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Contenido
GLOSARIO .............................................................................................................. 6
INTRODUCCIN ..................................................................................................... 8
JUSTIFICACIN ...................................................................................................... 9
OBJETIVOS ........................................................................................................... 12
OBJETIVO GENERAL ....................................................................................... 12
OBJETIVOS ESPECFICOS .............................................................................. 12
1.
1.1.1
2.1.1
2.2
Misin ................................................................................................. 18
3.3.2
4.9
4.10
DESCRIPCIN OBTENCIN, SEPARACIN E IDENTIFICACIN, DEL
METABOLITO DE INTERS. ............................... Error! Marcador no definido.
5. IMPLEMENTACINDEL PROCESO QUMICO Y/O BIOTECNOLGICO
TENIENDO EN CUENTA CONTROL DE ENSAYOS Y SUPERVISIN DE
VARIABLES. .......................................................................................................... 50
5.1
BIBLIOGRAFA ...................................................................................................... 53
ANEXOS .................................................................. Error! Marcador no definido.
GLOSARIO
pice: este trmino expresa el extremo superior o punta (del latn apex, con el
mismo significado) de la hoja, del fruto, etc. El adjetivo apical se puede aplicar a
flores, frutos, con el significado del ms distal. Distal, a su vez, es lo que se sita
hacia el extremo opuesto a la base o parte basal del rgano en cuestin.
Pednculo: Rabillo de la hoja, flor o fruto con que se une al tallo.
Propiedades organolpticas: Las propiedades organolpticas son el conjunto de
descripciones de las caractersticas fsicas que tiene la materia en general, segn
las pueden percibir nuestros sentidos, por ejemplo su sabor, textura, olor, color. Su
estudio es importante en las ramas de la ciencia en que es habitual evaluar
inicialmente las caractersticas de la materia sin instrumentos cientficos.
Parmetro: Para las matemticas, un parmetro es una variable que permite
identificar, en una familia de elementos, a cada uno de ellos mediante su valor
numrico.
Analito: En qumica analtica un analito es el componente (elemento, compuesto o
ion) de inters analtico de una muestra. Son especies qumicas cuya presencia o
concentracin se desea conocer. El analito es una especie qumica que puede ser
identificado y cuantificado, es decir, determinar su cantidad y concentracin en un
proceso de medicin qumica, constituye un tipo particular de mensurando en la
metrologa qumica.
Metabolito: un metabolito es el producto final utilizada o producida durante el
metabolismo, es decir es el producto final o producto de inters.
Metabolismo: el metabolismo puede definirse como la suma de todas las
reacciones qumicas que ocurren en el organismo viviente. En forma colectiva,
tales reacciones se encargan de mantener la viabilidad del organismo.
Coloide: un coloide se define como una partcula lo suficientemente pequea
como para experimentar movimiento browniano pero a la vez mucho ms grande
que las molculas del medio en que se encuentra.
Residuo: Residuo es definido (por la Ley 42/1975) como todo material resultante
de un proceso de fabricacin, transformacin, utilizacin, consumo o limpieza,
cuando
su
poseedor
o
productor
lo
destina
al
abandono.
Tambin residuo se define como el producto de desecho slido, liquido y gaseoso
INTRODUCCIN
JUSTIFICACIN
El proyecto de formacin SENA nace con el fin de innovar en el mercado con una
bebida alcohlica con sabor a mango, para ello se determinaron las diferentes
especies de mango, donde se eligi como materia prima el mango de azcar
Mangifera Indica L, el cual presenta 14,8% en carbohidratos totales y
caractersticas organolpticas que lo hacen atractivo para el proceso fermentativo,
en la obtencin del vino de mango.
Este fruto tropical se produce en muchos pases del mundo ubicando a Colombia
en la octava posicin con 165.000 toneladas anuales segn el Plan Frutcola
Nacional PFN. Siendo los departamentos de Tolima, Cundinamarca, Magdalena,
Bolvar y Antioquia los mayores productores de este fruto.
Del total de estas toneladas solo se aprovecha el 44% el cual se utiliza en la
fabricacin de jugos, salsas, conservas, mermeladas y jaleas, se pierden entonces
alrededor de 75.000 toneladas anuales que corresponden al 66%.Por esta razn
el mango de azcar Mangifera Indica L se hace ideal para la obtencin de la
bebida alcohlica, vino de mango. Por medio de este proyecto se va a aprovechar
la sobreproduccin nacional de este fruto, ofreciendo un producto de alta calidad
en un mercado tan competitivo como lo es la industria licorera. Lo anterior se
implementa por medio de un proceso qumico donde se transforma la materia
prima el cual se denomina fermentacin alcohlica.
RESUMEN
La obtencin de una bebida alcohlica a partir de la fermentacin del mango de
azcar (Mangifera Indica L) es un proyecto que busca aprovechar la
sobreproduccin nacional del mango de azcar e implementarla en un proceso de
fermentacin obteniendo como producto final un vino de mango.
El proyecto inicia con la identificacin de las materias primas, las cuales son el
mango de azcar y agua para consumo humano, y su posterior caracterizacin por
medio de referencias tericas que fueron corroboradas mediante anlisis
fsico qumicos realizados en el laboratorio.
En la transformacin de la materia prima se implementa un proceso qumico
biotecnolgico, en este caso la fermentacin alcohlica, la cual implica el
aislamiento del microorganismo (levadura), posterior identificacin macroscpica y
microscpica y por medio de pruebas bioqumicas la verificacin de que dicha
levadura metaboliza azucares reductores produciendo etanol, lo cual la hizo apta
para el proyecto.
La elaboracin de vino de mango inicia con la recepcin y seleccin de la fruta,
que a continuacin es sometida a un pre tratamiento que consta de un lavado,
escaldado, descortezado, despulpado, licuado y dilucin para la adecuacin del
sustrato. Este sustrato es inoculado con la levadura previamente aislada para que
en este punto se inicie formalmente la transformacin de la materia prima,
controlando variables como temperatura, pH y agitacin constante durante un
periodo de 8 das.
Al terminar la fermentacin se continua con la purificacin de la bebida fermentada
por medio de una filtracin, clarificacin y filtracin centrifuga con lo cual se
elimina la mayor cantidad de fibra, biomasa y slidos suspendidos presentes en el
fermento.
