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Chaperones Moleculares - os Mestres do Origami

Paula C. Ramos1*, Ana C. Matias1,2 e Antnio J. Marques2

Palavras-Chave: Chaperones, enrolamento de protenas (folding), protenas de choque trmico, controlo de qualidade
Introduo

As protenas acabadas de ser sintetizadas tm de adquirir a sua estrutura
tridimensional caracterstica. Apenas
uma conformao extremamente
estvel e possui as propriedades qumicas exactas que permitem que a
protena desempenhe a sua funo
especfica na clula. As protenas so
enroladas de uma forma to precisa
que nalguns casos basta a mudana
de um resduo de aminocido para
perderem a funo. Embora esteja
provado por experincias in vitro que
toda a informao necessria ao correcto enrolamento (folding) de uma
protena est contida na sua sequncia polipeptdica [1], o enrolamento
nativo de protenas dentro das clulas
no , na generalidade, um processo
espontneo [2]. Ao longo dos ltimos
anos as evidncias so cada vez
maiores de que muitas protenas recm-sintetizadas necessitam de uma
maquinaria celular complexa de chaperones moleculares e energia metablica para alcanarem os seus estados nativos eficientemente. A questo
que se coloca a seguinte: se a informao para o enrolamento de uma
protena inerente sua sequncia,

ento porque que os chaperones

so necessrios? Os chaperones moleculares tm como funo proteger
as cadeias polipeptdicas nascentes,
evitando o mau-enrolamento e agregao de protenas. A agregao
um problema para as cadeias nascentes que ainda no adquiriram a
sua estrutura nativa (Figura 1). Quando uma cadeia nascente libertada
do ribossoma, resduos hidrofbicos
(normalmente protegidos no interior
da protena), podem ficar expostos e
a cadeia, em vez de se enrolar apropriadamente, pode-se associar (agregar) a outras cadeias nascentes que

cadeia polipeptdica
nascente

possuam tambm resduos hidrfobos expostos. Pensa-se que na clula

as protenas em estados no-nativos
tm grande tendncia para agregar
devido elevada concentrao local
de protenas nascentes nos polirribossomas. Se tomarmos em ateno que
o citosol um meio atulhado de protenas e outras macromolculas, a propenso para a agregao de cadeias
proteicas no-nativas encontra-se aumentada pela sua concentrao efectiva. O aglomeramento macromolecular (molecular crowding) fornece
uma fora no especfica para a compactao e associao macromole-

intermedirios parcialmente
enrolados

subunidade nativa

Aglomeramento molecular
Stresse

protena nativa

Desagregao
Re-enrolamento

agregados

Degradao
1

Departamento de Qumica, Bioqumica e Farmcia,

Faculdade de Cincias e Tecnologia, Universidade
do Algarve, Campus de Gambelas, 8005-139 Faro,
Portugal
2
Institute for Genetics, University of Cologne, Zlpicher
Str. 47, D-50674 Cologne, Germany
*
E-mail: pcramos@ualg.pt

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Figura 1 Destinos de uma protena acabada de sintetizar: aquisio de estrutura nativa e funcional
(enrolamento); intermedirios parcialmente enrolados so altamente susceptveis de sofrerem
agregao devido ao aglomerado molecular caracterstico da clula ou em condies de stress.
Os agregados podem sofrer desagregao e re-enrolamento por aco de chaperones ou serem
conduzidos a degradao. Setas encarnadas, participao de chaperones.
Seta verde, aco de sistemas proteolticos

cular que inclui o colapso de cadeias

polipeptdicas durante o enrolamento
(Figura 1). A agregao remove protenas irreversivelmente das suas vias
produtivas de enrolamento e dever
ser evitado in vivo pelos chaperones
moleculares [3]. O re-enrolamento
espontneo in vitro normalmente
eficiente para protenas pequenas
com um nico domnio. Os resduos
de aminocidos hidrofbicos expostos so em milissegundos protegidos
no seu interior, logo no incio do enrolamento [2]. Ao contrrio, protenas
grandes, compostas por vrios domnios, frequentemente enrolam-se de
uma forma ineficaz, devido formao de intermedirios parcialmente
enrolados, incluindo estados mal enrolados, que tendem a agregar [2].

As clulas necessitam da actividade
dos chaperones moleculares no s
para prevenir a agregao de protenas com conformao no-nativa,
durante a aquisio da sua estrutura
aquando da sua sntese, mas tambm
para evitar e/ou reverter interaces
incorrectas que ocorrem por exemplo,
em condies de stresse, tais como
temperaturas elevadas, que provocam o desenrolamento das protenas
expondo superfcies que normalmente
esto protegidas no interior. A ligao
a um chaperone poder no somente
bloquear agregao directa entre as
molculas atravs de proteco das
superfcies interactivas nos polipptidos no-nativos, incluindo as de subunidades no montadas, como tambm
evitar ou reverter mau enrolamento
dentro da prpria molcula. Para alm
de protegerem reas potencialmente
reactivas na sequncia polipeptdica,
os chaperones funcionam tambm
como catalisadores no processo de
enrolamento. Tendo em conta que
numa bactria, cujo tempo de duplicao pode estar abaixo de 30 minutos,
so sintetizados mais de 30 000 polipptidos por minuto, a transposio
das barreiras energticas de estados
de alta energia (polipptidos desenrolados) para estados de baixa energia
(conformaes nativas), induzidas
apenas por interaces com o ambiente citoslico, no seria suficientemente rpida e eficaz para permitir a
viabilidade celular, especialmente se
considerados os polipptidos maiores
que 30kDa. Alguns chaperones en-

