EUROPEAN PHARMACOPOEIA COMMISSION

AG/ag
Working document, with no legally binding
status, intended exclusively for the addressees
and their associates, under the responsibility of
the addressees (listed opposite). Level 4
PA/PH/Exp. 10A/T (07) 103 ANP

BILINGUE

Strasbourg, March 2008

GROUP 10A

(ORGANIC CHEMISTRY SYNTHETIC PRODUCTS / CHIMIE ORGANIQUE PRODUITS DE SYNTHESE)

Phenobarbital
Phnobarbital
Phenobarbitalum
Monograph N: 201
Cette monographie est soumise aux Autorits nationales pour commentaires et elle sera publie simultanment
dans le prochain numro de Pharmeuropa (Pharmeuropa 20.2).
Programme spcial de rvision.
This monograph is submitted to National Authorities for comment and will be simultaneously published in the
next issue of Pharmeuropa (Pharmeuropa 20.2).
Special revision programme.

Distribution
For action:
ANP National Pharmacopoeia Authorities

For information :
10A Organic chemistry Synthetic Products
PRES Praesidium

This document will not be redistributed in sessions. Ce document ne sera pas redistribu lors des sessions.

PA/PH/Exp. 10A/T (07) 103 ANP

NOTE ON THE MONOGRAPH
Related substances : TLC replaced by LC in accordance with current policy as part of
a special revision programme.
Impurities : a section describing the impurities controlled by the LC has been added.
Only comments on the test for related substances are requested.

XXXX:0201

PHENOBARBITAL
Phenobarbitalum

C12H12N2O3
[50-06-6]

Mr 232.2

DEFINITION
5-Ethyl-5-phenylpyrimidine-2,4,6(1H,3H,5H)-trione.
Content : 99.0 per cent to 101.0 per cent (dried substance).
CHARACTERS
Appearance : white or almost white, crystalline powder or colourless crystals.
Solubility : very slightly soluble in water, freely soluble in ethanol (96 per cent).
It forms water-soluble compounds with alkali hydroxides, carbonates and ammonia.
IDENTIFICATION
First identification : A, B.
Second identification : A, C, D.
A. Determine the melting point (2.2.14) of the substance to be examined. Mix equal parts
of the substance to be examined and phenobarbital CRS ; determine the melting point
of the mixture. The difference between the 2 melting points (which are about 176 C)
is not greater than 2 C.
B. Infrared absorption spectrophotometry (2.2.24).
Comparison : phenobarbital CRS.
C. Thin-layer chromatography (2.2.27).
Test solution. Dissolve 0.1 g of the substance to be examined in ethanol (96 per cent) R
and dilute to 100.0 ml with the same solvent.
Reference solution. Dissolve 0.1 g of phenobarbital CRS in ethanol (96 per cent) R
and dilute to 100.0 ml with the same solvent.
Plate : TLC silica gel GF254 plate R.
E1

