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ACESSOS.
ANA VERUSKA CRUZ DA SILVA1; ANA SILVA LDO2; EVANDRO NEVES MUNIZ3; CAMILA SANTOS ALMEIDA4;
1,2,3.EMBRAPA TABULEIROS COSTEIROS, ARACAJU, SE, BRASIL; 4.UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE, ARACAJU, SE,
BRASIL;
ana.veruska@embrapa.br
Resumo: O jenipapeiro (Genipa americana L.) uma espcie nativa da Amrica tropical, explorada
de forma extrativista e com potencial importncia socioeconmica. Banco Ativo de Germoplasma de
Jenipapeiro da Embrapa Tabuleiros Costeiros foi implantado em 2009, no Campo Experimental Jorge
Sobral, em Nossa Senhora das Dores, Sergipe. O presente trabalho foi realizado para avaliar a
diversidade gentica por uso de marcadores RAPD em jenipapeiros oriundos de coleta na regio sul do
Estado de Sergipe. Os 20 iniciadores de sntese utilizados geraram 85,13% de polimorfismo e foi
possvel observar a formao de trs grupos. Com a anlise RAPD possvel analisar a variabilidade
gentica de jenipapeiro e os indivduos mais divergentes nesse estudo foram introduzidos ao BAG
jenipapo.
Palavras-chave: Genipa americana L., marcadores moleculares, germoplasma
Introduo
O jenipapeiro (Genipa americana L. - Rubiaceae) apresenta grande valor socioeconmico e
cultural para a regio Nordeste, e estudos envolvendo a sua caracterizao so importantes para
promover o aumento de conhecimento sobre a espcie.
A avaliao da diversidade gentica de um Banco de Germoplasma possibilita a identificao
de potenciais genitores e duplicatas e a realizao de intercmbio entre pesquisadores. Em 2009, foi
implantado o Banco Ativo de Germoplasma de jenipapeiro da Embrapa Tabuleiros Costeiros, no
Campo Experimental Jorge Sobral, onde constam atualmente 18 acessos.
O uso de marcadores moleculares para estudo da diversidade gentica em diversas espcies
tem sido amplamente utilizado. Em jenipapeiro, poucos trabalhos foram realizados utilizando
marcadores moleculares, como RAPD (Santos, 2008; Freire, 2012).
O presente trabalho foi realizado para avaliar a variabilidade gentica por uso de marcadores
RAPD em jenipapeiros oriundos de coleta na regio sul do Estado de Sergipe.
Material e Mtodos
Foram selecionados ao acaso dez indivduos em uma populao natural isolada, localizada no
municpio de Arau (latitude 111723 e longitude 373831), Sergipe.
Folhas jovens e recm-colhidas das plantas originais foram submetidas extrao de DNA
(Doyle e Doyle,1991). Para as reaes RAPD foram testados 20 primers de 10 pares de base, sendo 19
da marca Operon (Operon Technologies, EUA) e um da marca IDT (Integrated DNA Technologies,
Alemanha) (Tabela 1). Cada reao conteve 50ng de DNA, tampo de PCR com MgCl 1X (Promega),
dNTP 10 mM, 1,0 U de Taq DNA polimerase (Promega, EUA) e 3 ng de primer. Os DNAs foram
amplificados utilizando termociclador submetidos a um ciclo inicial de desnaturao de 96C por 05
minutos; seguido de 35 ciclos de 45 segundos a 94C, 45 segundos a 36C, 45 segundos a 72C e um
ciclo de extenso final de 10 minutos a 72C. Os resultados das amplificaes foram submetidos
eletroforese horizontal, em gel de agarose 1% e em tenso de 100 V por uma hora. Os gis foram
colocados contato a uma soluo contendo brometo de etdeo (0,02 L/mL de gua) por 30 minutos e
visualizados sob luz ultravioleta. A visualizao dos resultados foi realizada em equipamento de
fotodocumentao Gel doc L-pix (Loccus Biotecnologia, Brasil).
O padro de amplificao foi convertido em uma matriz binria, contabilizando a presena (1) e
ausncia (0) dos fragmentos. As estimativas das similaridades genticas entre cada par de indivduos
foram efetuadas empregando os coeficientes de Jaccard, e foi empregado o mtodo UPGMA
(Unweigth Pair-Group Method Arithmetic Average). Os programas utilizados foram FreeTree
(Pavlicek et al., 1999) e software XLSTAT (Addinsolft, 2009).
Resultados e Discusso
Os iniciadores de sntese utilizados permitiram a caracterizao molecular e estudo da
variabilidade gentica entre indivduos de jenipapeiros. Os 20 iniciadores utilizados geraram um total
de 74 bandas, das quais 63 foram polimrficas (85%) (Tabela 1). O iniciador que apresentou o maior
nmero de bandas polimrficas foi o X01 (6), enquanto o A15 e W2 no apresentaram bandas. O valor
do CIP variou entre 0,00 0,48 e IM de 0,41 2,00. Para os valores de estrutura gentica, o ndice de
Shannon (I) apresentou valor mdio de 0,42, e o ndice de diversidade gentica (G) apresentou o valor
mdio de 0,28.
5
4
5
4
5
5
5
3
0
3
3
3
3
4
6
4
0
4
4
4
4
60
50
100
100
100
100
60
33
100
100
100
100
33
100
100
100
100
100
100
100
87
283 (M )
282 (F)
285 (M )
284 (F)
288 (F)
287 (M )
286 (F)
279 (M )
1,00
0,90
0,80
0,70
0,60
0,50
Similaridade de Jaccard
0,40
0,30
0,20
XLSTAT
statistical
analysis
software,
verso
2010.
Disponvel
em:
<www.xlstat.com>. Acesso:17/05/2012.
DOYLE, J.J.; DOYLE, J.L. Isolation of plant DNA from fresh tissue. Focus, v.12, p.13-15, 1990.
FREIRE, K. C. S. Caracterizao molecular e morfo-agronmica do Banco Ativo de
Germoplasma de jenipapeiro. Dissertao (Mestrado em Biotecnologia). UFS: So Cristvo(SE),
2012.
PAVLICEK, A.; HRDA, S.; FLEGR, J. FreeTree freeware program for construction of phylogenetic
trees on the basis of distance data and bootstrap/jackknife analysis of the tree robustness. Application
in the RAPD analysis of genus Frenkelia. Folia Biologica, Praha, v. 45, p. 97-99, 1999.
SANTOS, A. R. F. Variabilidade gentica de jenipapo (Genipa Americana L.) em rea de mata
ciliar do baixo So Francisco visando produo de sementes. Monografia (Engenharia Florestal).
UFS: So Cristvo(SE), 2008.