volvem as cadeias, isolando-as total

ou parcialmente do meio exterior e
criando o ambiente ideal para que a
aquisio das conformaes nativas
(de alta para baixa energia) ocorra rapidamente e sem interferncias [2].

Muitos chaperones, embora sejam
expressos constitutivamente, so sintetizados em concentraes elevadas
em condies de stresse e por isso
so classificados como protenas de
stresse ou de choque trmico (heatshock proteins Hsp). Mas existem
chaperones que no so protenas de
stresse, bem como existem protenas
de choque trmico que no so chaperones. So conhecidos at data
numerosos chaperones, mas certamente existiro outros por caracterizar. Existem chaperones que so especficos para uma funo, como por
exemplo o trigger factor (TF), e outros
que so multivalentes e actuam em
vrios processos como os Hsp70. Os
chaperones assistem uma vasta variedade de processos, por exemplo: 1)
enrolamento de protenas nascentes e
acabadas de sintetizar; 2) desagregao de protenas; 3) transduo de sinais; 4) translocao de protenas do
citoplasma para organelos; 5) controlo
de qualidade das protenas; 6) montagem de complexos proteicos.
1. Enrolamento de protenas nascentes
e acabadas de sintetizar

O ribossoma, organelo responsvel
pela traduo das cadeias polipeptdicas, possui uma subunidade grande
cujo comprimento do canal de sada

do polipptido de 100 o comprimento de uma cadeia distendida com

cerca de 30 resduos de aminocidos
ou uma hlice com cerca de 65 resduos [4]. A largura do canal tem em
mdia 15, e em princpio, enrolamentos para alm de hlices no so
espacialmente permitidos dentro do
ribossoma [4].

O TF, os Hsp70s e a prefoldina so
chaperones que se ligam a cadeias
polipeptdicas nascentes. Estes chaperones so responsveis pela estabilizao das cadeias em elongao
nos ribossomas assegurando que se
mantenham num estado no agregado (Figura 2). No citoplasma, o
processo de enrolamento da cadeia
polipeptdica prossegue com a libertao controlada dos factores que se
associam ao ribossoma ou atravs da
transferncia das protenas recm-sintetizadas para outros chaperones
como, por exemplo as chaperoninas
(ver abaixo).
A - Chaperones de ligao ao ribossoma

O TF uma protena de 48kDa, existente nas eubactrias, que se liga ao
ribossoma numa proporo estequiomtrica de 1:1 e interage com cadeias
emergentes do ribossoma to pequenas como 57 resduos de aminocidos, evitando assim o contacto entre
segmentos hidrofbicos e, portanto,
mantendo as cadeias nascentes solveis (Figura 2 e Figura 4A) [5]. O reconhecimento da cadeia polipeptdica
alvo pelo TF mediado por pequenas
sequncias ricas em resduos hidro-

Figura 2 Vias de enrolamento de protenas acabadas de sintetizar em bactrias e percentagens

aproximadas da sua ocorrncia

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fbicos/aromticos. O TF dissocia-se
do seu substrato (cadeia nascente)
de uma forma independente de ATP,
aps a libertao da cadeia polipeptdica do ribossoma. O TF possui uma
actividade de peptidil-prolil-cis-trans
isomerase cuja relevncia no ainda compreendida e tem uma funo
de chaperone que se sobrepe ao
sistema Hsp70 bacteriano, DnaK e
DnaJ (ver sistema Hsp70, abaixo),
na estabilizao de cadeias nascentes mantendo-as numa forma competente para subsequente enrolamento
[6]. O citosol eucariota no possui TF,
mas sim um complexo heterodimrico
com duas subunidades (33kDa) e
(22kDa) designadas por NAC (nascent chain-associated complex), que
se associa com pequenas cadeias
acabadas de emergir do tnel do ribossoma. A dissociao ocorre aps a
cadeia ser libertada do ribossoma [7].

