Tema 3.

Aplicaciones y criterios de uso de la

espectroscopia
de
absorcin
molecular:
Espectrofotometra UV-visible

El instrumento tipo: parmetros de inters y calibracin.Descripcin de aplicaciones frecuentes.- Seleccin de

procedimientos adecuados para problemas concretos.- Uso de la
espectrofotometra UV-visible como sistema de deteccin en
otras tcnicas instrumentales
1

ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN MOLECULAR UV/VIS

Fuente de radiacin:
lmpara de Deuterio o Hidrgeno: proporcionan espectro continuo en la
regin UV (160-375 nm)
lmpara de filamento de Tungsteno: radiacin visible e IR cercano
arco de xenn: espectro continuo entre 150 y 800 nm
Selector de longitudes de onda:
filtros
monocromadores: de red, de prisma
Recipiente muestra:
cubetas cuarzo o slice fundida para que sean transparentes a la luz
(permitan en paso de radiacin de la regin espectral de inters)
Detector de radiacin:
2
fotomultiplicadores o fotodiodos

mayor frecuencia

Espectro Visible

menor frecuencia

longitud de onda (nm)

Violeta: 400-420 nm
Indigo: 420-440 nm
Azul: 440 -490 nm

Porqu algunas sustancias se ven

coloreadas y otras se ven blancas?

Verde: 490-570 nm
Amarillo: 570-585 nm
Naranja: 585-620 nm
Rojo: 620-780 nm:

Parte del espectro visible es absorbido y

otra parte reflejado (color
complementario)
3

Colores complementarios:
Absorcin a 420-430 nm: se ve amarillo
Absorcin a 500-520 nm: se ve rojo.
Absorcin total: se ve negro
Reflexin total: se ve blanco

Sustancias coloreadas que tienen un sistema de

enlaces conjugados
OH O

CH3
CO2H
OH

HO
OH O

cido carmnico

N
H

H
N

O
ndigo

O
O
H

crocetina

Figura. Instrumento medicin UV/vis de un solo haz

Figura. Instrumento medicin UV/vis de doble haz

5

Instrumento tipo- haz simple

Espectrofotmetros de doble haz Lambda 3A y

4B (Perkin-Elmer)

Espectrofotmetros de diodos apilados

diode array

Doble haz

10

11

12

Conceptos bsicos

Regin de longitudes de onda comprendida entre 160 y

780 nm (UV-vis)
La espectroscopia de absorcin molecular se basa en la
medida de la transmitancia T o de la absorbancia A de
disoluciones que se encuentran en cubetas
transparentes con un camino ptico de b cm
Normalmente, la concentracin c de un analito
absorbente est relacionada linealmente con la
absorbancia
A = -log T = log P0/P = b c
13

MEDIDA DE LA TRANSMITANCIA
DE LA ABSORBANCIA

14

MEDIDA DE LA TRANSMITANCIA
ABSORBANCIA

Y DE LA

La disolucin del analito debe

mantenerse en algun tipo de
recipiente transparente, o
cubeta
En las dos interfases
aire/pared de la cubeta, asi
como en las dos interfases
pared/disolucion tienen lugar
reflexiones
La atenuacin del haz resultante es
un factor importante
15

MEDIDA DE LA TRANSMITANCIA
DE LA ABSORBANCIA

Aproximadamente el 8,5 % de un haz de luz amarilla se pierde por

reflexin en su paso a travs de una cubeta de vidrio rellena de agua
La atenuacin del haz puede ocurrir como, consecuencia de la dispersin
causada por molculas grandes y, a veces, de la absorcin por las paredes
del recipiente
Para compensar todos estos efectos, la potencia del haz transmitido por la
disolucin del analito se compara, generalmente, con la potencia del haz
transmitido por una cubeta idntica que slo contiene disolvente
Con las siguientes ecuaciones se obtienen la T y A experimentales que se
aproximan estrechamente a la transmitancia y absorbancia verdaderas

16

LEY DE BEER

Consideremos el bloque de material absorbente (slido,

lquido o gas)
Un haz de radiacin monocromtico paralelo de potencia Po
choca contra el bloque de forma perpendicular a la
superficie; despus de pasar a travs de una longitud b de
material, que contiene n tomos, iones o molculas
absorbentes, su potencia disminuye hasta un valor P como
resultado de la absorcin.

A = - log T = log P0 /P = b c

Consideremos ahora una seccin transversal del bloque de

rea S y espesor infinitesimal dx.
Esta seccin contiene do partculas absorbentes; asociada a
cada partcula, podemos imaginar una superficie en la cual
tendr lugar la captura del fotn.

Si un fotn, por casualidad, alcanza una de estas reas,

inmediatamente tendr lugar la absorcin

La proyeccin del rea total de estas superficies de captura

dentro de la seccin se designa como dS

La relacin entre el area de captura y el area total, ser

entonces dS/S.

Estadsticamente, esta relacin representa la probabilidad

de captura de fotones en el interior de la seccin

17

Ley de Beer

La potencia del haz que entra en la seccin, Px, es proporcional al numero de

fotones por centmetro cuadrado y dPx representa la cantidad absorbida en la
seccin; la fraccin absorbida ser, entonces -dP/P, y esta relacin tambin es
igual a la probabilidad media de captura. El signo menos indica que P sufre un
descenso.

Recordemos, ahora, que dS es la suma de las reas de captura de las partculas

que se encuentran en la seccin ser proporcional al nmero de partculas

donde dn es el numero de partculas y a es una constante de proporcionalidad,

que puede denominarse seccin transversal de captura

18

donde n es el numero total de partculas en el

bloque
19

Ley de Beer

El rea de la seccin transversal S puede expresarse en trminos de

volumen del bloque V en cm3 y su longitud b en cm

Como, nlV tiene unidades de concentracin, es decir, numero de partculas

por centmetro, cbico, podemos convertir nlV en moles por litro

20

Ley de Beer

El nmero de moles viene dado por:

21

Aplicacin de la Ley de Beer a

mezclas

La ley de Beer tambin se puede aplicar a un medio que

contenga mas de un tipo de sustancias absorbentes
Siempre que no haya interaccin entre las distintas
especies, la absorbancia total para un sistema
multicomponente viene dado por

donde los subndices se refieren a los componentes

absorbentes 1, 2, ..., n.
22

Limitaciones de la ley de Beer

En algunas ocasiones estas desviaciones estn relacionadas

con el fundamento de la ley y representan limitaciones
propias de la misma

Otras veces surgen como, consecuencia de la forma en que

se realizan las medidas de absorbancia o como resultado de
cambios qumicos asociados con cambios de concentracin;
estas alteraciones de la ley de Beer se conocen cmo

desviaciones instrumentales
desviaciones qumicas

23

Limitaciones de la Ley de Beer

LIMITACIONES A LA LEY DE BEER

LIMITACIONES PROPIAS

ERRORES COMETIDOS AL APLICAR LA LEY

INCUMPLIMIENTO DE LAS PREMISAS

QUMICOS
Interacciones por mecanismos
distintos al de absorcin

INSTRUMENTALES

Error de lectura

Sistemas en
equilibrio

Control de la temperatura

Radiacin parsita

Radiacin no monocromtica
E. De dimerizacin

Utilizacin y cuidado de las

cubetas de absorcin

E. De cido-base

Interacciones entre las especies

absorbentes de soluto
Falta de uniformidad de la seccin
transversal de absorcin

PERSONALES

E. De complejacin
Efecto del disolvente

Impurezas de
los reactivos

Interferencias
de la muestra

24

Limitaciones propias de la ley de Beer

La ley de Beer describe de forma correcta el comportamiento de

absorcin de un medio que contiene concentraciones de analito
relativamente bajas; en este sentido, es una ley limite

A concentraciones altas (generalmente > 0,01 M), la distancia

media entre las moleculas responsables de la absorcin disminuye
hasta el punto en que cada molcula altera la distribucin de carga
de las molecular vecinas

Esta interaccin, a su vez, puede alterar la capacidad de las

molculas para absorber la radiacin de una determinada

Como, la magnitud de la interaccin depende de la concentracin,

la aparicin de este fenmeno da lugar a desviaciones de la
linealidad entre la absorbancia y la concentracin
25

Limitaciones propias de la ley de Beer

Un efecto similar se encuentra, a veces, en medios que contienen

concentraciones de absorbente bajas pero concentraciones altas de
otras especies, especialmente electrolitos
La estrecha proximidad de los iones al absorbente altera la absortividad
molar de este por interacciones electrostticas; el efecto se reduce
mediante dilucin
Aunque, normalmente, el efecto de las interacciones moleculares no es
significativo para concentraciones inferiores a 0,01 M, entre ciertos iones
o moleculas orgnicas grandes aparecen algunas excepciones.

La absortividad del color del azul de metileno en disolucin acuosa a 436

nm aumenta un 88 % cuando la concentracin del colorante aumenta de
10-5 a 10-2 M; incluso por debajo de 10-6 M no se observa un cumplimiento
estricto de la ley de Beer

26

Otras limitaciones propias de la ley de

Beer

Tambin surgen desviaciones de la ley de Beer como consecuencia de la

dependencia de del ndice de refraccin del medio

Si los cambios de la concentracin causan alteraciones significativas en el

ndice de refraccin de una disolucin, se observan desviaciones de la ley
de Beer

Para este efecto puede hacerse una correccin mediante la sustitucin de

por la cantidad n/(n2 + 2)2 en

En general, esta correccin nunca es muy grande y rara vez es

significativa para concentraciones menores de 0,01 M.