De esta manera se obtiene una bebida alcohlica de color amarillo brillante, el
proceso finaliza con el embotellado y pasteurizado de la bebida alcohlica
asegurando que el producto final cumpla con estndares de calidad.
ABSTRACT
The obtainment of a alcoholic drink from fermentation of sugars mango (Mangifera
Indica L) is a project that search take advantage of the national overproduction of
sugars mango and implement it in a process of fermentation obtaining as endproduct mangos wine.
The project starts with the identification of raw materials, which are sugars mango
and water to human consumption, and itss further characterization by means of
theoretical references that was corroborated through physico-chemical analysis
made in laboratory.
In the transformation of raw materials is implement a biotechnological chemical
process, in this case the alcoholic fermentation, which implies the isolation of
microorganism (yeast), later macroscopic and microscopic identification and
through biochemical tests the verification of such yeast metabolized reducting
sugars producing ethanol, which made it suitable to project.
The elaboration of mangos wine starts with the reception and selection of the fruit,
that below is subjected to a pretreatment that has a washing, scalding, debarking,
pulping, liquefied and dilution to adaptation of substratum. This substratum is
inoculated with the yeast previously isolation to that at this point start formally the
transformation of raw material, controlling variables like temperature, pH and
constant agitation during a period of 8 days.
At end of fermentation is continued with the purification of fermented beverage
through of a filtration, clarification, and centrifugal filtration whereupon is removed
the highest amount of fiber, biomass and suspended solids that is present in the
ferment.
Of that way is obtained a alcoholic beverage of brilliant yellow color, the process
end with the bottling and pasteurized of beverage, ensuring that the end-product
comply with quality standards.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Obtener productos qumicos de inters industrial de manera ms limpia y
sostenible, manteniendo los estndares de calidad mediante la implementacin de
procesos qumicos modificados y/o la aplicacin de la biotecnologa en procesos
qumicos industriales.
OBJETIVOS ESPECFICOS
-Identificar el producto de inters industrial a obtener
-Definir el proceso qumico o biotecnolgico a implementar
-Identificar y evaluar las variables de proceso susceptibles de ser modificadas
-Efectuar las modificaciones al proceso y ejecutar el proceso modificado
-Caracterizar el producto obtenido
-Evaluar las modificaciones implementadas
ENSAYO
MTODO
Determinacin de la
consistencia
Determinacin del
contenido de slidos
solubles totales
Determinacin del pH
Determinacin de la
acidez titulable
ENSAYO
DETERMINACIN DEL GRADO
ALCOHOLIMTRICO
DETERMINACIN DE LA ACIDEZ TOTAL
DETERMINACIN DE LA
ACIDEZ VOLTIL
DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE
METANOL
DETERMINACIN DEL
CONTENIDO DE ANHDRIDO
SULFUROSO
MTODO
Se efecta de acuerdo con lo indicado en las
GTC 4, p. 13
Se efecta de acuerdo con lo indicado en la
GTC 4, p.133.
Se efecta de acuerdo con lo indicado en la
GTC 4, p. 39
Se efecta de acuerdo con lo indicado en la
GTC 4, p. 138
Se efecta de acuerdo con lo indicado en la
GTC 4, p. 60.
DETERMINACIN DEL
CONTENIDO DE AZCARES TOTALES
DETERMINACIN DEL
CONTENIDO DE CIDO SRBICO
IDENTIFICACIN DE COLORANTES
DETERMINACIN DEL
EXTRACTO SECO REDUCIDO
OPORTUNIDADES
AMENAZAS
DEBILIDADES
Mal administracin del tiempo dedicado al
proyecto
Poca solvencia econmica para una
produccin al nivel industrial.
Poca disposicin de informacin acerca del
proceso fermentativo del mango de azcar.
FORTALEZAS
Corto plazo
0-6 meses
Mediano plazo
6 meses 1
ao
Largo plazo
2 aos en
adelante
2.1.2 Visin.
Ser una empresa lder en el sector licorero e innovar en el mercado de bebidas
alcohlicas tanto nacional como internacionalmente, implementando altos
estndares de calidad.
2.2 MANUAL DE CALIDAD
Para el proceso de obtencin de la bebida alcohlica es necesario
implementar los manuales de calidad de planta y de laboratorio los cuales
poseen los parmetros, equipos y ensayos que se realizan a cada rea con
sus respectivas etapas.
DE
MATERIA
PRIMA
PRODUCTO
MUESTREO
Tipo de muestra: muestra aleatoria
Naturaleza de la muestra: Solido
Fruta: mango de azcar
Especie: Mangifera Indica L
Parmetro a analizar: Porcentaje de azucares, porcentaje de carbohidratos,
porcentaje de fibra
Normatividad vigente: Normas NTC 1266-1,-2,-3,-4.
Equipos:
Hielera porttil
Documentacin requerida:
Sellos
Etiquetas
Libro de campo
Cadena de custodia
Hoja de remisin
Materiales:
Gafas de proteccin
Bata
Guantes de nitrilo
Tapa bocas
cofia
Parmetros in situ:
Olor
Color
Dimetro
Tamao
Masa en gramos
Forma
Reconocimiento del lugar
Para realizar el muestreo se debe especificar el lugar para tomar la muestra que
en este caso es el abastecimiento de alimentos (Corporacin de Abastos S.A
CORABASTOS).
Imagen 1: Ubicacin del sitio
Entrega al laboratorio
La muestra se debe entregar con la documentacin requerida, los sellos, los
rtulos, el libro de campo, la Cadena de custodia y esencialmente la hoja de
remisin. Adems la muestra debe ser entregada mximo un da despus de la
toma de la muestra. En el laboratorio la muestra se debe dejar hasta que ella
adquiera la temperatura ambiente para un buen anlisis de los analitos.
Tipo de recipientes
Bolsas plsticas Ziploc
Tiempo mximo de preservacin:
La muestra se debe preservar mximo por 24 horas ya que la refrigeracin no
tiene temperaturas medianamente bajas.
Tcnicas de preservacin:
La preservacin de las muestras se debe realizar a temperaturas entre 1 a 4
grados Celsius.
3.
3.1
IDENTIFICACIN DE MATERIALES Y EQUIPOS DE ANLISIS QUMICO.