As leveduras de padeiro, bem como
outros fungos, possuem uns homlogos de Hsp70 citoslicos especializados em ligar-se a cadeias polipeptdicas emergentes do ribossoma. Nos
eucariotas, ditos superiores, so as
prprias protenas do sistema Hsp70
que actuam tanto co- como ps-traducionalmente. Em Saccharomyces
cerevisiae, Ssb1 e Ssb2 interagem
com o ribossoma e com pequenas
cadeias nascentes [8]. Esta funo
das protenas Ssb parece ser mediada por outra Hsp70, Ssz1, que
forma um complexo estvel com o ribossoma e a zuotina, designado por
RAC (ribosome-associated complex).
Pensa-se que o RAC e as protenas Ssb tm uma aco concertada
em estabilizar cadeias nascentes.
B - O sistema Hsp70

Os membros tpicos da famlia Hsp70
so chaperones monomricos que
no ligam ao ribossoma e se encontram presentes tanto no citosol de clulas eucariticas e bacterianas e de
algumas arqueobactrias, como em
organelos eucariotas tais como mitocndrias e retculo endoplasmtico
[
3
]. O citosol dos eucariotas ditos superiores contm homlogos de Hsp70
expressos constitutivamente (Hsc70
heat shock cognate protein 70) e
formas induzidas pelo stress (Hsp70).
Na levedura de padeiro existem qua-

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tro Hsp70 que no se ligam ao ribossoma e esto presentes no citosol,

designadas por Ssa1 a Ssa4.

Os Hsp70 promovem o processo de
enrolamento de segmentos peptdicos
hidrofbicos expostos pelas protenas
nos seus estados no nativos, atravs de ciclos de ligao/libertao do
substrato regulados pela sua prpria
actividade ATPsica e por protenas
co-factores. O ciclo de ligao/libertao do substrato conduzido pela
mudana entre o estado de baixa afinidade para o ATP e o estado de elevada afinidade para o ADP (ver revises
de Young e colegas [9] e de Mayer e
Bukau [10]). Este ciclo controlado
tanto por co-chaperones da famlia
das Hsp40 (DnaJ), que dirigem os
Hsp70 para os seus substratos, como
por factores permutadores de nucletidos que determinam o tempo de vida
do complexo Hsp70-substrato.

O mecanismo de aco dos Hsp70
encontra-se bem estudado nas eubactrias. O Hsp70 de Escherichia
coli conhecido por DnaK, o seu
co-chaperone designado por DnaJ
(pertence famlia dos Hsp40) e o
seu factor permutador de nucletidos
conhecido por GrpE. O chaperone
DnaK associa-se preferencialmente a
polipptidos enlongados maiores do
que 20 a 30kDa e, portanto, actua nas
cadeias nascentes subsequentemente ao TF (Figura 2). O DnaK possui
um domnio com cerca de 44kDa no
terminal N que tem funo ATPsica e
um domnio de ligao a pptidos no
terminal C com cerca de 27kDa. Em
termos de estrutura terciria, o terminal C possui um subdomnio em sanduche com um fenda de ligao ao
pptido e um segmento em hlice
tipo trinco (Figura 3A).
Os pptidos alvo contm cerca de
sete resduos de comprimento e so
tipicamente hidrofbicos na sua regio
central, tendo a leucina e a isoleucina
como resduos preferenciais. Estatisticamente, numa protena, estes resduos encontram-se em mdia em cada
40 resduos de aminocidos. A ligao
entre o pptido alvo, que se encontra
numa forma estendida, e o DnaK ocorre atravs de interaces hidrofbicas
com as cadeias laterais e por pontes
de hidrognio com o esqueleto pep-

tdico. Ou seja, o Hsp70 reconhece

aspectos estruturais comuns maioria das cadeias nascentes. A ligao
ao pptido rpida e ocorre no estado
ligado a ATP do DnaK. Neste estado,
o trinco da hlice sobre a fenda do
domnio de ligao ao pptido est
numa conformao aberta (Figura
3B). A manuteno da ligao estvel
ao pptido capturado envolve o fecho
do trinco, uma alterao conformacional obtida atravs da hidrlise do
ATP ligado, a ADP. O ciclo do DnaK
entre estes dois estados regulado
pelo co-chaperone DnaJ e pelo factor
permutador de nucletidos, GrpE. O
terminal N do domnio J do co-chaperone DnaJ liga-se ao DnaK e acelera
a hidrlise do ATP por este, facilitando a captura do pptido. O terminal
C do DnaJ funciona como chaperone
e est envolvido no reconhecimento
de pptidos hidrfobos podendo recrutar DnaK para cadeias nascentes.
Aps a religao de ATP, o complexo
DnaK-pptido dissocia-se, completando o ciclo. O enrolamento completo do polipptido poder requerer
vrios ciclos de ligao e libertao.
O sistema Hsp70 em eucariotas
semelhante ao anteriormente descrito para E. coli. Homlogos de DnaJ
(HDJ1 e HDJ2, em mamferos ou
Ydj1 e Sis1, em S. cerevisiae) interagem com os polipptidos substratos
e estimulam a hidrlise de ATP pelos
Hsp70 correspondentes (Hsc70 em
mamferos e Ssa1 a 4 em S. cerevisiae). Embora no se encontrem ortlogos do factor permutador de nucletidos GrpE no citoplasma eucariota, a
troca de nucletidos estimulada por
co-chaperones, estruturalmente no
relacionados, como BAG1 (BCL2-associated athanogene 1) e seus homlogos. Outros permutadores conhecidos so o HspBP1 (em mamferos) e
Fes1 (em S. cerevisiae).
C Prefoldina/GimC