27

Desviaciones qumicas de la ley de

Beer

Cuando un analito se disocia, se asocia o reacciona con un

disolvente para dar lugar a un producto con un espectro de
absorcin diferente al del analito, se producen desviaciones de la
ley de Beer

Las disoluciones acuosas de los indicadores acido/base son un

ejemplo caracterstico de este comportamiento

El cambio de color asociado con un indicador tpico HIn se produce

como consecuencia de los cambios en el equilibrio
HIn H+ + Incolor 1 (1; 1)

color 2(2; 2)

28

Desviaciones qumicas de la ley de

Beer

La ley de Beer no se cumple, al menos que el pH sea constante, o se opere a la longitud de

onda del punto isosbstico, esto es, la a la cual las dos especies absorbentes en equilibrio
presenten la misma

29

Ejemplo-parte 1

Se determinaron las absortividades molares a 430 y 570 nm

del acido debil HIn (Ka = 1,42 x 10-5) y de su base conjugada
In- mediante medidas de disoluciones del indicador en medios
fuertemente cidos y fuertemente bsicos
Bajo estas condiciones, prcticamente todo el indicador se
encontrara como HIn e In-, respectivamente
Los resultados fueron:

30

Calcular los datos de absorbancia para las disoluciones no tamponadas

cuyas concentraciones totales de indicador estn comprendidas entre 2
x 10-5 y 16 x 10-5 M
Concentraciones molares de las dos especies [HIn] e [In-] en una disolucin
donde la concentracin total de indicador es 2,00 x 10-5 M
HIn = H+ + InKa = 1,42 x 10-5 = [H+][In-]/[HIn]
considerando que [H+] = [In-]
Adems, la suma de las concentraciones de las dos especies del indicador
debe ser igual a la concentracin analtica molar total del indicador
Por tanto, [In-] + [HIn] = 2,00 x 10-5
Sustituyendo estas ecuaciones en la expresin para el calculo de K,
obtenemos [In-]2/(2,00 x 10-5 [In-]) = 1,42 x 10-5

31

Reordenando los trminos obtenemos la expresin cuadrtica

[In-]2 + 1,42 x 10-5 [In-] - 2,84 x 10-10 = 0

La solucin positiva de esta ecuacin es [In-]=1,12x 10-5; [HIn] = 2,00

x 10-5 - 1,12 x 10-5 = 0,88 x 10-5

Ahora estamos en condiciones de calcular la absorbancia a las dos

longitudes de onda. De esta manera, sustituyendo en la ecuacin de
adicin de las absorbancias
A = Inb[In- ] + HInb[HIn]
A430 = 2,06 x 104 x 1,00 x 1,12 x 10-5 +6,30 x 102 x 1,00 x 0,88 x
10-5= 0,236

A 570 nm, A570 = 0,073

32

Otras limitaciones

Dimerizaciones
Cuando una disolucin de dicromato potsico no tamponada se
diluye se produce una transformacin parcial en cromato, como
consecuencia del equilibrio dmero-monmero existente en este
compuesto

Complejos
Cuando se mide la absorbancia de un complejo, por ejemplo,
Fe(SCN)63- para que se cumpla la ley de Beer hay que mantener
constante la concentracin de ligando libre, lo cual se consigue
frecuentemente operando en gran exceso de ligando respecto al
metal
33

Datos en relacin a las desviaciones

qumicas de la ley de Beer

34

Desviaciones instrumentales originadas

por la radiacin policromtica

El cumplimiento estricto de la ley de Beer slo se observa

cuando la radiacin es realmente monocromtica
Esto constituye otra manifestacin del carcter lmite de la ley
Desafortunadamente, en la practica es difcil la aplicacin de
una sola debido a que los dispositivos generan una banda de
s mas o menos simtrica en torno a la deseada

35

Expresin de la ley de Beer en

presencia de radiacin policromtica

Considemos un haz formado solo por dos longitudes de onda y .

Asumiendo que la ley de Beer se aplica estrictamente para cada una de
estas longitudes de onda, podemos escribir para la radiacin

36

Cuando la medida de la absorbancia se realiza utilizando una radiacin compuesta

por ambas longitudes de onda, la potencia del haz emergente de la disolucin
viene dada por P + P" y la del haz del disolvente por P0 + P0. Por tanto, la medida
de la absorbancia Am

Sustituyendo por P y P se convierte en

Ahora bien cuando =

Y se cumple la ley de Beer

37

Sin embargo, la relacin entre A y la concentracin deja de ser lineal cuando

las absortividades molares difieren entre si

La mayor desviacin de la linealidad ser mayor cuando lo sea la diferencia

entre y .

El mismo efecto se producira al incluir longitudes de onda adicionales

Es un hecho experimental que las desviaciones de la ley de Beer de un haz

policromtico no son apreciables, si la radiacin utilizada no abarca una
regin del espectro en la cual el absorbente muestre cambios grandes en la
absorcin en funcin de la longitud de onda

38

Desviaciones de la Ley de Beer

Tambin se ha observado experimentalmente que las

medidas de absorbancia en el mximo de los picos
estrechos hace que la desviacin de la ley de Beer no
sea significativa si la anchura de banda efectiva del
monocromador o filtro es menor de 1/10 de la mitad de
la anchura del pico de absorcin en la semialtura

39

40

Ruido instrumental como funcin de la

transmitancia

Una medida espectrofotomtrica lleva consigo tres etapas:

ajuste del 0 % de transmitancia

ajuste del 100 % de transmitancia
medida del porcentaje de T cuando se sita la muestra en la trayectoria
de la radiacin

El ruido asociado a cada una de estas etapas se combina para dar

una incertidumbre neta en el valor final de T obtenido

La relacin entre el ruido encontrado en la medida de T y la

incertidumbre en la medida de la concentracin puede deducirse
escribiendo la ley de Beer de la siguiente forma

41

Para relacionar la desviacin estndar de la concentracin c

, con la desviacin estndar de la transmitancia T se
procede tomando la derivada parcial de esta ecuacin con
respecto a T, manteniendo b y constantes. Es decir

2x= (x/p)2 p2 + (x/q)2 q2 + (x/r)2 r2 +

42

Dividiendo la ecuacin anterior

por el cuadrado de

Se obtiene
(c/c)2 = (T/T lnT)2
c/c = T/T lnT = 0,434 T/T logT

Para un nmero limitado de medidas se reemplaza la desviacin estndar de la poblacin c y T, por la

desviacin estndar de la muestra sc y sT, y se obtiene:
sc/c = 0,434 sT/T logT

Esta ecuacin relaciona la desviacin estndar relativa de c (sc/c) con la desviacin estndar absoluta de
la medida de transmitancia (sT).
Experimentalmente, sT puede evaluarse haciendo, por ejemplo, 20 replicados de la medida de
transmitancia (n = 20) de una disolucin repitiendo las medidas exactamente de la misma forma
Al examinar la Ecuacin de incertidumbre en la medida de la transmitancia, vemos que la incertidumbre
en la medida fotomtrica de la concentracin varia de forma no lineal con la magnitud de la
transmitancia.
La situacin es algo mas complicada, porque sT depende en numerosas ocasiones tambin de T

43

Debido a la relacin logartmica entre

T y A, la precisin de la medida de la
concentracin difiere segn el
intervalo de absorbancia que se est
midiendo:
Vamos a suponer que el error relativo
en la medida de T es 0,5% para
todos los valores de T entre 0 y 1
Esto es un error relativo de 0,005 para
T
El error relativo en A disminuye de
forma continua de mayores a menores
valores de A (este error se calcula
mediante una expresin matemtica).
44

El error relativo en la absorbancia, es la medida de nuestra

precisin analtica
A bajas concentraciones, 90% T(A = 0,045), y a concentraciones
relativamente altas, <2% T(A > 1,70), el error relativo es mayor
del 5%
Claramente, en estas condiciones la medida es menos precisa
que en otros intervalos
El intervalo en el que el error relativo para los resultados es ms
pequeo se encuentra en valores de absorbancia entre 0,4-0,7
20-60% T
En otras palabras, para alcanzar la mayor precisin en un
experimento de absorcin, la concentracin de la muestra o la
longitud del paso ptico a travs de la muestra se deberan
ajustar, si es posible, a aquella en la que la absorbancia a la
salida del instrumento est en el intervalo de 0,4-0,7
En la prctica, el error en T no es constante a lo largo de todo el
intervalo, y cada instrumento tiene sus propias caractersticas

%T

45

Otra forma de interpretar que el error fotomtrico es

menor entre valores de absorbancia de 0,4 a 0,7 es
considerar que:

si la absorbancia es baja, la potencia radiante que atraviesa la

muestra es anloga a la que atraviesa el blanco, y

la incertidumbre de medida relativa a la diferencia de estos dos

nmeros sera grande al comparar intensidades parecidas

Por el contrario si la absorbancia es muy alta llega poca

radiacin al detector y

disminuye la relacin seal-ruido

46

Efecto de la anchura de la rendija en las medidas de

absorbancia

Para conseguir espectros complejos bien resueltos se

requieren anchuras de rendija estrechas.
Se ha obtenido el espectro de T de un cristal de didimio
con un ajuste de la rendija que proporciono anchuras de
banda efectivas de 0,5; 9 y 20 nm
La perdida progresiva de los detalles espectrales es clara.
Para estudios cualitativos, tales perdidas son, con
frecuencia, de gran importancia

