'eau par la mthode de Karl Fischer
(lorsque cette mthode est utilise pour la mesure de la teneur en alcool du
distillat).
5.1.2 Hexafluorobenzne (C6F6) utilis comme substance de blocage
5.1.3 Acide trifluoroactique (TFA, CAS : 76-05-1) ou anhydride trifluoroactique
(TFAA, CAS : 407-25-0)
5.2 Matriaux de rfrence (disponibles auprs de l'Institut des matriaux et
mesures de rfrence (IRMM) Geel (B)) :
5.2.1 Tubes RMN scells de CRM-123, utiliss pour vrifier l'talonnage de
l'instrumentation RMN
5.2.2 N,N-ttramthylure standard (TMU) ; TMU standard avec un rapport
isotopique talonn D/H.
5.2.3 Autres matriaux de rfrence disponibles utiliss pour contrler les tapes de
distillation et de prparation :
OIV-MA-AS31105 : R2011

CRM
Paramtre
CRM-656 thanol du vin, 96% vol.
Valeur certifie
Incertitude
94,61
0,05
tD (thanol) en % -26,91
m/m
0,07
13C (thanol) en 102,84

VPDB
0,20
(D/H)I (thanol) en 132,07

ppm
0,30

ppm
0,005
R (thanol)
CRM-660 Solution
hydroalcoolique,
vol.
11,96
0,06
12%
tQ (thanol) en % -26,72
vol.
0,09
13C (thanol) en 102,90

VPDB
0,16

ppm
0,23
(D/H)II (thanol) en 2,567

ppm
0,005
0,14
(D/H)w
ppm
OIV-MA-AS31105 : R2011
148,68
(eau)
en

5.3 Appareillage
5.3.1
Spectromtre RMN quip d'une sonde spcifique 'deutrium' rgl la

frquence caractristique o du champ Bo (par exemple pour Bo = 7,05 T,
o = 46,05 MHz et pour Bo = 9,4 T, o = 61,4 MHz), possdant un canal
de dcouplage du proton (B2) et un canal de stabilisation champ-frquence
(lock) la frquence du fluor. L'instrument RMN peut ventuellement tre
quip d'un passeur automatique d'chantillons et d'un programme
supplmentaire de traitement de donnes pour l'valuation des spectres et
le calcul des rsultats. Le fonctionnement du spectromtre RMN peut tre
contrl l'aide de matriaux de rfrence certifis (tubes scells CRM
123).
5.3.2
Tubes chantillons RMN de 10 mm
5.3.3 Appareil de distillation

Remarque : Tout dispositif d'extraction de l'thanol peut tre utilis la
condition qu'il permette de rcuprer l'alcool du vin sans fractionnement
isotopique.
La colonne Cadiot reprsente en figure 1 est un exemple de dispositif de
distillation manuel qui permet dextraire 96 98,5% de lthanol du vin sans
fractionnement isotopique, et dobtenir un distillat contenant 92 93 d'thanol
en % m/m (95 % vol.).
Ce type de systme comprend :
Chauffe-ballon lectrique avec rgulateur de tension,
Ballon fond rond de 1 litre avec col en verre dpoli,
Colonne Cadiot bande tournante (partie mobile en Tflon),
Fioles coniques avec col en verre dpoli, pour la collecte du distillat
Des systmes automatiques de distillation sont galement disponibles.
OIV-MA-AS31105 : R2011

Les performances du systme de distillation peuvent tre contrles

priodiquement, la fois pour vrifier le taux d'extraction et l'exactitude de la
dtermination isotopique. Ce contrle peut tre effectu par distillation et mesure
de CRM -660.
5.3.4
Les quipements et consommables de laboratoire courants lists ci-dessous

sont ncessaires :
-micropipette avec embouts appropris,
-balance d'une prcision de 0,1 mg ou suprieure,
-balance d'une prcision de 0,1 g ou suprieure,
-seringue usage unique pour le transfert des liquides,
-fioles jauges de prcision (50ml, 100 ml, 250ml, )
-flacons quips d'un systme de fermeture tanche et de septa inertes (pour le
stockage de parties aliquotes de vins, de distillats et de rsidus jusqu' la mesure)
-quipement et consommables spcifis dans les autres mthodes cites ici.
Les matriels de laboratoire indiqus dans les listes ci-dessus constituent des
exemples et sont susceptibles d'tre remplacs par d'autres matriels de
performances quivalentes.
6. Echantillonnage (Prparation de l'chantillon)

6.1 Sil nest pas indiqu, dterminer le titre alcoomtrique du vin ou du produit
ferment (tv) au moins 0,05 % vol. le plus proche. (par exemple en utilisant la
mthode de l'OIV MA-F-AS312-01-TALVOL).
6.2 Extraction de l'thanol

OIV-MA-AS31105 : R2011

Avec la fiole jauge approprie, introduire un chantillon homogne d'un volume

appropri V ml de vin ou de produit ferment dans le ballon fond rond de
l'appareil de distillation. Placer une fiole conique en verre dpoli pour recueillir le
distillat. Chauffer le produit distiller pour obtenir un taux de reflux constant au
niveau du condensateur. Commencer le recueil du distillat quand on atteint une
temprature stable des vapeurs caractristique de l'azotrope eau-thanol (78C) et
arrter le recueil quand la temprature augmente. Le recueil du distillat doit se
poursuivre jusqu la rcupration totale de lazotrope eau-thanol.
En cas d'utilisation manuelle d'une colonne Cadiot (Figure 1), il est possible
d'appliquer le mode opratoire suivant :
-Recueillir le liquide d'bullition correspondant lazotrope eau-thanol ; quand
la temprature augmente, interrompre le recueil pendant cinq minutes. Quand la
temprature redescend 78C, recommencer le recueil du distillat jusqu ce que la
temprature des vapeurs augmente nouveau. Rpter cette opration jusqu' ce
que la temprature, aprs interruption du recueil, ne redescende plus 78 C.
Des systmes de distillation disponibles dans le commerce peuvent galement tre
utiliss.
Le poids mD de distillat collect est pes avec une prcision d'au moins 0,1g.
Afin d'viter tout fractionnement isotopique, le distillat doit tre conserv dans une
fiole tanche empchant toute vaporation jusqu' ce qu'il soit de nouveau utilis
pour la dtermination du titre alcoomtrique (6.3) et la prparation du tube RMN
(7.1).
Une partie aliquote de quelques ml de rsidu est conserve. Son rapport isotopique
(D/H)QW peut tre dtermin si ncessaire.
6.3 Dtermination du titre alcoomtrique du distillat
Le titre alcoomtrique (%m/m) du distillat doit tre dtermin avec une prcision
suprieure 0,1%.
OIV-MA-AS31105 : R2011

La teneur en eau du distillat (' g) peut tre dtermine par la mthode Karl Fischer
l'aide d'un chantillon d'environ 0,5 ml d'alcool d'une masse connue exacte de
g. Le titre alcoomtrique par masse du distillat est alors donn par la formule
suivante :
tmD % m/m= 100 (1-')/
Alternativement, le titre alcoomtrique peut tre dtermin par densimtrie, par
exemple l'aide d'un densimtre lectronique.
6.4 Taux de distillation
Le taux de distillation est estim l'aide de la formule suivante :
Taux de dist.% = 100 tmD mD /(V.tv)
Etant donn l'incertitude pesant sur chaque terme et en particulier sur le tv, le taux
de distillation est estim 0,5% (dans le cas d'un vin 10% v/v).
En cas d'utilisation de la colonne Cadiot, aucun effet significatif de fractionnement
isotopique n'est prvu pour un taux d'extraction suprieur 96%. En tout tat de
cause, l'oprateur peut employer pour la distillation un volume Vml appropri de
vin ou de produit ferment afin d'assurer un taux d'extraction suffisant. En gnral
des parties aliquotes de 750, 500, 400 et de 300 ml d'chantillon de vin devraient
tre suffisantes pour obtenir un taux de 96% en suivant la procdure de distillation
nonce ci-dessus avec la colonne de Cadiot sur des vins ou produits ferments
dont le tv est respectivement de 4, 6, 8 et 10% vol.
6.5 Fermentation de mots, mots concentrs et mots concentrs rectifis
Avant utilisation, la levure peut tre ractive dans un faible volume de mot. La
cuve de fermentation est quipe dun systme dtanchit pour viter les pertes
dthanol.
6.5.1 Mots
Verser environ un litre de mot, dont la concentration en sucres fermentescibles a
t prcdemment dtermine, dans la cuve de fermentation. Ajouter environ 1 g
de levure sche qui aura ventuellement t pralablement ractive. Insrer le
OIV-MA-AS31105 : R2011

dispositif d'tanchit. Laisser la fermentation s'effectuer jusqu' puisement du

sucre. Le produit ferment peut ensuite tre distill suivant le procd dcrit
prcdemment pour le vin aux paragraphes 6.1 6.4.
Remarque : Les mots conservs par ajout d'anhydride sulfureux doivent tre
dsulfits par barbotage d'azote dans le mot dans un bain-marie 70 80 C sous
reflux, afin d'empcher le fractionnement isotopique par l'vaporation de l'eau. Une
alternative pour retirer lanhydride sulfureux consiste ajouter en petite quantit
une solution de peroxyde dhydrogne (H2O2).
6.5.2 Mots concentrs
Placer V ml de mot concentr contenant une quantit connue de sucre
(approximativement 170 g) dans la cuve de fermentation. Complter jusqu' 1 litre
avec (1000 - V) ml deau. Ajouter les levures sches (1 g) et 3 g de base azote de
bacto-levure DIFCO sans acides amins. Homogniser et procder comme dcrit
au paragraphe 6.5.1.
6.5.3 Sucre de raisin (Mots concentrs rectifis)
Procder comme indiqu en 6.5.2, en compltant jusqu' 1 litre avec (1000 - V) ml
deau contenant galement 3 g d'acide tartrique dissous.
Remarque : Les mots concentrs et les mots rectifis sont dilus dans de leau
ayant un rapport isotopique (D/H) diffrent de celui du mot dorigine. Par
convention, les mesures des paramtres (D/H)I et (D/H)II sur lthanol doivent tre
normalises comme si le mot avait ferment dans de leau ayant une concentration
en deutrium ajuste celle de V-SMOW (155,76). On normalise cette donne
laide des quations suivantes (Martin et al., 1996, J. AOAC, 79, 62-72) :
Norm.V SMOW
D

H I
D S
D
= 0.19 155.76
H I
H W
OIV-MA-AS31105 : R2011

Norm.V SMOW
D

H II
D S
D
= 0.78 155.76
H II
H W
D S
est le rapport isotopique du mot dilu. Cette valeur peut tre calcule
H W
laide de lquation de la Droite mondiale des eaux mtoriques (Craig, 1961) :
(8 18O +10)
D S
+1
= 155.76
H W
1000
o on mesure 18O sur le mot dilu par la mthode de dtermination du rapport

isotopique 18O/16O de leau dans les vins et les mots [OIV-MA-AS2-12].
Conserver 50 ml d'chantillon de mot ou de mot trait l'anhydride sulfureux ou

de mot concentr ou de mot concentr rectifi, en vue de l'extraction ventuelle
de l'eau et de la dtermination de son rapport isotopique (D/H) W Q.
7. Procdure
7.1 Prparation de l'chantillon d'alcool pour la mesure RMN
- sonde RMN de 10 mm de diamtre : dans une fiole prcdemment pese,

recueillir 3,2 ml de distillat comme indiqu en section 6.2 et peser 0,1 mg prs
(mA) ; puis prendre un chantillon de 1,3 ml d'talon interne TMU (5.2.2) et peser
0,1 mg prs (mST).
OIV-MA-AS31105 : R2011
9

En fonction du type de spectromtre et de sonde utilis, ajouter une quantit

suffisante d'hexafluorobenzne (5.1.2) comme substance de stabilisation champfrquence (lock):
Spectromtre
sonde de 10 mm
7.05 T
150 l
9.4 T
35 l
Ces chiffres sont indicatifs et le volume rel utiliser doit tre ajust en fonction de
la sensibilit de l'instrument RMN. Pendant la prparation du tube et jusqu' la
mesure RMN, l'oprateur doit veiller viter toute vaporation d'thanol et de
TMU car ceci occasionnerait un fractionnement isotopique, des erreurs de poids
(mA et mST) des composants et des rsultats RMN incorrects.
L'exactitude du mode opratoire de mesure y compris cette tape de prparation
peut tre vrifie en utilisant le CRM 656.
Remarque : l'hexafluorobenzne peut tre additionn de 10% (v/v) d'acide
trifluoroactique (5.1.3) afin de catalyser l'change rapide d'hydrogne sur la
liaison hydroxyle avec pour rsultat un seul pic RMN pour les signaux hydroxyle
et eau rsiduelle.
7.2 Enregistrement des spectres RMN H de l'alcool

L'homognit du champ magntique B0 de l'chantillon est optimise par
compensation (shimming), maximisant le signal RMN du lock 19F observ avec
l'hexafluorobenzne. Les spectromtres RMN modernes peuvent effectuer
automatiquement et de manire trs efficace cette procdure de compensation
(shimming) condition que les rglages initiaux soient suffisamment proches de
l'homognit optimale du champ magntique pour un chantillon donn, ce qui est
OIV-MA-AS31105 : R2011
10

gnralement le cas pour une srie d'chantillons d'thanol prpars comme

indiqu en 7.1. L'efficacit de cette procdure peut tre contrle au moyen de la
rsolution mesure sur le spectre obtenu sans multiplication exponentielle (c.--d.
LB = 0) (Figure 2b) et exprime par la largeur mi-hauteur des signaux mthyle et
mthylne de l'thanol et du signal mthyle du TMU, et doit tre infrieure 0,5
Hz dans les conditions optimales. La sensibilit mesure avec un facteur de
multiplication exponentielle LB gal 2 (Figure 2a) doit tre suprieure ou gale
150 pour le signal mthyle de l'thanol titrant 95 % vol. (93,5 % mas.).
7.2.2 Vrification des rglages des instruments
Procder aux rglages habituels d'homognit et de sensibilit selon les
indications du constructeur.
Utiliser les tubes scells CRM123 (H : Haut, M : Moyen, B : Bas).
En suivant la procdure dcrite au paragraphe 7.3 ci-dessous, dterminer les
valeurs isotopiques de ces alcools, en les notant mesH, mesM, mesB.
Les comparer aux valeurs standard correspondantes signales par stH, stM, stB en
exposant.
En gnral, titre dindication, l'cart-type obtenu pour 10 rptitions de chaque
spectre devrait tre de l'ordre de 0,01 pour le rapport R, 0,5 ppm pour (D/H)I et 1
ppm pour (D/H)II.
Les valeurs moyennes obtenues pour les divers paramtres isotopiques (R, (D/H)I,
(D/H)II) doivent se situer dans l'cart-type de rptabilit correspondant indiqu
pour ces paramtres pour le CRM123. Dans le cas contraire, rpter les contrles.
Une fois les rglages optimiss, dautres matriaux CRM peuvent tre utiliss pour
contrler la qualit des mesures dans des analyses de routine.
7.3 Conditions d'acquisition des spectres RMN
Placer un chantillon d'alcool prpar en 7.1 dans un tube de 10 mm et l'introduire
dans la sonde.
OIV-MA-AS31105 : R2011
11

On suggre les conditions d'acquisition des spectres RMN suivantes :

- temprature constante de la sonde, rgle idalement avec une variation
n'excdant pas 0,5K dans la plage de 302K 306K en fonction de la puissance
calorifique gnre par le dcouplage ;
- temps d'acquisition d'au moins 6,8 s pour une largeur spectrale de 1200 hertz
(mmoire de 16K) (c.--d. environ 20 ppm 61,4 MHz ou 27 ppm 46,1 MHz) ;
- Impulsion : 90 ;
- dtection en quadrature : fixer l' offset 01 entre les signaux OD et CHD pour
l'thanol et entre les signaux HOD et TMU pour l'eau ;
- Dterminer la valeur de l'offset de dcouplage 02 partir du spectre protonique
mesur par la bobine de dcouplage sur le mme tube. Un bon dcouplage est
obtenu quand 02 est situ au milieu de l'intervalle de frquence existant entre les
groupes CH3 et CH2. Utiliser le mode de dcouplage large bande ou des trains
d'impulsions composites (ex : WALTZ16) pour assurer un dcouplage homogne
sur l'ensemble du spectre.
Effectuer pour chaque spectre un nombre NS d'accumulations suffisant pour
obtenir le rapport signal-bruit indiqu sous le terme de sensibilit au paragraphe 7.2
et rpter NE fois cette srie de NS accumulations. Les valeurs de NS dpendent
des types de spectromtre et de sonde utiliss. Exemples de choix possibles :
Spectromtre
sonde de 10 mm
7.05 T
NS = 304
9.4 T
NS = 200
Le nombre NE de rptitions doit tre statistiquement significatif et suffisant pour

obtenir les performances et la prcision de la mthode comme indiqu en section
(9) ci-dessous .
Dans le cas o deux tubes dchantillons RMN ont t prpars selon la procdure
dcrite en 7.1, on peut enregistrer cinq rptitions de spectres RMN (NE=5) sur
OIV-MA-AS31105 : R2011
12

chaque tube. Le rsultat final pour chacun des paramtres isotopiques correspond
la valeur moyenne des mesures obtenues sur les deux tubes dchantillons RMN.
Dans ce cas, les critres dacceptation pour la validation des rsultats obtenus avec
ces deux tubes sont les suivants :
|Mes1(D/H)I-Mes2(D/H)I|<0,5ppm, |Mes1(D/H)II-Mes2(D/H)II|<0,8ppm

Pour chacun des NE spectres (voir spectre RMN de l'thanol, Figure 2a),
dterminer :
hauteur du signal II (CH3 CHD OH)

hII
= 3
hauteur du signal I (CH2D CH2 OH)
hI
R = 3
(D/H) = 1,5866 T mm
ST
(D/H)
= 2,3799 TII
II
(D/H)
t
ST
D
m
mST (D/H)ST
mA
t Dm
avec
TI =
hauteur du signal I (CH2D CH2 OH)

hauteur du signal de l'talon interne (TMU)
OIV-MA-AS31105 : R2011
13

TII =
hauteur du signal II (CH3 CHD OH)

hauteur du signal de l'talon interne (TMU)
- mST et mA, voir 7.1

- tmD, voir 6.3
- (D/H)ST = rapport isotopique de l'talon interne (TMU) indiqu sur le certificat
fourni par IRMM.
L'utilisation des hauteurs de signaux au lieu des surfaces, mesurables avec moins
de prcision, suppose des largeurs de raies mi-hauteur gales, ce qui est une
approximation raisonnable (Figure 2b).
Pour chacun des paramtres isotopiques, calculer la moyenne et l'intervalle de
confiance pour le nombre de spectres rpts acquis sur un chantillon donn.
Des
logiciels
optionnels
permettent
d'effectuer
ces
calculs
en
ligne.
9. Prcision
La rptabilit et la reproductibilit de la mthode SNIF-NMR / RMN-FINS ont
t lobjet dtudes menes en collaboration sur les jus de fruit, ainsi quil est
indiqu dans la bibliographie ci-dessous. Nanmoins ces tudes ne prenaient en
considration que le paramtre (D/H)I. Dans le cas du vin, des donnes provenant
dtudes internes menes dans diffrents laboratoires peuvent tre prises en
considration pour tablir lcart-type de rptabliti et la limite de rptabilit,
comme prsent dans lAnnexe I. Les rsultats des essais daptitude rapports dans
lAnnexe II fournissent des donnes qui peuvent tre utilises pour calculer lcarttype de reproductibilit et la limite de reproductibilit pour les vins.
Ces chiffres peuvent tre rsums comme suit :

OIV-MA-AS31105 : R2011
14

(D/H)I
(D/H)II
Sr
0,26
0,30
0,005
0,72
0,84
0,015
SR
0,35
0,62
0,006
0,99
1,75
0,017
avec
-
S : cart type de rptabilit
r : limite de rptabilit
SR : cart type de reproductibilit
R : limite de reproductibilit
OIV-MA-AS31105 : R2011
15

REFERENCES
MARTIN G.J., MARTIN M.L., MABON F., Anal. Chem., 1982, 54, 23802382.
MARTIN G.J., MARTIN M.L., J. Chim. Phys., 1983, 80, 294297.
MARTIN G.J., GUILLOU C., NAULET N., BRUN S., Tep Y., Cabanis J.C.,
CABANIS M.T., SUDRAUD P., Sci. Alim., 1986, 6, 385405.
MARTIN G.J., ZHANG B.L., NAULET N. and MARTIN M.L., J. Amer. Chem.
Soc., 1986, 108, 51165122.
MARTIN G.J., GUILLOU C., MARTIN M.L., CABANIS M.T., TEP Y. et
AERNY J., J. Agric. Food Chem., 1988, 36, 316.
MARTIN G. G., WOOD R., MARTIN, G. J., J. AOAC Int., 1996 , 79 (4), 917-928.
MARTIN G.G., HANOTE V., LEES M., MARTIN Y-L.,. J. Assoc Off Anal Chem,
1996, 79, 62-72
CRAIG H., Science , 1961, 133,. 1702 - 1703
OIV-MA-AS31105 : R2011
16

Moteur
Joint tanche
Thermomtre
Atmosphre
Colonne
Thermomtre
Bouchon
Sonde
Ballon
OIV-MA-AS31105 : R2011
17

Figure 1 Dispositif d'extraction d'thanol
Fond x 10
Figure 2a
Spectre RMN 2H d'un thanol de vin avec un talon interne (TMU : N,Nttramthylure)
OIV-MA-AS31105 : R2011
18

Figure 2b
Spectre 2H de lthanol pris dans les mmes conditions que celles de la Figure 2a,
mais sans multiplication exponentielle (LB = 0)
OIV-MA-AS31105 : R2011
19

Annexe I : Estimation de la rptabilit partir d'tudes internes de

rptabilit
Les tudes internes de rptabilit ralises dans 4 laboratoires fournissent des
donnes qui permettent l'estimation de la rptabilit de la mthode SNIF-NMR /
RMN-FINS.
Ces tudes internes de rptabilit ont t ralises par les distillations et les
mesures en double de 10, 9 et 5 chantillons de vin diffrents, par les laboratoires
1, 2 et 3.
De son ct, le laboratoire 4 a ralis 16 distillations et mesures sur le mme vin
dans des conditions de rptabilit sur une courte priode de temps.
Tableau I-1 :
labo 1 : 10 vins analyss en double

(D/H)I
chantillon
(D/H)I
(D/H)II
103,97
130,11
2,503
104,52
130,79
2,503
103,53
130,89
2,529
103,94
130,57
2,513
102,72
130,00
2,531
103,04
130,20
2,527
105,38
132,39
2,513
105,52
132,59
2,513
(D/H)II
abs((D/H)I)
Carrs
abs((D/H)II)
Carrs
abs((R))
Carrs
0,55
0,302
0,68
0,462
0,000
0,00000
0,41
0,168
0,32
0,102
0,016
0,00026
0,32
0,102
0,20
0,040
0,004
0,00002
0,14
0,020
0,20
0,040
0,000
0,00000
OIV-MA-AS31105 : R2011
20

5
10
101,59
127,94
2,519
101,11
128,14
2,535
103,23
132,14
2,560
102,93
131,78
2,561
103,68
130,95
2,526
103,53
130,20
2,515
101,76
128,86
2,533
101,52
128,44
2,530
103,05
129,59
2,515
103,01
129,15
2,508
101,47
132,63
2,614
100,97
132,45
2,624
0,48
0,230
0,20
0,040
0,016
0,00026
0,30
0,090
0,36
0,130
0,001
0,00000
0,15
0,023
0,75
0,563
0,011
0,00012
0,24
0,058
0,42
0,176
0,003
0,00001
0,04
0,002
0,44
0,194
0,007
0,00005
0,50
0,250
0,18
0,032
0,010
0,00010
Somme des carrs :
1,245
1,779
0,00081
Sr
0,25
0,30
0,006
0,71
0,84
0,018
OIV-MA-AS31105 : R2011
21

Tableau I-2 :

(D/H)I
chantillon
(D/H)I
(D/H)II
105,02
133,78
2,548
104,76
133,88
2,556
102,38
130,00
2,540
101,65
129,60
2,550
100,26
126,08
2,515
99,42
125,44
2,523
101,17
128,83
2,547
100,66
128,38
2,551
101,47
128,78
2,538
101,47
128,52
2,533
106,14
134,37
2,532
106,26
134,41
2,530
103,62
130,55
2,520
103,57
130,66
2,523
103,66
129,88
2,506
103,38
129,33
2,502
103,50
129,66
2,506
103,93
129,44
2,491
(D/H)II
abs((D/H)I)
Carrs
abs((D/H)II)
Carrs
abs((R))
Carrs
0,26
0,068
0,10
0,010
0,008
0,00007
0,73
0,533
0,40
0,160
0,010
0,00011
0,84
0,706
0,64
0,410
0,008
0,00007
0,51
0,260
0,45
0,203
0,004
0,00002
0,00
0,000
0,26
0,068
0,005
0,00003
0,12
0,014
0,04
0,002
0,002
0,00000
0,05
0,003
0,11
0,012
0,003
0,00001
0,28
0,078
0,55
0,302
0,004
0,00001
0,43
0,185
0,22
0,048
0,015
0,00021
OIV-MA-AS31105 : R2011
22

Somme des carrs :
1,846
1,214
0,00053
Sr
0,32
0,26
0,005
0,91
0,74
0,015
Tableau I-3 :

(D/H)I
chantillon
(D/H)I
(D/H)II
101,63
125,87
2,477
101,57
125,41
2,470
99,24
124,41
2,507
99,19
124,37
2,508
101,23
125,07
2,471
101,17
125,23
2,476
100,71
125,29
2,488
100,78
124,13
2,464
99,89
124,02
2,483
99,71
123,46
2,476
100,60
124,14
2,468
100,41
124,80
2,486
101,47
125,60
2,476
101,70
125,74
2,473
(D/H)II
abs((D/H)I)
Carrs
abs((D/H)II)
Carrs
abs((R))
Carrs
0,06
0,004
0,46
0,212
0,007
0,00005
0,05
0,002
0,04
0,002
0,001
0,00000
0,06
0,004
0,16
0,026
0,005
0,00002
0,07
0,005
1,16
1,346
0,024
0,00058
0,18
0,032
0,56
0,314
0,007
0,00005
0,19
0,036
0,66
0,436
0,018
0,00032
0,23
0,053
0,14
0,020
0,003
0,00001
OIV-MA-AS31105 : R2011
23

8
10
11
12
13
15
102,02
124,00
2,431
102,15
123,93
2,426
99,69
124,60
2,500
100,09
125,13
2,500
99,17
123,71
2,495
99,47
123,90
2,491
100,60
123,89
2,463
101,00
124,43
2,464
99,38
124,88
2,513
99,05
124,33
2,511
99,51
125,24
2,517
99,95
125,25
2,506
101,34
124,68
2,460
101,77
125,09
2,458
0,13
0,017
0,07
0,005
0,005
0,00002
0,40
0,160
0,53
0,281
0,000
0,00000
0,30
0,090
0,19
0,036
0,004
0,00002
0,40
0,160
0,54
0,292
0,001
0,00000
0,33
0,109
0,55
0,302
0,002
0,00000
0,44
0,194
0,01
0,000
0,011
0,00012
0,43
0,185
0,41
0,168
0,002
0,00000
Somme des carrs :
1,050
3,437
0,00120
Sr
0,19
0,34
0,006
0,53
0,96
0,018
OIV-MA-AS31105 : R2011
24

Tableau I-4 :
labo 4 : un vin analys 16 fois
Rptition
(D/H)I
(D/H)II
101,38
126,87
2,503
101,30
126,22
2,492
100,98
125,86
2,493
100,94
126,00
2,497
100,71
125,79
2,498
100,95
126,05
2,497
101,17
126,30
2,497
101,22
126,22
2,494
100,99
125,91
2,494
10
101,29
126,24
2,493
11
100,78
126,07
2,502
12
100,65
125,65
2,497
13
101,01
126,17
2,498
14
100,89
126,05
2,499
15
101,66
126,52
2,489
16
100,98
126,11
2,498
(D/H)I
(D/H)II
cart :
0,0703
0,0840
0,000013
Sr
0,27
0,29
0,004
0,75
0,82
0,010
Les donnes groupes pour lcart-type de rptabilit et pour la limite de

rptabilit peuvent donc tre estimes comme suit :
OIV-MA-AS31105 : R2011
25

(D/H)I
(D/H)II
Sr
0,26
0,30
0,005
limite de rptabilit r
0,72
0,84
0,015
Les donnes des tudes internes de rptabilit ont t fournies par (par ordre
alphabtique) :
- Bundesinstitut fr Risikobewertung,
Thielallee 88-92 PF 330013 D-14195 BERLIN ALLEMAGNE
- Fondazione E. Mach-Istituto Agrario di San Michele all'Adige,

Via E. Mach, 1 - 38010 San Michele all'Adige (TN), ITALIE
- Joint Research Centre - Institute for Health and Consumer Protection,

I-21020 ISPRA (VA) ITALIE
-Laboratorio Arbitral Agroalimentario, Carretera de la Corua, km 10,7

E-28023 MADRID ESPAGNE
OIV-MA-AS31105 : R2011
26

Annexe II : valuation de la Reproductibilit partir de donnes d'essais

d'aptitude
Depuis dcembre 1994, des campagnes internationales d'essais d'aptitude sur la
dtermination de paramtres isotopiques sur le vin et sur plusieurs autres matrices
alimentaires ont t rgulirement organises. Ces campagnes d'essais d'aptitude
permettent aux laboratoires participants d'valuer leurs rsultats et la qualit de
leurs analyses. L'exploitation statistique de ces rsultats obtenus sur un grand
nombre d'chantillons sur une longue priode de temps permet d'apprcier la
variabilit des mesures dans des conditions de reproductibilit. Ceci permet une
bonne estimation des paramtres d'cart et de la limite de reproductibilit de la
mthode. Les rsultats de 40 sries dessais d'aptitude entre 1994 et 2010 pour
diffrents types de vin (rouge, blanc, ros, sec, doux et mousseux) sont synthtiss
dans le tableau II-1 ci-dessous.
Pour (D/H)I et (D/H)II le SR group peut donc tre calcul en utilisant l'quation
suivante :
avec Ni, et SR,i tant le nombre des valeurs et lcart-type de reproductibilit de la

ime srie, et K le nombre de sries.
Considrant la dfinition du rapport intramolculaire R, et en appliquant les rgles
type de propagation d'erreur supposant que (D/H)I et (D/H)II sont indpendantes
(les termes de covariance valent donc zro), on peut aussi estimer lcart-type de
reproductibilit pour ce paramtre.
On peut donc calculer les chiffres suivants :
OIV-MA-AS31105 : R2011
27

(D/H)I
(D/H)II
SR :
0,35
0,62
0,006
Limite de reproductibilit R
0,99
1,75
0,017
OIV-MA-AS31105 : R2011
28

Tableau II-1 : Essai d'aptitude FIT Synthse des valeurs statistiques observes sur des chantillons de vin :
(D/H)II
(D/H)I
chantillon
Anne
Srie
Moyenne
SR
Moyenne
SR
Vin rouge
1994
R1
10
102,50
0,362
10
130,72
0,33
Vin ros
1995
R1
10
102,27
0,333
10
128,61
0,35
Vin rouge
1995
R2
11
101,45
0,389
11
127,00
0,55
Vin rouge
1996
R1
11
101,57
0,289
11
132,23
0,34
Vin ros
1996
R2
12
102,81
0,322
12
128,20
0,60
Vin blanc
1996
R3
15
103,42
0,362
15
127,97
0,51
Vin rouge
1996
R4
15
102,02
0,377
13
131,28
0,30
Vin ros
1997
R1
16
103,36
0,247
16
126,33
0,44
Vin blanc
1997
R2
16
103,42
0,444
15
127,96
0,53
Vin blanc doux
1997
R2
14
99,16
0,419
15
130,02
0,88
Vin
1997
R3
13
101,87
0,258
15
132,03
0,61
Vin doux
1997
R3
12
102,66
0,214
12
128,48
0,48
Vin ros
1997
R4
16
102,29
0,324
16
129,29
0,63
Vin doux
1997
R4
15
102,04
0,269
13
131,27
0,30
Vin blanc
1998
R1
16
105,15
0,302
16
127,59
0,59
Vin doux
1998
R3
16
102,17
0,326
16
129,60
0,56
Vin rouge
1998
R4
17
102,44
0,306
17
131,60
0,47
Vin blanc
1999
R1
14
102,93
0,404
13
129,64
0,46
OIV-MA-AS31105 : R2011
29

Vin doux
2000
R2
15
103,19
0,315
14
129,43
0,60
Vin
2001
R1
12
105,28
0,264
16
131,32
0,68
Vin doux
2001
R2
14
101,96
0,249
15
128,99
1,05
Vin
2002
R1
17
101,01
0,365
16
129,02
0,74
Vin
2002
R2
17
101,30
0,531
17
129,28
0,93
Vin
2003
R1
18
100,08
0,335
18
128,98
0,77
Vin doux
2003
R2
17
100,51
0,399
18
128,31
0,80
Vin
2004
R1
18
102,88
0,485
19
128,06
0,81
Vin doux
2004
R3
16
101,47
0,423
16
130,10
0,71
Vin
2005
R1
19
101,33
0,447
19
129,88
0,76
Vin doux
2005
R2
15
102,53
0,395
15
131,36
0,38
Vin sec
2006
R1
18
101,55
0,348
18
131,30
0,51
Vin doux
2006
R2
18
100,31
0,299
18
127,79
0,55
Vin
2007
R1
18
103,36
0,403
18
130,90
0,90
Vin doux
2007
R2
19
102,78
0,437
19
130,72
0,55
Vin
2008
R1
24
103,20
0,261
23
131,29
0,59
Vin doux
2008
R2
20
101,79
0,265
19
129,73
0,34
Vin sec
2009
R1
24
102,96
0,280
23
130,25
0,49
Vin doux
2009
R2
21
101,31
0,310
21
127,07
0,50
Vin sec
2010
R1
21
101,80
0,350
20
129,65
0,40
Vin mousseux
2010
R1
11
101,51
0,310
11
129,09
0,68
Vin sec
2010
R2
20
104,05
0,290
19
133,31
0,58
OIV-MA-AS31105 : R2011
30

OIV-MA-AS31105 : R2011
31

Polyols drivant des sucres
Mthode Type IV
Dosage des polyols derivant des sucres et des sucres rsiduels

dans les vins secs par chromatographie en phase gazeuse
Dosage simultan de lrythrytol, l'arabitol, le mannitol, le sorbitol et le
msoinositol dans les vins.
Le dosage des sucres par Chromatographie en phase gazeuse (CPG) tant long et
compliqu, il est rserv la dtermination de traces de sucres et en particulier de
sucres pour lesquels il n'existe pas de mthode enzymatique utilise en routine :
Arabinose, Rhamnose, Mannose, Galactose mais il est applicable aussi au glucose
et fructose. L'avantage tant de pouvoir doser simultanment tous les monomres,
dimres ou mme trimres des sucres.
Remarque1. Il n'est pas possible de doser les sucres aprs leur rduction sous forme
d'alditol en raison de la prsence des polyols correspondants.
Remarque 2. Les sucres donnent sous forme de drivs TMS 2 formes et et
parfois 3 ou 4 (Gamma) correspondant aux diffrents anomres prsents dans le
vins.
Remarque 3. Sans dilution pralable la mthode permet difficilement de doser le
glucose et le fructose prsents plus de 5 g/l.
2. Principe
Les sucres rsiduels des vins secs peuvent tre doss par chromatographie en phase
gazeuse aprs formation de leurs drivs trimthylsilyls.
L'talon interne est le pentarythritol.
OIV-MA-AS311-06 : R2006

3. Ractifs
Mlange silanisant donn titre d'exemple :
3.1 Hexamthyldisilazane (HMDS) pur
3.2 Anhydride trifluoroactique (TFA) pur
3.3 Pyridine pure
3.4 Pentarythritol pur
3.5. Eau distille
3.6 Pentarythritol 10 g/l (solution d'talon interne), dissoudre 0,15 g de
pentarythritol (3.4) dans 100 ml d'eau (3.5)
3.7 Produits purs pouvant tre utiliss pour prparer les solutions d'talonnage
notamment glucose, fructose, arabinose, mannitol, sorbitol (liste non exhaustive)
3.8 Solutions de rfrence de produits purs 200 mg/l dissoudre 20 mg de
chacun des produits doser (3.6) dans 100 ml d'eau.
Remarque Les solutions de sucre doivent tre prpares juste avant l'emploi.
4. Matriel et appareillage
4.1 Pipettes de laboratoire de 1 ml gradues au 1/10e de ml
4.2 Poires propipettes
4.3 Seringue de 100 l
4.4 Tubes vis de 5 ml de capacit pouvant tre ferms par un bouchon vis
muni d'une capsule d'tanchit face tflone.
4.5 Evaporateur rotatif sous vide pouvant recevoir les tubes vis (4.4) afin
d'vaporer les chantillons sec
4.6 Chromatographe en phase gazeuse quip d'un dtecteur ionisation x g, de
flamme et d'un injecteur fonctionnant en mode "split" : division de 1/30e 1/50e de
volume inject (1 l)
4.7 Colonne capillaire apolaire pow ex (Se 30, Cpsil 5, HP1 ) 50 m x 0,25
mm paisseur du film de phase stationnaire 15 m ( titre dexemple).
4.8 Seringue d'injection de 10 l.
4.9 Systme d'acquisition des donnes
4.10 Bain ultra-sons
4.11 Sorbonne de laboratoire
5. Prparation des chantillons
5.1 Ajout de l'talon interne : 1 ml de vin (pipette, 4.1) ou de solution de rfrence
200 mg/l (3.6) est plac dans le tube vis (4.4).
OIV-MA-AS311-06 : R2006

Remarque : Il est galement possible d'oprer avec des volumes de vin trs
infrieurs en particulier si le milieu est riche en sucre.
Il est ajout 50 l de la solution de pentarythritol 10 g/l (3.5) l'aide de la
seringue (4.3)
5.2 Obtention d'un rsidu sec :
Le tube vis est plac sur l'vaporateur rotatif dont le bain d'eau est maintenu une
temprature infrieure 40 C, poursuivre l'vaporation jusqu' la disparition de
toute trace de liquide.
5.3 Ajout des ractifs
5.3.1 Placer les tubes contenant l'extrait sec de mme que les ractifs 3.1, 3.2 et 3.3
dans la sorbonne (4.11), brancher la ventilation
5.3.2 A l'aide des pipettes (4.1) et de poires propipettes (4.2) ajouter dans le tube
successivement 0,20 ml de pyridine (3.3), 0,7 ml de HMDS (3.1), 0,1 ml de TFA
(3.2)
5.3.3 Fermer hermtiquement le tube l'aide de son bouchon
5.3.4 Placer le tube dans le bain ultra-sons (4.10) durant 5 minutes afin d'obtenir
une dispersion complte du rsidu sec
5.3.5 Placer le tube dans un four 60 C durant 2 heures afin d'oprer la
substitution totale des hydrognes des hydroxyles ou des acides par des groupes
trimthylsilyle (TMS).
Remarque : il ne doit subsister qu'une seule phase aprs chauffage sinon cela
signifie quil restait de l'eau dans le tube ; de mme il ne doit pas y avoir de dpt
bruntre ce qui indiquerait un excs de sucre non driv.
6. Analyse chromatographique
6.1 Placer le tube refroidi dans la sorbonne (4.11) ventile, prlever 1 l l'aide de
la seringue (4.8). Injecter dans le chromatographe en mode "split" (division
permanente)
Traiter de la mme manire l'chantillon driv de vin et de rfrence
6.2 Programmer la temprature du four, par exemple de 60 C 240 C raison de
3 C par minute de telle sorte que l'analyse complte dure par exemple 1 heure
pour une sparation complte du mannitol et du sorbitol (rsolution suprieure
1,5)
7. Calculs
OIV-MA-AS311-06 : R2006

Exemple : calcul de la concentration en sorbitol

Soit
s la surface du pic du sorbitol dans le vin
S la surface du pic du sorbitol dans la solution de rfrence
i la surface du pic de l'talon interne dans le vin
I la surface du pic de l'talon interne dans la solution rfrence
la teneur ts en sorbitol dans le vin sera
ts = 200
s I
S i
en mg par litre
un mme raisonnement permet de calculer la teneur tg en glucose

tg = 200
g l
G i
en mg par litre
o g est la somme des surfaces des deux pics de glucose dans le vin et G est la
somme des surfaces des deux pics de glucose dans la solution de rfrence.
8. Caractristiques de la mthode
Seuil de dtection environ 5 mg/l pour un polyol (un seul pic chromatographique).
Rptabilit moyenne de l'ordre de 10 % pour une concentration en sucre ou polyol
de l'ordre de 100 mg/l.
Tableau 1
Rptabilit du dosage de quelques substances de lextrait sec du vin aprs
drivation TMS.
Ac.
Msoinosito
Tartrique Fructose Glucose Mannitol Sorbitol Dulcitol
l
moyenne
(mg/l)
cart-type
(mg/l)
CV (%)
2013
1238
255
164
58
31
456
184
9
118
10
27
11
8
5
2
3
2
8
28
6
OIV-MA-AS311-06 : R2006

REFERENCES
RIBEREAU-GAYON P. et BERTRAND A. 1972, Nouvelles applications de la

chromatographie en phase gazeuse lanalyse des vins et au contrle de leur
qualit, Vitis, 10, 318-322.
BERTRAND A. (1974), Dosage des principaux acides du vin par chromatographie
en phase gazeuse. FV OIV 717718, 253274.
DUBERNET M.0. (1974), Application de la chromatographie en phase gazeuse
ltude des sucres et polyols du vin: thse 3 Cycle, Bordeaux.
OIV-MA-AS311-06 : R2006

Figure 1
Chromatogramme dun vin blanc aprs silylation. Colonne Cpsil5CB 50 m x 0.25 mm
x 0,15 m. Injection split, 60 C, 3 C/min, 240 C. Ci-dessous grossissement.
44.243
40.012
26.443
31.313
22
19.293
20.021
20.392
2,3
14.812
10.295
10.607
11.050
4.028
4.196
5.005
5.397
1.615
1.815
2.023
2.184
2.630
ADC1 B, ADC1 CHANNEL B (AB17OCT\AB000016.D)

Norm.
400000
31
14,15,16
8,9
13
300000
36.721
37.388
24.761
8.632
500000
23
24
11
200000
30
18
12
100000
0
10
20
30
40
50
min
Identification des pics : 1 : mlange ractionnel; 2 et 3 : acides inconnus; 4 :pentarythritol; 5 et 6

inconnus; 7 : acide tartrique + arabinose ; 8, 10 et 11 : rhamnose ; 9 : Arabinose ; 12 : xylitol ; 13 : arabitol
; 14, 15 et 16 : fructose ; 17 : galactose + inconnu ; 18 :glucose ; 19 : galactose + acide galacturonique
; 20 et 21 : inconnus ; 22 : mannitol; 23 sorbitol ; 24 : glucose ; 25 et 27 : inconnus ; 26 : acide
galacturonique ; 28 et 30 : galactonolactone ; 29 : acide mucique ; 31 : mso-inositol.
OIV-MA-AS311-06 : R2006

Glucose et fructose par pH-mtrie diffrentielle
Mthode Type III
Determination conjointe du glucose et du fructose des vins

par ph-metrie differentielle
1.
PORTEE ET CHAMP D'APPLICATION
Cette mthode est applicable l'analyse du glucose et du fructose des vins entre 0
et 60 g/L (niveau moyen) ou 50 et 270 g/L (niveau haut).
2.
PRINCIPE
La dtermination conjointe du glucose et du fructose par pH-mtrie diffrentielle

consiste en une phosphorylation du glucose et du fructose par de l'hexokinase. Les
ions H+ gnrs de manire stchiomtrique par rapport aux quantits de glucose
et de fructose sont ensuite quantifis.
3.
REACTIONS
Le glucose et le fructose prsents sont phosphoryls par l'adnosine triphosphate

(ATP) cours d'une raction enzymatique catalyse par l'hexokinase (HK) (EC
2.7.1.1)
glucose + ATP
fructose + ATP
HK
HK
glucose-6-phosphate + ADP + H+
fructose-6-phosphate + ADP+ H+
4.
REACTIFS
4.1
4.2
4.3
4.4
Eau dminralise (18 M) ou bidistille

2-Amino-2-(hydroxymthyl)propane-1,3-diol (TRIS) puret 99%
Adnosine triphosphate disodique (ATP, 2Na) puret 99%
Phosphate trisodique douze molcules d'eau (Na3PO4.12H2O) puret
99%
Hydroxyde de sodium (NaOH) puret 98%
Chlorure de magnsium six molcules d'eau (MgCl2.6H2O) puret
4.5
4.6
99%
OIV-MA-AS311-07 : R2006

4.7
4.8
4.9
4.10
4.11
4.12
Triton X 100
Chlorure de potassium (KCl) puret 99%
2-Bromo-2-nitropropane-1,3-diol (Bronopol) (C3H6BrNO4)
Hexokinase (EC 2.7.1.1) 1 mg 145 U (ex Hofmann La Roche,
Mannheim, Allemagne ref. HEXO-70-1351)
Glycrol puret 98%
Glucose puret 99%
4.13
Tampon de raction pH 8,0 commercial ou prpar selon la mthode
suivante : dans une fiole jauge de 100 mL (5.2) verser approximativement 70 mL
(5.3) d'eau (4.1), mettre en agitation continue (5.5). Ajouter 0,242 g 0,001 g (5.4)
de TRIS (4.2), 0,787 g 0,001 g (5.4) d'ATP (4.3), 0,494 g 0,001 g (5.4) de
phosphate de sodium (4.4), 0,009 mg 0,001 g (5.4) d'hydroxyde de sodium (4.5),
0,203 g 0,001 g (5.4) de chlorure de magnsium (4.6), 2,000 0,001 g (5.4) de
Triton X 100 (4.7), 0,820 g 0,001 g (5.4) de chlorure de potassium (4.8) et 0,010
0,001 g (4.9) de bronopol. Ajuster au trait de jauge avec de l'eau (4.1). Le pH
final doit tre de 8,0 0,1 (5.6),.sinon l'ajuster avec de l'hydroxyde de sodium ou
de l'acide chlorhydrique. Le tampon ainsi prpar est stable pendant deux mois
4C.
4.14
Solution enzymatique commerciale ou prpare selon la mthode
suivante : l'aide d'une pipette jauge (5.7) disposer 5 mL de glycrol (4.11) dans
une fiole jauge de 10 mL, ajuster au trait de jauge avec de l'eau (4.1) et
homogniser. Dissoudre 20 mg 1 mg (5.4) d'hexokinase (4.10) et 5 mg de
Bronopol (4.9) dans 10 mL de la solution de glycrol. L'activit de la solution
enzymatique doit tre de 300 U 50 U par mL pour l'hexokinase. La solution
enzymatique est stable pendant 6 mois 4C.
4.15
Prparation de la solution d'talonnage (niveau moyen) si la teneur
suppose est infrieure 50 g/L de glucose + fructose)
Placer 3,60 g 0,01 g (5.4) de glucose (4.12) (pralablement dessch 12 heures
40 C jusqu' poids constant), 0,745 g 0,001 g (5.4) de chlorure de potassium
(4.8) et 0,010 g 0,001 g de bronopol (4.9) dans une fiole jauge de 100 mL (5.2).
Ajouter de l'eau (4.1). Bien homogniser (5.5). Ajuster au trait de jauge avec de
l'eau (4.1) aprs avoir enlever le barreau magntique. La concentration finale est de
36 g/L de glucose La solution est stable 6 mois 4C.
4.16
Prparation de la solution d'talonnage (niveau haut) si la teneur
suppose est suprieure 50 g/L de glucose + fructose)
Placer 18,0 g 0,01 g (5.4) de glucose (4.12) (pralablement dessch 12 heures
40 C jusqu' poids constant), 0,745 g 0,001 g (5.4) de chlorure de potassium
OIV-MA-AS311-07 : R2006

(4.8) et 0,010 g 0,001 g de bronopol (4.9) dans une fiole jauge de 100 mL (5.2).
Ajouter de l'eau (4.1). Bien homogniser (5.5). Ajuster au trait de jauge avec de
l'eau (4.1) aprs avoir enlever le barreau magntique. La concentration finale est de
180 g/L de glucose La solution est stable 6 mois 4C.
5.
APPAREILLAGE
5.1
Appareil de pH-mtrie diffrentielle
(EUROCHEM CL 10 plus, Microlab EFA ou quivalent) voir annexe A
5.2
Fiole jauge de 100 mL classe A
5.3
Eprouvette gradue pied de 100 mL
5.4
Balance de prcision permettant de peser au mg prs
5.5
Agitateur magntique et barreau magntique en tflon
5.6
pH-mtre
5.7
Pipettes jauges de 3mL, 5 mL classe A
5.8
5.9
Pipettes automatiques piston de 25 et 50 L
6.
PREPARATION DES ECHANTILLONS
Les chantillons ne doivent pas tre trop chargs de matires en suspension, dans le
cas contraire, les centrifuger ou les filtrer. Les vins mousseux doivent tre dgazs.
7.
MODE OPERATOIRE
L'oprateur doit respecter les instructions d'utilisation de l'appareillage (5.1). Avant

toute utilisation, l'instrument doit tre stabilis en temprature. Les circuits doivent
tre rincs avec la solution de tampon (4.13) aprs nettoyage ventuel.
7.1
Dtermination du blanc
(dtermination du signal de l'enzyme) ;
remplir les compartiments lectrodes (EL1 et EL2) du pH-mtre diffrentiel (5.1)
avec le tampon (4.13), la diffrence de potentiel entre les deux lectrodes (D1) doit
tre comprise entre 150 mpH ;
ajouter 24 L de solution enzymatique (4.14) dans la chambre de raction ( la
micropipette 5.9 ou par le prparateur) et remplir l'lectrode EL2 ;
mesurer la diffrence de potentiel (D2) entre les deux lectrodes ;
calculer la diffrence de pH, pHo pour le blanc selon le calcul suivant :
pHo = D2 D1
o
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pHo = la diffrence de pH entre les deux mesures pour le blanc ;

D1 = valeur de la diffrence de pH entre les deux lectrodes remplies avec le
tampon ;
D2 = valeur de la diffrence de pH entre les deux lectrodes dont l'une est remplie
de tampon et l'autre de tampon et d'enzyme.
La valeur de pHo permet de vrifier l'tat des lectrodes en cours de dosage ainsi
que leur drive ventuelle avec le temps; elle doit tre comprise entre 30 et 0 mpH
et 1,5 mpH entre deux mesures conscutives. Dans le cas contraire, vrifier la
qualit du tampon pH et la propret du circuit hydraulique et des lectrodes,
nettoyer si ncessaire puis refaire le blanc.
7.2
Etalonnage
7.2.1 Niveau moyen
remplir les compartiments lectrodes (EL1 et EL2) avec le tampon (4.13);
ajouter 25 L ( la micropipette 5.9 ou par le prparateur) de solution talon de
glucose (4.15) dans la chambre de raction ;
remplir les lectrodes EL1 et EL2 avec le mlange tampon + solution talon ;
mesurer la diffrence (D3) de potentiel entre les deux lectrodes ;
ajouter 24 L de solution enzymatique (4.14) et remplir l'lectrode EL2 avec le
mlange tampon + solution talon + enzyme ;
aprs le temps ncessaire la raction enzymatique, mesurer la diffrence de
potentiel (D4) entre les deux lectrodes ;
calculer la diffrence de pH, pHc pour l'chantillon de calibration selon le calcul
suivant :
pHc = (D4 D3) - pHo
o
pHc = la diffrence entre les deux mesures D3 et D4 pour l'chantillon de
calibration moins la diffrence obtenue pour le blanc ;
mlange tampon/solution de rfrence ;
de tampon/solution de rfrence et l'autre de tampon/solution de rfrence/enzyme.
calculer la pente de la droite d'talonnage :
s = Cu/pHc
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o
Cu est la concentration de glucose dans la solution talon exprime en g/L.
Vrifier la validit de l'talonnage en analysant 25 L de solution talon (ML) de
glucose (4.15) en suivant la procdure (7.3). Le rsultat doit tre compris entre
2% de la valeur de rfrence. Dans le cas contraire recommencer la procdure de
calibration.
7.2.2 Niveau haut
ajouter 10 L ( la micropipette 5.9 ou par le prparateur) de solution talon (HL)
de glucose (4.16) dans la chambre de raction ;
suivant :
pHc = (D4 D3) - pHo
o
pHc = la diffrence de pH entre les deux mesures D3 et D4 pour l'chantillon de
s = Cu/pHc
o
Cu est la concentration de glucose dans la solution talon exprime en g/L.
Vrifier la validit de l'talonnage en analysant 10 L de solution talon de glucose
(4.16) en suivant la procdure (7.3). Le rsultat doit tre compris entre 2% de la
valeur de rfrence. Dans le cas contraire recommencer la procdure de calibration.
OIV-MA-AS311-07 : R2006

7.3
Quantification
remplir les compartiments lectrodes (EL1 et EL2) avec le tampon (4.13)

ajouter 10 L (niveau haut ) ou 25 L ( niveau moyen) ( la micropipette 5.9 ou
par le prparateur) d'chantillon dans la chambre de raction ;
remplir les lectrodes EL1 et EL2 avec le mlange tampon + chantillon ;
mlange tampon + chantillon + enzyme ;
calculer la quantit de solut dans l'chantillon selon le calcul suivant :
w = s [(D6 D5) - pHo]
o
w =la quantit de solut dans l'chantillon (en g/L) ;
S est la pente dtermine par la droite de calibration ;
D5 = valeur de la diffrence de pH entre les deux lectrodes remplies avec
l'chantillon/solution de rfrence ;
de tampon/chantillon et l'autre de tampon/chantillon/enzyme.
EXPRESSION DES RESULTATS
Les rsultats sont exprims en g/L de glucose + fructose avec un chiffre significatif
aprs la virgule.
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FIDELITE
Les dtails de l'essai interlaboratoire portant sur la fidlit de la mthode sont

rsums dans l'annexe B.
9.1
Rptabilit
La diffrence absolue entre deux rsultats individuels obtenus sur une matire
identique soumise essai par un oprateur utilisant le mme appareillage, dans
l'intervalle de temps le plus court possible, ne dpassera pas la valeur de
rptabilit r dans 95% des cas.
La valeur est : r = 0,021x + 0,289 o x est la teneur en g/L de glucose + fructose
9.2
Reproductibilit
identique soumise essai dans deux laboratoires, ne dpassera pas la valeur de
reproductibilit R dans 95% des cas.
La valeur est : R = 0,033x + 0,507 o x est la teneur en g/L de glucose + fructose
10
AUTRES CARACTERISTIQUES DE L'ANALYSE
10.1
Limites de dtection et de quantification
10.1.1
limite de dtection
Elle est dtermine partir de 10 sries de trois rptitions d'un blanc analytique et
de la rgression linaire ralise avec les vins de l'essai de fidlit, elle est gale
trois carts types. Dans ce cas la mthode a donn comme rsultat une limite de
dtection
de
0,03 g/L. Des essais par dilutions successives ont confirm cette valeur.
10.1.2
limite de quantification
Elle est dtermine partir de 10 sries de trois rptitions d'un blanc analytique et
de la rgression linaire ralise avec les vins de l'essai de fidlit, elle est gale
dix carts types. Dans ce cas la mthode a donn comme rsultat une limite de
dtection
de
0,10 g/L. Des essais par dilutions successives ont confirm cette valeur. Les
quantifications de vins blancs et rouges ralises par les laboratoires qui ont
particip l'analyse interlaboratoire confirment galement ces chiffres.
OIV-MA-AS311-07 : R2006

10.2
Justesse
La justesse est value partir du taux de recouvrement moyen calcul des vins
surchargs analyss en double aveugle lors de l'essai interlaboratoire (vins A, B, C,
D, F et J). Elle est de 98.9% avec un intervalle de confiance de 0.22%.
11
CONTROLE QUALITE
Des contrles qualit peuvent tre raliss avec des matriaux de rfrence
certifis, des vins dont les caractristiques sont issues d'un consensus ou de vins
surchargs insrs rgulirement dans les sries analytiques et en suivant les cartes
de contrle affrentes.
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Annexe A
Schma de l'appareillage de pH-mtrie diffrentielle
A
S
EL
D
K
EL 1
P1
EL 2
P2
P3
M
B
A : amplificateur diffrentiel ; B : solution de tampon ; C : chambre de mlange ;

D : indicateur ; EL1 et EL 2 lectrodes capillaires ; EL : partie lectronique ; G :
mise la terre ; K : clavier ; M : agitateur magntique ; P : imprimante ; P1 P3 :
pompes pristaltiques ; S : seringue d'injection de l'chantillon et de l'enzyme ; W :
mise l'gout.
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Annexe B
Donnes statistiques obtenues partir des rsultats
des essais interlaboratoire
Conformment l'ISO 5725-2:1994, les paramtres suivants ont t dfinis au
cours d'un essai interlaboratoire. Cet essai a t conduit par le laboratoire du
Comit Interprofessionnel du Vin de Champagne Epernay (France).
Anne de l'essai interlaboratoire : 2005
Nombre de laboratoires : 13 en double aveugle
Nombre d'chantillons : 10
Vin A Vin B Vin C Vin D Vin E Vin F Vin G Vin H Vin I
Vin J
Moyenne en g/L 8,44 13,33 18,43 23,41 28,03 44,88 86,40 93,34 133,38 226,63
Nombre de
13
13
13
13
13
13
13
13
laboratoire
nombre de
laboratoire aprs
limination des 13
13
13
13
13
13
13
13
plus grandes
dispersions
cart type de
0,09 0,13 0,21 0,21 0,29 0,39 0,81 0,85
rptabilit
limite de
0,27 0,38 0,61 0,62 0,86 1,14 2,38 2,51
rptabilit
13
13
13
13
1,19
1,51
3,52
4,45
RSDr, 100%
1,08
0,97 1,13 0,91 1,04 0,86 0,94 0,91
0,89
0,67
HORRAT r
0,26
0,25 0,31 0,26 0,30 0,27 0,32 0,32
0,33
0,47
0,17
0,27 0,37 0,59 0,55 0,45 1,27 1,43
1,74
2,69
0,50
0,79 1,06 1,71 1,60 1,29 3,67 4,13
5,04
7,78
RSDR, 100%
2,05
2,05 1,99 2,54 1,97 1,00 1,47 1,53
1,31
1,19
HORRAT R
0,50
0,54 0,55 0,72 0,58 0,31 0,51 0,53
0,48
0,47
cart type de
reproductibilit
limite de
reproductibilit
OIV-MA-AS311-07 : R2006
10

Types d'chantillons :
Vin A : vin blanc contenant naturellement du sucre, surcharg de 2,50 g/L
glucose et de 2,50 g/L de fructose ;
Vin B : vin blanc contenant naturellement du sucre (vin A), surcharg de 5,00 g/L
glucose et de 50 g/L de fructose ;
Vin C : vin blanc contenant naturellement du sucre (vin A), surcharg de 7,50 g/L
Vin D : vin blanc contenant naturellement du sucre (vin A), surcharg de 10,0 g/L
Vin E : vin aromatis;
Vin F : vin blanc contenant naturellement moins de 0,4 g/L de sucre, surcharg de
22,50 g/L glucose et de 22,50 g/L de fructose ;
Vin G : vin rouge naturellement doux;
Vin H : vin blanc doux ;
Vin I : mistelle ;
Vin J : vin blanc contenant naturellement moins de 0,4 g/L de sucre, surcharg de
115,00 g/L glucose et de 115,00 g/L de fructose ;
OIV-MA-AS311-07 : R2006
11

BIBLIOGRAPHIE
LUZZANA M., PERELLA M. et ROSSI-BERNARDI L (1971) : Anal. Biochem,
43, 556-563.
LUZZANA M., AGNELLINI D., CREMONESI P. et CARAMENTI G. (2001) :
Enzymatic reactions for the determination of sugars in food samples using the
differential pH technique. Analyst, 126, 2149 2152.
LUZZANA M., LARCHER R., MARCHITTI C. V. et BERTOLDI D. (2003) :
Quantificazione mediante pH-metria differenziale dell'urea negli spumanti metodo
classico.in "Spumante tradizionale e classico nel terzo millennio" 27-28 giugno
2003, Istituti Agrario di San Mechele.
MOSCA A., DOSSI G., LUZZANA M., ROSSI-BERNARDI L., FRIAUF W. S.,
BERGER R.L., HOPKINS H. P. et CAREY V (1981) : Improved apparatus for the
differential measurment of pH : application to the measurment of glucose. Anal.
Biochem., 112, 287 294.
MOIO L., GAMBUTI A., Di MARZIO L. et PIOMBINO P. (2001) : Differential
pHmeter determination of residual sugars in wine. Am. J. Enol. Vitic, 52(3),
271 274.
TUSSEAU D., FENEUIL A., ROUCHAUSSE J.-M. et VAN LAER S. (2004) :
Mesure de diffrents paramtres d'intert oenologique par pHmtrie diffrentielle.
F.V. O.I.V. n 1199, 5 pages.
OIV-MA-AS311-07 : R2006
12

Glucose, fructose et saccharose par pH-mtrie diffrentielle
Mthode Type IV
Dtermination globale du glucose, du fructose et du saccharose

des mouts et des vins par pH-mtrie diffrentielle
1.
PORTEE ET CHAMP D'APPLICATION
Cette mthode est applicable l'analyse globale du glucose, du fructose et du

saccharose dans les mots et les vins entre 0 et 270 g/L.
Cette quantification se diffrencie de celle du glucose et du fructose par pHmtrie
diffrentielle et ne peux pas lui tre substitue.
2.
PRINCIPE
La dtermination par pH-mtrie diffrentielle du glucose, du fructose et du

saccharose consiste en une hydrolyse pralable du saccharose par de l'invertase,
suivie d'une phosphorylation du glucose et du fructose par de l'hexokinase. Les
ions H+ gnrs de manire stchiomtrique par rapport aux quantits de glucose
et de fructose sont ensuite quantifis.
3.
REACTIONS
Le saccharose ventuellement prsent est hydrolys par de l'invertase (EC 3.2.1.26)

invertase
saccharose
glucose + fructose
Le glucose et le fructose initialement prsents ou conscutifs l'action de

l'invertase sont phosphoryls par l'adnosine triphosphate (ATP) cours d'une
raction enzymatique catalyse par l'hexokinase (HK) (EC 2.7.1.1)
glucose + ATP
fructose + ATP
4.
HK
HK
glucose-6-phosphate + ADP + H+
fructose-6-phosphate + ADP+ H+
REACTIFS
OIV-MA-AS311-08 : R2006

4.1
4.2
4.3
4.4
4.5
4.6
4.7
4.8
4.9
4.10
4.11
4.12
4.13
Eau dminralise (18 M) ou bidistille