A prefoldina, tambm conhecida por
complexo GimC (de genes envolvidos
na biognese dos microtbulos), um
complexo hexamrico, com cerca de
90kDa composto por duas subunidades e quatro subunidades , existente no citosol das arqueobactrias
e dos seres eucariotas [3]. Foi, inicialmente, descrita como necessria para

Figura 3 O sistema Hsp70. (A) Organizao estrutural do chaperone DnaK, estruturas dos domnios
ATPsico (esquerda) e de ligao ao pptido do DnaK (direita). As estruturas foram produzidas com o
programa PDB viewer. (B) Ciclo de aco do sistema Hsp70 de E. coli (ver texto para detalhes).
S, protena substrato

o enrolamento e montagem da tubulina em S. cerevisiae e o seu homlogo

em mamferos como responsvel por
distribuir actina no-nativa ao chaperone TRiC in vitro [11]. A estrutura da
prefoldina parece uma medusa com
seis tentculos em forma de hlice
coiled-coil com cerca de 65 de comprimento agarradas a um corpo em
forma de barril composto por estruturas (ver Figura 4B) [12]. As pontas
dos tentculos esto parcialmente
desenroladas expondo resduos hidrofbicos para a ligao protena
substrato no nativa. A prefoldina
liga-se a cadeias nascentes durante
a sua traduo e transfere-as, poste-

riormente, para a chaperonina TRiC.

Coopera com a chaperonina TRiC no
enrolamento da actina e da tubulina,
nos passos aps traduo. A ligao e
libertao do substrato pela prefoldina
independente de ATP.
D - Chaperoninas

As chaperoninas so uma famlia muito conservada de complexos cilndricos de grandes dimenses em duplo
anel, com cerca de 800kDa. Dispem
de um compartimento central interior
onde uma cadeia polipeptdica pode
ser enrolada [13]. Embora a ligao/
libertao do substrato seja depen-

dente de ATP, o mecanismo de enrolamento muito diferente do sistema

Hsp70. A protena no nativa capturada atravs de contactos hidrofbicos com as subunidades da chaperonina e uma vez no interior da cavidade
enrolada e libertada para o exterior,
no sendo, portanto, possvel a agregao com outras protenas no-nativas. Esto classificadas em dois
grupos com arquitectura semelhante,
mas com sequncias remotamente
relacionadas [3,13]. As chaperoninas
do grupo I, tambm conhecido por
chaperoninas Hsp60, encontram-se
nas eubactrias e nos organelos com
origem endossimbitica, mitocndrias
e cloroplastos e colaboram com os co-factores GroES (Hsp10). Ao grupo II
pertencem as chaperoninas que so
independentes de Hsp10 e que esto
presentes nas arqueobactrias e no
citosol das clulas eucariticas.

GRUPO I A chaperonina mais bem
estudada a GroEL (Hsp60) e o seu
co-factor GroES (Hsp10) de E. coli,
figura 5A. A GroEL constituda por
dois anis heptamricos com subunidades idnticas de 57kDa [14]. Cada
subunidade possui trs domnios distintos: o domnio equatorial, que contm o stio de ligao ao ATP, ligado
atravs de um domnio intermedirio,
tipo dobradia, ao domnio apical.
Este ltimo faz a abertura do cilindro e
expe um nmero de resduos hidrofbicos na cavidade que liga o substrato. GroES um anel homo-heptamrico de subunidades com cerca de
10kDa que funciona como o interruptor de GroEL controlada pela ATPase
da prpria GroEL. A GroEL funcional
assimtrica, uma vez que os dois
anis no se encontram no mesmo
estado ligado a nucletidos [14]. A ligao do substrato ao complexo GroEL-GroES ocorre na extremidade do
anel de GroEL que no est ligado a
GroES (Figura 5D). Quase simultaneamente ligam-se 7 molculas de ATP
s subunidades do anel de GroEL que
acabou de receber o substrato e um
complexo GroES, o que provoca o
encapsulamento do substrato dentro
da cavidade GroEL-GroES. As alteraes conformacionais geradas levam dissociao de GroES que se
encontrava ligada ao anel oposto e a
libertao de 7 molculas de ADP. A
ligao da molcula de GroES cau-

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A forma como as chaperoninas do

grupo II medeiam o enrolamento das
protenas est ainda muito pouco
esclarecida (ver reviso de Spiess
e colegas [16]). A actina e a tubulina
foram os primeiros substratos descritos da TRiC, no entanto, actualmente,
conhecem-se outros como a ciclina E
e vrias protenas contendo domnios
WD, ou seja domnios constitudos
apenas por folhas anti-paralelas
[16].

Figura 4 Estruturas tri-dimensionais dos chaperones trigger factor (A) e da prefoldina (B)
(As estruturas foram produzidas com o programa PDB viewer)

sa grandes rearranjos conformacionais da cavidade que se torna mais

espaosa e as propriedades da sua
superfcie interna passam de hidrofbicas a hidroflicas. Protenas no-nativas at cerca de 60kDa podem
ser encapsuladas e sofrerem enrolamento no interior da cavidade [3,13].