Un segundo efecto de la anchura de la rendija sobre los espectros

compuestos por picos estrechos
Se utiliza el espectro de una disolucin de cloruro de praseodimio con
rendijas ajustables a 1,0; 0,5 y 0,1 mm
Los valores de absorbancia aumentan significativamente (hasta un 70 por
100 en uno de los casos) cuando la anchura de la rendija disminuye
Para ajustes de la rendija menores de aproximadamente 0,14 mm, las
absorbancias eran independientes de la anchura de la rendija
Las reas bajo los picos individuales son las mismas, pero anchuras de
rendija elevadas dan lugar a picos mas anchos y mas bajos
47

La medida cuantitativa de las bandas de absorcin estrechas requieren

el uso de anchuras de rendija estrechas o, alternativamente, ajustes de
anchura de rendija muy reproducibles
Una disminucin en la anchura de rendija va acompaada por una
reduccin exponencial de segundo orden en la energa radiante; cuando
se usan ajustes muy estrechos pueden perderse detalles espectrales
como consecuencia de un aumento en la relacin seal/ruido
Esta situacin se hace particularmente importante en las regiones
espectrales en las cuales la seal de salida de la fuente o la sensibilidad
del detector son bajas

El ruido, puede originar una prdida parcial o total de la estructura fina del
espectro

En general, desde el punto de vista prctico, es aconsejable no estrechar

la rendija ms de lo necesario
Generalmente, se observan alturas de pico constantes cuando la anchura
de banda efectiva del instrumento es 0,1 mm inferior a la anchura de
banda efectiva del pico de absorcin
48

Efecto de la radiacin dispersada.

Longitudes de onda extremas de un
instrumento

La radiacin dispersa puede causar desviaciones instrumentales de la ley

de Beer
Cuando las medidas se realizan a las extremas de un instrumento, los
efectos de la radiacin parasita pueden ser ms importantes
En ocasiones pueden llevar a la aparicin de falsos picos de absorcin
Ejemplo:
Consideremos un espectrofotometro que trabaja en la regin visible
equipado con ptica de vidrio, fuente de wolframio y clula fotovoltaica
como detector
A longitudes de onda inferiores a 380 nm, las ventanas, cubetas y prisma
comienzan a absorber radiacin, reduciendo as la energa que llega al
detector
La seal de salida de la fuente tambin desciende rpidamente en esta
regin; la sensibilidad del dispositivo fotoelctrico tambin disminuye
Como consecuencia de ello la seal total para el ajuste del 100 % de T
puede ser tan baja como el 1 2 % de la seal correspondiente a la
regin comprendida entre 500 y 650 nm

49

Intensidad de la radiacin emitida por las

fuentes tpicas en la zona UV-visible

50

Efecto de la radiacin dispersada.

Longitudes de onda de mayor sensibilidad
de un instrumento

Cuando la radiacin dispersa est constituida por a las

cuales el instrumento es muy sensible, el efecto de la
radiacin dispersa puede ser muy importante

En algunos casos, la seal de salida producida por la

radiacin parasita puede exceder a la del haz que
procede del monocromador

En estos casos la absorbancia medida procede tanto de

la radiacin parasita como de la radiacin que se ha
seleccionado en el instrumento

Ejemplo de la aparicin de un falso pico a las

longitudes extremas de un espectrofotmetro de la
regin visible
El

espectro B corresponde a un dispositivo con ptica

de cuarzo
El

espectro A (correspondiente a un espectrofotmetro

sencillo) muestra un falso pico por el efecto de la
radiacin dispersa correspondiente a > 400 nm, que no
son absorbidas por el cromforo (cerio (IV))
51

Cmo se aplica y se utiliza la espectroscopa UV-visible

LA MAGNITUD DE LAS ABSORTIVIDADES MOLARES
Empricamente,

en espectrometra de absorcin molecular

ultravioleta y visible se observan desde cero hasta 105
Para

un pico particular, la magnitud de depende de la seccin

transversal de captura de las especies y de la probabilidad de
que tenga lugar una transicin al absorber energa. Se ha
demostrado que la relacin entre y estas variables es
= 8,7 x 10-19 P A
Siendo

P la probabilidad de que se produzca la transicin y A el

rea de la seccin transversal de la molcula en centmetros
cuadrados.
52

Cmo se aplica y se utiliza la espectroscopa UVvisible

Para las transiciones permitidas segn la

mecnica cuntica que dan lugar a bandas de
absorcin intensas (= 104 a 105 ), los valores
de P estn comprendidos entre 0,1 y 1

Los picos que tienen < 103 se clasifican como

de baja intensidad

Son el resultado de las llamadas transiciones

prohibidas, que tienen una probabilidad de inferior
a 0,01
53

Especies absorbentes. Cromforos

La absorcin de radiacin UV-vis por una especie

atmica o molecular M se puede considerar como un
proceso en dos etapas:

1) Excitacin electrnica como se muestra en la ecuacin

M + hv M*

El producto de la reaccin entre M y el fotn hv es una

especie excitada electrnicamente simbolizada por M*.
El tiempo de vida de la especie excitada es breve (10-8 a
10-9 s), producindose distintos proceso de relajacin.

2) Relajacin en especial la conversin de esa energa de

excitacin en calor
M * M + calor
54

Otras formas de relajacin molecular

La relajacin puede producirse tambin por la descomposicion de M*

para dar lugar a nuevas especies; dicho proceso se denomina
reaccin fotoqumica.

Otros casos la relajacin puede suponer la reemisin de

fluorescencia o fosforescencia.

Es importante destacar que el tiempo de vida de M* es

generalmente, muy pequeo y su concentracin en cualquier
momento es despreciable.

Adems, la cantidad de energa trmica desarrollada en la relajacin

no es, habitualmente, detectable. Por ello, en las medidas de
absorcin crean una mnima perturbacin del sistema en estudio
excepto cuando tiene lugar la descomposicin fotoqumica.
55

Otras formas de relajacin molecular

La absorcin de radiacin ultravioleta o visible resulta, generalmente, de la

excitacin de los electrones de enlace; como consecuencia, los picos de
absorcin pueden correlacionarse con los tipos de enlaces de las especies
objeto de estudio.
La espectroscopia de absorcin molecular es, por tanto, vlida para
identificar grupos funcionales en una molcula.
Son importantes las aplicaciones de la espectroscopia de absorcin
ultravioleta y visible en la determinacin cuantitativa de compuestos que
contienen determinados grupos absorbentes.
Podemos citar tres tipos de transiciones electrnicas de inters en UVvisible:

(1) electrones , y n
(2) eleclrones d y f
(3) electrones de transferencia de carga

56

Especies absorbentes que contienen

electrones , y n

Las especies absorbentes que contienen electrones , y n son

fundamentalmente iones y molculas orgnicas, as como algunos
aniones inorgnicos. Consideraremos especialmente las primeras.

Todos los compuestos orgnicos son capaces de absorber

radiacin electromagntica por sus enlaces de tipo .

La energa de excitacin asociada a los electrones que constituyen

la mayora de los enlaces sencillos es lo suficientemente alta para
que su absorcin quede restringida a la regin ultravioleta de vaci
( < 185 nm), donde tambin absorben los componentes de la
atmsfera.

57

Especies absorbentes que contienen

electrones , y n

Las dificultades experimentales asociadas con el

ultravioleta de vaco son muy importantes, por ello, la
mayora de los estudios de compuestos orgnicos se
llevan a cabo a longitudes de onda superiores a 185
nm.

La absorcin de radiacin visible y ultravioleta de

longitud de onda ms larga estn no obstante
restringida a un numero limitado de grupos
funcionales (cromforos) que contienen electrones de
valencia con energas de excitacin relativamente
bajas.
58

Tipos de electrones absorbentes

Los electrones que contribuyen a la absorcin en una

molcula orgnica son:

(1) enlazantes, que participan directamente en la formacin de

enlaces entre tomos, asocindose con ms de uno de ellos
(2) no enlazantes o electrones que no participan en ningn
enlace que estn en gran parte localizados alrededor de tomos
como oxigeno, halgenos, azufre y nitrgeno

Los O.M. son el resultado del solapamiento de O.A. Cuando

se combinan 2 O.A se origina 1 O.M. enlazante (baja energa)
y otro antienlazante (alta energa)
Los orbitales moleculares asociados con los enlaces sencillos,
en las molculas orgnicas, se denominan orbitales sigma
(), y los electrones correspondientes son electrones .

59

Tipos de electrones absorbentes

La distribucin de la densidad de carga de un orbital sigma es

rotacionalmente simtrica alrededor del eje del enlace.

El doble enlace en una molcula orgnica contiene dos tipos de

orbitales moleculares: un orbital sigma () correspondiente a un par
de electrones enlazantes y un orbital molecular pi () asociado con
el otro par.

Los orbitales se forman por el solapamiento paralelo de orbitales

atmicos p. Su distribution de carga se caracteriza por un plano
nodal a lo largo del eje del enlace y una densidad mxima en las
regiones superior e inferior al plano

(c) orbital

(d) orbital *

60

Muchas molculas orgnicas contienen electrones no

enlazantes. Estos electrones, se designan con el smbolo n.
La energa para los distintos tipos de orbitales moleculares
difiere significativamente.
El nivel de energa de un electrn no enlazante se encuentra
entre niveles de energa de los orbitales y enlazantes y
antienlazantes.
Las transiciones electrnicas entre los distintos niveles de
energa, son posible cuatro tipos de transiciones

n *

n*

*
61

Transiciones *. Poseen una energa asociada muy elevada, y origina bandas de

absorcin en el UV de vaco. Por ellos no tienen inters prctico y no se le dedica atencin
en anlisis

Transiciones n * . Los compuestos saturados que contienen pares de electrones no

compartidos (electrones no enlazantes). En general, estas transiciones requieren menos
energa que las del tipo * y originan absorciones en la regin comprendida entre 150 y
250 nm, apareciendo, la mayora de los picos de absorcin, por debajo de 200 nm.