PA/PH/Exp. 10A/T (07) 103 ANP

Mobile phase : concentrated ammonia R, ethanol (96 per cent) R, chloroform R
(5:15:80 V/V/V). Use the lower layer.
Application : 10 l.
Development : over a path of 18 cm.
Detection : examine in ultraviolet light at 254 nm.
Results : the principal spot in the chromatogram obtained with the test solution is
similar in position and size to the principal spot in the chromatogram obtained with
the reference solution.
D. It gives the reaction of non-nitrogen substituted barbiturates (2.3.1).
TESTS
Appearance of solution. The solution is clear (2.2.1) and not more intensely coloured
than reference solution Y6 (2.2.2, Method II).
Dissolve 1.0 g in a mixture of 4 ml of dilute sodium hydroxide solution R and 6 ml of
water R.
Acidity. Boil 1.0 g with 50 ml of water R for 2 min, allow to cool and filter. To 10 ml of the
filtrate add 0.15 ml of methyl red solution R. The solution is orange-yellow. Not more than
0.1 ml of 0.1 M sodium hydroxide is required to produce a pure yellow colour.
Related substances. Examine by thin-layer chromatography (2.2.27), using silica
gel GF254 R as the coating substance.
Test solution. Dissolve 1.0 g of the substance to be examined in alcohol R and dilute
to 100 ml with the same solvent.
Reference solution. Dilute 0.5 ml of the test solution to 100 ml with alcohol R.
Apply separately to the plate 20 l of each solution. Develop over a path of 15 cm using
the lower layer of a mixture of 5 volumes of concentrated ammonia R, 15 volumes of
alcohol R and 80 volumes of chloroform R. Examine immediately in ultraviolet light at
254 nm. Spray with diphenylcarbazone mercuric reagent R. Allow the plate to dry in air
and spray with freshly prepared alcoholic potassium hydroxide solution R diluted 1 in 5
with aldehyde-free alcohol R. Heat at 100 C to 105 C for 5 min and examine immediately.
When examined in ultraviolet light and after spraying, any spot in the chromatogram
obtained with the test solution, apart from the principal spot, is not more intense than the
spot in the chromatogram obtained with the reference solution (0.5 per cent).
Liquid chromatography (2.2.29).
Test solution. Dissolve 125 mg of the substance to be examined in 5.0 ml of methanol R
and diluted to 25.0 ml with the mobile phase.
Reference solution (a). Mix 1.0 ml of the test solution and 20.0 ml of methanol R and
dilute to 100.0 ml with the mobile phase. Mix 1.0 ml of this solution with 2.0 ml of
methanol R and dilute to 10.0 ml with the mobile phase.
Reference solution (b). Dissolve 5.0 mg of phenobarbital impurity A CRS and 5.0 mg
of phenobarbital impurity B CRS in 2.0 ml of methanol R and dilute to 10.0 ml with
the mobile phase. Mix 1.0 ml of this solution with 20.0 ml of methanol R and dilute to
100.0 ml with the mobile phase.
E2

PA/PH/Exp. 10A/T (07) 103 ANP

Reference solution (c). Dissolve the contents of a vial of phenobarbital for system
suitability CRS (containing impurities A and B) in 1.0 ml of methanol R and dilute to
5.0 ml with the mobile phase.
Column :
size : l = 0.25 m, = 4.6 mm ;
stationary phase : end-capped octadecylsilyl silica gel for chromatography R (5 m)(1).
Mobile phase. Dissolve 6.6 g of sodium acetate R in 500 ml of water R, add 3 ml of glacial
acetic acid R and dilute to 1000 ml with water R. Adjust to pH 4.5 with glacial acetic
acid R. Mix 60 volumes of this solution with 40 volumes of methanol R.
Flow rate : 1.0 ml/min.
Detection : spectrophotometer at 254 nm.
Injection : 20 l.
Run time: 1.5 times the retention time of phenobarbital.
Identification of impurities : use the chromatogram supplied with phenobarbital for
system suitability CRS and the chromatogram obtained with reference solution (c) to
identify the peaks due to impurities A and B.
Relative retention with reference to phenobarbital (retention time = about 14 min) :
impurity A = about 0.2 ; impurity B = about 0.3.
System suitability : reference solution (c) :
resolution : minimum 1.5 between the peaks due to impurities A and B.
Limits :
impurity A : not more than the area of the corresponding peak in the chromatogram
obtained with reference solution (b) (0.1 per cent) ;
impurity B : not more than the area of the corresponding peak in the chromatogram
obtained with reference solution (b) (0.1 per cent) ;
unspecified impurities : for each impurity, not more than the area of the principal peak
in the chromatogram obtained with reference solution (a) (0.10 per cent) ;
total : not more than 2 times the area of the principal peak in the chromatogram
obtained with reference solution (a) (0.2 per cent) ;
disregard limit : 0.5 times the area of the principal peak in the chromatogram obtained
with reference solution (a) (0.05 per cent).
(1) Inertsil ODS2, Zorbax ODS and Luna C18 are suitable.