GRUPO II As chaperoninas do grupo
II tambm possuem estrutura em anel
duplo, embora o nmero de subunidades por anel varie entre oito e nove
[3,13]. Os complexos arqueobacterianos, conhecidos por termossomas,
contm duas ou trs subunidades distintas por anel (Figura 5C). A chaperonina eucariota designada por TRiC/
CCT (TCP-1 ring complex/chaperonin-

containing TCP-1) possui oito subunidades diferentes por anel, com cerca
de 50 a 60kDa. As estruturas dos termossomas mostram que o arranjo das
subunidades idntico ao encontrado
na GroEL. O domnio de ligao ao
ATP conservado entre todas as chaperoninas e a divergncia maior ocorre no domnio apical que possui uma
extenso em hlice que se projecta
para a abertura do anel (Figura 5B).
Como a diferena essencial entre
as chaperoninas do grupo I e II a
ausncia do factor GroES nas ltimas, pensa-se que essas extenses
funcionem como uma tampa funcionalmente equivalente a GroES [15].

Figura 5 As chaperoninas. (A) Estrutura tridimensional da GroEL/ES de E. coli. (B) Estrutura cristalina
duma subunidade isolada do termossoma (TRiC) de Thermoplasma acidophilum. (C) Aspectos
estruturais do anel do termossoma de Thermococcus sp.. Painel de cima, vista de topo. Painel de
baixo, vista de lado. Molculas de ADP, representadas a vermelho em space fill [39]. As estruturas
foram produzidas com o programa RasMol. (C) Ciclo de aco da chaperonina GroEL/ES, ver texto para
detalhes. Crculo amarelo, superfcie apolar. Crculo azul, superfcie polar

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2. Desagregao de protenas

A exposio de clulas a certas condies de stresse produz agregao
massiva de protenas. Este um
problema comum especialmente nos
organismos que no controlam a sua
temperatura interna, como bactrias,
fungos e plantas. A sobrevivncia
destes organismos depende da cooperao de um sistema bi-chapernico, formado por Hsp70 e por Hsp100,
que actua na solubilizao das protenas agregadas (desagregao) e na
reaquisio da suas estruturas nativas
(re-enrolamento) (ver reviso de Liberek e colegas [17]). Curiosamente,
cada componente deste sistema, por
si s, tem fraca capacidade (Hsp70)
ou mesmo nenhuma capacidade de
desagregao (Hsp100). Ortlogos
de Hsp100 no foram encontrados em
clulas animais, mas encontram-se
na maioria das bactrias (ClpB), em
S. cerevisiae (Hsp104) ou em plantas
(Hsp101). O Hsp100 um chaperone em forma de anel constitudo por
ATPases AAA+ (ATPases associated
with various cellular activities)
. A actividade de desagregao de protenas
do Hsp100 est potencialmente relacionada com o desenrolamento que
ocorre durante a translocao do polipptido atravs do seu canal central
[18]. Estudos recentes mostram que o
chaperone Hsp70 necessrio para a
fragmentao de agregados grandes
em mais pequenos e que na ausncia de Hsp100 os polipptidos extrados dos agregados no adquirem o
enrolamento correcto, mas voltam a
formar novos agregados [19]. No s
o tamanho do agregado importante
como parece ser importante o contedo em estruturas . Observou-se
que agregados contendo concentraes elevadas de estrutura s so

processados na presena de Hsp100

[20]. Com a informao actual disponvel, pensa-se que a aco do sistema Hsp70-Hsp100 na desagregao
de protenas ocorre da seguinte forma: primeiro, o chaperone Hsp70 desemaranha a cadeia polipeptdica do
agregado; segundo, o polipptido
transferido para o chaperone Hsp100
e translocado atravs do canal central
para o seu interior, ocorrendo hidrlise
de ATP. Terceiro, o polipptido libertado do Hsp100 e ou enrola espontaneamente ou sofre re-enrolamento
pelo sistema Hsp70 (ver Figura 6).

plasma integrando uma maquinaria

multichapernica que inclui o chaperone Hsp70, peptidil-propil-isomerases
e outros co-chaperones [9,23]. A actividade desta maquinaria modulada
por protenas co-factores que interagem directamente e especificamente
com o Hsp70 ou com o Hsp90 ou nalguns casos com ambos os chaperones
(por exemplo, os co-chaperones da
famlia com o domnio TPR-clamp, tetratricopeptide repeat-clamp domain).
A protena Hsp90 homodimrica e
cada subunidade possui trs domnios bem definidos: i) um domnio de