La Tabla 14-1 muestra los datos de absorcin de algunas transiciones n *

caractersticas.

Los requerimientos energticos para dichas transiciones dependen fundamentalmente del

tipo de enlace y en menor medida de la estructura de la molcula.

Las absortividades molares se encuentran entre 100 y 3000 l mol-1 cm-1

Los mximos de absorcin tienden a desplazarse a longitudes de onda ms cortas en
presencia de disolvente polares como agua o etanol

62

Transiciones n* y *

Las transiciones al estado n,* son generalmente bajas y

normalmente las se encuentran entre 10 y 100 l mol-1 cm-1
las transiciones ,* poseen valores ente 1000 y 10000 l mol-1 cm1.
Otra diferencia caracterstica entre los dos tipos de transiciones
es:
Los picos asociados a transiciones n,* se desplazan a longitudes
de onda ms cortas (desplazamiento hipsocrmico o hacia el
azul), cuando aumenta la polaridad del disolvente

Los picos asociados a transiciones ,* se desplazan a longitudes

de ondas ms largas (desplazamiento batocrmico, hacia el rojo)

63

Transiciones n* y *

El efecto hipsocromico surge de una mayor solvatacin del

par de electrones no enlazantes que disminuye la energa del
orbital n salto mayor mayor corta

Los efectos de este tipo ms intenso (desplazamiento hacia

el azul de 30 nm o ms) se observan con disolventes polares
prticos, como agua o alcohol, en los cuales es frecuente la
formacin de enlaces de hidrgeno entre los protones del
disolvente y el par de electrones no enlazantes

64

Cromforos orgnicos

Los mximos permiten la identificacin de grupos

funcionales, pero esta identificacin es difcil (efecto del
disolvente, etc)

Efecto de la conjugacin de los cromforos

En la teora de los orbitales moleculares, se considera

que los electrones estn deslocalizados por
conjugacin

El efecto de esta deslocalizacin es el descenso del nivel

de energa del orbital *, dotndole de menos carcter
antienlazante.

Como consecuencia, los mximos de absorcin se

desplazan hacia longitudes de onda mas largas (menor
energa y mayor ).
65

Cromforos orgnicos

Como se ve en la Tabla la absorcin de los multicromforos en una

molcula orgnica sencilla, es aproximadamente aditiva.

Olefina-diolefina: aumenta porque la probabilidad es mayor (mas

dobles enlaces) pero no si no est conjugada

66

Cromforos orgnicos

El 1,3-butadieno, CH2=CHCH=CH2, tiene una banda

de absorcin intensa que se desplaza 20 nm hacia
longitudes de onda mas largas si se compara con el
pico correspondiente a un dieno no conjugado

Cuando los dobles enlaces conjugados son tres, el

efecto batocrmico es an mayor

La conjugacin de cromforos tiene un profundo efecto

sobre las propiedades espectrales.

67

Efecto de la conjugacin

La conjugacin entre el doble enlace del oxgeno de los

aldehdos, cetonas y cidos carboxlicos y un doble enlace
olefnico da lugar a un comportamiento similar

Para los aldehdos y cetonas , - insaturados, el dbil pico de

absorcin correspondiente a las transiciones n, * se desplaza
40 nm o ms hacia longitudes de onda ms largas.

Adems, aparece un pico de absorcin intenso correspondiente

a la transicin , *.

68

A medida que
aumenta la
conjugacin, el
sistema absorbe a
mayores , o sea
ms hacia el
visible

69

A mayor conjugacin de sistemas aromticos la absorcin se

desplaza al visible
Este
compuesto es
de color
anaranjado

70

Caractersticas de absorcin de algunos

cromferos comunes

71

Absorcin de sistemas aromticos

Los espectros UV de los hidrocarburos aromticos

se caracterizan por tres grupos de bandas cuyo
origen son las transiciones *.

Por ejemplo, el benceno presenta un pico de

absorcin intenso a 184 nm (max = 60.000), una
banda debil, llamada banda E2 a 204 nm (max =
7.900) y un pico aun mas debil, denominado
banda B, a 256 nm (max = 200).

Las bandas de las longitudes de onda largas del

espectro del vapor de benceno, y de muchos otros
compuestos aromaticos contienen una serie de
picos agudos que se deben a la superposicion
de las transiciones vibracionales sobre las
transiciones electrnicas bsicas.

Los disolventes tienden a reducir (o eliminar) esta

estructura fina como lo hacen ciertos tipos de
sustitucin.

Espectro de
absorcin de la
1,2,4,5-tetrazina
72

Las tres bandas caractersticas del benceno se ven

muy afectadas por la sustitucin del anillo

Los efectos sobre las bandas de las dos longitudes

de onda mas largas tienen un inters especial porque
pueden estudiarse con un equipo
espectrofotomtrico comn

Por definicin, un auxocromo es un grupo funcional

que no absorbe en la regin ultravioleta pero que
tiene el efecto de desplazar los picos del cromforo
hacia longitudes de onda ms largas, as como de
incrementar sus intensidades.
73

Los grupos OH y -NH2 tienen un efecto auxocrmico

sobre el cromforo benceno, particularmente en
relacin con la banda B.

Los sustituyentes auxocrmicos tienen al menos, un

par de electrones n capaces de interaccionar con los
electrones del anillo. Esta interaccin tiene,
aparentemente, el efecto de estabilizar el estado
*, disminuyendo, de ese modo, su energa
(aumentando la y la absortividad molar)

El resultado es un desplazamiento batocrmico.

74

Adems, el efecto auxocrmico es ms pronunciado para el

anin fenolato que para el propio fenol, probablemente debido
a que el anion tiene un par extra de electrones no
compartidos que contribuyen en la interaccion.

Por otra parte, con la anilina, los electrones no enlazantes

se han perdido al formarse el cation anilinio, y, como
consecuencia el efecto auxocromico desaparece.

75

Absorcin por aniones inorgnicos

Algunos aniones inorgnicos presentan picos
de absorcin ultravioleta que son consecuencia
de las transiciones n*.
Como ejemplos se incluyen los iones nitrato
(313 nm), carbonato (217 nm), nitrito (360 y
280 nm), azida (230 nm) y tritiocarbonato
(500 nm).

76

ABSORCIN EN LA QUE
PARTICIPAN ELECTRONES d y f

La mayora de los iones de los metales de

transicin absorben en la regin ultravioleta o visible
del espectro.

Para la serie de lantnidos y actnidos, los

procesos de absorcin son el resultado de transiciones
electrnicas de los electrones 4f y 5 f;
Para los elementos de la 1 y 2 serie de los
metales de transicin, los electrones responsables
son los 3d y 4d.
77

Absorcin por iones lantnidos y

actnidos

Los iones de la mayora de los elementos lantnidos y

actnidos absorben en las regiones ultravioleta y visible.
A diferencia del comportamiento de la mayora de los
absorbentes inorgnicos y orgnicos:
sus espectros estn formados por picos de
absorcin caractersticos, bien definidos y
estrechos,
se ven muy poco afectados por el tipo de ligando
asociado con el ion metlico.
78

Absorcin por iones lantnidos y

actnidos
Espectros
caractersticos de
cuatro lantnidos

79

Absorcin por los elementos de la 1 y la 2 serie

de los metales de transicin

Los iones y complejos de los 18 elementos de la 1

de las dos series de transicin tienden a absorber
radiacin visible en todos sus estados de oxidacin.

Las bandas de absorcin son, con frecuencia,

anchas

Estn enormemente influenciadas por los factores

qumicos del entorno.

Ej. del efecto del entorno se encuentra en el color azul plido

del ion cobre (II) acuoso y el color azul, mucho ms oscuro,
del complejo del cobre con amonaco.
80

Absorcin por los elementos de la 1 y la

2 serie de los metales de transicin

81

Absorcin por los elementos de la 1 y la

2 serie de los metales de transicin

La serie de los metales de transicin se caracteriza

por tener cinco orbitales d parcialmente ocupados
(3d en la primera serie y 4d en la segunda), cada uno
de ellos capaces de alojar a un par de electrones.

Las caractersticas espectrales de los metales de

transicin suponen transiciones entre los distintos
niveles de energa de estos orbitales d.

82

Absorcin por los elementos de la 1 y la

2 serie de los metales de transicin

Se han propuesto dos teoras (campo cristalino y campo ligando)

para explicar los colores de los iones de los metales de transicin
y la profunda influencia del entorno qumico sobre estos colores.

La teora del campo cristalino, es la ms sencilla de las dos

teoras y es adecuada para una comprensin cualitativa. Sin
embargo, el tratamiento, ms complejo, de los orbitales
moleculares, proporciona un tratamiento cuantitativo del fenmeno
ms adecuado.

83

Absorcin por los elementos de la 1 y la

2 serie de los metales de transicin

Premisa comn:

las energas de los orbitales d de los iones de los metales de transicin en

disolucin no son iguales
la absorcin supone la transicin de los electrones de un orbital d de
menor energa a otro de mayor energa.
en ausencia de un campo elctrico o magntico externo (como en el
estado gaseoso diluido), las energas de los cinco orbitales d son
idnticas y, un electrn, para pasar de un orbital a otro, no necesita
absorber radiacin.
cuando tiene lugar la formacin de un complejo en disolucin entre el ion
metlico y el agua o algn otro ligando, surge el desdoblamiento de las
energas de los orbitales d. Este efecto se debe a las diferentes fuerzas
de repulsin electrostticas entre el par de electrones del donador y los
electrones en los distintos orbitales d del ion metlico central.