2-Amino-2-(hydroxymthyl)propane-1,3-diol (TRIS) puret 99%
Adnosine triphosphate disodique (ATP, 2Na) puret 99%
Phosphate trisodique douze molcules d'eau (Na3PO4.12H2O) puret 99%
Hydroxyde de sodium (NaOH) puret 98%
Chlorure de magnsium six molcules d'eau (MgCl2.6H2O) puret 99%
Triton X 100
Chlorure de potassium (KCl) puret 99%
2-Bromo-2-nitropropane-1,3-diol (Bronopol) (C3H6BrNO4)
Invertase (EC 3.2.1.26) 1 mg 500 U (ex Sigma ref I-4504)
Hexokinase (EC 2.7.1.1) 1 mg 145 U (ex Hofmann La Roche,
Mannheim, Allemagne ref HEXO-70-1351)
Glycrol puret 98%
Saccharose puret 99%
4.14
Tampon de raction pH 8,0 commercial (ex : DIFFCHAMB GEN 644)
ou prpar selon la mthode suivante :
dans une fiole jauge de 100 mL (5.2) verser approximativement 70 mL (5.3) d'eau
(4.1), mettre en agitation continue (5.5). Ajouter 0,242 g 0,001 g (5.4) de TRIS
(4.2), 0,787 g 0,001 g (5.4) d'ATP (4.3), 0,494 g 0,001 g (5.4) de phosphate de
sodium (4.4), 0,009 mg 0,001 g (5.4) d'hydroxyde de sodium (4.5), 0,203 g
0,001 g (5.4) de chlorure de magnsium (4.6), 2,000 0,001 g (5.4) de Triton X
100 (4.7), 0,820 g 0,001 g (5.4) de chlorure de potassium (4.8) et 0,010 0,001 g
(5.4) de bronopol. Ajuster au trait de jauge avec de l'eau (4.1). Le pH final doit
tre de 8,0 0,1 (5.6),.sinon l'ajuster avec de l'hydroxyde de sodium ou de l'acide
chlorhydrique. Le tampon ainsi prpar est stable pendant deux mois 4C.
4.15
Solution enzymatique commerciale ou prpare selon la mthode suivante
: l'aide d'une pipette jauge (5.7) disposer 5 mL de glycrol (4.12) dans une fiole
jauge de 10 mL, ajuster au trait de jauge avec de l'eau (4.1) et homogniser.
Dissoudre 300 mg 1 mg (5.4) d'invertase (4.10) 10 mg 1 mg (5.4) d'hexokinase
(4.11) dans 3 mL de la solution de glycrol. L'activit de la solution enzymatique
doit tre de 50 000 U 100 U par mL pour l'invertase et de 480 U 50 U par mL
pour l'hexokinase. La solution enzymatique est stable pendant 6 mois 4C.
4.16.
PREPARATION DE LA SOLUTION D'ETALONNAGE
Placer 17,100 g 0,01 g (5.4) de saccharose (4.13) (pralablement dessch 12

heures 40 C jusqu' poids constant), 0,745 g 0,001 g (5.4) de chlorure de
potassium (4.8) et 0,010 g 0,001 g (5.4) de Bronopol dans une fiole jauge de
OIV-MA-AS311-08 : R2006

100 mL (5.2). Ajouter de l'eau (4.1). Bien homogniser (5.5). Ajuster au trait de
jauge avec de l'eau (4.1) aprs avoir enlever le barreau magntique. La
concentration finale est de 171 g/L de saccharose. La solution est stable 6 mois
4C.
5.
APPAREILLAGE
5.1
Appareil de pH-mtrie diffrentielle
(EUROCHEM CL 10 plus, Microlab EFA ou quivalent) voir annexe A
5.2
5.3
Eprouvette gradue pied de 100 mL
5.4
Balance de prcision permettant de peser au mg prs
5.5
Agitateur magntique et barreau magntique en tflon
5.6
pH-mtre
5.7
Pipettes jauges de 3mL, 5 mL classe A
5.8
5.9
Pipettes automatiques piston de 25 et 50 L
6.
PREPARATION DES ECHANTILLONS
Les chantillons ne doivent pas tre trop chargs de matires en suspension, Dans
le cas contraire, les centrifuger ou les filtrer. Les vins mousseux doivent tre
dgazs.
7.
MODE OPERATOIRE
L'oprateur doit respecter les instructions d'utilisation de l'appareillage (5.1). Avant

toute utilisation, l'instrument doit tre stabilis en temprature. Les circuits doivent
tre rincs avec la solution de tampon (4.14) aprs nettoyage ventuel.
7.1 - Dtermination du blanc (dtermination du signal de l'enzyme)
remplir les compartiments lectrodes (EL1 et EL2) du pH-mtre diffrentiel (5.1)
avec le tampon (4.14), la diffrence de potentiel entre les deux lectrodes (D1) doit
tre comprise entre 150 mpH
ajouter 32 L de solution enzymatique (4.15) dans la chambre de raction ( la
micropipette 5.9 ou par le prparateur) et remplir l'lectrode EL2 ;
calculer la diffrence de pH, pHo pour le blanc selon le calcul suivant :
pHo = D2 D1
o
OIV-MA-AS311-08 : R2006


tampon ;
de tampon et l'autre de tampon et d'enzyme.
La valeur de pHo permet de vrifier l'tat des lectrodes en cours de dosage ainsi
que leur drive ventuelle avec le temps; elle doit tre comprise entre 30 et 0 mpH
et 1,5 mpH entre deux mesures conscutives. Dans le cas contraire, vrifier la
qualit du tampon pH et la propret du circuit hydraulique et des lectrodes,
nettoyer si ncessaire puis refaire le blanc.
7.2 Etalonnage
ajouter 10 L ( la micropipette 5.9 ou par le prparateur) de solution talon de
saccharose (5) dans la chambre de raction ;
suivant :
pHc = (D4 D3) - pHo
o
pHc = la diffrence de pH entre les deux mesures D3 et D4 pour l'chantillon de
s = Cu/pHc
o
Cu est la concentration de saccharose dans la solution talon exprime en g/L.
OIV-MA-AS311-08 : R2006

Vrifier la validit de l'talonnage en analysant 10 L de solution talon de

saccharose (5) en suivant la procdure (7.3). Le rsultat doit tre compris entre
2% de la valeur de rfrence. Dans le cas contraire recommencer la procdure de
calibration.
7.3 Quantification
remplir les compartiments lectrodes (EL1 et EL2) avec le tampon (4.14)
ajouter 10 L ( la micropipette 5.9 ou par le prparateur) d'chantillon dans la
chambre de raction ;
remplir les lectrodes EL1 et EL2 avec le mlange tampon + chantillon ;
mlange tampon + chantillon + enzyme ;
calculer la quantit de solut dans l'chantillon selon le calcul suivant :
w = s [(D6 D5) - pHo]
o
w =la quantit de solut dans l'chantillon (en g/L) ;
S est la pente dtermine par la droite de calibration ;
D5 = valeur de la diffrence de pH entre les deux lectrodes remplies avec
l'chantillon/solution de rfrence ;
de tampon/chantillon et l'autre de tampon/chantillon/enzyme.
OIV-MA-AS311-08 : R2006

EXPRESSION DES RESULTATS
Les rsultats sont exprims en g/L de glucose inverti avec un chiffre significatif
aprs la virgule.
9.
CARACTERISTIQUES DE L'ANALYSE
A cause de l'hydrolyse du saccharose dans les mots et les vins il n'a pas t
possible d'organiser une analyse interlaboratoire selon le protocole de l'OIV.
L'tude intra-laboratoire de cette mthode montre pour le saccharose une linarit
entre 0 et 250 g/L, une limite de dtection de 0,2 g/L, une limite de quantification
de 0,6 g/L, une rptabilit de 0,0837x 0,0249 g/L et une reproductibilit de
0,0935x 0,073 g/L (o x est la teneur en saccharose).
10
CONTROLE QUALITE
Des contrles qualit peuvent tre raliss avec des matriaux de rfrence
certifis, des vins dont les caractristiques sont issues d'un consensus ou de vins
surchargs insrs rgulirement dans les sries analytiques et en suivant les cartes
de contrle affrentes.
OIV-MA-AS311-08 : R2006

Annexe A
Schma de l'appareillage de pH-mtrie diffrentielle
A
S
EL
D
K
EL 1
P1
EL 2
P2
P3
M
B
A : amplificateur diffrentiel ; B : solution de tampon ; C : chambre de mlange; D

: indicateur ; EL1 et EL 2 lectrodes capillaires ; EL : partie lectronique ; G : mise
la terre ; K : clavier ; M : agitateur magntique ; P : imprimante ; P1 P3 :
pompes pristaltiques ; S : seringue d'injection de l'chantillon et de l'enzyme ; W :
mise l'gout.
OIV-MA-AS311-08 : R2006

Annexe B
BIBLIOGRAPHIE
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method for measurement of small pH changes in biological systems. Anal.
Biochem, 43, 556-563.
LUZZANA M., AGNELLINI D., CREMONESI P. et CARAMENTI G. (2001) :
Enzymatic reactions for the determination of sugars in food samples using the
differential pH technique. Analyst, 126, 2149 2152.
LUZZANA M., LARCHER R., MARCHITTI C. V. et BERTOLDI D. (2003) :
Quantificazione mediante pH-metria differenziale dell'urea negli spumanti metodo
classico.in "Spumante tradizionale e classico nel terzo millennio" 27-28 giugno
2003, Instituti Agrario di San Mechele.
MOIO L., GAMBUTI A., Di MARZIO L. et PIOMBINO P. (2001) : Differential
pHmeter determination of residual sugars in wine. Am. J. Enol. Vitic, 52(3), 271
274.
MOSCA A., DOSSI G., LUZZANA M., ROSSI-BERNARDI L., FRIAUF W. S.,
BERGER R.L., HOPKINS H. P. et CAREY V (1981) : Improved apparatus for the
differential measurment of pH : application to the measurment of glucose. Anal.
Biochem., 112, 287 294.
TUSSEAU D., FENEUIL A., ROUCHAUSSE J.-M. et VAN LAER S. (2004) :
Mesure de diffrents paramtres d'intert oenologique par pHmtrie diffrentielle.
F.V. O.I.V. n 1199, 5 pages.
OIV-MA-AS311-08 : R2006
Titre alcoomtrique volumique Mthodes Type I
Mthode Type I
Titre alcoomtrique volumique
1. DEFINITION
Le titre alcoomtrique volumique est gal au nombre de litres d'thanol contenu
dans 100 litres de vin, ces volumes tant tous deux mesurs la temprature de
20C. Son symbole est % vol.
Remarque: Les homologues de l'thanol, ainsi que l'thanol et les homologues de
l'thanol engags dans des esters, sont compris dans le titre alcoomtrique, car ils
se retrouvent dans le distillat.
2. PRINCIPE DES METHODES

2.1. Distillation du vin alcalinis par une suspension d'hydroxyde de calcium.
Dtermination du titre alcoomtrique sur le distillat.
2.2. Mthode de Type I:
A. Dtermination du titre alcoomtrique du distillat par pycnomtrie.
B. Mesure du titre alcoomtrique volumique des vins par densimtrie
lectronique utilisant un rsonateur de flexion.
C. Mesure du titre alcoomtrique volumique des vins par densimtrie utilisant
la balance hydrostatique
OIV-MA-AS312-01A : R2009
3. OBTENTION DU DISTILLAT
3.1. Ractifs et appareillage
3.1.1. Appareil de distillation comportant:
- un ballon d'un litre de capacit, rodage normalis,
- une colonne rectificatrice de 20 cm de hauteur environ ou tout dispositif
destin empcher le primage,
- une source de chaleur (toute pyrognation des matires extractives doit tre
vite par un dispositif appropri),
- un rfrigrant termin par un tube effil conduisant le distillat dans le fond de
la fiole jauge rceptrice contenant quelques millilitres d'eau.
3.1.2. Appareil entranement par la vapeur d'eau comportant:
- un gnrateur de vapeur d'eau;
- un barboteur;
- une colonne rectificatrice;
- un rfrigrant.
Tout modle d'appareil distillation ou tout appareil entranement la vapeur
d'eau peut tre utilis condition de rpondre au test suivant:
Distiller 5 fois successives un mlange hydroalcoolique titrant 10 % vol. Le
distillat doit prsenter un titre alcoomtrique d'au moins 9,9 % vol. aprs la
cinquime distillation, c'est--dire qu'il ne doit pas se produire de perte d'alcool
suprieure 0,02 % vol. au cours d'une distillation.
3.2. Suspension d'hydroxyde de calcium 2 M
Obtenue en versant avec prcaution 1 l deau chaude (60-70C) sur 120 g de
chaux vive CaO.
Les vins jeunes ou mousseux sont pralablement dbarrasss de la plus grande
quantit de leur dioxyde de carbone par agitation de 250 300 ml de vin dans
un flacon de 500 ml.
3.4. Mode opratoire
Prlever l'aide d'une fiole jauge un volume de vin de 200 ml. Noter la
temprature du vin.
Le verser dans le ballon de l'appareil distiller ou dans le barboteur de
l'appareil entranement la vapeur d'eau. Rincer la fiole jauge quatre
reprises avec 5 ml d'eau que l'on ajoute dans le ballon ou dans le barboteur.
OIV-MA-AS312-01A : R2009
Ajouter 10 ml d'hydroxyde de calcium 2 M et quelques fragments d'une matire

poreuse inerte (pierre ponce, etc./) dans le cas de la distillation.
Recueillir le distillat dans la fiole jauge de 200 ml qui a servi mesurer le vin.
Recueillir un volume gal aux trois quarts environ du volume initial dans le cas
de la distillation et recueillir 198-199 ml de distillat dans le cas de
l'entranement la vapeur d'eau.
Complter 200 ml avec de l'eau distille, le distillat tant une temprature
identique la temprature initiale 2 C prs.
Mlanger avec prcaution, par un mouvement circulaire.
Remarque : Dans le cas de vins particulirement chargs en ions ammoniacaux,
redistiller ventuellement le distillat dans les conditions dcrites ci-dessus en
remplaant la suspension d'hydroxyde de calcium par 1 ml d'acide sulfurique
10 pour 100 (v/v).
Prcautions de scurit
Respecter les consignes de scurit relatives lutilisation des appareils de
distillation, la manipulation des solutions hydroalcooliques et des produits de
nettoyage.
OIV-MA-AS312-01A : R2009
4. A. Dtermination du titre alcoomtrique

du distillat par pycnomtrie.
(Method A2/1978 Resolution 377/2009)
1. Appareillage
Utiliser le pycnomtre talonn comme il est indiqu au chapitre Masse
volumique.
2. Mode opratoire
Procder la dtermination de la masse volumique apparente t C du distillat
comme il est indiqu au chapitre 1 Masse volumique en 4.3.1 et 4.3.2; soit t.
cette masse volumique.
3.1. Mode de calcul
Exprimer le titre alcoomtrique 20 C au moyen de la table I. Sur la table,
chercher sur la ligne horizontale correspondant la temprature T (exprime en
nombre entier), immdiatement infrieure tC, la plus petite masse volumique
suprieure t.. Utiliser la diffrence tabulaire lue au-dessous de cette masse
volumique pour calculer la masse volumique cette temprature T.
Sur la ligne de cette temprature T chercher la masse volumique '
immdiatement suprieure et calculer la diffrence entre ces deux masses
volumiques et '. Cette diffrence est divise par la diffrence tabulaire lue
la droite de la masse volumique '. Le quotient donne la partie dcimale du titre
alcoomtrique, tandis que la partie entire de ce titre est indique au sommet de
la colonne dans laquelle se trouve la masse volumique '.
Un exemple de calcul du titre alcoomtrique est donn dans l'annexe l ce
chapitre.
Remarque : Cette correction de temprature a t mise sur programme et peut
tre ventuellement effectue automatiquement.
3.2. Rptabilit r
r = 0,10 % vol.
3.3. Reproductibilit (R)
R = 0,19 % vol.
OIV-MA-AS312-01A : R2009
ANNEXE I
Exemple de calcul du titre alcoomtrique dun vin
I Pycnomtrie sur balance deux plateaux
Les constantes du pycnomtre ont t dtermines et calcules comme il est
indiqu au chapitre Masse volumique et densit relative lAnnexe I.
Calculs
Exemple numrique
1 Pese du pycnomtre plein de distillat :

Tare = pycnomtre + distillat tC + p"
p + m - p" = masse du distillat tC
tC
= 18,90C
tC corrig = 18,70C
p"
= 2,8074 g
{ 105,0698 2,8074= 102,2624 g
Masse volumique apparente tC:
p m p"
volume du pycnomtre 20C
102.2624
18.7 104.0299 0.983076
2. Calcul du titre alcoomtrique:

Sur la ligne 18C de la table des
masses volumiques apparente, la
plus petite masse suprieure la
masse observe 0,983076 est
0,98398 dans la colonne 11%.
Se reporter la table des masses
volumiques apparentes des mlanges
hydroalcooliques diffrentes tempratures, comme il est Indiqu plus haut
La masse volumique 18C est :

(98307.6, + 0,7 x 22) 10-5=0,98323
0,98398 0,98323 = 0,00075
La partie dcimale du degr
alcoolique est 75/114 = 0,65
Le titre alcoomtrique est : 11,65%
vol
II Pycnomtrie sur balance monoplateau

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Les constantes du pycnomtre ont t dtermines et calcules comme il est

indiqu au chapitre Masse volumique et densit relative, lAnnexe I.
Calculs
1. Pese du pycnomtre plein de distillat :
Pese du flacon tare au moment de la
dtermination
: T1 = 171,9178
Pycnomtre plein de distillat 20,50C
: P2 = 167,8438
Variation de la pousse de lair
: dT = 171,9178 171,9160
= + 0,0018
Masse du distillat 20,50C:
: Lt = 167,8438 (67,6695 + 0,0018)

= 100,1725
Masse volumique apparente du distillat
: 20.50
100.1725
0.983825
101.8194
2 Calcul du titre alcoomtrique :

petite masse suprieure la masse
observe 0,983825 est 0,98471 dans
la colonne 10%.
Se reporter la table des masses
volumiques apparentes des mlanges
hydroalcooliques diffrentes tempratures, comme il est indiqu plus
haut :
La masse volumique 20C est :

(98382,5 + 0,5 x 24) 10-5 = 0,983945
0,98471 0,983945 = 0,000765
La partie dcimale du titre alcoomtrique est:
76,5 / 119 = 0,64
Le titre alcoomtrique est : 10,64% vol.
Sur la ligne 20C de la table des

masses volumiques apparentes, la plus
OIV-MA-AS312-01A : 2009

ANNEXE II
Formule permettant de calculer les tables alcoomtrique

des mlanges dalcool thylique et deau
La masse volumique "", exprime en kilogrammes par mtre cube (kg/m) d'un
mlange d'alcool thylique et d'eau la temprature t, exprime en degrs Celsius,
est donne par la formule suivante en fonction:
- du titre massique p exprim par un nombre dcimal ; *1
- de la temprature t exprime en degrs Celsius (E. I. P. T. 68);
- des coefficients numriques ci-aprs:
La formule est valable pour les tempratures comprises entre 20 C et +40 C.
A A pk 1 B t 20C
12
k 2
i 1
k 1
k 1
kt 20C
C p
i, k
= 5
m1 = 11
m2 = 10
m3 = 9
m4 = 4
m5 = 2
Exemple : pour un titre massique de 12%, p = 0,12
OIV-MA-AS312-01A : 2009

Coefficients numriques de la formule

k
Ak
Bk
kg/m3
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
9,982 012 300

1,929 769 495
3,891 238 958
1,668 103 923
1,352 215 441
8,829 278 388
3,062 874 042
6,138 381 234
7,470 172 998
5,478 461 354
2,234 460 334
3,903 285 426
102
102
102
103
104
104
105
105
105
105
105
104
2,061 851 3 10-1 kg/(m3 oC)

5,268 254 2 10-3 kg/(m3 oC2)
3,613 001 3 10-5 kg/(m3 oC3)
3,895 770 2 10-7 kg/(m3 oC4)
7,169 354 0 10-9 kg/(m3 oC5)
9,973 923 1 10-11 kg/(m3 oC6)
Cl,k
C2,k
kg/(m3 oC)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
k g/(m3 oC2)
1,693 443 461530 087

1,046 914 743 455 169
7,196 353 469 546 523
7,047 478 054 272 792
3,924 090 430 035 045
1,210 164 659 068 747
2,248 646 550 400 788
2,605 562 982 188 164
1,852 373 922 069 467
7,420 201433 430 137
1,285 617 841 998 974
10-1
101
101
102
103
104
104
104
104
103
103
C3,k
C4,k
3 o
kg/(m C3)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
C5,k
kg/(m3 oC5)
kg/(m C4)
-4
6,802 995 733 503 803 10

1,876 837 790 289 664 10-2
2,002 561 813734 156 10-1
1,022 992 966 719 220
2,895 696 483 903 638
4,810 060 584 300 675
4,672 147 440 794 683
2,458 043 105 903 461
5,411 227 621 436 812 10-1
4,075 376 675 622 027 10

8,763 058 573 471 110 106
6,515 031 360 099 368 10-6
1,515 784 836 987 210 10-
OIV-MA-AS312-01A : 2009
1, 193 013 005 057 010 102,517 399 633 803 46 1 10-1
2,170 575 700 536 993
1,353 034 988 843 029 101
5,029 988 758 547 014
1
1,096 355 666 577 570 102
1,422 753 946 421 155
2
1,080 435 942 856 230 102
4,414 153 236 817 392
1
7,442 971 530 188 783
2,788 074 354 782 40910-8

1,345 612 883493 354 108

4. B. Mesure du titre alcoomtrique volumique des vins par

densimtrie lectronique utilisant un rsonateur de flexion
(Rsolution Oeno 8/2000 377/2009)
1. Mthode de mesure
1.1. Titre et introduction
Le Titre Alcoomtrique Volumique (TAV) des vins doit tre mesur avant leur
commercialisation notamment pour se conformer aux rgles dtiquetage.
Le Titre Alcoomtrique Volumique est gal au nombre de litres dthanol contenus
20 C. Son symbole est % vol. .
1.2. Prcautions de scurit
nettoyage.
1.3. Objet et domaine dapplication
La mthode de mesure dcrite est la densimtrie lectronique utilisant un
rsonateur de flexion.
En rfrence aux dispositions rglementaires en vigueur, la temprature dessai est
arrte 20 C.
1.4. Principe et dfinitions
Le principe de la mthode consiste premirement distiller le vin de volume
volume. La mthode de distillation est dcrite dans le prsent Recueil. Cette
distillation permet dliminer les substances non volatiles. Les homologues de
lthanol, ainsi que lthanol et les homologues de lthanol engags dans les
esters, sont compris dans le titre alcoomtrique, car ils se retrouvent dans le
distillat.
Dans un deuxime temps on mesure la masse volumique du distillat obtenu. La
masse volumique dun liquide une temprature donne est gale au quotient de
sa masse sur son volume :
p = m / V, pour un vin, elle sexprime g/ml
Pour une solution hydroalcoolique telle quun distillat, connaissant la temprature,
des tables permettent de faire correspondre une masse volumique un titre
OIV-MA-AS312-01A : 2009

alcoomtrique (OIV, 1990). Ce titre alcoomtrique correspond celui du vin

(distillation de volume volume).
Dans la prsente mthode la masse volumique du distillat est mesure par
densimtrie lectronique utilisant un rsonateur de flexion. Le principe consiste
mesurer la priode doscillation dun tube contenant lchantillon soumis une
excitation lectromagntique. La masse volumique est alors calcule, elle est lie
la priode doscillation par la formule suivante :
C M
p T2 2
4 V V
(1)
p = masse volumique de lchantillon

T = priode de vibration induite
M = masse du tube vide
C = constante de rappel
V = volume de lchantillon en vibration
Cette relation est de la forme, p = A T2 B (2), il existe donc une relation linaire
entre la masse volumique et la priode leve au carr. Les constantes A et B sont
spcifiques de chaque oscillateur et sont estimes en mesurant la priode de fluides
de masse volumique connue.
1.5. Ractifs et produits
1.5.1 Fluides de rfrence
Deux fluides de rfrence servent ajuster le densimtre. Les masses volumiques
des fluides de rfrence doivent encadrer celles des distillats mesurer. Un cart de
masse volumique entre les fluides de rfrence suprieur 0,01000 g/ml est
recommand. Leur masse volumique doit tre connue avec une incertitude
infrieure +/- 0,00005 g/ml, pour une temprature de 20,00 +/- 0,05 C.
Pour la mesure du TAV des vins par densimtre lectronique les fluides de
rfrence sont :
- lair sec (non pollu),
- leau bi-distille ou de puret analytique quivalente,
- des solutions hydroalcooliques de masse volumique dtermine par
pycnomtrie (mthode de rfrence),
- des solutions raccordes aux talons nationaux de viscosit infrieure 2
mm2/s.
1.5.2 Produits de nettoyage et de schage
OIV-MA-AS312-01A : 2009
10

- dtergents, acides ,
- solvants organiques : thanol 96% Vol., actone pure
1.6. Appareillage
1.6.1 Densimtre lectronique rsonateur de flexion
Le densimtre lectronique comporte les lments suivants :
- une cellule de mesure comportant le tube de mesure et une enceinte
thermostate,
- un systme de mise en oscillation du tube et de mesure de la priode doscillation,
- une horloge,
- un afficheur numrique et ventuellement un calculateur.
Le densimtre est plac sur un support parfaitement stable et est isol de toutes
vibrations.
1.6.2 Contrle de la temprature de la cellule de mesure
Le tube de mesure est situ dans une enceinte thermostate. La stabilit de la
temprature doit tre meilleure que +/- 0,02 C.
Lorsque le densimtre le permet, il est ncessaire de contrler la temprature de la
cellule de mesure car celle-ci influence fortement les rsultats des dterminations.
La masse volumique dune solution hydroalcoolique de TAV 10 % Vol., est de
0,98471 g/ml 20C et de 0,98447 g/ml 21C soit un cart de 0,00024 g/ml.
La temprature dessai est arrte 20C. La mesure de temprature au niveau de
la cellule est ralise avec un thermomtre de rsolution de moins de 0,01C et
raccord aux talons nationaux. Il doit garantir une mesure de temprature
dincertitude infrieure +/- 0,07C.
1.6.3 Calibration de lappareil
Lappareil doit tre calibr avant sa premire utilisation, puis tous les six mois ou
si la vrification ne donne pas satisfaction. Lobjectif est dutiliser deux fluides de
rfrence pour calculer les constantes A et B (cf. (2)). Pour la ralisation pratique
de la calibration se rfrer au mode demploi de lappareil. En principe cette
calibration est effectue avec de lair sec (tenir compte de la pression
atmosphrique) et de leau trs pure (bi-distille et/ou microfiltre de rsistivit
trs leve, par exemple > 18 M
1.6.4 Vrification de la calibration
Pour vrifier la calibration on mesure la masse volumique de fluides de rfrence.
OIV-MA-AS312-01A : 2009
11

- Chaque jour, une vrification de la masse volumique de lair est ralise. Un

cart entre la masse volumique thorique et celle observe suprieur
0,00008 g/ml peut indiquer que le tube est encrass. Il faut alors le nettoyer.
Aprs nettoyage on vrifie nouveau la masse volumique de lair, si cette
vrification nest pas concluante il faut ajuster lappareil.
- On vrifie galement la masse volumique de leau, si lcart entre la masse
volumique thorique et celle observe est suprieur 0,00008 g/ml, on ajuste
lappareil.
- Si la vrification de la temprature de la cellule est difficile il est
possible de vrifier directement la masse volumique dune solution
hydroalcoolique de TAV comparable ceux des distillats analyss.
1.6.5 Contrle
Lorsque la diffrence entre la masse volumique thorique d'une solution de rfrence
(connue avec une incertitude de +/- 0,00005 g/ml) et la mesure est suprieure
0,00008 g/ml il faut vrifier la temprature de la cellule.
1.7. Echantillonnage et prparation des chantillons
(cf. Recueil des mthodes internationales des vins et des mots, AS312-01TAVPYC, Obtention du distillat)
1.8. Mode opratoire
Aprs obtention du distillat, (OIV, 1990) on mesure sa masse volumique ou son
TAV par densimtrie.
Loprateur sassure de la stabilit de la temprature de la cellule de mesure. Le
distillat dans la cellule du densimtre ne doit pas contenir de bulles dair et doit tre
homogne. Si lon dispose dun systme dclairage qui permet de vrifier
labsence de bulles, lteindre rapidement aprs la vrification car la chaleur
gnre par la lampe influe sur la temprature de mesure.
Si lappareil ne donne que la priode on calcule la masse volumique grce aux
constantes A et B (cf. A.4 c). Si lappareil ne donne pas directement le TAV,
connaissant la masse volumique on obtient ce TAV laide des tables (OIV, 1990).
Le titre alcoomtrique volumique du vin est celui obtenu pour le distillat. Il est
exprim en % vol. .
Si les conditions de temprature ne sont pas respectes, il est ncessaire de raliser
une correction pour lexprimer 20C. Le rsultat est donn avec deux dcimales.
OIV-MA-AS312-01A : 2009
12

1.10. Remarques
Le volume introduit dans la cellule doit tre suffisamment important afin dviter
une ventuelle contamination provoque par lchantillon prcdent. Il est donc
ncessaire de raliser au moins deux dterminations. Si celles-ci ne donnent pas des
rsultats inclus dans la limite de rptabilit, une troisime dtermination est
ncessaire. Gnralement les rsultats des deux dernires dterminations sont
homognes et on limine la premire valeur.
1.11 Fidlit
Pour des chantillons de TAV compris entre 4 et 18 % Vol.
Rptabilit (r) = 0,067 (% vol.),
Reproductibilit (R) = 0,0454 + 0,0105 x TAV.
2 Essai interlaboratoires. Fidlit et exactitude sur ajout

2.1. Echantillons
Les chantillons utiliss lors de ltude collaborative sont dcrits dans le tableau 1.
Tableau 1 : Echantillons de ltude collaborative
Num
C0
V0
V1
V2
V3
P0
Nature
Cidre (filtr sur membrane pour enlever le CO2)

Vin filtr
Vin filtr puis dop
Vin filtr puis dop
Vin filtr puis dop
Vin de liqueur
TAV approximatif (% vol.)
5
10
11
12
13
16
Tous les chantillons sont homogniss avant de remplir les bouteilles envoyes
aux participants. Pour le vin, 40 litres sont homogniss avant envoi et ralisation
des ajouts.
Pour les ajouts, dans une fiole jauge de 5 litres on verse lthanol absolu puis on
complte au trait de jauge avec le vin filtr. Cette opration est rpte deux fois.
Les volumes dthanol sont respectivement de 50, 100 et 150 ml pour les
chantillons V1, V2 et V3.
OIV-MA-AS312-01A : 2009
13

2.2. Laboratoires participants

Les laboratoires participants ltude collaborative sont dcrits dans le tableau 2.
Laboratoire
ALKO Group LTD
Bndictine
C.P.
Ville
Personne contacter
FIN-00101 Helsinki
76400
Monsieur Lehtonen
Fcamp
Madame Pillon
Casanis
18881
Gemenos
Madame Cozon
CIVC
51200
Epernay
Monsieur Tusseau
Cointreau
49181
St Barthlmy d'Anjou
Madame Guerin
Courvoisier
16200
Jarnac
Monsieur Lavergne
Hennessy
16100
Cognac
Monsieur Calvo
IDAC
44120
Vertou
Madame Mars
Laboratoire Gendrot
33000
Bordeaux
Madame Gubbiotti
Martell
16100
Cognac
Monsieur Barboteau
Ricard
94320
Thiais
Monsieur Boulanger
SOEC Martin Vialatte
51319
Epernay
Madame Bertemes
Afin de ne pas introduire de biais mthodologique, les rsultats de la Station

Viticole du Bureau National Interprofessionnel du Cognac (organisatrice de ltude
collaborative) ne sont pas pris en compte.
2.3. Analyses
Les produits C0 et P0 sont distills deux fois, les produits V0, V1, V2 et V3 trois
fois. Pour chaque distillat trois dterminations du TAV, reportes dans le tableau
de rsultats, sont ralises.
2.4. Rsultats
La deuxime dtermination des trois ralises est retenue pour ltude de la fidlit
(tableau 3).
Tableau 3 : Rsultats (deuxime dtermination par distillat) (% vol.)
Laboratoire
1
C0
6,020
5,970
6,040
6,040
V0
9,500
9,470
9,450
9,500
9,500
9,510
OIV-MA-AS312-01A : 2009
V1
10,390
10,380
10,340
10,990
10,390
10,400
V2
11,290
11,260
11,260
11,270
11,280
11,290
V3
12,100
12,150
12,150
12,210
12,210
12,200
P0
17,080
17,080
17,050
17,050
14

5,960
5,910
6,020
6,020
5,950
5,950
6,016
6,031
5,730
5,730
5,990
6,000
6,031
6,019
10
6,030
6,020
11
6,020
6,000
9,460
9,460
9,450
9,470
9,450
9,450
9,350
9,430
9,430
9,513
9,513
9,505
9,350
9,430
9,460
9,400
9,440
9,440
9,508
9,478
9,509
9,500
9,510
9,510
9,480
9,470
9,490
OIV-MA-AS312-01A : 2009
10,350
10,360
10,340
10,310
10,350
10,330
10,250
10,250
10,250
10,370
10,336
10,386
10,230
10,220
10,220
10,340
10,320
10,360
10,428
10,406
10,411
10,380
10,380
10,380
10,400
10,390
10,370
11,280
11,280
11,260
11,250
11,250
11,210
11,300
11,300
11,300
11,275
11,266
11,275
11,440
11,090
11,080
11,160
11,150
11,210
11,289
11,293
11,297
11,250
11,250
11,250
11,260
11,260
11,240
12,170
12,150
12,170
12,160
12,120
12,130
12,050
12,050
12,050
12,222
12,222
12,220
12,080
12,030
11,930
12,110
12,090
12,090
12,180
12,215
12,215
12,150
12,150
12,160
12,150
12,140
12,160
17,190
17,200
16,940
17,070
17,000
17,000
17,120
17,194
17,010
16,920
17,080
17,110
17,089
17,084
17,130
17,100
17,040
17,000
15

2.5. Calcul de rptabilit et de reproductibilit

Les calculs de rptabilit et de reproductibilit sont raliss conformment la
norme NF X 06-041, septembre 1983, ISO 5725.Le tableau 4 prsente les cartstypes par cellule (laboratoire x chantillon).
Tableau 4 : Table des dispersions (cart-types en % vol.)
Laboratoir
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
C0
0,0354
0,0000
0,0354
0,0000
0,0000
0,0106
0,0000
0,0071
0,0085
0,0071
0,0141
V0
0,0252
0,0058
0,0058
0,0115
0,0462
0,0046
0,0569
0,0231
0,0176
0,0058
0,0100
V1
0,0265
0,3436
0,0100
0,0200
0,0000
0,0255
0,0058
0,0200
0,0115
0,0000
0,0153
V2
0,0173
0,0100
0,0115
0,0231
0,0000
0,0052
0,2050
0,0321
0,0040
0,0000
0,0115
V3
0,0289
0,0058
0,0115
0,0208
0,0000
0,0012
0,0764
0,0115
0,0202
0,0058
0,0100
P0
0,0000
0,0000
0,0071
0,0919
0,0000
0,0523
0,0636
0,0212
0,0035
0,0212
0,0283
Trois cellules prsentent des dispersions fortes (Probabilit associe au test de

Cochran infrieure 1 %). Ces cellules sont reprsentes en gris (tableau 4).
Pour le laboratoire 7 et le produit V3, lcart-type de 0,0764 est conserv malgr le
rsultat du test de Cochran car il est du mme ordre de grandeur que celui observ
pour le mme laboratoire sur le produit V0.
Lexamen des valeurs par distillat (tableau 3) conduit liminer :
- laboratoire 2, produit V1, la valeur 10,990,
- laboratoire 7, produit V2, la valeur 11,440.
Aprs avoir limin ces deux valeurs les moyennes par cellule (laboratoire x
chantillon) sont calcules (tableau 5).
OIV-MA-AS312-01A : 2009
16

Tableau 5 : Table des moyennes (moyennes en % vol.)

Laboratoir
C0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
V0
5,9950
6,0400
5,9350
6,0200
5,9500
6,0235
5,7300
5,9950
6,0250
6,0250
6,0100
9,4733
9,5033
9,4567
9,4567
9,4033
9,5103
9,4133
9,4267
9,4983
9,5067
9,4800
V1
V2
V3
P0
10,3700
10,3950
10,3500
10,3300
10,2500
10,3640
10,2233
10,3400
10,4150
10,3800
10,3867
11,2700
11,2800
11,2733
11,2367
11,3000
11,2720
11,0850
11,1733
11,2930
11,2500
11,2533
12,1333
12,2067
12,1633
12,1367
12,0500
12,2213
12,0133
12,0967
12,2033
12,1533
12,1500
17,0800
17,0500
17,1950
17,0050
17,0000
17,1570
16,9650
17,0950
17,0865
17,1150
17,0200
Les valeurs donnes par le laboratoire 7 sont gnralement basses (tableau 5).
Dans le cas du cidre, la moyenne pour ce laboratoire est fortement loigne de
celles des autres laboratoires (Probabilit associe au test de Dixon infrieure 1
%). Les rsultats de ce laboratoire pour ce produit sont limins.
Le tableau 6 prsente les rptabilits et reproductibilits calcules.
Tableau 6 : Calcul des rptabilits et des reproductibilits
Echantil
lC0
V0
V1
V2
V3
P0
TAV
S2r
S2L
10
11
11
11
11
11
20
33
32
32
33
22
6,002
9,466
10,344
11,249
12,139
17,070
0,000298
0,000654
0,000255
0,000219
0,000722
0,001545
0,001033
0,001255
0,003485
0,003113
0,003955
0,004154
r
0,049
0,072
0,045
0,042
0,076
0,111
R
0,103
0,124
0,173
0,163
0,194
0,214
Lgende :
p
n
TAV
S2r
S2L
r
R
:
:
:
:
:
:
:
nombre de laboratoires retenus

nombre de valeurs retenues
TAV moyen (% vol.)
variance de rptabilit (% vol.)2
variance interlaboratoire (% vol.)2
rptabilit (% vol.)
reproductibilit (% vol.)
OIV-MA-AS312-01A : 2009
17

La reproductibilit augmente avec le TAV des chantillons (figure 1).

Laugmentation de la rptabilit en fonction du TAV est moins marque, ainsi
une rptabilit globale est calcule en fonction de la variance de rptabilit
moyenne. Ainsi, pour des chantillons de TAV compris entre 4 et 18 % vol.,
Reproductibilit (R) = 0,0454 + 0,0105 x TAV.
Rptabilit (r), reproductibilit (R) (% vol.)

.3
P0
V3
.2
V1
V2
V0
P0
C0
.1
V3
V0
C0
V1 V2
R
r
0.0
4
10
12
14
16
18
TAV (% vol.)
Figure 1 : Rptabilit et reproductibilit en fonction du titre alcoomtrique

volumique
OIV-MA-AS312-01A : 2009
18

2.6. Exactitude sur les ajouts raliss sur le vin

La droite de rgression du titre alcoomtrique aprs ajout en fonction du volume
dthanol ajout fournit, pour un volume de 0 ml, une estimation du titre
alcoomtrique initial du produit (figure 2). Cette rgression est ralise avec les
valeurs moyennes par laboratoire (tableau 5).
Titre alcoomtrique mesur moyen (% vol.)

12.5
12.0
11.5
11.0
10.5
10.0
9.5
9.0
0
40
80
120
160
Volume d'thanol ajout (ml)
Figure 2 : Rgression du TAV mesur sur le volume dthanol ajout
La mesure ralise sur le produit initial nintervient pas dans cette estimation. Cette
estimation est compare la moyenne des mesures ralises sur ce produit avant
ajout, les intervalles de confiance relatifs ces deux estimations sont calculs
(tableau 7).
Tableau 7 : Ajouts sur produits
BI
moyenne des mesures
BS
BI
9,440
9,466
9,492
9,392
estimation avec mesures

sur produits + ajouts
9,450
BS
9,508
Lgende : BI : borne infrieure de lintervalle de confiance 95%

BS : borne suprieure de lintervalle de confiance 95%
Les deux intervalles de confiance possdent une zone de recouvrement importante.
Grce aux mesures sur les chantillons dops on retrouve donc le titre
alcoomtrique volumique du produit initial.
OIV-MA-AS312-01A : 2009
19

2.7. Conclusion de lessai interlaboratoires

Les dterminations de la rptabilit et de la reproductibilit par les essais
interlaboratoires donnent les quations suivantes, pour des produits de TAV situ
entre 4 et 18 % vol. :
Reproductibilit (R) = 0,0454 + 0,0105 x TAV (% vol.).
Les indicateurs de Horwitz, Hor et HoR sont faibles (tableau 8). Ils indiquent donc
une bonne prcision de la mthode par rapport au niveau danalyte mesur.
Tableau 8 : Tableau rsum sur la fidlit de la mthode
Echantillon
n
p
TAV
r
sr
RSDr
RSDrH
Hor
R
sR
RSDR
RSDRH
HoR
Lgende :
n
p
TAV
r
sr
RSDr
RSDrH
Hor
R
sR
RSDR
RSDRH
HoR
C0
V0
V1
V2
V3
P0
20
10
6,0019
0,0489
0,0173
0,2878
2,0159
0,1428
0,1033
0,0365
0,6080
3,0543
0,1991
33
11
9,4662
0,0724
0,0256
0,2702
1,8822
0,1436
0,1237
0,0437
0,4616
2,8519
0,1619
32
11
10,3443
0,0452
0,0160
0,1543
1,8573
0,0831
0,1731
0,0612
0,5912
2,8141
0,2101
32
11
11,2492
0,0419
0,0148
0,1316
1,8340
0,0718
0,1634
0,0577
0,5131
2,7788
0,1847
33
11
12,1389
0,0760
0,0269
0,2214
1,8131
0,1221
0,1935
0,0684
0,5634
2,7471
0,2051
22
11
17,0699
0,1113
0,0393
0,2303
1,7224
0,1337
0,2136
0,0755
0,4423
2,6097
0,1695
:
:
:
:
:
:
:
:
:
:
:
:
nombre de valeurs retenues

nombre de laboratoires retenus
TAV moyen (% vol.)
rptabilit (% vol.)
Ecart-type de rptabilit (% vol.)
Coefficient de variation de rptabilit ( sr x 100 / TAV) (%)
Coefficient de variation de rptabilit dHorwitz ( 0,66 x RSDRH) (%)
Valeur de rptabilit dHorrat (RSDr/RSDrH)
reproductibilit (% vol.)
Ecart-type de reproductibilit (% vol.)
Coefficient de variation de reproductibilit ( sR x 100 / TAV) (%)
Coefficient de variation de reproductibilit dHorwitz
( 2(1-0,5log(TAV)) ) (%)
: Valeur de reproductibilit dHorrat ( RSDR/RSDRH)
OIV-MA-AS312-01A : 2009
20

Lors des essais interlaboratoires, les mesures ralises sur un vin avec ajouts
permettent de retrouver la valeur obtenue avant ajout, on obtient respectivement
les valeurs 9,45 et 9,47 % vol..
Bibliographie
OIV, 1990. Recueil des mthodes internationales danalyse des vins et des mots,
Office International de la Vigne et du Vin ; Paris.
OIV-MA-AS312-01A : 2009
21

4. C. Mesure du titre alcoomtrique volumique

des vins par densimtrie utilisant
la balance hydrostatique
(Rsolution Oeno 24/2003 377/2009)
1. MTHODE DE MESURE
1.1 Titre et introduction
Le titre alcoomtrique volumique (TAV) des vins doit tre mesur avant leur
commercialisation notamment pour la conformit aux rgles dtiquetage.
Le titre alcoomtrique volumique est gal au nombre de litres dthanol
contenus dans 100 litres de vin, ces volumes tant tous deux mesurs la
temprature de 20 C. Son symbole est % vol..
1.2 Prcaution de scurit
nettoyage.
1.3 Objet et domaine dapplication
La mthode de mesure dcrite est la densimtrie utilisant une balance
hydrostatique.
En rfrence aux dispositions rglementaires en vigueur, la temprature dessai
est arrte 20C.
1.4 Principe et dfinitions
Le principe de la mthode consiste premirement distiller le vin de volume
volume. La mthode de distillation est dcrite dans le prsent Recueil. Cette
distillation permet dliminer les substances non volatiles. Les homologues de
lthanol, ainsi que lthanol engags dans des liaisons esters, sont compris
dans le titre alcoomtrique, car ils se retrouvent dans le distillat.
Dans un deuxime temps on mesure la masse volumique du distillat obtenu. La
masse volumique dun liquide une temprature donne est gale au quotient
de sa masse sur son volume: =m/V, pour un vin, elle sexprime en g/ml .
Le titre alcoomtrique des vins peut tre mesur par densimtrie sur balance
hydrostatique suivant le principe d'Archimde selon lequel tout corps plong
dans un fluide subit une pousse verticale, dirige de bas en haut, gale au
poids du fluide dplac.
OIV-MA-AS312-01A : 2009
22

1.5 Ractifs
Au cours de l'analyse, sauf indication contraire, n'utiliser que des ractifs de
qualit analytique reconnue et de l'eau de classe 3 au minimum, rpondant la
dfinition de la norme ISO 3696:1987.
1.5.1 Solution de lavage du flotteur (hydroxyde de sodium, 30 % m/v).
Pour prparer une solution de 100 ml, peser 30 g d'hydroxyde de sodium et
porter au volume l'aide d'thanol 96 % vol.
1.6 Appareillage et matriel
appareillage courant de laboratoire et notamment :
1.6.1 Balance hydrostatique monoplateau d'une sensibilit de 1 mg.
1.6.2 Flotteur d'un volume d'au moins 20 ml, spcialement adapt la
balance, suspendu par un fil d'un diamtre infrieur ou gal 0,1 mm.
1.6.3 prouvette cylindrique comportant un repre de niveau. Le flotteur doit
pouvoir rentrer entirement dans le volume de l'prouvette situ audessous du repre; la surface du liquide ntant traverse que par le fil
de suspension. L'prouvette cylindrique doit avoir un diamtre intrieur
suprieur d'au moins 6 mm celui du flotteur.
1.6.4 Thermomtre (ou sonde de mesure de la temprature) gradu en degrs
et diximes de degr, de 10 40 C, talonn 0,05 C prs.
1.6.5 Poids talonns par un organisme de certification reconnu.
1.7 Mode opratoire
Entre chaque mesure, le flotteur et l'prouvette doivent tre nettoys l'eau
distille, essuys avec un papier de laboratoire doux ne perdant pas ses fibres et
rincs avec la solution dont la masse volumique est dterminer. Les mesures
doivent tre effectues ds que l'appareil a atteint sa stabilit afin de limiter les
pertes d'alcool par vaporation.
1.7.1 talonnage de la balance
Bien que les balances soient gnralement pourvues d'un systme d'talonnage
interne, la balance hydrostatique doit pouvoir tre talonne avec des poids
contrls par un organisme de certification officiel.
1.7.2 talonnage du flotteur
1.7.2.1 Remplir l'prouvette cylindrique jusqu'au repre avec de l'eau
bidistille (ou d'une puret quivalente, par exemple de l'eau microfiltre
d'une conductivit de 18,2 M/cm), dont la temprature sera comprise entre
15 et 25 C, mais se situera de prfrence 20 C.
OIV-MA-AS312-01A : 2009
23

1.7.2.2 Plonger le flotteur et le thermomtre dans le liquide, agiter, lire la

masse volumique du liquide sur l'appareil et, si ncessaire, corriger cette
lecture pour qu'elle soit gale celle de l'eau la temprature de la mesure.
1.7.3 Contrle l'aide d'une solution hydroalcoolique
1.7.3.1 Remplir l'prouvette cylindrique jusqu'au repre avec un mlange
hydroalcoolique de titre connu, dont la temprature sera comprise entre 15 et
25 C, mais se situera de prfrence 20 C.
masse volumique du liquide sur l'appareil (ou le titre alcoomtrique si ce
dernier le permet). Le titre alcoomtrique ainsi tabli doit tre gal au titre
alcoomtrique prcdemment dtermin.
Remarque 2: Cette solution de titre alcoomtrique connu peut galement
remplacer l'eau bidistille pour l'talonnage du flotteur.
1.7.4 Mesure de la masse volumique d'un distillat (ou de son titre
alcoomtrique si l'appareillage le permet)
1.7.4.1 Verser l'chantillon pour essai dans l'prouvette cylindrique jusqu'au
repre de niveau.
masse volumique du liquide sur l'appareil (ou le titre alcoomtrique si ce
dernier le permet). Noter la temprature si la masse volumique est mesure
t C ( t).
1.7.4.3 Corriger t l'aide de la table des masses t des mlanges
hydroalcooliques [table II de l'annexe II du recueil des mthodes d'analyse
de l'OIV ].
1.7.5 Nettoyage du flotteur et de l'prouvette cylindrique.
1.7.5.1 Plonger le flotteur dans la solution de lavage verse dans
l'prouvette.
1.7.5.2 Laisser tremper une heure en tournant le flotteur rgulirement.
1.7.5.3 Rincer abondamment l'eau du robinet, puis l'eau distille.
1.7.5.4 Essuyer avec un papier de laboratoire doux ne perdant pas ses fibres.
Raliser ces oprations lors de la premire utilisation du flotteur, puis
rgulirement ds que ncessaire.
1.7.6 Rsultat
l'aide de la masse volumique 20, calculer le titre alcoomtrique volumique
rel en utilisant la table indiquant la valeur du titre alcoomtrique volumique
(% vol.) 20 C en fonction de la masse volumique 20 C des mlanges
hydroalcooliques. Il sagit de la table internationale adopte par
OIV-MA-AS312-01A : 2009
24

l'Organisation internationale de mtrologie lgale dans sa recommandation

no 22.
2.
Comparaison des mesures effectues laide de la balance hydrostatique

avec celles obtenues par densimtrie lectronique (Methode de reference
OIV, Annexe A du Recueil des Mthodes Internationales dAnalyse)
A partir dchantillons dont le titre alcoomtrique est compris entre 4 %
vol. et 18 % vol., il a t procd la mesure de la rptabilit et de la
reproductibilit aprs un essai inter-laboratoire. Il sagit dune comparaison
des mesures du titre alcoomtrique de diffrents chantillons par la
balance hydrostatique et par le densimtre lectronique, incluant les valeurs
de rptabilit et de reproductibilit drives des essais dintercomparaison
pluri-annuels effectus sur une grande chelle.
2.1 Echantillons: Il sagit de vins de diffrentes densits et titres
alcoomtriques prpars mensuellement une chelle industrielle, tirs
dun stock de bouteilles conserves dans des conditions normales, et
fournis de manire anonyme aux laboratoires.
2.2 Laboratoires: laboratoires participant aux essais mensuels organiss par
Unione Italiana Vini Verona, Italy) daprs la rglementation ISO 5725
(UNI 9225) et le 'International Protocol of Proficiency test for chemical
analysis laboratories' tabli par l AOAC, lISO et lIUPAC (J. AOAC
Intern., 1993, 74/4) et daprs les lignes directrices ISO 43 and ILAC G13.
Un rapport annuel est fourni par la socit cite tous les participants.
2.3 Appareils:
2.3.1 Une balance hydrostatique lectronique (dont la prcision permet de
donner la 5me dcimale de la densit) et ventuellement quipe dun
appareil de traitement de donnes.
2.3.2Un densimtre lectronique ventuellement quip dun passeur
automatique dchantillon.
2.4 Analyses
Daprs les rgles de validation des mthodes (rsolution OENO 6/99),
chaque chantillon est analyss deux fois conscutives pour la
dtermination du titre alcoomtrique.
2.5 Rsultats
OIV-MA-AS312-01A : 2009
25

Le Tableau 1 montre les rsultats de mesure obtenus par les laboratoires

utilisant une balance hydrostatique.
Le Tableau 2 montre les rsultats obtenus par les laboratoires utilisant un
densimtre lectronique.
2.6 Evaluations des rsultats
2.6.1 Les rsultats des essais ont t examins pour mettre en vidence lerreur
systmatique individuelle (p<0,025) en utilisant successivement les tests
de Cochran et de Grubbs , selon les procdures dcrites dans le Protocol
international for the Design, Conduct and Interpretation of MethodPerformance Studies Ed W Horwitz, Pure and Applied Chemistry, 1995,
67, (2), 331-343.].
2.6.2 Rptabilit (r) et reproductibilit (R)
Les calculs de rptabilit (r) et reproductibilit (R) dfinies par le
protocole ont t effectus sur les rsultats restant aprs limination des
valeurs aberrantes. Lors de lvaluation dune nouvelle mthode, il est
frquent quil nexiste pas de mthode de rfrence valide ou de mthode
statutaire pour comparer les critres de prcision, donc pour comparer les
donnes de prcision obtenues lors des essais collaboratifs on se rfre
des niveaux de prcision estims . Ces niveaux estims sont calculs
daprs la formule dHorwitz. La comparaison des rsultats dessais et les
niveaux prvus indique si la mthode est suffisament prcise pour le niveau
danalyte mesur.
La valeur prdite dHorwitz est calcule par la formule dHorwitz
RSDR = 2(1-0,5 logC)
ou C = concentration mesure danalyte exprime en dcimales
(e.g. 1 g/100 g = 0,01) [Horwitz, W., Analytical Chemistry, 1982, 54, 67A76A.].
La valeur Horrat donne une comparaison de la prcision actuelle
dtermine avec la prcision prdite par la formule dHorwitz pour la
mthode et au niveau particulier de concentration de lanalyte ; elle est
calcule comme suit:
HoR = RSDR(mesur)/RSDR(Horwitz)
OIV-MA-AS312-01A : 2009
26

2.6.3 Prcision interlaboratoire

Une valeur Horrat de 1 indique normalement une prcision interlaboratoire satisfaisante, alors quune valeur suprieure 2 indique
normalement une prcision non satisfaisante, i.e. une prcision trop
variable pour des raisons analytiques ou quand la variation obtenue est plus
leve que celle estime pour la mthode employe. Hor est aussi calcu et
utilis pour dterminer la prcision intra-laboratoire en utilisant l
approximation suivante:
RSDr(Horwitz) = 0,66 RSDR(Horwitz) (ce qui suppose lapproximation
suivante : r = 0,66 R).
Le Tableau 3 montre les diffrences entre les mesures obtenues par les
laboratoires utilisant le densimtre lectronique et ceux utilisant la balance
hydrostatique. En dehors de lchantillon 2000/3 qui a un titre
alcoomtrique trs faible et pour lequel les deux techniques montrent une
faible reproductibilit, une bonne concordance est observe pour les autres
chantillons.
2.6.4 Paramtres de fidlit
Le Tableau 4 montre la moyenne gnrale des paramtres de fidlit
calcule partir de tous les essais mensuels qui se sont drouls entre
janvier 1999 et mai 2001.
En particulier:
Rptabilit (r)= 0,074 (% vol.) pour la balance hydrostatique et 0,061 (%
vol.) pour la densimtrie lectronique;
Reproductibilit (R)= 0,229 (% vol.) pour la balance hydrostatique et 0,174
(% vol.) pour la densimtrie lectronique, cette dernire valeur est
concordante avec la valeur estime pour la densimtrie lectronique
figurant au Recueil des Mthodes Internationales dAnalyse de lOIV.
2.7 Conclusion
Les rsultats concernant la dtermination du titre alcoomtrique dune large
gamme de vins montrent que les mesures effectues avec la balance hydrostatique
sont concordantes avec celles effectues par densimtrie lectronique utilisant un
rsonateur de flexion et que les valeurs des paramtres de validation sont proches
pour les deux mthodes.
OIV-MA-AS312-01A : 2009
27

Bibliographie
-
F.V. n. 1096; Cabanis Marie-Thrse., Cassanas Genevive, Raffy Jolle,

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Cabanis Marie-Thrse., Cassanas Genevive, Raffy Jolle, Cabanis J.C.,

1999: Intrt de la balance hydrostatique nouvelle gnration pour la
dtermination du titre alcoomtrique des vins et des boissons spiritueuses. Rev.
Fran. nol., 177/juillet-aot, 28-31;
Versini G., Larcher R., 2002: Comparison of wine density and alcoholic
strength measurement by hydrostatic balance and electronic densitymeter.
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'International Protocol of Proficiency test for chemical analysis laboratories'., J.