Figura 6 Esquema de actuao do sistema chapernico Hsp100-Hsp70 na recuperao de

polipptidos agregados

3. Transduo de sinais

O chaperone Hsp90 presente nas clulas eucariticas, desde a levedura
de padeiro a organismos mais complexos como os mamferos, est envolvido no enrolamento de um diverso
leque de protenas, tais como: factores de transcrio, protenas envolvidas na transduo de sinais, como
por exemplo receptores de hormonas
esterides e cinases reguladoras e
outras protenas que aparentemente
no possuem aspectos estruturais ou
funcionais semelhantes [21,22].
Ao contrrio do que acontece com o
Hsp70, o Hsp90 normalmente no actua no enrolamento de protenas nascentes. O Hsp90 liga-se a protenas
cuja estrutura prxima da nativa,
actuando portanto a um nvel do enrolamento final da protena substrato
(Figura 7A). O Hsp90 um chaperone
dependente de ATP e opera no cito-

ligao ao ATP no terminal N; ii) um

domnio central que completa o stio
activo da ATPase e liga protena
substrato; e iii) um domnio de dimerizao no terminal C (Figura 7B). A
resoluo recente da estrutura da protena HtpG, a Hsp90 de E. coli, veio
revelar novos aspectos do mecanismo
de aco desta classe de chaperones.
Durante o ciclo ATPsico, os trs domnios de Hsp90 passam de um estado aberto - livre de ATP para um
estado fechado ligado a ATP (Figura
7B). Na ausncia de ATP o dmero de
Hsp90 encontra-se numa conformao aberta, ou seja a posio dos
dois monmeros tal que origina uma
grande abertura central forrada com
elementos hidrofbicos provenientes
dos trs domnios (estado apo) [24].
O estado apo o estado mais provvel para a ligao de protenas substrato (Figura 7C). A estrutura sugere
que durante o ciclo ATPsico ocorrem
rearranjos radicais que conduzem
compactao do Hsp90. A ligao ao
ATP induz a dimerizao dos terminais N fechando a estrutura. A forma
como a ligao do ATP interfere com o
rearranjo da estrutura no est ainda
clara, o que bvio que, na totalidade, a hidrofobicidade da superfcie
da abertura central diminui. Pensa-se
que ento ocorrer remodelao da
protena substrato. A hidrlise do ATP
resulta num estado muito compacto
contendo ADP e na libertao da protena substrato e de co-chaperones.

Figura 7 (A) Modelo de um dos tipos de aco do chaperone Hsp90 na vias de transduo de sinais. Os
receptores de hormonas esterides e cinases so enrolados pela maquinaria Hsp90 e aps a ligao do
ligando tornam-se activos. O cilindro representa a parte j estruturada da protena substrato do Hsp90.
(B) Estrutura do Hsp90 ligada a ADP (a vermelho) nas formas distendida e fechada. As estruturas foram
produzidas com o programa PDB viewer. (C) Ciclo de aco do Hsp90. S, substrato

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A dissociao do ADP leva ao estado

apo (aberto) e pronto para um novo
ciclo.

Vrias so as questes ainda em
aberto sobre o modo de aco do chaperone Hsp90. Por exemplo, a forma
como as protenas substrato se ligam
aos vrios domnios do Hsp90 ou de
que forma os co-chaperones regulam
o ciclo ATPsico, ou ainda como
regulada a especificidade do sistema
Hsp90.

4. Translocao de protenas do citoplasma para organelos

A maquinaria Hsp70-Hsp90 para alm
de participar no enrolamento de vrios polipptidos desempenha um
importante papel na distribuio de
protenas tanto para organelos como
para a degradao pelo proteassoma
(ver seco controlo de qualidade).
As protenas mitocondriais so na sua
maioria sintetizadas no citoplasma
numa forma precursora e importadas
aps a traduo para as mitocndrias.
A membrana externa das mitocndrias
possui um translocase designada por
TOM e a membrana interna contm
outro translocase conhecido por TIM.
A Hsp90 e a Hsp70 de mamfero mantm a solubilidade de polipptidos
precursores, enquanto no citoplasma,
de algumas protenas da membrana
interna das mitocndrias e medeiam
a sua entrega ao translocase existente na membrana externa (TOM70)
[9,25]. Na levedura de padeiro a Ydj1
associa-se transientemente com a
membrana e dirige algumas protenas
para a mitocndria e para o retculo
endoplasmtico [26]. Enquanto que,
o co-chaperone Djp1 (da famlia das
Hsp40) encontra-se especificamente
envolvido na translocao de protenas para os peroxissomas, mas no
para o retculo ou para as mitocndrias [27].
5. Controlo de qualidade das protenas

A funo de uma protena est associada sua estrutura tridimensional. Uma vez perdida a estrutura, a
protena deixa de ser funcional. Isto
pode acontecer devido a mutaes
ou devido exposio das clulas a
determinadas condies de stresse.
As clulas desenvolveram mecanis-

