CINTICA ENZIMTICA

>>>>>> Variables que influyen en la velocidad de una reaccin enzimtica

1.- Concentracin enzimtica
2.- Concentracin de sustrato
3.- Activadores e inhibidores
4.- pH
5.- Temperatura
1.- CONCENTRACIN DE SUSTRATO Y VELOCIDAD ENZIMTICA. Vo y Vmax
Uno de los factores clave que afectan a la velocidad de una reaccin catalizada por un enzima es la concentracin de
sustrato presente, [S].

Sin embargo, el estudio de los efectos de la concentracin de sustrato es complicado debido al hecho de que [S] cambia durante
el transcurso de una reaccin a medida que el sustrato se convierte en producto.

- Una aproximacin simplificadora en los experimentos cinticos consiste en medir la velocidad inicial, llamada
Vo, cuando [S] es mucho mayor que la concentracin de enzima, [E].
* En una reaccin tpica, el enzima puede estar presente en concentraciones del orden nanomolar, mientras que [S]
puede ser cinco o seis rdenes de magnitud mayor.
- A mayores concentraciones ele sustrato, Vo aumenta a incrementos cada vez menores en respuesta a incrementos
de [S].
- Finalmente, se alcanza un punto ms all del cual se dan incrementos pequesimos de Vo con el incremento de
[S].
**Esta meseta se denomina velocidad mxima, Vmx
2.- CINTICA ENZIMTICA.
Es el mtodo principal para estudiar el mecanismo de una reaccin catalizada enzimticamente mediante la
determinacin de la velocidad de la reaccin y del modo en que sta cambia en respuesta a cambios en los
parmetros experimentales.
- Muchos enzimas comparten algunas propiedades cinticas:
1. Cuando se aade sustrato a un enzima, la reaccin enseguida llega a un estado estacionario en el que la velocidad
a la que se forma el complejo ES se equilibra con la velocidad a la que reacciona.
2. Al aumentar [S] la actividad de un enzima (a concentracin fija) en el estado estacionario aumenta siguiendo una
curva hiperblica que tiende a su mximo valor de velocidad (Vmax) en el cual casi todo el enzima ha formado
complejo con su sustrato.
- La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin de los productos o la desaparicin de los reactivos.
- Al seguir la velocidad de aparicin de producto (o de desaparicin del sustrato) en funcin del tiempo se obtiene la
llamada curva de avance de la reaccin, o simplemente, la cintica de la reaccin.
- A medida que la reaccin transcurre, la velocidad de acumulacin del producto va disminuyendo porque se va
consumiendo el sustrato de la reaccin.
* Se procede a medir la velocidad inicial de la reaccin (v 0 ). La velocidad inicial de la reaccin es igual a la pendiente
de la curva de avance a tiempo cero .De esta forma, la medida de V 0 se realiza antes de que se consuma el 10% del
total del sustrato.
- Si representamos v 0 frente a [S] 0 obtenemos una grfica como la de la Figura.
- Cuando [S] 0 es pequea, la velocidad inicial es directamente proporcional a la
concentracin de sustrato, y por tanto, la reaccin es de primer orden.
- A altas [S] 0 , el enzima se encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad ya no
depende de [S] 0 .
*En este punto, la reaccin es de orden cero y la velocidad es mxima (V max ).

A.) ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN.

ETAPA 1. Formacin del complejo enzima-sustrato
ETAPA 2. El complejo enzima-sustrato da lugar a la formacin del producto, liberando el enzima libre:
- En este esquema, k 1 , k 2 y k 3 son las constantes cinticas individuales de cada proceso y tambin reciben el
nombre de constantes microscpicas de velocidad. Segn esto, podemos afirmar que:
K1=constante de velocidad de formacin ES.
K2=constante de velocidad de disociacin de ES
K3=constante de formacin de P.
- Cuando el enzima se mezcla inicialmente con un gran exceso de sustrato, existe e1 periodo inicial, denominado
estado pre-estacionario, durante el cual aumenta la concentracin del complejo ES.
* Normalmenle el estado pre-estacionario es demasiado corto para que sea observado fcilmente y dura tan solo
unos microsegundos.
- La reaccin alcanza rpidamente un estado estacionario en el que [ES] (y la concentracin de otros intermediarios)
permanece aproximadamente constante con el tiempo.
Cintica del estado estacionario: anlisis de las Vo.
- Cuanto menor sea la Km mejor catalizador ser la enzima para el sustrato, puesto que necesita menos
concentracin de mismo para alcanzar la velocidad mxima.
La concentracin de sustrato a la que
la velocidad de la reaccin es la mitad
de Vmx es la constante de
Michaelis, Km, que es caracterstica
de cada enzima que acta sobre un
sustrato determinado.

B.) ECUACIN DE LINEWEAVER-BURK

- Es una modificacin de la ecuacin Michaelis-Menten.
* Tomando los inversos en ambos nmeros de la ecuacin.

- En esta grfica se obtiene una lnea recta con:

* Una pendiente de

*La Interseccin con el eje

es

* Interseccin con el eje [] en

3.- ACCIN ENZIMTICA SOBRE VARIOS SUSTRATOS

- Las reacciones enzimticas en las que hay dos sustratos implican normalmente la transferencia de un tomo o un
grupo funcional de un sustrato al otro.
- Tales reacciones transcurren por una o varias rutas diferentes:
1- Ambos sustratos estn fijados al enzima al mismo tiempo, formando en algn momento de la reaccin un
complejo ternario no covalente.
2- Los sustratos pueden fijarse en una secuencia al azar o en un orden especfico.
3- El primer sustrato se convierte en producto y se disocia antes de que se una el segundo sustrato. Un ejemplo de
esto es el mecanismo ping-pong o de doble desplazamiento.