(MATRIZ
DE
LOS
MISMOS,
ALISTAMIENTO)
(INFORME
DE
RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO, VERIFICACIN DE BALANZAS Y
MANEJO DE MATERIAL- INFORME DE MANEJO DE MONTAJES Y
CALIBRACIN DE MATERIAL VOLUMTRICO).
Para la realizacin de los ensayos y la fermentacin es necesario el uso de
material y equipos de laboratorio, para esto es preciso realizar un previo
reconocimiento de este material lo cual se hizo mediante el reconocimiento de los
laboratorios, la verificacin de balanzas, el manejo y calibracin del material
volumtrico. Cuyos informes se muestran en el anexo A.
3.2
CARACTERIZACIN
DE
EQUIPOS
DE
ANLISIS
QUMICO
(ASEGURAR)(DESCRIPCIN DE LOS MISMOS) (INSTRUCTIVOS DE ENSAYO,
INSTRUCTIVOS DE MANEJO DE EQUIPOS BSICOS DE LABORATORIO,
INFORME DE VERIFICACIN DE FUNCIONAMIENTO DE EQUIPOS E
INSTRUMENTOS DE ANLISIS).
Para la realizacin de ensayos se utilizaron los siguientes equipos.
Cromatografo de gases
CROMATOGRAFO DE GASES
1-Verificar que las conexiones de los gases estn bien instaladas.
2- Identificar los diferentes componentes del CG (Unidad analizadora, hornos
para las columnas, panel neumtico, unidad electrnica, el teclado, teclas
numricas, teclas de funciones, teclas programables, unidad de video,
detectores y registradores).
3- Dejar la puerta del horno ligeramente abierta e introducir el gas portador a 60
psi aproximadamente.
4-Encender el instrumento. En el video aparece el titulo PERKIN ELMER. Esto
mientras se establece un diagnostico (30 s).
5-Verificar que la temperatura de la columna no exceda la mxima temperatura
de la misma, pues puede causar daos en ella.
Al encender aparece una de dos posibles pginas:
-Datos y forma del ltimo mtodo utilizado.
-Pagina de control, esto a causa del no uso por ms de 6 meses.
-Si aparece la segunda pagina, se acepta tal configuracin con F8 o se puede
cambiar si se desea.
IMPORTANCIA DE LA CONFIGURACION
La configuracin del equipo esta dada por las condiciones y accesorios
instalados y de acuerdo a esto se realiza un anlisis.
En el caso de aparecer la pagina de control presione la tecla INST/TERM dos
veces para ingresar a la pagina de funciones. Una vez se encuentre en esta
pagina oprima la tecla programable a la funcin configuracin.
Existe la funcin (modif. Config) con esta se cambian los parmetros necesarios
para la nueva configuracin, (temperatura del horno, temperatura del inyector,
temperatura de la columna, flujo, tipo de detector, velocidad de incremento de
temperatura, tiempo de incremento, tiempo de la corrida, sensibilidad, imprimir
etc.). Los parmetros a cambiar aparecen en video inverso, los nuevos valores
se ingresan con el teclado numrico seguido de la tecla programable con la
funcin ENTER F8.
Para el FID utilizar gas de arrastre H2/aire - nitrgeno y para el HWD y DCE
nitrgeno.
RECOMENDACIONES
1- Verificar conexiones del gas de arrastre
2- Al encender el equipo deje la puerta del horno ligeramente abierta, de este
modo el horno no calienta.
3- Usar una velocidad de gas portador segn el dimetro de la columna ( 1/8 =
20 a 30 ml/min o = 60 a 80 ml/min).
4- Mantener una presin de 20 psi para el gas portador. Igualmente para el
mtodo a desarrollar se debe evaluar.
5-La preparacin de los parmetros para un anlisis se hace en modo Terminal.
6-La muestras deben ser voltiles y se debe tener unos patrones de referencia.
7- Para apagar el instrumento se deben modificar (bajar valores de temperatura)
los parmetros trmicos y de esta forma si se puede finalizar.
8- Llene el formato de registro de hoja de vida del instrumento.
TECLADO
Teclas de funciones
1-INST/TERM. Pasa del modo Terminal al modo instrumento o viceversa. Acepta
el mtodo.
2-PAGE: En el modo instrumento cambia la pantalla entre pagina de control y
pagina de estatus. En el modo Terminal pasa de la pagina uno a la dos y as
sucesivamente.
3-SCROLL KEYS: Teclas de avance, para avanzar de la lnea presente de
teclas programables en la pantalla siguiente.
4_^: En el modo instrumento incrementa la atenuacin ATTN del cromatograma
por un factor de dos, En el modo Terminal desplaza el cursor.
5- V: En el modo instrumento disminuye la atenuacin ATTN del cromatograma
por un factor de dos. En el modo Terminal desplaza el cursor.
6-SET ZERO: Activa el modo de control, hace que actualice la lnea base del
detector.
7-CLEAR: Borra cualquier entrada numrica que este en proceso. Borra
mensaje de error.
Potencimetro
OBJETIVO: Determinar la concentracin de oxigeno disuelto con un Ion
selectivo en muestras de aguas.
OBJETIVO:
Describir el proceso
de
utilizacin
apropiada
espectrofotmetro de absorcin atmica para el anlisis de metales.
del
1.
2.
3.
4.
CHECK.
Espectrofotmetro infrarrojo
OBJETIVO: Describir el proceso de utilizacin apropiada del equipo Infrarrojo
FTIR Nicolet Impact 410 a muestras de referencia slidas, liquidas o en fase de
vapor.
MATERIALES Y REACTIVOS:
Equipo infrarrojo
Celda para lquidos o prensa para slidos.
Bromuro de potasio seco y grado espectroscpico.
1. Encienda el computador y espere que cargue Windows.
2. En la pantalla aparece un cuadro de dialogo, seleccione el modo de
operacin OMNIC, de clic dos veces en l o bien de OK.
3. En el cuadro de dialogo siguiente confirme la operacin dando OK.
4. Al desplegar la pantalla seleccione la opcin COLLECT.
5. Elegir COLLECT BACK GROUND, no se debe tener muestra. Observe la
forma de la grafica y su significado. Luego coloque un patrn de poliestireno
(collect sample) para apreciar las bandas de absorcin caractersticas y el
comportamiento del equipo.
6. La pantalla nos muestra un espectro blanco y luego aparecen las del
compuesto aromtico.