Qumica 109 - Abr/Jun 08

mos de controlo de qualidade que

reconhecem protenas mal-enroladas.
O controlo realizado, por um lado,
por chaperones que controlam o estado de enrolamento das protenas
e medeiam o seu re-enrolamento e,
por outro lado, por proteases responsveis pela degradao de protenas
mal-enroladas (Figura 1). As ATPases
AAA+ so complexos proteicos em
forma de anel que podem cooperar
tanto com sistemas chapernicos
como com sistemas proteolticos no
controlo da qualidade das protenas.
Nas clulas eucariticas o sistema
intracelular de degradao de protenas, dependente de ubiquitina/proteassoma (ver reviso em portugus
de Ramos [28]), responsvel pela
remoo de protenas celulares tanto
danificadas (devido a mau enrolamento, ou desnaturao) bem como de
protenas nativas de forma a regular
a quantidade disponvel da protena
funcional. O proteassoma 26S, o complexo proteoltico responsvel pela
degradao dos substratos possui na
base da partcula reguladora um anel
de ATPases AAA+. Por outro lado, a
protena Hsp100, tambm uma ATPase AAA+, actua independentemente
de sistemas proteolticos e em conjunto com o sistema chapernico Hsp70
na solubilizao e re-enrolamento de
protenas agregadas (ver seco desagregao de protenas).
Nos mamferos, a maquinaria Hsp70Hsp90, para alm da sua funo
como maquinaria de enrolamento de
protenas, est envolvida no controlo
de qualidade das protenas celulares.
A protena Bag1, um factor permutador de nucletidos do Hsp70, para
alm de regular o ciclo ATPsico do
chaperone Hsp70 possui um domnio
ubiquitin-like que medeia a interaco com o proteassoma. A protena
CHIP (carboxyl terminus of Hsp70
interacting protein) est envolvida na
ubiquitilao e degradao de alguns
polipptidos que so substratos da
maquinaria Hsp70-Hsp90 uma vez
que possui um domnio (TRP-clamp
tetratricopeptide repeat) que pode
ser reconhecido tanto pelo Hsp70
como pelo Hsp90 e ao mesmo tempo
possui actividade de ligase de ubiquitina (E3 do tipo U-Box, [28]). CHIP e
BAG1 interagem entre si e pensa-se
que recebam substratos no-nativos
do sistema Hsp70-Hsp90, medeiem

a sua ubiquitilao e consequente degradao pelo proteassoma.

No retculo endoplasmtico, o processo de maturao de uma protena
acompanhado pela aco de vrios
enzimas e conduzido por um grande
nmero de chaperones. O controlo de
qualidade destas protenas conduzido por chaperones moleculares que
dirigem protenas aberrantes para o
sistema ERAD (ER-associated degradation) (ver revises de Brodsky [29] e
de Anelli e Sitia [30]).
6. Montagem de complexos proteicos

A importncia dos chaperones na
aquisio da estrutura tridimensional
de uma protena ou no desmantelamento de agregados encontra-se bem
reconhecida, mas, normalmente, fica
esquecida a importncia dos chaperones na formao de complexos
proteicos multimricos. No entanto,
as evidncias so cada vez maiores
de que a montagem de protenas multimricas assistida por chaperones
especficos [31].

O DNA uma molcula muito longa
que se encontra empacotada no ncleo de modo a ocupar pouco espao. Os nucleossomas so estruturas
constitudas por DNA enrolado (cerca
de 146 pares de bases) num complexo de protenas bsicas designadas
por histonas. A correcta deposio de
histonas no DNA acabado de duplicar
(replicar) assistida por chaperones
nucleares. Os nucleossomas so estruturas muito dinmicas devido aco do DNA. Assim, os chaperones
nucleares esto divididos em dois
grupos: a) chaperones envolvidos
na montagem dependente de replicao; b) chaperones envolvidos na
montagem independente de replicao. No primeiro grupo encontram-se
o CAF-1 (chromatin assembly factor
1) e o NAP-1 (chaperone nucleosome assembly factor 1). Do segundo
grupo constam chaperones como a
HIRA (histone-associated regulatory
protein), a nucleoplasmina, a protena
nuclear N1 e o TAF-1 (template activating factor 1).

O proteassoma 26S uma protease
multimrica dependente de ATP com
cerca de 2000 kDa, que degrada pro-

tenas conjugadas covalentemente

com ubiquitina. constitudo por dois
complexos regulatrios 19S e por um
complexo cataltico de com cerca de
700kDa, designado por proteassoma
20S [28]. A estrutura do proteassoma
20S de S. cerevisiae revelou a posio final das 28 subunidades que
o constituem. Sete subunidades
diferentes e sete subunidades

distintas organizam-se em quatro anis

empilhados, cada qual constitudo por
sete membros, numa estequiometria
7777 [32]. Embora a estrutura
seja conhecida h mais de dez anos,
a forma como as 28 subunidades se
associam de modo a formar uma estrutura functional ainda no totalmente clara. O primeiro chaperone a
ser descrito envolvido na montagem
do proteassoma 20S foi o Ump1 [33].
Actualmente, sabe-se que so vrios
os chaperones que assistem a montagem do proteassoma 20S (Figura 8).
O primeiro passo ocorre com a sntese
das subunidades . Um heterodmero
constitudo pelos chaperones PAC1PAC2 liga-se a algumas subunidades servindo como alicerce para a
montagem de um anel . Um terceiro
chaperone Pba3-Pba4 contribui tambm para organizao dos anis . As
subunidades 2, 3 e 4 juntam-se
ao anel formando o complexo 13S. As
restantes subunidades , bem como o
chaperone Ump1, ligam-se formando
o complexo 15S, com a libertao de
Pba3-Pba4. O proteassoma 20S resulta da dimerizao dos complexos
15S assistida pelo chaperone Ump1
que, aps
processamento autocataltico das trs subunidades contendo
actividade proteoltica, degradado

pelo proteassoma, bem como os chaperones PAC1-PAC2 [33-36].

