Objetivos

Observar el fenmeno de la hemolisis y explicarlo en funcin de

las diferencias de osmolaridad entre el interior y el exterior de la
clula.
Comprobar que la osmolaridad de una solucin depende del
nmero de partculas osmticamente activas y no de su
concentracin.
Determinar la relacin que existe entre el coeficiente de particin
y la permeabilidad de la membrana.
Explicar el fenmeno de la estructura qumica de la membrana.

Material y Mtodos
Material biolgico:

sangre (6 gotas)

Cristalera, instrumental y equipo:

2 pipetas Pasteur con bulbo

5 pipetas graduadas de 5 mL
2 perillas o jeringas
25 tubos de ensayo
2 gradillas
2 vasos de precipitados de 100 Ml
Lancetas
Guantes

Material de consumo y soluciones

Agua destilada

Soluciones de:
NaCl 0.15 M
CaCl2 0.15

Sacarosa 0.15 M y 0.3 M

Glicerol 0.3 M
Alcohol metlico 0.3 M
Alcohol etlico 0.3 M
Alcohol proplico 0.3 M

Desarrollo Experimental:
Observacin de la hemolisis
En un tubo de ensayo se pusieron 6 mL de solucin salina (NaCl 0.15
M), mas seis gotas de sangre, despus de mezclar con suavidad se
tendr una suspensin de glbulos rojos que se conservara durante toda
la prctica.
De la suspensin anterior se tomaron las cantidades necesarias para las
pruebas siguientes.
Se aprender a distinguir el fenmeno de hemolisis. Se agreg 5 gotas
de la suspensin inicial de glbulos rojos a dos tubos de ensayo, uno de
ellos se coloc 5 mL de agua destilada y al otro 5 mL de solucin salina.
Se observ a travs del lquido de los tubos y se determin en cual se ha
producido la hemolisis.
Actividad Osmtica de sustancias no difusibles
La permeabilidad de la membrana de los glbulos rojos es mucho mayor
para el agua que para los iones, dependiendo de la concentracin de la
solucin en la que se coloquen los glbulos rojos ocurrir o no la
osmosis. Se determinara la os molaridad necesaria para que se produzca
la hemolisis. Para ellos a partir de soluciones de NaCl 0.15 M, CaCl 2 0.15
M y sacarosa 0.15 M , se prepararan la diluciones indicadas en la tabla 1,
en cada una de ellas agregar 5 gotas de la suspensin inicial de glbulos
rojos; mezclar con suavidad al hacer las diluciones y al aadir las 5
gotas.
El tiempo transcurrido para la rotura de los glbulos rojos (hemolisis) se
tomara como medida de la permeabilidad frente a las distintas
disoluciones. Realizar las observaciones cada minuto durante los

primeros cinco minutos, despus cada cinco minutos hasta el final de la

prctica.

Actividad osmtica de sustancias difusibles

Algunas sustancias pueden difundir a travs de las membranas sin
dificultad. Estas sustancias tienden a equilibrarse a ambos lados de la
membrana y normalmente arrastran agua, ya que otros solutos
osmticamente activos no pueden salir para compensar la entrada, se
produce un gradiente osmtico hacia el interior de la clula.
Para poner de manifiesto este efecto se utilizaran soluciones
isoosmticas con respecto al contenido de los glbulos rojos (0.3
osmolar) de una sustancia difusible (glicerol) y de otra no difusible
(sacarosa).
Colocar 5 mL de cada una de las soluciones (glicerol 0.3 M y sacarosa
0.3 M) en diferentes tubos de ensayo y aada a cada uno de ellos 5
gotas de la suspensin de glbulos rojos, mezcle suavemente y observe
el efecto producido.
Velocidad de difusin
Como se ha mencionado, existen diversas sustancias que pueden
atravesar la membrana celular, pero la velocidad a la que difunden
depende de su solubilidad en la matriz lipdica de la membrana. Un
ndice que se usa con frecuencia en estudios de este tipo es el
coeficiente de particin, que se define como la relacin que resultad de
comparar la solubilidad de una sustancia en aceite, con respecto a su
solubilidad en agua. Dicho coeficiente s mayor entre mayor sea el peso
molecular y la longitud de la cadena de tomos de carbono de la
sustancia.
Para este experimento se utilizaran soluciones isoosmoticas (0.3 M) de
sustancias con diferentes coeficientes de particin:

Alcohol metlico (CH3OH) Coeficiente de particin = 0.0097

Alcohol etlico (CH3-CH2OH) Coeficiente de particin = 0.0357
Alcohol proplico ( CH3-CH2-CH2-OH) Coeficiente de particin =
0.156

Colocar 5 mL de cada solucin en tubos de ensayo previamente

etiquetados y aadir a cada uno 5 gotas de la suspensin de glbulos
rojos. Mezclar y observar rpidamente los efectos, medir el tiempo (en
segundos) en que se produce la hemolisis total. Hacer una comparacin
con la hemolisis producida en agua destilada.
2. Actividad osmtica de sustancias no difusibles.
TABLA 1.