84

Absorcin por los elementos de la 1 y la

2 serie de los metales de transicin
Ocupan los espacios
entre los tres ejes
densidad electrnica
mnima a lo largo de los
ejes y mxima en la
diagonal entre los ejes

Densidades electrnicas
dirigidas a lo largo de los
ejes

Distribucin de la densidad electrnica en los cinco

orbitales d
85

Absorcin por los elementos de la 1 y la

2 serie de los metales de transicin

Consideremos ahora un ion de un metal de transicin unido por

enlaces de coordinacin a seis molculas de agua, los ligandos
estn distribuidos de forma simtrica alrededor del tomo central,
cada ligando localizado al final de los tres ejes la estructura
octadrica resultante es la orientacin ms comn para los
complejos de los metales de transicin.

Los extremos negativos de los dipolos del agua estn orientados

hacia el ion metlico y los campos elctricos de estos dipolos
tienden a ejercer un efecto repulsivo sobre todos los orbitales d,
de este modo aumentan su energa los orbitales han sido
desestabilizados.

86

Absorcin por los elementos de la 1 y la

2 serie de los metales de transicin

La densidad de carga mxima de los orbitales dz2 est situada a

lo largo de los ejes de unin. El campo negativo de un ligando
unido tiene adems un efecto mayor sobre este orbital que sobre
los orbitales dxy, dxz y dyz, cuyas densidades de carga no
coinciden con los ejes de unin.

Estos ltimos orbitales se desestabilizarn de la misma forma,

puesto que difieren uno de otro slo en lo que respecta a la
orientacin.

El efecto del campo elctrico sobre los orbitales dx2-y2, es menos

obvio, pero clculos cunticos han demostrado que est
igualmente desestabilizado que el orbital dz2.

87

Absorcin por los elementos de la 1 y la

2 serie de los metales de transicin

As, el diagrama de niveles de energa para la configuracin

octadrica muestra que las energas de todos los orbitales d
aumentan en presencia de un campo ligando, pero, adems, que
los orbitales d se desdoblan en niveles que difieren en un de
energa

88

Absorcin por los elementos de la 1 y la

2 serie de los metales de transicin

En los diagramas de energa para complejos con cuatro enlaces

coordinados:
Configuracin tetradrica, en la que los cuatro grupos se
distribuyen simtricamente en el espacio alrededor del ion
metlico,

Configuracin plano cuadrada, en la que los cuatro ligandos se

encuentran en el mismo plano que el ion metlico y equidistantes
al mismo.

Los modelos de desdoblamiento de los orbitales d

correspondientes a cada configuracin se pueden deducir a partir
de argumentos similares a los utilizados en la estructura
octadrica.

89

Absorcin por los elementos de la 1 y la

2 serie de los metales de transicin

La magnitud del depende de varios factores, que incluyen la

carga del ion metlico y la posicin del elemento en el sistema
peridico.

Una variable importante atribuible al ligando es la fuerza del

campo ligando, que es una medida de la intensidad con que un
grupo complejante desdoblar la energa de los electrones d;

Es posible ordenar los ligandos ms comunes en orden creciente

de fuerzas del campo ligando (menor radio-volumen):

I- < Br - < Cl- < F- < OH- < C2O42- ~ H2O < SCN- < NH3 <
etilendiamina < o-fenantrolina < NO-2<CN-.

90

ABSORCIN POR TRANSFERENCIA DE CARGA

Desde el punto de vista analtico, las especies que

presentan absorcin por transferencia de carga
tienen particular importancia, ya que sus
absortividades molares son muy altas (mx >
10.000).
As, estos complejos proporcionan una sensibilidad
muy elevada para la deteccin y determinacin de
especies absorbentes.
Muchos complejos inorgnicos presentan
absorcin por transferencia de carga y por ello se
llaman complejos de transferencia de carga.
Ejemplos:

complejos fenlicos y complejos de tiocianato con el

hierro(III)
complejo de o-fenantrolina de hierro(II)
complejo yodo-yoduro coloreado con almidn (I3- )
complejo ferro/ferricianuro responsable del color azul
de Prusia.
91

ABSORCIN POR TRANSFERENCIA DE

CARGA

Para que un complejo presente un espectro de transferencia de carga, es

necesario que uno de sus componentes tenga caractersticas de dador de
electrones y el otro componente tenga propiedades de aceptor de
electrones

La absorcin de la radiacin implica, entonces, la transferencia de un

electrn desde el dador hasta un orbital que est en gran parte asociado
con el aceptor
Como consecuencia, el estado excitado es el resultado de un proceso tipo
oxidacin/reduccin interno. Este comportamiento difiere del de un
cromforo orgnico, donde el electrn, en el estado excitado, est en un
orbital molecular formado por dos o ms tomos
En el ejemplo del complejo hierro(III)/tiocianato. La absorcin de un fotn
da lugar a la transferencia de un electrn del ion tiocianato a un orbital
asociado con el hierro(III). El producto es, por tanto, una especie excitada
formada predominantemente por el ion hierro(II) y el radical neutro
tiocianato SCN
92

ABSORCIN POR TRANSFERENCIA DE

CARGA

Como en otros tipos de excitacin electrnica, el electrn, bajo condiciones

normales, tras un breve perodo, vuelve a su estado original
Sin embargo, ocasionalmente, puede tener lugar la disociacin del
complejo excitado, originando productos de oxidacin/reduccin
fotoqumica
En la mayora de los complejos de transferencia de carga que incluyen un
ion metlico, el metal acta como aceptor de electrones
Una excepcin es el complejo de ortofenantrolina con el hierro(II) o el
cobre(I), donde el ligando es el aceptor y el ion metlico es el dador.

93

Complejos de transferencia de carga con

compuestos orgnicos

La quinhidrona (complejo 1:1 de quinona e

hidroquinona), que muestra una fuerte
absorcin en la regin visible.

Los complejos de yodo con aminas,

compuestos aromticos y sulfuros.

94

ANLISIS CUALITATIVO

Las aplicaciones de la espectrofotometra ultravioleta y

visible en el anlisis cualitativo son limitadas, ya que el
nmero de mximos y mnimos de absorcin
correspondiente a una molcula es relativamente
pequeo.

Por tanto, una identificacin inequvoca es a menudo

imposible.

MODALIDADES DE REGISTRO GRFICO DE DATOS ESPECTRALES

En espectroscopia molecular cualitativa existen diferentes

tipos de registros espectrales.

Lo ms habitual es representar en ordenadas el

porcentaje de transmitancia, la absorbancia, el logaritmo
de la absorbancia o la absortividad molar.

En abscisas es habitual representar la longitud de onda o

el nmero de onda, aunque en algunas ocasiones se
emplea la frecuencia.
95

Disolventes

Al elegir un disolvente no slo se tiene que tener

en cuenta su transparencia sino tambin sus
posibles efectos sobre el sistema absorbente

Con bastante frecuencia, los disolventes polares

como el agua, alcoholes, esteres y cetonas
tienden a borrar la estructura fina del espectro
que resulta de los cambios vibracionales

Es ms probable obtener espectros parecidos a

los originados en fase gaseosa cuando se
utilizan disolventes no polares como los
hidrocarburos

Las posiciones de los mximos de absorcin se

ven afectadas por la naturaleza del disolvente.
Es imprescindible utilizar el mismo disolvente
cuando se comparan espectros de absorcin con
fines de identificacin.

96

Disolventes

En la Tabla se enumeran algunos

disolventes comunes y la longitud de
onda aproximada por debajo de la
cual no pueden usarse debido a la
absorcin

Este mnimo depende en gran

medida de la pureza del disolvente

Entre los disolventes habituales para

espectrofotometra ultravioleta se
incluyen agua, etanol del 95 por 100,
ciclohexano y 1,4-dioxano

Para la regin visible, cualquier

disolvente incoloro es til
97

Deteccin de grupos funcionales

Aunque la espectroscopa UV-visible no puede proporcionar la

identificacin inequvoca de un compuesto orgnico es til para detectar la
presencia de ciertos grupos funcionales que actan como cromforos.

Ejemplos:
Una banda de absorcin dbil en la regin de 280 a 290 nm, que se
desplaza hacia longitudes de onda ms cortas cuando aumenta la
polaridad del disolvente, indica firmemente la presencia de un grupo
carbonilo.
Una banda de absorcin dbil prxima a 260 nm con indicios de estructura
fina vibracional constituye una evidencia de la existencia de un anillo
aromtico.
Para confirmar la presencia de una amina aromtica o de una estructura
fenlica se pueden comparar los efectos del pH en los espectros de las
disoluciones de la muestra (caso fenol y anilina) en el anlisis cuantitativo.
98

Analisis cuantitativo

Caractersticas de los mtodos espectrofotomtricos

Gran aplicabilidad tanto para sistemas orgnicos como inorgnicos

Sensibilidades caractersticas de 10-4 a 10-5 M

Este intervalo puede ampliarse de 10-6 a 10-7 M (con ciertas

modificaciones)

Selectividad de moderada a alta

Buena precisin

Adquisicin de datos fcil y rpida.

