Professional Documents
Culture Documents
Chromatographie
I. Gnralits.
Mthode de sparation des constituants dun mlange.
Applications: Identification, dosage (quantification), purification.
Quelques noms et dates :
- 1903 : mise en vidence par Mikhail TSWETT, botaniste russe
- 1931 (KUHN et LEDERER) : chromatographie sur colonne (chromatographie liquidesolide CLS)
- 1938 (IZMAILOV et SCRAIBER) : chromatographie sur couche mince (CCM ou TLC),
TAYLOR et UREY : chromatographie par change dions
- 1941 (MARTIN et SYNGE, Nobel en 1952) : concept de chromatographie gaz-liquide,
chromatographie de partage liquide-liquide
- 1952 : dveloppement pratique de la chromatographie gaz-liquide
- 1955 : 1er chromatographe gaz-liquide sur le march (chromatographie en phase
gazeuse : CPG ou GC)
- 1965 (HALASZ, HORVATH) : Chromatographie Liquide Haute Performance (CLHP ou
HPLC)
Rfrences :
- F. Rouessac et A. Rouessac. Analyse Chimique. Mthodes et techniques
instrumentales modernes, 6me dition (Dunod)
- D.A. Skoog, D.M. West, F.J. Holler. Chimie analytique (De Boeck).
I. Gnralits.
I. 1. Principe :
Le principe repose sur l'quilibre de concentrations des composs prsents entre deux
phases en contact : la phase stationnaire et la phase mobile (gaz ou liquide) qui se
dplace. La sparation est base sur l'entranement diffrentiel des constituants du
mlange. Ces derniers parcourent la phase stationnaire avec des temps proportionnels
leurs proprits intrinsques (taille, structure, ...) ou leur affinit avec la phase
stationnaire (polarit, ...).
A phase mobile
K = CS/CM
A phase stationnaire
K : Coefficient de distribution
CS : Concentration de lanalyte A dans la phase
stationnaire
CM : Concentration de lanalyte A dans la phase mobile
Phase stationnaire : - dans une colonne au travers de laquelle progresse la phase mobile par
gravit ou sous laction dune diffrence de pression chromatographie
sur colonne
- sur une surface plane chromatographie sur couche mince (CCM)
Phase mobile :
II. Chromatogramme.
Diagramme montrant lvolution du signal du dtecteur ( la concentration en solut) en
fonction du temps dlution (plus rarement du volume dlution)
Chromatogramme :
t0 : dbut de l'injection
Vm : volume mort de la colonne
tm : temps mort
Ve : volume d'lution ( de rtention, Vr )
d'un compos
tr : temps de rtention ( d'lution, te ) d'un
compos
Ve (volume d'lution) = d (dbit) x t (temps)
Ve' : volume d'lution rduit (Ve = Ve' + Vm)
tr' : temps de rtention rduit (tr = tr' + tm)
Wb : largeur du pic la base ()
Wh : largeur du pic mi-hauteur ()
Facteur de rtention (ou facteur de capacit) k :
k=
k=
tr
tm
tr-tm
tm
mS
mM
CSVS
CMVM
= K
VS
VM
K : coefficient de distribution
mS : masse de solut dans la phase stationnaire
mM : masse de solut dans la phase mobile
H=
Une colonne sera dautant plus efficace que N est grand (L grand) et H est petit.
On peut montrer que : H =
Donc H =
L2
16tR2
et =
L
et
L
4tR
N = 16(tR/)2
ou
N = 5,545 (tR/)2
tR2 - tR1
R=2
1 + 2
k2
k1
tR2
tR1
H = A +
B
u
+ Cu
uopt =
B
C
Injecteur split/splitless :
Mode split : le gaz vecteur pntre dans la chambre de vaporisation avec un dbit lev
(ex: 50 ml/mn), une vanne de fuite, rglable, permet dvacuer la plus grande partie du
gaz et de ne laisser entrer dans la colonne quune faible partie (1/20 1/500), ex: 1% de
50 ml/mn, soit un dbit dans la colonne de 0,5 ml/mn : seulement 1% de lchantillon
inject passe rellement sur la colonne.
Mode splitless : rserv aux solutions trs dilues (analyse de traces)
Injecteur on column :
Injection directe, froid (40C), de lchantillon lintrieur de la colonne (microseringue spciale). La vaporisation na lieu quaprs le dpt.
Adapt aux composs fragiles (thermodgradables), en biochimie par ex.
pente (C/mn)
(mesh x mm = 15)
: Grande efficacit 200000 plateaux ( 1000 pour une colonne remplie). A noter que le
terme de remplissage A de leqt de Van Deemter est ici nul.
Colonnes remplies :
Grand choix de phases stationnaires, facile mettre en uvre car simple imprgnation
dans les pores du support.
Classement de 200 phases stationnaires (Mc Reynolds) I = Iphase - Isqualane
(I = indice de rtention de Kovats, squalane (C30H62) phase stationnaire de rfrence, la
moins polaire)
Colonnes capillaires :
Choix beaucoup plus limit (phases pouvant conduire la formation dun film greff) :
Polysiloxanes :
R
R
R
R - Si - O - Si - O - Si - R
R
nR
Carbowax
(macromolcules)
- efficacit moindre (L + faible)
- + dinteractions :
CPG
CPL
Solut
Solut
phase stat.
phase mobile
phase stat.
V.1. Appareillage.
Elments relis entre eux par des tubes ( = 0,1 mm) en inox ou PEEK
V.1.3. Injecteurs
Vanne dinjection boucle (5L < V < 500L)
V.1.4. Colonnes
standard : Inox (5 cm < L < 30 cm, 4 mm < int.< 10 mm), efficacit 50 000 plateaux / m
Micro-colonnes (L 5 cm, int 1 mm, 100 000 plateaux / m) : rapidit, faibles volumes
de solvants
Matriau de remplissage : gel de silice prpar par procd sol-gel
Si(OEt)4
H2O
SiO2
ure + formol
pH = 2
, O2
H+
Sol-gel
3-6m
V.1.5. Dtecteurs
- sensibilit : limite de dtection (LD) : signal / bruit 2
- rponse linaire sur un large domaine de [ ]
d. Autres dtecteurs
- lectrochimiques (mesures potentiomtriques, conductimtriques, voltampromtriques)
- couplage / spectromtre de masse (electrospray) voire RMN.
ClSiMe2R
silice
Me
O Si R
OHMe Me
O Si R
Me
RP-8 (dimthyloctylsilane)
Chromatographie normale :
Chromatographie inverse :
Applications :
- deionisation deau (adoucisseurs)
- sparation
- dosage dions