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OIV Resolution OENO 6/1999;
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method-performance studies, Pure and Applied Chemistry, 67/2, 331-343.
OIV-MA-AS312-01A : 2009
28
1999/1
1999/2
1999/3
1999/4
1999/5
1999/6
1999/7
1999/9
1999/10
1999/11
1999/12
2000/1
2000/2
2000/3
2000/4
2000/5
2000/6
2000/7
2000/9
2000/10
2000/11
2000/12
2001/1
2001/2
2001/3
2001/4
2001/5
moyenne
11,043
11,247
11,946
7,653
11,188
11,276
8,018
11,226
11,026
7,701
10,987
11,313
11,232
0,679
11,223
7,439
11,181
10,858
12,031
11,374
7,644
11,314
11,415
11,347
11,818
11,331
8,063
n
17
14
16
17
17
19
17
17
17
16
17
16
17
10
18
19
19
16
17
18
18
19
19
19
16
17
19
aberrants
1
1
0
1
0
0
0
0
0
1
2
0
0
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
0
0
1
n1
16
13
16
16
17
19
17
17
17
15
15
16
17
10
18
18
19
16
16
18
18
18
19
19
16
17
18
r
0,0571
0,0584
0,0405
0,0502
0,0871
0,0846
0,0890
0,0580
0,0606
0,0643
0,0655
0,0986
0,0859
0,0680
0,0709
0,0630
0,0536
0,0526
0,0602
0,0814
0,0827
0,0775
0,0950
0,0792
0,0659
0,1067
0,0782
sr
0,0204
0,0208
0,0145
0,0179
0,0311
0,0302
0,0318
0,0207
0,0216
0,0229
0,0234
0,0352
0,0307
0,0243
0,0253
0,0225
0,0191
0,0188
0,0215
0,0291
0,0295
0,0277
0,0339
0,0283
0,0235
0,0381
0,0279
RSDr
0,1846
0,1854
0,1211
0,2344
0,2780
0,2680
0,3964
0,1846
0,1961
0,2980
0,2128
0,3113
0,2731
3,5773
0,2257
0,3023
0,1710
0,1731
0,1787
0,2555
0,3863
0,2447
0,2971
0,2493
0,1990
0,3364
0,3465
Hor
0,1004
0,1011
0,0666
0,1206
0,1515
0,1462
0,2054
0,1423
0,1066
0,1535
0,1156
0,1699
0,1489
1,2783
0,1230
0,1549
0,0932
0,0939
0,0985
0,1395
0,1988
0,1336
0,1623
0,1361
0,1093
0,1836
0,1797
R
0,1579
0,1803
0,1593
0,1537
0,2701
0,2957
0,2573
0,2796
0,2651
0,2330
0,1258
0,2577
0,2535
0,6529
0,2184
0,1522
0,2783
0,1827
0,2447
0,2701
0,2289
0,2421
0,2410
0,1944
0,2636
0,1895
0,1906
sR
0,0564
0,0644
0,0569
0,0549
0,0965
0,1056
0,0919
0,0999
0,0947
0,0832
0,0449
0,0920
0,0905
0,2332
0,0780
0,0544
0,0994
0,0653
0,0874
0,0965
0,0817
0,0864
0,0861
0,0694
0,0941
0,0677
0,0681
RSDR
0,5107
0,5727
0,4764
0,7172
0,8622
0,9365
1,1462
0,8896
0,8588
1,0805
0,4089
0,8135
0,8060
34,3395
0,6951
0,7307
0,8890
0,6011
0,7263
0,8482
1,0694
0,7641
0,7539
0,6119
0,7965
0,5971
0,8442
HoR
0,18
0,21
0,17
0,24
0,31
0,34
0,39
0,45
0,31
0,37
0,15
0,29
0,29
8,10
0,25
0,25
0,32
0,22
0,26
0,31
0,36
0,28
0,27
0,22
0,29
0,22
0,29
no. de
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
diffrence
0,1080
0,1241
0,1108
0,1057
0,1860
0,2047
0,1764
0,1956
0,1850
0,1616
0,0827
0,1754
0,1740
0,4604
0,1503
0,1029
0,1950
0,1265
0,1704
0,1866
0,1565
0,1667
0,1636
0,1316
0,1834
0,1229
0,1290
29

OIV-MA-AS312-01A : 2009
Tableau 1: Balance Hydrostatique (HB)
D1999/1
D1999/2
D1999/3
D1999/4
D1999/5
D1999/6
D1999/7
D1999/9
D1999/10
D1999/11
D1999/12
D2000/1
D2000/2
D2000/3
D2000/4
D2000/5
D2000/6
D2000/7
D2000/9
D2000/10
D2000/11
D2000/12
D2001/1
D2001/2
D2001/3
D2001/4
D2001/5
AVG n1
11,019
11,245
11,967
7,643
11,188
11,303
8,026
11,225
11,011
7,648
10,999
11,248
11,240
0,526
11,225
7,423
11,175
10,845
11,983
11,356
7,601
11,322
11,427
11,320
11,826
11,339
8,058
n aberrants
18
1
19
2
21
0
19
1
21
3
21
0
21
0
17
0
19
0
21
1
16
1
22
1
19
3
12
1
19
1
21
0
23
2
21
5
22
1
22
1
27
0
25
1
29
0
29
1
34
1
31
2
28
0
n1
17
17
21
18
18
21
21
17
19
20
15
21
16
11
18
21
21
16
21
21
27
24
29
28
33
29
28
r
0,0677
0,0448
0,0701
0,0610
0,0260
0,0652
0,0884
0,0372
0,0915
0,0615
0,0428
0,0697
0,0448
0,0327
0,0476
0,0628
0,0606
0,0440
0,0841
0,0635
0,0521
0,0476
0,0706
0,0675
0,0489
0,0639
0,0473
sr
0,0242
0,0160
0,0250
0,0218
0,0093
0,0233
0,0316
0,0133
0,0327
0,0220
0,0153
0,0249
0,0160
0,0117
0,0170
0,0224
0,0217
0,0157
0,0300
0,0227
0,0186
0,0170
0,0252
0,0241
0,0175
0,0228
0,0169
RSDr
0,2196
0,1423
0,2091
0,2852
0,0829
0,2061
0,3935
0,1183
0,2969
0,2872
0,1389
0,2212
0,1424
2,2185
0,1514
0,3019
0,1938
0,1449
0,2507
0,1997
0,2448
0,1503
0,2207
0,2128
0,1476
0,2012
0,2098
Hor
0,1193
0,0776
0,1151
0,1467
0,0452
0,1125
0,2039
0,0645
0,1613
0,1478
0,0755
0,1206
0,0776
0,7630
0,0825
0,1547
0,1056
0,0786
0,1380
0,1090
0,1258
0,0820
0,1206
0,1161
0,0811
0,1099
0,1088
R
0,1996
0,1311
0,1552
0,1340
0,2047
0,1466
0,1708
0,1686
0,1723
0,1538
0,2015
0,1422
0,1619
0,9344
0,1350
0,2635
0,1697
0,1447
0,2410
0,1865
0,1685
0,1594
0,1526
0,1570
0,1762
0,1520
0,2025
sR
0,0713
0,0468
0,0554
0,0479
0,0731
0,0523
0,0610
0,0602
0,0615
0,0549
0,0720
0,0508
0,0578
0,3337
0,0482
0,0941
0,0606
0,0517
0,0861
0,0666
0,0602
0,0569
0,0545
0,0561
0,0629
0,0543
0,0723
RSDR
0,6470
0,4165
0,4631
0,6262
0,6536
0,4631
0,7600
0,5366
0,5588
0,7183
0,6541
0,4516
0,5145
63,4009
0,4295
1,2677
0,5424
0,4766
0,7183
0,5866
0,7916
0,5028
0,4771
0,4952
0,5322
0,4788
0,8976
HoR
0,23
0,15
0,17
0,21
0,24
0,17
0,26
0,19
0,20
0,24
0,23
0,16
0,19
14,39
0,15
0,43
0,20
0,17
0,26
0,21
0,27
0,18
0,17
0,18
0,19
0,17
0,31
no. de
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
diffrence
0,1370
0,0900
0,1040
0,0897
0,1442
0,0984
0,1124
0,1178
0,1129
0,1043
0,1408
0,0944
0,1123
0,6605
0,0924
0,1836
0,1161
0,0999
0,1651
0,1280
0,1162
0,1102
0,1020
0,1057
0,1222
0,1026
0,1412
30

OIV-MA-AS312-01A : 2009
Tableau 2: Densimtrie lectronique (ED)
1999/1
1999/2
1999/3
1999/4
1999/5
1999/6
1999/7
1999/9
1999/10
1999/11
1999/12
2000/1
2000/2
2000/3
2000/4
2000/5
2000/6
2000/7
2000/9
2000/10
2000/11
2000/12
2001/1
2001/2
2001/3
2001/4
2001/5
Moyenne (BH)
11,043
11,247
11,946
7,653
11,188
11,276
8,018
11,226
11,026
7,701
10,987
11,313
11,232
0,679
11,223
7,439
11,181
10,858
12,031
11,374
7,644
11,314
11,415
11,347
11,818
11,331
8,063
n
17
14
16
17
17
19
17
17
17
16
17
16
17
10
18
19
19
16
17
18
18
19
19
19
16
17
19
Valeurs
1
1
0
1
0
0
0
0
0
1
2
0
0
0
0
1
0
0
1
0
0
1
0
0
0
0
1
n1
16
13
16
16
17
19
17
17
17
15
15
16
17
10
18
18
19
16
16
18
18
18
19
19
16
17
18
Moyenne (DE)
D1999/1
11,019
D1999/2
11,245
D1999/3
11,967
D1999/4
7,643
D1999/5
11,188
D1999/6
11,303
D1999/7
8,026
D1999/9
11,225
D1999/10
11,011
D1999/11
7,648
D1999/12
10,999
D2000/1
11,248
D2000/2
11,240
D2000/3
0,526
D2000/4
11,225
D2000/5
7,423
D2000/6
11,175
D2000/7
10,845
D2000/9
11,983
D2000/10
11,356
D2000/11
7,601
D2000/12
11,322
D2001/1
11,427
D2001/2
11,320
D2001/3
11,826
D2001/4
11,339
D2001/5
8,058
Diffrence gnrale / TAV (BH-DE)
Ecart type/diffrence
Essai 2000/3 nest pas pris en compte
n
18
19
21
19
21
21
21
17
19
21
16
22
19
12
19
21
23
21
22
22
27
25
29
29
34
31
28
Valeurs
1
2
0
1
3
0
0
0
0
1
1
1
3
1
1
0
2
5
1
1
0
1
0
1
1
2
0
n1
TAV(BH-DE)
17
0,024
17
0,002
21
-0,021
18
0,010
18
0,000
21
-0,028
21
-0,008
17
0,002
19
0,015
20
0,052
15
-0,013
21
0,065
16
-0,008
11 *
0,153
18
-0,002
21
0,016
21
0,006
16
0,013
21
0,049
21
0,018
27
0,043
24
-0,008
29
-0,012
28
0,027
33
-0,008
29
-0,008
28
0,004
0,014
0,036
31

OIV-MA-AS312-01A : 2009
Tableau 3: : Comparaison des rsultats entre la balance hydrostatique (BH) et la densimtrie lectronique (DE)

Tableau 4: Paramtres de fidlit
Balance hydrostatique
Densimtrie lectronique
441
557
variance relative
de rptabilit
0,309
0,267
r
sr
0,074
0,026
0,061
0,022
variance relative
de reproductibilit
R
sR
2,948
0,229
0,082
2,150
0,174
0,062
MOYENNE
n1
OIV-MA-AS312-01A : 2009
32

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OIV-MA-AS312-01A : 2009
33
Titre alcoomtrique volumique Mthodes Type IV
Method OIV-MA-AS312-01B
Mthode Type IV
1. DEFINITION
Le titre alcoomtrique volumique est gal au nombre de litres d'thanol contenu
20C. Son symbole est % vol.
Remarque: Les homologues de l'thanol, ainsi que l'thanol et les homologues de
l'thanol engags dans des esters, sont compris dans le titre alcoomtrique, car ils
se retrouvent dans le distillat.
2. PRINCIPE DES METHODES

2.1. Distillation du vin alcalinis par une suspension d'hydroxyde de calcium.
Dtermination du titre alcoomtrique sur le distillat.
2.2. Mthode de Type IV:

A. Dtermination du titre alcoomtrique du distillat par aromtrie
B. Dtermination du titre alcoomtrique du distillat par rfractomtrie
OIV-MA-AS312-01B : R2009
3. Obtention du distillat
3.1. Ractifs et appareillage
3.1.1. Appareil de distillation comportant:
- un ballon d'un litre de capacit, rodage normalis,
- une colonne rectificatrice de 20 cm de hauteur environ ou tout dispositif
destin empcher le primage,
- une source de chaleur (toute pyrognation des matires extractives doit tre
vite par un dispositif appropri),
- un rfrigrant termin par un tube effil conduisant le distillat dans le fond de
la fiole jauge rceptrice contenant quelques millilitres d'eau.
3.1.2. Appareil entranement par la vapeur d'eau comportant:
- un gnrateur de vapeur d'eau;
- un barboteur;
- une colonne rectificatrice;
- un rfrigrant.
Tout modle d'appareil distillation ou tout appareil entranement la vapeur
d'eau peut tre utilis condition de rpondre au test suivant:
Distiller 5 fois successives un mlange hydroalcoolique titrant 10 % vol. Le
distillat doit prsenter un titre alcoomtrique d'au moins 9,9 % vol. aprs la
cinquime distillation, c'est--dire qu'il ne doit pas se produire de perte d'alcool
suprieure 0,02 % vol. au cours d'une distillation.
3.2. Ractifs
Suspension d'hydroxyde de calcium 2 M
Obtenue en versant avec prcaution 1 l deau chaude (60-70C) sur 120 g de
chaux vive CaO.
Les vins jeunes ou mousseux sont pralablement dbarrasss de la plus grande
quantit de leur dioxyde de carbone par agitation de 250 300 ml de vin dans
un flacon de 500 ml.
3.4. Mode opratoire
Prlever l'aide d'une fiole jauge un volume de vin de 200 ml. Noter la
temprature du vin.
Le verser dans le ballon de l'appareil distiller ou dans le barboteur de
l'appareil entranement la vapeur d'eau. Rincer la fiole jauge quatre
OIV-MA-AS312-01B : R2009
reprises avec 5 ml d'eau que l'on ajoute dans le ballon ou dans le barboteur.
Ajouter 10 ml d'hydroxyde de calcium 2 M et quelques fragments d'une matire
poreuse inerte (pierre ponce, etc./) dans le cas de la distillation.
Recueillir le distillat dans la fiole jauge de 200 ml qui a servi mesurer le vin.
Recueillir un volume gal aux trois quarts environ du volume initial dans le cas
de la distillation et recueillir 198-199 ml de distillat dans le cas de
l'entranement la vapeur d'eau.
Complter 200 ml avec de l'eau distille, le distillat tant une temprature
identique la temprature initiale 2 C prs.
Mlanger avec prcaution, par un mouvement circulaire.
Remarque : Dans le cas de vins particulirement chargs en ions ammoniacaux,
redistiller ventuellement le distillat dans les conditions dcrites ci-dessus en
remplaant la suspension d'hydroxyde de calcium par 1 ml d'acide sulfurique
10 pour 100 (v/v).
Prcautions de scurit
nettoyage.
OIV-MA-AS312-01B : R2009
4.
Dtermination du titre alcoomtrique du distillat par

Aromtrie ou Rfractomtrie
(Mthode de type IV)
4.1. Aromtrie
4.1.1. Appareillage
- Alcoomtre
L'alcoomtre doit rpondre aux spcifications pour les appareils de la classe I
ou de la classe II dfinies dans la Recommandation Internationale no 44
Alcoomtres et aromtres pour l'alcool de l'O.I.M.L. (Organisation
Internationale de Mtrologie Lgale).
- Thermomtre gradu en degrs et 1/10e de degr de 0 40 C, vrifi au
vingtime de degr prs.
- prouvette cylindrique de 36 mm de diamtre et 320 mm de hauteur tenue
verticalement grce un support vis calantes.
4.1.2. Mode opratoire
Verser le distillat dans l'prouvette cylindrique. Tenir cette prouvette bien
verticalement. Introduire le thermomtre et l'alcoomtre. La lecture du
thermomtre est faite 1 min. aprs avoir agit pour raliser l'galit de
temprature de l'prouvette, du thermomtre, de l'alcoomtre et du distillat.
Retirer le thermomtre et lire le titre alcoomtrique apparent aprs 1 min. de
repos. Faire au moins trois lectures en s'aidant d'une loupe. Le titre apparent
mesur t C sera corrig de l'action de la temprature l'aide de la table II.
Il faut que la temprature du liquide soit peu diffrente de la temprature
ambiante (5 C de diffrence au plus).
4.2. Rfractomtrie
4.2.1. Appareillage
Rfractomtre permettant la mesure des indices de rfraction compris entre
1,330 et 1,346.
Selon le type d'appareil, les mesures seront faites:
- soit 20 C, grce un dispositif appropri,
soit la temprature ambiante t C, mesure au moyen d'un thermomtre
permettant de la dterminer 0,05 C prs au moins. Une table de correction
de temprature sera fournie avec l'appareil..
OIV-MA-AS312-01B : R2009

La mesure de l'indice de rfraction est effectue sur le distillat de vin (3.3) en
suivant le mode opratoire prescrit pour le type d'appareil utilis.
4.2.3. Expression des rsultats
L'indice de rfraction 20 C est report dans la table IV pour obtenir le titre
alcoomtrique.
Remarque: La table IV donne la correspondance entre les indices de rfraction
des mlanges hydroalcooliques purs et des distillats de vin. Dans le cas des
distillats de vin, elle tient compte des impurets du distillat (alcools suprieurs
principalement). La prsence de mthanol se traduit par une diminution de
l'indice de rfraction et donc du titre alcoomtrique.
Nota : Pour exprimer le titre alcoomtrique partir de la masse volumique du

distillat, utiliser les tables pratiques I, II, III donnes dans l'annexe II ce
chapitre. Elles ont t calcules partir de la table alcoomtrique
internationale publie en 1972 par l'Organisation internationale de mtrologie
lgale dans sa Recommandation n 22 et adopte par l'OIV (Assemble
gnrale de 1974). Dans lAnnexe II est donne l'quation gnrale reliant le
titre alcoomtrique volumique et la masse volumique des mlanges
hydroalcooliques en fonction de la temprature.
OIV-MA-AS312-01B : R2009
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OIV-MA-AS312-01B : R2009
TABLE I
to
999,64
-0,07
o
1
999,71
-0,05
2o 999,76
-0,03
3o 999,79
-0,02
4o 999,81
0,00
5o 999,81
0,01
6o 999,80
0,03
7o 999,77
0,05
8o 999,72
0,05
9o 999,67
0,07
10 999,60
0,09
11o 999,51
0,10
12o 999,41
0,11
13o 999,30
0,12
14o 999,18
0,14
15o 999,05
0,14
16o 998,90
0,16
17o 998,74
0,17
18o 998,57
0,18
19o 998,39
0,19
20o 998,20
1,50 998,14
-0,06
1,51 998,20
-0,05
1,51 998,25
-0,03
1,51 998,28
-0,02
1,51 998,30
0,00
1,51 998,30
0,01
1,51 998,29
0,03
1,51 998,26
0,04
1,50 998,22
0,06
1,51 998,16
0,07
1,51 998,09
0,09
1,51 998,00
0,09
1,50 997,91
0,11
1,50 997,80
0,12
1,50 997,68
0,14
1,51 997,54
0,14
1,50 997,40
0,16
1,50 997,24
0,17
1,50 997,07
0,18
1,50 996,89
0,19
1,50 996,70
1,44 996,70
-0,06
1,44 996,76
-0,04
1,45 996,80
4,03
1,45 996,83
-0,01
1,46 996,84
0,00
1,46 996,84
0,01
1,46 996,83
0,03
1,46 996,80
0,04
1,46 996,76
0,06
1,46 996,70
0,07
1,46 996,63
0,09
1,46 996,54
0,09
1,46 996,45
0,11
1,46 996,34
0,13
1,46 996,22
0,13
1,46 996,08
0,15
1,46 995,94
0,16
1,46 995,78
0,16
1,46 995,61
0,19
1,46 995,43
0,19
1,46 995,24
1,40 995,30
-0,06
1,40 995,36
-0,04
1,40 995,40
-0,02
1,41 995,42
-0,02
1,40 995,44
0,00
1,40 995,44
0,02
1,41 995,42
0,03
1,41 995,39
0,05
1,42 995,34
0,06
1,42 995,28
0,07
1,42 995,21
0,08
1,41 995,13
0,10
1,42 995,03
0,11
1,42 994,92
0,13
1,43 994,79
0,13
1,42 994,66
0,15
1,43 994,51
0,16
1,43 994,35
0,17
1,42 994,19
0,19
1,43 994,00
0,19
1,43 993,81
Titre alcoomtrique volumique en %

4
5
6
7
1,35 993,95
-0,06
1,35 994,01
-0,04
1,35 994,05
-0,02
1,35 994,07
-0,01
1,36 994,08
0,01
1,37 994,07
0,01
1,36 994,06
0,04
1,37 994,02
0,05
1,37 993,97
0,06
1,37 993,91
0,07
1,37 993,84
0,09
1,38 993,75
0,10
1,38 993,65
0,11
1,38 993,54
0,13
1,38 993,41
0,14
1,38 993,28
0,15
1,38 993,13
0,17
1,38 992,97
0,17
1,39 992,80
0,19
1,39 992,61
0,19
1,39 992,42
1,30 992,65
-0,06
1,30 992,71
-0,04
1,30 992,75
-0,02
1,30 992,77
-0,01
1,30 992,78
0,02
1,31 992,76
0,02
1,32 992,74
0,04
1,32 99270
0,05
1,32 992,65
0,06
1,32 992:59
0,08
1,33 992,51
0,09
1,33 992,42
0,11
1,34 992,31
0,11
1,34 992,20
0,13
1,34 992,07
0,14
1,35 991,93
0,16
1,35 991,78
017
1,36 991,61
0,18
1,36 991,44
0,19
1,36 991,25
0,20
1,36 991,06
1,24 991,41
-0,06
1,24 991,47
-0,03
1,25 99150
-0,02
1,25 991,52
0,00
1,26 991,52
0,02
1,26 991,50
0,03
1,27 991,47
0,04
1,27 99143
0,05
1,27 991,38
0,07
1,28 99131
0,08
1,28 991,23
0,10
1,29 991,13
0,11
1,29 991,02
0,12
1,30 990,90
0,14
1,30 990,77
0,15
1,30 990,63
0,16
1,31 990,47
0,18
1,31 990,30
0,18
1,32 990,12
0,20
1,32 989,93
0,20
1,33 989,73
1,19 990,22
-0,05
1,20 990,27
-0,03
1,20 990,30
-0,01
1,21 990,31
0,00
1,21 990,31
0,02
1,21 990,29
0,04
1,22 990,25
0,05
1,23 99020
0,06
1,24 990,14
0,07
1,24 990,07
0,09
1,25 989,98
0,10
1,25 989,88
0,11
1,25 989,77
0,12
1,25 989,65
0,14
1,26 989,51
0,16
1,27 989,36
0,17
1,27 989,20
0,18
1,28 989,02
0,19
1,28 988,84
0,20
1,29 988,64
0,21
1,29 988,44
10
11
1,14 989,08
-0,04
1,15 989:12
-0,02
1,16 989,14
-0,01
1,16 989,15
0,01
1,17 989,14
0,02
1,17 989,12
0,05
1,18 989:07
0,06
1,19 989,01
0,06
1,19 988,95
0,08
1,20 988,87
0,09
1,20 988,78
0,11
1,21 988,67
0,12
1,22 988,55
0,13
1,23 988,42
0,15
1,23 988,28
0,16
1,24 988,12
0,17
1,25 987,95
0,19
1,25 987,17
0,20
1,26 987,58
0,20
1,26 987,38
0,22
1,27 987,17
1,10 987,98
-0,03
1,11 988,01
-0,02
1,11 988,03
0,00
1,12 988,03
0,02
1,13 988:01
0,03
1,14 987,98
0,05
1,14 987,93
0,07
1,15 987:86
0,07
1,16 987,79
0,09
1,17 987,70
0,10
1,17 987,60
0,11
1,18 987,49
0,13
1,19 987,36
0,14
1,20 987,22
0,16
1,21 987,07
0,17
1,21 986,91
0,18
1,21 986,74
0,19
1,22 986,55
0,21
1,23 986,35
0,21
1,23 986,15
0,23
1,24 985,93
1,05 986,93
-0,02
1,06 986,95
-0,01
1,07 986,96
0,01
1,08 986,95
0,03
1,09 986,92
0,04
1,10 986,88
0,05
1,10 986,83
0,08
1,11 986,75
0,08
1,12 986,67
0,10
1,13 986,57
0,11
1,14 986,46
0,12
1,15 986,34
0,13
1,15 986,21
0,15
1,16 986,06
0,16
1,17 985,90
0,18
1,18 985,73
0,19
1,19 985,55
0,20
1,19 985,36
0,22
1,20 985,15
0,21
1,21 984,94
0,24
1,22 984,71
1,00 985,93
-0,01
1,01 985,94
0,00
1,02 985,94
0,02
1,03 985,92
0,04
1,04 985,88
0,05
1,05 985,83
0,06
1,06 985,77
0,09
1,07 985,68
0,09
1,08 985,59
0,11
1,09 985,48
0,12
1,10 985,36
0,13
1,11 985,23
0,14
1,12 98,509
0,16
1,13 984,93
0,16
1,13 984,77
0,18
1,14 984,59
0,19
1,15 984,40
0,20
1,16 984,20
0,22
1,17 983,98
0,22
1,10 983,76
0,24
1,19 983,52
0,95
0,97
0,98
1,00
1,00
1,01
1,03
1,03
1,05
1,06
1,06
1,07
1,09
1,09
1,11
1,12
1,13
1,14
1,14
1,16
1,16

OIV-MA-AS312-02 : R2009
Titre alcoomtrique international 20C

Table des masses volumiques apparentes des mlanges hydroalcooliques Pycnomtre en pyrex
Masses volumiques tC, corrigs de la pousse de lair
TABLE I (suite)
to
20o
21
22
23
24
25o
26o
27o
28
29
30
31
30
33
34
35
36
37
38
39o
40
998,20 1,50 996,70

0,20
0,20
998,00 1,50 996,50
0,21
0,21
997,79 1,50 996,29
0,22
0,22
997,57 1,50 996,07
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0,23
997,33 1,49 995,94
0,24
0,25
997,09 1,50 995,59
0,25
0,25
996,84 1,50 995,34
0,26
0,26
996,58 1,50 995,68
0,27
0,27
996,31 1,50 994,81
0,28
0,28
996,03 1,50 994,53
0,28
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0,30
0,30
995,45 1,51 993,94
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0,31
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0,31
0,31
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0,32
0,33
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0,33
0,33
994,18 1,52 992,66
0,34
0,35
993,84 1,53 992,31
0,35
0,35
993,49 1,53 991,96
0,36
0,36
993,13 1,53 991,60
0,36
0,37
992,77 1,54 991,23
0,37
0,37
992,40 1,54 990,86
1,46 995,24
0,20
1,46 995,04
0,21
1,46 994,83
023
1,47 994,60
0,23
1,47 994,37
0,24
1,46 994,13
0,26
1,47 993,87
0,26
1,47 993,61
0,27
1,47 993,34
0,28
1,47 993,06
0,29
1,47 992,77
0,30
1,47 992,47
0,31
1,47 992,16
0,32
1,48 991,84
0,33
1,48 991,51
0,34
1,49 991,17
0,35
1,49 990,82
0,36
1,50 990,46
0,36
1,50 990,10
0,37
1,50 989,73
0,38
1,51 989,35
1,43 993,81
0,20
1,43 993,61
0,21
1,43 993,40
0,23
1,43 993,17
0,23
1,43 992,94
0,25
1,44 992,69
0,25
1,43 992,44
0,27
1,44 992,17
0,27
1,44 991,90
0,29
1,45 991,61
0,29
1,45 991,32
0,30
1,45 991,02
0,32
1,46 990,70
0,32
1,46 990,38
0,33
1,46 990,05
0,35
1,47 989,70
0,35
1,47 989,35
0,35
1,46 989,00
0,37
1,47 988,63
0,37
1,47 988,26
0,39
1,48 987,87
1,39 992,42
0,21
1,40 992,21
0,21
1,40 992,00
0,23
1,40 991,77
0,24
1,41 991,53
0,24
1,40 991,29
0,26
1,41 991,03
0,27
1,41 990,76
0,28
1,42 990,48
0,28
1,41 990,20
0,30
1,42 989,90
0,31
1,43 989,59
0,31
1,42 989,28
0,32
1,42 988,96
0,35
1,44 988,61
0,34
1,43 988,27
0,35
1,43 987,92
0,36
1,44 987,56
0,37
1,44 987,19
0,38
1,45 986,81
0,38
1,44 986,43
5
1,36 991,06 1,33
0,21
1,36 990,85 1,33
0,22
1,37 990,63 1,33
0,23
1,37 990,40 1,34
0,24
1,37 990,16 1,34
0,25
1,38 989,91 1,35
0,26
1,38 989,65 1,35
0,27
1,38 989,38 1, 35
0,28
1,38 989,10 1,36
0,29
1,39 988,81 1,36
0,30
1,39 988,51 1,37
0,31
1,39 988,20 1,37
0,32
1,40 987,88 1,37
0,33
1,41 987,55 1,37
0,34
1,40 987,21 1,38
0,35
1,41 986,86 1,38
0,35
1,41 986,51 1,38
0,36
1,41 986,15 1,39
0,37
1,41 985,78 1,39
0,38
1,41 985,40 1,39
0,39
1,42 985,01 1,39
6
989,73 1,29
0,21
989,52 1,30
0,22
989,30 1,31
0,24
989,06 1,31
0,24
988,82 1,32,
0,26
988,56 1,32
0,26
988,30 1,32
0,27
988,03 1,33
0,29
987,74 1,33
0,29
987,45 1,34
0,31
987,14 1,34
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OIV-MA-AS312-02 : R2009

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OIV-MA-AS312-02 : R2009

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0,43
1,11 967,41
0,45
1,14 966,96
27
0,75 973,58
0,31
0,77 973,27
0,32
0,79 972,95
0,33
0,81 972,62
0,34
0,84 972,28
0,35
0,86 971,93
0,35
0,86 971,58
0,36
0,90 971,22
0,37
0,92 970,85
0,38
0,95 970,47
0,39
0,97 970,08
0,40
0,99 969,68
0,40
1,01 969,28
0,41
1,03 968,87
0,41
1,04 968,46
0,42
1,06 968,04
0,43
1,08 967,61
0,44
1,10 967,17
0,45
1,12 966,72
0,45
1,14 966,27
0,46
1,15 965,81
28
0,77 972,81 0,80
0,34
0,80 972,47 0182
0,34
0,82 972,13 0,85
0,36
0,85 971,77 0,87
0,36
0,87 971,41 0,89
0,37
0,89 971,04 0,91
0,37
0,91 970,67 0,94
0,36
0,93 970,20 0,96
0,40
0,96 969,89 0,98
0,39
0,97 969,50 1,00
0,41
0,99 969,09 1,02
0,42
1,01 968,67 1,04
0,42
1,03 968,25 1,06
0,43
1,05 967,82 1,08
0,43
1,07 967,39 1,10
0,44
1,09 966,95 1,12
0,45
1,11 966,50 1,13
0,45
1,12 966,05 1,16
0,47
1,14 965,58 1,17
0,47
1,16 965,11 1,18
0,47
1,17 964,64 1,20
29
972,01
0,36
971,65
0,37
971,28
0,38
970,90
0,38
970,52
0,39
970,13
0,40
969,73
0,40
969,33
0,42
968,91
0,41
968,50
0,43
968,07
0,44
967,63
0,44
967,19
0,45
966,74
0,45
966,29
0,46
965,83
0,46
965,37
0,48
964,89
0,48
964,41
0,48
963,93
0,49
963,44
30
0,83 971,18
0,39
0,86 970,79
0,39
0,88 970,40
0,40
0,90 970,00
0,40
0,92 969,60
0,42
0,95 969,18
0,42
0,97 968,76
0,42
0,99 968,34
0,43
1,00 967,91
0,44
1,03 967,47
0,45
1,05 967,02
0,46
1,07 966,56
0,45
1,08 966,11
0,47
1,10 965,64
0,47
1,12 965,17
0,48
1,14 964,69
0,48
1,16 964,21
0,50
1,18 963,71
0,49
1,19 963,22
0,50
1,21 962,72
0,51
1,23 962,21
31
0,87 970,31 0,90
0,41
0,89 969,90 0,92
0,41
0,91 969,49 0,95
0,42
0,93 969,07 0,98
0,43
0,96 968,64 1,00
0,44
0,98 968,20 1,01
0,44
1,00 967,76 1,03
0,44
1,02 967,32 1,06
0,46
1,05 966,86 1,07
0,46
1,07 966,40 1,09
0,46
1,08 965,94 1,12
0,47
1,09 965,47 1,13
0,48
1,12 964,99 1,15
0,49
1,14 964,50 1,17
0,49
1,16 964,01 1,19
0,49
1,17 963,52 1,21
0,51
1,20 963,01 1,22
0,50
1,20 962,51 1,24
0,52
1,23 961,99 1,25
0,52
1,25 961,47 1,27
0,52
1,26 960,95 1,29

OIV-MA-AS312-02 : R2009

TABLE I (suite)
to
20
20 973,5
0,36
21 973,2
0,36
22 972,8
0,37
23 972,4
0,38
24 972,0
0,39
25 971,7
0,40
26 971,3
0,40
27 970,9
0,41
28 970,4
0,42
29 970,0
0,44
30 969,6
0,44
31 969,1
0,44
32 968,7
0,45
33 968,3
0,46
34 967,8
0,46
35 967,3
0,47
36 966,9
0,48
37 966,4
0,49
38 965,9
0,49
39 965,4
0,49
40 964,9
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
1,08 972,48
0,37
1,09 972,11
0,37
1,10 971,74
0,39
1,12 971,35
0,40
1,14 970,95
0,40
1,15 970,55
0,41
1,16 970,14
0,42
1,18 969,72
0,43
1,20 969,29
0,43
1,21 968,86
0,45
1,22 968,41
0,45
1,23 967,96
0,46
1,25 967,50
0,46
1,26 967,04
0,47
1,27 966,57
0,48
1,29 966,09
0,48
1,30 965,61
0,49
1,31 965,12
0,50
1,32 964,62
0,50
1,33 964,12
0,51
1,35 963,61
1,08 971,40
0,38
1,09 971,02
0,40
1,12 970,62
0,40
1,13 970,22
0,41
1,14 969,81
0,42
1,16 969,39
0,42
1,17 968,97
0,43
1,18 968,54
0,45
1,20 968,09
0,45
1,22 967,64
0,46
1,23 967,18
0,46
1,24 966,72
0,47
1,25 966,25
0,48
1,27 965,77
0,49
1,29 965,28
0,49
1,30 964,79
0,50
1,32 964,29
0,50
1,33 963,79
0,51
1,34 963,28
0,52
1,36 962,76
0,52
1,37 962,24
1,09 970,31
0,40
1,11 969,91
0,41
1,12 969,50
0,42
1,14 969,08
0,42
1,15 968,66
0,43
1,16 968,23
0,44
1,18 967,79
0,45
1,20 967,34
0,46
1,21 966,88
0,47
1,23 966,41
0,47
1,24 965,94
0,48
1,26 965,46
0,48
1,27 964,98
0,49
1,28 964,49
0,50
1,29 963,99
0,51
1,31 963,48
0,51
1,32 962,97
0,52
1,34 962,45
0,52
1,35 961,93
0,53
1,36 961,40
0,54
1,38 960,86
1,10 969,21
0,42
1,12 968,79
0,42
1,13 968,37
0,43
1,14 967,94
0,44
1,16 967,50
0,45
1,18 967,05
0,46
1,20 966,59
0,46
1,21 966,13
0,47
1,22 965,66
0,49
1,24 965,17
0,49
1,26 964,68
0,49
1,27 964,19
0,50
1,29 963,69
0,50
1,30 963,19
0,51
1,31 962,68
0,52
1,32 962,16
0,53
1,34 961,63
0,53
1,35 961,10
0,54
1,37 960,56
0,54
1,38 960,02
0,55
1,39 959,47
1,11 968,10
0,44
1,13 967,66
0,44
1,15 967,22
0,45
1,17 966,77
0,45
1,18 966,32
0,47
1,20 965,85
0,47
1,21 965,38
0,48
1,23 964,90
0,48
1,24 964,42
0,50
1,25 963,92
0,50
1,26 963,42
0,51
1,28 962,91
0,51
1,29 962,40
0,52
1,31 961,88
0,53
1,33 961,35
0,53
1,34 960,82
0,54
1,35 960,28
0,55
1,37 959,73
0,55
1,38 959,18
0,56
1,40 958,62
0,56
1,41 958,06
1,14 966,96
0,45
1,15 966,51
0,45
1,16 966,06
0,47
1,18 965,59
0,47
1,20 965,12
0,48
1,21 964,64
0,49
1,23 964,15
0,49
1,24 963,66
0,50
1,26 963,16
0,52
1,28 962,64
0,51
1,29 962,13
0,52
1,30 961,61
0,53
1,32 961,08
0,53
1,33 960,55
0,54
1,34 960,01
0,55
1,36 959,46
0,55
1,37 958,91
0,56
1,38 958,35
0,57
1,40 957,78
0,57
1,41 957,21
0,58
1,43 956,63
1,15 965,81
0,46
1,16 965,35
0,48
1,19 964,87
0,48
1,20 964,39
0,49
1,22 963,90
0,49
1,23 963,41
0,50
1,24 962,91
0,51
1,26 962,40
0,52
1,28 961,88
0,53
1,29 961,35
0,53
1,31 960,82
0,53
1,32 960,29
0,54
1,33 959,75
0,55
1,35 959,20
0,56
1,37 958,64
0,56
1,38 958,08
0,57
1,40 957,51
0,57
1,41 956,94
0,58
1,42 956,36
0,58
1,43 955,78
0,59
1,44 955,19
1,17 964,64
0,49
1,20 964,15
0,49
1,21 963,66
0,49
1,22 963,17
0,51
1,24 962,66
0,51
1,26 962,15
0,51
1,27 961,64
0,53
1,29 961,11
0,54
1,31 960,57
0,53
1,31 960,04
0,55
1,33 959,49
0,55
1,35 958,94
0,55
1,36 958,39
0,57
1,38 957,82
0,56
1,38 957,26
0,58
1,40 956,68
0,58
1,41 956,10
0,59
1,43 955,51
0,59
1,44 954,92
0,60
1,46 954,32
0,60
1,47 953,72
1,20 963,44
0,50
1,21 962,94
0,51
1,23 962,43
0,51
1,25 961,92
0,52
1,26 961,40
0,53
1,28 960,87
0,53
1,30 960,34
0,54
1,31 959,80
0,56
1,33 959,24
0,55
1,35 958,69
0,55
1,35 958,14
0,57
1,37 957,57
0,57
1,39 957,00
0,57
1,39 956,43
0,59
1,42 95584
0,58
1,42 955,26
0,60
1,44 954,66
0,60
1,45 954,06
0,60
1,46 953,46
0,61
1,47 952,85
0,62
1,49 952,23
1,23 962,21
0,52
1,25 961,69
0,52
1,26 961,17
0,53
1,28 960,64
0,54
1,30 960,10
0,54
1,31 959,56
0,54
1,32 959,02
0,56
1,34 958,46
0,57
1,35 957,89
0,56
1,36 957,33
0,58
1,39 956,75
0,58
1,40 956,17
0,58
1,41 955,59
0,59
1,43 955,00
0,59
1,43 954,41
0,60
1,45 953,81
0,61
1,46 953,20
0,61
1,47 952,59
0,62
1,49 951,97
0,62
1,50 951,35
0,63
1,51 950,72
1,26 960,95
0,53
1,27 960,42
0,54
1,29 959,88
0,55
1,31 959,33
0,55
1,32 958,78
0,55
1,33 958,23
0,57
1,36 957,66
0,56
1,36 957,10
0,59
1,38 956,51
0,58
1,40 955,93
0,58
1,40 955,35
0,60
1,42 954,75
0,59
1,43 954,16
0,61
1,45 953,55
0,60
1,46 952,95
0,62
1,48 952,33
0,62
1,49 951,71
0,62
1,50 951,09
0,63
1,51 950,4
0,64
1,53 949,82
0,64
1,54 949,18
1,29
1,31
1,32
1,33
1,35
1,37
1,38
1,40
1,41
1,42
1,44
1,44
1,46
1,47
1,49
1 50
1,51
1,53
1,54
1,55
1,57

OIV-MA-AS312-02 : R2009

Titre alcoomtrique international 20oC

Table de corrections effectuer sur le titre alcoomtrique apparent pour corriger laction de la temprature
Ajouter ou retrancher au titre alcoomtrique apparent toC (alcoomtre en verre ordinaire) la correction indique ci-dessous
10
11
12
13
14
15
16
0,76
0,77
0,82
0,87
0,95
1,04
1,16
1,31
1,49
1,70
1,95
2,26
2,62
3,03
3,49
4,02
4,56
1
2o
3o
4o
0,81
0,85
0,88
0,90
0,83
0,87
0,91
0,92
0,87
0,92
0,95
0,97
0,92
0,97
1,00
1,02
1,00
1,04
1,07
1,09
1,09
1,13
1,15
1,17
1,20
1,24
1,26
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1,74
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1,97
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0,91
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1,07
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2,01
1,92
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1,71
2,23
2,12
2,00
1,97
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0,25
6
7o
8o
9o
10o
o
11
12o
13o
14o
16
17o
18o
19o
ajouter
Tempratures
Titres alcoomtriques apparents toC

OIV-MA-AS312-02 : R2009
TABLE II

0
o
21
26o
27o
28o
29o
30o
31o
32o
33o
34o
35o
36o
37o
38o
39o
40o
retrancher
Tempratures
22
23o
24o
25o
10
11
12
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15
16
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5,19
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5,36
4,37
4,65
4,94
5,23
5,53

OIV-MA-AS312-02 : R2009
TABLE II (suite)
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
0o
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1o
2o
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5o
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6o
7o
8o
9o
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5,77
5,34
4,92
4,50
5,80
5,37
4,95
4,53
10o
ajouter
Tempratures

28
29
30
2,06
2,24
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2,80
2,98
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11o
12o
13o
14o
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1,49
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15o
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0,80
0,41

OIV-MA-AS312-02 : R2009
TABLE II (suite)

15
16
17
18
19
20
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22
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24
25
26
27
28
29
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21o
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2,74
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35o
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6,57
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6,08
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6,81
7,18
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6,17
6,54
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7,66
26
27o
28o
29o
30o
o
31
32o
33o
34o
36
37o
38o
39o
40o
retrancher
Tempratures
14
0,40
0,80
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1,59
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3,17
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4,33
4,72
5,10
5,49
6,25
6,63
7,01
7,39
7,76

OIV-MA-AS312-02 : R2009
TABLE II (suite)
TABLE III

5
6
7
to
999,34
--0,09
999,43
--0,06
999,49
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999,54
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2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
11
20
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1,17 988,88
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10
11
986,63
-0,03
986,66
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986,68
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1,02
1,04
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1,06
1,07
1,08
1,09
1,10
1,11
1,12
1,13
1,14
1,15
1,16
1,17

OIV-MA-AS312-02 : R2009
Titre alcoomtrique international 20OC

Table des masses volumiques apparentes des mlanges hydroalcooliques Appareils en verre ordinaire
Masses volumiques toC corrigs de la pousse de lair
TABLE III (suite)
t
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
12
40
0
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1
2
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0,32
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OIV-MA-AS312-02 : R2009

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OIV-MA-AS312-02 : R2009

TABLE III (suite)
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0,50
1,24 961,71
0,51
1,26 961,20
0,52
1,28 960,68
0,53
1,29 960,16
0,53
1,31 959,63
0,53
1,32 959,10
0,53
1,33 958,57
0,55
1,35 958,02
0,55
1,36 957,47
0,56
1,38 956,91
0,56
1,39 956,35
0,57
1,40 955,78
0,58
1,42 955,20
0,58
1,44 954,62
0,59
1,45 954,03
0,60
1,46 953,43
0,60
1,48 952,83
0,60
1,49 952,23
0,61
1,50 951,62
0,62
1,51 951,00
1,26 960,95
0,52
1,28 960,43
0,52
1,29 959,91
0,53
1,30 959,38
0,54
1,32 958,84
0,54
1,33 958,30
0,55
1,35 957,75
0,55
1,37 957,20
0,56
1,38 956,64
0,56
1,39 956,08
0,58
1,41 955,50
0,58
1,43 954,92
0,58
1,44 954,34
0,59
1,45 953,75
0,60
1,47 953,15
0,60
1,48 952,55
061
1,49 951,94
0,61
1,50 951,33
0,61
1,51 950,72
0,62
1,52 950,10
0,64
1,54 949,49
1,39 957,75
0,56
1,40 957,19
0,57
1,42 956,62
0,57
1,43 956,05
058
1,45 955,47
1,2
1,3
1,3
1,3
1,3
1,3
1,3
1,4
1,4
1,4
1,4
1,4
1,4
1,4
1,4
1,5
1,5
1,5
1,5
1,5
1,5
16

OIV-MA-AS312-02 : R2009

TABLE IV
Table de correspondence entre les indices de refraction 20 C et les titres alcoomtriques
20 C des mlanges hydroalcooliques purs et des distillats
Indice de
rfraction
20 C
1.33628
1.33642
1.33656
1.33670
1.33685
1.33699
1.33713
1.33727
1.33742
1.33756
1.33770
1.33784
1.33799
1.33813
1.33827
1.33841
1.33856
1.33870
1.33884
1.33898
1.33912
1.33926
1.33940
1.33955
1.33969
1.33983
1.33997
1.34011
1.34025
1.34039
1.34053
1.34067
1.34081
1.34096
1.34110
1.34124
1.34138
1.34152
1.34166
1.34180
1.34194
1.34208
Titres alcoomtriques 20 oC
Mlanges
hydroalcooliques
6.54
0.25
6.79
0.26
7.05
0.25
7.30
0.28
7.58
0.25
7.83
0.26
8.09
0.25
8.34
0.28
8.62
0.25
8.87
0.25
9.12
0.24
9.36
0.27
9.63
0.24
9.87
0.25
10.12
0.23
10.35
0.26
10.61
0.25
10.86
0.24
11.10
0.23
11.33
0.24
11.47
0.24
11.81
0.24
12.05
0.25
12.30
0.23
12.53
0.23
12.76
0.24
13.00
0.23
13.23
0.24
13.47
0.23
13.70
0.23
13.93
0.23
14.16
0.25
14.41
0.25
14.66
0.23
14.89
0.24
15.13
0.23
15.36
0.23
15.59
0.24
15.83
0.23
16.06
0.23
16.29
0.23
16.52
0.24
Distillats
6.48
6.74
7.00
7.27
7.54
7.79
8.05
8.30
8.56
8.81
9.06
9.30
9.55
9.81
10.05
10.29
10.54
10.78
11.02
11.26
11.50
11.74
11.98
12.22
12.46
12.69
12.92
13.15
13.40
13.62
13.86
14.09
14.32
14.57
14.81
15.06
15.28
15.50
15.74
15.96
16.19
16.41
OIV-MA-AS312-02 : R2009
0.26
0.26
0.27
0.27
0.25
0.26
0.25
0.26
0.25
0.25
0.24
0.25
0.26
0.24
0.24
0.25
0.24
0.24
0.24
0.24
0.24
0.24
0.24
0.24
0.23
0.23
0.23
0.25
0.22
0.24
0.23
0.23
0.25
0.24
0.25
0.22
0.22
0.24
0.22
0.23
0.22
0.24
Indice de
rfraction
20 C
1.34222
1.34236
1.34250
1.34264
1.34278
1.34291
1.34305
1.34319
1.34333
1.34347
1.34361
1.34375
1.34389
1.34403
1.34417
1.34431
1.34445
1.34458
1.34472
1.34486
1.34500
1.34513
1.34527
1.34541
1.34555
1.34568
1.34582
1.34596
1.34610
1.34623
1.34637
1.34651
1.34665
1.34678
1.34692
1.34706
1.34720
1.34733
1.34747
1.34760
1.34774
1.34788
Titres alcoomtriques 20 oC
Mlanges
hydroalcooliques
16.76
0.23
16.99
0.23
17.22
0.22
17.44
0.24
17.68
0.21
17.89
0.23
18.12
0.24
18.36
0.23
18.59
0.23
18.82
0.23
19.05
0.23
19.28
0.23
19.51
0.24
19.75
0.23
19.98
0.24
20.22
0.22
20.44
0.21
20.65
0.24
20.89
0.22
21.11
0.23
21.34
0.21
21.55
0.23
21.78
0.22
22.00
0.23
22.23
0.21
22.44
0.23
22.67
0.23
22.90
0.23
23.13
0.20
23.33
0.24
23.57
0.24
23.81
0.23
24.04
0.22
24.26
0.22
24.48
0.24
24.72
0.23
24.95
0.21
25.16
0.24
25.40
0.22
25.62
0.24
25.86
0.24
26.10
0.22
Distillats
16.65
16.88
17.12
17.34
17.56
17.78
18.01
18.23
18.46
18.70
18.92
19.17
19.40
19.62
19.86
20.09
20.33
20.54
20.76
20.99
21.21
21.44
21.65
21.87
22.10
22.31
22.54
22.75
22.96
23.17
23.40
23.61
23.85
24.09
24.31
24.56
24.78
25.00
25.23
25.45
25.70
25.93
0.23
0.24
0.22
0.22
0.22
0.23
0.22
0.23
0.24
0.22
0.25
0.23
0.22
0.24
0.23
0.24
0.21
0.22
0.23
0.22
0.23
0.21
0.22
0.23
0.21
0.23
0.21
0.21
0.21
0.23
0.21
0.24
0.24
0.22
0.25
0.22
0.22
0.23
0.22
0.25
0.23
0.22
17

Mthanol
Mthode Type IV
Mthanol
Le mthanol est dtermin par chromatographie en phase gazeuse sur le distillat du
vin, additionn dun talon interne.
2. Mthode
2.1 Appareillage
Chromatographe en phase gazeuse avec dtecteur ionisation de flamme.
Colonnes:
- Carbowax 1540, enrob 10 p. 100 en poids sur du Chromosorb W, 60-80
mesh, dans une colonne en acier inoxydable de 7,5 m de long et 1/8 de pouce
de diamtre.
- Carbowax 400 5 p. 100 et Hallcomid M. 18 OL 1 p. 100 enrobs sur
Chromosorb W, 60-80 mesh, dans une colonne en acier inoxydable de 7,5 m
de long et 1/8 de pouce de diamtre.
Dans les deux cas, le Chromosorb W est pralablement activ par chauffage
ltuve 750-800C pendant 4 heures.
Remarque: Dautres types de colonnes peuvent galement permettre une bonne
sparation. Le mode opratoire dcrit ci-dessous est donn titre dexemple.
2.2 Mode opratoire
Prparer une solution hydroalcoolique 1 g/l de ltalon interne mthyl-4pentanol-2) dans lalcool 10% vol.
Prparer la solution doser en ajoutant 5 ml de cette solution 50 ml de
distillat de vin obtenu comme il est indiqu au chapitre Titre alcoomtrique.
Prparer une solution de rfrence de mthanol 100 mg/l dans lthanol
10% vol. Ajouter 5 ml de solution dtalon interne 50 ml de cette solution.
Injecter dans le chromatographe 2 l de la solution de rfrence, additionnes
de ltalon interne.
La temprature du four est de 90 C et le dbit du gaz vecteur de 25 ml/min.
2.3 Calculs
Soit:
S = la surface du pic du mthanol dans la solution de rfrence,
Sx = la surface du pic du mthanol dans la solution doser,
i = la surface du pic dtalon interne dans la solution doser,
I = la surface du pic de ltalon interne dans la solution de rfrence.
OIV-MA-AS312-03A : R2009

Mthanol
La teneur en mthanol, exprime en milligrammes par litre, est donne par la

relation :
100 I x
OIV-MA-AS312-03A : R2009
Sx

Mthanol
Mthode Type IV
Mthanol
Le mthanol est oxyd en mthanal par le permanganate de potassium acidul par
lacide phosphorique sur le distillat du vin amen par dilution contenir 5 p. 100
(v/v). Le mthanal est ensuite dos grce la coloration violette quil donne en
milieu sulfurique avec lacide chromotropique, lintensit de la coloration tant
dtermine au spectrophotomtre 575 nm.
3. Mthode
3.1 Ractifs
3.1.1 Acide chromotropique
2H2O de
Acide di-hydroxy 4,5-naphthalne di-sulfonic 2,7 C10H8O8S2
poids molculaire 356,34 g.
Poudre blanche ou brun clair, soluble dans leau. On emploi galement le sel
disodique de cet acide qui se prsente sous forme dun produit jaune ou brun
clair, trs soluble dans leau.
Purification Lacide chromotropique doit tre pur et ne donner quune
coloration ngligeable dans lessai blanc des ractifs prpars avec lui. Dans
le cas contraire, on peut le purifier par le procd suivant :
Dissoudre 10 g dacide chromotropique ou de sel dans 25 ml deau distille. Si
cest le sel qui a t utilis, ajouter 2 ml dacide sulfurique concentr ( =
1,84 g/ml) pour librer lacide. Ajouter 50 ml de mthanol, chauffer
lbullition et filtrer. Ajouter 100 ml dalcool isopopylique pour prcipiter
lacide libre pur cristallis, laisser scher froid les cristaux essors.
Raction Laddition de chlorure ferrique (I goutte) 10 ml dune solution
0,1 g/p.1000 donne une coloration verte.
Essai de sensibilit - Diluer 0,5 ml de solut officinal de formaldhyde 1000
ml avec de leau. A 5 ml de solution 0,05 p. 100 dacide chromotropique dans
lacide sulfurique 75% (v/v), ajouter 0,1 ml de solution de formaldhyde cidessus et chauffer 70C pendant 20 min. Il doit se produire une coloration
violette.
3.1.2 Solution dacide chromotropique 0,05 p. 100 dans lacide sulfurique
75 p. 100 (v/v).
Dissoudre 50 mg dacide chromotropique ou de son sel de sodium dans 35 ml
deau distille. Placer cette solution dans un bain deau et de glace et ajouter
OIV-MA-AS312-03B : R2009

Mthanol
avec prcaution par petites portions et en agitant 75 ml dacide sulfurique

concentr (= 1,84 g/ml).
Cette solution doit tre prpare au moment de lemploi.
3.1.3 Solution talon de mthanol 5 g/l dalcool 5 p. 100 (v/v)
....................... 0.5 g
Mthanol pur (E760 = 64,7 0,2)
........................ 50 ml
Alcool absolu (exempt de mthanol)
......................................... 1 litre
Eau distille q.s.p.
3.1.4 Solution de dilution

........................ 50 ml
Alcool absolu (exempt de mthanol)
......................................... 1 litre
Eau distille q.s.p.
3.1.5 Solution dacide phosphorique 50 p. 100 (m/v)
3.1.6 Solution de permanganate de potassium 5 p. 100 (m/v)
3.1.7 Solution de sulfite neutre de sodium 2 p. 100 (m/v)
Solution rapidement oxyde par lair. Vrifier son titre par titrage
iodomtrique.
3.2 Mode opratoire
Diluer le distillat de vin (voir chapitre Titre alcoomtrique) de manire
ramener son titre alcoomtrique 5% vol.
Dans un tube essai bouch lmeri, placer 0,5 ml de ce distillat dilu,
ajouter I goutte dacide phosphorique 50 p. 100, II gouttes de solution de
permanganate de potassium 5 p. 100, agiter et laisser au repos 10 min.
Dcolorer le permanganate par quelques gouttes, IV en gnral, de solution 2
p. 100 de sulfite neutre de sodium (viter tout excs). Ajouter 5 ml de solution
sulfurique d'acide chromotropique 0,05 p. 100. Porter dans un bain d'eau
70C pendant 20 min. Laisser refroidir.
Dterminer labsorbance As, 570 nm, le zro de lchelle des absorbance
tant rgl sur le tmoin prpar avec 0,5 ml de solution de dilution.
Etablissement de la courbe dtalonnage
Dans une srie de ballons jaugs de 50 ml, placer 2,5-5-10-15-20-25 ml de
solution de mthanol 0,5 g/l dans lalcool 5 p. 100. Complter au trait de
jauge avec la solution hydroalcoolique de dilution 5 p. 100. Ces solutions
contiennent, par litre, dans lalcool 5 p. 100, 25-50-100-150-200-250 mg de
mthanol.
Traiter 0,5 ml de solution hydroalcoolique de dilution et 0,5 ml de chacune de
ces solutions talons, simultanment et selon la mme technique que le distillat
de vin ramen une teneur en alcool de 5 p. 100.
OIV-MA-AS312-03B : R2009

Mthanol
Dterminer labsorbance de ces solutions 570 nm, dans les conditions cidessus.
La reprsentation graphique des absorbances des solutions talons en fonction
des concentrations est une droite.
3.3 Calculs
Dterminer la teneur en mthanol, exprime en mg/l du distillat de vin ramen
un titre alcoomtrique de 5% vol., en reportant AS sur la droite dtalonnage.
Exprimer la teneur du vin en mg/l en tenant compte de la dilution effectue
pour ramener son titre 5% vol.
OIV-MA-AS312-03B : R2009

Glycrol et 2,3-Butanediol
Mthode Type IV
Glycrol et 2,3-Butanediol P 143

1. Principe
Aprs un traitement par une colonne de rsine changeuse danions pour fixer les
sucres et une quantit importante de mannitol et de sorbitol, on oxyde le glycrol et
le 2,3 butanediol par de lacide priodique. La combinaison obtenue par action de
la phloroglucine sur le mthanal, lui-mme form par oxydation du glycrol, est
dose colorimtriquement 480 nm. La combinaison de la pipridine et du
nitroprussiate de sodium avec lthanal form par oxydation du 2,3-butanediol est
dose colorimtriquement 570 nm.
2. Appareillage
2.1. Colonne de verre de 300 mm environ de longueur et de 10-11 mm de
diamtre intrieur munie dun rgulateur de dbit (robinet).
2.2. Spectrophotomtre permettant des mesures entre 300 et 700 nm et cuves de 1
cm de trajet optique.
3. Ractifs
3.1. Glycrol, C3H8O3
3.2. 2,3-Butanediol, C4H10O2
3.3. changeur danions de forte basicit, par exemple changeur III de Merck ou
Amberlite IRA 400.
3.4. Polyvinylpyrolidone polymris (PVPP). (Voir Codex nologique international).
3.5. Solution dacide priodique O,1 M dans de lacide sulfurique 0,05 M :
Peser 10,696 g de mtaperiodate de sodium (NaIO4) ; dissoudre dans un
ballon jaug de 500 ml avec 50 ml dacide sulfurique 0,5 M ; amener au
trait de jauge avec de leau distille.
3.6. Solution dacide priodique 0,05 M dans de lacide sulfurique 0,025 M :
Diluer la solution prcdente avec de leau distille 1 + 1.
3.7.
3.8.
3.9.
3.10.
3.11.
Solution dacide sulfurique 0,5 M.

Solution dhydroxyde de sodium 1 M.
Solution dhydroxyde de sodium 5 p. 100 (m/v).
Alcool 96% 100 vol.
Solution de phloroglucine 2 p. 100 (m/v) renouveler tous les jours.
OIV-MA-AS312-04 : R2009

3.12. Solution dactate de sodium anhydre, Na CH3COO 27 p. 100 (m/v).

3.13. Solution de nitroprussiate de sodium, Na2Fe(CN)5NO.2H2O 2 p. 100 (m/v)
renouveler tous les jours.
3.14. Solution de pipridine C5H11N 25 p. 100 (v/v) ; renouveler tous les jours.
3.15. Solution talon de Glycrol.
Prparer une solution contenant 250 mg dans 100 ml de lchantillon du
glycrol dont on dispose et dterminer le titre en glycrol de cet chantillon
par la mthode enzymatique ou par periodimtrie (voir ci-dessous en 6).
Prparer ensuite la solution talon de glycrol en pesant dans une fiole jauge
de 100 ml une masse m correspondant 250 mg de glycrol pur ; porter
au trait de jauge avec de leau.
3.16. Solution talon de 2,3-butanediol
Prparer une solution contenant 250 mg dans 100 ml de lchantillon de 2,3
butanediol dont on dispose et dterminer le titre en 2,3 butanediol de cet
chantillon par periodimtrie (voir ci-dessous en 6).
Prparer ensuite la solution talon de 2,3 butanediol en pesant dans une fiole
jauge de 100 ml une masse m correspondant 250 mg de 2,3-butanediol
pur ; porter au trait de jauge avec de leau.
3.17 Solution cupro-alcaline.
Solution cuprique A
40 g
Sulfate de cuivre, CuSO4.5H20 .........................................
2 ml
Acide sulfurique (r=1.84 g/mL) ...........................................
Eau q.s.p ..... 1000 ml
Solution tartro-alcaline B
Tartrate de sodium et de potassium,
200 g
KNaC4H4O6.4H2O ..........................................................
Hydroxyde de sodium ............................................................. 150 g
Eau q.s.p .... 1000 ml
La solution cupro-alcaline est obtenue en mlangeant, au moment de lemploi,
les solutions A et B parties gales.
4. Mode opratoire
4.1. Prparation de la colonne dchangeur danions
La rsine changeuse danions (qui se trouve en gnral sous la forme C1-) doit
tre conserve dans un flacon en tant recouverte deau distille dcarbonique.
Introduire 30 ml de rsine changeuse danions dans la colonne. Placer la
partie suprieure de la colonne un tampon de coton de verre ; on vite ainsi les
inclusions daire dans le lit de rsine. Faire passer 150 ml de solution
dhydroxyde de sodium 5 p. 100 avec un dbit de 3,5 5 ml par minute et
faire passer ensuite avec le mme dbit une quantit deau distille
OIV-MA-AS312-04 : R2009

dcarbonique jusqu raction neutre ou lgrement alcaline la

phnolphtaline. La rsine est alors prte lemploi.
Lchangeur danions ne peut servir quune seule fois. Aprs, il doit tre
rgnr avec de lacide chlorhydrique 5 p. 100 pendant quelques heures ; on
lave ensuite avec de leau jusqu ce que leau de rinage soit exempte de
chlorures (vrifier labsence de chlorures).
Diluer le vin au 1/5 (10 ml/50 ml).
Dans le cas de vins fortement colors, procder une dcoloration pralable ay
moyen de PVPP : placer 10 ml de vin dans une fiole jauge de 50 ml ; diluer
avec de leau (20 ml) et ajouter 300 mg de PVPP ; agiter de temps en temps
pendant 20 minutes, ajuster au trait de jauge et filtrer sur papier filtre pliss.
Prlever 10 ml de la dilution de vin (trait ou non au PVPP) et les mettre sur
lchangeur danions. Laisser le vin dilu scouler goutte goutte de faon
ne pas dpasser un dbit de 2 ml par minute. Quand le niveau du vin dilu
arrive 5-10 mm au-dessus du coton de verre, faire passer de leau distille
dcarbonique en quantit suffisante pour amener le volume de lluat 100
ml, la vitesse de 2-3 ml par minute. Il faut vrifier que lluat est exempt de
sucres. Pour cela, on fait bouillir brivement 5 ml dluat avec 5 ml de solution
cuproalcaline ; il ne doit se produire ni coloration ni prcipit.
4.3. Dosage du glycrol.
4.3.1. Dosage photomtrique.
Introduire dans une fiole conique de 100 ml bouchage meri :
10 ml dluat et ajouter successivement
10 ml deau distille et
10 ml de solution 0,05 M dacide priodique.
Agiter avec prcaution pour bien mlanger et laisser loxydation seffectuer
pendant 5 minutes (exactement mesures). Ajouter ensuite : 10 ml de solution
dhydroxyde de sodium 1 M et 5 ml dalcool 96% vol.
Agiter aprs chaque addition, puis ajouter : 10 ml de solution de phloroglucine.
Mlanger rapidement et transvaser la solution dans la cuve
spectrophotomtrique de 1 cm de trajet optique. La coloration violette obtenue
volue trs rapidement, son intensit passe par un maximum au bout de 50 60
secondes et diminue ensuite. Noter labsorbance maximale. La mesure est
effectue par rapport une couche daire quivalente la longueur donde de
480 nm.
4.3.2. Etablissement de la courbe dtalonnage.
Mettre dans des fioles jauges de 100 ml :
OIV-MA-AS312-04 : R2009

3,0 4,0 5,0 - 6,0 7,0 et 8,0 ml de solution talon de glycrol et ajuster aux
traits de jauge avec de leau distille.
Ces solutions correspondent, dans les conditions dcrites au point 4.2., aux
concentrations suivantes :
3,75 5,00 6,25 7,50 8,75 et 10,00 g/l de glycrol.
Procder au dosage dcrit en 4.3.1. en mettant chaque fois le mme volume
de solution-talon la place de lluat. La droite dtalonnage ne passe pas par
lorigine.
4.4. Dosage du 2,3-butanediol
4.4.1. Dosage photomtrique
Introduire dans une fiole conique de 100 ml bouchage meri :
20 ml dluat et ajouter successivement :
5 ml de la solution dactate de sodium et
5 ml de la solution 0,1 M dacide priodique.
Agiter doucement pour mlanger et laisser au repos 2 minutes exactement pour
que loxydation se produise.
Ajouter :
5 ml de la solution de nitroprussiate de sodium et
5 ml de la solution de pipridine.
Transvaser la solution dans la cuve spectrophotomtrique de 1 cm dpaisseur.
La coloration violette obtenue volue trs rapidement : son intensit est
maximale au bout de 30 40 secondes et diminue ensuite. Noter labsorbance
maximale. La mesure est effectue par rapport la couche daire quivalente
sur la longueur donde de 570 nm.
4.4.2. Etablissement de la courbe dtalonnage
Mettre 10,0 ml de solution talon de 2,3-butanediol dans une fiole jauge de
100 ml et ajuster au trait de jauge avec de leau distille. A partir de cette
solution, prparer les solutions talons en mettant respectivement dans des
fioles jauges de 100 ml :
2,0 4,0 6,0 8,0 et 10,0 ml et en ajustant chaque fois au trait de jauge
avec de leau distille.
Ces solutions correspondent, dans les conditions dcrites en 4.2., aux
concentrations suivantes :
0,25 0,50 0,75 1,00 et 1,25 g/l de 2,3-butanediol.
Procder au dosage dcrit au point 4.4.1. en mettant la place de lluat le
mme volume de chacune des solutions talons. La droite dtalonnage ne
passe pas par lorigine.
5. Calcul et expression des rsultats
5.1. Glycrol
5.1.1. Mode de calcul
OIV-MA-AS312-04 : R2009

Lire la teneur en glycrol sur la courbe dtalonnage. Le rsultat sexprime en

g/l avec une dcimale.
5.1.2. Rptabilit
5.1.3. Reproductibilit
5.2. 2,3-Butanediol
Lire la teneur en 2,3-butanedial sur la courbe dtalonnage. Le rsultat
sexprime en g/l avec deux dcimales.
5.2.2. Rptabilit
5.2.3. Reproductibilit
6. Titrage Priodimtrique du glycrol et du 2,3-butanediol.
6.1. Ractifs.
6.1.1. Solution dhydroxyde de sodium 1 M
6.1.2. Solution dacide sulfurique 0,5 M
6.1.3. Solution dacide priodique 0,025 M
6.1.4. Solution dhydrognocarbonate de sodium, NaHCO3 8 p. 100 (m/v).
6.1.5 Solution darsnite de sodium 0,025 M.
Dans une fiole jauge de 1000 ml, dissoudre 2,473 g danhydride arsnieux,
As2O3 avec 30 ml dhydroxyde de sodium 1 M, ajouter 35 ml dacide
sulfurique 0,5 M et ajuster au trait de jauge avec de leau distille.
6.1.6. Solution diode 0,025 M.
6.1.7. Solution diodure de potassium 10 p. 100 (m/v).
6.1.8. Solution dempois damidon 2 p. 100 (m/v).
6.2. Mode opratoire
Dans une fiole conique de 300 ml, mettre :
5 ml de la solution de lchantillon de glycrol (3.15)
45 ml deau distille
ou 25 ml de la solution de lchantillon de 2,3-butanediol (3.16)
25 ml deau distille.
Ajouter alors :
20 ml dacide priodique 0,025 M, puis laisser au repos 15 minutes en
agitant de temps en temps,
10-20 ml de solution dhydrognocarbonate de sodium
20 ml de la solution darsnite de sodium,
Laisser au repos 15 minutes en agitant de temps en temps, ajouter :
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5 ml de la solution diodure de potassium

2 ml dempois damidon.
Titrer larsnite de sodium excdentaire avec la solution diode 0,025 M.
Effectuer paralllement un essai blanc en utilisant 50 ml deau distille et les
mme quantits de ractifs.
6.3. Mode de calcul
6.3.1. Glycrol
1 ml dacide priodique 0,025 M oxyde 1,151 mg de glycrol.
La teneur en glycrol en g/l de la solution de lchantillon de glycrol (3-15)
est :
(X B) x 1,151
G=
Le titre en p. 100 en glycrol de lchantillon de glycrol (3.1) utilis est :
G _ X 100
2,5
X = ml de la solution diode 0,025 M. consomms par la solution de
lchantillon utilis (3.15).
B = ml de la solution diode 0,025 M consomms dans lessai blanc.
a = ml de la prise dessai de la solution (3.15) (gal 5 ml)
6.3.2. 2,3-Butanediol
1 ml dacide priodique 0,025 M oxyde 2,253 mg de 2,3-butanediol.
La teneur en 2,3-butanediol en g/l de la solution de lchantillon de 2,3butanediol (3.16.) est :
BD =
(X' B') x 2,253

b
Le titre en p.100 en 2,3-butanediol de lchantillon de 2,3 butanediol (3.2)

utilis est
BD 100
2,5
X = ml de la solution diode 0,025 M. consomms par la solution de
lchantillon utilis (3.16).
B = ml de la solution diode 0,025 M consomms dans lessai blanc
B = ml de la prise dessai de la solution (3.16) (tal 25 ml).
OIV-MA-AS312-04 : R2009

BIBLIOGRAPHIE
REBELEIN H., Z. Lebensm. Unters. U. Forsch., 1957, 4, 296, F.V. O.I.V., N 63.
TERCERO C., SANCHEZ O., F.V. O.I.V., 1977, n 651 et 1981, N 731
OIV-MA-AS312-04 : R2009

Glycrol Mthode enzymatique
Mthode Type IV
Glycrol
1. Principe
La glycrokinase (GK) catalyse la phosphorylation du glycrol en glycrol-3phospate par ladnosine-5-triphosphate (ATP) (1) :
(1)
GK
Glycerol + ATP
glycerol-3-phosphate + ADP
Ladnosine-5-diphosphate (ADP) form est nouveau transform en ATP par le

phosphonol-pyruvate (PEP) en prsence de pyruvate-kinase (PK) avec formation
de pyruvate (2) :
(2)
PK
ADP + PEP
ATP + pyruvate
Le pyruvate est rduit en lactate par le nicotinamide-adnine dinuclotide rduit

(NADH) en prsence de lactate-dshydrognase (LDH) (3) :
(3)
LDH
pyruvate + NADH + H+
lactate + NAD+
La quantit de NAD+ form durant la raction est proportionnelle la quantit de

glycrol. Loxydation de NADH est mesure par la diminution de son extinction
la longueur donde de 334 nm, 340 nm ou 365 nm.
2. Appareillage
2.1. Spectrophotomtre permettant deffectuer les mesures 340 nm, maximum
dabsorption du NADH.
A dfaut, photomtre spectre discontinu permettant deffectuer les mesures
334 nm ou 365 nm.
2.2. Cuves de verre de 1 cm de trajet optique ou cuves usage unique.
2.3. Micropipettes permettant de prlever des volumes allant de 0,02 2 ml.
3. Ractifs
3.1. Tampon (glycylglycine 0,75 M, Mg2+ 10-3 M, pH = 7,4) :
OIV-MA-AS312-05 : R2009