99

Campo de aplicacin
Especies absorbentes

Cromforos orgnicos
Cromforos inorgnicos

Co (II), Ni(II), Cu(II)

Nitrito, nitrato y cromato;
Tretrxidos de osmio y rutenio (amarillos)
Yodo molecular (amarillo en medio acuoso)
Ozono (azul)

100

Campo de aplicacin
Especies no absorbentes

Reactivos inorgnicos:
SCN- para determinar

H2O2 para determinar

I- para determinar

Fe3+ (rojo), Co2+(azul)

Mo6+(amarillo, rojo en presencia de
reductor)
Ti4+(amarillo TiO(H2O2)2+)
V5+(rojizo, ion peroxivandico, VO22+)
Cr6+ (color azul intenso extraible en eter
o alcohol amlico, CrO5, dos grupos
perxido)
Bi3+ , Pd2+, Te4+(rojo TeI62-)

101

Campo de aplicacin
Especies no absorbentes

Reactivos orgnicos:
o-fenantrolina
Dimetilglioxima
Dietilditiocarbamato
Ditizona (difeniltiocarbazona)

Fe(II)
Ni(II) y Pd(II)
Cu(II)
Pb(II), Hg(II)

102

103

Aspectos prcticos de las determinaciones

espectrofotomtricas

Es necesario establecer adecuadamente las condiciones de trabajo para

qua la determinacin espectrofotomtrica se aplique al problema analtico
que nos interese de manera adecuada.
Una vez fijadas estas condiciones de trabajo se procede a la etapa de
calibrado que ya se ha comentado con anterioridad.
Seleccin de la longitud de onda: Las medidas se realizan normalmente
en el mximo de absorcin del espectro correspondiente

La variacin de absorbancia con la longitud de onda en esa zona es muy

pequea y de esa forma se asegura el cumplimiento de la ley de Beer.
En esta zona de medida la sensibilidad del ensayo ser mxima
Se asegura que la incertidumbre originada por las limitaciones de los
instrumentos para reproducir con precisin la seleccin de la longitud de onda
sea ms pequea

104

Aspectos prcticos en las medidas espectrofotomtricas

Seleccin de las condiciones del medio de reaccin: Las variables

ms usuales que se tiene en cuenta al poner a punto un procedimiento
espectrofotomtrico son las siguientes:

Naturaleza del disolvente

pH de la disolucin
Temperatura
Fuerza inica del medio (que evala la presencia de otras sales en la
disolucin)
Presencia de otras especies interferentes.
Los efectos de estas variables deben conocerse y elegir las condiciones
ptima para la respuesta del sistema.

Limpieza y manipulacin de las cubetas: Es necesario contrastar el par

de cubetas que se utilice en el anlisis para detectar las diferencias que
se vayan generando entre ellas como consecuencia de rozaduras,
ataques con cidos y desgaste por el uso.
Es igualmente importante el uso de tcnicas de limpieza y secado
adecuadas.
105

Anlisis de mezclas de sustancias absorbentes

La absorbancia total de una disolucin, a una

longitud de onda dada, es igual a la suma de las
absorbancias que presentan los componentes
individuales.
A = M b cM + N b cN (para )
A = M b cM + N b cN (para )

Esta relacin hace posible la determinacin

cuantitativa de los constituyentes individuales de
una mezcla, incluso si su espectro se solapa.

Considrese, por ejemplo, los espectros de M y

de N, que se muestran en la Figura.

Obsrvese que no existe ninguna longitud de

onda en la cual la absorbancia de esta mezcla
se deba exclusivamente a uno de los
componentes; as, la determinacin de M o N
es imposible con una nica medida

106

Las cuatro absortividades molares M, N, M, N, pueden calcularse a

partir de disoluciones estndar individuales de M y de N, o mejor, a partir
de las pendientes de sus representaciones graficas de la ley dc Beer.
Las absorbancias de la mezcla A' y A", se pueden medir
experimentalmente, al igual que b, el espesor de la cubeta. As, a partir de
estas dos ecuaciones, se pueden calcular fcilmente las concentraciones
de los constituyentes individuales. cM y cN.
Estas relaciones son validas slo si se cumple la ley de Beer y si los dos
componentes se comportan de manera independientes el uno del otro. La
mayor exactitud en un anlisis de este tipo se alcanza cuando se
seleccionan longitudes de onda en las que las diferencias entre las
absortividades molares sean grandes.
Se pueden analizar mezclas que contengan ms de dos especies
absorbentes, si se hace una medida adicional de absorbancia para cada
componente aadido. Sin embargo, la incertidumbre en los datos
resultantes se hace mayor cuando el nmero de medidas aumenta.
Para los anlisis se necesitan los espectros de las disoluciones patrn de
cada uno de los componentes
107

Espectrofotometra derivada y de longitud de onda

dual

En la espectrofotometra derivada, los espectros se obtienen representando

grficamente la derivada primera o de mayor orden, de la absorbancia o de
la transmitancia, con respecto a la longitud de onda, en funcin de la
longitud de onda. A menudo estas representaciones grficas revelan
detalles espectrales que se pierden en un espectro ordinario.
A veces se pueden realizar las medidas de concentracin de un analito en
presencia de un interferente con ms facilidad y exactitud.
Como desventaja hay que sealar una reduccin en la relacin seal/ruido
que acompaa a la obtencin de las derivadas.
En muchas zonas de las regiones ultravioleta y visible la relacin
seal/ruido no es un factor limitante serio; es en estas regiones donde ms
se utilizan los espectros derivados.
Una desventaja adicional de la espectrofotometra derivada es que,
generalmente, necesita un equipo ms costoso
108

Dispositivos de modulacin de la
longitud de onda

Se han desarrollado varios procedimientos para conseguir la

modulacin de la longitud de onda.

En algunos de ellos, se barre un intervalo de longitudes de onda de

unos pocos nanmetros rpida y repetitivamente mientras que se
hace un barrido del espectro de la forma usual.

La amplitud de la seal de corriente alterna resultante en el detector

es una buena aproximacin de la derivada del espectro respecto de
la longitud de onda. El barrido rpido repetitivo se obtiene por algn
medio mecnico, como la oscilacin o la vibracin de un espejo, una
rendija o un elemento dispersante de un monocromador

109

Dispositivos de modulacin de la longitud

de onda-II

Un segundo esquema para la modulacin, requiere el uso

de un sistema dispersante doble ordenado de tal manera
que dos haces de longitudes de onda ligeramente
diferentes (normalmente 1 2 nm) van a incidir
alternativamente en una cubeta de muestra y su detector;
no se utiliza haz de referencia.

El parmetro que se genera es la diferencia entre las

seales alternas, que da una buena aproximacin de la
derivada de las absorbancias en funcin de la longitud de
onda (A/).

La Figura representa un esquema de un instrumento de

longitud de onda dual.

Obsrvese que la cubeta de referencia no se utiliza y la

cubeta de la muestra se expone alternativamente a la
radiacin procedente de cada uno de los
monocromadores.

Generalmente, los instrumentos de longitud de onda dual

tambin pueden trabajar en la modalidad de longitud de
onda sencilla, haciendo pasar alternativamente la
radiacin a travs de la cubeta de referencia y de la
muestra.
110

Aplicaciones de los espectros derivados

Muchas de las aplicaciones ms

importantes de la espectroscopia
derivada en las regiones ultravioleta
y visible son las identificaciones
cualitativas de especies, en las
cuales la observacin en detalle
(aumentando la figura) de un
espectro derivado hace posible
distinguir entre compuestos que
tienen espectros solapados.
La Figura ilustra la manera en que
una grafica derivada puede revelar
los detalles de un espectro formado
por tres picos de absorcin
solapados.

111

Aplicaciones de la espectroscopia de
derivadas

La espectrofotometra de longitud de onda dual ha

demostrado ser particularmente til para la obtencin de
espectros de absorcin ultravioleta/visible de analitos
presentes en disoluciones turbias, donde la dispersin
de la luz elimina los detalles de espectro de absorcin.
Por ejemplo, tres aminocidos, el triptofano, la tirosina y
la fenilalanina contienen cadenas aromticas
secundarias, que presentan picos de absorcin agudos
en la zona de 240 a 300 nm.
Estos picos agudos no estn claros en los espectros de
las preparaciones de protenas tpicas, tales como la
albmina bovina o de huevo, ya que las molculas
grandes dispersan fuertemente la radiacin, dando lugar
slo a un pico de absorcin suave tal como el que
aparece en la Figura a. La estructura fina aromtica se
descubre en los espectros de primera y segunda
derivada, como muestran las curvas (b) y (c).

112

Uso de la espectrofotometra dual

para reducir interferencias

La espectrofotometra de longitud de onda dual tambin es til

para el anlisis de un analito en presencia de una interferencia
espectral.

En estos casos, el instrumento trabaja en la modalidad de no

barrido, midiendo las absorbancias a dos longitudes de onda en
las cuales la interferencia tiene idnticas absortividades molares,
mientras que el analito absorbe con ms intensidad en una de
estas longitudes de onda que en la otra.

La absorbancia diferencial es directamente proporcional a la

concentracin del analito

113

Valoraciones fotomtricas

Las medidas espectrofotomtricas pueden utilizarse para detectar

el punto final de una valoracin siempre que el analito, el reactivo
o el producto final de la valoracin absorban radiacin. En
ocasiones se aade un indicador coloreado que nos marca el
punto final.

Curvas de valoracin

Una curva de valoracin fotomtrica es una representacin

grfica de la absorbancia corregida por los cambio de volumen,
en funcin del volumen de valorante.