7. Proceda a realizar la pastilla de la muestra (totalmente seca, anhidra, hacer
prueba con CuSO4) con KBr o ensamble la celda para lquidos. Seguir
procedimiento de las guas del fabricante.
8. Introduzca el porta muestras al I.R.
9. Hacer clic el COLLECT y luego en COLLECT SAMPLE.
10. La pantalla nos muestra el espectro de la muestra problema.
11. Para ver el espectro en absorbancia o transmitancia cambiamos en la
funcin PROCESS.
12. Para suavizar la lnea de trazado hacer clip en PROCESS y luego en AUTO
SMOOTH. Coloque los nombres de la muestra y el usuario. Asigne los
valores de absorcin a las bandas ms representativas.
13. Para imprimir el espectro hacer clip en FILE y luego en PRINT.
14. Ya teniendo el espectro, proceder a sacar la muestra del porta muestras,
limpiar y entregar.
15. Para salir del programa se sale como cualquier programa Windows.
OJO NOTAS:
El equipo NUNCA DEBE APAGARSE. Asegurarse que el estabilizador
este prendido (encendido y en rojo)
Colormetro
3.3
DESCRIPCIN DEL PROCESO PARA LA OBTENCIN DEL PRODUCTO
QUMICO (A NIVEL EXPERIMENTAL)
A nivel laboratorio se llevo a cabo la obtencin de vino de mango, en base a esto
se realizo un diagrama de flujo, se estimaron los balances de materia y energa los
cuales se realizaron con los equipos que se van a utilizar a nivel planta piloto y el
diagrama de distribucin en planta del proceso de vino de mango
3.3.1 Diagrama de flujo del proceso qumico
El proceso para la elaboracin de vino de mango a nivel planta se describe
mediante 14 etapas, las cuales se distribuyen en 5 reas productivas. Cada rea
tiene un propsito especfico y cada etapa incluye ciertas entradas y salidas que
controladas adecuadamente optimizan el proceso.
84,75
63,5625
254,25
317,8125
15,890625
190,6875
333,703125
333,703125
5,33925
272,30175
250,2773438
250,2773438
6,78
14,4075
63,5625
317,8125
190,6875
127,125
333,703125
Energa en
HP
2581,38
774,41
3355,80
Energa en KW
1924,94
577,48
2502,42
276,95
1478557,26
$ 443.981,30
Energa
por equipo
en HP/H
Nmero
de
equipos
0,5
1
2
1,4751
1
0,4425
1
1,2
2,0115
0,4425
0,75
0,5
1
3
1
1
1
2
4
1
1
2
1
1
Energa
equipos
totales en
HP/h
0,5
3
2
1,4751
1
0,885
4
1,2
2,0115
0,885
0,75
0,5
horas gastadas
por equipos para
cochada de 250 L
de vino
2
5
0,2
1
3
1
4
192
2
2
2
3
Energa
por equipo
en HP/H
Nmero
de
equipos
Energa
equipos
totales en
HP/h
horas gastadas
por equipos para
cochada de 250 L
de vino
0,160
0,16
102,6585086
12
0,2682
1
1
12
0,2682
192,000
1,000
2304
0,2682
1478282,524
172,081325
4.
4.1
PLAN DE MANEJO Y DISPOSICIN DE RESIDUOS GENERADOS EN EL
PROCESO QUMICO (ANEXO DE REGISTRO DE CLASIFICACIN DE
DISPOSICIN FINAL DE RESIDUOS GENERADOS EN LOS ENSAYOS.
ALISTAMIENTO)
A continuacin se muestra la matriz de residuos, donde se identifica el tipo de
residuo, la cantidad generada y los anlisis previos a realizar a cada uno para su
previa disposicin, es importante resaltar que la matriz se realiza con el fin de
determinar los residuos generados en el proceso, siendo esto necesario para el
proyecto de formacin.
Esta matriz se muestra a travs de dos tablas las cuales estn divididas en las 5
reas de proceso establecidas para la obtencin de vino de mango, en la primera
tabla se encuentra el tipo de residuo, una breve descripcin, los anlisis a realizar
y la disposicin final que se les dar. En la segunda se determina el tipo de
residuo generado en cada rea (solido, liquido o gas), el riesgo que puede
presentar que se divide en peligroso y ordinario, la descripcin y la cantidad de
residuo generado por lote que se basa en el balance de materia realizado para el
proceso. La matriz se controla y verifica por medio de los supervisores de cada
rea de proceso, los cuales son los encargados de inspeccionar que los
parmetros establecidos se estn cumpliendo de la mejor manera posible, dando
solucin a las fallas que se pueden presentar a lo largo de la obtencin del vino de
mango.
4.2
.DESCRIPCIN DE TOMA DE MUESTRA (REGISTROS DEL PROCESO
DE TOMA DE MUESTRA.
Tanto para la elaboracin del vino de mango como para realizar los ensayos de
caracterizacin y control de calidad del mango de azcar, previamente se realiza
una toma de la muestra siguiendo un plan de muestreo descrito en la seccin 2.3,
la ejecucin de este plan de muestreo y la toma de la muestra
PASO 1: se ubico el lugar donde se
tomo
la
PASO 2: se
representativa.
tom
la
muestra
4.3
REFERENCIA DEL PRINCIPIO DE ANLISIS (ANEXOINSTRUCTIVOS DE
ENSAYO)
Determinacin de nitrgeno y de protenas por el mtodo kjeldhal
Para realizar la determinacin de este parmetro en una muestra de mango, se
llevo a cabo una digestin en la cual se utiliza acido sulfrico concentrado en
presencia de un catalizador para oxidar hasta dixido de carbono y agua el
hidrogeno, oxigeno y carbono proteico en presencia de calor, despus de esto el
residuo generado se destila con hidrxido de sodio al 40% para la liberacin del
amoniaco y este es recogido en vapor de agua para que se genere el hidrxido de
amonio que posteriormente es recolectado en acido brico y titulado con acido
clorhdrico previamente estandarizado. De este modo se puede conocer la
cantidad de nitrgeno presente y por medio de un factor se calcula la cantidad de
protena contenida en la muestra.
Determinacin de hierro y cobre por espectrofotometra de absorcin
atmica en el vino de mango.
