28/8/2013

Provas Bioqumicas
Isolamento e identificao de
Enterobactrias
MICROBIOLOGIA I

Enterobactrias
Famlia Enterobacteriaceae
Gneros: Escherichia, Shigella, Salmonella,
Edwardsiella, Klebsiella, Proteus, Yersinia,
Enterobacter, Citrobacter, Morganella,
Providencia, Serratia

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Infeces intestinais
Infeces extra-intestinais

Provas bioqumicas para

Enterobactrias
Aps isolados, os bacilos Gram negativos
fermentadores podem ser identificados
atravs de uma bateria de provas
bioqumicas, para avaliar suas atividades
metablicas.

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Prova de triagem - TSI

TSI - Triple sugar iron agar
Princpio determinar a capacidade de bastonetes Gram
negativos fermentarem glicose, lactose e/ou sacarose, com
produo de gs (CO2) e gs sulfdrico (H2S).
Componentes:
Vermelho de fenol indicador de pH
Acares glicose (0,1%), lactose (1%) e sacarose (1%)
Indicador de H2S sulfato ferroso de amnia/tiossulfato de sdio

TSI - inoculao
Perfurar com agulha bacteriolgica at a base
do tubo e fazer estrias em zig-zag na
superfcie do meio.
Incubar por 18 a 24h, a 35oC-37oC.

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Prova da Glicose: Determina a capacidade do micro-organismo de

fermentar a glicose, e produzir gs, que em caso positivo ser
captado pelo tubo de Durhan.
Indicador de pH vermelho de fenol.
Tipo de inoculao: inoculao em meio lquido.

Prova da Urease: Determina se um micro-organismo capaz de

hidrolisar uria em duas molculas de amnia por ao da enzima
urease.
Indicador de pH vermelho de fenol.
Tipo de inoculao: inoculao em meio lquido.

Prova do Citrato: determina se o microrganismo capaz de utilizar

o citrato como nica fonte de carbono, enzima citrato permease.
Indicador de pH azul de bromotimol.
Tipo de inoculao: estrias na superfcie.

Prova do Indol: Determina se a bactria capaz de produzir indol, a

partir do aminocido triptofano, atravs da ao da enzima
triptofanase.
Revelador do indol reativo de Kovacs (adicionado no
momento da leitura)
Tipo de inoculao: inoculao em meio lquido

Prova da Fenilalanina: Determina se a bactria capaz de

desaminar a fenilalanina, produzindo cido fenilpirvico.
Revelador do ac. fenilpirvico cloreto frrico (adicionado
no momento da leitura).
Tipo de inoculao: estrias.

Produo de H2S: Determina se ocorre a liberao de cido

sulfdrico gasoso, pela metabolizao bacteriana de aminocidos

que contm enxofre em sua estrutura.
Revelador fita de acetato de chumbo.
Tipo de inoculao: inoculao em meio lquido.

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Prova da motilidade SIM

Motilidade
Indol
H2 S
Tipo de inoculao: punctura em meio
semi-slido com agulha (at 2/3 do meio)

Provas bioqumicas - interpretao

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Fermentao da glicose

Substrato glicose
Indicador vermelho de fenol
Enzimas complexo enzimtico
Resultado positivo produtos cidos, meio fica amarelo
Produz gs bolhas coletadas pelo tubo de Durhan

TSI
Base

Base

Superfcie

Superfcie

Produo de Gs

Formao de bolhas e
rachaduras

Produo de H2S

Presena de pigmento
negro de qualquer
intensidade

Fermentao de glicose

Reao positiva:
colorao amarela

Fermentao de lactose
e/ou sacarose

Reao positiva:
colorao amarela

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Resultados do TSI

Produo de urease

Substrato uria
Indicador vermelho de fenol
Enzima urease
Reao formao de amnia e CO2
Resultado positivo produtos alcalinos,
meio fica rosa

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Prova do citrato

Substrato citrato como nica fonte de carbono

Indicador azul de bromotimol
Enzima citrato permease
Resultado positivo bactria cresce,
produzindo carbonatos, meio fica azul

Prova do indol
Substrato triptofano
Enzima triptofanase
Produto final indol, que vai ser revelado pelo
reativo de Kovacs (p-dimetilaminobenzaldedo)
Resultado positivo o anel formado pelo
reativo de Kovacs, que adicionado no
momento da leitura fica vinho.

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Prova da fenilalanina
Substrato fenilalanina
Enzima fenilalanina desaminase
Produto final cido fenilpirvico, que vai ser
revelado pelo reativo de cloreto frrico
Resultado positivo ao adicionar o cloreto
frrico no momento da leitura, o reativo fica
verde na presena do cido fenilpirvico.

Produo de H2S
Substrato cistena (aminocidos contendo
enxofre)
Enzima desulfurase da cistena
Produto final cido sulfdrico, que vai ser
revelado pelo escurecimento da fita de
acetato de chumbo.
Resultado positivo a fita de acetato de
chumbo fica escura, impregnada pelo
cido sulfdrico.

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Prova da motilidade - SIM

Para avaliar a motilidade, o princpio no
bioqumico e sim fisiolgico ( mvel a bactria que
possui flagelo).
Semeadura em punctura.
Bactria imvel crescimento apenas no ponto de
inoculao.
Bactria mvel crescimento difuso no meio.
possvel visualizar a presena de H2S, e a
produo de indol (provas bioqumicas).

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TABELA PARA IDENTIFICAO BIOQUMICA DAS ENTEROBACTRIAS

Lactose

Glicose
com
produo
de gs

H2S

Urease

Motilidade

Indol

Escherichia coli

Klebsiella pneumoniae

- /+

Enterobacter cloacae

- /+

Citrobacter freundii

- /+

- /+

- /+

-/+

Arizona

Shigella sp

- /+

Edwardsiella tarda

- /+

Salmonella sp

Serratia marcescens

- /+

Proteus mirabilis

-/+

- /+

- /+

Providencia rettgeri

Yersinia enterocolitica

- /+

-/+

- /+

Bactrias

Citrato

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