Si se eligen las condiciones adecuadas, la curva constara de dos

regiones lineales con diferentes pendientes, una se obtiene al
principio de la valoracin y la otra se localiza ms all de la zona
del punto de equivalencia; el punto final se conoce por la
interseccin de los dos tramos lineales extrapolados.
114

Se consideran los siguientes casos:

(a) La valoracin de una especie no absorbente con un valorante coloreado que
origina un producto de reaccin incoloro da lugar a una lnea hori-zontal en las
etapas iniciales, seguido de un rpido ascenso de la absorbancia pasado el
punto de equivalencia
(b) La formacin de un producto coloreado, a partir de reactivos incoloros,
produce inicialmente un aumento lineal en la absorbancia, seguido de una
regin en la cual la absorbancia se mantiene independiente del volumen de
reactivo aadido
(c) La sustancia que se valora es coloreada, pero el compuesto resultante es
incoloro, as como el reactivo
(d) La sustancia que se valora y el valorante absorben a la longitud de onda de
medida, pero no el producto de la reaccin
(e) Tanto el producto de la reaccin como el valorante absorben, pero con
absortividades molares diferentes, siendo la del producto de la reaccin menor
que la del valorante. La muestra no absorbe
(f) el mismo caso anterior, pero ahora producto de la reaccin> valorante
115

1: Analito no absorbe; reactivo titulante absorbe; producto no absorbe.

2: Analito no absorbe; reactivo titulante no absorbe; producto absorbe.
3: Analito absorbe; reactivo titulante no absorbe; producto no absorbe.
4: Analito absorbe; reactivo titulante absorbe; producto no absorbe.
5: Analito no absorbe; reactivo titulante absorbe; producto absorbe.
6: Analito no absorbe; reactivo titulante absorbe; producto absorbe.
116

Condiciones de una valoracin

fotomtrica

Con objeto de obtener un punto final fotomtrico satisfactorio, es

necesario:

Que el(los) sistema(s) absorbente(s) cumpla(n) la ley de Beer,

de otro modo, la curva de valoracin carecera de las regiones
lineales necesarias para la extrapolacin el punto final.

Adems, como consecuencia de los cambios de volumen, es

necesario corregir la absorbancia. Los valores observados se
multiplican por (V + v)/V, donde V es el volumen original de la
disolucin y v es el volumen de valorante aadido.

117

Instrumentacin en las valoraciones

fotomtricas

Las valoraciones fotomtricas se realizan en un espectroftometro o un fotmetro que se ha

modificado para poder intercalar el recipiente de valoracin en la trayectoria de la luz.

Como alternativa, se puede utilizar una cubeta tipo sonda.

Despus de ajustar el cero de la escala de medida, se deja pasar la radiacin a travs de la

disolucin que contiene el analito y el instrumento se ajusta variando la intensidad de la
fuente o la sensibilidad del detector hasta obtener una lectura de absorbancia adecuada.

No es necesario la medida de la absorbancia absoluta relacionada unvocamente con la

concentracin, sino la variacin de la absorbancia con el valorante hasta alcanzar el punto
final.

Los datos de la valoracin se recogen sin modificar el ajuste del instrumento.

Normalmente se utilizan recipientes cilndricos y se debe tener cuidado de evitar cualquier

movimiento del mismo que pueda alterar la longitud del paso ptico

Para las valoraciones fotomtricas se han utilizado tanto los fotmetros de filtro como los
espectrofotmetros. Sin embargo, se prefieren los ltimos, ya que sus anchuras de banda,
ms estrechas, aumentan la probabilidad de cumplimiento de la ley de Beer.

118

Aplicacin de las valoraciones fotomtricas

Las valoraciones fotomtricas proporcionan resultados ms exactos que los obtenidos

mediante un anlisis fotomtrico directo, ya que para determinar el punto final se
utilizan los datos de varias medidas.
Adems, la presencia de otras especies absorbentes puede no interferir, ya que solo se
mide un cambio en la absorbancia.
El punto final obtenido fotomtricamente utiliza medidas alejadas del punto final, por lo
que las reacciones de valoracin no necesitan tener constantes de equilibrio muy
elevadas como ocurre en valoraciones que utilizan medidas prximas al punto de
equivalencia

Por esta misma razn pueden valorarse disoluciones relativamente diluidas.

El punto final obtenido fotomtricamente se ha aplicado a todo tipo de reacciones.

Muchos de los reactivos utilizados en las valoraciones de oxidacin/reduccin tienen

espectros de absorcin caractersticos y, de este modo, producen puntos finales
detectables fotomtricamente.
Los indicadores cido/base se han utilizado para valoraciones fotomtricas de
neutralizacin.
119

Ejemplo de valoracin fotomtrica

La valoracin fotomtrica se ha utilizado en las

valoraciones con EDTA y con otros agentes
complejantes.

En la figura se observa la valoracin sucesiva de

bismuto(III) y cobre(II) con AEDT.

A 745 nm, ninguno de los cationes ni el reactivo

absorben, tampoco lo hace el complejo ms estable del
bismuto, que se forma en la primera parte de la
valoracin; sin embargo, si absorbe el complejo del
cobre. Por tanto la disolucin no presenta absorbancia
hasta que todo el bismuto se ha valorado.

En el momento en que comienza a formarse el

complejo de cobre tiene lugar un aumento de la
absorbancia. Esta contina aumentando hasta que se
alcanza el punto de equivalencia del cobre. Las
posteriores adiciones de reactivo no producen ms
cambios en la absorbancia.

Se obtienen dos puntos finales bien definido

120

Estructura de los ligandos fotomtricos:

Grupos especficos de reaccin

La mayora de los ligandos usados actualmente en fotometra son

sustancias orgnicas.
No siempre es posible predecir cuando un ligando de una constitucin
dada ha de actuar de una manera selectiva o sensible sobre ciertos iones y
solo la experiencia permite resolver estos problemas en muchos casos.
Sin embargo, se conocen las causas de determinadas propiedades
selectivas y pueden establecerse unas reglas orientadoras al respecto.
La gran sensibilidad y selectividad que se consigue en la determinacin
fotomtrica de metales mediante la formacin de complejos con ligandos
orgnicos estriba en que estos poseen en su molcula determinados
grupos activos que son los que producen las fuerzas de enlace
necesarias para la formacin del quelato.
Es decir, deben poseer al menos dos grupos cidos (aninicos) o dos
grupos bsicos (Lewis) coordinativos o un grupo acido y otro bsico.
121

Grupos activos de reaccin

Los grupos cidos capaces de ceder protones pueden ser -OH (hidroxilo) -SH
(mercapto) e -NH (imino) entre otros.
Pueden estar unidos directamente a la cadena hidrocarbonada como en el caso
del fenol o unidos a otros tomos que a su vez se unen a la cadena formando los
grupos:

Los grupos bsicos de Lewis poseen tomos con pares de electrones libres para
aportar a la configuracin electrnica del metal. Estos tomos pueden ser S, O y N
y los grupos que forman generalmente enlaces de coordinacin son:

La presencia de estos grupos activos no es suficiente para asegurar la capacidad

de formacin de complejos de un compuesto orgnico. Estos grupos deben
localizarse en la molcula en posiciones tales que al formar el complejo con el ion
metlico se originan anillos de un tamao adecuado; los de cuatro, cinco o seis
eslabones son los que confieren mayor estabilidad.
122

Grupos activos de reaccin

La reactividad de estos grupos activos va dirigida a ciertos iones metlicos,

por eso se les llama grupos especficos o selectivos de reaccin.
El resto de la molcula, aunque no afecta sustancialmente a la reactividad,
condiciona las propiedades del complejo, siendo de mayor importancia
desde un punto de vista fotomtrico el color y la solubilidad.
Por tanto, la presencia de un grupo especfico de reaccin no es suficiente
para asegurar la selectividad de un ensayo, y en la mayora de los casos
es necesario condicionar el medio para que la reaccin coloreada se
produzca, fundamentalmente el pH. De ah que es ms correcto hablar de
reacciones especficas o selectivas que de reactivos con estas
propiedades.
En la Tabla se han recogido los grupos especficos de reaccin ms
importantes. Desde el punto de vista fotomtrico unos de los grupos
especficos de reaccin mas interesantes es el = N-C-C-N = (ferroina) o
grupo del Fe (II) y el R-C=N-C-C-N=C-R (cuproina) o grupo del Cu (I), que
dan complejos solubles que absorben a 510 nm y 480 nm,
respectivamente.
123

La formacin de un complejo coloreado depende de la naturaleza del ligando y del

ion metlico.
Para un mismo ion el color y su intensidad (sensibilidad) estn condicionados por la
naturaleza del ligando, es decir por la presencia de estas agrupaciones especificas
y tambin por el resto de la molcula.
Los elementos de la serie de transicin son los que fundamentalmente originan
complejos coloreados dando con frecuencia bandas de transferencia de carga
metal-ligando o ligando-metal, en la zona visible del espectro.
Estas bandas se hallan generalmente separadas de la zona de absorcin del propio
ligando (bandas asociadas a transferencia de electrones de la molcula) y su
intensidad es por lo general mayor que las bandas de transicin d-d, las cuales
tambin aparecen separadas de las del ligando.
De ah que, en las medidas fotomtricas realizadas en la regin espectral de las
bandas de transferencia de carga, el exceso de ligando (que generalmente se
aade en exceso para asegurar la formacin del complejo) no interfiere en la
determinacin analtica. La gran absortividad molar de estas bandas permite
procedimientos analticos muy sensibles.
124

Segn el tipo de grupos cidos o bsicos que posea un ligando,

la carga del ion metlico y la estequiometra del complejo, este
tendr o no carga y por tanto ser o no soluble.