La determinacin de estos metales de realizo hallando la densidad de la bebida
para as saber
cuanto volumen corresponda a un gramo del fermento, la
alcuota tomada se le efectuo una dilucin , posteriormente se realizo la lectura en
el equipo de absorcin atmica con los respectivos patrones de calibracin para
hallar la concentracin en la muestra, en el equipo por medio de una llama
4.4
DESCRIPCIN
MICROORGANISMO
DEL
AISLAMIENTO
IDENTIFICACIN
DEL
4.5
Alistamiento sustrato
1. Alistamiento de cepas
Cultivo de la levadura en medio
solido
Realizacin de pruebas de
concentracin
Adecuacin del
microorganismo a medio
lquido
Generacin de biomasa
Inoculacin del
sustrato
Desarrollo de la fermentacin, llevar a temperatura de 27c a
130 rpm
Supervisin y control de variables
involucradas
Inactivacin de la fermentacin
Filtracin
Embotellado
Pasteurizacin
5.
IMPLEMENTACINDEL PROCESO QUMICO Y/O BIOTECNOLGICO
TENIENDO EN CUENTA CONTROL DE ENSAYOS Y SUPERVISIN DE
VARIABLES.
5.1
5.2
PROGRAMA DE SUPERVISIN DEL PROCESO QUMICO QUE
IDENTIFIQUE LAS REAS Y PERSONAL RESPONSABLE DE CADA UNA DE
LAS ACTIVIDADES (FORMATOS PARA LA RECOLECCIN DE INFORMACIN
DEL PROCESO QUMICO ANEXOS)
Las listas de verificacin del proceso de obtencin de vino de mango, estn
diseadas para cada una de las reas del proceso ( supervisin de la materia
prima, pre tratamiento, fermentacin, separacin y purificacin y empaque) y sus
respectivas etapas, e incluyen el objetivo de cada rea, y los indicadores de cada
etapa con el fin de comprobar que las variables presentes se controlen y se
cumplan de acuerdo a la operacin que se realiza, siguiendo la documentacin
que se requiere en cada etapa, como son formatos, registros, fichas de
caracterizacin, y normas relacionadas con la operacin que se est verificando,
se encuentra tambin el personal que se encarga de supervisar lo anteriormente
mencionado.
6.
EVALUACIN Y MONITOREO DEL PROCESO QUMICO
6.1
DESCRIPCIN DE NO CONFORMIDADES O CORRECCIONES
RESULTANTES DE LA EVALUACIN
Al realizar el proceso la separacin y purificacin de la bebida fermentada se
presentan dificultades en algunas de las etapas que comprenden este proceso,
tanto las causas como las posibles soluciones de esta problemtica en la
elaboracin del vino de mango se evalan y sintetizan en la siguiente matriz.
PROBLEMATICA
Debido a la cantidad de
slidos presentes en la
bebida fermentada, a la
hora de realizar la
filtracin se provoco la
obstruccin del medio
filtrante demorando el
proceso de separacin
de la biomasa y fibra
afectando directamente
todo el proceso.
ETAPAS
Filtracin.
CAUSA
SOLUCIN
separacin y
purificacin.
La eleccin del
El objetivo de la
agente y su dosis
separacin y
ptima se
purificacin es obtener
determina con un
una bebida traslucida y
test de jarras, el
brillante, lo cual no se
cual implica el uso
logro despus de
de 6 litros de
realizar las etapas que clarificacin
bebida
se plantean para este
fermentada,
fin, por esto se
debido a que se
establecen causas y
elabora tan solo 1
posibles soluciones
litro fue imposible
para optimizar el
determinar el
proceso.
agente coagulante
y su dosis ptima.
El filtro membrana
es empleado para
Debido a la baja
separaciones con
capacidad del equipo la
baja cantidad de
filtracin centrifuga no
slidos, al haber
se realizo por esta
presente fibra y
razn se empleo un
filtracin biomasa genero el
filtro de membrana de
taponamiento del
0,2 micrmetros
filtro, adems
aumentando la cantidad
provoco que la
de tiempo en la etapa.
bebida filtrada
fuese de bajo
volumen.
Se recomienda
producir mayor
volumen de
fermentado
(alrededor de 7
litros) para
determinar dosis de
agente coagulante
mediante el ensayo
de test de jarras.
La solucin mas
efectiva y
correspondiente a la
etapa es utilizar un
filtro centrifugo que
tenga una capacidad
requerida para el
proceso,
minimizando el
tiempo.
6.2
ACCIONES CORRECTIVAS Y DE MEJORA, SEGN LOS RESULTADOS
OBTENIDOS EN EL PROCESO QUMICO.
En el proceso de obtencin de la bebida alcohlica se presentaron inconvenientes
que se dieron en el rea de separacin y purificacin, dentro de las etapas de esta
rea se proponen soluciones con el fin de mejorar el proceso.
En la etapa de filtracin la cantidad de slidos presentes en el fermento provoco la
obstruccin del medio filtrante del equipo y por esta razn se proponen dos
posibles soluciones, las cuales son: emplear un medio filtrante de mayor
capacidad o retirar la fibra antes de iniciar la fermentacin, al presentarse este
inconveniente en la etapa de filtracin se vio afectado directamente el proceso ya
que provoco demora en la operacin.
En la etapa de clarificacin la produccin de un bajo volumen de fermento fue la
causa del problema, ya que no se pudo realizar el ensayo para determinar la
dosis optima de coagulante, en este caso si se realiza una produccin de mayor
volumen se solucionara la falla en esta operacin.
Por ultimo en la etapa de filtracin centrifuga, el equipo que se utilizo fue de baja
capacidad y el tiempo que requera esta etapa aumento, la mejor y nica opcin
es evitar la utilizacin de equipos de baja capacidad del lecho filtrante y as no
provocar demoras y posibles cuello de botella en el proceso.
BIBLIOGRAFIA
NTC 2322; VIDRIO. MATERIAL DE VIDRIO PARA LABORATORIO.
BALONES VOLUMTRICOS DE UN SOLO TRAZO.
NTC 2175: 1986, Material de vidrio para laboratorio. Buretas. Requisitos
generales.
NTC 2198: 1986, Material de vidrio para laboratorio. Pipetas graduadas.
NTC 2052: 1985, Material de vidrio para laboratorio. Pipetas aforadas (de un solo trazo).
ANEXOS
ANEXO A.
LABORATORIO NO 6
Calibracin del material volumtrico
Fecha: 30-Marzo-2011
OBJETIVOS
Objetivo General:
Verificar adecuadamente la calibracin del material volumtrico siguiendo los
parmetros establecidos y las indicaciones de las normas NTC.