INHIBICIN ENZIMTICA
Inhibidor: Compuesto que disminuye la actividad enzimtica.
1.- INHIBICIN REVERSIBLE
COMPETITIVA
- Un inhibidor competitivo compite con el sustrato por el sitio activo del enzima. Mientras el inhibidor ocupa el sitio
activo, impide la fijacin del sustrato.
- Muchos inhibidores competitivos son compuestos que se parecen al sustrato, y que se combinan con el enzima
formando complejos EI, pero sin llevarlo a la catlisis
En presencia de un inhibidor, aumenta la km aparente ([S] necesaria para alcanzar la mitad de la Vmax).
La velocidad mxima no se modifica
>>> La inhibicin competitiva se utiliza en terapia mdica para tratar
pacientes que han ingerido metanol. Mediante la difusin lenta
intravenosa de etanol que actuar como inhibidor competitivo.

ACOMPETITIVA
- El inhibidor se fija en un sitio distinto al que se fija el sustrato en el sitio
activo.
- A diferencia de la competitiva, solo se une al complejo ES
Un inhibidor acompetitivo disminuye la Vmax.
La km aparente tambin disminuye, debido a que la [S] necesaria para
alcanzar la Vmax es menor.
MIXTA
- Se fija a un sitio distinto al del sustrato, pero se fija tanto a E como a ES.
Afecta tanto a Km como a Vmax.
>>> El caso especial en el que = se define clsicamente como inhibicin
no competitiva.

2.- INHIBICIN IRREVERSIBLE

Inhibidor Irreversible: se combinan con, o destruyen, un grupo de la enzima que es esencial para su actividad.
- Es frecuente la formacin de un enlace covalente entre un inhibidor irreversible y un enzima.
- Muchos frmacos y venenos actan como inhibidores irreversibles.
Ej.: la penicilina inhibe de forma irreversible una enzima clave para la sntesis de la pared de muchas bacterias, de ah
su efecto antibitico.
Ej.: La aspirina o ASS inhibe irreversiblemente a la ciclooxigenass que es una enzima que cataliza el primer paso en la
sntesis de la prostaglandinas, que son mediadores fundamentales de la inflamacin
>> Son muy tiles para estudiar los mecanismos de reaccin.
3.- EFECTO DE LA TEMPERATURA Y EL PH
- La mayora de las enzimas poseen un pH optimo a la cual su actividad es mxima ,por encima o por debajo de ese
valor la actividad disminuye ,debido a la desnaturalizacin de las enzimas.
-Al igual que ocurre con la mayora de las reacciones qumicas. La velocidad de la reaccin catalizada por enzimas
aumenta con la temperatura dentro del intervalo en el que la enzima es estable y permanece totalmente activa.
i. Inactivacin por desnaturalizacin
ii. Cambios en el estado de ionizacin del sustrato
iii. Alteracin del equilibrio en caso de que [H+] est involucrada en la reaccin.
iv. Cambios en el estado de ionizacin de los aminocidos del centro cataltico.
REGULACIN ENZIMTICA
- Las enzimas llevan a cabo una serie de reacciones secuenciales que constituyen las rutas metablicas.
Dichas rutas estn perfectamente coordinadas entre s y cada una est regulada de forma muy precisa.
- La velocidad de cada ruta est controlada para que refleje las necesidades generales de la clula.
- La primera enzima de la ruta suele ser limitante de la velocidad (enzima regulador)
1.- CONTROL A NIVEL DE SUSTRATO
- Mediante la interaccin de los sustratos y productos de cada reaccin con la enzima.

CONTROL POR RETROALIMENTACIN

- El producto final de una ruta inhibe al primer enzima de la misma.
- De este modo se equilibra la velocidad de formacin del producto final con las necesidades de la clula
2.- REGULACIN ALOSTRICA
- Cambio de conformacin entre diversas formas de actividad
inducida por la unin de moduladores.
- No tienen comportamiento Michaelis-Menten.
>>> Homotrpicos (homoalostrico)----> Sustrato = Modulador
- Control a nivel de sustrato
>>> Heterotrpicos (heteroalostrico) ---> Sustrato Modulador
- Retroinhibicin
* Inhibidores: Aumento de Km, disminucin de Vmax
* Activadores: Disminucin de la Km, aumento de Vmax

3.- MODULACIN COVALENTE

- Se modula la actividad por modificacin covalente de la molcula enzimtica mediante un grupo qumico a la
cadena lateral de algn aminocido de la protena.
EJEMPLOS:
i. Fosforilacin
- Mayoritaria
ii. Adicin de grupos
* Acetilos * ADP-Ribosa * Lpidos
4.- ACTIVACIN MEDIANTE RUPTURA.
- Algunas enzimas y otras protenas son regulados mediante la rotura proteoltica de un precursor enzimtico.
CONCEPTO DE ZIMGENO
- Protenas precursoras sin actividad enzimtica.
>> Tambin pueden ser llamados como proprotenas o proenzimas.
Ej. El colgeno del tejido conjuntivo se sintetiza inicialmente en modo de precursor soluble denominado
procolgeno.
CASCADA DE ACTIVACIN
- Un ejemplo de una cascada de activacin proteoltica es la coagulacin sangunea.
* La fibrina, se origina por protelisis de su proprotena inactiva, el fibringeno. La proteasa, responsable de esta
activacin es la trombina, la cual a su vez se origina por protelisis de una proprotena, la protrombina.
5.- MODULACIN POR OTRAS PROTENAS
>> Interaccin protena-protena
i- Protenas G
ii- Calmodulina