Cuando el ligando posee slo grupos bsico de Lewis (dadores

de electrones) los quelatos estn cargados y son solubles como
los de Fe-ferrona y Cu-cuprona.

Si posee grupos cidos que compensan las cargas del metal (de
acuerdo con el nmero de ligandos que entran) los complejos
son insolubles como el Ni-dimetilglioxima y aunque se puede
extraer, no siempre renen buenas condiciones para la
fonometra.

De ah que con frecuencia se recurra a la introduccin de grupos

que confieren solubilidad tales como -OH, -COOH, -SO3H, etc.

125

Grupos activos de creacin

126

Determinacin de aniones en aguas

Nitratos y nitritos
Generalmente, el contenido de nitratos en el agua es bajo aunque puede ser
apreciable en aguas que han sido contaminadas por fertilizantes de uso
agrcola. Otra fuente de este anin es la lluvia cida. A pesar de que los
nitratos son nutrientes, las bacterias lo transforman en iones nitrito que son
txicos.
La determinacin de nitratos puede realizarse por espectrofotometra de
absorcin molecular, empleando la brucina como reactivo
espectrofotomtrico. El anin nitrato reacciona con brucina en medio cido
sulfrico, formando un color rojo que cambia rpidamente a amarillo. El
color amarillo es debido a un producto de oxidacin de la brucina, la
cacotelina. La absorbancia se mide en un espectrofotmetro a 410 nm.
Interfieren los oxidantes o reductores fuertes. Los iones del hierro y el
manganeso tetravalente interfieren ligeramente cuando se encuentran
presentes en concentraciones superiores a 1 mg/l.

127

Determinacin de nitritos en aguas

La determinacin de nitritos en agua se lleva a cabo mediante la

diazotacin (reaccin de Griess) y determinacin mediante
espectrofotometra del producto formado.

Esta reaccin se lleva a cabo en dos etapas.

En la primera la sulfanilalamida (amina primaria aromtica) reacciona

con los nitritos en medio cido
En la segunda etapa, el producto se une a la N-(1-naftil)-etilen-diamina
teniendo lugar la formacin de un complejo coloreado prpura adecuado
para la determinacin espectrofomtrica de nitritos por medida de la
absorbancia a la longitud de onda de 543 nm.

128

Fosfatos en aguas

Los abonos inorgnicos estn constituidos por diversas clases de fosfatos

solubles. El fsforo se puede encontrar en las aguas como aniones meta(PO3-), piro- (P2O74), ortofosfato (PO43), hidrogenofosfato (HPO42-) y
polifosfatos (P3O105-). Debido a su elevada solubilidad, estos aniones son
arrastrados fcilmente por las aguas superficiales hacia ros, acuferos,
etc.
El mtodo ms recomendado para la determinacin de fosfatos consiste
en la formacin de fosfomolibdato (amarillo) con el reactivo vanadomolbdico (de color amarillo y soluble en agua). Para el ortofosfato, la
formacin de este complejo tiene lugar segn la reaccin:
(PO4)3 + (VO3) + 11(MoO4)2 + 22 H+ = P(VMo11O40)3 + 11 H2O
En esta identificacin interfieren concentraciones apreciables de Fe(III),
silicato y arseniato, entre otras especies. Es decir, estas especies
absorben luz a la longitud de onda ptima por lo que se selecciona 420
nm.

129

Mtodo del azul de molibdeno

El mtodo del azul de molibdeno, se basa en la reduccin del complejo anterior

con cido ascrbico dando un complejo de estado de oxidacin inferior [Mo(V)]
de color azul intenso.
Se han propuesto muchos agentes reductores, sin embargo el cido ascrbico
es el que proporciona una mayor sensibilidad.
No obstante presenta el inconveniente de que a veces el color tarda 12 horas
en desarrollarse. Se puede acelerar calentando pero hay que realizar un control
estricto del tiempo, generalmente 1 min. La absorbancia se mide a 830 nm.
Existe otra alternativa que consiste en la disolucin cida en presencia de
molibdato amnico (exceso), teniendo lugar la formacin de un complejo de
fosfomolibdato [(NH3)4(PMo12O40)] que reducido por el cido ascrbico y en
presencia de Sb desarrolla la coloracin azul (azul de molibdeno) susceptible
de determinacin espectrofotomtrica (colorimtrica) a 882 nm.
La formacin de este complejo con Mo se produce porque es ms estable el
complejo que el in simple, dando un compuesto de estado de oxidacin menor
[Mo(V)] y de coloracin azul intenso. La coloracin se desarrolla en tan slo 10
minutos. La sensibilidad del mtodo puede aumentarse extrayendo el azul de
molibdeno con un disolvente
130

Determinacin de elementos en tejidos

vegetales

Boro

La determinacin de boro es importante, porque aunque el elemento es

esencial a bajas concentraciones para la salud y desarrollo de las plantas,
adquiere carcter txico para niveles ligeramente superiores. Los sntomas
que sealan la deficiencia de boro se observan fundamentalmente en las
races de las plantas, en forma de manchas pardas oscuras en su parte
superior.

La determinacin de boro por espectroscopia de absorcin en llama no es

muy sensible, y como el elemento se encuentra en niveles pequeos en los
tejidos de las plantas, puede ser necesaria una etapa de preconcentracin
por extraccin si se usa la absorcin o emisin atmica con llama.

Los mtodos colorimtricos son mucho ms sensibles y selectivos. Uno de

los ms conocidos utiliza el complejo coloreado que forma con la
curcumina (1,7 - bis (4 - hidroxi - 3 - metoxifenil) -1,6- heptadieno - 3, 5 diona) en solucin etanlica y en presencia de cido oxlico.

131

Azufre-problemtica

En la actualidad existe un gran inters por medir el contenido de azufre

de las plantas.
Las medidas tendentes a controlar la contaminacin de SO2 en la
atmsfera, estn produciendo una disminucin de los niveles de dicho
gas, que antes cubra los problemas de deficiencias en las cosechas.
El problema se agrava con la adicin de grandes cantidades de
fertilizantes, que aportan nitrgeno, fsforo y potasio para incrementar el
rendimiento de los cultivos en los que cada vez se detectan con mas
frecuencia niveles excesivamente bajos de azufre. Para determinar el
azufre orgnico, ste debe convertirse previamente en una forma
inorgnica simple de forma cuantitativa, generalmente en sulfato.
Esta transformacin se lleva a cabo por oxidacin hmeda con cido
ntrico y perclrico, en el que el azufre orgnico se transforma en SO2, y
luego en sulfato.

132

Azufre- anlisis

Los sulfatos se determinan mediante turbidimetra, ya que es un mtodo simple,

rpido, sensible y selectivo.
La turbidimetra es un mtodo de anlisis basado en la medida de la
absorbancia aparente de la luz, producida por su dispersin por una suspensin
de las especies que se analizan, pero no tiene lugar una absorcin verdadera.
En el caso del sulfato, este se convierte en una suspensin de sulfato de bario
por reaccin con cloruro de bario.
Se determina la turbidez producida por precipitacin del sulfato de bario en
medio cido.
La precipitacin se lleva a cabo en condiciones tales que se forman cristales de
sulfato de bario de tamao uniforme, que deben mantenerse en suspensin
homognea un periodo de tiempo suficiente para medir la turbidez.
Las lecturas se efectan en el espectrofotmetro frente a blanco a 650 nm.

133

Aniones de azufre

Las especies de azufre que se encuentran con mayor frecuencia en el

agua son los sulfatos (SO42-), sulfitos (SO32-), sulfuros y tiosulfatos
(S2O32-). Su concentracin no debe ser superior a 0,05 ppm.
Los iones sulfuro se determinan espectrofotomtricamente por
formacin del azul de metileno y medida a 670 nm.
Los sulfitos y tiosulfatos se determinan mediante valoracin con iodo.
Los sulfatos se determinan por turbidimetra, medida de la turbidez
producida por la reaccin de precipitacin del ion sulfato con una sal
brica en medio cido.
La precipitacin se lleva a cabo en condiciones tales que se forman
cristales de sulfato de bario de tamao uniforme, que deben mantenerse
en suspensin homognea un periodo de tiempo suficiente para medir
la turbidez. Las lecturas se efectan en el espectrofotmetro frente a
blanco a 650 nm
134

135

Determinacin de metales pesados

136

UV-visible como sistema de deteccin en

otras tcnicas instrumentales

Cromatografa HPLC

137

Detectores UV-visible utilizados en HPLC

Existen dos tipos de detectores UV aplicables a

cromatografa HPLC

Longitud de onda fija

Longitud de onda variable.

En la Fig se muestra un diagrama del primero de estos

dispositivos.

El detector consta de una celda cilndrica pequea (de 2.0

a 100.0 l de volumen) a travs de la cul fluye el eluyente
que procede de la columna.

Una lmpara UV suministra radiacin UV que pasa a

travs de la celda hasta alcanzar una celda fotoelctrica.

En el caso de un dispositivo de longitud de onda fija, la

longitud de onda depende del tipo de lmpara que se
utilice.

Existen diversas lmparas en el comercio que

proporcionan longitudes de onda de 210 nm a 280 nm. Las
lmparas comerciales son las siguientes:
Tipo de lmpara

Longitudes de onda de emisin

Lmpara de vapor de mercurio

253.7 nm

Lmpara de vapor de cinc

2123.9 nm y 307.6 nm

Lmpara de vapor de cadmio

228.8, 326.1,340.3, y 346.6 nm

138

Instrumento de HPLC

139

Inyector y columna

140