E3

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The following chromatogram is shown for information but will not be published in
the European Pharmacopoeia.

1. impurity A

2. impurity B

3. impurity C

4. phenobarbital

Figure 0201.-1. Chromatogram for the test for related substances : solution of
phenobarbital spiked with impurities A, B and C
Loss on drying (2.2.32) : maximum 0.5 per cent, determined on 1.000 g by drying in
an oven at 105 C.
Sulphated ash (2.4.14) : maximum 0.1 per cent, determined on 1.0 g.
ASSAY
Dissolve 0.100 g in 5 ml of pyridine R. Add 0.5 ml of thymolphthalein solution R and
10 ml of silver nitrate solution in pyridine R. Titrate with 0.1 M ethanolic sodium
hydroxide until a pure blue colour is obtained. Carry out a blank titration.
1 ml of 0.1 M ethanolic sodium hydroxide is equivalent to 11.61 mg of C12H12N2O3.
IMPURITIES
Specified impurities : A, B.
Other detectable impurities (the following substances would, if present at a sufficient
level, be detected by one or other of the tests in the monograph. They are limited by
the general acceptance criterion for other/unspecified impurities and/or by the general
monograph Substances for pharmaceutical use (2034). It is therefore not necessary
to identify these impurities for demonstration of compliance. See also 5.10. Control of
impurities in substances for pharmaceutical use) : C.
E4

PA/PH/Exp. 10A/T (07) 103 ANP

A. R = NH : 2,6-diamino-5-ethyl-5-phenylpyrimidin-4(5H)-one,
B. R = O : 6-amino-5-ethyl-5-phenylpyrimidine-2,4(3H,5H)-dione,

C. 5-methyl-5-phenylpyrimidine-2,4,6(1H,3H,5H)-trione.

E5

PA/PH/Exp. 10A/T (07) 103 ANP

NOTE RELATIVE LA MONOGRAPHIE
Substances apparentes : la CCM a t remplace par une CL, conformment la
politique en vigueur, dans le cadre dun programme de rvision spcial.
Impurets : une rubrique dcrivant les impurets contrles par la CL a t ajoute.
Seuls des commentaires sur lessai des substances apparentes sont attendus.
XXXX:0201

PHNOBARBITAL
Phenobarbitalum

C12H12N2O3
[50-06-6]

Mr 232,2

DFINITION
5-Ethyl-5-phnylpyrimidine-2,4,6(1H,3H,5H)-trione.
Teneur : 99,0 pour cent 101,0 pour cent (substance dessche).
CARACTRES
Aspect : poudre cristalline, blanche ou sensiblement blanche, ou cristaux incolores.
Solubilit : trs peu soluble dans leau, facilement soluble dans lthanol 96 pour cent.
Le phnobarbital donne des composs solubles dans leau avec les hydroxydes alcalins,
les carbonates alcalins et lammoniaque.
IDENTIFICATION
Premire identification : A, B.
Seconde identification : A, C, D.
A. Dterminez le point de fusion (2.2.14) du phnobarbital. Mlangez en proportions
gales de la substance examiner et du phnobarbital SCR, puis dterminez le point
de fusion du mlange. La diffrence entre les 2 points de fusion observs vers 176 C
nest pas suprieure 2 C.
B. Spectrophotomtrie dabsorption dans linfrarouge (2.2.24).
Comparaison : phnobarbital SCR.
C. Chromatographie sur couche mince (2.2.27).
Solution examiner. Dissolvez 0,1 g de phnobarbital dans de lthanol 96 pour
cent R et compltez 100,0 ml avec le mme solvant.
Solution tmoin. Dissolvez 0,1 g de phnobarbital SCR dans de lthanol 96 pour
cent R et compltez 100,0 ml avec le mme solvant.
Plaque : plaque au gel de silice GF254 pour CCM R.
F1