Dissoudre 10,0 g de glycylglycine et 0,25 g de sulfate de magnsium,

MgSO4,7H20, dans environ 80 ml deau bidistille ; ajouter environ 2,4 ml de
NaOH (5M) pour obtenir un pH de 7,4 et ajuster le volume 100 ml.
Cette solution peut se conserver environ trois mois + 4C.
3.2. (NADH 8,2.10-3 M, ATP 33. 10-3 M, PEP 46. 10-3 M)
Dissoudre :
42 mg de nicotinamide-adnine-dinuclotide rduit Na2,
120 mg dadnosine-5-triphosphate, Na2H2,
60 mg de phosphonolpyruvate, Na et
300 mg dhydrognocarbonate de sodium (NaHCO3)
dans 6 ml deau bidistille.
Cette solution se conserve pendant 2-3 jours + 4 C.
3.3. Pyruvate-kinase/lactate-dshydrognase (PK/LDH)
(3 mg PK/ml, 1 mg LDH/ml)
Utiliser la suspension sans la diluer.
Le mlange peut se conserver environ un an + 4 C.
3.4. Glycrokinase, GK (1 mg/ml)
La suspension peut se conserver environ un an + 4 C.
Remarque : Lensemble des ractifs ncessaires pour ce dosage est
commercialis.
Le dosage du glycrol seffectue gnralement directement sur le vin, aprs
dilution avec de leau bidistille de sorte que la concentration en glycrol de la
dilution se situe entre 30 et 500 mg/l (quantit de glycrol dans la prise dessai
comprise entre 3 et 50 g). Une dilution au 1/50 (2 ml dans 100 ml) est
gnralement suffisante.
5. Mode opratoire
Le spectrophotomtre tant rgl sur la longueur donde 340nm, les mesures
dabsorbance se font dans les cuves de 1 cm de trajet optique, labsorbance zro
tant rgle par rapport lair (pas de cuve sur le trajet optique).
Dans les cuves de 1 cm de trajet optique introduire :
Solution 3.1 ..
Solution 3.2 ..
Essai ....
Eau ...
Suspension 3.3. ...
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Tmoin
1,00 ml
0,10 m l
2,00 ml
0,01 ml
Dosage
1,00 ml
0,10 ml
0,10 ml
1,90 ml
0,01 ml

Mlanger ; au bout de 5 min. environ, lire les absorbances (A1). Dclencher la

raction par addition de :
Suspension 3.4
0,01 ml
0,01 ml
Mlanger, attendre la fin de la raction (environ 5 10 min.) et lire les absorbances

des solutions (A2). Si la raction nest pas termine au bout de 10 min., continuer
lire les absorbances de 2 min. en 2 min., jusqu ce que la diminution de
labsorbance soit constante sur 2 min.
Dterminer les diffrences dabsorbance :
A2 A1
pour le tmoin et pour le dosage.
Dduire la diffrence dabsorbance du tmoin (AT) de celle du dosage (AD) et
tablir :
(A = (AD)- (AT)
6.1. Mode de calcul
La concentration en grammes par litre est donne par la formule gnrale :
C=
V x PM ____
x d x v x 1000
x A
V = volume du test en ml (ici 3,12 ml)

v = volume de lchantillon en ml (ici 0,1 ml)
PM = poids molculaire de la substance doser (ici glycrol = 92,1)
d = trajet optique de la cuve (ici 1 cm)
= coefficient dabsorption du NADH 340 nm :
= 6,3 (mmole-1 x l x cm-1)
On obtient :
C = 0,456 x A x F
F = facteur de dilution
Remarque :
- mesure 334 nm, = 6,2 (mmole-1 x l x cm-1)
C = 0,463 x A x F
- mesure 365 nm; = 3,4 (mmole-1 x l x cm-1)
C = 0,845 x A x F
6.2. Rptabilit
OIV-MA-AS312-05 : R2009

6.3. Reproductibilit
BIBLIOGRAPHIE
BOEHRINGER , Mannheim, Mthodes danalyse enzymatique en chimie
OIV-MA-AS312-05 : R2009
RECUEIL INTERNATIONAL DES METHODES DANALYSE OIV

Ethanol
Mthode Type II
Determination par spectrometrie de masse isotopique du

rapport disotopes 13C/12C de lethanol du vin ou de celui
obtenu par fermentation des mouts, des mouts concentres
ou du sucre de raisin
1. CHAMP DAPPLICATION
La mthode permet la mesure du rapport isotopique 13C/12C de l'thanol du vin et
de celui de lthanol obtenu aprs fermentation des produits drivs de la vigne
(mot, mot concentr, sucre de raisin).
2. REFERENCES NORMATIVES
ISO 5725 : 1994 Fidlit des mthodes dessai- Dtermination de la rptabilit
et de la reproductibilit dune mthode dessai normalise par essais
interlaboratoires.
V-PDB : Vienna-Pee-Dee Belemnite (RPDB = 0,0112372).
Mthode OIV Dtection de lenrichissement des mots , des mots concentrs,
du sucre de raisin et des vins par application de la rsonance magntique nuclaire
du deutrium (RMN-FINS):
3. TERMES ET DEFINITIONS
13 12
C/ C : rapport des isotopes du carbone 13 et du carbone 12 pour un chantillon
donn
13C : teneur en carbone 13 (13C) exprime en parties pour mille ()
RMN-FINS : Fractionnement Isotopique Naturel Spcifique tudi par
Rsonance Magntique Nuclaire
V-PDB : Vienna-Pee-Dee Belemnite. Le PDB, rfrence primaire pour la mesure
des variations naturelles des teneurs isotopiques en carbone 13, tait un carbonate
de calcium provenant dun rostre de blemnite du Crtac de la formation Peedee
de la Caroline du sud (USA). Son rapport isotopique 13C/12C ou RPDB est
RPDB = 0,0112372. Le PDB est puis depuis longtemps mais est
rest la rfrence primaire pour exprimer les variations naturelles des teneurs
isotopiques en carbone 13, contre laquelle sont calibrs les matriaux de rfrence,
disponibles lAgence Internationale de lEnergie Atomique (IAEA) Vienne
(Autriche).
OIV-MA-AS312-06 : R2001

Ethanol
Les dterminations isotopiques des abondances naturelles en carbone 13 sont alors

exprimes, par convention, par rapport au V-PDB.
m/z : rapport masse sur charge
4. PRINCIPE
Lors de la photosynthse, lassimilation du gaz carbonique par les vgtaux
seffectue selon deux principaux types de mtabolismes qui sont les mtabolismes
C3 (cycle de Calvin) et C4 (Hatch et Slack). Ces deux mcanismes de
photosynthse prsentent un fractionnement isotopique diffrent. Ainsi, les
produits issus des plantes C4 , tel que les sucres et lalcool driv par fermentation,
prsentent des teneurs en carbone 13 plus leves que celles de leurs homologues
provenant des plantes C3. La plupart des vgtaux tels que la vigne et la betterave,
appartiennent au groupe C3. La canne sucre et le mas appartiennent au groupe
C4. La mesure de la teneur en carbone 13 permet donc la dtection et la
quantification du sucre dorigine C4 (sucre de canne ou l'isoglucose de mas) ajout
aux produits drivs du raisin (mots de raisins, vins...). Les informations
combines de la teneur en carbone 13 avec celles obtenues par RMN-FINS
permettent galement la quantification de l'addition de mlanges de sucres ou
dalcools dorigine des plantes C3 et C4.
La teneur en carbone 13 est dtermine sur le gaz carbonique rsultant de la
combustion complte de l'chantillon. Les abondances des principaux isotopomres
de masses 44 (12C16O2), 45 (13C16O2 et 12C17O16O) et 46 (12C16O18O), rsultant des
diffrentes combinaisons possibles des isotopes 18O, 17O, 16O, 13C et 12C, sont
dtermines partir des courants ioniques mesurs sur trois collecteurs diffrents
dun spectromtre de masse isotopique. Les contributions des isotopomres
13 17 16
C O O et 12C17O2 peuvent tre ngliges en raison de leur trs faible abondance.
Le courant ionique pour m/z = 45 est corrig de la contribution de 12C17O16O qui est
calcule en fonction de lintensit du courant mesur pour m/z = 46 en considrant
les abondances relatives de 18O et 17O (correction de Craig). La comparaison avec
une rfrence calibre contre la rfrence internationale V-PDB permet le calcul de
la teneur en carbone 13 sur l'chelle relative 13C.
5. REACTIFS
Les matriaux et les consommables dpendent de lappareillage (6) utilis par le
laboratoire. Les systmes gnralement utiliss sont ceux fonds sur lanalyseur
lmentaire. Celui ci peut tre quip pour l'introduction dchantillons placs dans
des capsules mtalliques scelles, ou pour linjection dchantillons liquides
travers un septum au moyen dune seringue.
Selon le type dinstrumentation utilis, les matriaux de rfrence, ractifs et
consommables suivants peuvent tre utiliss :
OIV-MA-AS312-06 : R2001

Ethanol
- Matriaux de rfrence disponibles auprs de lIAEA :

Nom
Matriel
13C versus V-PDB (9)
- IAEA-CH-6
saccharose
-10,4
-IAEA-CH-7
polythylne
-31,8
- NBS22
huile
-29,7
- USGS24
graphite
-16,1
disponibles auprs de lIRMM de Geel (B) (Institut des Matriaux et Mesures de
Rfrence) :
Matriel
13C versus V-PDB (9)
alcool de vin
-26,93
glucose
-10,75
solution hydroalcoolique
-26,72
(TAV 12%)
Echantillon standard de travail ayant un rapport 13C/12C connu calibr contre les
matriaux de rfrence internationaux.
La liste indicative de consommables ci-dessous est tablie pour les systmes flux
continu :
Nom
- CRM 656
- CRM 657
- CRM 660
- Hlium pour analyse (CAS 07440-59-7)

- Oxygne pour analyse (CAS 07782-44-7)
- Dioxyde de carbone pour analyse, utilis comme gaz de rfrence secondaire
pour la teneur en carbone 13 (CAS 00124-38-9)
- Ractif d'oxydation pour le four du systme de combustion comme par exemple
oxyde de cuivre () pour analyse lmentaire (CAS 1317-38-0)
- Desschant pour liminer de l'eau produite par la combustion. Par exemple
anhydrone pour analyse lmentaire (perchlorate de magnsium) (CAS 10034-818).
Non ncessaire pour les appareillages quips avec un sytme dlimination de
l'eau par cryopigeage ou au moyen d'un capillaire slectivement permable.
6. APPAREILLAGE ET MATERIEL
6.1. Spectromtre de masse de rapport isotopique (SMRI)
Spectromtre de masse de rapport isotopique (SMRI), permettant de dterminer la
teneur relative de 13C du gaz CO2 en abondance naturelle avec une prcision
interne de 0,05 ou mieux exprime en valeur relative (9). La prcision interne
est ici dfinie comme la diffrence entre deux mesures du mme chantillon de
CO2. Le spectromtre de masse, destin la mesure des rapports isotopiques, est
OIV-MA-AS312-06 : R2001

Ethanol
gnralement quip dun collecteur triple pour mesurer simultanment les

intensits pour m/z = 44, 45 et 46. Le spectromtre de masse de rapport isotopique
doit, soit tre quip d'un systme d'introduction double, pour mesurer en
alternance l'chantillon inconnu et un chantillon de rfrence, soit utiliser un
systme intgr qui effectue la combustion quantitative des chantillons et spare
le dioxyde de carbone des autres produits de combustion pralablement la mesure
dans le spectromtre de masse.
6.2. Appareillage de combustion
Appareillage de combustion capable de convertir quantitativement l'thanol en
dioxyde de carbone et dliminer tous les autres produits de combustion y compris
leau sans aucun fractionnement isotopique. Lappareillage peut tre, soit un
systme flux continu intgr linstrumentation de spectromtrie de masse
(6.2.1), soit un systme de combustion autonome (6.2.2). Lappareillage doit
permettre dobtenir une prcision au moins quivalente celle indique en (11).
6.2.1. Systmes flux continu
Ceux-ci sont constitus soit
par un analyseur lmentaire, soit par un
chromatographe en phase gazeuse quip dun systme de combustion en ligne.
Pour les systmes quips pour lintroduction des chantillons contenus dans des
capsules mtalliques, le matriel de laboratoire suivant est utilis :
- micropipette volumtrique avec cnes appropris
- balance 1 g de prcision ou mieux
- pince pour encapsulage
- capsules d'tain pour chantillons liquides
- capsules d'tain pour chantillons solides
Lors de l'utilisation d'un analyseur lmentaire quip d'un injecteur pour liquides
ou dans le cas dun systme de prparation par chromatographie-combustion, le
matriel de laboratoire suivant est utilis :
- seringue pour liquides
- flacons quips dun systme de fermeture tanche et de septa
inertes.
Les matriels de laboratoire indiqus dans les listes ci-dessus constituent des
exemples et sont susceptibles dtre remplacs par dautres matriels de
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Ethanol
performances quivalentes selon le type dappareillage de combustion et de

spectromtrie de masse utilis par le laboratoire.
6.2.2. Systmes autonomes de prparation
Dans ce cas, les chantillons de dioxyde de carbone rsultant de la combustion des
chantillons analyser et de la rfrence sont collects dans des ampoules qui sont
ensuite installes au double systme d'entre du spectromtre pour raliser l'analyse
isotopique. Plusieurs types dappareillages de combustion dcrits dans la littrature
sont utilisables:
- Systme clos de combustion rempli avec du gaz oxygne circulant
- Analyseur lmentaire avec flux d'hlium et d'oxygne
- Ampoule scelle en verre remplie avec de l'oxyde de cuivre () comme
agent doxydation
7. PREPARATION DES ECHANTILLONS POUR ESSAI
L'thanol doit tre extrait partir du vin avant dtermination isotopique. Cette
extraction est effectue par la distillation du vin comme dcrit dans 3.1 de la
mthode RMN-FINS.
Dans le cas du mot de raisins, du mot de raisins concentr et du mot de raisins
concentr rectifi (sucre de raisin), les sucres doivent tre ferments en thanol,
d'abord comme dcrit dans 3.2 de la mthode RMN-FINS.
8. MODE OPERATOIRE
Toutes les tapes prparatoires doivent tre effectues sans aucune perte
significative d'thanol par vaporation qui changerait la composition isotopique de
l'chantillon.
La description qui suit fait rfrence aux procdures gnralement utilises pour la
combustion des chantillons d'thanol au moyen des systmes automatiss de
combustion commerciaux. Toute autre mthode, assurant que l'chantillon
d'thanol est quantitativement converti en dioxyde de carbone sans aucune perte
par vaporation d'thanol peut convenir pour la prparation du dioxyde de carbone
pour l'analyse isotopique.
Procdure exprimentale fonde sur l'utilisation d'un analyseur lmentaire :
a) Mise en capsule des chantillons :
- utiliser des capsules, une pince et un plateau de prparation propres
OIV-MA-AS312-06 : R2001

Ethanol
- prendre une capsule de la dimension approprie laide de la pince

- introduire le volume ncessaire de liquide dans la capsule l'aide de la
micropipette
Note: 3,84 mg d'thanol absolu ou 4,17 mg de distillat ayant un titre alcoolique de
92% m/m sont ncessaires pour obtenir 2 mg de carbone. La quantit approprie de
distillat doit tre calcule de la mme manire selon la quantit de carbone
ncessaire en fonction de la sensibilit de l'instrumentation de spectromtrie de
masse.
- refermer la capsule laide des pinces.
- chaque capsule doit tre ferme de faon absolument tanche. En cas
contraire, elle doit tre rejete et une nouvelle capsule doit tre reprpare.
- pour chaque chantillon, prparer deux capsules.
- placer les capsules l'endroit appropri sur le plateau du passeur
automatique dchantillon de lanalyseur lmentaire. Chaque capsule doit tre
soigneusement identifie par un numro d'ordre.
- placer systmatiquement des capsules contenant les rfrences de travail
au dbut et la fin de la srie d'chantillons.
- insrer rgulirement des chantillons de contrle dans la srie
d'chantillons.
b) Contrle et ajustement de linstrumentation danalyse lmentaire et de
spectromtrie de masse
- ajuster la temprature des fours de lanalyseur lmentaire et les flux de gaz
dhlium et doxygne pour une combustion optimale de l'chantillon.
- vrifier l'absence de fuite dans le systme danalyse lmentaire et de
spectromtrie de masse (par exemple en contrlant le courant ionique pour
m/z = 28 correspondant N2.).
- ajuster le spectromtre de masse pour mesurer les intensits des courants ioniques
pour m/z = 44, 45 et 46.
- vrifier le systme laide d'chantillons de contrle connus avant de
commencer les mesures sur les chantillons.
c) Droulement d'une srie de mesures
Les chantillons placs sur le passeur automatique d'chantillons de lanalyseur
lmentaire (ou du chromatographe) sont introduits successivement. Le dioxyde de
carbone de chaque combustion dchantillon est lu vers le spectromtre de masse
qui mesure les courants ioniques. L'ordinateur interfac linstrumentation
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Ethanol
enregistre les intensits des courants ioniques et calcule les valeurs pour chaque
chantillon (9).
9. CALCUL
L'objectif de la mthode est de mesurer le rapport isotopique 13C/12C de l'thanol
extrait partir du vin ou partir des produits drivs du raisin aprs fermentation.
Le rapport isotopique 13C/12C peut tre exprim par sa dviation par rapport une
rfrence de travail. La dviation isotopique carbone 13 ( 13C) est alors calcule
sur une chelle delta pour mille par comparaison des rsultats obtenus pour
lchantillon mesurer contre ceux de la rfrence de travail prcdemment
calibre par rapport la rfrence primaire internationale (V-PDB). Les valeurs
13
C sont exprimes par rapport la rfrence de travail selon :
13Cech/ref = 1000 (Rech-Rref)/Rref
o Rech et Rref sont respectivement les rapports isotopiques13C/12C de l'chantillon
et ceux de la rfrence de travail.
Les valeurs 13C sont alors exprimes par rapport au V-PDB selon :
13Cech/V-PDB = 13Cech/ref + 13Cref/V-PDB + (13Cech/ref 13Cref/V-PDB) /1000
o 13Cref/V-PDB est la dviation isotopique pralablement dtermine pour la
rfrence de travail contre le V-PDB.
Pendant la mesure en ligne des petites drives dues la variation, des conditions
instrumentales peuvent tre observes. Dans ce cas, les 13C des chantillons
doivent tre corrigs en fonction de la diffrence de la valeur 13C de la rfrence
de travail et sa valeur vraie, prcdemment calibre contre le V-PDB par
comparaison avec lun des matriaux de rfrence international. Entre deux
mesures de la rfrence de travail, la drive et donc la correction appliquer aux
rsultats des chantillons peuvent tre assumes linaires. La rfrence de travail
doit tre mesure en dbut et en fin de toute srie d'chantillons. Une correction
peut ensuite tre calcule pour chaque chantillon au moyen d'une interpolation
linaire entre les deux valeurs des diffrences entre la valeur assigne la rfrence
de travail et les mesures de valeurs obtenues.
OIV-MA-AS312-06 : R2001

Ethanol
10. ASSURANCE QUALITE ET CONTROLE

Contrler que la valeur 13C pour la rfrence de travail ne diffre pas de plus de
0,5 de la valeur admise. En cas contraire, les rglages de linstrumentation du
spectromtre devront tre contrls et ventuellement rajusts.
Pour chaque chantillon, vrifier que la diffrence de rsultat entre les deux
capsules mesures successivement est infrieure 0,3 . Le rsultat final pour un
chantillon donn est alors la valeur moyenne des deux capsules. Si la dviation est
plus leve que 0,3, la mesure doit tre rpte.
Un contrle du fonctionnement correct de la mesure peut tre fond sur l'intensit
du courant ionique pour m/z = 44 qui est proportionnel la quantit de carbone
injecte dans lanalyseur lmentaire. Dans les conditions type, l'intensit de ce
courant ionique devrait tre pratiquement constante pour les chantillons en
analyse. Une dviation significative doit conduire souponner une vaporation
d'thanol (par exemple une capsule imparfaitement scelle) ou bien une instabilit
de lanalyseur lmentaire ou du spectromtre de masse.
11. CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCE DE LA METHODE
(Prcision)
Une premire analyse collaborative (11.1) a t ralise sur des distillats
comportant des alcools dorigine vinique, et des alcools de canne et de betterave
ainsi que diffrents mlanges de ces trois origines. Cette tude nayant pas pris en
compte ltape de distillation, des informations complmentaires provenant
dautres essais interlaboratoires raliss sur des vins (11.2) et notamment des
circuits de tests daptitudes (11.3) pour les mesures isotopiques ont galement t
considres. Les rsultats dmontrent que les diffrents systmes de distillation
utiliss dans des conditions satisfaisantes, et en particulier ceux applicables pour
les mesures RMN-FINS, napportent pas de variabilit significative pour les
dterminations 13C de lthanol du vin. Les paramtres de fidlit observs pour
les vins sont quasiment identiques ceux obtenus lors de ltude collaborative
(11.1) sur les distillats.
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Ethanol
11.1. tude collaborative sur les distillats

Anne de lessai interlaboratoires :
1996
Nombre de laboratoires :
20
Nombre dchantillons
6 chantillons en double aveugle
13C de lthanol
Analyte :
Code des
chantillons
Alcool dorigine
vinique
Alcool de betterave
Alcool de canne
A&G
80%
10%
10%
B&C
90%
10%
0%
D&F
0%
100%
0%
E&I
90%
0%
10%
H&K
100%
0%
0%
J&L
0%
0%
100%
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Ethanol
chantillons
A/G
B/C
D/F
E/I
H/K
J/L
retenus aprs
limination des
rsultats aberrants
19
18
17
19
19
19
Nombre de rsultats
accepts
38
36
34
38
38
38
Valeur moyenne (
13
C)
-25,32
-26,75
-27,79
-25,26
-26,63
-12,54
Sr2
0,0064
0,0077
0,0031
0,0127
0,0069
0,0041
cart-type de
rptabilit (Sr)
0,08
0,09
0,06
0,11
0,08
0,06
Limite de rptabilit r
(2,8Sr)
0,22
0,25
0,16
0,32
0,23
0,18
0,0389
0,0309
0,0382
0,0459
0,0316
0,0584
cart-type de
reproductibilit (SR)
0,20
0,18
0,20
0,21
0,18
0,24
Limite de
reproductibilit R (2,8
SR)
0,55
0,49
0,55
0,60
0,50
0,68
SR2
OIV-MA-AS312-06 : R2001
10

Ethanol
11.2. Etude interlaboratoires sur deux vins et un alcool

1996
14 pour la distillation des vins dont 7 pour
galement la mesure 13C de lthanol des vins
Nombre dchantillons
8 pour la mesure 13C de lchantillon dalcool

3 (Vin blanc TAV 9,3% vol., Vin blanc de TAV
9,6% vol. et Alcool de titre alcoomtrique 93%
m/m)
Analyte :
13C de lthanol
chantillons
Vin rouge
Vin blanc
Alcool
Nombre de rsultats accepts
Valeur moyenne ( 13C)
-26,20
-26,20
-25,08
Variance de reproductibilit SR2
0,0525
0,0740
0,0962
cart-type de reproductibilit (SR)
0,23
0,27
0,31
Limite de reproductibilit R (2,8 SR)
0,64
0,76
0,87
Diffrents systmes de distillation ont t utiliss par les laboratoires participants.

Les dterminations isotopiques 13C ralises dans un seul laboratoire sur
lensemble des distillats retourns par les participants ne montrent ni valeur
aberrante ni valeur significativement distincte des valeurs moyennes. La variance
des rsultats (S2 = 0,0059) est comparable aux variances de rptabilit Sr2 de
ltude collaborative sur les distillats (11.1).
OIV-MA-AS312-06 : R2001
11

Ethanol
11.3. Rsultats des exercices des circuits daptitude aux essais isotopiques
Depuis dcembre 1994 des exercices daptitude internationaux pour les
dterminations isotopiques sur les vins et alcools (distillats de TAV 96% vol.) sont
organiss rgulirement. Les rsultats permettent aux laboratoires participants de
contrler la qualit de leurs analyses. Lexploitation statistique des rsultats permet
dapprcier la variabilit des dterminations dans des conditions de reproductibilit
et donc destimer les paramtres de variance et de limite de reproductibilit. Les
rsultats obtenus pour les dterminations 13C de lthanol des vins et distillats
sont rsums dans le tableau suivant :
Date
SR
Dc. 1994
Juin 1995
Dc. 1995
Mars 1996
Juin 1996
Sep. 1996
Dc. 1996
Mars 1997
Juin 1997
Sep 1997
Dc. 1997
Mars 1998
Juin 1998
Sep 1998
6
8
7
9
8
10
10
10
11
12
11
12
12
11
0,210
0,133
0,075
0,249
0,127
0,147
0,330
0,069
0,280
0,237
0,127
0,285
0,182
0,264
Moyenne
pondre
Vins
S2 R
0,044
0,018
0,006
0,062
0,016
0,022
0,109
0,005
0,079
0,056
0,016
0,081
0,033
0,070
Distillats
N SR
S2 R
0,59
0,37
0,21
0,70
0,36
0,41
0,92
0,19
0,78
0,66
0,36
0,80
0,51
0,74
6
8
8
11
8
11
9
8
11
11
12
13
12
12
0,42
0,41
0,32
0,78
0,53
0,63
0,16
0,16
0,49
0,57
0,44
0,69
0,74
0,91
0,215 0,046 0,60
0,151
0,147
0,115
0,278
0,189
0,224
0,057
0,059
0,175
0,203
0,156
0,245
0,263
0,327
0,023
0,021
0,013
0,077
0,036
0,050
0,003
0,003
0,031
0,041
0,024
0,060
0,069
0,107
0,209 0,044 0,59
N : nombre de laboratoires participants
OIV-MA-AS312-06 : R2001
12

Ethanol
12. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

Dtection de lenrichissement des mots, des mots concentrs, du sucre de raisin
et des vins par lapplication de la rsonance magntique nuclaire du deutrium
(RMN-FINS/SNIF-NMR)
OIV Recueil des mthodes internationales danalyse des vins et des mots.
E.C. Regulation. Community analytical methods which can be applied in the wine
sector, N.2676/90. Detecting enrichment of grape musts, concentrated grape
musts, rectified concentrated grape musts and wines by application of nuclear
magnetic resonance of deuterium (SNIF-NMR)
Official Journal of the European Communities, NoL 272, Vol 33, 64-73, 3 October
1990.
Interlaboratory study about the determination of 13C in wine ethanols
OIV FV No 1051
Fidelity of the determination of the 13C/12C isotopic ratio of ethanol of wine
OIV FV No 1116.
Stable carbon isotope content in ethanol of EC data bank wines from Italy, France
and Germany. A Rossmann ; H.-L. Schmidt ; F. Reniero ; G. Versini ; I. Moussa ;
M.-H. Merle.
z. Lebensm. Unters. Forsch., 1996, 203, p 293-301.
OIV-MA-AS312-06 : R2001
13

METHODE OIV-MA-AS312-07
Type de la mthode IV
Mthode de dtermination du rapport isotopique 13C/12C du

glycrol dans les vins par chromatographie gazeuse couple
un four combustion ou par chromatographie liquide
haute performance couple la spectromtrie de masse de
rapport isotopique (CG-C-SMRI)
(OIV-Oeno 343-2010)
1. CHAMP DAPPLICATION
Les mthodes prsentes, fondes sur la chromatographie gazeuse [1] ou la
chromatograhie liquide [2] couple un spectromtre de masse de rapport
isotopique (CG-C-SMRI ou CLHP-SMRI), permettent la mesure du rapport
13 12
C/ C de glycrol. Si sa quantification est exige en mme temps que le
rapport isotopique 13C/12C, le CG-C-SMRI peut tre utilis.
Lemploi de pentamthylneglycol, en talon interne, permet galement de
dterminer la concentration de glycrol au cours de la mme analyse du
rapport 13C/12C.
2.
DFINITIONS
13
C/12C :
rapport entre lisotope 13 de carbone (13C) et lisotope
12 de carbone (12C) pour un chantillon donn.
13C : teneur en carbone 13 (13C) exprime en parties par millier
().
CG-C-SMRI : technique couple de chromatographie gazeuse
couple un spectromtre de masse de rapport isotopique et un
four combustion.
V-PDB :
Vienna-Pee-Dee-Belemnite. Le PDB est la matire de
rfrence primaire pour la mesure des variations naturelles de la
teneur isotopique du carbone 13, consistant en carbonate de calcium
issu dun rostre de blemnite du Crtac de la formation Pee Dee de
la Caroline du sud (tats-Unis). Son rapport isotopique 13C/12C ou
RPDB est de 0,0112372. Les rserves de PDB sont puises depuis
OIV-MA-AS312-07 : 2010

3.
longtemps, mais cette matire continue de faire fonction de rfrence

primaire pour exprimer les variations naturelles de la teneur
isotopique du carbone 13 et pour calibrer les matriaux de rfrence
disponibles auprs de lAIEA (Agence internationale de lnergie
atomique) de Vienne, en Autriche. Les dterminations isotopiques
des abondances naturelles en carbone 13 sont normalement
exprimes par rapport au V-PDB.
PRINCIPE
Il existe une importante diffrence entre la teneur en carbone 13 des sucres

vgtaux lissue des diffrents cycles de photosynthse C3 (cycle de
Calvin) et C4 (Hatch-Slack). La plupart des plantes, comme la vigne et la
betterave, appartiennent au groupe C3 ; tandis que le mas et la canne sucre
appartiennent au groupe C4. Les teneurs en carbone 13 du sucre et des
mtabolites correspondants obtenus par fermentation (thanol, glycrol)
sont corrles.
La mesure de la teneur en carbone 13 du glycrol peut permettre de dtecter
ladjonction de glycrol de mas (plante C4) ou de synthse (sources
fossiles) du vin ou autres boissons alcoolises.
La sparation du glycrol de la matrice du vin est effectue au moyen dun
chromatographe en phase gazeuse ou liquide.
Dans le GC-C-SMRI aprs cette sparation chromatographique, leffluent
est soumis une combustion puis une rduction, dans les fours
doxydation et de rduction dune interface de combustion. Les composants
autres que le glycrol, savoir le solvant, sont dgazs au moyen dune
soupape de rtrobalayage pendant le cycle de manire viter toute
contamination des fours et toute interfrence dans les chromatogrammes. La
teneur en carbone 13 est dtermine sur le dioxyde de carbone produit par
loxydation du glycrol contenu dans lchantillon. Une fois le glycol
oxyd, il y a production de CO2 et H2O. Leau produite durant la
combustion est limine par un pige vacuateur deau, consistant en une
membrane de Nafion. Le dioxyde de carbone est lu par un courant
dhlium vers la source SMRI pour lanalyse 13C/12C.
OIV-MA-AS312-07 : 2010

Dans le HPLC-SMRI aprs la sparation chromatographique, lchantillon

est oxyd alors quil est encore en phase mobile au niveau de linterface. Le
CO2 form est retir en ligne du flux de solvent via une membrane pour
change de gaz et envoy dans un coulement de He. Cet coulement
traverse un pige vacuateur deau, consistant en une membrane de
Nafion, avant dtre admis dans la source dions du SMRI par une fente.
Les diverses combinaisons possibles des isotopes 18O, 17O, 16O et 13C, 12C
conduisent la masse 44 correspondant lisotopomre 12C16O2, la masse
45 correspondant aux espces 13C16O2 et 12C17O16O et la masse 46 pour
lisotopomre 12C16O18O (13C17O16O et 12C17O2 peuvent tre ngligs du fait
de leur trs faible abondance). Les courants ioniques correspondants sont
dtermins sur trois diffrents collecteurs. Le courant ionique m/z 45 est
corrig de la contribution de 12C17O16O qui est calcule en fonction de
lintensit du courant mesur pour m/z = 46 en tenant compte de
labondance relative de 18O et de 17O (correction de Craig). La comparaison
avec une rfrence calibre par rapport ltalon international de V-PDB
permet le calcul de la teneur en carbone 13 sur lchelle relative 13C .
4.
RACTIFS
Les ractifs et talons de travail suivants doivent tre utiliss :

4.1
thanol anhydre (numro CAS 64-17-5).
4.2
Glycrol pur 99 % (CAS 56-81-5).
4.3
Pentamthylneglycol (CAS 111-29-5).
4.4
Solution principale de pentamthylneglycol (4.3) dans lthanol
(4.1). Cette solution prpare une concentration prcisment
connue, entre 0,5 et 1,0 g L-1, est utilise pour diluer des chantillons
de vin.
4.5
Acide orthophosphorique
4.6
Peroxodisulfate de sodium utilis comme ractif doxydation
4.7
Hlium pour analyse, utilis comme gaz vecteur (CAS 07440-59-7).
4.8
Oxygne pour analyse, utilis comme gaz rgnrant pour le racteur
de combustion (CAS 07782-44-7).
4.9
Bouteille de dioxyde de carbone pour analyse, utilis comme gaz de
rfrence
secondaire
pour
la
teneur
en
carbone 13
(CAS 00124-38-9).
OIV-MA-AS312-07 : 2010

chantillons standard de travail de glycrol avec un rapport 13C/12C

connu, calibrs par rapport aux matriaux de rfrence
internationaux.
4.11 chantillons standard de travail de pentamthylneglycol avec un
rapport 13C/12C connu, calibrs par rapport aux matriaux de rfrence
internationaux.
4.10
5.
APPAREILS ET EQUIPEMENTS
5.1
Spectromtre de masse de rapport isotopique

Spectromtre de masse isotopique (SMRI) capable de dterminer la
teneur relative en 13C du CO2 en abondance naturelle avec une
prcision interne de 0,05 , ou mieux, exprime en valeur relative
(point 8. Calculs). La prcision interne se dfinit ici comme la
diffrence entre deux mesures du mme chantillon de CO2. Le
spectromtre de masse utilis pour mesurer les rapports isotopiques
est quip dun collecteur triple afin de mesurer simultanment les
intensits pour m/z = 44, 45 et 46. Le SMRI est quip dun logiciel
ddi au pilotage de lanalyse, lacquisition de donnes et au
traitement des rsultats danalyse pour le calcul des rapports
isotopiques.
5.2
Chromatographe en phase gazeuse
Chromatographe en phase gazeuse (GC) coupl un spectromtre de masse

de rapport isotopique par lintermdiaire dun four combustion (5.1).
Chromatographe en phase gazeuse doit tre quip dune colonne capillaire
polaire permettant de sparer par chromatographie le glycrol des autres
composants du vin (p. ex. colonne capillaire en silice fondue Chrompack
WCOT remplie de polythylne glycol coll CP-Wax-57 CB, 25 m, di 0,25
mm, film paisseur 0,20 m).
Interface de combustion gnralement compose dun racteur doxydation
(tube de cramique contenant des fils de nickel, de platine et de cuivre) et
dun racteur de rduction (tube de cramique contenant des fils de cuivre).
OIV-MA-AS312-07 : 2010

5.3
Chromatographe en phase liquide
Chromatographe en phase liquide (LC) coupl un spectromtre de masse

de rapport isotopique (5.1) par lintermdiaire dune interface Isolink LC.
Le chromatographe en phase liquide doit tre quip dune colonne
permettant de sparer par chromatographie le glycrol des autres
composants du vin sans recourir des solvants ou additifs organiques (p. ex.
colonnes Carbohydrate HyperREZ H+, 30 cm, 8 mm).
Interface Isolink constitue dun racteur doxydation capillaire et dun
changeur membranes (trois membranes).
5.4. Matriels
Matriels de laboratoire habituels, notamment :
-Seringues dinjection pour chantillons ou autosampler
-Fioles calibres, filtres de 0,2 m, flacons chromatographiques et seringue
liquide 10 L.
Les quipements de laboratoire figurant dans la liste ci-dessus sont des
exemples et peuvent tre remplacs par dautres quipements dont les
performances sont quivalentes.
6.
PRPARATION DCHANTILLONS AVANT ESSAIS
6.1. Dtermination 13C/12C de glycrol par GC-C-SMRI

Chaque chantillon de vin est filtr au moyen dun filtre de 0,2 m, puis une
partie aliquote est dilue (rapport 1/4) avec de lthanol. Chaque chantillon
est ensuite vers dans un flacon chromatographique spcial, lequel est alors
scell et stock T 4 C jusqu lanalyse.
OIV-MA-AS312-07 : 2010

6.2. Rapport de glycrol 13C/12C et sa quantification par GC-C-SMRI

partie aliquote est dilue (rapport 1/4) avec la solution en vrac de
pentamthylneglycol (4.4). Chaque chantillon est ensuite vers dans un
flacon chromatographique spcial, lequel est alors scell et stock T
4 C jusqu lanalyse.
6.3.
Dtermination de glycrol 13C/12C par CLHP-SMRI
partie aliquote est dilue dans de leau. Chaque chantillon est ensuite vers
dans un flacon chromatographique spcial, lequel est alors scell et stock
T 4 C jusqu lanalyse.
7.
PROCDURE
7.1
GC-C-SMRI
La description suivante renvoie aux procdures gnralement appliqus

pour dterminer le rapport isotopique 13C/12C de glycrol, laide de
systmes GC-C-SMRI automatiss du commerce.
Les procdures peuvent tre adaptes en fonction des changements
introduits par les fabricants. Remarque : les volumes, la temprature,
les coulements et la dure sont donns titre indicatif. Les valeurs
correctes doivent tre optimises suivant les indications du fabricant.
7.1.1 Conditions opratoires
Avec la colonne et linterface de combustion dcrites plus haut titre
dexemple au point (5.2), les paramtres suivants peuvent tre
appliqus :
A.
La temprature de linjecteur est rgle sur 270 C.
B.
Le programme thermique est dfini comme suit : la
temprature initiale de la colonne est fixe 120 C, avec une dure
de maintien de 2 minutes, puis la temprature est programme
raison de 10 C.min-1 jusqu atteindre la valeur finale de 220 C,
OIV-MA-AS312-07 : 2010

avec un isotherme final

de 2 minutes. Chaque cycle dure
14 minutes, sans tenir compte du temps de refroidissement.
C.
Il est utilis comme gaz porteur.
D.
Les tempratures des racteurs de combustion et de rduction
de linterface de combustion GC sont rgles 960 et 640 C
respectivement.
E.
chaque injection, 0,3 L de solution d'chantillon est
introduite dans la colonne avec un mode de division lev
l'injection (dbit de fuite de l'injecteur : 120 mL. min-1).
A intervalles rguliers (p. ex. une fois par semaine) une roxydation
du racteur doxydation au O2 est indispensable (les intervalles sont
fonction des quantits totales de substances qui sont passes dans le
racteur).
7.1.2. Rapport de glycrol 13C/12C
Pour chaque analyse 13C/12C, au minimum deux injections de gaz de
rfrence de la bouteille de CO2 (4.9) sont effectues. Ce CO2 a t
prcdemment calibr par rapport dautres talons internationaux
de V-PDB, eux-mmes calibrs par rapport aux talons
internationaux de lAIEA. Le CO2 de rfrence peut galement tre
calibr avec des talons internes.
Chaque chantillon de vin (6.1) est inject trois fois. Des rfrences de
contrle appropries doivent tre incluses dans chaque lot.
Un lot-type se prsente comme suit :
- chantillon tmoin
- chantillon tmoin
- chantillon 1
- chantillon 1
- chantillon 1
- chantillon 2
Chaque chantillon est mesur 3 fois
Echantillon 6
- chantillon 6
- chantillon 6
- chantillon tmoin
- chantillon tmoin
OIV-MA-AS312-07 : 2010

Lchantillon tmoin est une solution de glycrol dans l'thanol

dune valeur 13C connue et prcisment mesure (par un analyseur
lmentaire SMRI, par exemple) et permet galement de vrifier la
drive dans la squence de mesures et la donc la correction des
rsultats.
7.1.3 Rapport 13C/12C de glycrol et sa quantification
Si la quantification du glycrol est exige en mme temps que la
mesure du rapport isotopique 13C/12C, la procdure prcdente (7.1.2) est
applique aux chantillons prpars suivant la description au point 6.2.
Le pentamthylneglycol (5.3) permet de dterminer la
concentration de glycrol. En outre, les valeurs 13C de la rfrence
interne peuvent tre utilises pour valuer la justesse des injections
et le contrle qualit des dterminations isotopiques et de la phase de
raction de la combustion.
La concentration de glycrol dans des chantillons de vin est dtermine au
moyen de la mthode de ltalon interne. Une courbe de calibrage doit tre
tablie cette fin, en prenant une concentration constante connue pour
ltalon interne, le pentamthylneglycol, et cinq solutions de glycrol
diffrentes concentrations connues, de 0,50 10 g L-1. Ces solutions sont
prpares en pesant et en dissolvant du glycrol (4.2) et du
pentamthylneglycol dans de lthanol (4.1) dans des flacons calibrs. Il
faut sassurer que la rponse est linaire en analysant successivement, trois
reprises, chacune des solutions normales de linarit contenant un talon
interne.
7.2. CLHP-SMRI
La description suivante renvoie aux procdures gnralement appliques
pour dterminer le rapport isotopique 13C/12C du glycrol laide de
systmes CLHP-SMRI automatiss du commerce.
Les procdures peuvent tre adaptes en fonction des changements
introduits par les fabricants. Remarque : les volumes, la temprature, les
coulements et la dure sont donns titre indicatif. Les valeurs correctes
doivent tre optimises suivant les indications du fabricant.
OIV-MA-AS312-07 : 2010

7.2.1 Conditions opratoires

Avec la colonne et linterface dcrites titre exemple au point (5.3), les
paramtres suivants peuvent tre appliqus :
A.
Le dbit de lluent est rgl 400 L min-1.
B.
Le dbit des ractifs acides et oxydants dans linterface LC
interface est rgl 40 et 30 L min-1, respectivement
C.
Les tempratures du racteur de linterface et de la colonne
sont rgles 99,9 et 65 C, respectivement.
D.
Le dbit dhlium de lunit de sparation est rgl 1 L
min-1.
Les bouteilles de ractif subissent un dgazage lhlium durant la totalit
de la campagne chromatographique.
7.2.2. Rapport 13C/12C de glycrol
Pour chaque analyse 13C/12C, au minimum deux injections de gaz de
rfrence de la bouteille de CO2 (4.9) sont effectues (voir exemple
du chromatogramme en 11.2). Ce CO2 a t prcdemment calibr
par rapport dautres talons internationaux de V-PDB, eux-mmes
calibrs par rapport aux talons internationaux de lAIEA. Le CO2 de
rfrence peut galement tre calibr par rapport des talons
internes.
Chaque chantillon de vin (6.3) est inject trois fois. Des rfrences de
contrle appropries doivent tre incluses dans chaque lot.
Un lot-type se prsente comme suit :
Echantillon tmoin
Echantillon tmoin
Echantillon 1
Echantillon 1
Echantillon 1
Echantillon 2
OIV-MA-AS312-07 : 2010

Chaque chantillon est mesur 3 fois

..
Echantillon 6
Echantillon 6
Echantillon 6
Echantillon tmoin
Echantillon tmoin
Lchantillon tmoin est une solution de glycrol dune valeur 13C connue
et mesure avec prcision (par un analyseur lmentaire SMRI, par
exemple) et permet galement de vrifier la drive dans la squence de
mesures et donc la correction des rsultats.
8. CALCULS
8.1. Rapport 13C/12C
Le rapport isotopique 13C/12C peut tre exprim par son cart avec une
rfrence de travail.
Lcart isotopique du carbone 13 (13C) est alors calcul sur une chelle
delta pour mille (/1 000 ou ) en comparant les rsultats obtenus pour
lchantillon mesurer avec ceux dune rfrence de travail pralablement
calibre par rapport la rfrence internationale primaire (V-PDB). Pendant
les analyses 13C/12C, du CO2 de rfrence est introduit, calibr par rapport
dautres talons internationaux de PDB.
Les valeurs 13C sont exprimes par rapport la rfrence de travail,
comme suit :
13Cchantillon/Rf. = (Rchantillon/Rrf - 1) X 1 000
o Rchantillon et RRf. sont respectivement les rapports isotopiques 13C/12C de
lchantillon et du dioxyde de carbone utilis comme gaz de rfrence (4.9).
Les valeurs 13C sont exprimes par rapport au V-PDB, comme suit :
13Cchantillon/V-PDB = 13Cchantillon/Rf. + 13CRf./V-PDB + ( 13Cchantillon/rf
13CRf./V-PDB)/1 000
o 13CRf./V-PDB est lcart isotopique prcdemment dtermin entre la
rfrence de travail et le V-PDB.
OIV-MA-AS312-07 : 2010
10

De faibles variations peuvent survenir lors de la mesure en ligne en raison

de changements des conditions instrumentales. Dans ce cas, les valeurs
13
C des chantillons doivent tre corriges en fonction de la diffrence entre
la valeur mesure 13C de lchantillon de travail standard et sa vraie valeur
prcdemment talonn par rapport V-PDB par comparaison lun des
matriaux de rfrence internationaux. Entre deux mesures de lchantillon
de travail standard, la variation, et par consquent la correction appliquer
aux rsultats obtenus avec les chantillons, peuvent tre supposes linaires.
Lchantillon de travail standard doit tre mesur au dbut et la fin de
toutes les sries dchantillons. Une correction peut tre ensuite calcule
pour chaque chantillon par interpolation linaire.
8.2. Concentration de glycrol par GC SMRI

Lors de la gnration de la courbe dtalonnage, pour chaque injection, le
paramtre mesur qui est pris en compte est la surface S (dans V*s) donne
par le spectromtre. Calculer le rapport R et tracer un graphique reprsentant
R en fonction du rapport de concentration du glycrol et de ltalon interne
(EI), C. Un trac linaire doit tre obtenu, avec un coefficient de corrlation
dau moins 0,99.
quation 1
R=
Surface du pic glycrol

Surface du pic EI
Avec les mmes conditions danalyse (7.1.1), le pentamthylneglycol, qui

est moins polaire que le glycrol, a un temps de rtention denviron
310 secondes, alors que celui du glycrol est de 460 secondes (voir un
exemple de chromatogramme au point 11.1).
La concentration de glycrol dans chaque injection est calcule par
lquation suivante :
OIV-MA-AS312-07 : 2010
11

quation
2
C glyc Sample
chantillon
K C 1,5PD Sample
chantillon
S glyc Sample Facteur

de dilution
dilution factor
S 1,5PD Sample
chantillon
chantillon
avec :
Cxchantillon est la concentration en g L-1 de lespce dans lchantillon ;
SXchantillon est la surface des pics produits ;
K (le facteur de rponse) est calcul comme suit :
Cglyc St S1,5PD St
C1,5PDSt Sglyc St
quation 3 (voir 8.2)
Le suffixe St indique les concentrations et les surfaces de

pentamthylneglycol et de glycrol dans les cinq solutions normales
prpares pour le calibrage (7.1.3) ;
Facteur de dilution : compte tenu des conditions de calibrage susvises (7),
le facteur de dilution est 4.
La valeur de concentration en g L-1 de chaque chantillon est la moyenne
des trois injections.
9. ASSURANCE ET CONTROLE QUALITE

9.1. GC-C-SMRI
Pour chaque chantillon, vrifier que lcart type (ET) dans trois fioles
mesures successivement est infrieur 0,6 . Le rsultat final pour un
chantillon donn est la valeur moyenne pour les trois mesures. Si lcart
est suprieur 0,6 , la mesure doit tre rpte.
Les contrles de mesure correcte peuvent tre bass sur le courant ionique
pour lequel m/z = 44, lequel est proportionnel la quantit de carbone
injecte dans le systme. Dans des conditions standard, le courant ionique
doit tre quasiment constant pour les chantillons analyss. Un cart
important peut signaler une sparation imparfaite et une oxydation du
glycrol ou une instabilit du spectromtre de masse.
OIV-MA-AS312-07 : 2010
12

9.2. CLHP-SMRI
Vrifier que la valeur 13C de la rfrence de travail ne scarte pas de plus
de 0,5 de la valeur admissible. Dans le cas contraire, les rglages de
lappareil de spectromtrie doivent tre vrifis et, si besoin, ajusts.
Pour chaque chantillon, vrifier que lcart type (ET) dans trois fioles
mesures successivement est infrieur 0,6 . Le rsultat final pour un
chantillon donn est la valeur moyenne pour les trois mesures. Si lcart
est suprieur 0,6 , la mesure doit tre rpte.
Les contrles de mesure correcte peuvent tre bass sur le courant ionique
pour lequel m/z = 44, lequel est proportionnel la quantit de carbone
injecte dans le systme. Dans des conditions standard, le courant ionique
doit tre quasiment constant pour les chantillons analyss. Un cart
important peut signaler une sparation imparfaite et une oxydation du
glycrol ou une instabilit du spectromtre de masse.
10. CARACTERISTIQUES
METHODE
DE
PERFORMANCES
DE
LA
10.1. GC-C-SMRI
10.1.1 Prcision
Des tudes prliminaires ont t conduites sur 4 solutions de vin
synthtiques (eau-thanolglycrol), prpares avec des chantillons de
glycrol de diffrentes origines et dune valeur 13C pralablement
dtermine par EA-SMRI. Pour les 3 rptitions, n = 3, par la technique
CG-C-SMRI, un cart-type ET 0,6 a t jug admissible.
La prcision peut tre affecte par un chevauchement entre le
pentamthylneglycol et dautres composants ou sous-produits du vin dans
la dtermination des vins liquoreux.
OIV-MA-AS312-07 : 2010
13

10.1.2. Dtermination de la concentration de glycrol

Pour la validation de cette mthode, deux solutions de glycrol ont t
employes. Si lon suppose que la concentration-type de glycrol est de 410 g L-1 dans le vin sec, ces deux solutions reprsentent cette tendue. La
premire solution est de 4,0 g L-1 et a donn une concentration
exprimentale de 3,6 g L-1 (ET = 0,2, n = 8). La seconde solution, de 8,0
g L-1, a donn une valeur de 7,9 g L-1 (ET = 0,3, n = 8).
En outre, cinq chantillons de vin (A-E) avec une concentration de glycrol
prdose, par application dautres mthodes* par le test de comptence
BIPEA, ont t injects afin de tester la mthode.
OIV-MA-AS312-07 : 2010
14

Tableau 1 : Comparaison de concentrations avec 5 vins doss
Echantillon
Type
Fourchette
donne
Valeur moyenne
Blanc
Ros
Blanc
Rouge
Blanc
6,2-8,4
4,8-6,6
5,7-7,7
6,3-8,5
4,6-6,2
7,3
5,4
6,7
7,4
5,4
par GC-C-IRMS
6,4
5,4
6,7
7,8
5,4
Les dterminations BIPEA ont t ralises par HPLC et/ou analyses

enzymatiques
Les concentrations sont donnes en g/L n>3 et SD<0,6
Tableau 1 : Comparaison avec la concentration de 5 vins doss
Echantillon Type de vin Gamme de mesure Valeur moyenne par CG-CSMRI Blanc Ros Blanc Rouge Blanc
*
Les dterminations BIPEA ont t effectues par CLHP et/ou analyse

enzymatique.
Les concentrations sont indiques en g L-1. n > 3 et ET < 0,6.
Les concentrations de glycrol trouves par GC-C-SMRI sont conformes
aux valeurs obtenues utilisant dautres techniques analytiques comme la
dtermination enzymatique ou par CLHP.
OIV-MA-AS312-07 : 2010
15

10.2. CLHP-SMRI
Validation interne de la mthode CLHP-SMRI
Pour la validation de la mthode CLHP_SMRI, les chantillons suivants
ont t utiliss : un chantillon de glycrol standard, trois vins
synthtiques (les concentrations de glycrol varient au sein de la
gamme typique des vins) et un vin.
La prcision de la mesure du glycrol ft dtermine en rptant
lanalyse dix fois pour chaque chantillon pendant trois jours, sous des
conditions reproductibles (Tableau 2)
Tableau 2. Accuracy and precision of 13C values of glycerol obtained
by HPLC-IRMSa
HPLC-IRMS
Jour 1
Jour 2
Jour 3
Prcision
Echantillon
Rptitions
par
chantillon
Moyenne
13C
()
Ecart
type
()
Moyenne
13C
()
Ecart
type
()
Moyenne
13C
()
Ecart
type
()
r
()
R
()
Glycrol
(standard)b
10
27.99
0.0
5
27.94
0.0
4
27.95
0.0
8
0.1
7
0.1
8
10
28.06
0.1
3
28.14
0.1
2
28.14
0.1
1
0.3
4
0.3
5
10
28.11
0.1
2
28.18
0.0
7
28.21
0.0
7
0.2
5
0.2
8
10
28.06
0.0
6
28.06
0.0
9
28.05
0.0
9
0.2
3
0.2
4
10
28.88
0.1
0
28.85
0.2
7
28.72
0.2
3
0.6
0
0.6
2
Vin
synthtique
(6 g/l)
Vin
synthtique
(8 g/l)
Vin
synthtique
(10 g/l)
Vin
a
Valeurs de 13C sont exprimes en du rapport V-PDB

EA-IRMS glycrol (standard) rsultat : -28.02 + 0.09
Les paramtres de performance suivants pour la dtermination du 13C du glycrol furent
obtenus partir dun chantillon de vin :
Rptabilit
r: 0,60
Reproductibilit R: 0,62
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11. ANNEXE
11.1 Chromatogramme type dune analyse CG-C-SMRI de glycrol dans du vin
OIV-MA-AS312-07 : 2010
17

11.2 Chromatogramme typique dune analyse CLHP-SMRI du glycrol
12.
BIBLIOGRAPHIE
1 Calderone G., Naulet N., Guillou C., Reniero F., Characterization of

European wine glycerol: stable carbon isotope approach. Journal of
Agricultural and Food Chemistry, 2004, 52, 5902-5906
2. Cabanero AI, Recio JL, Ruperez M. Simultaneous stable carbon isotopic
analysis of wine glycerol and ethanol by liquid chromatography coupled to
isotope ratio mass spectrometry.
OIV-MA-AS312-07 : 2010
18

Acidit totale
Mthode Type I
Acidit totale
1. Dfinition
L'acidit totale est la somme des acidits titrables lorsqu'on amne le pH 7 par
addition d'une solution alcaline titre.
Le dioxyde de carbone n'est pas compris dans l'acidit totale.
Titrage potentiomtrique ou titrage en prsence de bleu de bromothymol comme
indicateur de fin de raction par comparaison un talon de coloration.
3. Appareillage
3.1. Trompe vide eau.
3.2. Fiole vide de 500 ml.
3.3. Potentiomtre chelle talonne en units pH et lectrodes. L'lectrode de
verre doit tre conserve dans l'eau distille. L'lectrode au calomel-chlorure
de potassium satur doit tre conserve dans une solution sature de chlorure
de potassium.
3.4. Vases cylindriques de 12 cm de diamtre.
4. Ractifs
4.1. Solution tampon pH 7,0 :
Phosphate monopotassique KH2PO4 ..... 107,3 g
Solution M d'hydroxyde de sodium ..... 500 ml
Eau q.s.p. . ..... 1 000 ml
La solution tampon pH 7 du commerce peut galement tre utilise.
4.2. Solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium.
4.3. Solution de bleu de bromothymol 4 g/l.
4g
Bleu de bromothymol (C27H28Br2O5S) .
Alcool neutre 96 % vol. .... 200 ml
Aprs solubilisation ajouter :
Eau sans CO2 .... 200 ml
Solution M d'hydroxyde de sodium,
q.s.p. coloration bleu-vert (pH 7) . 7,5 ml
Eau q.s.p. .... 1000 ml
5. Mode opratoire
5.1. Prparation de l'chantillon : limination du dioxyde de carbone.
OIV-MA-AS313-01 : R2009

Acidit totale
Placer environ 50 ml de vin dans une fiole vide, agiter et en mme temps faire
le vide au moyen de la trompe vide eau. L'agitation doit durer 1 2 minutes.
5.2. Titrage potentiomtrique
5.2.1. talonnage du pH mtre
L'talonnage du pH mtre s'effectue 20 C en suivant les indications donnes
pour l'appareil utilis avec la solution tampon de pH 7,00 20 C.
5.2.2. Technique d'une mesure
Dans un vase cylindrique (3.4) placer 10 ml de vin prpar comme indiqu
en 5.1.
Ajouter 10 ml environ d'eau distille et verser la burette la solution 0,1 M
d'hydroxyde de sodium jusqu' ce que le pH soit gal 7 20 C.
L'addition de solution alcaline doit tre faite lentement et la solution
constamment agite. Soit n le nombre de millilitres de NaOH 0,1 M verss.
5.3. Titrage avec indicateur (bleu de bromothymol)
5.3.1. Essai pralable : tablissement de l'talon de coloration
Dans un vase cylindrique (3.4), placer 25 ml d'eau distille bouillie, 1 ml de
solution de bleu de bromothymol et 10 ml de vin prpar comme indiqu en
5.1.
Ajouter la solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium jusqu' obtention d'une
coloration bleu-vert. Ajouter 5 ml de la solution tampon pH 7
5.3.2. Dosage
Dans un vase cylindrique (3.4), placer 30 ml d'eau distille bouillie, 1 ml de
solution de bleu de bromothymol et 10 ml de vin prpar comme indiqu
en 5.1.
6.1. Mode de calcul
L'acidit totale exprime en milliquivalents par litre sera :
A = 10 n
Elle est donne avec une dcimale.
L'acidit totale exprime en grammes d'acide tartrique par litre sera :
A = 0,075 x A
Elle est donne avec deux dcimales.
L'acidit totale exprime en grammes d'acide sulfurique par litre sera :
A = 0,049 x A
OIV-MA-AS313-01 : R2009

Acidit totale
Elle est donne avec deux dcimales.
6.2. Rptabilit (r) pour le titrage avec indicateur 5.3.) :

r = 0,9 meq/l
r = 0,04 g d'acide sulfurique/l,
r = 0,07 g d'acide tartrique/l .
6.3. Reproductibilit (R) pour le titrage avec indicateur (5.3).
Pour les vins blancs et ross :
R = 3,6 meq/l
R = 0,2 g d'acide sulfurique/l,
R = 0,3 g d'acide tartrique/l .
Pour les vins rouges :
R = 5,1 meq/l
R = 0,3 g d'acide sulfurique/l,
R = 0,4 g d'acide tartrique/l .
BIBLIOGRAPHIE
SEMICHON L., FLANZY M., Ann. Fals. Fraudes, 1930, 23,5.

FRE L., Ibid., 1931, 24, 75.
JAULMES P., Bull. O.I.V., 1953, 26, no 274, 42; Ann. Fals. Fraudes, 1955, 48,
157.
OIV-MA-AS313-01 : R2009

Acidit volatile
Mthode Type I
Acidit volatile
1. Dfinition
L'acidit volatile est constitue par les acides appartenant la srie actique qui se
trouvent dans le vin l'tat libre et l'tat salifi.
Titrage des acides volatils spars du vin par entranement la vapeur d'eau et
rectification des vapeurs.
Le vin est au pralable dbarrass du dioxyde de carbone.
L'acidit du dioxyde de soufre libre et du dioxyde de soufre combin distills dans
ces conditions doit tre retranche de l'acidit du distillat.
L'acidit de l'acide sorbique ventuellement ajout au vin doit galement tre
retranche.
Remarque : L'acide salicylique utilis dans certains pays pour stabiliser les vins
pralablement l'analyse se retrouve en partie dans le distillat. Il est ncessaire de
le doser et de le dfalquer de l'acidit. La mthode de dosage est donne en annexe
de ce chapitre.
3. Appareillage
3.1. Appareil entranement la vapeur d'eau compos :
d'un gnrateur de vapeur d'eau; la vapeur d'eau produite doit tre exempte
de dioxyde de carbone,
d'un barboteur,
d'une colonne rectificatrice,
d'un rfrigrant.
Cet appareil doit rpondre aux trois essais suivants :
a) Placer dans le barboteur 20 ml d'eau bouillie; recueillir 250 ml de distillat et
les additionner de 0,1 ml de solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium et
2 gouttes de la solution de phnolphtaline; la coloration rose doit tre stable
pendant au moins 10 secondes (vapeur d'eau exempte de dioxyde de
carbone).
b) Placer dans le barboteur 20 ml d'une solution 0,1 M d'acide actique.
Recueillir 250 ml de distillat. Titrer avec la solution 0,1 M d'hydroxyde de
sodium. Le volume vers doit tre au moins gal 19,9 ml. (acide actique
entran 99,5 %).
OIV-MA-AS313-02 : R2009

Acidit volatile
c) Placer dans le barboteur 20 ml d'une solution M d'acide lactique. Recueillir

250 ml de distillat et titrer l'acidit avec la solution 0,1 M d'hydroxyde de
sodium.
Le volume vers doit tre infrieur ou gal 1,0 ml (acide lactique distill
0,5 %).
Tout appareil ou toute technique qui satisfait ces essais constitue un
appareil ou une technique officielle internationale.
3.2. Trompe vide d'eau.
3.3. Fiole vide.
4. Ractifs
4.1. Acide tartrique cristallis.
4.2. Solution 0,1 M d'hydroxyde de sodium.
4.3. Solution de phnolphtaline 1 p. 100 dans l'alcool 96 % vol. neutre.
4.4.
4.5.
4.6.
4.7.
Acide chlorhydrique ((20 = 1,18 g/ml) dilu (v/v).

Solution 0,005 M d'iode.
Iodure de potassium cristallis.
Empois d'amidon 5 g/l :
Dlayer 5 g d'amidon dans 500 ml d'eau environ. Porter bullition en
agitant et maintenir l'bullition pendant 10 minutes; ajouter 200 g de chlorure
de sodium. Porter au litre aprs refroidissement.
4.8. Solution sature de borate de sodium (Na2B4O7. 10 H2O), soit environ 55 g/l
20 C.
4.9. Solution 0,1 M d'acide actique.
4.10. Solution M d'acide lactique (pour la prparation, voir au chapitre Acide
lactique, en 2. Ractifs).
5. Mode opratoire
5.1. Prparation de l'chantillon : limination du dioxyde de carbone.
Placer environ 50 ml de vin dans une fiole vide; agiter et en mme temps faire
le vide au moyen de la trompe vide d'eau. L'agitation doit durer 1 2 min.
5.2. Entranement la vapeur d'eau.
Placer 20 ml de vin dcarboniqu comme indiqu en 5.1 dans le barboteur.
Ajouter 0,5 g environ d'acide tartrique. Recueillir au moins 250 ml de distillat.
5.3. Titrage
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Acidit volatile
Titrer par la solution 0,1 M d'hydroxyde (3.2) de sodium en prsence de

2 gouttes de solution de phnolphtaline, soit n ml le volume vers.
Ajouter 4 gouttes d'acide chlorhydrique dilu , 2 ml d'empois d'amidon et
quelques cristaux d'iodure de potassium. Titrer le dioxyde de soufre libre par la
solution 0,005 M d'iode.
Soit n' ml le volume vers.
Ajouter la solution sature de borate de sodium jusqu' rapparition de la
coloration rose. Titrer le dioxyde de soufre combin par la solution 0,005 M
d'iode. Soit n" ml le volume vers.
6.1. Mode de calcul
L'acidit volatile exprime en milliquivalents par litre avec une dcimale sera :
5 (n 0,1 n' 0,05 n").
L'acidit volatile exprime en g d'acide sulfurique par litre avec deux dcimales
sera :
0,245 (n - 0,1 n' - 0,05 n").
L'acidit volatile exprime en g d'acide actique par litre avec deux dcimales
sera :
0,300 (n - 0,1 n' - 0,05 n").
6.2. Rptabilit (r) :
6.3 Reproductibilit (R) :
r = 0,7 me/l
r = 0,03 g d'acide sulfurique/l
r = 0,04 g d'acide actique/l.
R = 1,3 me/l
R = 0,06 g d'acide sulfurique/l
R = 0,08 g d'acide actique/l.
6.4. Cas d'un vin additionn d'acide sorbique.