Objetivos Especficos:
Determinar mediante los ensayos de calibracin la precisin y exactitud del
material volumtrico.
Realizar adecuadamente y con las debidas precauciones la verificacin de la
calibracin del material volumtrico.
Lograr una buena prctica de laboratorio con la ayuda de las instrucciones del
profesor, las normas NTC y los conocimientos previos.
MARCO TEORICO:
BALONES VOLUMTRICOS DE UN SOLO TRAZO
Tomando como referencia y documento de consulta la norma tcnica colombiana
NTC 2322; VIDRIO. MATERIAL DE VIDRIO PARA LABORATORIO. BALONES
VOLUMTRICOS DE UN SOLO TRAZO. Se aplican varios conceptos que se
deben tener en cuenta para realizar una correcta verificacin de la calibracin de
un baln volumtrico o baln aforado.
Unidad de volumen: La unidad de volumen tomada es el cm 3, aunque tambin se
puede utilizar el nombre de mililitro (ml).
5
10
25
50
100
200
250
500
1 000
2 000
0,025
0,025
0,04
0,06
0,10
0,15
0,15
0,25
0,40
0,60
Clase B
0,05
0,05
0,08
0,12
0,20
0,30
0,30
0,50
0,80
1,20
valores en
*Construccin
Material: Los balones volumtricos sern construidos con vidrio que posea
propiedades qumicas y trmicas adecuadas y que en lo posible est libre de
defectos visibles y razonablemente libre de tensiones internas. Los balones
volumtricos tendrn una construccin robusta para asegurar su uso normal y el
espesor de pared ser de preferencia uniforme.
Capacidad nominal
Dimetro de la base
Imagen 1.
Cuello: El cuello del baln ser aproximadamente cilndrico con excepcin del el
esmerilado (si los hay), sin variaciones excesivas en su dimetro interno y espesor
de pared. El eje del cuello ser perpendicular a la base del baln. El extremo del
cuello de un baln de cuello liso terminar en un reborde reforzado.
Tapn: Si el baln est provisto de tapn, ser adecuado al cuello del baln y
podr fabricarse de vidrio o de un material plstico inerte.
Dimensiones: Los balones volumtricos cumplirn con las dimensiones indicadas
en la Tabla 2. Las dimensiones recomendadas en la Tabla 3 son nicamente
aproximadas, pero sirven de orientacin para casos prcticos de uso. La lnea de
graduacin estar ubicada en el segundo tercio inferior del cuello del baln y la
distancia mnima desde la lnea de graduacin hasta cualquier punto donde
cambie el dimetro interno del cuello, ser la especificada en la Tabla 2.
Tabla 2. Dimensiones
Capacidad
nominal (ml)
5
10
25
50
100
200
250
500
1 000
Clase
6 a 10
6a8
8 a 10
10 a 12
12 a 14
14 a 17
14 a 17
17 a 21
21 a 25
5
10
25
50
100
200
250
500
1 000
2 000
70
90
110
140
170
210
220
260
300
370
22
27
40
50
60
75
80
100
125
160
15
18
25
35
40
50
55
70
85
110
Dimensiones en milmetros
Imagen 2
PIPETA GRADUADA:
Es un elemento de vidrio que es utilizado para dar volmenes exactos con bastante
reproducibilidad, con esta pipeta, se pueden medir distintos volmenes de lquido, ya que lleva
una escala graduada.
Las especificaciones en cuanto a los parmetros establecidos para una pipeta graduada y calibrada
se encuentra en la NTC 2198: 1986, Material de vidrio para laboratorio. Pipetas graduadas.
Imagen 3
PIPETA VOLUMTRICA:
Es un elemento de vidrio, que posee un nico valor de medida, por lo que slo puede medir un
volumen especfico, esto aparentemente es una desventaja pero en cuanto a precisin y exactitud
es un instrumento bastante competitivo.
Las pipetas graduadas permiten medir volmenes intermedios, pues estn graduadas, mientras
que las pipetas volumtricas slo miden el volumen que viene indicado en ellas.
Las especificaciones con respecto a este material se encuentran en la NTC 2052: 1985, Material de
vidrio para laboratorio. Pipetas aforadas (de un solo trazo).
Imagen 4
PROBETAS:
Tubo de cristal o borosilicato alargado y graduado, cerrado por un extremo, usado
como recipiente de lquidos o gases, el cual tiene como finalidad medir el volumen
de los propios. Cabe denotar que este instrumento por sus caractersticas clasifica
en el material volumtrico de contencin.
Las especificaciones referentes a este instrumento se encuentran consignadas en
la NTC 2321: 1987, Material de vidrio para laboratorio. Probetas graduadas.
Imagen 5
DIAGRAMA DE FLUJO
Inicio
Fin
MATERIALES
Pipeta graduada
Baln aforado de 100 mL
Pipeta volumtrica de 20 mL
Probeta de 100 mL
Pipeta aforada de 2 mL
Bureta de 50 mL
Balanza analtica
Erlenmeyer
Gotero
Reactivos
Acetona
Agua des ionizada
Alcohol etlico
gota y sin gota de estos valores comparados con el valor terico que es 20 mL. Y
luego comparamos las dos pipetas aforadas en cuanto a su calibracin.
Con la pipeta aforada A, al calcular el volumen con gota y con este calcular los
datos, obtuvimos una precisin y una exactitud de 99,5565 y 99,1829, que
comparado con el volumen calculado sin gota y sus respectivos datos de precisin
y exactitud, que fueron 99,8973 y 99,5592, concluimos que para tomar la medicin
de un volumen de 20 mL mas exacto y preciso, lo ideal es realizarlo sin tener en
cuenta la gota que queda en la punta de la pipeta, esto es debido a que algunas
pipetas son calibradas descontando esta gota desde el momento de su
fabricacin.