NaCl
mL de NaCl
0.15 M
Tubo
1
2
3
4
5

5
2
1.5
1
0.5

Tiempo
Osmolarida
transcurrid
mL de
Concentraci
H2O
d (mOsm) o antes de
n final (M)
destilada
(G=1.8)
hemlisis
(min)
--0
0.15
290.0
3.10
3
0.06
116.0
2.53
3.5
0.045
87.0
2.25
4
0.03
58.0
2.05
4.5
0.015
29.0

CaCl2
mL de CaCl2
0.15 M
Tubo
1
2
3
4
5

5
2
1.5
1
0.5

mL de
H2O
destil
ada
0
3
3.5
4
4.5

Osmolarida
Concentraci
d (mOsm)
n final (M)
(G=2.6)
0.15
0.06
0.045
0.03
0.015

418.9
167.6
125.7
83.8
41.9

Tiempo
transcurrid
o antes de
hemlisis(
min)
----3.00
2.50
2.10

Sacarosa
mL de
sacarosa
0.15 M
Tubo

Tiempo
mL de
transcurrid
Concentraci Osmolarida
H2O
o antes de
n final (M)
d (mOsm)
destilada
hemlisis(
min)

1
2
3
4
5

5
2
1.5
1
0.5

0
3
3.5
4
4.5

0.15
0.06
0.045
0.03
0.015

--2.00
1.51
1.40
1.32

163.9
65.5
49.2
32.0
16.4

3. Actividad osmtica de sustancias difusibles.

TABLA 2.
Sustancia

Aspecto

Observaciones

Glicerol

Traslcido

Sacarosa

Turbio

Homogneo , hay
hemolisis.
Heterogneo . no hay
hemolisis.

4. Velocidad de difusin.
TABLA 3.
Alcohol
Metlico (CH3OH)
Etlico (CH3CH2OH)
Proplico (CH3CH2CH2OH)

Coeficiente de
particin
0.0097
0.0357
0.156

Tiempo (s)
21

11
5

Observacin de la hemlisis con respecto al coeficiente de particin

25
20
15
Tiempo en que se produce la hemlisis (s)

10
5
0
.0097

.0357

.156

Coeficiente de Particin

Discusin de los resultados

La difusin a travs de la membrana en los glbulos rojos es mayor para
el agua y sustancias disueltas de menor tamao debido a las
acuaporinas. En el experimento se trat de determinar la osmolaridad
necesaria para provocar la hemolisis
La sacarosa, es una molcula que no se difunde y adems atrae hacia
las molculas de agua, evitando la hemlisis hasta que su concentracin
es muy baja , comprobando que la concentracin no tiene nada que ver
con su difusin a travs de la membrana; sino que depende de las
partculas osmticamente activas.
Analizando los datos obtenidos y observando que la hemlisis comienza
en puntos distintos de acuerdo a las propiedades de l soluto; el NaCl y
CaCl2 son sustancias que se disocian, por lo tanto su osmolaridad ser
mayor que el de la molcula no disociable, esto es que la molcula
gramo ser igual a dos osmoles mientras que en la sacarosa, su
molcula gramo es igual a un osmol de sacarosa.
Existen algunas sustancias que se pueden difundir a travs de la
membrana mediante transporte pasivo por difusin simple sin dificultad
como por ejemplo O2, CO2 , benceno y diferentes alcoholes, ya que se
equilibran a ambos lados de la membrana y arrastran agua cuya entrada
no puede ser compensada con la salida de otros solutos osmticamente
activos, ya que la osmolaridad es directamente proporcional a la presin
osmtica, al aumentar la osmolaridad de igual manera aumentar la
presin de la membrana celular induciendo que la tonicidad de la clula
se pierda, provocando la hemlisis.
En el tercer experimento, el glicerol fue la sustancia difusible, ya que es
un alcohol, adems, la relacin entre carbonos y grupos hidroflicos OH,
permite que esta sustancia si sea difusible por la membrana, esa fue la
razn por la que se observ el efecto de la hemlisis.
En
la sacarosa, que no es una sustancia difusible, no atraves la
membrana y por lo tanto no hubo cambios entonces la hemlisis no
ocurri.
La velocidad de difusin va a depender de diversos factores, por eso el
parmetro utilizado es el coeficiente de particin. Este valor es mayor
cuanto ms grande es el peso molecular del compuesto y la longitud de

la cadena de carbonos, de esta manera atraviesa la membrana con

mayor rapidez.