L'acide sorbique tant entranable la vapeur d'eau 96 % pour un volume de
distillat de 250 ml, son acidit doit tre retranche de l'acidit volatile, sachant
que 100 mg d'acide sorbique correspondent une acidit de 0,89
milliquivalent, ou de 0,044 g d'acide sulfurique ou de 0,053 g d'acide actique
et connaissant la teneur en acide sorbique (mg/l) dtermine par ailleurs.
OIV-MA-AS313-02 : R2009

Acidit volatile
ANNEXE
Dosage de l'acide salicylique entran dans le distillat de l'acidit volatile
1. Principe
Aprs le dosage de l'acidit volatile et la correction du dioxyde de soufre, la
prsence d'acide salicylique est caractrise, aprs acidification, par la
coloration violette qui apparat aprs addition d'un sel de fer III.
Le dosage de l'acide salicylique entran dans le distillat avec l'acidit volatile
est effectu sur un deuxime distillat de volume gal celui sur lequel a t
effectu le dosage de l'acidit volatile. Dans ce distillat, l'acide salicylique est
dos par une mthode colorimtrique de comparaison. Il est dfalqu de
l'acidit du distillat de l'acidit volatile.
2. Ractifs
- Acide chlorhydrique (20 = 1,18 1,19 g/ml).
- Thiosulfate de sodium (Na2S2O3.5H2O en solution 0,1 M.
- Solution de sulfate de fer III et d'ammonium, Fe2(SO4)3.(NH4)2SO4.24H2O
10 p. 100 (m/v).
- Solution de salicylate de sodium 0,01 M. Solution contenant 1,60 g/l de
salicylate de sodium NaC7H5O3.
3. Mode opratoire
3.1. Caractrisation de l'acide salicylique dans le distillat de l'acidit volatile.
Immdiatement aprs le dosage de l'acidit volatile et la correction du dioxyde de
soufre libre et combin, ajouter dans la fiole conique 0,5 ml d'acide
chlorhydrique, 3 ml de la solution 0,1 M de thiosulfate de sodium et 1 ml de la
solution de sulfate de fer III et d'ammonium.
En prsence d'acide salicylique, une coloration violette apparat.
3.2. Dosage de l'acide salicylique
Sur la fiole conique prcdente, indiquer par un trait repre le volume du distillat.
Vider et rincer la fiole.
Soumettre l'entranement la vapeur d'eau une nouvelle prise d'essai de 20 ml
de vin et recueillir le distillat dans la fiole conique jusqu'au trait repre. Ajouter
0,3 ml d'acide chlorhydrique pur et 1 ml de la solution de sulfate de fer III et
d'ammonium.
Le contenu de la fiole conique se colore en violet.
Dans une fiole conique identique celle portant le trait repre, placer de l'eau
distille jusqu'au mme niveau que celui du distillat. Ajouter 0,3 ml d'acide
chlorhydrique pur, 1 ml de solution de sulfate de fer III et d'ammonium. Verser
la burette la solution de salicylate de sodium 0,01 M jusqu' obtention d'une
coloration violette de mme intensit que celle de la fiole conique contenant le
distillat de vin.
OIV-MA-AS313-02 : R2009

Acidit volatile
Soit n'", le nombre de millilitres verss.

4. Correction de l'acidit volatile
Retrancher le volume 0,1 x n'" du volume n ml de solution d'hydroxyde de
sodium 0,1 M utilis pour titrer l'acidit du distillat lors du dosage de l'acidit
volatile.
BIBLIOGRAPHIE
Mthode unique :
JAULMES P., Recherches sur l'acidit volatile des vins, Thse Diplme. Pharm.
1991, Montpellier, Nmes.
JAULMES P., Ann. Fals. Frauds, 1950, 43, 110.
JAULMES P., Analyse des vins, 1951, 396, Montpellier.
JAULMES P., Bull. O.I.V., 1953., 26, no 274, 48.
JAULMES P., MESTRES R., MANDROU Mlle B., Ann. Fals. Exp. Chim., 1964, 57, 119.
OIV-MA-AS313-02 : R2009

Acidit fixe
Mthode Type I
Acidit fixe
1. Principe
L'acidit fixe est dtermine par la diffrence entre l'acidit totale et l'acidit
volatile.

L'acidit fixe est exprime :
en milliquivalents par litre.
en grammes d'acide sulfurique par litre.
en grammes d'acide tartrique par litre.
OIV-MA-AS313-03 : R2009

Acides organiques Mthode gnrale par HPLC
Mthode Type IV
Acides organiques
Les acides organiques du vin peuvent tre spars et ventuellement doss
simultanment par chromatographie liquide haute performance (CLHP).
Les acides organiques du vin peuvent tre spars sur deux types de phase
stationnaire : silice greffe octyl et rsine changeuse dions. Les acides sont
dtects par spectrophotomtrie dabsorption dans lultraviolet.
Pour le dosage des acides tartrique et malique, il est prfrable dutiliser la
sparation sur silice greffe octyl et pour les acides citrique et lactique, la
sparation sur changeur dions. Le dosage de ces acides est effectu par rapport
un talon externe analys dans les mmes conditions.
Cette mthode permet, en outre, une valuation des teneurs en acides shikimique,
actique, succinique et fumarique.
Remarque : Dautres types de colonnes peuvent galement permettre une bonne
sparation. Les conditions opratoires et le mode opratoire dcrits ci-dessous sont
donns titre dexemple.
2. Appareillage
2.1. Dispositif de filtration sur membrane de cellulose
(diamtre des pores : 0,45 m).
2.2. Cartouches garnies de silice greffe octadcyl (exemple : Sep Pak WATERS
ASS.).
2.3. Chromatographe en phase liquide haute performance quip :
- dun injecteur boucle de 10 l,
- dun dispositif de thermostatisation,
- dun dtecteur, spectrophotomtre permettant les mesures dabsorbance
210 nm,
- dun enregistreur, ventuellement dun intgrateur.
Conditions opratoires
2.3.1. Cas de la sparation des acides citrique, lactique et actique :
- colonne garnie de rsine changeuse de cations forte (H+) (ex. : HPX-87 H
BIO-RAD, longueur 300 mm, diamtre interne 7,8 mm, particules de 9 m),
OIV-MA-AS313-04 : R2009

- phase mobile : solution dacide sulfurique 0,0125 M,

- dbit de la phase mobile : 0,6 ml/min.,
- temprature : 60-65 C (selon le lot de rsine).
2.3.2.Cas de la sparation des acides tartrique, malique, lactique, shikimique,
succinique et fumarique
- deux colonnes (250 mm de longueur et 4 mm de diamtre interne) places en
srie, garnies de silice greffe octyl, particules sphriques de 5 m de
diamtre,
- phase mobile : solution titrant 70 g/l en dihydrognophosphate de potassium,
14 g/l en sulfate dammonium et ajuste pH 2,1 par addition dacide
phosphorique,
- dbit de la phase mobile : 0,8 ml/min.
- temprature : 20 C.
3. Ractifs
3.1. Eau distille ou de qualit CLHP
3.2. Mthanol distill
3.3. Acide tartrique
3.4. Acide malique
3.5. Lactate de sodium
3.6. Acide shikimique
3.7. Actate de sodium
3.8. Acide succinique
3.9. Acide citrique
3.10. Acide fumarique
3.11. Acide sulfurique (20 = 1.84 g/ml)
3.12. Solution dacide sulfurique 0,0125 M
3.13. Dihydrognophosphate de potassium, KH2 PO4
3.14. Sulfate dammonium (NH4) 2SO4
3.15. Acide orthophosphorique 85% (20 = 1.71 g/ml)
3.16. Solution de rfrence compose de : acide tartrique (5 g/l), acide malique
(5 g/l), lactate de sodium (6,22 g/l), acide shikimique (0,05 g/l), actate de
sodium (6,83 g/l), acide succinique (5 g/l), acide fumarique (0,01 g/l) et acide
citrique (5 g/l).
OIV-MA-AS313-04 : R2009

4. Mode opratoire
Laver pralablement une cartouche par 10 ml de mthanol puis par 10 ml
deau.
Dgazer lchantillon de vin ou de mot. Filtrer sur membrane (0,45 m).
Prlever 8 ml dchantillon filtr dans une seringue pralablement rince avec
lchantillon ; faire passer sur la cartouche. liminer les trois premiers ml et
recueillir les 5 ml suivants (viter damener la cartouche sec).
4.2. Chromatographie
Injecter dans le chromatographe successivement 10 l de solution de rfrence
et 10 l de lchantillon prpar selon 4.1. Rpter trois fois ces injections dans
le mme ordre.
Enregistrer le chromatogramme.
5. Calculs
5.1. Analyse qualitative
Dterminer les temps de rtention respectifs de chacun des composs lus.
Les acides organiques de la solution de rfrence sont spars dans lordre
dlution suivant :
- acides citrique, tartrique, malique, succinique + shikimique, lactique
fumarique, actique dans la technique 2.3.2.
- acides tartrique, malique, shikimique, lactique, actique, citrique, succinique
et fumarique dans la technique 2.3.2.
5.2. Analyse quantitative
Mesurer la surface de chacun des pics et dterminer la moyenne des trois
rponses pour la solution de rfrence et pour lchantillon analyser.
Dduire la concentration de lchantillon en acides organiques.
Les concentrations sont exprimes :
- en grammes par litre avec une dcimale pour les acides tartrique, malique,
lactique et succinique,
- en milligrammes par litre pour les acides citrique, actique et fumarique.
BIBLIOGRAPHIE
TUSSEAU D. et BENOIT C., F.V. O.I.V., 1986, Ns 800 et 813 ; J. Chromatogr.,
1987, 395, 323-333.
OIV-MA-AS313-04 : R2009

Acide tartrique
Mthodes Type IV
Acide tartrique

L'acide tartrique, prcipit sous forme de racmate de calcium, est dos
pondralement. Ce dosage peut tre complt par un dosage volumtrique de
comparaison. Les conditions de prcipitation : pH, volume total mis en oeuvre,
concentration des ions prcipitants, sont telles que la prcipitation du racmate
de calcium est totale tandis que le D(-)tartrate de calcium demeure en solution.
Lorsque le vin a t additionn d'acide mtatartrique, qui rend la prcipitation
du racmate de calcium incomplte, il devra subir un traitement pralable
d'hydrolyse.
2. Mthode
2.1. Mthode pondrale
2.1.1. Ractifs
Solution d'actate de calcium contenant 10 g/l de calcium :
Carbonate de calcium : Ca CO3 .. 25 g
Acide actique (20 = 1,05 g/ml) ........ 40 ml
Eau q.s.p. ..... 1 l
Racmate de calcium cristallis : CaC4O6H4. 4H2O :
Dans un vase cylindrique de 400 ml, introduire 20 ml d'une solution d'acide
L(+)tartrique 5 g/l, 20 ml d'une solution de D(-)tartrate d'ammonium
6,126 g/l et 6 ml de la solution d'actate de calcium 10 g/l de calcium.
Laisser prcipiter pendant 2 heures. Recueillir le prcipit sur un creuset
filtrant de porosit n 4, le laver 3 reprises avec 30 ml environ d'eau
distille. Scher l'tuve 70 C jusqu' un poids constant. Avec les
quantits de ractif mises en oeuvre, on obtient environ 340 mg de racmate
de calcium cristallis.
Conserver en flacon bouch.
Liqueur de prcipitation (pH 4,75) :
D(-)Tartrate d'ammonium .................... 150 mg
Solution d'actate de calcium 10 g de calcium par litre .. 8,8 ml
1l
Eau q.s.p. ........
Dissoudre le D(-)tartrate d'ammonium dans 900 ml d'eau ; ajouter 8,8 ml de
solution d'actate de calcium et porter au litre. Le racmate de calcium tant
OIV-MA-AS313-05A : R2009

Acide tartrique
lgrement soluble dans cette liqueur, il convient d'y introduire 5 mg de

racmate de calcium par litre, de soumettre l'agitation pendant 12 heures et
filtrer.
Remarque : La liqueur de prcipitation peut tre prpare partir d'acide
D(-)tartrique
Acide D(-)tartrique ... 122 mg
Solution d'hydroxyde d'ammonium (20 = 0,97 g/ml) 25 % (v/v) 0,3 ml
Dissoudre l'acide D(-)tartrique, ajouter l'hydroxyde d'ammonium ; porter le
volume 900 ml environ. Ajouter 8,8 ml de solution d'actate de calcium et,
aprs mlange, ajuster le pH 4,75 par addition d'acide actique. Porter au
litre.
Ajouter 5 mg de racmate de calcium par litre, soumettre l'agitation pendant
12 heures et de filtrer.
- Cas des vins non additionns d'acide mtatartrique
Dans un vase cylindrique de 600 ml, placer 500 ml de liqueur de prcipitation
et 10 ml de vin. Mlanger et amorcer la prcipitation en frottant les parois du
vase avec l'extrmit d'une baguette de verre. Laisser prcipiter pendant
12 heures (une nuit).
Filtrer sur creuset filtrant de porosit no 4, tar et dispos sur une fiole vide
propre, en entranant le prcipit. Rincer le vase o s'est effectue la
prcipitation avec le filtrat et entraner les dernires particules de prcipit.
Scher l'tuve 70 C jusqu' poids constant. Peser : soit p le poids de
racmate de calcium CaC4O6H4 cristallis avec 4 molcules d'eau.
- Cas des vins additionns d'acide mtatartrique
Lorsqu'on a affaire un vin additionn d'acide mtatartrique ou que l'on
souponne cette addition, procder l'hydrolyse de cet acide dans les
conditions suivantes.
Dans une fiole conique de 50 ml, placer 10 ml de vin et 0,4 ml d'acide
actique pur. Fermer la fiole par un bouchon muni d'un crachoir et porter
bullition pendant 30 minutes. Aprs refroidissement, transvaser le liquide
contenu dans la fiole conique dans un vase cylindrique ; rincer la fiole deux
fois par 5 ml d'eau et continuer comme il est indiqu dans le mode opratoire
ci-dessus.
L'acide mtatartrique est compt comme acide tartrique dans le rsultat du
dosage.
OIV-MA-AS313-05A : R2009

Acide tartrique
Une molcule de racmate de calcium correspond une demi-molcule

d'acide L(+) tartrique du vin.
La quantit d'acide tartrique par litre de vin, exprime en milliquivalents est
gale :
384,5 p.
La quantit d'acide tartrique par litre de vin, exprime en grammes d'acide
tartrique, est gale :
28,84 p.
La quantit d'acide tartrique par litre de vin, exprime en grammes de tartrate
acide de potassium, est gale :
36,15 p.
2.2. Dosage volumtrique de comparaison
2.2.1. Ractifs
- Acide chlorhydrique (20 = 1,18 1,19 g/ml) dilu au 1/5 (v/v).
- Solution d'EDTA 0,05 M :
EDTA (sel disodique bihydrat de l'acide thylnediaminettractique ou complexon III) ..... 18,61 g
1l
Eau distille q.s.p. .......
- Solution d'hydroxyde de sodium 40 % (m/v) :
40 g
Hydroxyde de sodium ........
Eau distille q.s.p. ........ 100 ml
- Indicateur complxomtrique l'acide calcone-carbonique :
Acide calcone carbonique ou acide 2-hydroxy-4-sulfo1g
1-naphtylazo-3-naphtoque .....
Sulfate de sodium anhydre ...... 100 g
Aprs pese, replacer le creuset contenant le prcipit de racmate de calcium
sur la fiole vide et dissoudre le prcipit avec 10 ml d'acide chlorhydrique
dilu. Laver le creuset filtrant avec 50 ml d'eau distille.
Ajouter 5 ml de solution d'hydroxyde de sodium 40 % et 30 mg environ (une
pince) d'indicateur. Titrer par l'EDTA 0,05 M. Soit n le nombre de millilitres
verss.
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Acide tartrique
La quantit d'acide tartrique par litre de vin, exprime en milliquivalents est

gale :
5 n.
La quantit d'acide tartrique par litre de vin, exprime en grammes d'acide
tartrique est gale :
0,375 n.
La quantit d'acide tartrique par litre de vin exprime en grammes de tartrate
acide de potassium est gale :
0,470 n.
BIBLIOGRAPHIE
KLING A., Bull. Soc. Chim., 1910, 7, 567.
KLING A., FLORENTIN D., Ibid, 1912, 11, 886.
SEMICHON L., FLANZY M., Ann. Fals. Fraudes, 1933, 26, 404.
PEYNAUD E., Ibid, 1936, 29, 260.
PATO M., Bull. O.I.V., 1944, 17, no, 161, 59, no, 162, 64.
POUX C., Ann. Fals. Fraudes, 1949, 42, 439.
PEYNAUD E., Bull. Soc. Chim. Biol., 1951, 18, 911 ; Ref. Z. Lebensmit. Forsch. ,
1953, 97, 142.
JAULMES P., BRUN Mme S., VASSAL Mlle M., Trav. Soc, Pharm., Montpellier,
1961, 21, 46-51.
JAULMES P., BRUN Mme S., CABANIS J.C., Bull. O.I.V., 1969, nos 462-463,
932.
OIV-MA-AS313-05A : R2009

Acide tartrique
Mthodes Type IV
Acide tartrique
Principe des mthodes

L'acide tartrique, isol l'aide d'une colonne changeuse d'anions, est dos
colorimtriquement dans l'luat grce la coloration rouge qu'il donne avec
l'acide vanadique. Cet luat contient aussi les acides lactique et malique qui ne
sont pas gnants.
SUPPRIME
(Rsolution OIV-Oeno-377-2009)
OIV-MA-AS313-05B : R2009

Acide Lactique Mthode chimique
Acide lactique
Mthode chimique
Mthode usuelle : lacide lactique, spar sur colonne de rsine changeuse
danions, est oxyd en thanal et dos par colorimtrie aprs raction avec le
nitroprussiate de sodium et la pipridine.
SUPPRIME
OIV-MA-AS313-06 : R2009

Acide lactique Mthode enzymatique
Mthode Type II
Acide lactique
Mthode enzymatique
1. Principe de mthode
En prsence de nicotinamide-adnine-dinuclotide (NAD) l'acide lactique total
(Llactate et D-lactate) est oxyd en pyruvate dans une raction catalyse par la
Llactate dshydrognase (L-LDH) et la D-lactate dshydrognase (D-LDH).
L'quilibre de la raction est en faveur du lactate. L'limination du pyruvate du
milieu ractionnel dplace l'quilibre de la raction dans le sens de la formation de
pyruvate.
En prsence de L-glutamate, le pyruvate est transform en L-alanine, raction
catalyse par la glutamate-pyruvate-transaminase (GPT).
L-LDH
(1)
L-lactate + NAD+
(2)
D-lactate + NAD+
pyruvate + NADH + H
L-LDH
L-LDH
(3)
Pyruvate + L-glutamate
L-alanine + -ctoglutarate
La formation de NADH, mesure par l'augmentation de l'absorbance la longueur

d'onde de 340 nm, est proportionnelle la quantit de lactate prsente.
Remarque : L'acide L-lactique peut tre dtermin individuellement par
application des ractions (1) et (3). L'acide D-lactique peut tre dtermin
individuellement par application des ractions (2) et (3).
2. Appareillage
2.1. Spectrophotomtre permettant d'effectuer les mesures 340 nm, maximum
d'absorption du NADH.
dfaut, photomtre spectre discontinu permettant d'effectuer les mesures
334 nm ou 365 nm.
2.3. Micropipettes permettant de prlever des volumes compris entre 0,02 et 2 ml.
OIV-MA-AS313-07 : R2009

3. Ractifs
Eau bidistille
3.1. Solution tampon pH 10 (glycylglycine 0,6 mole/l ; L-glutamate 0,1 mole/l).
Dissoudre 4,75 g de glycylglycine, 0,88 g d'acide L-glutamique dans environ
50 ml d'eau bidistille ; ajuster le pH 10 avec quelques millilitres de solution
d'hydroxyde de sodium 10 M et porter 60 ml avec de l'eau bidistille.
La solution reste stable pendant au moins 12 semaines + 4 C.
-3
3.2. Solution de nicotinamide-adnine-dinuclotide (NAD) environ 40 10 M ;

dissoudre 900 mg de NAD dans 30 ml d'eau bidistille. La solution reste
stable pendant au moins 4 semaines + 4 C.
3.3. Suspension de glutamate-pyruvate-transaminase (GPT) 20 mg/ml. La
suspension est stable pendant au moins un an + 4 C.
3.4. Suspension de L-lactate-dshydrognase (L-LDH) 5 mg/ml. La suspension
est stable pendant au moins un an + 4 C.
3.5. Suspension de D-lactate-dshydrognase (D-LDH) 5 mg/ml. La suspension
est stable pendant au moins un an + 4 C.
Il est recommand de procder, pralablement au dosage, la vrification de
l'activit de l'enzyme.
Remarque : L'ensemble des ractifs ncessaires pour le dosage est disponible
dans le commerce.
4. Prparation de l'chantillon
Le dosage du lactate s'effectue gnralement directement sur le vin sans
dcoloration pralable et sans dilution si la concentration en acide lactique est
infrieure 100 mg/l. Si la concentration du vin en acide lactique est comprise
entre :
100 mg/l et 1 g/l diluer 1/10 avec de l'eau bidistille ;
1 g/l et 2,5 g/l diluer 1/25 avec de l'eau bidistille ;
2,5 g/l et 5 g/l diluer 1/50 avec de l'eau bidistille.
5. Mode opratoire
Remarques prliminaires :
Eviter de toucher avec les doigts la partie de la verrerie qui entre en contact avec le
milieu ractionnel, ceci pouvant tre une cause dapport dacide L-lactique qui
fausserait le rsultat.
La solution tampon doit tre ramene 20-25 C avant de procder au dosage.
5.1. Dosage de l'acide lactique total
Le spectrophotomtre tant rgl sur la longueur d'onde 340 nm, les mesures
d'absorbance se font dans les cuves de 1 cm de trajet optique, l'absorbance zro
tant rgle par rapport l'air (pas de cuve sur le trajet optique) ou par rapport
l'eau.
OIV-MA-AS313-07 : R2009

Dans les cuves de 1 cm de trajet optique introduire :

Tmoin
Dosage
(ml)
(ml)
Solution 3.1. ............................ 1.00
1.00
Solution 3.2. ........................... 0.20
0.20
Eau bidistille ................... 1.00
0.80
Suspension 3.3. ....................... 0.02
0.02
Echantillon ...............
0.20
Mlanger l'aide d'un agitateur de verre ou d'une baguette de matire
synthtique bout aplati ; aprs environ 5 minutes, mesurer les absorbances
des solutions tmoin et dosage (A1).
Ajouter 0,02 ml de solution 3.4 et 0,05 ml de solution 3.5, homogniser,
attendre la fin de la raction (environ 30 minutes) et mesurer les absorbances
des solutions tmoin et dosage (A2).
Dterminer les diffrences d'absorbances (A2-A1) du tmoin et du dosage.
Dduire la diffrence d'absorbances du tmoin de la diffrence d'absorbance du
dosage.
A = AD AT
5.2. Dosage de l'acide L-lactique et de l'acide D-lactique
Le dosage de l'acide L-lactique et D-lactique peut tre ralis individuellement
en appliquant le mode opratoire indiqu pour l'acide lactique total, mais en
oprant ainsi aprs avoir dtermin A1 :
Ajouter 0,02 ml de solution 3.4, homogniser, attendre la fin de la raction
(environ 20 minutes) et mesurer les absorbances des solutions tmoin et
dosage (A2).
Ajouter 0,05 ml de solution 3.5, homogniser, attendre la fin de la raction
(environ 30 minutes) et mesurer les absorbances des solutions tmoin et
dosage (A3).
Dterminer les diffrences d'absorbances (A2-A1) pour l'acide L-lactique et
(A3A2) pour l'acide D-lactique dans le cas du tmoin et dans le cas du dosage.
Dduire la diffrence d'absorbance du tmoin de la diffrence d'absorbance du
dosage
A = AD AT
Remarque : Le temps ncessaire l'action des enzymes peut varier d'un lot
l'autre. Il n'est donn ci-dessus qu' titre indicatif. Il est recommand de le
dterminer pour chaque lot. Lorsqu'on dose l'acide L-lactique seul, le temps
d'incubation aprs addition de la L-lactate deshydrognase peut tre ramen
10 minutes.
OIV-MA-AS313-07 : R2009


La concentration en acide lactique est donne en grammes par litre (g/l) avec
1 dcimale.2.5.1. Mode de calcul
6.1. Mode de calcul
La concentration en grammes par litre est calcule par la formule gnrale :
V x PM
x
x x x 1000
V = volume du test en millilitres (V = 2,24 ml pour l'acide L-lactique,

V = 2,29 ml pour l'acide D-lactique et l'acide lactique total).
= volume de l'chantillon en millilitres (ici 0,2 ml)
PM = masse molculaire de la substance doser (ici acide DL-lactique = 90,08)
= trajet optique de la cuve en centimtres (ici 1 cm)
= coefficient d'absorption du NADH 340 nm
-1
-1
(= 6,3 mmole x l x cm ).
6.1.1 Acide lactique total et acide D-lactique

C = 0,164 x A
Si une dilution a t effectue lors de la prparation de l'chantillon, multiplier
le rsultat par le facteur de dilution.
Remarque :
-1
-1
Mesure 334 nm : = 6,2 (mmole x l x cm ).
C = 0,167 x A,
-1
-1
Mesure 365 nm : = 3,4 (mmole x l x cm ).
C = 0,1303 x A,
6.1.2 Acide L-lactique

C = 0,160 x A
Remarque :
-1
-1
Mesure 334 nm : = 6,2 (mmole x 1 x cm ).
C = 0,163 x A,
-1
-1
Mesure 365 nm : = 3,4 (mmole x 1 x cm ).
C = 0,297 x A,
OIV-MA-AS313-07 : R2009

6.2. Rptabilit (r)

r = 0,02 + 0,07 xi
xi = concentration en acide lactique de l'chantillon en g/l.
R = 0,05 + 0,125 xi
xi = concentration en acide lactique de l'chantillon en g/l.
BIBLIOGRAPHIE
HOHORST H.J., in Mthodes d'analyse enzymatique, par BERGMEYER H.U., 2e

d., p. 1425, Verlag-Chemie Weinheim/Bergstae, 1970.
GAWEHN K. et BERGMEYER H.U., ibid., p. 1450.
BOEHRINGER, Mannheim, Mthodes d'analyse enzymatique en chimie
JUNGE Ch., F.V., O.I.V., 1974, no 479.
VAN DEN DRIESSCHE S. et THYS L., F.V., O.I.V., 1982, no 755.
OIV-MA-AS313-07 : R2009

Acide citrique - Mthode chimique
Mthode Type IV
Acide citrique
Mthode chimique
Lacide citrique est fix avec les autres acides du vin par une rsine changeuse
danions. On procde une lution fractionne qui permet de le sparer de lacide
citramalique.
Lacide citrique est transform par oxydation mnage en actone, que l'on spare
par distillation. Lthanal entran est oxyd en acide actique et on dose lactone
par iodomtrie.
2. Appareillage
2.1. Colonne dchangeur danions
Dans une burette robinet de 25 ml, placer un tampon de laine de verre et
verser 20 ml de rsine Dowex 1 X 2.
Au commencement, faire subir la rsine deux cycles complets de rgnration
avec passages alterns de solution M dacide chlorhydrique et dhydroxyde de
sodium. Rincer avec 50 ml deau distille1. Saturer la rsine dions actate par
passage de 250 ml dune solution 4 M dacide
actique ; laver avec 100 ml deau distille.
Lchantillon analyser est pass sur la colonne
conformment la description ci-dessous.
Aprs llution des acides, rincer avec 50 ml
deau distille et procder nouveau la
saturation de la rsine avec la solution dacide
actique 4 M. Rincer avec 100 ml deau. La
rsine est prte pour un nouveau dosage.
Fig. 1 :
Appareil doxydation et distillation
pour dosage de lacide citrique
2.2 Appareil pour oxydation

Lemploi dun appareil distiller muni dun
ballon oxydation, dont le schma est donn
fig. 1, facilite lintroduction de la solution de
permanganate de potassium, qui est alors trs
rgulire.
A dfaut, utiliser un ballon fond rond de 500
ml, surmont dun entonnoir robinet, dont le
Le passage de la solution dhydroxyde de sodium provoque une contraction qui, suivie dun
gonflement lors du lavage leau, empche lcoulement. Il est recommand dagiter la rsine ds
que les premiers millilitres deau passent travers la colonne, pour la dcoller du fond de la burette.
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bout est effil afin que laddition de permanganate de potassium soit aussi rgulire
que possible.
3. Ractifs
- Rsine Dowex 1 X 2 (50-100 mesh.).
- Solution 4 M dacide actique
- Solution 2,5 M dacide actique
- Solution 2 M dhydroxyde de sodium
- Acide sulfurique ((20 = 1,84 g/ml) dilu au 1/5 (v/v)
- Solution tampon de pH 3,2-3,4
Dihydrognophosphate de potassium, KH2PO4 .. . . . . . .. . .. .. . . 150 g
Acide phosphorique pur ((20 = 1,70 g/ml) . . . . . .. . . . . . . . . .... .. . . .
5 ml
Eau q.s.p. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . .. . . . . . . .. .. . . . . 1000 ml
- Solution de sulfate de manganse, MnSO4.H2O, 50 g/l
- Pierre ponce
- Solution 0,01 M de permanganate de potassium
- Acide sulfurique (dilu au 1/3 (v/v)
- Solution 0,4 M de permanganate de potassium
- Solution de sulfate de fer II, FeSO4.7H2O 40 p. 100 (m/v)
- Solution 5 M dhydroxyde de sodium
- Solution 0,01 M diode
- Solution 0,02 M de thiosulfate de sodium
- Thiodne ou empois damidon.
4 Mode opratoire
4.1. Sparation des acides citrique et citramalique
Faire passer 25 ml de vin travers la colonne dchangeur danions Dowex 1 x
2 sous forme actate raison de 3 ml toutes les 2 minutes. Rincer la colonne
avec 20 ml deau distille trois reprises. luer les acides avec 200 ml de
solution 2,5 M dacide actique que lon fait passer la mme vitesse. Dans
cette fraction dluat on retrouve les acides succinique, lactique,
galacturonique, citramalique et la presque totalit de lacide malique.
Procder ensuite llution des acides citrique et tartrique en faisant passer
travers la colonne 100 ml dune solution 2 M dhydroxyde de sodium et
recueillir lluat dans le ballon de lappareil pour loxydation.
4.2. Oxydation
Dans le ballon contenant ce deuxime luat, ajouter de lacide sulfurique dilu
au 1/5 (environ 20 ml) pour amener le pH entre 3,2 et 3,8. Ajouter alors 25 ml
de solution tampon pH 3,2-3,4, 1 ml de solution de sulfate de manganse et
quelques grains de pierre ponce.
Porter lbullition et distiller 50 ml que lon rejette.
Placer la solution 0,01 M de permanganate de potassium dans lentonnoir
robinet et lintroduire raison de 1 goutte par seconde dans lluat en
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bullition. Le distillat est recueilli dans un flacon de 500 ml bouchant lmeri

et contenant quelques millilitres deau. Poursuivre loxydation jusqu
coloration brune du liquide indiquant un excs de permanganate de potassium.
4.3. Sparation de lactone
Si le volume de distillat est infrieur 90 ml, porter ce volume avec de leau
distille ; ajouter 4,5 ml dacide sulfurique dilu au 1/3 et 5 ml dune solution
0,4 M de permanganate de potassium.
Si le distillat recueilli dpasse largement ce volume, complter 180 ml et
doubler la dose des ractifs.
Dans ces conditions (milieu 0,25 M en acide sulfurique et 0,02 M en
permanganate de potassium), lthanal est oxyd en acide actique tandis que
lactone reste intacte.
Le flacon est bouch et laiss au repos pendant 45 min. la temprature
ambiante. Au bout de ce temps lexcs de permanganate de potassium est
dtruit par addition de la solution de sulfate de fer (II).
Distiller et recueillir 50 ml environ de distillat dans un flacon bouchant
lmeri contenant 5 ml dune solution 5 M dhydroxyde de sodium.
4.4. Dosage de lactone
Ajouter au contenu du flacon 25 ml dune solution 0,01 M diode2.
Laisser en contact 20 min. Ajouter 8 ml dacide sulfurique dilu au 1/5 et titrer
lexcs diode par le thiosulfate 0,02 M en prsence de thiodne, soit n ml.
Faire dans les mme conditions un dosage blanc en remplaant les 50 ml de
distillat par 50 ml deau distille.
Soit n ml de thiosulfate utiliss.
5. Calculs
1 ml diode 0,01 M correspond 0,64 mg dacide citrique.
Dans les conditions opratoires dcrites, la quantit dacide citrique en
milligrammes par litre, est donn par
(n' - n) x 25,6
La concentration en acide citrique est exprime en milligrammes par litre sans dcimale.
Cette dose convient pour des teneurs en acide citrique ne dpassant pas 0,5 0,6 g/l. Pour des
teneurs suprieures le volume prescrit de la solution diode nest pas suffisant et la solution ne
prend pas une coloration jaune, caractristique dun excs diode. Dans ce cas doubler ou tripler
la quantit diode ajoute, jusqu ce que la solution devienne nettement jaune. Cependant, dans
les cas exceptionnels o la teneur du vin en acide citrique dpasse 1,5 g/l, il est prfrable de
recommencer lanalyse sur 10 ml de vin.
OIV-MA-AS313-08 : R2009

BIBLIOGRAPHIE
KOGEN A., Z. Anal. chem., 1930, 80, 112.
BARTELS W., Z. Unters. Lebensm. 1933, 65, 1.
PEYNAUD E., Bull. O.I.V., 1938, 11, no 118, 33.
GODET C., CHARRIERE R., Trav. Chim. Alim. Hyg., 1948, 37, 317.
KOURAKOU Mme S., Ann. Fals. Exp. Chim., 1962, 55, 149.
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Acide citrique Mode enzymatique
Mthode Type II
Acide citrique
Mthode enzymatique
1 Principe de la mthode
L'acide citrique est transform en oxaloactate et actate dans une raction
catalyse par la citrate-lyase (CL) :
CL
Citrate
oxaloactate + actate
En prsence de la malate-dshydrognase (MDH) et de la lactate-dshydrognase

(LDH), l'oxaloactate et son driv de dcarboxylation, le pyruvate, sont rduits en
L-malate et en L-lactate par le nicotinamide-adnine-dinuclotide rduit (NADH) :
MDH
Oxaloactate + NADH + H+
L-malate + NAD+
LDH
L-lactate + NAD+
La quantit de NADH oxyd en NAD+ dans ces ractions est proportionnelle au

citrate prsent. L'oxydation du NADH est mesure par la diminution de son
absorbance la longueur d'onde 340 nm.
2 Appareillage
2.1 Spectrophotomtre permettant d'effectuer les mesures 340 nm, maximum
334 nm ou 365 nm
2.3. Micropipettes permettant de prlever des volumes allant de 0,02 2 ml.
3. Ractifs
2+
-3
3.1. Tampon pH 7,8 (glycylglycine 0,51 M ; pH = 7,8 ; Zn : 0,6 10 M) :

Dissoudre 7,13 g de glycylglycine dans environ 70 ml d'eau bidistille.
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Ajuster le pH 7,8 avec environ 13 ml de solution d'hydroxyde de

sodium 5 M ; ajouter 10 ml de solution de chlorure de zinc ZnCl2, 80 mg
dans 100 ml et porter 100 ml avec de l'eau bidistille.
3.2. Solution de nicotinamide-adnine-dinuclotide rduit (NADH), environ
3
6.10 M : dissoudre 30 mg de NADH et 60 mg de NaHCO3 avec 6 ml d'eau
bidistille. La solution reste stable pendant au moins 4 semaines + 4 C.
3.3. Solution de malate dshydrognase/lactate dshydrognase, (MDH/LDH)
(0,5 g MDH/ml ; 2,5 mg LDH/ml) : on fait un mlange de 0,1 ml MDH
(5 g MDH/ml), 0,4 ml de solution de sulfate d'ammonium (3,2 M) et 0,5 ml
LDH (5 mg/ml).
Cette suspension est stable pendant au moins un an + 4 C.
3.4. Solution de citrate-lyase CL (5 mg de protine/ml). Dissoudre 168 mg de
lyophilisat dans 1 ml d'eau glace. La solution est stable pendant au moins une
semaine + 4 C et pendant au moins 4 semaines sous forme congele.
Il est recommand de procder, pralablement au dosage, la vrification de
l'activit de l'enzyme.
3.5. Polyvinylpolypyrolidone (PVPP) (Voir Codex nologique international).
Remarque : L'ensemble des ractifs ncessaires pour ce dosage est disponible dans
le commerce.
Le dosage du citrate s'effectue gnralement directement sur le vin sans
dcoloration pralable et sans dilution, condition que la teneur en acide citrique
soit infrieure 400 mg/l. Sinon, procder la dilution du vin de manire que la
concentration en citrate se situe entre 20 et 400 mg/l (quantit de citrate dans la
prise d'essai comprise entre 5 g et 80 g).
Dans le cas de vins rouges riches en composs phnoliques, il est recommand de
le traiter au pralable par la PVPP : mettre en suspension dans l'eau 0,2 g environ
de PVPP, laisser reposer 15 minutes. Filtrer sur filtre pliss.
10 ml de vin plac dans une fiole conique de 50 ml, ajouter la PVPP humide
prleve la spatule sur le filtre. Agiter pendant 2 3 minutes. Filtrer.
5. Mode opratoire
d'absorbance se font dans les cuves de 1 cm, l'absorbance zro tant rgle par
rapport l'air (pas de cuve sur le trajet optique).
Dans les cuves de 1 cm d'paisseur, introduire :
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Solution 3.1 ..............................

Solution 3.2 ............ ................
Echantillon ..............
Eau bidistille ......................
Solution 3.3. .... .....................
Tmoin
1,00 ml
0,10 ml
2,00 ml
0,02 ml
Dosage
1,00 ml
0,10 ml
0,20 ml
1,80 ml
0,02 ml
Mlanger ; aprs environ 5 minutes, lire les absorbances des solutions tmoin et
dosage (A1).
Ajouter :
0,02 ml
Solution 3.4 ................ 0,02 ml
Mlanger ; attendre la fin de la raction (environ 5 min.) et lire les absorbances des
solutions tmoin et dosage (A2).
Dterminer les diffrences d'absorbances (A1-A2) du tmoin et du dosage.
Dduire la diffrence d'absorbances du tmoin de la diffrence d'absorbances du
dosage : AD and AT.
La concentration en acide citrique est donne, en milligrammes par litre (mg/l) sans
dcimale.
6.1. Mode de calcul
La concentration en milligrammes par litre est donne par la formule gnrale :
V x PM
x
xx
V
= volume du test en millilitres (ici 3,14 ml)
v
= volume de l'chantillon en millilitres (ici 0,2 ml)
PM = masse molculaire de la substance doser (ici, acide citrique anhydre = 192,1)
= trajet optique de la cuve en centimtres (ici 1 cm)
= coefficient d'absorption du NADH ; 340 nm,

-1
-1
= 6.3 mmole x l x cm
on obtient :
C = 479 x A
Remarque :
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-1
-1
Mesure 334 nm : C = 488 x A (= 6,3 mmole x l x cm ).

-1
-1
Mesure 365 nm : C = 887 x A (= 3,4 mmole x l x cm ).
6.2. Rptabilit (r)

Teneur en acide citrique infrieure 400 mg/l :
r = 14 mg/l.
Teneur en acide citrique suprieure 400 mg/l :
r = 28 mg/l.

Teneur en acide citrique infrieure 400 mg/l :
R = 39 mg/l.
Teneur en acide citrique suprieure 400 mg/l :
R = 65 mg/l.
BIBLIOGRAPHIE
MAYER K. et PAUSE G., Lebensm. Wiss. u. Technol., 1969. 2, 143
JUNGE Ch., F.V., O.I.V., 1970, no 364
BOEHHRINGER, Mannheim, Mthodes d'analyse enzymatique en chimie
VAN DEN DREISCHE S. et THYS L., F.V., O.I.V., 1982, no 755.
OIV-MA-AS313-09 : R2009

Acide malique total Mthode usuelle
Mthode Type IV
Acide malique total

Mthode usuelle
1 Principe de la mthode
L'acide malique isol l'aide d'une colonne de rsine changeuse d'anions est dos
colorimtriquement dans l'luat grce la coloration jaune qu'il donne sous l'action
de l'acide sulfurique 96 p. 100 et de l'acide chromotropique. Les substances
contenues dans l'luat interfrent dans cette raction. Mais ces substances
ragissent, contrairement l'acide malique, avec l'acide sulfurique 86 pour 100 et
l'acide chromotropique. Pour liminer cette interfrence, il suffit donc de soustraire
de l'absorbance obtenue aprs raction avec l'acide chromotropique et l'acide
sulfurique 96 p. 100, l'absorbance obtenue aprs raction avec l'acide
chromotropique et l'acide sulfurique 86 p. 100.
2. Appareillage
2.1. Colonne de verre de 250 mm environ de longueur et de 35 mm de diamtre
intrieur, munie d'un robinet.
2.2. Colonne de verre de 300 mm environ de longueur et de 10 11 mm de
diamtre intrieur, munie d'un robinet.
2.4. Spectrophotomtre permettant les mesures d'absorbance la longueur d'onde
de 420 nm avec cuves de 10 mm de trajet optique.
3. Ractifs
3.1. changeur d'anions de forte basicit (par exemple Merck III).
3.2. Hydroxyde de sodium 5 p. 100 (m/v).
3.3. Acide actique 30 p. 100 (m/v).
3.4. Acide actique 0,5 p. 100 (m/v).
3.5. Solution de sulfate de sodium (Na2SO4) 10 p. 100 (m/v).
3.6. Acide sulfurique concentr 95-97 % (m/m).
3.7. Acide sulfurique 86 p. 100 (m/m).
3.8. Solution d'acide chromotropique 5 p. 100 (m/v).
prparer extemporanment avant chaque dosage en dissolvant 500 mg de
chromotropate de sodium (C10H6Na2O8S2.2H2O) dans 10 ml d'eau distille.
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3.9. Solution d'acide DL-malique 0,5 g/l.

Dissoudre 250 mg d'acide malique (C4H6O5) dans une quantit suffisante de
solution de sulfate de sodium 10 p. 100 (3.5) pour avoir 500 ml.
4. Mode opratoire
4.1. Prparation de l'changeur d'ions
Placer dans la colonne de verre 35 250 mm au-dessus du robinet un tampon
de coton de verre imprgn d'eau distille. Verser dans la colonne de
l'changeur d'ions mis en suspension dans l'eau de manire avoir un espace
libre d'environ 50 mm au-dessus de la surface de l'changeur d'ions. Aprs
rinage avec 1000 ml d'eau distille, remplir la colonne avec la solution
d'hydroxyde de sodium 5 p. 100, laisser couler le liquide jusqu' environ
23 mm au-dessus de la surface de l'changeur d'ions, rpter encore 2 fois
cette opration et laisser en contact durant 1 heure. Laver la colonne avec 1000
ml d'eau distille. Ensuite, remplir la colonne avec la solution d'acide actique
30 p. 100, laisser couler le liquide jusqu' environ 2-3 mm au-dessus de la
surface de l'changeur d'ions, rpter cette opration 2 fois et laisser en contact
durant au moins 24 heures avant l'emploi. Conserver ensuite l'changeur d'ions
dans l'acide actique 30 p. 100 pour les dosages ultrieurs.
4.2. Prparation de la colonne d'changeur d'ions
Placer dans la colonne de verre 11 300 mm au-dessus du robinet un tampon
de coton de verre. Verser dans la colonne l'changeur d'ions, prpar comme
dcrit en 4.1, sur une hauteur de 10 cm. Le robinet tant ouvert, laisser la
solution d'acide actique 30 p. 100 s'couler jusqu' environ 2-3 mm audessus de la surface de l'changeur. Laver l'changeur avec 50 ml de la solution
d'acide actique 0,5 p. 100.
4.3. Isolement de l'acide DL-malique
Verser sur l'changeur prpar comme dcrit en 4.2, 10 ml de vin ou de mot.
Laisser couler le vin goutte goutte (dbit moyen : une goutte par seconde)
jusqu' environ 2-3 mm au-dessus de la surface de l'changeur d'ions. Laver la
colonne d'abord avec environ 50 ml de la solution d'acide actique 0,5 pour
100 et puis avec environ 50 ml d'eau distille ; laisser couler ces liquides avec
la mme vitesse que le vin.
luer les acides fixs sur l'changeur d'ions l'aide de la solution de sulfate de
sodium 10 p. 100 avec la mme vitesse que les oprations prcdentes
(1 goutte/sec.), recueillir l'luat dans une fiole jauge de 100 ml jusqu'
ajustage au trait de jauge.
On peut rgnrer l'changeur comme dcrit en 4.1.
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4.4. Dosage de l'acide malique

Prendre deux tubes large ouverture de 30 ml, bouchant l'meri,A et B.
Introduire dans chaque tube 1,0 ml d'luat et 1,0 ml de la solution d'acide
chromotropique 5 p. 100. Ajouter dans le tube A 10,0 ml d'acide sulfurique
86 p. 100 (tmoin) et dans le tube B 10,0 ml d'acide sulfurique 96 p. 100
(mesure). Boucher et agiter pour obtenir une homognit parfaite sans
mouiller le rodage. Plonger les tubes pendant 10 minutes exactement dans un
bain d'eau port pralablement une vive bullition. Refroidir les tubes 20 C
l'obscurit. Exactement 90 minutes aprs le dbut du refroidissement, mesurer
l'absorbance du tube B par rapport au tmoin (tube A) la longueur d'onde
420 nm dans les cuves de 1 cm de trajet optique.
4.5. tablissement de la courbe d'talonnage
Prlever 5 - 10 - 15 et 20 ml de la solution d'acide malique 0,5 g/l et les
introduire dans des fioles jauges de 50 ml ; porter au trait de jauge avec la
solution de sulfate de sodium 10 p. 100.
Les solutions ainsi obtenues correspondent des luats obtenus partir de vins
contenant 0,5 - 1,0 - 1,5 et 2,0 g d'acide DL-malique par litre.
Continuer comme il est indiqu en 4.4.
Les valeurs de l'absorbance obtenues avec ces solutions-talons reportes en
fonction des teneurs en acide malique correspondantes s'alignent sur une droite
passant par l'origine.
tant donn que l'intensit de la coloration dpend beaucoup de la
concentration de l'acide sulfurique, il est ncessaire de vrifier la courbe
d'talonnage pour au moins 1 point lors de chaque srie de mesures pour mettre
en vidence un changement ventuel dans la concentration de l'acide
sulfurique.
Reporter l'absorbance mesure pour l'luat sur la courbe d'talonnage pour obtenir
la teneur en acide DL-malique en grammes par litre. Cette teneur est exprime avec
1 dcimale.
BIBLIOGRAPHIE
REINHARD C., KOEDING, G., Zur Bestimmung der Apfelsure in Fruchtsften,
Flssiges Obst., 1989, 45, S, 373 ff.
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Acide L-malique Mthode enzymatique
Mthode Type II
Acide L-malique
Mthode enzymatique
En prsence de nicotinamide-adnine-dinuclotide (NAD) l'acide Lmalique
(Lmalate) est oxyd en oxaloactate dans une raction catalyse par la Lmalatedeshydrognase (L-MDH).
L'quilibre de la raction est en faveur du malate. L'limination de l'oxaloactate du
milieu ractionnel dlace l'quilibre de la raction dans le sens de la formation
d'oxaloactate. En prsence de L-glutamate, l'oxaloactate est transform en
Laspartate, raction catalyse par la glutamate-oxaloactate-transaminase (GOT).
L-MDH
+
+
oxaloactate + NADH + H
(1)
L-malate + NAD
GOT
(2)
Oxaloactate + L-glutamate
L-aspartate + ctoglutarate
La formation de NADH, mesure par l'augmentation de l'absorbance la longueur

d'onde de 340 nm, est proportionnelle la quantit de L-malate prsente.
2. Appareillage
2.1. Spectrophotomtre permettant d'effectuer les mesures 340 nm, maximum
334 nm ou 365 nm.
2.3. Micropipettes permettant de prlever des volumes compris entre 0,01 et 2 ml
3. Ractifs
Eau bidistille
3.1. Tampon pH 10 (glycylglycine 0,60 mol/l, L-glutamate 0,1 mol)
Dissoudre 4,75 g de glycylglycine et 0,88 g d'acide L-glutamique dans environ
50 ml d'eau bidistille ; ajuster le pH 10 avec environ 4,6 ml de solution
d'hydroxyde de sodium 10 M et porter 60 ml avec de l'eau bidistille.
3.2. Solution de nicotinamide-adnine-dinuclotide (NAD), environ 0,047 M :
dissoudre 420 mg de NAD dans 12 ml d'eau bidistille. La solution reste stable
pendant au moins 4 semaines + 4 C.
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3.3. Suspension de glutamate-oxaloactate-transaminase (GOT) 2 mg/ml.

La suspension est stable pendant au moins un an + 4 C.
3.4. Solution de L-malate-deshydrognase (L-MDH) 5 mg/ml.
La solution est stable pendant au moins un an + 4 C.
Remarque : L'ensemble des ractifs ncessaires pour le dosage est disponible dans le
commerce.
Le dosage du L-malate s'effectue gnralement directement sur le vin sans
dcoloration pralable et sans dilution, condition que la teneur en acide
Lmalique soit infrieure 350 mg/l (mesures 365 nm). Sinon, procder la
dilution du vin avec de l'eau bidistille de sorte que la concentration en
Lmalate se situe entre 30 et 350 mg/l (quantit de L-malate dans la prise
d'essai comprise entre 3 et 35 g).
Si la concentration en malate du vin est infrieure 30 mg/l le volume de la
prise d'essai peut tre augment jusqu' 1 ml. Dans ce cas le volume de l'eau
ajouter est rduit afin que les volumes totaux soient les mmes dans les deux
cuves.
5. Mode opratoire
d'absorbance se font dans les cuves de 1 cm de trajet optique, l'absorbance zro
tant rgl par rapport l'air (pas de cuve sur le trajet optique) ou par rapport
l'eau. Dans les cuves de 1 cm de trajet optique introduire :
Solution 3.1 ..
Solution 3.2 ..
Eau bidistille ..
Suspension 3.3 ...
Echantillon ...
Tmoin
1,00 ml
0,20 ml
1,00 ml
0,01 ml
-
Dosage
1,00 ml
0,20 ml
0,90 ml
0.01 ml
0,10 ml
Mlanger ; aprs environ 3 min., mesurer les absorbances des solutions tmoin et
dosage (A1). Ajouter :
Solution 3.4 . 0,01 ml
0,01 ml
Mlanger ; attendre la fin de la raction (environ 5 10 minutes) et mesurer les

absorbances des solutions tmoin et dosage (A2).
Dterminer les diffrences d'absorbances (A2 - A1) du tmoin et du dosage.
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Dduire la diffrence d'absorbances du tmoin de la diffrence d'absorbances du

dosage.
AAD AT
6. EXPRESSION DES RSULTATS
La concentration en acide L-malique est donne en grammes par litre (g/l) avec
1 dcimale.
6.1. Mode de calcul
La concentration en grammes par litre est calcule par la formule gnrale :
V x PM
x
x x 1000
V =
v =
P.M =
=
=
volume du test en ml (ici 2,22 ml)

volume de l'chantillon en millilitres (ici 0,1 ml)
masse molculaire de la substance doser (ici, acide L-malique = 134,09)
trajet optique de la cuve en centimtres (ici 1 cm)
coefficient d'absorption du NADH ; 340 nm,
-1
-1
= 6,3 mmole x l x cm
on obtient pour le L-malate :

C = 0,473 x A
Remarque :
-1
-1
Mesure 334 nm, = 6,2 (mmole x l x cm ).
C = 0,482 x A
Mesure 365 nm, = 3,4 (mmole x l x cm ).
C = 0,876 x A
-1
OIV-MA-AS313-11 : R2009
-1

6.2. Rptabilit (r)

r = 0,03 + 0,034 xi.
xi = concentration en acide malique de lchantillon en g/l.
R = 0,05 + 0,071 xi
xi = concentration en acide malique de lchantillon en g/l.
BIBLIOGRAPHIE
BERGMEYER H.U., Mthodes danalyse enzymatique, 2e d., Verlag-Chemie
Weinheim/Bergstrasse, 1970
BOERHINGER, Mannheim, Mthodes danalyse enzymatique en chimi alimentaire,
documentation technique.
VAN DEN DRIESSCHE S. et THYS L., F.C. O.I.V., 1982, n 755
OIV-MA-AS313-11 : R2009

Acide D-malique Mthode enzymatique
Mthode Type II
Acide D-malique
DOSAGE PAR MTHODE ENZYMATIQUE
1. Principe :
En prsence de D-malate-deshydrognase (D-MDH), lacide D-malique (D-malate)
est oxyd en oxalo-actate par le nicotinamide-adnine-dinuclotide (NAD).
Loxalo-actate form est transform en pyruvate et dioxyde de carbone.
(1) D-malate + NAD
+ D-MDH
pyruvate + CO2 + NADH + H+
La formation de NADH, mesure par laugmentation de labsorbance la longueur

donde de 334, 340 ou 365 nm, est proportionnelle la quantit de D-malate
prsente.
2. Ractifs :
Les ractifs permettant environ 30 dterminations sont prsents dans le commerce
en coffret comprenant :
1/ Flacon 1 contenant environ 30 ml de solution de tampon Hepes acide [N-(2hydroxythyl)piprazine-N-2-thane sulfonique] pH = 9,0 et stabilisateurs ;
2/ Flacon 2 contenant environ 210 mg de lyophilist de NAD ;
3/ Flacon 3 (au nombre de trois), contenant le lyophilist de D-MDH, titrant
environ 8 units.
Prparation des solutions :
1/ Utiliser le contenu du flacon 1 sans dilution.
Amener la solution 20-25 C avant lemploi;
2/ Dissoudre le contenu du flacon 2 dans 4 ml deau bidistille;
3/ Dissoudre le contenu dun des flacons 3 dans 0,6 ml deau bidistille. Amener la
solution 20-25 C avant lemploi.
Stabilit des solutions :
Le contenu du flacon 1 se conserve au moins un an + 4 C ; la solution 2 se
conserve environ 3 semaines + 4 C et 2 mois 20 C ; la solution 3 se
conserve 5 jours + 4 C.
3. Appareillage :
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3.1. Spectrophotomtre permettant deffectuer les mesures 340 nm maximum

dabsorption du NADH.
A dfaut, photomtre spectre discontinu permettant deffectuer les mesures
334 nm et 365 nm. Sagissant de mesures absolues dabsorbance (pas de
gamme dtalonnage, mais rfrence au coefficient dextinction du NADH),
les chelles des longueurs donde et des absorbances de lappareil doivent tre
contrles.
3.2. Cuves de 1 cm de trajet optique en verre ou cuves usage unique.
3.3. Micropipettes permettant de prlever des volumes compris entre 0,01 et 2 ml.
4. Prparation de lchantillon :
Le dosage du D-malate seffectue gnralement directement sur le vin sans
dcoloration pralable.
La quantit de D-malate dans la cuve devant tre comprise entre 2 g et 50 g, il
convient de diluer le vin de telle manire que la concentration en malate soit
comprise entre 0,02 et 0,5 g/l ou 0,02 et 0,3 g/l (selon lappareillage utilis).
Tableau de dilution
Quantit estime de D malate /litre
Mesure :
340 ou 334 nm
365 nm
< 0,3 g
< 0,5 g
0,3-3,0 g
0,5-5,0 g
Dilution avec de leau Facteur de dilution F
1+9
1
10
5. Mode opratoire :
Le spectrophotomtre tant rgl sur la longueur donde 340 nm, les mesures
dabsorbance se font dans les cuves de 1 cm de trajet optique, labsorbance zro
tant rgle par rapport lair (pas de cuve sur le trajet optique) ou par rapport
leau.
Dans les cuves de 1 cm de trajet optique, introduire :
Solution 1
Solution 2
Eau bidistille
Echantillon
Tmoin
1,00 ml
0,10 ml
1,80 ml
-
Essai
1,00 ml
0,10 ml
1,70 ml
0,10 ml
Mlanger. Aprs environ 6 minutes, mesurer les absorbances des solutions tmoin
et essai (A1).
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Ajouter,
Tmoin
0,05 ml
Solution 3
Essai
0,05 ml
Mlanger ; attendre la fin de la raction (environ 20 min.) et mesurer les

absorbances des solutions tmoin et dessai (A2).
Dterminer les diffrences dabsorbances (A2 - A1) du tmoin (T) et de lessai
(D).
Dduire la diffrence dabsorbance du tmoin de la diffrence dabsorbance de
lessai :
= D - T
Remarque : Le temps ncessaire laction des enzymes peut varier dun lot
lautre. Il nest donn ci-dessus qu titre indicatif. Il est recommand de le
Lacide D-malique ragit vite. Une activit supplmentaire de lenzyme transforme
aussi lacide L-tartrique mme si la vitesse est beaucoup moins rapide. Cest la
raison pour laquelle il y a une faible raction parasite quil est possible de corriger
par extrapolation (v. annexe 1).
6. Expression des rsultats :
La concentration en milligrammes par litre est calcule par la formule gnrale :
C=
V x PM
xdx
V = volume du test en ml (ici 2,95 ml)

= volume de lchantillon en ml (ici 0,1 ml)
PM = masse molculaire de la substance doser (ici acide D-malique = 134.09)
d = trajet optique de la cuve en cm (ici 1 cm)
= coefficient dabsorption du NADH :
340 nm = 6,3 (l mmol-1 cm-1)
365 nm = 3,4 (l mmol-1 cm-1)
334 nm = 6,18(l mmol-1 cm-1).
Si une dilution a t effectue lors de la prparation de lchantillon, multiplier le
rsultat par le facteur de dilution.
La concentration en acide D-malique est donne en milligrammes par litre (mg/l)
sans dcimale.
7. Fidlit :
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Les dtails de lessai interlaboratoire portant sur la fidlit de la mthode sont

rsums dans lannexe 2. Les valeurs drives de lessai interlaboratoire peuvent ne
pas tre applicables aux gammes de concentration en analyte et aux matrices autres
que celles donnes en annexe 2.
7.1. Rptabilit :
identique soumise essai, par un oprateur utilisant le mme appareillage,
dans lintervalle de temps le plus court, ne dpassera pas la valeur de
rptabilit r dans plus 5 % des cas.
La valeur est : r = 11 mg/l.
7.2. Reproductibilit :
identique soumise essai dans deux laboratoires ne dpassera pas la valeur de
reproductibilit R dans plus de 5 % des cas.
La valeur est : R = 20 mg/l.
8 Remarques :
Compte tenu de la prcision de la mthode, les valeurs d'acide D-malique infrieures
50 mg/L doivent tre confirmes par une autre mthode d'analyse utilisant un autre
principe de mesure par exemple celle de PRZYBORSKI et al, (1993) et les valeurs
d'acide D-malique infrieures 100 mg/L ne doivent pas tre interprtes comme une
addition d'acide D,L-malique au vin.
La prise d'essai de vin dans la cuvette ne doit pas tre suprieure 0,1ml pour viter
d'ventuelles inhibitions de l'activit enzymatique par les polyphnols.
BIBLIOGRAPHIE
PRZYBORSKI et al. Mitteilungen Klosterneuburg 43, 1993; 215-218.
OIV-MA-AS313-12A : R2009

ANNEXE 1
Comment traiter les ractions parasites :
Les ractions parasites sont gnralement dues des ractions secondaires de
lenzyme, la prsence dautres enzymes dans la matrice de lchantillon, ou
linteraction dun ou plusieurs lments de la matrice avec un co-facteur de la
raction enzymatique.
Dans la raction normale, labsorbance atteint une valeur constante au bout dun
certain temps, gnralement entre 10 min et 20 min, selon la vitesse de la raction
enzymatique spcifique. Cependant, lorsquil se produit des ractions secondaires,
labsorbance natteint pas une valeur constante, mais augmente rgulirement dans
le temps; ce type de processus est couramment appel raction parasite .
Lorsque ce problme se pose, il convient de mesurer labsorbance de la solution
intervalles rguliers (2 min 5 min), aprs le temps requis pour que la solution
talon atteigne son absorbance finale. Lorsque labsorbance augmente
rgulirement, procder 5 ou 6 mesures, puis faire une extrapolation graphique ou
par calcul, pour obtenir labsorbance qui aurait t celle de la solution au moment
ou lenzyme final a t ajout (T0). La diffrence dabsorbance extrapole ce
moment (Af - Ai) est utilise dans le calcul de la concentration du substrat.
A b s o rb a n c e
A / t = c o n s ta n t
m a in a n d s id e re a c tio n s
Af
m a in re a c tio n
s id e re a c tio n
Ai
T 0 (A d d itio n o f fin a l e n zym e )
T im e
Figure 1 : raction parasite
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ANNEXE 2
Rsultats statistiques de lessai interlaboratoires :
Nombre dchantillons :
Echantillon
Type de vin
1995
8
5 avec addition dacide D-malique
A
B
C
rouge rouge blanc
Nombre de laboratoires retenus

aprs limination des laboratoires
prsentant des rsultats aberrants
D
blanc
E
blanc
Nombre de laboratoires ayant des

rsultats aberrants
35
41
35
41
36
Valeur moyenne () (mg/l)
161,7
65,9
33,1
106,9 111,0
Ecart-type de rptabilit (sr) (mg/l)
4,53
4,24
1,93
4,36
4,47
Ecart-type relatif la rptabilit

(RSDr) (%)
2,8
6,4
5,8
4,1
4,00
Limite de rptabilit (r) (mg/l)
12,7
11,9
5,4
12,2
12,5
Ecart-type de reproductibilit (sR)

(mg/l)
9,26
7,24
5,89
6,36
6,08
Ecart-type
relatif
reproductibilit (RSDR) (%)
la
5,7
11
17,8
5,9
5,5
(R)
25,9
20,3
16,5
17,8
17,0
Limite
(mg/l)
de
reproductibilit
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Mthode Type IV
Dosage de l'acide d-malique dans les vins pour des faibles

teneurs, en employant la mthode enzymatique
1. DOMAINE DAPPLICATION
La mthode dcrite est applique au dosage, par voie enzymatique, de l'acide Dmalique des vins avec de teneurs infrieures 50 mg/l.
2. PRINCIPE
Le principe de la mthode est bas sur loxydation de lacide D-malique (Dmalate) par le nicotinamide-adnine-dinuclotide (NAD) en oxaloactate qui est
transform en pyruvate et dioxyde de carbone; la formation de NADH, mesure
par l'augmentation de l'absorbance la longueur d'onde de 340 nm, est
proportionnelle la quantit de D-malate prsente (principe de la mthode
dcrite pour le dosage de lacide D-malique pour des teneurs suprieures 50
mg/l), aprs lintroduction dans la cuve de mesure dune quantit dacide Dmalique quivalente 50 mg/l.
3. REACTIFS
Solution dacide D-malique 0,199 g/l, au-del des ractifs indiqus dans la
mthode dcrite pour des teneurs suprieures 50 mg/l.
4. APPAREILLAGE
Lappareillage indiqu dans la mthode dcrite pour des teneurs suprieures
50 mg/l.
5. PREPARATION DE LECHANTILLON
La prparation de lchantillon est indique dans la mthode dcrite pour des
teneurs suprieures 50 mg/l.
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6. MODE OPERATOIRE
Le mode opratoire indiqu dans la mthode dcrite pour des teneurs
suprieures 50 mg/l. (rsolution Oeno 6/98), mais avec lintroduction dans la
cuve dune quantit dacide D-malique quivalente 50 mg/l. (introduction de
0,025 ml dune solution dacide D-malique 0,199 g/l, en substitution du
volume quivalent de leau) ; les valeurs obtenues sont diminues de 50 mg/l.
7. VALIDATION INTERNE
Rsum du dossier de validation interne de la mthode de dosage de lacide Dmalique aprs adjonction pralable de 50 mg/l de cet isomre.
Gamme de travail
0 mg 70 mg dacide D-malique par litre.