Con la pipeta aforada B, al calcular la precisin y exactitud del volumen contenido
teniendo en cuenta la gota, obtuvimos 91,8389 y 94,3843 respectivamente, estos
valores nos indican que esta pipeta, a diferencia de la anterior est bastante
descalibrada, pero esto puede deberse a que a la hora de llenar la pipeta con
agua, el menisco no estaba tangente a la lnea de afore, lo que a la hora de pesar
esta cantidad de agua, vara significativamente. Analizando ahora los datos de
precisin y exactitud obtenidos sin tener en cuenta la gota, los valores son
93,1116 y 94,75255 respectivamente, que al igual que los datos obtenidos con
gota, son bastante imprecisos e inexactos, pero aun as, la incertidumbre
porcentual y el error porcentual son un poco ms bajos que al momento de hacer
la medida teniendo en cuenta la gota.
Si comparamos la pipeta aforada A, con la pipeta aforada B, segn los datos
reportados y calculados, podemos asumir que la pipeta aforada A es mucho ms
precisa y exacta que la B, o vindolo desde otro punto de vista podemos inferir
que la pipeta aforada A esta bien calibrada, mientras que la pipeta B no. Esta
conclusin nos lleva a decir que esto se debe a que probablemente la
descalibracin se deba al trato y al tiempo de uso que ha tenido este material,
aunque lo ms seguro es que a la hora de realizar la prctica, los datos del peso
del agua contenida en la pipeta aforada B, fueron mal tomados por la persona
encargada, esto lo concluimos analizando los datos y lo distantes que estuvieron
unos con otros y lo alejados frente al valor terico esperado.
no es el ms apropiado ya que su desviacin oscila entre 0,4 y 1,3, otro dato que nos
corrobora esta afirmacin es el margen de error que presenta ya que es muy elevado
frente a otros instrumentos ms competitivos a la hora de observar su margen de error.
Con esto concluimos inicialmente que la probeta al ser un instrumento de contencin mas
no de transferencia no es el ms indicado para realizar medidas que requieran una alta
precisin y exactitud, puesto que segn los resultados obtenidos no es la ms confiable,
tambin nos indica que el material esta descalibrado lo que nos impide realizar medidas
reproducibles. Otro factor que pudo haber influido en los resultados fue mala toma de los
datos por parte del personal encargado.
Grupo 5: PIPETA AFORADA 2(ml)
ANALISIS DE RESULTADOS: Grupo 5
Al analizar los datos recolectados, podemos observar que la pipeta, se
aproxima al valor terico esperado, pero aun as mirando la proporcin de la
medida sin gota varia relativamente el valor que nos arroja el instrument frente
a la medida en la cual se tiene en cuenta la gota, con esto podemos decir que la
medida que no tiene en cuenta la gota es ms precisa pero menos exacta con
respecto a la medida en la cual se tiene en cuenta la gota la cual es ms exacta
y menos precisa que la anterior. Con lo cual concluimos que si necesitramos
realizar una medida con mayor precisin escogeramos la pipeta en la cual no
se tiene en cuenta la gota, pero si necesitramos una medida con mayor
exactitud requeriramos la pipeta en la cual se tiene en cuenta la gota.
Grupo 6: BURETA DE 50(ml) tabla 6
ANALISIS DE RESULTADOS: Grupo 6
Tras realizar una serie de ensayos con la bureta y un numero de pesadas
podemos observar que este instrumento presenta una serie de datos que al ser
vistos desde un ngulo critico no es bastante reproducible, ya que presenta una
precisin baja y una incertidumbre alta. podemos ver en la tabla que en ciertos
datos aumenta y luego se reduce significativamente lo que nos indica que los
datos no son constantes lo que hace que se alteren los resultados, haciendo que
en ciertos casos que requieran exactitud no lo haga de la forma ms adecuada y
fiable, con lo que concluimos, que la bureta al ser un instrumento de transferencia
no est dando la precisin y la exactitud que se espera hacia un material
volumtrico lo que nos indica finalmente que la bureta esta descalibrada.
CONCLUSIONES
Se determino mediante los ensayos de calibracin la precisin y exactitud del
material volumtrico.
Se realizo adecuadamente y con las debidas precauciones la verificacin de la
calibracin del material volumtrico.
Se Logro una buena prctica de laboratorio con la ayuda de las instrucciones
del profesor, las normas NTC y los conocimientos previos.
Se observaron los datos tomados por los dems grupos y se les realizo los
respectivos clculos y anlisis para verificar la calibracin de dichos
instrumentos.
ANEXO B
INFORME DE MICROBIOLOGA
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE UN MICROORGANISMO CAPAZ DE
FERMENTAR LA GLUCOSA PARA OBTENER UNA BEBIDA ALCOHOLICA
A PARTIR DEL MANGO DE AZCAR (MANGIFERA INDICA L)
RUBEN DARIO CANRO FARIAS
JEISSON FERNANDO CRUZ MENDOZA
JENNY ANDREA PERALTA BARRETO
VILMA ROCIO CASTAEDA ESPINOSA
HERNAN DARIO PEREZ SANTOS
ALEXANDRA MONTEALEGRE TOVAR
INSTRUCTORA:
Etna Milena Snchez Castelblanco
SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE - SENA
CENTRO DE GESTIN INDUSTRIAL
TECNOLOGA EN QUMICA APLICADA A LA INDUSTRIA
BOGOT, D.C.
2011
RESUMEN
Para la realizacin del aislamiento de levaduras se ejecutaron ciertas prcticas
las cuales se presentan en este informe, el cual contiene en su estructura una
secuencia de contenidos, conceptos y metodologa que permite que se siga un
procedimiento adecuado para llegar a unos resultados y posteriormente su
respectivo anlisis.
El orden de los contenidos presenta un orden lgico comenzando por las
tcnica de esterilizacin que se le realizaron, seguido por la preparacin del
medio de cultivo, la realizacin de la respectiva siembra donde se obtuvo el
microorganismo que ms adelante fue definido mediante identificaciones
macro y microscpicas de la colonia que se obtuvo, para luego realizar las
tcnicas de frotis y tincin de Gram, para poder definir el tipo de
microorganismo que se est trabajando.
Luego del aislamiento de los microorganismos se comprob el metabolismo de
estos, lo cual se logr utilizando las diferentes pruebas bioqumicas para las
levaduras, en este caso se utilizaron kliger, rojo de metilo y TSI, con el fin de
comprobar si el microorganismo fermenta azucares para la implementacin en
el proyecto de formacin cuyo objetivo es la obtencin de una bebida
alcohlica a partir de la fermentacin del mango de azcar (mangifera Indica
L).