PA/PH/Exp. 10A/T (07) 103 ANP

Phase mobile : ammoniaque concentre R, thanol 96 pour cent R, chloroforme R
(5:15:80 V/V/V). Utilisez la phase infrieure.
Dpt : 10 l.
Dveloppement : sur un parcours de 18 cm.
Dtection : examinez en lumire ultraviolette 254 nm.
Rsultats : la tache principale du chromatogramme obtenu avec la solution
examiner est semblable quant sa position et ses dimensions la tache principale du
chromatogramme obtenu avec la solution tmoin.
D. Le phnobarbital donne la raction des barbituriques non substitus lazote (2.3.1).
ESSAI
Aspect de la solution. La solution est limpide (2.2.1) et nest pas plus fortement colore
que la solution tmoin J6 (2.2.2, Procd II).
Dissolvez 1,0 g de phnobarbital dans un mlange de 4 ml de solution dilue dhydroxyde
de sodium R et de 6 ml deau R.
Acidit. Chauffez bullition pendant 2 min 1,0 g de phnobarbital avec 50 ml deau R,
puis laissez refroidir et filtrez. A 10 ml du filtrat, ajoutez 0,15 ml de solution de rouge
de mthyle R. La solution est jaune orang. Le virage de lindicateur au jaune franc ne
ncessite pas plus de 0,1 ml dhydroxyde de sodium 0,1 M.
Substances apparentes. Oprez par chromatographie sur couche mince (2.2.27) en
utilisant une plaque recouverte de gel de silice GF254 R.
Solution examiner. Dissolvez 1,0 g de phnobarbital dans de lalcool R et compltez
100 ml avec le mme solvant.
Solution tmoin. Prlevez 0,5 ml de solution examiner et compltez 100 ml avec
de lalcool R.
Dposez sparment sur la plaque 20 l de chaque solution. Mlangez 5 volumes
dammoniaque concentre R, 15 volumes dalcool R et 80 volumes de chloroforme R.
Utilisez la couche infrieure comme phase mobile. Dveloppez sur un parcours de 15 cm.
Examinez immdiatement en lumire ultraviolette 254 nm. Pulvrisez du ractif
la diphnylcarbazone-mercurique R. Laissez scher la plaque lair. Pulvrisez de la
solution alcoolique dhydroxyde de potassium R prpare extemporanment et dilue
5 fois avec de lalcool exempt daldhyde R. Chauffez la plaque 100-105 C pendant
5 min et examinez immdiatement. Si, en lumire ultraviolette et aprs pulvrisation,
il apparat dautres taches que la tache principale dans le chromatogramme obtenu
avec la solution examiner, aucune dentre elles nest plus intense que la tache du
chromatogramme obtenu avec la solution tmoin (0,5 pour cent).
Chromatographie liquide (2.2.29).
F2

PA/PH/Exp. 10A/T (07) 103 ANP

Le chromatogramme suivant est prsent pour information mais ne sera pas publi
dans la Pharmacope Europenne.

1. impuret A

2. impuret B

3. impuret C

4. phnobarbital

Figure 0201.-1. Chromatogramme pour lessai des substances apparentes : solution

de phnobarbital dope avec les impurets A, B et C
Solution examiner. Dissolvez 125 mg de phnobarbital dans 5,0 ml de mthanol R et
compltez 25,0 ml avec la phase mobile.
Solution tmoin (a). Mlangez 1,0 ml de solution examiner et 20,0 ml de mthanol R et
compltez 100,0 ml avec la phase mobile. Mlangez 1,0 ml de cette solution avec 2,0 ml
de mthanol R et compltez 10,0 ml avec la phase mobile.
Solution tmoin (b). Dissolvez 5,0 mg dimpuret A de phnobarbital SCR et 5,0 mg
dimpuret B de phnobarbital SCR dans 2,0 ml de mthanol R et compltez 10,0 ml
avec la phase mobile. Mlangez 1,0 ml de cette solution avec 20,0 ml de mthanol R et
compltez 100,0 ml avec la phase mobile.
Solution tmoin (c). Dissolvez le contenu dun flacon de phnobarbital pour conformit
du systme SCR (contenant les impurets A et B) dans 1,0 ml de mthanol R et compltez
5,0 ml avec la phase mobile.
Colonne :
dimensions : l = 0,25 m, = 4,6 mm,
phase stationnaire : gel de silice octadcylsilyl postgreff pour chromatographie R
(5 m)(1).
(1) Inertsil ODS2, Zorbax ODS et Luna C18 conviennent.