Dans ces limites, la mthode est linaire, avec
un coefficient de corrlation entre 0,990 et
0,994
Limite de quantification
24,4 mg/l
Limite de dtection
8,3 mg/l
Sensibilit
0,0015 abs / mg/l
Taux de rcupration
87,5 115,0% pour les vins blancs et 75

105% pour les vins rouges
Rptabilit
=12,4 mg/l pour les vins blancs (selon la

mthode OIV, =12,5 mg/l)
=12,6 mg/l pour les vins rouges (selon la
mthode OIV, =12,7 mg/l)
Coefficient de variation
4,2% 7,6% (vins blancs et vins rouges)
Variabilit intralaboratoire
CV=7,4% (s=4,4 mg/l; moyenne=59,3 mg/l)
OIV-MA-AS313-12B : R2009

8. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
Chretien D., Sudraud P., 1993. Prsence naturelle d'acide D(+)-malique dans les
mots et les vins, Journal International des Sciences de la Vigne et du Vin, 27:
147-149.
Chretien D., Sudraud P., 1994. Prsence naturelle d'acide D(+)-malique dans les
mots et les vins, Feuillet Vert de l'OIV, 966.
Delfini C., Gaetano G., Gaia P., Piangerelli M.G., Cocito C., 1995. Production
of D(+)-malic acid by wine yeasts, Rivista de Viticoltura e di Enologia, 48: 7576.
OIV, 1998. Recueil des mthodes internationales d'analyse des vins et des
mots.Mise jour Septembre 1998. OIV, Paris.
Przyborski H., Wacha C., Bandion F., 1993. Zur bestimmung von
D(+)Apfelsure in wein, Mitteilung Klosterneuburg, 43: 215-218.
Machado M. et Curvelo-Garcia A.S.; 1999; , FV. O.I.V. N 1082, Ref.
2616/220199.
OIV-MA-AS313-12B : R2009

Acide L-ascorbique
Mthode Type IV
Acide L-ascorbique
1 Principe des mthodes

Les mthodes proposes permettent de doser lacide ascorbique et lacide
dhydroascorbique prsents dans les vins et les mots.
L'acide L-ascorbique est oxyd par action du charbon actif en acide
dhydroascorbique. Ceci forme un compos fluorescent par raction avec
l'orthophnylnediamine (O.P.D.A.). Un essai tmoin en prsence d'acide borique
permet de dterminer la fluorescence parasite (par formation d'un complexe acide
borique - acide dhydroascorbique) et de la dduire du dosage fluorimtrique.
2 Mthode (mthode fluorimtrique)
2.1. Appareillage
2.1.1. Fluorimtre.
Utiliser un spectrofluorimtre quip d'une lampe spectre continu en se
plaant la puissance minimale de la lampe.
Les longueurs d'onde d'excitation et d'mission optimales pour l'essai seront
dtermines pralablement et dpendent de l'appareil utilis. titre indicatif la
longueur d'onde d'excitation se situe au voisinage de 350 nm, la longueur
d'onde d'mission au voisinage de 430 nm.
Cuves de 1 cm de trajet optique.
2.1.2. Filtre en verre fritt de porosit 3.
2.1.3. Tubes essai (diamtre : 10 mm).
2.1.4. Agitateur pour tubes essai
2.2.Ractifs
2.2.1. Solution de dihydrochlorure d'ortho-phnylnediamine (C6H10Cl2N2),
0,02 g p. 100, prpare extemporanment.
2.2.2. Solution d'actate de sodium trihydrat 500 g/l.
2.2.3. Solution mixte d'acide borique et d'actate de sodium
Dissoudre 3 g d'acide borique dans 100 ml de solution d'actate de sodium
500 g/l. Cette solution doit tre prpare extemporanment.
2.2.4. Solution d'acide actique (20 = 1,05 g/ml) dilu 56 p. 100 (v/v) de pH
voisin de 1,2.
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Acide L-ascorbique
2.2.5. Solution de rfrence d'acide L-ascorbique 1 g par litre

Dissoudre, au moment de l'emploi, 50 mg d'acide L-ascorbique, pralablement
dshydrat dans un dessiccateur l'abri de la lumire, dans 50 ml de solution
d'acide actique.
2.2.6. Charbon actif trs pur pour analyses 1
Placer dans une fiole conique de 2 litres de capacit, 100 g de charbon actif,
ajouter 500 ml d'une solution d'acide chlorhydrique, (20 = 1,19 g/ml) 10 p.
100 (v/v). Porter l'bullition, filtrer sur filtre en verre fritt de porosit 3.
Recueillir le charbon ainsi trait dans une fiole conique de 2 l de capacit.
Ajouter 1 l d'eau, agiter et filtrer sur filtre de verre fritt de porosit 3. Rpter
deux fois cette opration. Placer le rsidu dans une tuve rgle 115 5 C
pendant 12 heures (une nuit par exemple).
2.3. Mode opratoire
2.3.1. Prparation de l'chantillon de vin ou de mot
Prlever un volume de vin ou de mot et le diluer 100 ml dans une fiole
jauge avec la solution d'acide actique 56% afin d'obtenir une solution dont
la concentration en acide L-ascorbique soit comprise entre 0 et 60 mg/litre.
Homogniser le contenu de la fiole jauge par agitation. Ajouter 2 g de
charbon actif et laisser en contact durant 15 min. en agitant de temps en temps.
Filtrer sur papier filtre ordinaire en liminant les premiers millilitres de filtrat.
Dans deux fioles jauges de 100 ml introduire 5 ml de filtrat et, respectivement,
5 ml de solution mixte d'acide borique et d'actate de sodium (essai tmoin) et
5 ml de solution d'actate de sodium (dosage). Laisser en contact durant
15 minutes en agitant de temps en temps, complter 100 ml avec de l'eau
distille.
Prlever 2 ml du contenu de chacune des fioles, ajouter dans un tube essai,
ajouter 5 ml de solution d'ortho-phnylnediamine ; mlanger laide de
lagitateur ; laisser la raction se dvelopper durant 30 min. l'obscurit, puis
effectuer la mesure au spectrofluorimtre.
2.3.2. Courbe d'talonnage
Dans trois fioles jauges de 100 ml placer respectivement 2, 4 et 6 ml de
solution de rfrence d'acide L-ascorbique, complter 100 ml avec la solution
d'acide actique. Homogniser par agitation. Les solutions de rfrence
prpares contiennent respectivement 2, 4 et 6 mg dacide ascorbique/100 ml.
Ajouter 2 g de charbon actif dans chacune des fioles et laisser en contact durant
15 min. en agitant de temps en temps. Filtrer sur papier filtre ordinaire en
liminant les premiers millilitres.
Introduire respectivement 5 ml de chacun des filtrats recueillis dans trois fioles
jauges de 100 ml (premire srie). Rpter l'opration dans une deuxime srie
1
Une des appellations commerciales est "norite"
OIV-MA-AS313-13A : R2009

Acide L-ascorbique
de trois fioles jauges. Ajouter dans chacune des fioles de la premire srie
(correspondant l'essai tmoin) 5 ml de solution mixte d'acide borique et
d'actate de sodium et dans chacune des fioles de la deuxime srie 5 ml de
solution d'actate de sodium.
Laisser en contact durant 15 min. en agitant de temps en temps. Complter
100 ml avec de l'eau distille. Prlever 2 ml du contenu de chacune des fioles,
ajouter 5 ml de solution d'ortho-phnylnediamine, agiter. Laisser la raction se
dvelopper durant 30 min. l'obscurit, puis effectuer la mesure au
spectrofluorimtre.
2.3.3. Dtermination fluorimtrique
Rgler, pour chaque solution de la courbe d'talonnage et pour la solution du
dosage, le zro de l'chelle des mesures sur l'essai tmoin correspondant.
Effectuer ensuite la mesure de l'intensit de la fluorescence pour chaque
solution de la gamme d'talonnage et pour le dosage.
Tracer la courbe d'talonnage. Elle doit tre linaire et passer par l'origine.
Reporter sur cette droite la valeur relative au dosage et dduire la teneur C en
acide ascorbique + acide dhydroascorbique de la solution analyse.
La concentration du vin en acide L-ascorbique + acide dhydroascorbique
exprime en milligrammes par litre sera :
CX F
F = facteur de dilution
BIBLIOGRAPHIE
Norme AFNOR, 76-107, ARNOR, Tour Europe, Paris.

PROM T., F.V., O.I.V., 1984, n 788.
OIV-MA-AS313-13A : R2009

Acide L-ascorbique
Mthode Type IV
Acide L-ascorbique
Principe des mthodes

L'acide L-ascorbique est oxyd par l'iode en acide dhydroascorbique. Ce compos
est
prcipit
par
la
2,4dinitrophnylhydrazine
en
bis
(2,4dinitrophnylhydrazone). Aprs sparation par chromatographie sur couche
mince et solubilisation en milieu actique, ce compos color en rouge est dos par
spectrophotomtrie 500 nm.
SUPPRIME
(Rsolution OIV-Oeno-377-2009)
OIV-MA-AS313-13B : R2009

Acide sorbique
Mthode Type IV
Acide sorbique
Mthode de dosage par spectrophotomtrie d'absorption dans l'ultraviolet
L'acide
sorbique
(acide trans,trans-hexa-2,4-dinoque)
extrait
par
entranement la vapeur d'eau est dos dans le distillat du vin par
spectrophotomtrie d'absorption dans l'ultraviolet. Les substances interfrant
sur la mesure d'absorption dans l'ultraviolet sont limines par vaporation
sec de la prise d'essai du distillat lgrement alcalinise par une solution
d'hydroxyde de calcium. Les teneurs infrieures 20 mg/l doivent tre
confirmes par la caractrisation par chromatographie en couche mince
(sensibilit : 1 mg/l).
2 Mthode de dosage par spectrophotomtrie dabsorption dans lultraviolet

2.1. Appareillage
2.1.1. Appareil d'entranement par la vapeur d'eau (cf. Acidit volatile).
2.1.2. Bain d'eau 100 C.
2.1.3. Spectrophotomtre permettant des mesures la longueur d'onde de
256 nm avec cuves en quartz de 1 cm de trajet optique.
2.2 Ractifs
2.2.1. Acide tartrique cristallis.
2.2.2. Solution d'hydroxyde de calcium environ 0,02 M.
2.2.3. Solution de rfrence d'acide sorbique 20 mg par litre.
Dissoudre 20 mg d'acide sorbique dans 2 ml environ de solution 0,1 M
d'hydroxyde de sodium. Verser dans une fiole jauge de 1000 ml, ajuster au
trait de jauge avec de l'eau. On peut galement dissoudre 26,8 mg de sorbate de
potassium dans l'eau et complter 1000 ml avec de l'eau.
2.3. Mode opratoire
2.3.1.Distillation
Placer dans le barboteur de l'appareil d'entranement par la vapeur d'eau 10 ml
de vin, ajouter environ 1 g d'acide tartrique. Recueillir 250 ml de distillat.
2.3.2. Courbe d'talonnage
OIV-MA-AS313-14A : R2009

Acide sorbique
Prparer par dilutions avec l'eau partir de la solution de rfrence quatre

solutions de rfrence dilues titrant respectivement 0,5-1-2,5 et 5 mg d'acide
sorbique par litre; mesurer l'aide du spectrophotomtre leurs absorbances
respectives 256 nm par rapport l'eau distille. Tracer la courbe des
variations de l'absorbance en fonction des concentrations des solutions. La
variation est linaire.
2.3.3. Dosage
Dans une capsule de 55 mm de diamtre placer 5 ml de distillat, ajouter 1 ml de
solution d'hydroxyde de calcium. vaporer sec sur bain d'eau bouillante.
Reprendre le rsidu par quelques millilitres d'eau distille, entraner
quantitativement dans une fiole jauge de 20 ml et ajuster au trait de jauge avec
les eaux de rinage. Mesurer l'absorbance 256 nm l'aide du
spectrophotomtre comparativement une solution tmoin obtenue par dilution
20 ml avec de l'eau de 1 ml de solution d'hydroxyde de calcium.
Porter la valeur de l'absorbance mesure sur la droite d'talonnage, en dduire
la concentration C de la solution en acide sorbique.
Remarque : Dans la pratique courante, cette vaporation sec peut tre
nglige. Oprer directement la mesure d'absorbance sur le distillat dilu au
par rapport l'eau distille.
La concentration en acide sorbique du vin exprime en milligrammes par litre
est gale :
100 C
C = concentration en acide sorbique de la solution
spectrophotomtrie, exprime en milligrammes par litre.
analyse
par
BIBLIOGRAPHIE
JAULMES P., MESTRES R. & MANDROU B., Ann. Fals. Exp. Chim., n spcial,
runion de Marseille, 1961, 111-116.
MANDROU, B., BRUN, S. & ROUX E., Ann. Fals. Exp. Chim., 1975, 725, 29-48.
CHRETIEN D., PEREZ L. & SUDRAUD P., F.V., O.I.V., 1980, n 720
OIV-MA-AS313-14A : R2009

Acide sorbique
Mthode Type IV
Acide sorbique
Mthode de dosage par chromatographie gazeuse
L'acide sorbique extrait dans l'ther thylique est dos par chromatographie en
phase gazeuse en prsence d'un talon interne.
2. Mthode de dosage par chromatographie en phase gazeuse
2.1. Appareillage
2.1.1. Chromatographe en phase gazeuse quip d'un dtecteur ionisation de
flamme et d'une colonne en acier inoxydable (4 m 1/8 de pouce)
pralablement traite par le dimthyldichlorosilane et garnie de phase
stationnaire, constitue par un mlange de dithylneglycol succinate (5%) et
d'acide phosphorique (1%) (DEGS-H3PO4) ou par un mlange de
dithylneglycol adipate (7%) et d'acide phosphorique (1%) (DEGA-H3PO4)
fix sur Gaschrom Q 80-100 mesh.
Pour le traitement au dimthyldichlorosilane (DMDCS), faire passer dans la
colonne une solution titrant 2 3 g de DMDCS dans le tolune.
Laver immdiatement la colonne avec du mthanol; faire passer un courant
d'azote, puis de l'hexane et nouveau un courant d'azote. La remplir ensuite.
Conditions opratoires :
- temprature du fou : 175 C.
- temprature de l'injecteur et du dtecteur : 230 C.
- gaz vecteur : azote (dbit 20 ml/min.).
Note: D'autres types de colonnes peuvent aussi donner une bonne sparation, en
particulier les colonnes capillaires (par exemple FFAP). La mthode de travail
dcrites ci-dessous est donne comme exemple
2.1.2. Microseringue de 10 microlitres de capacit gradue par 0,1 microlitre.
2.2. Ractifs
2.2.1. ther thylique distill au moment de l'utilisation.
2.2.2. Solution de l'talon interne : solution d'acide undcanoque dans l'thanol
95 pour 100 vol. titrant 1 g par litre.
1
2.2.3. Solution aqueuse d'acide sulfurique, (20 = 1,84 g/ml) dilu /3 (v/v).
2.3. Mode opratoire
OIV-MA-AS313-14B : R2009

Acide sorbique
2.3.1. Prparation de l'chantillon analyser

Dans un tube de verre de 40 ml environ de capacit et muni d'un bouchon rod
introduire 20 ml de vin, ajouter 2 ml de solution de l'talon interne et 1 ml de
solution dilue d'acide sulfurique.
Aprs agitation par retournements successifs, ajouter au contenu du tube 10 ml
d'ther thylique. Extraire l'acide sorbique dans la phase organique par
agitation du tube durant 5 min. Laisser dcanter.
2.3.2. Prparation de la solution de rfrence
Slectionner un vin dont le chromatogramme de l'extrait l'ther ne prsente
aucun pic au niveau de l'lution de l'acide sorbique; surcharger ce vin en acide
sorbique la concentration de 100 mg par litre. Traiter 20 ml de l'chantillon
ainsi prpar selon le mode opratoire dcrit en 2.3.1.
2.3.3. Chromatographie
Injecter successivement dans le chromatographe l'aide d'une microseringue 2
l de la phase thre obtenue en 2.3.2 et 2 l de la phase thre obtenue en
2.3.1.
Enregistrer les chromatogrammes respectifs; vrifier l'identit des temps de
rtention respectifs de l'acide sorbique et de l'talon interne. Mesurer la hauteur
(ou la surface) de chacun des pics enregistrs.
La concentration en acide sorbique du vin analys, exprime en milligrammes
par litre, est gale :
100 x h x I
H i
H = hauteur du pic de l'acide sorbique dans la solution de rfrence.
h = hauteur du pic de l'acide sorbique dans l'chantillon analyser.
I = hauteur du pic de l'talon interne dans la solution de rfrence.
I = hauteur du pic de l'talon interne dans l'chantillon analyser.
NOTE : La concentration en acide sorbique peut tre dtermine de la mme
manire partir des mesures de la surface des pics respectifs.
BIBLIOGRAPHIE
OIV-MA-AS313-14B : R2009

Acide sorbique
Mthode OIV-MA-AS313-14C
Mthode Type IV
Acide sorbique
Mthode de recherche de traces par chromatographie sur couche mince
L'acide sorbique extrait dans l'ther thylique est spar par chromatographie
sur couche mince et sa concentration est value semi-quantitativement.
2. Mthode de recherche de traces dacide sorbique par chromatographie sur
couche mince
2.1. Appareillage
2.1.1. Plaques pour chromatographie sur couche mince prtes l'emploi,
20 20 cm recouvertes de gel de polyamide (paisseur : 0,15 mm) additionn
d'un indicateur de fluorescence.
2.1.2. Cuve pour chromatographie sur couche mince.
2.1.3. Micropipette ou microseringue permettant de dlivrer des volumes de 5
l 0,1 l prs.
2.1.4. Lampe rayonnement ultraviolet (254 nm).
2.2. Ractifs
2.2.1. ther thylique
2.2.2. Solution aqueuse d'acide sulfurique (20 = 1,84 g/ml) dilu 1/3 (v/v).
2.2.3. Solution de rfrence d'acide sorbique dans un mlange
hydrothanolique 10 % d'thanol (vol.) environ titrant 20 mg par litre.
2.2.4. Phase mobile : hexane-pentane-acide actique (20:20:3)
2.3. Mode opratoire
2.3.1. Prparation de l'chantillon analyser
Dans un tube en verre de 25 ml environ de capacit et muni d'un bouchon rod,
placer 10 ml de vin, ajouter 1 ml de solution d'acide sulfurique dilu et 5 ml
d'ther thylique. Agiter par retournements successifs. Laisser dcanter.
2.3.2. Prparation des solutions dilues de rfrence
Par dilution partir de la solution 2.2.3 prparer cinq solutions dilues de
rfrence titrant respectivement 2, 4, 6, 8 et 10 mg d'acide sorbique par litre.
2.3.3. Chromatographie
OIV-MA-AS313-14C : R2009

Acide sorbique
2 cm du bord infrieur de la plaque, dposer l'aide d'une microseringue ou

d'une micropipette 5 l de phase thre obtenue en 2.3.1 et 5 l de chacune
des solutions dilues de rfrence, les dpts tant distants de 2 cm.
Placer la phase mobile dans la cuve pour chromatographie sur une hauteur de
0,5 cm environ et laisser l'atmosphre de la cuve se saturer des vapeurs des
solvants. Placer la plaque dans la cuve. Laisser dvelopper le chromatogramme
sur 12 15 cm (la dure de dveloppement est de 30 minutes environ). Scher
la plaque sous un courant d'air froid. Examiner le chromatogramme sous une
lampe rayonnement ultraviolet 254 nm.
Les taches relatives l'acide sorbique apparaissent en violet sombre sur le fond
jaune fluorescent de la plaque.
La comparaison de l'intensit du spot de l'chantillon analyser et des spots des
solutions de rfrence permet d'valuer semi-quantitativement la concentration
en acide sorbique entre 2 et 10 mg par litre. Une concentration gale 1 mg par
litre pourra tre dtermine avec un dpt de 10 l de solution de l'chantillon
analyser.
Des concentrations suprieures 10 mg par litre pourront tre dtermines avec
un volume de dpt de la solution analyser infrieur 5 l (mesur l'aide
d'une microseringue).
BIBLIOGRAPHIE
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pH
Mthode Type I
pH
Rsolution OIV-OENO 438-2011
1. Principe
Mesure de la diffrence de potentiel entre deux lectrodes plonges dans le mot
ou le vin. L'une des lectrodes a un potentiel qui est une fonction dfinie du pH du
liquide, l'autre a un potentiel fixe et connu et constitue l'lectrode de rfrence.
2. Appareillage
2.1 pH mtre talonn en units pH permettant des mesures 0,01 unit
prs..
2.2 lectrodes :
lectrode de verre, conserver dans l'eau distille;
lectrode de rfrence au calomel-chlorure de potassium satur, conserver
dans une solution sature de chlorure de potassium;
ou lectrode combine conserver dans l'eau distille.
3. Ractifs
Solutions tampons :
Solution sature de tartrate acide de potassium. Solution, contenant au moins
5,7 g/l de hydrognotartrate de potassium (HOOC C2H4O2 COOK) 20 C.
Cette solution peut se conserver 2 mois en prsence de 0,1 g de thymol pour
200 ml.
3,57 20 oC
pH
3,56 25 oC
3,55 30 oC
Solution 0,05 M de phtalate acide de potassium. Solution contenant 10,211 g/l
de hydrognophtalate de potassium (HOOC C6H4 COOK) 20 C.

(Dure maximale de conservation : 2 mois.)
pH
OIV-MA-AS313-15 : R2011
3,999 15 oC
4,003 20 oC
4,008 25 oC
4,015 30 oC

pH
Solution contenant :
Dihydrognophosphate de potassium, KH2PO4 ............ 3,402 g

Hydrognophosphate de potassium, K2HPO4 ............... 4,354 g
1l
Eau q.s.p. ..................................
(Dure maximale de conservation : 2 mois)
pH
6,90 15 o C
6,88 20 oC
6,86 25 oC
6,85 30 oC
N.B. Les solutions tampons de rfrence du commerce traables au

SI peuvent tre utilises.
N.B. : -
Par exemple :
pH 1,679 0.01 25C

pH 4,005 0.01 25C
pH 7,000 0.01 25C
4. Mode opratoire
4.1 Mise au zro de l'appareil
La mise zro s'effectue avant toute mesure, en suivant les indications donnes
pour l'appareil utilis.
4.2 talonnage du pH mtre
Ltalonnage de lappareil doit tre ralis 20C avec des solutions tampon
talon raccordes au SI. Les valeurs de pH choisies doivent encadrer la gamme
des valeurs pouvant tre rencontres dans les mots et les vins. Dans le cas o
le matriel utilis ne permet pas dassurer un talonnage avec des valeurs
suffisamment basses, une vrification utilisant un solution tampon talon
raccorde au SI et prsentant une valeur de pH proche des valeurs des mots et
des vins peut tre introduite.
4.3 Mesure
Plonger l'lectrode dans le vin ou le mot dont la temprature doit tre
comprise entre 20 et 25 C et aussi proche que possible de 20 C.
Lire directement sur l'chelle la valeur du pH.
Effectuer au moins deux dterminations sur le mme vin.
Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des deux dterminations.
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pH
Le pH du mot ou du vin est exprim avec 2 dcimales.
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Acide organique
Mthode Type IV
Dosage des acides organiques et anions mineraux dans

les vins par chromatographie ionique
Prambule
Le dveloppement de la chromatographie ionique haute performance dans les
laboratoires a permis dtudier le dosage par cette technique des acides
organiques et anions minraux dans les boissons alcoolises ou non.
Sagissant particulirement de lanalyse des vins, les rsultats des essais
dintercomparaison et les mesures des taux de recouvrement ont permis de
valider une mthodologie analytique.
Lintrt majeur de cette mthode tient au fait que les colonnes changeuses
dions permettent une sparation de la plupart des acides organiques et anions et
la dtection par conductimtrie affranchit lanalyste des interfrences dues la
prsence de composs phnoliques. Or, ce type dinterfrences est trs notable
dans les mthodes chromatographiques qui comportent une dtection dans
lultra-violet 210 nm.
1 - OBJET ET DOMAINE D'APPLICATION
La mthode de dosage des anions minraux et acides organiques par
chromatographie ionique est applicable aux boissons alcoolises (vins, eaux-devie et liqueurs). Elle permet de doser les acides organiques dans les domaines de
concentration, rapports dans le tableau 1; ces concentrations sont obtenues par
dilution des chantillons.
Tableau 1 : Domaine de concentration des anions pour leur analyse
par chromatographie ionique
Sulfate
Ortho-phosphate
Acide malique
Acide tartrique
Acide citrique
Acide isocitrique
0,1 10
0,2 10
1 20
1 20
1 20
0,5 5
mg/l
mg/l
mg/l
mg/l
mg/l
mg/l
Les gammes de travail mentionnes ci-dessus sont donnes titre indicatif.

Elles englobent les modes d'talonnage couramment pratiqus et sont donc
modulables en fonction du type d'appareillage utilis (nature de la colonne,
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Acide organique
sensibilit du dtecteur, ...) et du mode opratoire (volume d'chantillon inject,

dilution, ...).
2- PRINCIPE
Sparation des anions minraux et acides organiques sur une rsine changeuse
d'ions.
Dtection par conductimtrie.
Identification d'aprs le temps de rtention et quantification au moyen d'une
courbe d'talonnage.
3 - REACTIFS
Tous les ractifs utiliss lors de l'analyse doivent tre de qualit analytique.
L'eau servant la prparation des solutions doit tre de l'eau distille ou
dsionise d'une conductivit infrieure 0,06 S, exempte des anions doss
des seuils compatibles avec les limites de dtection que permet d'atteindre
l'appareillage utilis.
3.1 Eluant
La composition de l'luant dpend de la nature de la colonne de sparation et de
la nature de l'chantillon analyser. Elle est cependant toujours prpare partir
de solutions aqueuses dhydroxyde de sodium.
Les performances de l'analyse chromatographique sont altres par
carbonatation de la solution dhydroxyde de sodium; en consquence, les
flacons de phase mobile sont balays l'hlium avant adjonction dhydroxyde
de sodium et il faut prendre toutes les prcautions afin d'viter de les contaminer
par l'air ambiant.
Enfin, ce sont des solutions dhydroxyde de sodium concentres commerciales
qui seront utilises.
Remarque
Le tableau du chapitre 7 rappelle les principaux interfrents susceptibles d'tre
prsents dans les chantillons.
Il est donc ncessaire de savoir au pralable s'ils coluent avec les ions doser
et s'ils sont prsents une concentration telle que l'analyse est perturbe.
Les boissons fermentes contiennent de l'acide succinique qui peut interfrer
avec l'acide malique. A cet effet, il est ncessaire d'ajouter du mthanol dans
l'luant pour amliorer la rsolution de la colonne au niveau de ces deux
substances (20 % de mthanol).
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Acide organique
3.2 Solutions mres talons

Prparer des solutions mres talons de concentrations prcises voisines de
celles indiques sur le tableau suivant. Dissoudre dans l'eau, dans des fioles
jauges de 1000 ml, des quantits de sels ou d'acides correspondants. (Tableau
2)
Tableau 2 : Concentration des anions doss dans les solutions mres talons
Anions et
acides
Sulfate
Orthophosphate
Ac. malique
Ac. tartrique
Ac. citrique
Ac. isocitrique
Composs
pess
Na2SO4
KH2PO4
Ac. malique
Ac. tartrique
Ac. Citrique.H2O
Isocitrate 3Na.2H2O
Concentration
finale (mg/l)
500
700
1000
1000
1000
400
Quantit
pese (mg)
739,5
1003,1
1000,0
1000,0
1093,8
612,4
Remarque
Le laboratoire doit prendre les prcautions ncessaires au regard du caractre
hygroscopique de certains sels.
3.3 Solutions d'talonnage
Les solutions d'talonnage sont obtenues par dilution dans l'eau des solutions
mres de chaque ion ou acide.
Ces solutions doivent contenir l'ensemble des ions ou acides doss dans une
gamme de concentrations recouvrant ncessairement celle correspondant aux
chantillons analyser. Elles doivent tre prpares le jour de leur emploi.
Au moins deux solutions d'talonnage et un blanc doivent tre analyss de faon
tablir, par substance, des courbes d'talonnage l'aide de trois points (0,
demi-concentration maximale, concentration maximale).
Remarque
Le tableau 1 donne des indications sur les concentrations maximales en anions
et acides dans les solutions d'talonnage mais les performances des colonnes
chromatographiques sont meilleures avec des solutions trs dilues.
Il faut donc rechercher au mieux l'adquation entre les performances de la
colonne et le niveau de dilution des chantillons.
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Acide organique
En gnral, on est amen diluer l'chantillon entre 50 et 200 fois au maximum,

sauf cas particulier.
Pour amliorer la dure de vie des solutions filles, il est souhaitable de les
prparer en solution dans un mlange eau/ mthanol (80/20).
4 - APPAREILLAGE
Matriel courant de laboratoire et,
4.1 Ensemble instrumental pour la chromatographie ionique
comprenant:
4.1.1 Rservoir(s) d'luant(s)
4.1.2 Pompe dbit constant, sans effet de pulsation
4.1.3 Dispositif d'injection, soit manuel, soit automatique, constitu
d'une vanne boucle d'chantillonnage (par exemple 25 ou 50 l).
4.1.4 Colonnes de sparation
Ensemble constitu d'une colonne changeuse d'anions, de performance
contrle, ventuellement d'une prcolonne de mme nature que la colonne
principale. A titre dexemple, il est possible dutiliser les colonnes AS11 et
prcolonne AG11 de DIONEX.
4.1.5 Systme de dtection
Cellule de conductivit circulation, de trs faible volume, relie un
conductimtre comportant plusieurs gammes de sensibilit.
Afin d'abaisser la conductivit de l'luant, un dispositif de suppression
chimique, changeur de cations est install en amont de la cellule de
conductivit.
4.1.6 Enregistreur, intgrateur ou autre dispositif de traitement des
signaux.
4.2 Balance sensible au 1 mg
4.3 Fioles jauges de 10 1000 ml
4.4 Pipettes calibres de 1 50 ml
4.5 Membranes filtrantes de diamtre moyen de pore de 0,45 m.
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Acide organique
5 - ECHANTILLONNAGE
Les chantillons sont dilus en tenant compte des anions minraux et des acides
organiques que l'on souhaite doser.
Si leur concentration est trs variable dans l'chantillon, deux niveaux de
dilution seront ncessaires afin de respecter les domaines de concentration
couverts par les solutions d'talonnage.
6 - MODE OPERATOIRE
Mettre en marche l'appareillage en suivant les instructions du constructeur.
Rgler les conditions de pompage (flux d'luant) et de dtection de manire
obtenir une sparations slective des pics dans la gamme de concentrations des
ions analyser.
Laisser le systme s'quilibrer jusqu' obtention d'une ligne de base stable.
6.1 Etalonnage
Prparer les solutions d'talonnage comme indiqu en 3.3.
Injecter les solutions d'talonnage de faon ce que le volume inject soit au
moins de 5 fois celui de la boucle d'chantillonnage pour permettre le rinage
du systme.
Tracer les courbes d'talonnage pour chaque ion. Celles-ci doivent tre
normalement des droites.
6.2 Essai blanc
Injecter l'eau utilise dans la prparation des solutions d'talonnage et des
chantillons.
Contrler l'absence de pics parasites et quantifier les anions minraux prsents
(chlorure, sulfate..).
6.3 Analyse
Diluer l'chantillon ventuellement deux niveaux diffrents comme indiqu en
5, de sorte que les anions et acides doser soient prsents dans la gamme des
concentrations des solutions d'talonnage.
Filtrer l'chantillon dilu sur une membrane filtrante (4.5) avant injection.
Procder ensuite comme pour l'talonnage (6.1).
7 - REPETABILITE, REPRODUCTIBILITE
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Acide organique
Cette mthode a t teste par un circuit interlaboratoire mais il ne s'agit pas

d'une validation formelle selon le protocole OIV (Oeno 6/99).
La limite de rptabilit et la limite de reproductibilit du dosage de chaque ion
dans les
vins ont t calcules selon la norme ISO 5725.
Chaque analyse a t rpte 3 fois.
Nombre de laboratoires participants: 11; Les rsultats sont les suivants:
Vin blanc
Acide malique
Acide citrique
Acide tartrique
Sulfate
O.phosphate
Nb labos
retenus
Moyenne
(mg/l)
11/11
9/11
10/11
10/11
9/11
2745
124
2001
253
57
Nb labos
retenus
Moyenne
(mg/l)
Rptabilit
(mg/l)
Reproductibilit
(mg/l)
110
13
96
15
5
559
37
527
43
18
Vin rouge
Acide malique
Acide citrique
Acide tartrique
Sulfate
O.phosphate
8/11
8/10
9/11
10/11
10/11
128
117
2154
324
269
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Rptabilit
(mg/l)
16
8
48
17
38
Reproductibilit
(mg/l)
99
44
393
85
46

Acide organique
8 - CALCUL DES TAUX DE RECOUVREMENT

Lchantillon supplment est un vin blanc
Dtermination Nb labos Concentration
retenus initiale
(mg/l)
Ajout
rel
(mg/l)
Ajout
mesur
(mg/l)
Ac. citrique
Ac. malique
Ac. tartrique
25,8
600
401
24,2
577
366
11/11
11/11
11/11
122
2746
2018
Taux de
rcupration
(%)
93,8
96,2
91,3
9 - RISQUES DINTERFERENCES
Toute substance dont le temps de rtention concide avec celui de l'un des ions
analyss peut constituer une interfrence.
Les interfrences les plus courantes sont les suivantes:
Anions ou
acides
Nitrate
Sulfate
Orthophosphate
Ac. malique
Ac. tartrique
Ac. citrique
Ac. isocitrique
Interfrents
bromure
oxalate, malate
phtalate
Ac. succinique, Ac. citramalique
Ac. malonique
-
Remarque
Lajout de mthanol dans la phase mobile peut rsoudre certains problmes
analytiques.
Par exemple:
- La prsence de mthanol dans la phase mobile n'est pas toujours requise;
cependant elle est indispensable pour obtenir une rsolution convenable entre
acide succinique et acide malique lors de l'analyse des vins.
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Acide organique
- Les ions oxalates et sulfates coluent avec la plupart des conditions

chromatographiques; il faut 13% de mthanol dans la phase mobile pour les
sparer.
- La rsolution des pics correspondant aux acides actique et lactique est
satisfaisante si l'on ralise un gradient d'lution en hydroxyde de sodium, sans
mthanol.
10 - EXEMPLES DE CHROMATOGRAMMES
Annexe (a)
Chromatogramme d'une solution d'talonnage d'acides organiques et d'anions

minraux: Chlorure (1,96 mg/l), Nitrate (2,21 mg/l), Acide malique (5,35 mg/l), Acide
tartrique (5,08 mg/l), Sulfate (2,8 mg/l), O.phosphate (3,9 mg/l), Acide citrique (3,24
mg/l), Acide isocitrique (1,6 mg/l).
Appareillage utilis de marque DIONEX: Pompe, Dtecteur PED, suppresseur

AMMSII avec AUTOREGEN, colonne AS11 et prcolonne AG11.
Dbit 2ml/mn Phase mobile 1: Eau-NaOH 0,5mM/l, mthanol (80/20)
Phase mobile 2: Eau-NaOH 100mM/l, mthanol (80/20)
Gradient d'lution: 100% Phase mobile 1 65% phase mobile 1 en 25 mn.
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Acide organique
Annexe (b)
Chromatogramme d'un vin ros dilu 200 fois:

Appareillage utilis de marque DIONEX: Pompe, Dtecteur PED, suppresseur
AMMSII avec AUTOREGEN, colonne AS11 et prcolonne AG11.
Dbit 2ml/mn Phase mobile 1: Eau-NaOH 0,5mM/l, mthanol (80/20)
Phase mobile 2: Eau-NaOH 100mM/l, mthanol (80/20)
Gradient d'lution: 100% Phase mobile 1 65% phase mobile 1 en 25 mn.
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Acide shikimique
Mthode Type II
Dosage de lacide shikimique dans le vin par

chromatographie liquide haute performance et dtection UV
1. Introduction
Lacide shikimique (acide 3,4,5-Trihydroxycyclohex-1-ne-1-carboxylique) est
biosynthtis partir dacide quinique par dshydratation et joue un rle majeur
comme prcurseur de phnylalanine, tyrosine, tryptophane et des alcalodes
vgtaux [1]. Lacide shikimique se trouve naturellement dans une grande varit
de fruits [2].
Les Etats membres sont encourags poursuivre la recherche dans ce domaine
pour viter les valuations non scientifiques de ces rsultats.
Le dosage de lacide shikimique par CLHP a t valid dans le cadre dune tude
collaborative internationale par des analyses dchantillons de vins prsentant des
teneurs naturelles en acide shikimique allant de 10 150 mg/l. La validit a t
prouve par une comparaison inter-laboratoire utilisant respectivement la CLHP, la
GC/FID et GC/MS .3
2.
Domaine dapplication
Ce document dcrit une mthode usuelle en mode isocratique qui sapplique la

dtermination quantitative dacide shikimique dans les vins rouges, ross et blancs
(y compris vins mousseux et vins spciaux) des concentrations allant de 1 mg/l
jusqu 300 mg/l en utilisant la chromatographie liquide haute performance
(CLHP). La mthode peut sappliquer aux vins mousseux condition que les
chantillons soient pralablement dgazs (par sonication par exemple).
3.
Principe
Lacide shikimique est dos directement, sans prparation dchantillon, par

chromatographie liquide haute performance en utilisant un systme de colonnes
couplees. La premire colonne est de type C18 t la deuxieme colonne est de type
echangeuse de cations. Elle est chauffee 65C. En utilisant une eau lgrement
acidifie comme solvant dlution, on obtient une bonne rsolution de lacide
shikimique sans effets de matrice du vin. Grce la double liaison du
cyclohexne, lacide shikimique prsente un maximum dabsorption situ 210 nm
et peut donc tre facilement dtect par un dtecteur UV.
4.
Ractifs et matriaux
OIV-MA-AS313-17 : R2004

Acide shikimique
4.1
Acide shikimique (CAS 138-59-0), dune puret minimum de 98 %
4.2
Acide sulphurique 0,5 M
4.3
Eau bidistille
4.4 Prparation du solvant dlution (0,01 M H2SO4 ,)

Pipeter 20 ml dacide sulfurique 0,5 M (4.2) dans une fiole jauge de 1000 ml,
remplir deau bidistille (4.3) jusqu environ 900 ml, agiter et ajuster 1000 ml.
Filtrer le solvant dlution au moyen dun filtre dont les pores ont un diamtre
infrieur ou gal 0,45 m et dgazer.
4.5
Prparation de la solution mre talon (500 mg/l dacide shikimique)

Peser exactement 50 mg dacide shikimique (4.1), transfrer quantitativement
dans une fiole jauge de 100 ml, remplir deau bidistille (4.3) jusqu 90 ml
environ, agiter et ajuster
100 ml. La solution mre talon peut tre
conserve pendant plusieurs mois a 18C.
4.6
Prparation des solutions talons de travail ( 5, 25, 50, 100, 150 mg/l dacide
shikimique) Diluer la solution mre raison de 500 mg/l (4.5) avec de leau
bidistille (4.3) pour obtenir cinq solutions talons de travail de 5, 25, 50,
100, 150 mg/l dacide shikimique. Prparer les solutions talons
quotidiennement.
5.
Appareillage et matriel
Equipement usuel de laboratoire et en particulier le matriel suivant:

5.1 Systme CLHP capable deffectuer lanalyse dune solution dacide
shikimique
5.1.1 Chromatographe CLHP quip dune vanne dinjection 6 voies avec boucle
dchantillonnage de 5 l ou tout autre dispositif, automatique ou manuel,
assurant une injection fiable de micro volumes.
5.1.2 Systme de pompes rgime isocratique pour maintenir un dbit constant ou
programm avec une prcision maximale
5.1.3 Systme permettant de chauffer une colonne de 300 mm jusqu 65 C
OIV-MA-AS313-17 : R2004

Acide shikimique
5.1.4 Dtecteur UV-VIS avec cellule a circulation et fonctionnant la longueur

donde de
210 nm
5.1.5
5.2
Intgrateur ou tout autre systme de collecte de donnes

Colonnes CLHP en acier inoxydable.
5.2.1 Pr-colonne
Il est recommand de prvoir une pr-colonne en amont des colonnes
analytiques.
5.2.2 Colonnes analytiques
1. Colonne en phases inverses ( temprature ambiante)
Matriau: acier inoxydable
Diamtre interne: 4 - 4,6 mm
Longueur: 200 - 250 mm
Phase stationnaire: matriau sphrique, C18 en phases inverses,
particules de 5m de diamtre*)
Couple
2. Colonne changeuse de cations (chauffe 65C)
Matriau: acier inoxydable
Diamtre interne: 4 - 7.8 mm
Longueur: 300 mm
Phase stationnaire: rsine de type polystyrne-divinylbenzne avec un
taux de reticulation 8 % et groupements sulfoniques sous forme
hydrogne (S-DVB)**)
6.
Echantillonage
Les chantillons de vins limpides sont introduits directement dans des fioles
pour chantillons et analyss par chromatographie sans prparation
pralable. Les chantillons troubles sont filtrs travers une membrane de
diamtre de pores de 0,45 m avant injection, aprs limination des
premires fractions de filtrats.
*)
LichrospherTM 100 RP-18 , HypersilTM-ODS or OmnichromTM YMC-ODS-A sont des

exemples de colonnes adaptes disponibles dans le commerce.
**)
AminexTM HPX 87-H ou RezexTM ROA-Organic Acid sont des exemple de colonnes
adaptes et disponibles dans le commerce.
OIV-MA-AS313-17 : R2004

Acide shikimique
7.
Procdure
7.1
Mode opratoire de lanalyse CLHP

Injecter 5 L de vin dans lappareil chromatographique (systme dinjection
boucle).
Dbit:
0,4 ml/min
(si le diamtre interne de la colonne changeuse de cations est de 4 mm)
0,6 ml/min
(si le diamtre interne de la colonne changeuse de cations est de 7,8 mm)
Phase mobile: 0,01 M H2SO4
Chauffage de la colonne changeuse de cations: 65 C
Dure: 40 mn
Temps ncessaire lquilibration: 20 mn (afin que toutes les substances du
vin aient bien t limines)
Longueur donde de dtection: 210 nm
Volume dinjection: 5 L
Note: en raison des diffrences de proprits de sparation entre les
colonnes et des diffrences de volume mort entre les diffrents appareils
CLHP, le temps de rtention absolu (mn) pour le pic dacide shikimique
peut varier de manire plus ou moins significative. Bien que lacide
shikimique puisse tre identifi facilement en calculant facteur de sparation
() par rapport un pic de rfrence, lacide tartrique, est le premier pic et
le pic dominant dans le chromatogramme. En essayant diffrentes colonnes
en phases inverses C18 et diverses colonnes changeuses de cation, un
facteur de sparation ()de 1,33 ( 0.2) a t calcul.
7.2. Limite de dtection

La limite de dtection de cette mthode calcule selon le protocole OIV, a t
estime 1 mg/l
8.
Calibration
OIV-MA-AS313-17 : R2004

Acide shikimique
Prparer une courbe de calibration 5 points partir des solutions talons de

travail (4.6).
La dtermination quantitative de lacide shikimique est effectue en suivant
la mthode de ltalonnage externe en mesurant les surfaces des pics de
temps de rtention de lacide shikimique et en les comparant la courbe de
calibration pertinente. Les rsultats, en acide shikimique, sont exprims en
mg/l une dcimale.
9.
Etude collaborative
La mthode a t valide par une tude collaborative avec la participation de
19 laboratoires internationaux suivant la rsolution de lOIV oeno 6/2000
Protocole pour la validation des mthodes danalyse et notamment les
recommandations sur la planification, la conduite et linterprtation des
tudes de performance des mthodes danalyse. Ltude a port sur 5
chantillons diffrents de vins rouges et blancs avec des concentrations de 10
120 mg/l. (voir annexe 3)
Les carts-type de rptabilit et de reproductibilit sont corrls la
concentration dacide shikimique (voir Annexe 2). Les paramtres de
performance rels peuvent tre calculs comme suit:
sr = 0,0146 x + 0.2716
sR = 0,0286 x + 1.4883
x: concentration dacide
shikimique (mg/l)
Exemple:
Acide shikimique:
sr =: 1.0 mg/l
sR = sR: 2.92 mg/l
50 mg/l
10. Annexe
Un exemple de sparation de lacide shikimique et des autres acides
organiques est mentionn dans lannexe 1.
La corrlation entre la concentration de lacide shikimique et lcart type de
rptabilit et de reproductibilit figure dans lannexe 2.
Les statistiques provenant des rsultats dune tude inter laboratoire sont
fournis dans lannexe 3.
OIV-MA-AS313-17 : R2004

Acide shikimique
11.
Rfrences
[1]
Rmpp Lexikon Chemie-Version 2.0, Stuttgart/New York, Georg
Thieme Verlag 1999

[2]
Wallrauch S., Flssiges Obst 3, 107 113 (1999)
[3]
44th session SCMA, 23-26 march 2004, comparison of HPLC,
GC,and GC-MS determination of Shikimic acid in wine, FV 1193
OIV-MA-AS313-17 : R2004

Acide shikimique
mV
tar
ta
200
Chromatogramme des acides organiques du vin
ric
acid
Annexe 1:
ma
l ic
acid
shi
kim
ic a
c id
150
100
50
m in
- 20
0 ,0
Annexe 2:
1 0 ,0
2 0 ,0
3 0 ,0
4 0 ,0
Corrlation entre la concentration de lacide shikimique et les

carts-type de rptabilit et de reproductibilit
OIV-MA-AS313-17 : R2004

Acide shikimique
Annexe 3: Tableau de performance de la mthode
Identification des
chantillons
Nombre de
laboratoires
participants
Nombre de
laboratoires
retenus
Moyenne
mg/l
sr2
sr
RSDr (%)
r
sL2
sR2
sR
RSDR (%)
R
sr2
sr
RSDr (%)
r
sL2
sR2
sR
19
19
19
19
19
17
18
17
18
18
58.15
30.05
11.17
122.17
91.20
0.54588
0.73884
1.27
2.07
8.45221
8.99809
2.99968
5.16
8.40
0.84694
0.92030
3.06
2.58
13.27078
14.11773
3.75736
12.50
10.52
0.19353
0.43992
3.93
1.23
0.73013
0.92366
0.96107
8.60
2.69
4.32417
2.07946
1.70
5.82
24.62737
28.95154
5.38066
4.40
15.07
2.67306
1.63495
1.79
4.58
8.55508
11.22814
3.35084
3.67
9.38
variance de rptabilit
cart-type de rptabilit
cart-type relatif/ rptabilit
rptabilit
variance sure interlaboratoires
variance de reproductibilit
cart-type de reproductibilit
RSDR (%) cart-type relatif/reproductibilit

R
reproductibilit
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Acide Sorbique Electrophorse capillaire
Mthode Type IV
Dosage de lacide sorbique dans les vins par

lectrophorse capillaire
1 Domaine dapplication
La prsente mthode permet de doser lacide sorbique dans les vins dans une gamme de
0 300 mg/l.
2 Principe
La charge ngative de lion sorbate permet de le sparer efficacement par
lectrophorse capillaire. En sortie de colonne, la dtection est effectue dans
lultraviolet 254 nm.
3
Ractifs et produits
3.1 Ractifs
3.1.1 Dihydrognophosphate de sodium [10049-21-5] puret > 96%
3.1.2 Hydrognophosphate de sodium [10028-24-7] puret > 99%
3.1.3.Hydroxyde de sodium [1310-73-2] puret > 97%
3.1.4.Hippurate de sodium [532-94-5] puret > 99%
3.1.5 Eau dminralise (< 15 MOHMS) ou bidistille
3.2 Solution tampon de migration

Le tampon de migration est constitu dune solution aqueuse de :
Dihydrognophosphate de sodium (3.1.1)
Hydrognophosphate de sodium (3.1.2)
5 mM
5 mM
3.3 Standard interne

Hippurate de sodium (3.1.4) en solution aqueuse 0.5 g.L-1.
3.4 Solutions de rinage
3.4.1 Hydroxyde de sodium (3.1.3) N/10
3.4.2 Hydroxyde de sodium (3.1.3) N
OIV-MA-AS313-18 : R2006

4 Prparation des chantillons

Les chantillons de vin sont prpars selon le schma suivant qui entrane une
dilution au 1/20 :
Vin analyser :
0.5 ml
Hydroxyde de sodium (3.1.3) N/10 : 0.5 ml
Standard interne (3.1.4) 0.5 g.L-1 : 0.5 ml
qsp 10 ml avec de leau dminralise (3.1.5)
5 Conditions opratoires
5.1 Conditionnement du capillaire
Avant sa premire utilisation, et ds que les temps de migration augmentent, le
capillaire doit tre conditionn selon le processus suivant :
5.1.1
5.1.2
5.1.3
5.1.4
Rinage avec une solution dhydroxyde de sodium 1N (3.4.2)

sous 20 psi (140 kPA) pendant 8 mn.
Rinage avec une solution dhydroxyde de sodium (3.4.1) 0.1 N
sous 20 psi (140 kPA) pendant 12 mn
Rinage leau (3.1.5) sous 20 psi (140 kPA) pendant 10 mn
Rinage au tampon de migration (3.2) sous 20 psi (140 kPA)
pendant 30 mn
5.2 Conditions de migration

Ces conditions peuvent ventuellement tre sujettes de lgres modifications en
fonction de lappareillage utilis.
5.2.1 Le capillaire en silice fondue est de 31 cm de longueur, avec un
diamtre de 50 microns.
5.2.2 Temprature de migration : 25 C
5.2.3 Longueur donde de lecture : 254 nm.
5.2.4 Lecture du signal en mode direct (lacide sorbique absorbe dans
lUV).
5.2.5 Premier prrinage sous pression 30 psi (210 kPA) avec une
solution dhydroxyde de sodium 0,1 N (3.4.1) pendant 30
secondes
5.2.6 Deuxime prrinage sous pression 30 psi (210 kPA) au tampon
de migration (3.2) pendant 30 secondes.
5.2.7 Linjection se fait sous pression de 0,3 psi (2,1 kPA) pendant 10
secondes.
5.2.8 La migration dure environ 1.5 2 minutes sous une diffrence de
potentiel de + 25 kV, en polarit normale (cathode la sortie).
OIV-MA-AS313-18 : R2006

5.2.9 Certains appareils dlectrophorse capillaire proposent des vials de

grande contenance pour les solutions tampon de migration. Ceci
est prfrable lorsque plusieurs analyses sont ralises la suite,
car les proprits lectrolytes se conservent plus longtemps.
5.3 Lecture des rsultats
Les pics dabsorption du standard interne et de lacide sorbique sont obtenus en
moyenne 1 1,5 minutes aprs le dbut de la phase de migration sous tension. Le
temps de migration est assez constant, mais peut lgrement varier en fonction de
ltat du capillaire. En cas de dgradation du temps de migration, un
reconditionnement du capillaire est ncessaire, et si les conditions nominales ne
sont pas rtablies, le capillaire doit tre remplac.
6 Caractristiques de la mthode
Les diffrentes tapes de validation interne dcrites ont t effectues selon la
rsolution OIV OENO 10/2005.
6.1
6.2
Rptabilit intralaboratoire
cart type de rptabilit Sr
1,6 mg.L-1
Rptabilit r
4,6 mg.L-1
Linarit
Droite de rgression
Coefficient de corrlation r
cart type rsiduel Sxy
cart type pente Sb
OIV-MA-AS313-18 : R2006
Y = 0,99491 X + 2,52727
0,9997
1,6 mg.L-1
0,008 mg.L-1

6.3
Reproductibilit intralaboratoire
cart
type
reproductibilit SR
de
Reproductibilit R
6.4
6.5
2,1 mg.L-1
5,8 mg.L-1
Limites de dtection et de quantification

Limite de dtection Ld
1,8 mg.L-1
Limite de quantification Lq
4,8 mg.L-1
Robustesse
La mthode tant relative, les ventuelles lgres variations des conditions

danalyse nauront pas dinfluence sur le rsultat final, mais auront essentiellement
des influences sur le temps de migration.
6.6
Spcificit de la mthode
Lventuelle influence des principaux additifs nologiques a t teste. Aucun

nentrane une modification des rsultats.
6.7
Raccordement de la mthode la mthode de rfrence OIV
La mthode de rfrence OIV est le dosage par spectromtrie dabsorption dans

lultraviolet. Lacide sorbique, extrait par entranement la vapeur deau, est dos
dans le distillat du vin par spectromtrie dabsorption dans lultraviolet 256 nm.
6.7.1
Comparaison des rptabilits
cart type de rptabilit

Sr
Rptabilit r
OIV-MA-AS313-18 : R2006
lectrophorse
capillaire
Mthode de rfrence
OIV
1,6 mg.L-1
2,5 mg.L-1
4,6 mg.L-1
7,0 mg.L-1

6.7.2
Justesse de la mthode usuelle par rapport la mthode de

rfrence
Coefficient de corrlation r
0,999
Biais moyen Md
0,03 mg.L-1
cart type biais moyen Sd
3,1 mg.L-1
Z-score (Md/ Sd)
OIV-MA-AS313-18 : R2006
0,01

Mthode pour le dosage de sulfate dans le vin par
Mthode Type II et III
Dosage des principaux acides organiques des vins et des

sulfates par lectrophorse capillaire
(Rsolution OIV-Oeno 5/2006, rvision per Oeno 407-2011)
1.
Introduction
Les acides tartrique, malique et lactique et sulfates sont spars et doss par
lectrophorse capillaire aprs simple dilution et addition d'talon interne.
2.
Titre
DOSAGE DES PRINCIPAUX ACIDES ORGANIQUES DES VINS

ET DES SULFATES PAR ELECTROPHORESE CAPILLAIRE
3.
Domaine d'application
L'lectrophorse capillaire permet de doser les acides tartrique et malique

des mots ainsi que les acides tartrique, malique, lactique et les sulfates des
vins pralablement dilus, dgazs et filtrs si besoin.
4.
Dfinitions
4.1 Electrophorse capillaire

L'lectrophorse capillaire : ensemble de techniques qui utilisent un
capillaire de silice de trs faible diamtre pour sparer efficacement l'aide
d'un tampon appropri, la fois des petites et des grosses molcules
lectriquement charges en prsence d'un courant lectrique de fort voltage.
4.2 Tampon pour lectrophorse
OIV-MA-AS31319 : R2011

Solution contenant un ou plusieurs solvants et des soluts de mobilits

lectrophortiques convenables capables de tamponner le pH de cette
solution.
4.3 Mobilit electrophoretique
Aptitude d'un ion se dplacer rapidement sous l'effet d'un champ
lectrique.
4.4 Flux electroosmotique
Ecoulement du solvant du tampon le long de la paroi interne du capillaire d
aux dplacements des ions solvats sous les effets du champ et des
charges lectriques de la silice
5. Principe
Les sparations des soluts d'un mlange par lectrophorse capillaire sont
obtenues par migrations diffrentielles dans un lectrolyte tamponn
appel tampon. L'lectrophorse se droule dans un tube de silice de
diamtre intrieur compris entre 25 et 75 m. Les soluts sparer sont
entrans simultanment par
2 forces qui peuvent agir dans le mme sens ou en sens contraire. Ces deux
forces sont dues au champ lectrique et au flux lectroosmotique.
Le champ lectrique est reprsent par la tension en volts applique entre les
lectrodes ramene un centimtre de capillaire, il est exprim en V.cm-1.
La mobilit est une caractristique de l'ion. Plus les molcules sont petites
et charges plus leur mobilit lectrophortique est importante.
Dans le cas o la paroi interne du capillaire est non revtue, les charges
lectriques ngatives de la silice vont engendrer une fixation d'une partie
des cations du tampon. La solvatation et le dplacement vers la cathode
d'une partie des cations du tampon crent le flux lectroosmotique. Les
choix du pH du tampon et l'utilisation d'additifs permettent de contrler le
sens et l'intensit de ce flux lectroosmotique.
L'addition d'un ion chromophore dans le tampon permet l'obtention de pics
ngatifs qui reprsentent quantitativement les soluts sparer qui
n'absorbent pas la longueur d'onde utilise.
OIV-MA-AS31319 : R2011

6.1 Produits purs de qualit pure pour analyse 99 % au moins
6.1.1 Sulfate de sodium ou sulfate de potassium
6.1.2 Acide L-tartrique
6.1.3 Acide D,L-malique
6.1.4 Acide citrique monohydrat
6.1.5 Acide succinique
6.1.6 Acide D,L-lactique
6.1.7 Dihydrognophosphate de sodium
6.1.8 Gluconate de sodium
6.1.9 Chlorate de sodium
6.1.10 Acide dipicolinique
6.1.11 Bromure de cthyl-trimthyl-ammonium
6.1.12 Actonitrile pour CLHP
6.1.13 Eau pure dsionise, ultrafiltre
6.1.14 Hydroxyde de sodium
6.2 Solutions
6.2.1 Solution mre d'talonnage
Solution dans l'eau pure (6.1.13) des diffrents acides et sulfate
doser (6.1.1 6.1.6) des concentrations exactement connues
comprises entre 800 et 1200 mg l-1
Solution conserver +5 C pendant 1 mois maximum.
6.2.2 Solution d'talon interne
Solution de chlorate de sodium (6.1.9) environ 2 g l-1 dans l'eau pure
(6.1.13)
Solution conserver +5 C pendant 1 mois maximum
6.2.3 Solution d'talonnage injecter
Dans une fiole jauge de 50 ml de classe "A", dposer l'aide de pipettes de
classe
"A":
2 ml de la Solution d'talonnage (6.2.1)
1 ml de solution d'talon interne (6.2.2) Complter 50 ml avec de l'eau
pure (6.1.13) Homogniser par agitation
Solution prparer chaque jour
OIV-MA-AS31319 : R2011

6.2.4 Solutions d'hydroxyde de sodium

6.2.4.1 Solution d'hydroxyde de sodium M
Placer dans une fiole de 100 ml 4 g d'hydroxyde de sodium (6.1.14)
Complter avec de l'eau pure (6.1.13)
Agiter jusqu' dissolution complte.
6.2.4.2 Solution d'hydroxyde de sodium 0,1 M
Placer dans une fiole de 100 ml 10 ml d'hydroxyde de sodium M (6.2.4.1)
Complter avec de l'eau pure (6.1.13)
Homogniser.
6.2.5 Tampon lectrophortique
Dans une fiole jauge de 200 ml de classe "A", dposer
0.668 g d'acide dipicolinique (6.1.10)
0.364 g de bromure de cthyl-trimthyl-ammonium (6.1.11)
20 ml d'actonitrile (6.1.12)
160 ml environ d'eau pure (6.1.13)
Agiter jusqu' complte dissolution (si besoin placer dans un bain
ultrasons pour liminer les agrgats)
Amener pH 5.64 avec tout d'abord de la solution d'hydroxyde de
sodium M (6.2.4.1) puis avec de la solution d'hydroxyde de sodium 0,1
M (6.2.4.2)
Complter 200 ml avec de l'eau pure (6.1.13) Homogniser par
agitation
Solution prparer chaque mois. Conservation la temprature du
laboratoire.
Ce tampon peut tre remplac par un produit quivalent disponible sur
le march.
7. Appareillage
Un quipement d'lectrophorse capillaire ncessaire pour ces dosages
contient essentiellement :
Un passeur d'chantillons
Deux flacons (vials) contenant du tampon
Un capillaire de silice non revtue de 50 m de diamtre interne et de
OIV-MA-AS31319 : R2011

60 cm de longueur entre l'entre du capillaire et la cellule de dtection.