Perspectivas futuras

A compreenso do funcionamento e
aco dos chaperones no enrolamento de protenas apresenta um enorme
potencial do ponto de vista biotecnolgico pois poder servir de base na
optimizao da produo de protenas recombinantes (vejam-se algumas aplicaes na referncia 37). O
incorrecto enrolamento de protenas
chave em determinados processos
celulares, bem como a acumulao e
consequente agregao de protenas
desenroladas esto associados a vrias doenas como o cancro, doenas
neurodegenerativas e senescncia
[38]. O melhor conhecimento de como
a maquinaria de chaperones funciona,
permitir no futuro controlar a aco
das protenas tanto em condies normais como em condies de stresse
ou em caso de doena.

Agradecimentos
O trabalho no laboratrio de PCR
financiado pela Fundao para a Cincia e Tecnologia, projecto POCI/
BIA-PRO/58344/2004. ACM financiada pela Fundao para a Cincia e Tecnologia, bolsa SFRH/
BD/16951/2004/62qt. AJM financiado por uma bolsa de doutoramento do
programa Genetics of Cellular Systems da Forschungsgemeinschaft. Manifestamos o nosso agradecimento ao
Professor Jrgen Dohmen pelas facilidades laboratoriais durante a escrita
deste trabalho.

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Figura 8 Montagem do proteassoma 20S assistida por chaperones

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Curiosidade Histrica
Os gnios qumicos da lmpada
Embora a paternidade da lmpada de
incandescncia seja muitas vezes atribuda a Thomas Edison, na realidade
Edison baseou o seu trabalho numa
lmpada descrita por um qumico ingls num artigo publicado na Scientific
American.
Edison trabalhou a inveno desse
qumico e apresentou a sua verso
ligeiramente melhorada (essencialmente em termos da resistncia do filamento) em Outubro de 1879, verso
que patenteou em Janeiro de 1880
(patente 223 898 de 27 de Janeiro).
A lmpada incandescente foi de facto
inventada por Joseph Wilson Swan,
a quem devemos igualmente o papel
fotogrfico de brometo de prata e trabalho pioneiro com nitrocelulose, um
dos primeiros polmeros feitos, ou antes, modificados, pelo Homem.
Swan trabalhava na sua verso da
lmpada incandescente com filamento de carbono desde 1848 mas as
bombas de vcuo existentes impediam a construo de uma lmpada
eficiente.

Qumica 109 - Abr/Jun 08

Hermann Sprengel, um qumico que

trabalhara na Alemanha no laboratrio
de Robert Wilhelm Bunsen (o mesmo
dos bicos de Bunsen), mudou-se para
Oxford em 1859.
Sprengel desenvolveu uma bomba de
vcuo mais eficiente, a partir da verso inventada por Johann Heinrich
Wilhelm Geissler, um mecnico e soprador de vidro que fabricava instrumentos cientficos para vrios investigadores da Universidade de Bona
(que o agraciou com um doutoramento Honoris Causa em 1868).
Em 1868, Swan, que tivera conhecimento da bomba de Sprengel pelo trabalho de William Crookes, utilizou-a no
aperfeioamento das suas lmpadas.
Em 1878, Swan relatou Newcastle
Chemical Society o sucesso da lmpada que demonstrou em Fevereiro
de 1879 numa conferncia em Newcastle e patenteou no mesmo ano.
De qualquer forma, se no h dvidas
de que no foi Edison o inventor da
lmpada de incandescncia nem sequer o primeiro a patentear a mesma,
importa no esquecer que a iluminao elctrica, das ruas principalmente, no se iniciou com Edison como

muitos igualmente pensam.

De facto, em 1802, muitos anos antes de Edison sequer ter nascido,
outro qumico ingls, Humphry Davy,
descobrira o arco voltaico, tambm
designado por arco de Davy, e inventara a lmpada de Davy, apresentada
Royal Society a 9 de Novembro de
1815. As lmpadas de arco voltaico
foram utilizadas durante muitos anos
na iluminao pblica.
Nomeadamente, trs anos antes de
Edison nascer, em 1844, o fsico francs Jean Foucault, que desenvolveu
a inveno de Davy, conseguiu um
arco elctrico suficientemente brilhante para iluminar a Praa da Concrdia
em Paris.
De igual forma foi um qumico, o austraco Carl Auer von Welsbach que se
doutorou com Robert Bunsen, quem
apresentou a primeira lmpada comercial com filamento de metal.

PS