F3

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Phase mobile. Dissolvez 6,6 g dactate de sodium R dans 500 ml deau R, ajoutez 3 ml
dacide actique glacial R et compltez 1000 ml avec de leau R. Ajustez pH 4,5 avec
de lacide actique glacial R. Mlangez 60 volumes de cette solution avec 40 volumes de
mthanol R.
Dbit : 1,0 ml/min.
Dtection : spectrophotomtre 254 nm.
Injection : 20 l.
Enregistrement : 1,5 fois le temps de rtention du phnobarbital.
Identification des impurets : utilisez le chromatogramme fourni avec le phnobarbital
pour conformit du systme SCR et le chromatogramme obtenu avec la solution
tmoin (c) pour identifier les pics dus aux impurets A et B.
Rtention relative par rapport au phnobarbital (temps de rtention = environ 14 min) :
impuret A = environ 0,2 ; impuret B = environ 0,3.
Conformit du systme : solution tmoin (c) :
rsolution : au minimum 1,5 entre les pics dus aux impurets A et B.
Limites :
impuret A : au maximum la surface du pic correspondant dans le chromatogramme
obtenu avec la solution tmoin (b) (0,1 pour cent),
impuret B : au maximum la surface du pic correspondant dans le chromatogramme
obtenu avec la solution tmoin (b) (0,1 pour cent),
impurets non spcifies : pour chaque impuret, au maximum la surface du pic
principal du chromatogramme obtenu avec la solution tmoin (a) (0,10 pour cent),
total : au maximum 2 fois la surface du pic principal du chromatogramme obtenu
avec la solution tmoin (a) (0,2 pour cent),
limite dexclusion : 0,5 fois la surface du pic principal du chromatogramme obtenu
avec la solution tmoin (a) (0,05 pour cent).
Perte la dessiccation (2.2.32) : au maximum 0,5 pour cent, dtermin ltuve 105 C
sur 1,000 g de phnobarbital.
Cendres sulfuriques (2.4.14) : au maximum 0,1 pour cent, dtermin sur 1,0 g de
phnobarbital.
DOSAGE
Dissolvez 0,100 g de phnobarbital dans 5 ml de pyridine R. Ajoutez 0,5 ml de solution
de thymolphtaline R et 10 ml de solution de nitrate dargent dans la pyridine R. Titrez
par la solution thanolique dhydroxyde de sodium 0,1 M jusqu coloration bleu franc.
Effectuez un titrage blanc.
1 ml de solution thanolique dhydroxyde de sodium 0,1 M correspond 11,61 mg de
C12H12N2O3.
IMPURETS
Impurets spcifies : A, B.
Autres impurets dcelables (si elles sont prsentes une teneur suffisante, les substances
suivantes seront dtectes par lun des essais de la monographie. Elles sont limites
par le critre gnral dacceptation applicable aux autres impurets ou impurets non
F4

PA/PH/Exp. 10A/T (07) 103 ANP

spcifies, ou par les dispositions de la monographie gnrale Substances pour usage
pharmaceutique (2034). Il nest donc pas ncessaire de les identifier pour dmontrer la
conformit de la substance. Voir galement chapitre 5.10. Contrle des impurets dans
les substances pour usage pharmaceutique) : C.

A. R = NH : 2,6-diamino-5-thyl-5-phnylpyrimidin-4(5H)-one,
B. R = O : 6-amino-5-thyl-5-phnylpyrimidine-2,4(3H,5H)-dione,

C. 5-mthyl-5-phnylpyrimidine-2,4,6(1H,3H,5H)-trione.

F5