De 7 15 cm, suivant les appareils, supplmentaires sont ncessaires
pour que la sortie du capillaire soit immerge au centre d'un autre flacon
Une alimentation haute tension de courant continu capable de dlivrer
des tensions de 30 + 30 kv. Les lectrodes immerges dans les deux
flacons o dbouchent les extrmits du capillaire sont relies aux
bornes du gnrateur
Un systme de pressurisation capable de faire circuler le tampon dans
le capillaire et permettre l'injection de la prise d'essai
Un dtecteur UV
Un systme d'acquisition des donnes
8. Prparation des chantillons pour essai

8.1 Dgazage et filtration
Les chantillons riches en gaz carbonique sont dgazs pendant 2 min
aux ultrasons. Les chantillons troubles sont filtrs sur une membrane dont
le diamtre des pores moyen est de 0,45 m.
8.2 Dilution et ajout d'talon interne
Placer 2 ml d'chantillon dans une fiole jauge de 50 ml. Ajouter 1 ml de
solution d'talon interne (6.2.2). Complter 50 ml avec de l'eau pure
(6.1.13) Homogniser.
9. Mode opratoire
9.1 Conditionnement dun capillaire neuf ( titre indicatif)
Circulation d'eau pure (6.1.13) en sens inverse (de la sortie du

capillaire vers le flacon d'entre) pendant 5 mn avec une pression de 40
psi environ (2,76 bar ou 276 kPa)
Circulation d'hydroxyde de sodium 0,1 M (6.2.4.2) en sens inverse
pendant 5 mn la mme pression
Circulation d'eau pure (6.1.13) en sens inverse (de la sortie du
capillaire vers le flacon d'entre) pendant 5 mn la mme pression
Recommencer ce cycle : passages d'eau pure, d'hydroxyde de sodium
0,1 M, eau pure
Circulation du tampon lectrophortique (6.2.5) en sens inverse
pendant 10 mn.
OIV-MA-AS31319 : R2011

9.2 Reconditionnement dun capillaire en cours dutilisation (facultatif)

Lorsque que la qualit des sparations devient insuffisante un nouveau
conditionnement du capillaire s'impose. Si les rsultats obtenus ne sont
toujours pas satisfaisants, changer le capillaire et le conditionner.
9.3 Vrification de la qualit du capillaire (facultatif)
Analyser 5 reprises la solution d'talonnage (6.2.3) dans les conditions
d'analyses prconises.
9.4 Conditions de sparation et de dtection ( titre indicatif)
Allumage de la lampe du dtecteur 1 heure avant le dbut des analyses

Rinage du capillaire par circulation du tampon lectrophortique
(6.2.5) pendant 3 mn en sens inverse sous une pression de 40 psi
Injection par pression 0,5 psi pendant 6 15 secondes des
chantillons prpars en 8.1
La polarit est rgle afin que l'anode soit du ct du dtecteur
Appliquer une tension de 0 16 Kv en 1 mn puis de 16 Kv pendant 18
mn environ
(la dure de la sparation peut lgrement varier en fonction de la
qualit du capillaire)
La temprature est maintenue + 25 C
La dtection dans l'ultra violet est faite 254 nm
Rinage du capillaire par circulation du tampon lectrophortique
(6.2.5) pendant 2 mn en sens inverse sous une pression de 40 psi
Changer le du tampon lectrophortique (6.2.5) contenu dans flacons
d'entre et de sortie tous les 6 injections au minimum.
9.5 Ordre dans lequel les analyses doivent tre effectues ( titre
indicatif)
Changer le tampon lectrophortique (6.2.5) chaque nouvelle srie
d'analyses
La squence des analyses contient dans l'ordre :
Analyse de la solution d'talonnage (6.2.3)
Analyse du matriau de rfrence (chantillon
OIV-MA-AS31319 : R2011
externe
6
de

concentration connue pour les diffrents acides doser)

Analyse des chantillons prpars en 8.2, les chromatogrammes
devraient ressembler ceux prsents en annexe A.
A la fin des analyses effectuer un rinage l'eau pure (6.1.13) de 10 mn
en sens inverse, (de la sortie du capillaire vers l'entre),
Eteindre la lampe du dtecteur.
10. Calculs des rsultats

Les calculs sont faits partir des surfaces des pics obtenues aprs
intgrations.
Les surfaces des pics de soluts de la solution d'talonnage (6.2.3) sont
corriges en tenant compte des variations de surfaces des pics de l'talon
interne. Le coefficient de rponse pour chaque acide est calcul.
Les surfaces des pics de l'talon interne et des pics des soluts sont
releves pour chaque chantillon. Les surfaces des soluts doser
sont recalcules en tenant compte de nouveau des variations de
surfaces des pics de l'talon interne pour obtenir des surfaces dites
"corriges".
Les surfaces corriges sont ensuite multiplies par la valeur du coefficient
de rponse correspondant.
Il est possible d'utiliser un systme automatis de gestion des donnes,
pour autant que celles-ci puissent tre contrles conformment aux
principes dcrits ci-dessus et aux bonnes pratiques (calcul du facteur de
rponse et/ou tablissement dune courbe dtalonnage).
FORMULE DE CALCULS
Les abrviations utilises pour le calcul de la concentration d'un acide
sont donnes dans le tableau suivant:
Les surfaces sont exprimes par les nombres entiers d'units d'intgration.
Les concentrations sont donnes en g/L. (ne conserver que deux dcimales).
OIV-MA-AS31319 : R2011

ABREVIATIONS
SOLUTION
REFERENCE
SURFACES DU PIC SAR
DOSE
PICS
D'ETALON SEIR
INTERNE
CONCENTRATION
CAR
DE ECHANTILLON
SAE
SEIE
CE
La formule de calcul est:
CE =
CAR SAE SEIR

SAR SEIE
Chaque fois que cela est possible, l'analyse en double exemplaire permet
de mettre en vidence une erreur ventuelle dans la reconnaissance des pics
ou une imprcision des intgrations. Le passeur d'chantillons permet de
raliser les analyses en mode automatique tout au long du jour et de la nuit.
11. Fidlit
11.1 Organisation des essais
Les essais interlaboratoires et leurs rsultats sont dcrits
dans les annexes B1 et B2.
11.2 Mesure de la fidlit
ESTIMATION DE LA FIDELITE APRES ANALYSES INTERLABORATOIRES
Nombre de laboratoires participants:
Rsultats donns en mg / l
OIV-MA-AS31319 : R2011

Acide
tartrique
Acide
malique
Acide
lactique
1395
1884
1013
valeurs moyennes des carts types

de rptabilit
38
54
42
valeurs moyennes des carts types

de rproductibilit
87
113
42
valeurs
moyennes
concentrations
des
OIV-MA-AS31319 : R2011

12. ANNEXES
ANNEXE A
ELECTROPHOREGRAMME D'UNE SOLUTION ETALON
D'ACIDES
OIV-MA-AS31319 : R2011
10

ELECTROPHOREGRAMME D'UN VIN
OIV-MA-AS31319 : R2011
11

ANNEXE B1
des essais interlaboratoire (2006)
Conformment l'ISO 5725-2:1994, les paramtres suivants ont t dfinis
au cours d'un essai interlaboratoire. Cet essai a t conduit par le laboratoire
de la Direction Gnrale de la Consommation et de la Rpression des
Fraudes de Bordeaux (France).
Anne de l'essai interlaboratoire : 2006
Nombre de laboratoires : 5
Nombre d'chantillons : 8 en double aveugle (2 vins blancs secs, 2 vins
blancs liquoreux, 2 vins ross et 2 vins rouges)
OIV-MA-AS31319 : R2011
12

ESSAIS INTERLABORATOIRES
Dosage de l'ACIDE TARTRIQUE par lectrophorse capillaire
Identification de l'chantillon
Nombre de laboratoires participants
vins blancs
vins blancs
vins ross
vins rouges
liquoreux
secs
A et D B et C E et F G et H I et J K et L M et N O et P
5
4
5
Valeur moyenne en mg/l
1943
2563
1440
255
553
1885
1373
1148
Valeur accepte en mg/l
1943
2563
1387
2217
1877
1593
1370
1830
Ecart-type de rptabilit (Sr)
27
25
106
23
40
31
25
24
Coefficient de variation de rptabilit
1,4
7,7
2,2
1,9
1,8
1,3
Limite de rptabilit ( r )
77
70
298
65
113
86
70
66
Ecart-type de reproductibilit (SR)
96
128
174
80
57
55
52
53
Coefficient de variation de reproductibilit

en %
4,9
12,6
3,6
3,5
3,8
2,9
Limite de reproductibilit ( R )
268
359
488
223
160
154
145
148
OIV-MA-AS31319 : R2011
13

Dosage de l'ACIDE MALIQUE par lectrophorse capillaire
vins ross
vins blancs
vins blancs
vins rouges
secs
liquoreux
4
5
2571
1602
1580
2539
3524
2109
173
869
2571
1602
1580
2539
3524
2109
177
869
54
19
113
36
61
109
32
2,1
1,2
6,7
1,4
1,7
5,2
4,1
3,7
151
54
315
99
170
305
20
89
90
51
171
97
279
142
21
53
Coefficient de variation de reproductibilit 13,6

en %
9,8
41
39,6
14,7
14,1
7,6
142
479
273
782
397
59
148
252
OIV-MA-AS31319 : R2011
14

Dosage de l'ACIDE LACTIQUE par lectrophorse capillaire
vins blancs
vins blancs
vins ross
vins rouges
secs
liquoreux
4
5
659
1324
258
255
553
1885
2066
1148
650
1324
258
255
553
1885
2066
1148
20
42
20
39
27
99
75
16
3,1
3,2
7,8
15,1
4,8
5,3
3,7
16
57
117
56
108
75
278
211
46
20
38,57 26,786 99,29 75,36 16,429
20,357 41,79
Coefficient de variation de reproductibilit 13,6

en %
9,8
41
39,6
14,7
14,1
7,6
363
296
283
227
475
802
243
OIV-MA-AS31319 : R2011
247
15

ANNEXE B2
des essais interlaboratoire (sulfates 2010)
Conformment l'ISO 5725-2:1994, les paramtres suivants ont t dfinis

au cours d'un essai interlaboratoire. Cet essai a t conduit par le laboratoire
Instituto dos Vinhos do Douro e do Porto (Portugal).
Annes de l'essai interlaboratoire : 2010 - 2011
Nombre de laboratoires : 7 (un laboratoire a envoy deux sries de rsultats
obtenus avec deux appareils diffrents)
Nombre d'chantillons : 6 en double aveugle
OIV-MA-AS31319 : R2011
16

Indicateurs
Vin
blan
c
(A/
G)
Nombre de
7
groupes
Nombre de
2
rptitions
Minimum
0,71
(g/L K2SO4)
Maximum
0,88
(g/L K2SO4)
variance de
0,00
rptabilit
12
sr2
variance
0,00
intergroupe
148
2
sL
variance de
0,00
reproductibil
27
2
it sR
Moyenne
gnrale
0,78
(g/L K2SO4)
Ecart-type
de
0,04
rptabilit
(g/LK2SO4)
Limite r
0,10
(g/L K2SO4)
0
CV de
5%
rptabilit
Ecart-type
de
reproductibil 0,05
it
(g/L K2SO4)
Limite R
0,14
(g/L K2SO4)
8
CV de
reproductibil 7%
it
HORRAT
1,1
OIV-MA-AS31319 :
Ros
(B/F
)
Ros
(C/
O)
Vin
Rou
ge
(D/
M)
Vin
liqu
eur
(E/
N)
Vin
liqu
eur
(I/K
)
Vin
blan
c
(H/
Q)
Vin
roug
e
(J/P
)
Vin
liqu
eur
(L)
0,34
0,40
0,62
1,79
1,06
1,38
1,96
2,17
0,54
0,52
0,75
2,40
1,35
1,70
2,30
2,85
0,00
11
0,00
01
0,00
16
0,00
63
0,00
13
0,00
36
0,00
15
0,00
53
0,00
230
0,00
163
0,00
055
0,01
952
0,01
082
0,00
668
0,01
744
0,03
552
0,00
34
0,00
18
0,00
22
0,02
58
0,01
22
0,01
03
0,01
89
0,04
08
0,43
0,44
0,69
2,01
1,19
1,49
2,15
2,41
0,03
0,01
0,04
0,08
0,04
0,06
0,04
0,07
0,09
3
0,03
1
0,11
5
0,22
4
0,10
3
0,17
0
0,10
9
0,20
6
8%
3%
6%
4%
3%
4%
2%
3%
0,06
0,04
0,05
0,16
0,11
0,10
0,14
0,20
0,16
5
0,11
8
0,13
2
0,45
4
0,31
2
0,28
7
0,38
9
0,57
2
14%
10%
7%
8%
9%
7%
6%
8%
2,1
1,5
R2011
1,1
1,6
1,7
1,3
1,3
1,7
17

13.
Bibliographie
ARELLANO M., COUDERC F. et PUIG .L ( 1997 ) : Simultaneous
separation of organic and inorganic acids by capillary zone
electrophoresis. Application to wines and fruit juices. Am. J. Enol. Vitic.,
48, 408-412.
KANDL
T. et KUPINA
S. ( 1999 ): An improved capillary
electrophoresis procedure for the determination of organics acids in grape
juices and wine. Am. J. Vitic., 50, 155-161.
KLAMPF C.F. ( 1999 ): Analysis of organics acids and inorganics anions in
different types of beer using capillary zone electrophoresis. J. Agric. Food
Chem., 47, 987-990.
OIV-MA-AS31319 : R2011
18

Acides sorbique, benzoque salicylique - HPLC
Mthode Type IV
Dosage des acides sorbique, benzoque, salicylique dans les

vins par chromatographie liquide haute performance
1. Introduction
L'acide sorbique et son sel de potassium est un antiseptique utilisable en
nologie mais certains pays ne tolrent pas sa prsence dans les vins y compris
l'tat de trace. Ceci se justifiant en particulier en raison de l'odeur de granium
apparaissant lors de la dgradation de l'acide sorbique par les bactries lactiques.
Les acides benzoques et salicyliques sont toujours interdits dans les vins mais ils
sont utiliss dans d'autres boissons.
Tous les vins ou mots de raisin en particulier ceux qui sont susceptibles de ne
contenir que des traces d'acide sorbique, benzoque ou salicylique (mise en
vidence partir de 1 mg/l).
3. Principe
Les antiseptiques sont doss par HPLC par injection directe de l'chantillon
dans une colonne fonctionnant par partage en phases inverses en isocratique avec
dtection dans l'ultraviolet 235 nm.
4. Produits
4.1 Eau pure microfiltre (par exemple de rsistivit suprieure 18,2 M)
4.2 Ttrahydrofuranne pur
4.3 Mthanol pur
4.4 Acide chlorhydrique 0,1 M (prpar partir d'ampoules diluer)
4.5 Eau pH2 amener 650 ml d'eau (4.1) pH2 contrl l'aide du pHmtre
(5.5) en versant goutte goutte sans agitation l'acide chlorhydrique 0,1 M
(4.4)
4.6 Solution d'lution. Mlanger 650 ml deau pH2 (4.5), 280 ml de
mthanol (4.3) et 7 ml de ttrahydrofuranne (4.2).
OIV-MA-AS313-20 : R2006

Remarque : il est galement possible d'utiliser d'autres solvants d'lution, par

exemple : 80% d'une solution d'actate dammonium 0,005M (0,38 g/l)
ajuste pH 4 avec de lacide actique pur + 20% d'actonitrile
4.7 Acide sorbique pur
4.8 Acide benzoque pur
4.9 Acide salicylique pur
4.10 Alcool pur
4.11 Solution hydroalcoolique 50 % vol. Placer 500 ml d'alcool pur (4.10)
dans une fiole de 1 l complter avec de l'eau distille (4.1)
4.12 Solution mre des acides 500 mg/l. Dissoudre 50 mg des acides
sorbique (4.7), benzoque (4.8), salicylique (4.9) dans 100 ml de la
solution hydroalcoolique 50 % vol. (4.11)
4.13 Solution filles des acides sorbique, benzoque, salicylique. Diluer la
solution mre (4.12) dans la solution hydroalcoolique (4.11) de manire
obtenir les concentrations finales dsires par exemple pour une solution
- 200 mg/l placer 20 ml de la solution mre (4.12) dans une fiole de 50

ml complter au trait de jauge avec (4.11).
- 1 mg/l placer 2 ml de solution mre (4.12) dans une fiole de 50 ml.
Complter au trait de jauge avec 4.11
Des solutions intermdiaires peuvent tre ralises de la mme
manire selon les ncessits de l'talonnage
5. Appareils
5.1 Verrerie de laboratoire en particulier pipette et fioles jauges
5.2 Bain ultrasons
5.3 Dispositif de filtrations sous vide pour volume important (1 l) utilisant des
membranes filtrantes de diamtre de pore infrieur 1 m (gnralement
0,45 m)
5.4 Minifiltre pour chantillon (1 2 ml) utilisant des membranes filtrantes de
diamtre de pore infrieur 1 m (gnralement 0,45 m)
5.5 pH mtre
5.6 Chromatographe en phase liquide fonctionnant en mode isocratique muni
d'un dispositif d'injection pour faibles volumes (par exemple) vanne
boucle de 10 ou 20 l.
5.7 Dtecteur pouvant fonctionner dans l'ultra violet 235 nm muni d'une cuve
circulation pour CLHP (par exemple de 8 l pour 1 cm de trajet
optique)
OIV-MA-AS313-20 : R2006

5.8 Colonne pour CLHP de phase stationnaire de 5 m type silice greffe par
des groupes octadcyles (C18) de 20 cm de long 4 mm de diamtre
intrieur.
5.9 Systme d'acquisition des donnes
6. Prparation des chantillons et du solvant d'lution

6.1 Filtrer les chantillons analyser l'aide du minifiltre (5.4)
6.2 Dgazer le solvant d'lution (4.6) durant 5 minutes l'aide du bain
ultrasons (5.2)
6.3 Filtrer le solvant l'aide du dispositif (5.4)
7. Mode opratoire
7.1 Conditionnement de la colonne. Avant l'injection mettre en route la pompe
et rincer la colonne avec le solvant durant au minimum 30 minutes
7.2 Injecter une des solutions filles (4.13) afin de s'assurer de la sensibilit du
systme et de la bonne rsolution des pics des substances analyser.
7.3 Injecter l'chantillon analyser faire ventuellement l'analyse d'un
chantillon identique ayant t supplment par les acides rechercher
(adapter l'ajout la quantit ventuellement dcele lors de l'analyse
prcdente, pour 1 mg prsent ajouter galement 1 mg)
S'assurer de la bonne rsolution des pics des acides recherchs avec les pics du
vins (normalement il n'en existe pas dans cette zone)
8. Calcul
Aprs avoir repr les pics des acides doser dans l'chantillon comparer
l'aire des pics avec celles des acides d'une solution fille (4.13) de
concentration C connue
OIV-MA-AS313-20 : R2006

Par exemple soit s l'aire du pic de l'acide doser. S l'aire du pic de la solution
(4.13) de concentration C
X dans l'chantillon = C
s
S
en mg/l
9. Caractristiques de la mthode
Acide sorbique
Acide benzoque
Acide
salicylique
0 200 mg/l
0 200 mg/l
0 200 mg/l
> 90 %
> 90 %
> 90 %
Rptabilit : r*
2%
3%
8%
Reproductibilit : R*
8%
9%
12%
Limite de dtection
3 mg/l
3 mg/l
3 mg/l
Limite de quantification
5 mg/l
6 mg/l
7 mg/l
11%
12%
13%
Domaine de linarit
Justesse (taux de
rcupration)
Incertitude
10. Bibliographie
- Dosage de l'acide sorbique dans les vins par chromatographie en phase gazeuse.
1978. BERTRAND A. et SARRE Ch., Feuillets Verts O.I.V., 654-681.
- Dosage de l'acide salicylique dans les vins par chromatographie en phase gazeuse.
1978. BERTRAND A. et SARRE Ch., Feuillets Verts Ol.V., 655-682.
- Dosage de l'acide benzoque, dans les sodas et autres produits alimentaires
liquides, par chromatographie en phase gazeuse. 1978. BERTRAND A. et SARRE
Ch. Ann. Fals. Exp. Chim. 71, 761, 35-39.
-Application de la chromatographie liquide lanalyse des vins et des mots. 1979.
SALAGOITY-AUGUSTE M.-H. Doctorat de luniversit de Bordeaux 2.
OIV-MA-AS313-20 : R2006

Acide Metatartrique
Mthode Type IV
Dtermination de la prsence dacide metatartrique

1. Introduction
L'acide mtatartrique ajout au vin pour viter les prcipitations tartriques est
traditionnellement dos par diffrence entre l'acide tartrique total aprs hydrolyse
chaud de l'acide mtatartrique et l'acide tartrique naturel avant hydrolyse.
Toutefois, compte tenu de la prcision du dosage de l'acide tartrique, des traces
d'acide mtatartrique ne sont pas dcelables par cette mthode, il faut donc
caractriser cet additif non accept dans certains pays par une mthode plus
spcifique.
Vins susceptibles de contenir de l'acide mtatartrique l'tat de trace.
3. Principe
L'acide mtatartrique forme avec l'actate de cadmium en milieu moyennement
acide, un prcipit insoluble ; il est le seul de tous les lments prsents dans le
mot et le vin donner un tel prcipit.
Remarque : L'acide tartrique est aussi prcipit avec l'actate de cadmium, mais
seulement en prsence d'une teneur en alcool suprieure 25 % vol. Le prcipit se
re-dissous dans l'eau, contrairement au prcipit obtenu avec l'acide mtatartrique.
Le prcipit cadmique d'acide mtatartrique est dcompos par chauffage avec
de l'hydroxyde de sodium et libre l'acide tartrique. Ce dernier forme avec le
mtavanadate d'ammonium une coloration orange spcifique.
4. Ractifs
4.1 Solution d'actate de cadmium 5 p.100
4.1.1 Actate de cadmium dihydrat 98 %
4.1.2 Acide actique pur
4.1.3 Eau distille ou dminralise
4.1.4 Solution d'actate de cadmium : dissoudre 5 g d'actate de cadmium
(4.1.1) dans 99 mL d'eau (4.1.3) ajouter 1 mL d'acide actique pur (4.1.2)
OIV-MA-AS313-21 : R2007

Acide Metatartrique
4.2 Hydroxyde de sodium 1M

4.3 Acide sulfurique 1M
4.4 Solution de mtavanadate d'ammonium 2 p. 100 en poids
4.4.1 Mtavanadate d'ammonium
4.4.2 Actate de sodium trihydrat 99 %
4.4.3 Solution d'actate de sodium 27 p. 100 : dissoudre 478 g d'actate
de sodium (4.4.2) dans 1 litre d'eau (4.1.3)
4.4.4 Solution de mtavanadate d'ammonium : dissoudre 10 g de
mtavanadate d'ammonium (4.4.1) dans 150 mL d'hydroxyde de sodium 1
M (4.2) ajouter 200 mL de la solution d'actate de sodium 27 p. 100
(4.4.3) et complter 500 mL avec de l'eau (4.1.3)
4.5 Ethanol 96 % vol.
5. Appareillage
5.1 Centrifugeuse avec un rotor pouvant recevoir des flacons de 50 mL de
capacit
5.2 Spectromtre pouvant fonctionner dans le visible et recevoir des cuves de 1
cm de trajet optique.
6. Mode opratoire
6.1 Centrifuger 50 mL de vin pendant 10 minutes 11000 rpm
6.2 Prlever 40 mL de vin limpide l'prouvette et les placer de nouveau dans
un flacon pour centrifugeuse
6.3 Ajouter 5 mL d'thanol 96 % vol (4.5)
6.4 Ajouter 5 mL de la solution d'actate de cadmium (4.1.4)
6.5 Mlanger et laisser reposer 10 minutes
6.6 Centrifuger pendant 10 minutes 11000 rpm
6.7 Dcanter par retournement total du flacon (une fois) et jeter le surnageant.
En prsence d'acide mtatartrique, il se forme un prcipit lamellaire au fond du
tube.
En l'absence de prcipit, l'chantillon sera considr comme exempt d'acide
mtatartrique. Dans le cas contraire ou si l'on veut tablir avec certitude la prsence
d'un lger prcipit, procder comme suit :
6.8 Laver une fois le prcipit avec 10 mL d'eau (4.1.3) sous la forme d'un jet
nergique vers le fond du tube ce qui pour but de dtacher le prcipit du fond
6.9 Ajouter 2 mL de solution d'actate de cadmium (4.1.4)
6.10 Centrifuger 11000 rpm pendant 10 minutes puis jeter le surnageant par
retournement complet du tube (une fois)
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Acide Metatartrique
6.11 Aprs addition d'un mL d'hydroxyde de sodium 1 M (4.2), plonger le tube

centrifuger pendant 5 minutes dans un bain d'eau 100 C
6.12 Aprs refroidissement, ajouter 1 mL d'acide sulfurique 1M (4.3) et 1 mL
de solution de mtavanadate d'ammonium (4.4.4)
6.13 Attendre 15 minutes
6.14 Centrifuger durant 10 minutes 11000 rpm
6.15 Verser le surnageant dans une cuve de spectrophotomtre et mesurer
l'absorbance 530 nm, aprs avoir fait le zro avec de l'eau (4.1.3)
Soit AbsE
Tmoin. On ralise en parallle un tmoin constitu du mme vin que celui
analys mais chauff pralablement 2 minutes 30 l'aide d'un gnrateur de microondes rgl sur la puissance maximum ou encore au bain d'eau 100 C durant 5
minutes
Soit AbsT
7. Rsultat
La prsence d'acide mtatartrique dans le vin est tablie lorsque, 530 nm :
AbsE - AbsT >0,050
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Acide L-ascorbique et acide D-isoascorbique
Mthode Type II
Dosage simultan de l'acide L-ascorbique et de l'acide

D-isoascorbique (acide rythorbique) dans le vin
par HLPC et dtection UV
1. Introduction
L'acide ascorbique est un antioxydant prsent naturellement dans toute une
srie de denres alimentaires. La quantit normale d'acide ascorbique dans
le raisin diminue lors de llaboration des mots et au cours de la
vinification. Il peut tre ajout aux mots et aux vins dans certaines limites.
La mthode dcrite a t valide dans le cadre d'essais interlaboratoires, par
des analyses d'chantillons de vin avec des quantits ajoutes d'acide Lascorbique et d'acide D-isoascorbique respectivement de 30 mg/L 150
mg/L et de 10 mg/L 100 mg/L.
Cette mthode convient au dosage simultan de l'acide L-ascorbique et de
l'acide
D-isoascorbique (acide rythorbique) dans le vin par chromatographie
liquide haute performance et dtection UV dans une plage de 3 150 mg/L.
Pour des teneurs suprieures 150 mg/L, une dilution de lchantillon est
ncessaire.
3. Principe
Les chantillons sont directement injects dans le systme HLPC aprs
filtration sur membrane. Les analytes sont spars sur une colonne phase
inverse et sont soumis une dtection UV 266 nm. La quantification de
l'acide L-ascorbique et de l'acide D-isoascorbique est effectue par rapport
un talon externe.
Remarque : Les colonnes et les conditions de fonctionnement sont donnes
titre d'exemple. D'autres types de colonnes peuvent galement assurer une
bonne sparation.
OIV-MA-AS313-22 : R2008

4.1
Ractifs
4.1.1. n-octylamine, puret 99,0 %
4.1.2. Actate de sodium x 3 H2O, puret 99,0 %
4.1.3. Acide actique pur, 100 %
4.1.4. Acide phosphorique, approx. 25 %
4.1.5. Acide oxalique, puret 99,0 %
4.1.6. Ascorbate oxydase
4.1.7. Acide L-ascorbique, ultra 99,5 %
4.1.8. Acide D-isoascorbique, puret 99,0 %
4.1.9. Eau bidistille
4.1.10. Mthanol, p.A. 99,8 %
4.2
Prparation de la phase mobile
4.2.1 Solutions pour la phase mobile
Prparer les solutions suivantes pour la phase mobile :
4.2.1.1 12,93 g de n-octylamine dans 100 mL de mthanol
4.2.1.2 68,05 g d'actate de sodium x 3 H2O dans 500 mL d'eau bidistille
4.2.1.3 12,01 g d'acide actique pur dans 200 mL d'eau bidistille
4.2.1.4 Solution tampon (pH 5,4) : 430 mL de solution d'actate de sodium
(4.2.1.2) et 70 mL de solution d'acide actique (4.2.1.3)
4.2.2 Prparation de la phase mobile
Ajouter 5 mL de solution de n-octylamine (4.2.1.1) environ 400 mL d'eau
bidistille dans un bcher. Ajuster cette solution un pH de 5,4 5,6, en
ajoutant goutte goutte de l'acide phosphorique 25% (4.1.4). Ajouter
50 mL de la solution tampon (4.2.1.4) et transfrer le compos dans une
fiole jauge de 1000 mL, puis complter avec de l'eau bidistille. Avant
utilisation, la phase mobile doit tre filtre l'aide d'une membrane
(cellulose rgnre de 0,2 m) et si possible dgaze avec de l'hlium
(pendant environ 10 minutes) selon les besoins du systme HLPC utilis.
OIV-MA-AS313-22 : R2008

4.3
Prparation de la solution talon
Remarque :
Toutes les solutions talons (solution mre 4.3.1. et solutions de travail
4.3.2) doivent tre prpares chaque jour et de prfrence stockes dans un
rfrigrateur avant injection.
4.3.1 Prparation de la solution mre (1 mg/mL)
Prparer une solution aqueuse d'acide oxalique 2% et liminer loxygne
dissout par barbotage lazote.
Peser exactement 100 mg d'acide L-ascorbique et 100 mg d'acide Disoascorbique dans une fiole jauge de 100 mL, et la remplir de solution
aqueuse d'acide oxalique 2%.
4.3.2 Prparation des solutions de travail
Pour les solutions de travail, diluer la solution mre (4.3.1) aux
concentrations dsires avec la solution d'acide oxalique 2%. Des
concentrations entre 10 mg/L et 120 mg/L sont recommandes. Par exemple
100 l, 200 l, 400 l, 800 l 1200l 10 mL, correspondant 10, 20, 40,
80 et 120 mg/L.
5. Appareillage
Matriel courant de laboratoire, en particulier les quipements suivants :
5.1 Pompe HLPC
5.2 Injecteur boucle de 20 l
5.3 Dtecteur UV
6. chantillonnage
Des chantillons de vin sont filtrs sur une membrane d'un diamtre de pore
de 0,2 m avant injection.
Pour des teneurs suprieures 150 mg/L, une dilution de lchantillon est
ncessaire.
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7. Mode opratoire
7.1 Conditions d'utilisation du systme HLPC
Injecter dans l'appareil chromatographique 20 l de l'chantillon filtr sur
membrane.
Prcolonne :
7 m)
Colonne :
7 m)
Volume d'injection :
Phase mobile :
Dbit :
Dtection UV :
Cycle de rinage :
par exemple Nuclosil 120 C18 (4 cm x 4 mm x

par exemple Nuclosil 120 C18 (25 cm x 4 mm x
20 l
voir 4.2.2, isocratique
1mL/min
266 nm
au moins 30 mL d'eau bidistille suivis de 30mL de
mthanol et de 30 mL d'actonitrile
7. 2 Identification/Confirmation
L'identification des pics s'effectue par comparaison des temps de rtention
des talons et des chantillons. Avec le systme chromatographique dcrit
en exemple, les temps de rtention sont respectivement de 7,7 min pour
l'acide L-ascorbique et 8,3 min pour l'acide D-isoascorbique (voir figure 1,
chromatogramme A).
Pour confirmer des rsultats positifs, ces chantillons doivent tre traits
avec une spatule d'ascorbate oxydase et mesurs de nouveau (voir figure 1,
chromatogramme B).
En raison de la dgradation de l'acide L-ascorbique et de l'acide Disoascorbique provoque par l'ascorbate oxydase, aucun signal ne devrait
tre trouv au temps de rtention de l'acide L-ascorbique et de l'acide Disoascorbique. En cas de dtection de
pics parasites, leur surface doit tre prise en compte dans le calcul de la
concentration des analytes.
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acide D-isoascorbique
acide L-ascorbique

Figure 1 : Exemple de chromatogramme dun vin blanc : A avant le

traitement lascorbate oxydase ; B aprs traitement
Remarque : Il est recommand d'analyser les chantillons traits
l'ascorbate oxydase la fin d'une squence suivie du cycle de rinage pour
liminer les restes d'ascorbate oxydase de la colonne, faute de quoi l'acide
L-ascorbique et l'acide D-isoascorbique pourraient tre convertis par les
restes d'ascorbate oxydase lors de la mesure HPLC et le rsultat pourrait
s'en trouver affect.
8. Calculs
Prparer une courbe d'talonnage partir des solutions de travail (4.3.2).
Selon la mthode de l'talon externe, la quantification de l'acide Lascorbique et de l'acide
D-isoascorbique est ralise en mesurant les surfaces des pics et en les
comparant la concentration correspondante sur la courbe d'talonnage.
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Expression des rsultats

Les rsultats sont exprims une dcimale en mg/L d'acide L-ascorbique et
d'acide
D-isoascorbique respectivement (par exemple 51,3 mg/L).
Pour des teneurs suprieures 150 mg/L, prendre en compte la dilution.
9. Fidlit
La mthode a t teste dans le cadre d'un essai interlaboratoire organis en
1994 par l'ancien Office fdral d'hygine publique (Bundesgesundheitsamt,
Allemagne), auquel ont particip 27 laboratoires. Le programme de l'essai
interlaboratoire a suivi le 35 de la loi allemande relative aux denres
alimentaires, qui a t accept par l'O.I.V jusqu' l'introduction du nouveau
protocole (OENO 6/2000).
L'tude a port sur quatre chantillons diffrents de vin - deux vins blancs et
deux vins rouges avec cinq rptitions de chaque chantillon demandes.
tant donn qu'il n'tait pas possible de prparer des chantillons avec une
stabilit suffisante des analytes(vitesses de dgradation diffrentes), il a t
dcid d'envoyer aux participants des quantits dfinies de substances
talons pures ainsi que les chantillons de vin. Les laboratoires ont reu
pour consigne de transfrer les talons quantitativement dans les
chantillons de vin et de les analyser immdiatement. Des volumes de 30
150 mg/L pour l'acide L-ascorbique et de 10 100 mg/L pour l'acide Disoascorbique ont t analyss. Les rsultats dtaills de l'tude sont
prsents dans l'ANNEXE. L'valuation a t ralise selon DIN/ISO 5725
(version 1988).
Les carts-types de rptabilit (sr) et de reproductibilit (sR) taient en
adquation avec les concentrations d'acide L-ascorbiques et d'acide Disoascorbique. Le paramtre de prcision relle peut tre calcul l'aide des
quations suivantes :
Acide L-ascorbique
sr = 0,011 x + 0,31
sR = 0,064 x + 1,39
x : concentration d'acide L-ascorbique (mg/L)
Acide D-isoascorbique
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sr = 0,014 x + 0,31
sR = 0,079 x + 1,29
x : concentration d'acide D-isoascorbique (mg/L)
Exemple :
50 mg/L d'acide D-isoascorbique
sr = 1,0 mg/L
sR = 5,2 mg/L
10. Autres caractristiques de lanalyse

10.1 Limite de dtection
La limite de dtection de cette mthode a t estime 3 mg/L pour l'acide
L-ascorbique et l'acide D-isoascorbique.
10.2 Justesse
Le rcupration moyenne calcule partir de l'essai interlaboratoire men
sur quatre chantillons (voir l'ANNEXE) a t de :
100,6 % pour l'acide L-ascorbique
103,3 % pour l'acide D-isoascorbique
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11. Annexe : Essai interlaboratoires

Acide L-ascorbique
x
Quantit ajoute
Rcupration
n
Valeurs aberrantes
Rptabilit (sr)
Rptabilit relative
(Rel. sr)
Valeur de rptabilit
dHorrat
R
Reproductibilit (sR)
Reproductibilit relative
(Rel. sR)
Coefficient de variation de
reproductibilit dHorwitz
Valeur de reproductibilit
dHorrat
R
mg/L
mg/L
%
mg/L
%
Vin Rouge Vin Blanc Vin Rouge

I
II
III
152,7
119,8
81,0
150
120
80
101,8
99,8
101,3
25
23
25
1
3
1
1,92
1,55
1,25
1,3
1,3
1,5
0,17
0,17
0,19
0,20
mg/L
mg/L
%
5,4
10,52
6,9
4,3
10,03
8,4
3,5
6,14
7,6
1,6
3,26
10,9
7,5
7,8
8,3
9,6
0,92
1,08
0,92
1,14
29,5
28,1
17,2
9,1
mg/L
sR
sr
2,5
12
y = 0,0106x + 0,3058
R2 = 0,99
Vin Blanc
IV
29,9
30
99,7
23
3
0,58
1,9
y = 0,0636x + 1,3938
R2 = 0,9565
10
8
sr
sR
1,5
1
6
4
0,5
2
0
0
0
50
100
150
C mg/l
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200
50
100
150
200
C mg/l

Acide D-isoascorbique
Vin Rouge
I
mg/L
102,4
Quantit ajoute
Rcupration
mg/L
%
100
102,4
80
99,8
10
113,0
30
98,0
mg/L
%
25
1
1,71
1,7
23
3
1,49
1,9
24
2
0,47
4,1
22
4
0,70
2,4
0,21
0,23
0,37
0,25
mg/L
mg/L
%
4,8
9,18
9,0
4,2
7,96
10,0
1,3
2,394
21,2
2,0
3,23
11,0
8,0
8,3
11,1
9,6
1,12
1,21
1,91
1,14
25,7
22,3
6,7
9,0
n
Valeurs aberrantes
Rptabilit (sr)
Rptabilit relative
(Rel. sr)
Valeur de rptatibilit
dHorrat
r
Reproductibilit (sR)
Reproductibilit
relative (Rel. sR)
Coefficient de variation
de repro-ductibilit
dHorwitz
Valeur de
reproductibilit
dHorrat
R
mg/L
Vin Blanc
II
79,8
Vin Rouge
III
11,3
Vin Blanc
IV
29,4
sR
Sr
2
1,5
10
y = 0,0141x + 0,3081
2
R = 0,9952
y = 0,079x + 1,2854
R2 = 0,9893
8
sR
Sr
0,5
2
0
0
0
50
100
150
50
100
150
C mg/l
C mg/l
OIV-MA-AS313-22 : R2008

12. Bibliographie
B. Seiffert, H. Swaczyna, I. Schaefer (1992) : Deutsche
Lebensmittelrundschau, 88 (2) p. 38-40
C. Fauhl: Simultaneous determination of L -ascorbic acid and D isoascorbic acid (erythorbic acid) in wine by HPLC and UV-detection
OIV FV 1228, 2006
OIV-MA-AS313-22 : R2008
10
RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSES

OIV
Origine de lacide L-tartrique
Mthode Type IV
Dtermination de lorigine de lacide l-tartrique : vgtale

ou fossile par la dtermination de son activit 14C
1. OBJET ET DOMAINE DAPPLICATION

La mthode permet didentifier lorigine de lacide tartrique, vgtale ou fossile
et de dterminer les proportions respectives des 2 formes dans lventualit dun
mlange des deux. Dans ce dernier cas, la mthode permet de dtecter la prsence
de quantits dacide L-tartrique (L(+)-tartrique) d'origine fossile infrieures 10
%.
2. PRINCIPE
Lacide tartrique dorigine vgtale commercialis est, dans la majorit des cas,
un produit dorigine vinicole. Cest le hydrognotartrate de potassium prsent
dans les lies qui est exploit et commercialis sous forme dacide L-tartrique. La
teneur de cet acide en 14C est donc, comme lthanol des vins, lie la teneur en
14
C du dioxyde de carbone de lanne de production des vins dont il est issu. Cette
activit est relativement leve en liaison avec les activits humaines.
Lacide tartrique de synthse, issu de produits fossiles, a lui une teneur en 14C
beaucoup plus basse voire ngligeable.
La mesure de lactivit 14C en DPM/g de carbone (Dsintgration Par Minute)
par scintillation liquide permet donc de dterminer lorigine et un ventuel
mlange des deux formes.
3. REACTIFS ET PRODUITS
3.1 Ractifs
3.1.1 liquide scintillant, par exemple Instagel Plus
3.1.2 talon tolune 14C dont lactivit est certifie par un laboratoire certifi pour
ltalonnage, pour le calcul de lefficacit de lappareil et de son rendement par
ltablissement de la courbe de quenching.
3.1.3 standards 14C, 3H et du tolune 12C pour le bruit de fond pour la calibration
du compteur scintillation
3.1.4 nitromthane 99 %
3.1.5 eau ultrapure (> 18 M)
OIV-MA-AS313-23 : R2008

OIV
3.1.6 solution de tolune 14C environ 430 DPM/mL obtenue par dilution dans le
tolune 12C de la solution mre talon 14C
3.2 Etalons
3.2.1 Etablissement de la courbe de quenching
Aprs avoir ralis une calibration du scintillateur avec les 3 standards certifis
14
C et 3H et du tolune 12C raliser la courbe de quenching suivant le protocole
suivant.
Prparer une douzaine de flacons avec 10 mL dune solution 500 g/L dacide Ltartrique fossile dans leau, rajouter ensuite une quantit telle dtalon 14C tolune
pour avoir environ 400-1000 DPM au total par flacon (au besoin faire une
solution intermdiaire de la solution talon dans du tolune), puis ajouter des
concentrations croissantes de nitromthane, par exemple pour 12 tubes : 0, 0, 0, 5,
10, 15, 20, 35, 50, 100, 200 et 400 L puis 10 mL de liquide scintillant. Il faut
quil y ait au moins 3 chantillons sans nitromthane.
Etablir la courbe de quenching une fois par an en analysant les tubes par ordre de
teneur croissante en nitromthane.
La courbe de quenching permet alors de dterminer lefficacit ou le rendement
moyen.
3.2.2 Dtermination du bruit de fond (blanc de lanalyse)
A partir de lacide L-tartrique fossile, par exemple celui utilis pour le calcul du
rendement, dterminer le bruit de fond ou blanc de lanalyse. Cette analyse doit
tre ralise immdiatement aprs la courbe de quenching puis environ tous les
mois.
3.2.3 Etablissement de la courbe dtalonnage
Il faut vrifier la puret des acides L-tartriques fossile et vgtal par HPLC avant
analyse par scintillation.
Etalonnage avec un mlange dacide tartrique (dont on connat de manire
certaine lorigine vgtale) contenant entre 0% et 100 % de cette forme en
association avec la forme fossile.
OIV-MA-AS313-23 : R2008

OIV
Prparation des solutions 500 g/L

Blanc ou bruit de
Etalons
Autocontrle
fond
respectivement dans des fioles jauges de 50 mL
25 g de mlanges
utiliser le
25 g acide Lconnus dacide Lblanc
Pese
tartrique fossile
tartrique fossile et
vgtal
boucher
Dissolution
bien homogniser le mlange par secouage et/ou
retournement
Prparation des mlanges scintillant
Dans des flacons en plastique ajouter respectivement
Prise dessai partir
10 mL laide de pipettes jauges
des solutions 500
g/L
Ajout dos
/////////////////////////
/////////////////////////
100 L
Ajout du liquide e 10 mL laide dun distributeur automatique
scintillant
visser le bouchon et secouer fortement
attendre 15 min et mettre en analyse pendant 500 min
3.3 AUTOCONTROLE
3.3.1 Nature du produit utilis pour lautocontrle
Une solution dacide L-tartrique fossile 500 g/L est dope avec du 14C tolune
(DPM<100)
La dtermination du bruit de fond doit tre ralise conjointement avec la mme
solution dacide L-tartrique fossile.
3.3.2 Type dautocontrle
Lajout dos mesur permet de vrifier quil ny a pas interfrence spectrale dans
le milieu examin.
3.3.3 Limite de contrle
La limite de contrle dpend du matriel utilis, une valeur de 5 % est acceptable.
3.3.4 Frquence et squence de la vrification
Une fois par mois en utilisation courante, ou chaque srie danalyse, un
autocontrle est effectu sur le scintillateur. Ce contrle est galement effectu
chaque changement de lot de liquide scintillant ou aprs tablissement dune
nouvelle courbe de quenching.
3.3.5 Rgles de dcision prendre en fonction des rsultats de lautocontrle
OIV-MA-AS313-23 : R2008

OIV
Si les rsultats sortent des limites de contrle, aprs vrification du protocole,

procder une calibration du scintillateur puis refaire lautocontrle.
Si la calibration est correcte mais pas la mesure du nouvel autocontrle, refaire
une courbe de quenching et un autocontrle.
4. APPAREILLAGE
4.1 spectromtre scintillation liquide avec ordinateur et imprimante
pralablement talonn et dont la courbe de quenching a t tablie, par exemple,
avec du nitromthane
4.2 flacons pauvres en potassium (40K) munis de bouchons vis, faible bruit de
fond et identiques
4.3 pipettes de 10 mL 2 traits
4.4 burette distribution automatique s'adaptant au pas de vis du flacon de liquide
scintillant
4.5 verrerie de laboratoire
5. ECHANTILLONS
La puret des chantillons peut ventuellement tre vrifie par HPLC avant
analyse par scintillation.
Faire une solution 500 g/L dchantillon analyser dans de leau ultra pure.
OIV-MA-AS313-23 : R2008

OIV
Prparation des solutions 500 g/L

Blanc
Etalons
Autocontrl Echantillo
analytique ou
e
n
bruit de fond
respectivement dans des fioles jauges de 50 mL
25 g de
utiliser le
25 g acide Lmlanges
blanc
Pese
25 g
tartrique fossile
connus
dacide Ltartrique
fossile et
vgtal
boucher
Dissolution
bien homogniser le mlange par secouage et/ou
retournement
Prparation des mlanges scintillants
Dans des flacons en plastique ajouter respectivement
Prise dessai
10 mL laide de pipettes jauges
partir
des
solutions 500
g/L
Ajout dos
/////////////////////// //////////////// 100 L
////////////////
//
///
///
Ajout du liquide 10 mL laide dun distributeur automatique
e scintillant
visser le bouchon et secouer fortement
attendre 15 minutes et mettre en analyse pendant 500
minutes
passer un chantillon 0 % dacide tartrique vgtal,
Remarques
soit 10 mL dacide tartrique fossile et 10 mL de liquide
scintillant, tous les 5 10 chantillons analyss.
effectuer une dtermination du bruit de fond la fin de
chaque srie danalyses
OIV-MA-AS313-23 : R2008

OIV
6. CALCULS
Les mesures sont donnes directement en Coups Par Minutes (CPM), mais il faut
les convertir en DPM/g de carbone.
6.1 Rsultats
Calcul de lactivit spcifique 14C de lchantillon en DPM/g de Carbone:
A=
( X X' ) 100 3 ,125( 1)

Rm m
A : activit en dsintgrations/minutes et par gramme de carbone

X : CPM de lchantillon
X : CPM pour lacide L-tartrique fossile utilis pour le bruit de fond
m : masse dacide tartrique dans la prise dessai de 10 mL de la solution 500
g/L soit 5 g dacide
Rm : cest le rendement moyen exprim en pourcentage
(1) il y a 3,125 grammes dacide tartrique pour un gramme de carbone (rapport de
la masse molaire de lacide (150 g/mol) sur la masse totale du carbone (soit 4 x
12 = 48 g/mol)
Le rsultat est donn avec une dcimale.
6.2 Vrification des rsultats avec lautocontrle
Il faut vrifier en comparant la valeur obtenue au 6.1 avec le rsultat donn par
la mthode de lajout dos. Si la diffrence est importante (> 5 %), dans ce cas
recalculer la valeur en DPM partir de la valeur en CPM suivant :
DPM recalcules =
CPM
Rm
avec le rendement moyen obtenu partir de la courbe de quenching.

Les 2 rsultats ne doivent pas diffrer de plus de 5 % de la valeur moyenne.
Sinon, refaire une analyse de lchantillon en doublant la quantit dtalon
interne. Comparer les 2 rsultats obtenus avec les talons, sils ne diffrent pas de
plus de 5 % autour de la moyenne des 2, donner le rsultat moyen.
OIV-MA-AS313-23 : R2008

OIV
Remarque : dans ce cas cela signifie que le quenching de lchantillon est tel que
lanalyse directe nest pas exploitable.
6.3 Incertitude
Lincertitude obtenue dans des conditions standards danalyse est de
DPM/g de carbone.
0,7
7. VALIDATION PAR RAPPORT A UNE METHODE DE REFERENCE

7.1 Principe
Lacide tartrique est transform en CO2 par combustion puis transform en
benzne ;
La mesure est alors effectu en scintillation liquide.
Aprs avoir subi un prtraitement destin liminer les contaminations, le CO2
de l'chantillon est transform en benzne selon la chane de ractions suivantes:
C + O2 CO2 (1)
CaCO3 + 2 HCl CO2 + H2O + Ca2+ + 2Cl- (2)
800C
2 CO2 + 10 Li Li2C2 + 4 Li2O (3)
Li2C2 + 2 H2O C2H2 + 2 LiOH (4)
3 C2H2 C6H6 (5)
Al2O3 avec Cr3+ et V
(1) Echantillon organique: Le carbone, avec un balayage d'oxygne et une source

de chaleur (ou par combustion en prsence d'oxygne sous pression) donne le
dioxyde de carbone de l'chantillon CO2.
(2) Echantillon minral (carbonates marins ou continentaux, eaux, etc) : Le
carbonate est attaqu par de l'acide chlorydrique pur (HCl) pour donner le
dioxyde de carbone CO2 de l'chantillon avec de l'eau et du calcium ionis.
(3) L'action du dioxyde de carbone CO2 sur du lithium mtal chauff entre
+600C et +800C donne du carbure de lithium et de l'oxyde de lithium (Li2O).
OIV-MA-AS313-23 : R2008

OIV
(4) L'action de l'eau (hydrolyse) sur le carbure de lithium donne de l'actylne

(C2H2), de l'hydroxyde de lithium, . Il faut utiliser de l'eau non tritie et sans
radon.
(5) La trimrisation de l'actylne sur catalyseur base d'alumine recouvert de
chrome-vanadium 185C environ donne le benzne (C6H6).
7.2 Mode Opratoire

Le dioxyde de carbone (CO2) obtenu soit aprs brlage, combustion ou attaque
acide d'un chantillon, est conserv dans une colonne de stockage. On place une
quantit de lithium (lithium = catalyseur permettant une transformation chimique)
ncessaire dans une coupelle en nickel et on place le tout au fond d'un racteur de
chauffe. On fait le vide dans ce racteur et on chauffe sa partie infrieure tout en
refroidissant sa partie suprieure au niveau des parois grce une poche de
circulation d'eau.
7.2.1 Carburation.
Aprs une heure de chauffe environ, la temprature atteint 650 C. On peut alors
mettre le CO2 en prsence du lithium fondu. La quantit de lithium est toujours en
excs par rapport la quantit de carbone de l'chantillon. L'excs de lithium
utiliser par rapport aux conditions stoechiomtriques varie selon les auteurs de
20% 100%.
La raction chimique (carburation ou "capture") est quasi instantane et ce sont
les premires minutes de la capture qui sont dterminantes dans le processus de
carburation.
Cette raction est exothermique (un gain de 200 C). La carburation est assez
rapide et elle est considre l'tat carbur ds les premires 20 minutes, mais le
chauffage reste permanent durant 45 50 minutes de faon liminer les traces
de radon (fils de l'uranium) qui peuvent ventuellement se trouver mles au
dioxyde de carbone.
7.2.2 Refroidissement.
Une fois le temps de traitement (chauffage) termin, on laisse les racteurs
refroidir jusqu' obtenir une temprature ambiante (25-30 C).
OIV-MA-AS313-23 : R2008

OIV
7.2.3 Hydrolyse du Carbure de Lithium.

On introduit de l'eau dans le racteur, en quantit largement suprieure aux
besoins de la raction (1,5 L). La raction chimique est instantane et le
dgagement de l'actylne se produit dans le mme temps. Cette raction est
galement exothermique (gain en temprature de +80C +100C).
L'actylne produit est ensuite ramen l'tat gazeux (sublimation) pour tre
capt sur le catalyseur alumine au vanadium-chrome Cr3+. Celui-ci est
pralablement dshydrat pendant trois heures minimum l'air puis ensuite deux
heures sous vide primaire avec un chauffage +380 C. La dshydratation est
capitale pour vacuer toute l'eau rsidente sur les billes du catalyseur.
7.2.4 Trimrisation - Polymrisation de l'actylne en benzne par catalyse.
Avant la trimrisation, la temprature du catalyseur doit tre retombe entre +60
et +70 C, cette raction tant exothermique galement, il y aura auto-entretien de
cette temprature. Puis le catalyseur est nouveau chauff +180 C pendant
1h30 et le benzne vaporis est dsorb pour tre pig dans un doigt entour
d'azote liquide. Cette dsorbtion se droule sous vide dynamique. A la fin de la
manipulation, on laisse le benzne cristallis se rchauffer jusqu' temprature
ambiante pour qu'il trouve sa forme liquide avant d'tre utilis pour le comptage.
7.3 Banc de chimie pour la synthse du Benzne
OIV-MA-AS313-23 : R2008

OIV
7.4 Solution chimique de rfrence pour le comptage.

On utilise comme rfrence pour les comptages en scintillation liquide, un
volume tabli 4 mL de solution.
Cette solution comprend une base idale de 3,52g de benzne de l'chantillon
(solvant) + le liquide scintillant (solut) compos de 2 scintillants, un primaire et
un secondaire.
Sachant que la masse volumique du benzne est 0.88 g/litre,
donc 0,88 x 4mL = 3,52 g.
Liquide Scintillant Primaire
Butyl-PBD
Composition chimique
(2-(4-Biphnylyl)-5-(4tertbutyl-phnyl)-1,3,4oxadiazole)
Fluorescence maximale en longueur d'onde
367 nanomtres
Liquide Scintillant Secondaire
bis-MSB
Composition chimique
1,4-Di-(2-Mthylstyryl)Benzne
Fluorescence maximale en longueur d'onde
415 nanomtres
Proprits optiques d'absorption et

d'mission du couplage des deux
scintillants :
Longueur d'onde de l'absorption maxi
409 nanomtres
Longueur d'onde de l'mission maxi
412 nanomtres
7.5 Correction delta 13C pour le fractionnement Isotopique.

La mesure implique une correction pour le fractionnement isotopique au travers
de la procdure de normalisation avec un standard 13C PDB d'une valeur de
25
OIV-MA-AS313-23 : R2008
10

OIV
8. CARACTERISTIQUES DE LA METHODE
8.1 Mise en oeuvre
Un chantillon d'acide tartrique d'origine vinicole et un chantillon d'acide
tartrique de synthse ont t utiliss pour prparer des solutions tests d'acide
tartrique 500 g/L.
Les teneurs en acide tartrique d'origine vinicole des solutions tests variaient entre
0% et 100%.
L'origine et la puret des deux chantillons de dpart ont t pralablement
vrifies l'aide de la mthode de rfrence.
8.2 Rsultats:
Les rsultats sont donns dans le tableau et la figure suivant :
% D'ACIDE TARTRIQUE D'ORIGINE VINICOLE
TENEURS
REELLES
0
10
20
30
40
50
60
70
80
85
90
95
100
RESULTATS DE LA
METHODE
ALTERNATIVE
0 et 0
3,5 et 6,0
11,4 et 12
24,6 et 25,4
34,7 et 38
41,4 et 50,6
57,8 et 58,8
60 et 63,3
81
84
88
94
100
OIV-MA-AS313-23 : R2008
RESULTATS DE LA
METHODE
DE REFERENCE
0
12
22
31
40
50
63
70
81
86
91
96
100
11

OIV
Activit
18
Mthode Alternative
C en fonction de la teneur en acide Ltartrique fossile
14
16
14
12
y = 0,159x + 0,2543
R 2 = 0,9917
10
8
6
4
2
0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
120
% d e l ' a c i de t a r t r i qu e v g t a l
8.3 Justesse, Fidlit

La justesse est de 6,9%
Lcart type de rptabilit de la mthode alternative est de : 2,86 % d'acide
tartrique vgtal.
9. BIBLIOGRAPHIE
Recueil des mthodes internationales danalyse des boissons spiritueuses, des
alcools et de la fraction aromatiques des boissons, Office Internationale de la
Vigne et du Vin, Edition officielle, juin 1994, page 201, 204, 210 et 307.
Mthodes danalyses communautaires de lalcool neutre applicables dans le
secteur du vin, rglement C.E.E n625/2003, 2 avril 2003, Journal Officiel des
communauts europennes du 15 mai 1992, nL130, p18. (Journal officiel du 8
avril 2003, N L90, p4.)
J. GUERAIN et S. TOURLIERE , Radioactivit carbone et tritium dans les
alcools, Industries Alimentaires et Agricoles 92e anne juillet - aot 1975, N
7-8
S. COHEN, B. CRESTO, S. NACHAMPASSAK, T. PAYOT, B. MEDINA, S.
CHAUVET, Dtermination de lorigine de lacide tartrique L(+): naturelle ou
fossile par la dtermination de son activit C14 - Document OIV FV 1238, 2006
OIV-MA-AS313-23 : R2008
12
Dioxyde de carbone
Mthode Type II
Dioxyde de carbone
avec une gamme de concentrationjusqu 1,5 g/L
(A39 modifie par Oeno 21/2003 et complete par la rsolution Oeno
3/2006)
1.1. Cas des vins tranquilles (surpression de CO2 0,5 x 105 Pa) 1
Le volume de vin prlev sur l'chantillon amen au voisinage de 0 C est vers
dans un excs suffisant de solution titre d'hydroxyde de sodium pour avoir un
pH de 10 - 11. On titre avec une solution acide en prsence d'anhydrase
carbonique. La teneur en dioxyde de carbone est dduite du volume vers pour
passer de pH 8,6 (forme carbonate acide) 4,0 (acide carbonique). Un titrage
tmoin effectu dans les mmes conditions sur le vin dcarboniqu permet de
tenir compte du volume de solution d'hydroxyde de sodium consomm par les
acides du vin.
1.2. Cas des vins ptillants et des vins mousseux
L'chantillon de vin analyser est amen au voisinage de son point de
conglation. Aprs soutirage d'un certain volume destin servir de tmoin
aprs dcarbonication, on alcalinise le reste de la bouteille pour fixer tout le
CO2 sous forme de carbonate neutre. On titre avec une solution acide en
prsence d'anhydrase carbonique. La teneur en dioxyde de carbone est dduite
du volume de solution acide verse pour passer de pH 8,6 (forme carbonate
acide) pH 4,0 (acide carbonique). Un titrage tmoin effectu dans les mmes
conditions sur le vin dcarboniqu permet de tenir compte du volume de
solution d'hydroxyde de sodium consomm par les acides du vin.
2. Description de la mthode
2.1. Cas des vins tranquilles
(surpression de dioxyde de carbone 0,5 x 105 Pa).
1 bar = 10 Pascal (Pa)
OIV-MA-AS314-01 : R2006
Dioxyde de carbone
2.1.1. Appareillage
Agitateur magntique
pH mtre.
2.1.2. Ractifs
Solution d'hydroxyde de sodium 0,1 M.
Solution d'acide sulfurique 0,05 M.
Solution d'anhydrase carbonique 1 gramme par litre.
Refroidir l'chantillon de vin aux environs de 0 C ainsi que la pipette de 10 ml
servant son prlvement.
Prlever dans un vase cylindrique de 100 ml, 25 ml de solution 0,1 M
d'hydroxyde de sodium ; ajouter 2 gouttes de solution aqueuse d'anhydrase
carbonique 1 g par litre. Y introduire 10 ml de vin au moyen de la pipette
refroidie 0 C.
Placer le vase cylindrique sur l'agitateur magntique, mettre en place l'lectrode
et le barreau magntique et procder une agitation modre.
Lorsque le liquide est revenu la temprature ambiante, verser par affusion
lente la solution 0,05 M d'acide sulfurique jusqu' pH 8,6.
Continuer les affusions d'acide sulfurique 0,05 M jusqu' pH 4,0. Soit n ml le
volume utilis entre pH 8,6 et 4,0.
Procder par ailleurs l'limination du CO2 sur 50 ml environ de l'chantillon
de vin par agitation sous vide pendant 3 minutes, en rchauffant la fiole dans
un bain d'eau 25 C environ.
Appliquer sur 10 ml de vin dcarboniqu le mode opratoire ci-dessus : soit
n ml le volume utilis.
1 ml de solution titre d'acide sulfurique 0,05 M correspond 4,4 mg de
dioxyde de carbone.
La quantit de dioxyde de carbone, en grammes par litre de vin, est donne par :
0,44 (n n).
Remarque : Dans le cas des vins peu chargs en CO2 (CO2 < 1 g/l), l'addition
d'anhydrase carbonique pour catalyser l'hydratation du CO2 n'est pas
ncessaire.
OIV-MA-AS314-01 : R2006
Dioxyde de carbone
2.2. Cas des vins ptillants et des vins mousseux

2.2.1. Appareillage
Agitateur magntique.
pH mtre.
2.2.2. Ractifs
Solution d'hydroxyde de sodium 50 p. 100 (m/m).
Solution d'acide sulfurique 0,05 M.
Solution d'anhydrase carbonique 1 gramme par litre.
Sur la bouteille de vin analyser, tracer un repre au niveau du remplissage et
la refroidir jusqu' dbut de conglation.
Laisser la bouteille se rchauffer lgrement, tout en l'agitant, jusqu'
disparition des cristaux de glace.
Dboucher rapidement et mettre de ct, dans une prouvette gradue, 45 50
ml de vin qui serviront au dosage tmoin. Le volume exact de ce prlvement,
v ml, sera dtermin par lecture sur l'prouvette aprs son retour la
temprature ambiante.
Ajouter, sitt le prlvement effectu, 20 ml de solution d'hydroxyde de
sodium 50 p. 1000 dans la bouteille pour une contenance de 750 ml.
Attendre que le vin soit revenu la temprature ambiante.
Placer dans un vase cylindrique de 100 ml, 30 ml d'eau distille bouillie et
2 gouttes de la solution d'anhydrase carbonique 1 g/l. Y ajouter 10 ml de vin
alcalinis.
Placer le vase sur l'agitation magntique, mettre en place l'lectrode et le
barreau magntique et procder une agitation modre.
Verser par affusion lente la solution d'acide sulfurique 0,05 M jusqu' pH 8,6.
Continuer les affusions d'acide sulfurique 0,05 M jusqu' pH 4,0. Soit n ml le
volume utilis entre pH 8,6 et 4,0.
Procder par ailleurs l'limination du CO2 sur les v ml de vin, mis ct pour
le dosage tmoin, par agitation sous vide pendant 3 minutes, en rchauffant la
fiole dans un bain d'eau 25 C environ. Prlever 10 ml de vin dcarboniqu
dans 30 ml d'eau distille bouillie, ajouter 2 3 gouttes de solution d'hydroxyde
de sodium 50 p. 100 pour amener le pH 10-11. Appliquer ensuite le mode
opratoire ci-dessus. Soit n ml, le volume d'acide sulfurique 0,05 M vers.
OIV-MA-AS314-01 : R2006
Dioxyde de carbone
1 ml de solution d'acide sulfurique 0,05 M correspond 4,4 mg de dioxyde de

carbone.
Vider la bouteille de son vin alcalinis et dterminer 1 ml prs le volume
initial du vin en la remplissant avec de l'eau jusqu'au trait de repre, soit V ml.
La quantit de dioxyde de carbone en grammes par litre de vin est donne par :
0,44 (n n) x
V v + 20
V-v

2.3. Calcul de la surpression thorique
La surpression 20 C, Paph20, exprime en Pascals, est donne par la formule :
Paph 20
Q
Patm
1,951 x 105 (0,86 0,01 A) (1 0,00144 S)
avec :
Q
= Teneur en grammes de CO2 par litre de vin
A
= Titre alcoomtrique du vin 20 C
S
= Teneur en sucres du vin en grammes par litre
Patm = Pression atmosphrique, exprime en Pascals
2.4 Remarque
Le mode opratoire ci-dessous peut tre employ titre usuel pour des vins
contenant moins de 4 g par litre de dioxyde de carbone.
Il est ncessaire de disposer de deux chantillons du vin analyser.
Ouvrir lun des chantillons aprs lavoir refroidi aux environs de 5 C et
ajouter immdiatement 5 ml dune solution dhydroxyde de sodium 50%
(m/m), pour 275 ml dchantillon. Boucher aussitt et mlanger. Prlever 10 ml
de vin ainsi trait dans un vase cylindrique contenant 40 ml deau et ajouter
3 gouttes de solution danhydrase carbonique 0,1 g/l. Titrer avec une solution
dacide sulfurique 0,02275 M jusqu pH 8,6, puis jusqu pH 4,0 et relever le
volume vers entre pH 8,6 et 4,0, soit n ml.
Procder par ailleurs llimination du dioxyde de carbone sur 25 ml environ
de vin, prlevs sur le deuxime chantillon, par agitation sous vide durant 1
min. dans un flacon de 500 ml contenant III gouttes de solution danhydrase
carbonique. Ajouter 0,33 ml de solution dhydroxyde de sodium 50% (m/m).
Appliquer sur 10 ml de vin dcarboniqu le mode opratoire ci-dessus. Soit
OIV-MA-AS314-01 : R2006
Dioxyde de carbone
n ml le volume utilis, 1 ml H2SO4 0,02275 M correspond 200 mg de

dioxyde de carbone par litre.
Teneur du vin analys en dioxyde de carbone, en milligrammes par litre :
(n - n') x 200 x 1,013
BIBLIOGRAPHIE
Mthode de rfrence :
CAPUTI A, UEDA M., WALTER P, & BROWN T., Amer, J, Enol, Vitic., 1970,
21, 140-144,
SUDRAUD P., F., O.I.V., 1973, n 350,
GORANOV N., F.V., O.I.V., 1983, n 758,
BRUN S, & TEP Y., F.V., O.I.V., 1981, n 736 & 1982, n 736 (bis),
OIV-MA-AS314-01 : R2006
Dioxyde de carbone
- Etude collaborative Titrage du dioxyde de carbone dans les vins ptillants

et mousseux
- Rapport sur les rsultats obtenus-
Objectif de ltude
Lobjectif de ltude est de dterminer les caractristiques de rptabilit et de
reproductibilit de la mthode de rfrence (MA-F-AS314-01-DIOCAR) pour le
titrage du CO2 dans les vins ptillants et mousseux.
Les dfinitions de lOIV et les limites de CO2 sont disponible dans la rsolution
OENO 1/2002.
Besoins et objectifs de ltude
La mthode de rfrence pour le titrage du CO2 nincluant pas des donnes de
prcision, c'est cette fin que ces essais collaboratifs ont t mens.
En raison de la particularit analytique de cette mthode, le protocole de validation
conventionnel na pas pu tre compltement respect. Sur une bouteille
dchantillon, on na pu effectuer quune seule dtermination indpendante.
Chaque bouteille a d tre considre comme individuelle. Il na donc pas t
possible de procder aux essais dhomognit prvus dordinaire dans le cadre des
enqutes prliminaires dune tude collaborative. Il a donc fallu travailler en troite
collaboration avec les producteurs afin davoir un matriau dessai homogne.
Les chantillons ont t prlevs dans un lot au cours du remplissage des
bouteilles, directement sur la ligne de remplissage dans un court intervalle de
temps, en supposant donc que le CO2 avait t distribu de manire homogne dans
toutes les bouteilles.
Ltude a t conue comme une srie de rptitions en aveugle . Lanonymat
complet des chantillons na pas pu tre garanti car les partenaires/producteurs
impliqus dans ltude utilisaient diffrents types de bouteilles et/ou dobturateurs
pour les diffrents chantillons. Il a donc fallu se fier lhonntet des laboratoires
participant ltude qui on a demand de raliser une analyse indpendante des
donnes, sans modification de ces donnes.
Objet et domaine d'application

1. La mthode est quantitative.
OIV-MA-AS314-01 : R2006
Dioxyde de carbone
2. la mthode est applicable pour le titrage alcoomtrique du CO2 dans les vins
ptillants et mousseux pour vrifier le respect des normes.
Matriaux et matrices
Ltude collaborative a port sur 6 chantillons diffrents. Ceux-ci ont tous t
envoys en rpliques en aveugle. Au total 12 bouteilles ont donc t distribues
aux participants.
Tableau 1 : Echantillons et codes
Echantillon
Code bouteille
Type
Echant. A
(Code 1 + 9)
Vin mousseux
Echant. B
(Code 2 + 5)
Vin ptillant
Echant. C
(Code 3 + 4)
Vin mousseux
Echant. D
(Code 6 + 10)
Vin ptillant
Echant.E
(Code 7 + 11)
Vin ptillant
Echant. F
(Code 8 + 12)
Vin mousseux (rouge)
Mesures de contrle
La mthode tudie dans le prsent document est dj approuve dans la pratique.
Seules les donnes de prcision manquantes devaient tre dtermines par ltude
collaborative. Il na pas t ncessaire deffectuer dessai prliminaire car la
plupart des laboratoires utilisaient dj la mthode de rfrence pour leurs analyses
usuelles.
Mthode suivre et pices justificatives

Toutes les pices justificatives ncessaires ont t fournies aux participants (lettre
daccompagnement, rfrence de la mthode danalyse, formulaire de rception de
lchantillon et fiche de rsultats). La dtermination de la teneur de CO2 devait tre
exprime en g/l.
OIV-MA-AS314-01 : R2006
Dioxyde de carbone
Analyse des donnes

1. La dtermination des valeurs aberrantes a t value par le test de Cochran, le
test de Grubbs unilatral et le test de Grubbs bilatral.
2. Une analyse statistique a t effectue pour obtenir les donnes de rptabilit
et reproductibilit
3. Les valeurs de HORRAT ont t calcules.
Participants
13 laboratoires appartenant plusieurs pays ont particip ltude collaborative.
On a attribu un code chaque laboratoire. Les laboratoires participants ont une
exprience reconnue dans lanalyse du CO2 dans les vins mousseux.
Tableau 2 : Liste des participants.
Landesuntersuchungsamt
D-56068 Koblenz (Coblence)
ALLEMAGNE
Institut fr Lebensmittelchemie und

Arzneimittelprfung
D-55129 Mainz (Mayence)
ALLEMAGNE
Institut fr Lebensmittel, Arzneimittel
D-67346 Speyer
und Tierseuchen
ALLEMAGNE
D-10557 BERLIN
ALLEMAGNE
Servicio Central de Viticultura y Enologia Landesuntersuchungsamt
E-08720 Villafranca Del Pendes
D-54295 Trier (Trves)
ESPAGNE
ALLEMAGNE
Instituto Agrario di S. Michele
D-85764 Oberschleiheim
I-38010 S. Michele all Adig
ALLEMAGNE
ITALIE
Chemisches Landes- u. Staatl.
Ispettorato Centrale Repressione Frodi
Veterinruntersuchungsamt
I-31015 Conegliano (Treviso)
D-48151 Mnster
ITALIE
ALLEMAGNE
Bundesamt fr Weinbau
BgVV
A-7000 Eisenstadt
D-14195 Berlin
AUTRICHE
ALLEMAGNE
Chemisches und
Veterinruntersuchungsamt
D-70736 Fellbach
ALLEMAGNE
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Dioxyde de carbone
9. Rsultats
Pour la dtermination du CO2 les valeurs dincertitude sont calcules directement
partir des rsultats soumis. Aux fins de lvaluation de ltude collaborative, le
calcul de la valeur Horrat est pertinent. Pour tous les chantillons on a obtenu une
valeur Horrat < 2 pour la reproductibilit et la rptabilit, ce qui est convaincant
pour une tude collaborative. Le Tableau 3 donne les rsultats du titrage de CO2
par chantillon.
Tableau 3 : Rsum des rsultats du titrage de CO2.