2. INTRODUCCIN
El proyecto de formacin Sena tiene como fin la obtencin de una bebida
alcohlica a partir de la fermentacin del mango de azcar (Mangifera Indica
L) mediado por la levadura sacchromyces cerevisiae, para lograr este objetivo
es de vital importancia realizar un aislamiento del microorganismo de inters lo
cual se ha ejecutado durante tres sesiones de formacin del rea de
microbiologa.
Esto agiliza y facilita la asimilacin del proyecto que se va a llevar a cabo
proporcionando teora y principios bsicos del tema, adems posibilita la
aplicacin de estos conceptos y contenidos, teniendo en cuenta los diferentes
cuidados que se deben tener a la hora de la realizacin de las prcticas y
tambin un logro de los objetivos propuestos despertando un sentido crtico y
analtico basado en el marco de investigacin seria y responsable que se
realiz.
El informe que se presentar a continuacin contiene la informacin sobre las
practicas realizadas (siembra, aislamiento por agotamiento y pruebas
bioqumicas) el modo en el cual fueron llevadas a cabo, los resultados y el
anlisis realizado a cada uno de ellos. Para as determinar que medio de
cultivo es el adecuado para extraer el microorganismo de inters.
3. OBJETIVOS
3.1. OBJETIVO GENERAL
5. METODOLOGA
PREPARACIN DEL CULTIVO PDA (CONDICIONES ASPTICAS)
Para garantizar el crecimiento de microorganismos se prepararon medios de
cultivo que contienen los nutrientes necesarios ptimos para el desarrollo de
colonias microbianas.
INICIO
De acuerdo a los clculos, se pesaron 7.8g de PDA.
Se disolvieron en 100 ml de agua destilada, en un frasco de dilucin y luego
se llevo a volumen. (200ml)
Se calent la solucin hasta punto de ebullicin por un minuto.
La solucin se esterilizo en el autoclave.
Se agregaron los 200 ml en las cajas de petri, previamente esterilizadas,
adicionando 25 ml en cada caja.
FIN
Se dejo solidificar, se envolvi en papel vinipel y se llevo a la nevera.
PROTOCOLO PREPARACION DE AGUA PEPTONADA
El agua peptonada se uso para realizar las diluciones ya sea a partir de medio
slido o lquido para luego proceder a la siembra en las cajas de Petri con el
medio de cultivo que en este caso fue PDA.
Se disolvieron 3.51 de agua peptonada en 234 ml de agua destilada.
INICIO
Se fracciono el agua en tubos taparosca, 9 ml en cada uno.
Se calent hasta punto de ebullicin por 2 minutos
FIN
Se realizo el ciclo de auto clave para esterilizar
PREPARACIN DE DILUCIONES DE LA MUESTRA (CONDICIONES
ASPTICAS)
Las diluciones se realizaron con el fin de disminuir la concentracin de la
muestra, como consecuencia de esto se obtienen colonias microbianas mas
separadas unas de la otras.
INICIO
Se tomaron 10 ml de cada muestra (Banano y mango), se adicionaron en los
frascos de dilucin de 90 ml cada uno.
Para la muestra slida (mango) se realizo una previa maceracin
Se agito y se dejo reposar por cinco minutos
Posteriormente se realizaron las diluciones (10-2,10-3,10-4) partiendo de los
frascos de 90 ml que contenan las muestras.
Se sembraron en los medios previamente preparados, tomando 0.1 ml de las
diluciones.
Se llevaron a la incubadora a una temperatura de 27 C.
FIN
SIEMBRA DE LAS MUESTRAS EN LAS CAJAS DE PETRI (CONDICIONES
ASPTICAS)
La siembra en cajas de Petri se lleva a cabo de forma asptica con el fin de
que solo crezca el microorganismo de inters y no de lugar para que otros
microorganismos contaminen el cultivo, generando as un cultivo axnico.
Posteriormente se rotularon las cajas en la base de acuerdo a la muestra y
dilucin.
Se tomaron las diluciones de cada muestra y se sembraron en las respectivas
cajas de petri, utilizando el asa de vidrio previamente esterilizada.
INICIO
Se llevaron las cajas a la incubadora a una temperatura de 27 grados Celsius.
Se envolvieron en papel vinipel y luego se llevaron a la nevera.
FIN
PREPARACIN DEL FROTIS (CONDICIONES ASPTICAS)
El frotis y la tincin diferencial de Gram se realizan para identificar ms fcil y
efectivamente microorganismos al microscopio.
INICIO
Se coloco una gota de agua en el portaobjetos.
Se pincho la colonia con el asa recta, previamente esterilizada y se
homogenizo en la gota de agua.
Se dejo secar la muestra en el portaobjetos, y posteriormente se fijo
flamendola en el mechero.
Se agrego cristal violeta por un minuto y se lavo con agua.
Se agrego lugol por un minuto y se lavo con agua
Se agrego alcohol-acetona por medio minuto y se lavo con agua
Se agrego fucsina por un minuto y se lavo con agua, se dejo secar.
Se llevo la muestra al microscopio.
FIN
TCNICA DE AISLAMIENTO POR ESTRIA (CONDICIONES ASPTICAS)
Las tcnicas de aislamiento, permiten la obtencin de microorganismos a
partir de muestras complejas (Suelo, agua, alimentos etc.) en las que hay gran
diversidad microbiana, as como para comprobar la pureza de los cultivos
obtenidos.
FIN
Se envolvieron las cajas en papel vinipel y se llevaron a la nevera.
Se distribuyo la muestra de la colonia en el agar en forma de estras.
Se coloco la muestra de cada colonia en el medio de cultivo. (PDA)
Se pincho la colonia ms aislada para el aislamiento en cada muestra.
INICIO
REALIZACIN DE PRUEBA BIOQUMICA TSI
CONCLUSIONES
Se obtuvo una bebida de mango con 0,56% de etanol, que de acuerdo
a la NTC 708, no se considera un vino de frutas.
Se defini como proceso biotecnolgico una fermentacin alcohlica
mediada por una levadura capaz de fermentar glucosa y sacarosa
produciendo etanol.
Se dise el diagrama de proceso para la produccin a nivel piloto del
vino de mango, con un total de 5 reas y 14 etapas de proceso,
contando con un total de 28 equipos.
Se identificaron las variables a modificar para optimizar la fermentacin,
estas son cantidad de oxgeno disuelto y concentracin de azcares
fermentables en el sustrato.