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COCHABAMBA-BOLIVIA
Contenido
1.
INTRODCCION......................................................................................................................... 3
2.
ANTECEDENTES...................................................................................................................... 3
3.
JUSTIFICACION........................................................................................................................ 4
4.
OBJETIVOS............................................................................................................................... 4
5.
4.1.
Objetivo general.......................................................................................................... 4
4.2.
Objetivos especficos.................................................................................................. 4
MARCO TEORICO.................................................................................................................... 5
5.1.
MICROORGANISMOS........................................................................................................... 5
5.2.
5.2.1.
I.-
Virus:.................................................................................................................................. 6
5.2.2.
I.
Microorganismos Acelulares........................................................................................... 6
Microorganismos Celulares............................................................................................ 8
Eucariontes............................................................................................................................. 8
a)
Protozoos........................................................................................................................... 8
b)
Hongos microscpicos...................................................................................................... 10
c)
Algas Microscpicas......................................................................................................... 10
II.
Procariotas........................................................................................................................ 11
a)
Bacterias........................................................................................................................... 11
5.3.
5.4.
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS..........................................................................18
5.5.
5.6.
PLASTICOS BIODEGRADABLES.......................................................................................20
5.7.
6.
MATERIALES Y REACTIVOS................................................................................................. 29
7.
METOLOGIA........................................................................................................................... 31
9.
RESULTADOS......................................................................................................................... 39
10.
CONCLUSIONES................................................................................................................. 47
11.
RECOMENDACIONES........................................................................................................ 48
12.
BIBLIOGRAFIA..................................................................................................................... 49
1. INTRODCCION
Los polihidroxialcanoatos (PHA) son polisteres intracelulares sintetizados por
diferentes especies bacterianas. Las caractersticas fsicas de los PHA como la
densidad, punto de fusin, fuerza de tensin y elongacin son similares a los
plsticos derivados del petrleo, pero, a diferencia de stos, los PHA se degradan
completamente hasta CO2 y H2O.
El costo de produccin de los PHA es superior al del polipropileno. Por esta razn,
en los ltimos aos han surgido varias alternativas para mejorar la produccin de
estos biopolmeros, entre las cuales se destacan: la utilizacin de
microorganismos recombinantes, la polimerizacin in vitro catalizada por PHA
polimerasa, y el uso de ingeniera gentica para la sntesis de PHA en plantas. 1
2. ANTECEDENTES
Los plsticos de origen petroqumico son ampliamente utilizados debido a du fcil
modelamiento y alta resistencia qumica, pero son un problema ambiental, debido
a su alto peso y conformacin molecular, la accin de los microorganismos en los
procesos degradadores es mnima, por lo cual permanecen en el ambiente
durante amplios periodos de tiempo
Las medidas que se han adoptado para solucionar el problema engloba desde el
reciclaje hasta la incineracin de las mismas, las cuales no son soluciones muy
viables debido a los procesos son costosos, no abarcan todos los desechos y
generan emanaciones gaseosas nocivas para el ambiente, las cuales en los
ltimos aos estn siendo ms restringidas por las nuevas legislaciones
ambientales.
La sobre poblacin humana, combinado con el actual estilo de vida exige el uso
racional, eficiente y auto sostenible de fuentes naturales para producir sustancias
amigables para el medio ambiente como los polihidroxialcanoatos (PHA). 2
El primer hidroxialcanoato en ser estudiado fue el poli 3 hidroxibutirato (PHB), el
cual fue descubierto por lemoigue en 1926 (lemoigne, 1926). En 1994 se identifico
el cido 3-hidroxi-2-butenoico producido por la bacteria del genero Nocardia. En
1972, a partir de estudios en aguas residuales, se confirm la presencia de otras
sustancias como los cidos 3-hidroxivalerico (3HV), 3-hidrocihexanoico (3HHx) y
3_hidrociheptanoico (3HHep) mediante la extraccin con cloroformo. En 1976, la
empresa inglesa Imperial Chemical Industries (ICI) empez estudios para producir
4. OBJETIVOS
4.1. Objetivo general
5. MARCO TEORICO
5.1.