CO2
Moyenne[
ECHANT. A ECHANT. B ECHANT. C ECHANT. D ECHANT. E ECHANT. F

9,401
3,344
9,328
4,382
4,645
8,642
r [g/l]
0,626
0,180
0,560
0,407
0,365
0,327
sr [g/l]
0,224
0,064
0,200
0,145
0,130
0,117
RSDr %
2,379
1,921
2,145
3,314
2,803
1,352
Hor
0,893
0,617
0,804
1,109
0,946
0,501
R [g/l]
1,323
0,588
0,768
0,888
0,999
0,718
sR [g/l]
0,473
0,210
0,274
0,317
0,357
0,256
RSDR %
5,028
6,276
2,942
7,239
7,680
2,967
HoR
1,245
1,331
0,728
1,599
1,711
0,726
g/l]
OIV-MA-AS314-01 : R2006
Surpression
Mthode Type I
Methode de mesure de la surpression des vins effervescents

(Oeno 21/2003)
1. PRINCIPE
Aprs stabilisation thermique et agitation de la bouteille, la surpression est mesure
laide dun aphromtre (jauge de pression). Elle est exprime en Pascals (Pa)
(mthode de type I).
2. APPAREILLAGE
Lappareil permettant la mesure de la surpression dans les bouteilles de vins
mousseux et ptillants sappelle un aphromtre. Il se prsente diffremment suivant
le bouchage de la bouteille (capsule mtallique, couronne, bouchon lige ou
plastique).
2.1 Pour les bouteilles munies dune capsule
Il est constitu de trois parties (figure 1):
- La partie suprieure (ou vis porte-aiguille) est compose du manomtre, dune
bague de serrage manuel, dune vis sans fin qui coulisse dans la partie
moyenne, et dune aiguille qui traverse la capsule. Laiguille possde un trou
latral qui communique la pression au manomtre. Un joint assure ltanchit
de lensemble sur la capsule de la bouteille.
- La partie moyenne (ou crou) sert centrer la partie suprieure. Elle se visse
dans la partie infrieure de manire maintenir fortement lensemble sur la
bouteille.
- La partie infrieure (ou trier) est munie dun ergot qui se glisse sous la bague
de la bouteille, de manire retenir lensemble. Il existe des bagues adaptes
chaque type de bouteille.
OIV-MA-AS314-02 : R2003
Surpression
2.2 Pour les bouteilles munies dun bouchon

Il est constitu de deux parties (figure 2):
- La partie suprieure est identique lappareil prcdent ; toutefois, laiguille
est plus longue. Cette dernire est forme dun long tube creux au bout
duquel est place une pointe qui aidera traverser le bouchon. Cette pointe est
amovible, elle tombe dans le vin une fois le bouchon travers.
- la partie infrieure est forme par lcrou et dune base venant reposer sur le
bouchon. Celle-ci est munie de quatre vis de serrage servant maintenir
lensemble sur le bouchon.
Figure1
Aphromtre
pour capsules
Figure 2
Aphromtre
pour bouchons
Remarques concernant les manomtres quipant ces deux types dappareil :

- Ils peuvent tre soit mcaniques tube de Bourdon, soit numriques capteur
pizolectrique. Dans le premier cas, le tube de Bourdon sera obligatoirement
en acier inoxydable.
- Ils sont gradus en pascals (abrviation Pa). Pour les vins mousseux, il est plus
pratique dutiliser le 105 pascals (105 Pa) ou le kilopascal (kPa) comme unit.
- Ils peuvent tre de diffrentes classes. La classe d'un manomtre est la prcision
de la lecture par rapport la pleine chelle exprime en pourcentage (ex.
manomtre 1000 kPa classe 1, signifie pression d'utilisation maximale 1000
kPa, lecture 10 kPa). La classe 1 est recommande pour des mesures
prcises.
3. MODE OPERATOIRE
OIV-MA-AS314-02 : R2003
Surpression
La mesure doit seffectuer sur des bouteilles dont la temprature est stabilise
depuis au moins 24 heures.
Aprs avoir perc la couronne, le bouchon de lige ou de plastique, la bouteille doit
alors tre fortement agite jusqu' pression constante, pour effectuer la lecture.
3.1 Cas des bouteilles capsules
Glisser lergot de ltrier sous la bague de la bouteille. Visser lcrou jusqu ce
que lensemble soit serr sur la bouteille.
La partie suprieure est alors visse dans lcrou. Pour viter des pertes de gaz
le percement de la capsule doit seffectuer le plus rapidement possible, pour
amener le joint au contact de la capsule. La bouteille doit tre ensuite fortement
agite jusqu pression constante pour effectuer la lecture.
3.2 Cas des bouteilles bouches
Mettre une pointe en place au bout de laiguille. Positionner lensemble du
montage sur le bouchon. Serrer les quatre vis sur le bouchon.
Visser la partie suprieure (laiguille traverse alors le bouchon). La pointe doit
tomber dans la bouteille pour que la pression puisse se transmettre au
manomtre. Effectuer la lecture aprs agitation de la bouteille jusqu pression
constante. Rcuprer la pointe aprs lecture.
4. EXPRESSION DES RESULTATS
La surpression 20 C (Paph20) est exprime en pascals (Pa) ou en kilopascals
(kPa).
Elle doit tre en concordance avec la prcision du manomtre (par exemple: 6,3 105
Pa ou 630 kPa et non 6,33 105 Pa ou 633 kPa pour un manomtre 1000 kPa pleine
chelle, de classe 1).
Quand la temprature de mesure est diffrente de 20 C, il convient d'apporter une
correction en multipliant la pression mesure par le coefficient appropri (voir
tableau 1).
OIV-MA-AS314-02 : R2003
Surpression
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
1,85
1,80
1,74
1,68
1,64
1,59
1,54
1,50
1,45
1,40
1,36
1,32
1,28
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
1,24
1,20
1,16
1,13
1,09
1,06
1,03
1,00
0,97
0,95
0,93
0,91
0,88
TABLEAU 1 : Rapport de la surpression Paph20 d'un vin ptillant ou mousseux

20 C la surpression Papht une temprature t
5. CONTRLE DES RESULTATS

Mthode de dtermination directe de paramtres physiques (mthode critre de
type I)
Vrification des aphromtres

Les aphromtres doivent tre vrifis rgulirement (au moins une fois par an).
La vrification se fait l'aide d'un banc d'talonnage. Il permet de comparer le
manomtre tester un manomtre de rfrence, de classe suprieure, raccord
aux talons nationaux, mont en parallle. Le contrle est utilis pour
confronter les valeurs indiques par les deux appareils pour des pressions
croissantes puis dcroissantes. S'il y a une diffrence entre les deux, une vis de
rglage permet d'effectuer les corrections ncessaires.
Les laboratoires et les organismes autoriss sont tous quips de tels bancs
d'talonnage; ils sont galement disponibles auprs des constructeurs de
manomtres.
OIV-MA-AS314-02 : R2003

Rapport isotopique 13C/12C du CO2 dans les vins mousseux
Mthode Type II
Dtermination du rapport isotopique 13C/12C du CO2 dans les

vins mousseux - Mthode employant la spectromtrie de
masse de rapport isotopique (SMRI)
Avant-propos
La mthode standard dcrite ci-aprs a t labore avec le consentement de tous
les laboratoires participant ltude collective de lOIV : Analyses 13C-SMRI du
CO2 dans le vin mousseux (2003-2004).
Introduction
Le vide, dans une bouteille de vin mousseux, contient une phase gazeuse riche en
CO2, quilibre avec le CO2 dissous en phase liquide. Ce gaz volue durant la
seconde fermentation, sous leffet de lajout du sucre provenant de raisin, de
betterave, de canne sucre ou de mas. Mais la teneur en CO2 des vins mousseux
peut aussi tre augmente artificiellement au moyen de CO2 industriel.
En 1997, une mthode autonome de dtermination du rapport isotopique 13C/12C du
CO2 de vins mousseux par spectromtrie de masse des isotopes (SMRI) a t
prsente lOIV. Cette mthode a par la suite gnr de nouvelles procdures
fondes sur des techniques automatises en ligne, conues dans certains
laboratoires europens. Une de ces procdures a t prsente lOIV en 2001. Ces
prochaines annes, les progrs techniques pourraient fort bien conduire de
nouvelles procdures permettant de dterminer, de faon fiable et rapide, le rapport
isotopique 13C/12C de nombreux chantillons de CO2. Une description exhaustive
de toutes les procdures applicables aux diffrentes techniques risque de faire
tomber rapidement la mthode en dsutude. La mthode suivante tient compte de
ce fait : elle dcrit les principes de base pour une bonne mesure de la teneur en
carbone 13 du CO2 procdant de vin mousseux et fournit un bref aperu des
procdures utilises aujourdhui, accompagn dune description exhaustive, base
dexemples, des procdures fondes sur des techniques hors-ligne et en ligne.
1. Champ dapplication
Cette mthode dtermine, par la spectromtrie de masse des isotopes (SMRI), le
rapport isotopique stable du carbone (13C/12C) du CO2 dans les vins mousseux.
Cette mthode couvre une vaste gamme de procdures, dont lapplication est
fonction des instruments disponibles.
OIV-MA-AS314-03 : R2005

2. Rfrences normatives
ISO
5725-2:1994 Exactitude (justesse et fidlit) des rsultats et mthodes de

mesure. Partie 2 : mthode de base pour la dtermination de la rptabilit
et la reproductibilit dune mthode de mesure standard .
ISO
78-2:1999 Chimie Plans de normes. Partie 2 : mthodes danalyse

chimique .
3. Dfinitions
13
C/12C : Rapport des isotopes du carbone 13 et du carbone 12 pour un chantillon

donn.
13C :
Teneur en carbone 13 (13C) exprime en parties pour mille ().
V-PDB :
Vienna-Pee-Dee Belemnite. Le standard PDB est un carbonate de

calcium fossile de la Caroline du sud, aux tats-Unis dAmrique,
prsentant le rapport isotopique (13C/12C ou RPDB) = 0,0112372. Cette
valeur sert de point de rfrence lchelle PDB internationale commune
pour les valeurs 13C exprimes en parties pour mille ().
m/z :
Rapport masse sur charge.
Sr :
cart-type de rptabilit. cart-type observ dans les rsultats dessais

conduits sous des conditions de rptabilit (conditions permettant
dobtenir des rsultats dessais conduits indpendamment avec la mme
mthode partir dchantillons identiques, dans le mme laboratoire et
avec le mme oprateur utilisant le mme matriel de brefs intervalles
de temps).
r:
Limite de rptabilit. Valeur infrieure ou gale la diffrence absolue

entre deux rsultats dessais obtenus sous des conditions de rptabilit,
avec une probabilit de 95 % ; r=2,8Sr.
SR :
cart-type de reproductibilit. cart-type observ dans les rsultats

dessais conduits sous des conditions de reproductibilit (conditions
permettant dobtenir des rsultats dessais conduits avec la mme
mthode partir dchantillons identiques, dans des laboratoires
diffrents et avec des oprateurs diffrents utilisant un matriel diffrent).
R:
Limite de reproductibilit. Valeur infrieure ou gale la diffrence

absolue entre deux rsultats dessais obtenus sous des conditions de
reproductibilit, avec une probabilit de 95 % ; r=2,8SR.
OIV-MA-AS314-03 : R2005

4. Principe
Les plantes sont classes C3 ou C4 en fonction de litinraire suivi par la synthse
du sucre. Le sucre des plantes C3, telles le raisin et la betterave, prsente une
teneur en 13C infrieure celle du sucre de plantes comme la canne sucre et le
mas. Cette diffrence est prserve dans la teneur en 13C des produits de
fermentation de sucres, tels lthanol et le CO2. En outre, le CO2 industriel employ
dans lindustrie alimentaire, qui procde de la combustion de combustibles fossiles
ou du traitement thermique de carbonate, prsente une teneur en 13C diffrente de
celle des produits issus de plantes C3 et C4. En consquence, le rapport isotopique
13 12
C/ C du CO2 des vins mousseux est rgi par le type de sucre employ durant la
seconde fermentation (C3 ou C4) ou par la composition isotopique du CO2
industriel ajout.
Les tudes conduites ce jour sur la teneur en 13C du CO2 des vins mousseux ont
rvl que le CO2 obtenu par fermentation du sucre de plantes C3 prsentait une
13C de -17 -26 , alors que le CO2 obtenu par fermentation du sucre de
plantes C4 avait une 13C de lordre de -7 -10 . Les vins gazifis ont un
rapport isotopique 13C/12C infrieur -29 ou suprieur -10 , en fonction de
la source de bioxyde de carbone1-4. En consquence, la mesure du rapport
isotopique stable du carbone (13C/12C) de CO2 dans les vins mousseux peut
constituer une bonne mthode pour dtecter lorigine du gaz.
La teneur en 13C est dtermine partir du bioxyde de carbone obtenu dun vin
mousseux. Les diffrentes combinaisons possibles des isotopes 18O, 17O, 16O et 13C,
12
C gnrent le nombre de masse 44 correspondant lisotopomre 12C16O2, le
nombre de masse 45 correspondant aux espces 13C16O2 et 12C17O16O et le nombre
de masse 46 correspondant lisotopomre 12C16O18O (l3C17O16O et 12C17O2
peuvent tre ignors en raison de leur trs faible abondance). Les courants ioniques
correspondants sont dtermins sur les trois diffrents collecteurs. Le courant
ionique m/z 45 est corrig de la contribution de 12C17O16O, calcule en fonction de
lintensit du courant mesure pour m/z 46, en considrant les abondances relatives
de 18O et de 17O (correction de Craig). La comparaison avec une rfrence calibre
contre la rfrence internationale V-PDB autorise alors le calcul de la teneur en 13C
sur lchelle relative l3C .
5. Ractifs
Les matriaux et consommables sont fonction de lappareillage employ dans le
laboratoire.
OIV-MA-AS314-03 : R2005

Lorsque la sparation et la purification des chantillons de CO2 sont excutes par

cryopigeage dans une ligne de vide, les ractifs suivants sont employs :
- Azote liquide
- thanol
- CO2 solide
En gnral, les consommables suivants sont employs pour lanalyse avec un
systme flux continu (EA-SMRI ou GC-C-SMRI). Dautres matriaux de qualit
analogue peuvent remplacer lun ou lautre des produits recenss :
- Hlium pour analyse (CAS 07440-59-7).
- Oxygne pour analyse (CAS 07782-44-7).
- Bioxyde de carbone pour analyse, utilis comme gaz de rfrence
secondaire pour la teneur en carbone 13 (CAS 00124-38-9).
- Ractif doxydation pour le four du systme de combustion ex. :
oxyde de cuivre pour micro-analyse (CAS 1317-38-0).
- Desschant pour llimination de leau produite par la combustion
ex. : perchlorate de magnsium pour micro-analyse (CAS 10034-814). Inutile lorsque le systme EA-SMRI ou GC-C-SMRI limine leau
par cryopigeage.
- Colonne capillaire et membrane Naphion pour llimination de leau
produite par la combustion dans les systmes GC-C-SMRI.
Le gaz de rfrence employ dans les mesures peut tre un gaz certifi ou un gaz
de travail calibr par rapport aux rfrences internationales avec des valeurs delta
connues (gaz certifis ou matriaux de rfrence). Ci-aprs figure une liste de
quelques-uns des matriaux de rfrence internationaux pouvant tre employs
pour le rglage dtalons gazomtriques et le contrle des talons gazomtriques :
OIV-MA-AS314-03 : R2005

Code chantillon
Matriau
13CPDB
IMEP-8-A
ISO-TOP
CO2
CO2
-6,40
-25,7
Messer Griesheim
Messer Griesheim
BCR-656
BCR-657
thanol
Glucose
-20,91
-10,76
IRMM
IRMM
SAI-692C
CO2
-10,96
NBS-22
IAEA-CH-6 (ANU)
NBS-18
NBS-19
Huile
Sucrose
Calcite
Calcaire sec
-29,7
-10,4
-5,1
+1,95
FID-Mix
Varian
mlange
n-alcanes
C14
C15
C16
de
Oztech
Trading
Corporation (USA)
IAEA
IAEA
IAEA
IAEA
dans
de
lisooctanol
-29,61
-25,51
-33,39
6. Appareillage
Lappareillage de laboratoire pour la mesure du rapport isotopique du carbone
consiste gnralement en ce qui suit :
Spectromtre de masse de rapport isotopique (SMRI), capable de dterminer la
teneur en 13C du CO2 en abondance naturelle, un degr de prcision interne
dau moins 0,05 (exprim en valeur relative ). La prcision interne se
dfinit ici comme tant la diffrence entre deux mesures du mme chantillon
de CO2.
Le spectromtre de masse est gnralement quip dun triple collecteur
permettant de mesurer simultanment les intensits de courant de m/z 44, 45 et
46. Le spectromtre de masse doit en outre, soit tre quip dun systme
dintroduction double, autorisant la mesure en alternance de lchantillon
inconnu et dun chantillon de rfrence, soit appliquer une technique flux
continu (CF-SMRI).
Systmes flux continu (CF-SMRI). Des systmes flux continu appliquant un
systme automatis dchantillonnage de gaz peuvent tre employs. Ci-dessous
figure une liste de quelques techniques CF-SMRI adaptes la prsente
mthode et disponibles dans le commerce :
OIV-MA-AS314-03 : R2005

GC-C-SMRI (Chromatographie en phase gazeuse combustion

SMRI).
EA-SMRI (Analyseur lmentaire quip pour les injections liquides

ou solides).
Ces systmes sparent et purifient le CO2, puis luent le bioxyde de carbone

vers la chambre dionisation du spectromtre.
Ligne de vide en verre ou en acier, avec des cryopiges, relie une pompe
capable datteindre une pression infrieure 5,10-3 mbar.
Dispositifs dchantillonnage de gaz, disponibles dans le commerce (ex. :
seringue pour chantillons gazeux) ou conus en interne, capables dextraire
une aliquote de CO2 dun vin mousseux sans fractionnement isotopique.
Flacons scells pour les chantillons gazeux, adapts au passeur automatique
dchantillons vers les systmes flux continu.
Flacons scells pour les aliquotes de vin mousseux, adapts la ligne de vide
et/ou au passeur automatique dchantillons vers les systmes flux continu.
7. Procdure
La mthode propose compte trois tapes : chantillonnage du CO2, purification et
sparation du CO2 et mesure du rapport 13C/12C. Ces tapes peuvent tre totalement
indpendantes (systme autonome) ou intgralement ou partiellement
interconnectes (systme continu). Toute procdure permettant dviter le
fractionnement isotopique de lchantillon de CO2 durant les trois tapes de la
mthode pourra tre applique. Des informations complmentaires sur les
procdures fondes sur des systmes autonomes et continus sont fournies aux
Annexes A, B et C.
La description ci-aprs renvoie aux procdures appliques par les laboratoires
participant lessai inter-laboratoires.
7.1. Procdures dchantillonnage de CO2
a. chantillonnage du CO2 temprature ambiante dans le vide de la
bouteille, par insertion dun dispositif spcial travers le bouchon.
b. chantillonnage du CO2 dans le vide de la bouteille aprs extraction du
bouchon et tanchification de la bouteille au moyen dun mcanisme de
fermeture de prcision, impermable au gaz, reli au dispositif
dchantillonnage. La bouteille de vin mousseux doit tre refroidie en-de
de 0 C avant linstallation du mcanisme de fermeture, puis rchauffe
OIV-MA-AS314-03 : R2005

temprature ambiante . Une aliquote de gaz collecte dans le dispositif

dchantillonnage est prleve au moyen dune seringue tanche au gaz et
injecte dans un flacon CG scell.
c. chantillonnage du CO2 dans une aliquote de vin mousseux. La bouteille
de vin mousseux doit tre refroidie 4-5 C avant lextraction du
bouchon. Les aliquotes de vin sont disposes dans une bouteille spciale,
adapte la ligne de vide en verre ou au passeur automatique
dchantillons.
7.2. Procdures de purification et de sparation du CO2
a. Les gaz non condenss et leau prsents dans lchantillon gazeux sont
limins dans une ligne de vide au moyen de cryopiges.
b. Les chantillons gazeux sont purifis et le CO2 est spar par diffrents
systmes continus relis au SMRI au moyen dun systme flux continu
ou dun cryopige. Les systmes continus pouvant tre utiliss sont, entre
autres, les suivants :
- cryopige eau autonome, reli un systme flux continu,
- pige eau (perchlorate de
chromatographe en phase gazeuse,
magnsium),
suivi
dun
- chromatographe en phase gazeuse, reli directement ou

indirectement au SMRI ou via une interface de combustion.
7.3. Mesure du ratio 13C/12C
Le rapport isotopique du carbone du CO2 obtenu dans du vin se mesure au
moyen dun spectromtre de masse des rapports isotopiques.
8. Calcul
Rapport isotopique 13C/12C du CO2 dans du vin mousseux exprim par dviation
partir d'un talon de travail (13C) pralablement talonn par rapport la rfrence
internationale PDB (Pee Dee Belemnite). Ce paramtre est dfini comme tant la
diffrence relative pour mille entre les rapports 13C et 12C dun chantillon par
rapport la rfrence PDB. La rfrence PDB consiste en un carbonate de calcium
fossile de la Caroline du sud, aux tats-Unis, prsentant un rapport isotopique
(RPDB) = 0,0112372. Cette valeur sert de point de rfrence lchelle PDB
internationale commune pour les valeurs 13C exprimes en parties pour mille ().
Les valeurs 13C exprimes par rapport l'talon de travail sont calcules au moyen
de lquation suivante :
13Cch/rf () = 1 000 x (Rch R rf) / Rrf
OIV-MA-AS314-03 : R2005

o
Rch
est le rapport isotopique 13C/12C de la prise dessai ;
Rrf
est le rapport isotopique 13C/12C de l'talon de travail.
Les valeurs 13C exprimes par rapport la rfrence PDB sont calcules au moyen
de lquation suivante :
13Cch/V-PDB () = ch/rf + 13Crf/V-PDB + (13Cch/rf x 13Crf/V-PDB ) / 1000
o
13Crf/V-PDB
est la dviation isotopique de l'talon de travail

pralablement dtermin contre le PDB, exprime en
parties pour mille ().
Les rsultats sont exprims avec deux dcimales.
9. Prcision
Lessai inter-laboratoires sur la prcision de la mthode est spcifi lAnnexe D.
9.1. Rptabilit
La diffrence absolue entre deux rsultats individuels obtenus sur un mme
chantillon dessai par un oprateur utilisant le mme appareil dans le plus bref
intervalle de temps possible excdera la limite de rptabilit r dans 5 % des cas au
maximum.
Les valeurs moyennes admises pour lcart type de la limite de rptabilit (Sr) et
de rptabilit (r) sont gales :
Sr = 0,21
r = 0,58
9.2. Reproductibilit
La diffrence absolue entre deux rsultats individuels obtenus sur un mme
chantillon dessai par deux laboratoires excdera la limite de reproductibilit R
dans 5 % des cas au maximum.
Les valeurs moyennes admises pour lcart type de la limite de reproductibilit (SR)
et de reproductibilit (R) sont gales :
OIV-MA-AS314-03 : R2005

SR = 0,47
R = 1,33
10. Procs-verbal dessai
Le procs-verbal dessai doit spcifier les donnes suivantes :
- toutes les informations ncessaires lidentification de lchantillon
test
- mention de la Mthode standard internationale
- la mthode employe, avec mention de la procdure dchantillonnage
et de mesurage et recensement des instruments employs
- les rsultats de lessai et les units, avec les rsultats des
dterminations individuelles et leur moyenne, calculs comme indiqu
la Section 8 ( Calcul )
- toute variance par rapport la procdure spcifie
- toute caractristique inhabituelle observe durant lessai
- la date de lessai
- si la rptabilit a t vrifie
- une description de la procdure de calibrage du gaz de rfrence
applique pour la mesure des prises dessai.
Annexes (A,B,C,D)
11. Bibliographie
1. Mesure du rapport isotopique 13C/12C du gaz carbonique des vins mousseux et
des vins gazifis , J. Merin et S. Mnguez. Office International de la Vigne et
du Vin. Paris. F.V. 1039, 2426/200297 (1997).
2. Examination of the 13C/12C isotopes in sparkling and semi-sparkling wine with
the aid of simple on-line sampling , M. Boner et H. Frstel. Office
International de la Vigne et du Vin. Paris. F.V. 1152. (2001).
3. Use of 13C/12C ratios for studying the origin of CO2 in sparkling wine ,
J.Dunbar. Fresenius Z. Anal. Chem., 311, 578-580 (1982).
OIV-MA-AS314-03 : R2005

4. Contribution to the study of the origin of CO2 in sparkling wines by

determination of the 13C/12C isotope ratio , I. Gonzlez-Martin, C. GonzlezPrez et E. Marqus-Macas. J. Agric. Food Chem. 45, 1149-1151 (1997).
5. Protocol for Design, Conduct and Interpretation of Method-Performance
studies . Pure Appl. Chem., 1995, 67, 331-343.
OIV-MA-AS314-03 : R2005
10

ANNEXE A
Procdure exprimentale fonde sur des systmes autonomes pour

lchantillonnage et le mesurage
(dispositif dchantillonnage conu en interne, ligne de vide autonome
et SMRI double systme dentre)
1.
Matriel
Dispositif dchantillonnage. Le dispositif employ pour extraire les
aliquotes gazeuses de la bouteille consiste en une pince (aiguille dacier)
dote de trois orifices latraux, par lesquels pntre le gaz. Il est reli un
systme de clapets compos de deux clapets relis en squence, dune
capacit denviron 1 mL. Un clapet est fix la pince (Clapet 1) et lautre
un tube dacier (Clapet 2), qui relie le dispositif une ligne de vide. Si la
ligne de vide est en verre, un adaptateur tube dacier flexible doit tre
install. Le Schma ci-aprs reprsente le dispositif de captation des gaz.
Ligne de vide autonome avec deux cryopiges (P < 0,05 mbar). Deux types
de ligne de vide peuvent tre employs : verre ou acier.
Spectromtre de masse des rapports isotopiques double systme dentre,
capable de dterminer la teneur en 13C du CO2 en abondance naturelle, un
degr de prcision interne dau moins 0,05 (exprim en valeur relative
). La prcision interne se dfinit ici comme tant la diffrence entre deux
mesures du mme chantillon de CO2.
Procdure (voir le Schma)
2.
2.1.
chantillonnage du CO2
1.
Relier le dispositif dchantillonnage la ligne de vide et tester sa capacit

dtanchit.
2.
Insrer le dispositif dchantillonnage avec les clapets ferms dans le

bouchon en effectuant un mouvement circulaire tout en maintenant le
dispositif la verticale.
3.
Relier lensemble dispositif dchantillonnagebouteille de vin la ligne

de vide et vidanger la ligne et le rservoir dlimits par les deux clapets
(Clapet 2 ouvert, Clapet 1 ferm).
4.
Une fois que le vide est cr dans le rservoir, fermer le clapet 2, ouvrir le
OIV-MA-AS314-03 : R2005
11

clapet 1 et maintenir cette configuration pendant 1 minute. Aprs le temps

dquilibre, fermer le clapet 1. Le gaz enferm dans le rservoir est alors
purifi.
2.2.
Purification et sparation du CO2
1.
Transfrer le CO2 collect dans le rservoir vers le premier cryopige avec

de lazote liquide pendant au moins 1 minute, puis pomper le gaz non
condens jusqu obtention dune pression infrieure 0,05 mbar.
2.
Transfrer lchantillon de CO2 vers le dispositif de mesurage en

employant de lazote liquide dans le second cryopige et en changeant
lazote liquide dans le premier cryopige contre un pige eau de 80 5
C. Maintenir cette configuration pendant au moins 1 minute.
3.
Pomper le gaz non condens (jusqu obtention dune pression infrieure

0,05 mbar) avant de fermer le dispositif de mesurage.
2.3.
Mesure du rapport 13C/12C

Le rapport isotopique du carbone du CO2 obtenu se mesure au moyen dun
SMRI double systme dentre.
3.
Rfrence
Mesure du rapport isotopique 13C/12C du gaz carbonique des vins mousseux et

des vins gazifis , J. Mern et S. Mnguez. Office International de la Vigne et du
Vin, F.V. 1039, 2426/200297.
OIV-MA-AS314-03 : R2005
12
OIV-MA-AS314-03 : R2005
Orifices
Clapet 1
Clapet 2
Aiguille dacier
Rservoir de CO2
Connecteur
la ligne de
vide
Dispositif dchantillonnage de gaz
1er cryopige
Dispositif de
mesurage
Ligne de vide
2me cryopige
Vers la pompe
chantillonnage de gaz et purification du CO2
Diagramme du systme autonome
ANNEXE A

13

ANNEXE B
Procdure exprimentale fonde sur des systmes continus pour
lchantillonnage et le mesurage (CF-SMRI)
1. CHANTILLONNAGE TECHNIQUE
En premier lieu, le systme dchantillonnage est vidang, le bioxyde de carbone
est extrait de la bouteille au moyen dun dispositif dchantillonnage et une
quantit spcifique est transfre vers la cuve de stockage. Aprs application dune
surpression, une petite quantit de gaz est introduite dans le flux continu dhlium
au moyen dun restricteur. Le systme dchantillonnage est reprsent au Schma
2.
Un flux continu de dioxyde de carbone est maintenant prsent dans le flux
dhlium (flux dchantillonnage). Le flux rsiduel dhlium est exempt de dioxyde
de carbone et fait fonction de dbit nul. Des pics de commutation artificiels
sont gnrs par commutation provisoire entre le dbit nul et le flux
dchantillonnage (temps de commutation : 2 secondes), dont les rapports
isotopiques sont mesurs par le spectromtre de masse.
2. Procdure (voir Schma)
2.1. Vidange du systme dchantillonnage
Le systme dchantillonnage est intgralement vidang jusqu obtention
dune pression ngative de 1 mbar (V3 ferm).
2.2. chantillonnage
Le bouchon est transperc par un dispositif dchantillonnage et
latmosphre de la bouteille est transfre vers la cuve de stockage de gaz (GV)
par pression ngative (hausse de pression aprs 50 mbars environ). Le clapet de
rglage fin (VF) autorise lcoulement matris et lent du gaz. Le gaz est
purifi dans le cryopige lissue du transfert.
2.3. Alimentation
Aprs lchantillonnage (V3 et V2 ferms, V4 ouvert), une surpression de 1,5
bar est constitue laide dhlium. Le gaz mesurer est conduit au CF-SMRI
par louverture de V3. Le mesurage peut tre effectu aprs une premire mise
en condition de 150 secondes. Un capillaire est intgr comme restricteur,
nautorisant le passage que dune trs faible quantit de gaz porteur
(10 mL/mn).
2.4. Mesurage
OIV-MA-AS314-03 : R2005
14

Un flux continu de bioxyde de carbone est maintenant prsent dans le flux

dchantillonnage dhlium (PRO). La commutation entre le flux
dchantillonnage (PRO) le flux dhlium pur (NUL) permet de gnrer des
pics de commutation artificiels.
Commutation sur le flux dchantillonnage : 2 secondes
(dbit nul : 10-30 secondes).
3. Rfrence
Examination of the 13C/12C isotopes in sparkling and semi-sparkling wine with
the aid of simple on-line sampling , M. Boner et H. Frstel. Office International
de la Vigne et du Vin, FV 1152.
OIV-MA-AS314-03 : R2005
15

ANNEXE B
Diagramme du systme continu
V1
VP
VF
Hlium
V2
V4
GV
V3
SK
DM
KF
Bottle of
sparkling wine
KA
PRO
NUL
VM
Spectromtre de masse
V1-V4
VP
VF
SK
PRO
NUL
KF
GV
DM
KA
VM
clapet de non retour

pompe vide
clapet de rglage fin
dispositif dchantillonnage
flux dchantillonnage dhlium (50 ml/min)
flux dhlium (dbit nul) (60 ml/min)
propan-1-ol du pige eau 90C
cuve de stockage de gaz 250 ml
manomtre
capillaire restricteur (10 cm, 150 m)
clapet 2/4 voies
OIV-MA-AS314-03 : R2005
16

ANNEXE C
Procdure exprimentale fonde sur la technique GC-C-SMRI
1. Caractristiques des instruments
Chromatographe en phase gazeuse : GC Varian 3400.
Colonne capillaire : HP-INNOWax (glycol polythylnique rticul), 30 m x
0,25 mm ID, paisseur du film : 0,5 m.
Interface de combustion ThermoFinnigan-MAT, avec four oxydation rgl
940 C ou larrt ; four de rduction 640 C ou larrt.
Spectromtre de masse : DeltaPlus ThermoFinnigan-MAT.
2. Procdure
2.1. chantillonnage du CO2
1.
Des aliquotes de gaz ont t collectes au moyen dune seringue de 25 cm3,

avec insertion dune longue aiguille dacier au travers du bouchon. La
pression du CO2 a spontanment rempli la seringue avec le gaz du vide de
la bouteille.
2.
Le gaz est transfr dans des flacons pr-obturs aux fins de lanalyse. Les
flacons employs pour stocker le gaz sont pralablement obturs au moyen
de capsules septum de Tflon-silicone. Pour vacuer lair situ
lintrieur et ainsi le CO2 atmosphrique , une seconde aiguille est
plante dans le septum, de manire garantir que le gaz du vide de la
bouteille pousse bien lair dans le flacon. Voir le schma ci-dessous.
REMARQUE : une seringue de plus grande capacit est employe, en fonction du

volume du flacon, pour garantir une parfaite propret du flacon. Dans le cas prsent,
une seringue de 25 cm3 (ou de capacit plus grande) est employe avec un flacon de
2 ml.
OIV-MA-AS314-03 : R2005
17
Air aspir depuis le flacon

Gaz du vide de la
bouteille,
contenant
le CO2 injecter
* Attention : le format du flacon nest pas chelle

avec celui de la seringue .
2.2. Analyses GC-SMRI : injection du CO2 et mesure du rapport 13C/12C

Une trs faible quantit l de gaz a t directement injecte dans la colonne au
moyen dune seringue Hamilton de 10 l aiguille en acier cment. Des
conditions de ddoublement de haut dbit taient dfinies. Lhlium porteur tait
20 PSI.
Quatre injections ont t effectues lors de chaque mise en condition de chacun des
chantillons. Le temps total dexcution pour lanalyse a t de 6 minutes. Voir le
chromatogramme ci-dessous.
OIV-MA-AS314-03 : R2005
18

2.3. Traitement des rsultats

Le logiciel employ pour lenregistrement et la confection des signaux du
spectromtre de masse est la version 1.50 dIsodat NT, de ThermoFinniganBremen, sous le systme dexploitation MS-Windows NT.
Pour chaque chantillon, la valeur 13C moyenne est calcule comme tant la
valeur moyenne des 3 dernires injections. La valeur 13C de la premire injection
est systmatiquement rejete.
OIV-MA-AS314-03 : R2005
19

ANNEXE D
( titre dinformation)
Rsultats statistiques de lessai inter-laboratoires essais de champagne
comemcial supprimer 2 ;2
Conformment ISO 5725:1994, les paramtres suivants ont t dfinis dans le
cadre dun essai inter-laboratoires conduit par 11 laboratoires europens et 1
laboratoire mexicain.
Anne de lessai inter-laboratoires
Nombre dchantillons
Paramtre 13C de CO2
2003-2004
12
5, en double aveugle
Identification de lchantillon
12
12
12
12
12
Nombre de laboratoires retenus aprs liminat

des rsultats aberrants
12
11
12
12
12
Nombre dexpriences menes en parallle par

laboratoire
24
22
24
24
24
Moyenne (13C)
-9,92
-20,84
23,66 34,80 36,43
sr2
0,057
0,031
0,119 0,006 0,044
cart-type de rptabilit (Sr)
0,24
0,18
0,35
0,08
0,21
Valeur de rptabilit, r (2,8 x Sr)
0,67
0,49
0,97
0,21
0,58
SR2
0,284
0,301
0,256 0,140 0,172
cart-type de reproductibilit (SR)
0,53
0,55
0,51
0,37
0,41
Valeur de reproductibilit, R (2,8 x SR)
1,49
1,54
1,42
1,05
1,16
Types dchantillons : A
B
C
D
E
Vin mousseux Sucre C4

Vin gazifi
Vin gazifi
OIV-MA-AS314-03 : R2005
20

Dioxyde de Carbone - Manomtrique
Mthode Type II
Dosage du dioxyde de carbone dans le vin

par methode manometrique
pour une chelle de concentration allant de 0,5 g/l 7 g/
1. PRINCIPE
Le dioxyde de carbone de l'chantillon est fix par de la soude 10M. Il est ensuite
libr par de l'acide sulfurique dans une fiole vide connecte un manomtre.
L'augmentation de pression qui en rsulte permet de calculer la quantit de
dioxyde carbone contenu dans l'chantillon.
2. REACTIFS
2.1. Eau frachement distille ou dsionise ;
2.2. Hydroxyde de sodium (puret >98%) ;
2.3. Acide sulfurique (puret >95-97%) ;
2.4. Carbonate de sodium anhydre ( puret >99%).
Prparation des solutions ractives
2.5. Hydroxyde de sodium 10 M : Dissoudre 100 g d'hydroxyde de sodium
(2.2) dans 200 ml d'eau (2.1) et ajuster 250 ml dans une fiole jauge.
2.6. Acide sulfurique environ 50 % (v/v) : Ajouter avec prcaution, de
l'acide sulfurique (2.3) un volume gal d'eau (2.1). Bien mlanger par agitation.
Laisser refroidir jusqu' temprature ambiante.
2.7. Mlange talon de dioxyde de carbone 10 g/l : scher le carbonate de
sodium une nuit (2.4) dans un four 260-270C, laisser revenir temprature
ambiante dans un dessiccateur. Dissoudre 6,02 0, 01 g de carbonate de sodium
sch dans de l'eau (2.1) et ajuster 250 ml dans une fiole jauge.
2.8. Mlanges talons de dioxyde de carbone 0,4 ; 1 ; 2 ; 4 and 6 g/l :
l'aide de pipettes verser 2, 5, 10, 20 et 30 ml de la solution talon (2.7) dans des
fioles jauges de 50 ml et ajuster avec de l'eau (2.1).
3. APPAREILLAGE
3.1. Fioles jauges de 250 ml et 50 ml ;
3.2. Four ;
3.3. Dessiccateur ;
OIV-MA-AS314-04 : R2006

3.4. Balance d'une exactitude de 0.1 mg ;

3.5. Rfrigrateur ou bain rfrigrant - 4oC ;
3.6. Densimtre lectronique (ou pycnomtre) et bain thermostat 20
C;
3.7. Pipettes de 0,5, 2, 3, 5, 10, 20 et 30 ml ;
3.8. flacons cniques de 100 ml, large ouverture ;
3.9. Manomtre numrique (permettant de mesurer des carts de pression
de l'ordre de 200 kPa avec une exactitude de 0,1 kPa) ;
3.10. Fiole vide de 25 ml quip d'un flacon de raction de 3 ml et
d'une vanne trois voies (voir la figure 1) ;
3.11. Gnrateur de vide (par exemple une trompe eau).
3.12 Ampoule dcanter
4. MODE OPERATOIRE
4.1. Prparation de l'chantillon
Prparer les chantillons en double. Refroidir l'chantillon en le laissant une nuit
dans un rfrigrateur ou 40 minutes dans un bain rfrigrant 4C (3.5). Verser
3 ml dhydroxyde de sodium 10M (2.5) dans un flacon cnique de 100 ml (3.8).
Peser le flacon et son contenu 0,1 mg prs. Verser approximativement 75 ml de
l'chantillon refroidi dans le flacon cnique contenant lhydroxyde de sodium.
Peser 0,1 mg prs. Mlanger et laisser revenir temprature ambiante.
4.2. Dosage du dioxyde de carbone contenu par mthode manomtrique
Transfrer 2 ml de l'chantillon prpar (4.1) dans la fiole vide (3.10). La
connecter au manomtre (3.9) via la vanne trois voies en position ouverte. A
l'aide d'une pipette (3.7) dposer 0,5 ml d'acide sulfurique 50 % (2.6) dans le
flacon de raction. Le raccorder la fiole vide. Fixer et scuriser l'ensemble
l'aide de clips. Noter la pression. Fermer la vanne trois voies. Mlanger l'acide et
l'chantillon en inclinant l'ensemble et en le secouant vigoureusement. Noter la
pression. L'chantillon peut tre dilu si ncessaire.
OIV-MA-AS314-04 : R2006

environ
environ
Fig. 1. Appareillage. A manomtre, B tuyau en caoutchouc, C valve trois

voies, D ballon raction (gauche) et caractristiques approximatifs de la
verrerie (centre et droite)
OIV-MA-AS314-04 : R2006

4.3. Etalonnage
Evaluer le contenu de dioxyde de carbone dans les solutions dtalonnage (4.2).
Dterminer trois solutions dtalonnage qui encadrent la valeur de l'chantillon.
Ces points d'talonnage sont rpts deux fois.
4.4. Mesure de la densit de l'chantillon.
Enlever le contenu de dioxyde de carbone des solutions dtalonnage par
agitation dans une ampoule dcanter puis sous un vide gnr par une trompe
eau pendant trois minutes. Mesurer la masse volumique l'aide dun densimtre
lectronique ou dun pycnomtre.
5. CALCUL
Calculer l'augmentation de pression due au dioxyde carbone libr par chaque
solution talon et tracer le graphique.
Calculer la pente (a) et l'ordonne l'origine (b).
Le volume V de l'chantillon est donn par la formule :
V = [(m2-m1) x 1000]/d
(1)
o
m1 (g)= poids de (fiole vide + 3 ml NaOH) ;
m2 (g) = poids de (fiole vide + 3 ml NaOH + chantillon) ;
d (kg/m3) = masse volumique de l'chantillon.
L'augmentation de pression pi provoque par le dioxyde de carbone libr de
l'chantillon est donne par la formule:
pi = ps - pap
(2)
o
ps = lecture de la pression aprs action de dioxyde de carbone de lchantillon
pap = lecture de la pression avant addition de H2SO4 (par exemple la pression
atmosphrique)
OIV-MA-AS314-04 : R2006

La concentration (C) du dioxyde de carbone dans l'chantillon (en g/L) est

donne par :
C = [( pi - b) / a] x [(V + 3)/V] x L
(3)
o
pi = augmentation de pression (quation 2)
a = pente de la droite d'talonnage
b = ordonne l'origine de la droite d'talonnage
V = volume d'chantillon (quation 1)
L = facteur de dilution en cas de dilution de l'chantillon
La teneur en % de masse de dioxyde de carbone est donne par :

CO2 % (m/m) = C x 100/d
(4)
Exemple de calcul de la teneur en dioxyde carbone :
Etalonnage
Conc de l'talon
g/l
pression
initiale
2
2
4
4
6
6
mbar
1021
1021
1021
1021
1021
1021
pente
ordonne l'or.
correlation
18.25000
7.50000
0.99995
pression
finale
mbar
1065
1065
1101
1102
1138
1138
augmentation
de pression
mbar
44
44
80
81
117
117
CO2 talonnage
140
120
100
m
b
a
r
80
60
40
20
0
0
OIV-MA-AS314-04 : R2006
g/l

Echantillon
vin
mousseux 1
vin
mousseux 1
vin
mousseux 2
vin
mousseux 2
Poids
pressi Pressio
masse
poids
(fiole +
on
volumiq
n
(fiole +
soude initiale finale
ue d
soude)
+chant.
pap
(en
ps
m1 (g)
3
) m1 ( g) (mbar) (mbar)
kg/m )
1027,2
1027,2
1025,3
1025,3
84,628
7
84,628
7
86,106
6
86,106
6
156,162
0
156,162
0
153,440
7
153,440
7
volume
de
CO2
ps - l'chantill
(
on
pap
g/L)
(2) V ( mL) (3)
(1)
1021
1112
91
69,64
4,77
1021
1113
92
69,64
4,83
1021
1118
97
65,67
5,13
1021
1118
97
65,67
5,13
valeur
moyen
ne de
CO2
(g/L)
4,80
5,13
6. VALIDATION
6.1 Performances de la mthode
- Ecart type moyen estim d'aprs les rptitions, so = 0,07 g/l

- Ecart-type relatif, RSD = 1,9%
- Rptabilit, r = 5,6 %
- Incertitude largie (k=2), U = 3,8%
- Gamme dtalonnage 0,4-6 g/L
- Gamme de dtermination 0,3 -12 g/L (chantillons avec concentration au
dessus de 6 g/L diluer 1 :2 avec leau conformment la gamme de
calibration
- Limite de dtection 0,14 g/L
- Limite de quantification 0,48 g/L
OIV-MA-AS314-04 : R2006

Annexe A
Rfrence
European Brewery Convention Analytica-EBC, Fourth edition, 1987, 9.15 Carbon

dioxide.
Ali-Mattila E et Lehtonen P.(2002), OIV, FV 1153.
OIV, SCMA 2002, FV N 1153, determination of carbon dioxide in alcoholic
beverages by a modified EBC method
OIV, SCMA 2004, FV N 1192, determination of carbon dioxide in alcoholic
Beverages by a modified EBC method, Statistical results of the collaborative study
OIV, SCMA 2005, FV N 1222, comparison of the titrimetric method and the
modified EBC method for the determination of carbon dioxide in alcoholic
beverages
Ali-Mattila, E. and Lehtonen, P., Determination of carbon dioxide in alcoholic
beverages by a modified EBC method, Mitteilungen Klosterneuburg 52 (2002):
233-236
OIV-MA-AS314-04 : R2006

Annexe B
Rsultats statistiques de l'tude collaborative
DTERMINATION DE LA TENEUR EN DIOXYDE DE CARBONE DES
BOISSONS ALCOOLISES SELON UNE MTHODE EBC MODIFIE
1. But de l'tude
L'tude avait pour objectif de dterminer la rptabilit et la reproductibilit de la
mthode EBC modifie de dtermination de la teneur en dioxyde de carbone des
vins, vins mousseux, cidres et bires.
2. Besoins et finalit de l'tude

La fermentation produit du dioxyde de carbone dans les boissons alcoolises. Dans
la production de vins mousseux, le dioxyde de carbone est l'un des produits les plus
essentiels et peut galement tre ajout certaines boissons alcoolises. Le dioxyde
de carbone modifie le got et l'arme et est un agent de conservation des boissons
alcoolises.
Conformment aux dfinitions du Code international des pratiques nologiques,
les vins mousseux devront prsenter une surpression minimale de 3 bars, due au
dioxyde de carbone en solution, lorsqu'ils sont conservs la temprature de 20C
dans des rcipients ferms. De mme les vins ptillants devront prsenter une
surpression minimale de 1 bar et maximale de 2,5 bars. Des surpressions de 3 bars,
2,5 bars et 1 bar correspondent respectivement 20C environ 5,83 g/L, 5,17 g/L
et 3,08 g/L de dioxyde de carbone en solution.
A l'heure actuelle, il n'existe aucune mthode pratique et fiable permettant de doser
le dioxyde de carbone dans les boissons alcoolises. La grande variabilit des
teneurs dioxyde de carbone obtenues lors d'essais d'aptitude internationaux indique
clairement la ncessit de disposer d'une mthode fiable.
3. Porte et applicabilit
La mthode propose est quantitative et applicable la dtermination de la teneur
en dioxyde de carbone des boissons alcoolises. Cette mthode a t valide dans
le cadre d'une tude collaborative de dtermination de la teneur en dioxyde de
carbone de vins, bires, cidres et vins mousseux au moyen d'analyses pratiques
des niveaux compris approximativement entre 0,4 g/L et 12 g/L (Remarque : le
niveau d'talonnage actuel est compris entre 0,4 g/L et 6 g/L. Les chantillons
OIV-MA-AS314-04 : R2006

doivent tre dilus avec de l'eau jusqu' ce niveau, lorsque la teneur en dioxyde de
carbone est suprieure 6 g/L).
4. Matriaux et matrices
L'tude collaborative a port sur 6 chantillons diffrents. Tous les chantillons,
l'exception des chantillons de bire, ont t envoys en double aveugle, ce qui fait
qu'au total 12 bouteilles ont t distribues aux participants : deux de bire, deux de
cidre, deux de vin rouge, deux de vin blanc, deux de vin ptillant et deux de vin
mousseux. Chaque bouteille a reu un code individuel pour chaque participant.
Tous les chantillons ont t prsents dans leurs bouteilles d'origine, et les
tiquettes ont t enleves sur tous les chantillons l'exception des chantillons de
vin mousseux. La mesure de la quantit de dioxyde de carbone dans 10 bouteilles
du mme lot a permis d'valuer l'homognit des chantillons.
5. chantillons d'apprentissage
Quatre chantillons tmoins ont t remis aux participants pour quils se
familiarisent avec la mthode. Ces chantillons comprenaient un chantillon de
bire, un de vin, un de vin ptillant et un de vin mousseux.
6. Mode opratoire et documents de support

Le mode opratoire et un tableau Excel pour le calcul des rsultats ont t remis
aux participants.
Des documents de support ont galement t fournis, parmi lesquels la lettre
d'accompagnement, un formulaire de prise en charge d'chantillons et des fiches de
rsultat.
7. Analyse des donnes

7.1. La dtermination des valeurs aberrantes a t value en utilisant les tests de
Cochran et de Grubbs ainsi que le test de Grubbs bilatral.
7.2. Une analyse statistique a t effectue pour obtenir les donnes de rptabilit
et de reproductibilit.
8. Participants
Neuf laboratoires de diffrents pays ont particip l'tude collaborative. Des codes
ont t attribus ces laboratoires. Les laboratoires participants avaient une
exprience tablie en matire d'analyse de boissons alcoolises.
OIV-MA-AS314-04 : R2006

Alcohol Control Laboratory

Alko Inc.
P.O.Box 279
FIN-01301 Vantaa
Finlande
Altia Ltd
Valta-akseli
Rajamki
Finlande
Arcus AS
Haslevangen 16
P.O.Box 6764 Rodelkka
0503 Oslo
Norvge
ARETO Ltd
Mere pst 8a
10111 Tallinn
Estonie
Bundesamt fr Weinbau
Comit Interprofessionnel du Vin de

Champagne
5, rue Henri MARTIN
BP 135
51204 EPERNAY CEDEX
France
Glbeszeile 1
A-7000 Eisenstadt
Autriche
High-Tec Foods Ltd
Institut fr Radioagronomie
Forschungszentrum
Jlich GMBH
Postfach 1913
52425 JLICH
Allemagne
Ruomelantie 12 B
02210 Espoo
Finlande
Systembolagets laboratorioum
Armaturvgen 4,
S-136 50 HANINGE
Sude
9. Rsultats
L'homognit des chantillons a t dtermine par l' Alcohol Control
Laboratory (Finlande), en mesurant la teneur en dioxyde de carbone de 10
bouteilles du mme lot. Des chantillons portant les numros de lots
correspondants ont t envoys aux participants :
CO2
Vin
Vin
Vin
Vin
g/L
Bire 1
Bire 2
Cidre
blanc
rouge
ptill.
mouss.
Moy.
5,191
5,14
4,817
1,337
0,595
5,254
7,463
0,020
0,027
0,025
0,036
0,038
0,022
0,046
OIV-MA-AS314-04 : R2006
10

Selon l'essai d'homognit, la teneur en CO2 des deux bires tait la mme, elles
furent donc
considres comme doubles aveugles.
Les rsultats individuels pour l'ensemble des chantillons et laboratoires de l'tude

collaborative sont donns ci-dessous.
Code Lab Bire 1

A
5,39
Vin
Vin
Vin
Vin
Vin
Vin
Vin
Vin
Bire 2 Cidre 1 Cidre 2 blanc 1 blanc 2 rouge 1rouge 2 ptill. 1 ptill. 2 mouss. 1 mouss 2
5,08
4,75
4,91
1,25 1,11 0,54 0,54 5,15 5,22
6,93
6,91
3
3
2
2
3
3
3
3
7,66
7,72
1,90 1,78 0,73 1,19 5,85 5,93
5,53
4,71
4,70
4,76
C
D
5,15
1
3,13
5,14
1
3,95
4,93
1
4,36
4,94
1
0,38
1,36
1
1,11
1,41
1
1,11
0,51
1
0,43
4,87
4,73
4,96
4,78
1,52
1,52
0,78
0,48
1
0,38
5,23
1
4,47
5,33
1
4,29
7,33
1
5,54
7,36
1
5,52
0,80
4,98
4,94
5,83
6,17
5,34
4,91
4,71
5,01
1,33
1,40
0,46
0,57
5,22
4,95
6,52
6,67
5,18
5,15
4,82
4,86
1,37
1,36
0,56
0,59
5,22
5,27
7,54
7,47
H
I
5,42
5,14
5,40
5,13
5,05
4,65
5,12
4,76
1,15
1,16
1,30
1,19
0,52
0,47
0,53
0,61
5,12
5,16
5,10
5,06
7,25
6,88
7,34
6,48
1. Enlev en raison d'une erreur systmatique importante, manifestement due un

mauvais talonnage
2. Valeur aberrante selon le test de Cochran
3. Valeur aberrante selon le test de Grubbs
OIV-MA-AS314-04 : R2006
11

Les rsultats statistiques de l'essai interlaboratoire sont rcapituls ci-dessous.
Moyenne (g/L)
Bire
5,145
Cidre
4,859
Vin
blanc
1,316
Moyenne (Rp.1) (g/L)
5,156
4,833
1,306
0,510
5,154
6,897
Moyenne (Rp.2) (g/L)
5,134
4,885
1,327
0,553
5,124
6,914
Ecart type de rptabilit

(s r) (g/L)
0,237
0,089
0,060
0,053
0,086
0,149
Ecart type de
reproductibilit (sR) (g/L)
0,237
0,139
0,135
0,059
0,124
0,538
Ecart type relatif de

rptabilit (SDRr) (%)
4,597
1,821
4,562
9,953
1,663
2,163
Ecart type relatif de

reproductibilit (RSDR)
(%)
Limite de rptabilit
r (2,8*sr) (g/L)
4,611
2,855
10,22
11,07
2,407
7,795
0,662
0,248
0,168
0,148
0,239
0,418
Limite de reproductibilit 0,664

R (2,8*sR) (g/L)
0,388
0,377
0,165
0,346
1,507
1,043
0,640
1,883
1,779
0,544
1,843
Cf xValeur de HORRAT
Vin
rouge
0,532
Vin
ptillant
5,139
Vin
mousseux
6,906
Conclusion
Les valeurs de Horrat sont infrieures 2, ce qui signifie que la mthode est
acceptable. Les valeurs de Horrat sont cependant lgrement leves. Dans cinq
des neuf laboratoires participants ces essais ont t raliss pratiquement sans
exprience pralable. Les rsultats peuvent par consquent tre considrs comme
pour le moins trs satisfaisants.
La mthode donne les rsultats en g/L mais ces rsultats peuvent tre convertis en
units de pression. 1
Troost, G. and Haushofer, H., Sekt, Schaum- und Perlwein, Eugen

Ulmer Gmbh & Co., 1980, Klosterneuburg am Rhein, ISBN 3-80015804-3, diagramme 1 en page 13.
1
OIV-MA-AS314-04 : R2006
12

Annexe C
Validation des niveaux bas de dioxyde de carbone
1. Limite de dtection et limite de dtermination

Un chantillon de vin blanc a t analys dix fois en double. Les donns
statistiques sont les suivantes:
Rsidus
Moyenne CO2 (g/L)
Ecart standard de la moyenne, s (g/L)
Limite de dtection 3 x s
Limite de dtermination 10 x s
10
0.41
0.048
0.14
0.48
2. Ajouts dtalons
Des solutions talons de 5 concentrations diffrentes, ralises en double, ont t
ajouts au mme vin qui a t utilis pour dterminer les limites de dtection et de
dtermination. Les concentrations correspondantes en CO2 ont t galement
ajoutes de leau. Les rgressions linaires de ces deux essais ont t compares.
Augmentation de la pression (mbar)
eau + standards Echantillon+standards

60
y = 18,85x + 6,38
2
R = 1,00
50
40
y = 19,28x + 6,60
2
R = 1,00
30
20
10
0
0
0,5
1,5
2,5
Concentration en CO2 (gl/l)
Fig. 1 Ajouts dtalons lchantillon et leau

OIV-MA-AS314-04 : R2006
13

Donnes statistiques des essais:

Eau+ talons
Pente
Incertitude de la pente
Intersection
Incertitude de lintersection
Ecart rsiduel standard
Nombre dchantillons
Echantillon+Etalons
19,3
0,3
6,6
0,4
0,4
15
18,9
0,3
6,4
0,5
0,3
10
Selon les donnes statistiques les deux droits de rgression sont similaires.
Rsidus
Pression Rsiduelle (mbar)
1,0000
0,5000
0,0000
0
0,5
1,5
2,5
-0,5000
-1,0000
Concentration de CO2 (g/l)
Fig. 2. Les rsidus de lquation eau+standards

Les rsidus se rpartissent des deux cts du zro ce qui montre que la rgression
est linaire.
OIV-MA-AS314-04 : R2006
14

Annexe D
Comparaison avec dautres techniques et laboratoires
1. Comparaison de la mthode EBC modifie avec lappareil commercial
Anton Paar CarboQC
Echantillon
Vin mousseux
Cidre
Vin blanc
Vin rouge
Bire 1
Bire 2
Bire 3
Bire sans alcool 1
Bire sans alcool 2
Mthode EBC
modifie (g/l)
9,14
4,20
1,18
1,08
5,26
4,89
4,90
5,41
5,39
Anton Paar
CarboQC (g/l)
9,35
4,10
1,10
0,83
5,15
4,82
4,92
5,33
5,36
Moyenne
Diffrence
-0,21
0,1
0,08
0,25
0,11
0,07
-0,02
0,08
0,03
0,06
Selon le t-test il nexiste pas de diffrence systmatique dans les mesures.
2. Comparaison entre Bfr, Allemagne et ACL, Finlande

Bfr a envoy quatre chantillons ACL et ACL a envoy cinq chantillons Bfr.
Ces neuf chantillons ont t analyss dune manire indpendante par ACL
utilisant la mthode prsente dans ce document et en Allemagne chez Bfr utilisant
la mthode titrimtrique. Les rsultats statistiques sont les suivants:
Diffrence moyenne
Diffrence standard
Z-score
OIV-MA-AS314-04 : R2006
0,14 g/l
0,13 g/l
1,04
15

La mthode prsente ici et la mthode titrimtrique ont t compares galement

par le Bundesamt fr Weinbau en Autriche en utilisant 21 de ses propres
chantillons.
Les donnes statistiques sont les suivantes:
Diffrence moyenne
Diffrence standard
Z-score
-0,01 g/l
0,26 g/l
-0,03
Conclusion
Selon ce document et les essais effectus prcdemment cette mthode est
universelle.
Elle convient pour la dtermination de la teneur en dioxyde de carbone dans tous
les types de boissons alcooliques comme les bires, les vins, les vins de fruits, les
cidres, les vins ptillants et les vins mousseux prsentant un niveau de
concentration de 0,3 g/l et plus.
OIV-MA-AS314-04 : R2006
16
Conformment la jurisprudence, lOIV dcline toute responsabilit pouvant

rsulter des erreurs ou des omissions involontaires qui, malgr les soins apports
la rdaction de louvrage, auraient pu se produire. La reproduction des textes
publis dans cet ouvrage est interdite. Ils sont la proprit de lOIV qui se rserve
le droit de reproduction et de traduction dans le monde entier. La loi interdit les
copies ou reproductions destines une utilisation collective. Toute
reprsentation ou reproduction intgrale ou partielle faite par quelque procd
que ce soit sans le consentement de lOIV, est illicite et constitue une
contrefaon.
OIV 2013
ORGANISATION INTERNATIONALE DE LA VIGNE ET DU VIN

18, rue dAguesseau
75008 PARIS
Tl. (33) 01.44.94.80.80 - Tlc. (33) 01.42.66.90.63

E-mail: oiv@oiv.int - www.oiv.int

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RECUEIL DES METHODES

ORGANISATION INTERNATIONALE DE LA VIGNE ET DU VIN

RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSES OIV

Plan gnral du Recueil

ANNEXE A METHODES D'ANALYSE DES VINS ET DES MOUTS

RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSES OIV

NB: La rfrence de chaque mthode se trouve entre parenthse (rsolutions, mthodes de

- Table des matires

ANNEXE A METHODES D'ANALYSE DES

- Masse volumique (A 1, rvision par 377/2009)

Evaluation de la teneur en sucres des mots, des

- Alcalinit des cendres (A 7, rvision par 377/2009)

RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSES OIV

Turbidit des vins (Oeno 4/2000, rvision par

SECTION 3 ANALYSES CHIMIQUES

- Substances rductrices (A 4, rvision par 377/2009)

Glucose et fructose (mthode enzymatique) (rvision

SECTION 3.1.2 ALCOOLS

- Titre alcoomtrique volumique (pycnomtrie,

- Mthanol (CG) (A 41, rvision par 377/2009)

RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSES OIV

Mthanol (colorimtrie) (A 41, rvision par

SECTION 3.1.3 ACIDES

- Acidit totale (A 10, rvision par 377/2009)

- Acide lactique - mthode chimique (A 27)

Acide lactique -mthode enzymatique (Recueil OIV

- Sorbic Acid (TLC) (A 30, rvision par 377/2009)

RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSES OIV

l'acide D-isoascorbique par HLPC (Oeno 11/2008)

- Identification de lacide L- tartrique (Oeno 12/2008)

- Acides organiques et sulphates (lectrophorse

- Acide sorbique, benzoque, salicylique (Oeno

- Acide mtatartrique (Oeno 10/2007)

SECTION 3.1.4 GAZ

- Dioxyde de carbone (A 39 modifie par Oeno

- Dtermination du rapport isotopique 13C/12C du CO2

- Dioxyde de carbone (mthode manomtrique) (Oeno

RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSES OIV

- Colorants de synthse (A 43, rvision par 377/2009)

Dithylneglycol (Recueil OIV ed. 1990, rvision

- Dosage du 2,4,6-trichloroanisole relargable dans le

- Recherche et dosage des polychlorophenols et des

- Dosage du glutathion (Oeno 345/2009)

- Dtermination des composes -dicarbonyls du vin

Brome total (A 23, rvision par 377/2009)

Chlorures (A 15, rvision par 377/2009)

Fluorures (A22 ; Oeno 22/2004)

Phosphore total (A 16, rvision par 377/2009)

SECTION 3.2 COMPOSS NON ORGANIQUES

RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSES OIV

SECTION 3.2.2 CATIONS

- Ammonium (A 20, rvision par 377/2009)

Potassium (photomtrie de flamme) (A 8, rvision

- Fer (AAS) (A 9, rvision par 377/2009))

Cuivre (Recueil OIV ed. 1990, rvision par

Argent (Recueil OIV ed. 1990, rvision par

- Plomb (critres pour mthodes) (Oeno 7/2006)

SECTION 3.2.3 AUTRES COMPOSS NON

- Azote total (A 40, rvision par 377/2009)

Azote total - Mthode Dumas (Oeno 13/2002,

RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSES OIV

Dioxyde de soufre (mthode moleculaire) (A17,

- Dtermination de la natamycine dans le vins (Oeno