MICROORGANISMOS
http://es.wikipedia.org/wiki/Microorganismo
diferentes tipos de
despus hablaremos
Fuente:
https://sites.google.com/site/micr00rganism0salba/clasificacion-de-losmicroorganismos
5.2.1. Microorganismos Acelulares
I.-
Virus:
Los virus son entidades no celulares de muy pequeo tamao. Son agentes
infectivos de naturaleza obligadamente parasitaria intracelular, que necesitan su
incorporacin al protoplasma vivo para que su material gentico sea replicado, y
que pueden transmitirse de una clula a otra. Cada tipo de virus consta de una
sola clase de cido nucleico (ADN o ARN, nunca ambos), con capacidad para
codificar varias protenas, algunas de las cuales pueden tener funciones
enzimticas, mientras que otras son estructurales, disponindose stas en cada
partcula virsica (virin) alrededor del material gentico formando una estructura
regular (cpsida)
Estructura:
Los virus presentan una amplia diversidad de formas y tamaos. Una partcula
vrica completa, conocida como virin, consiste en un cido nucleico rodeado por
una capa de proteccin proteica llamada cpside.
-cido nucleico: contiene la informacin especfica y el potencial para modificar
operaciones en la clula infectada. Los virus pueden tener distintos tipos de cidos
nucleicos y las molculas de stos pueden presentar diversas formas. As pueden
contener ADN o ARN. Pueden estar formados por una sola cadena, siendo
entonces monocatenarios, o por dos, bicatenarios. Las molculas de cido
nucleico pueden ser circulares o lineales. Algunos virus presentan el genoma
fragmentado como ocurre con el virus de la gripe que posee ocho fragmentos de
ARN monocatenario.
Fuente:
https://sites.google.com/site/micr00rganism0salba/clasificacion-de-losmicroorganismos
En general, estas son las principales morfologas vricas:
-Helicoidal: es la organizacin ms sencilla, formados por un nico tipo de
protenas, se disponen en torno al cido nucleico y dan lugar a estructura
cilndrica. Esta formacin produce viriones en forma de barra o de hilo, pueden
ser cortos y muy rgidos, o largos y muy flexibles.
- Polidricos: los ms simples de este tipo son los icosadricos, que poseen 20
caras, cada una de las cuales es un tringulo equiltero formado por la unin de
tres protenas distintas. Cuanto mayor sea el nmero de caras, ms esfrico
parece el virus.
-Complejas o mixtas: combinan las estructuras helicoidal y polidrica A la porcin
polidrica, se le llama cabeza, en cuyo interior se encuentra el cido nucleico, y la
porcin helicoidal constituye la cola. Algunos virus poseen una placa basal y,
adems, espculas y fibras que le ayudan a unirse a la clula que van a infectar.
-Envoltura membranosa: algunos virus poseen por fuera de la cpside una
membranosa, que es un fragmento de la clula en la que se reprodujo. Esta
membrana est constituida por una bicapa lipdica que procede de la clula
Fuente:
https://sites.google.com/site/micr00rganism0salba/clasificacion-de-losmicroorganismos
b) Hongos microscpicos
Los hongos son microorganismos eucariotas unicelulares o pluricelulares carentes
de pigmentos fotosintticos, por lo que no pueden realizar la fotosntesis, tienen
por lo tanto una nutricin hetertrofa mediante la absorcin de alimento orgnico
muerto (nutricin saproftica) previamente digerido en el exterior de las clulas
gracias a la secrecin de potentes enzimas.
La mayora de los hongos viven en ambientes terrestres, bien en el suelo o sobre
materia vegetal muerta, a cuya descomposicin contribuyen. Muchos hongos son
parsitos de plantas y animales.
Los hongos pluricelulares forman esporas que al desprenderse y germinar
producen filamentos microscpicos denominados hifas, cuyas clulas pueden
estar completamente separadas (hifas septadas) o bien incompletamente o bien
incompletamente (sinfonadas). El conjunto de las hifas de un hongo se denomina
micelio. Muchas esporas se forman despus de la reproduccin sexual mediante
la fusin de gametangios, como las oosporas de los oomicetes y las zigosporas de
los zigomicetes, o bien dentro de esporangios como las ascas (ascosporas) y los
basidios (basidiosporas).
c) Algas Microscpicas
Figura # 5.3 Algas Microscopicas
Fuente:
https://sites.google.com/site/micr00rganism0salba/clasificacion-de-losmicroorganismos
Procariotas
Se llama procariotas a las clulas sin ncleo celular diferenciado, es decir, cuyo
material gentico se encuentra disperso en el citoplasma, reunido en una zona
denominada Nucleoide.
a) Bacterias
Anatoma de una bacteria sencilla
Una bacteria simplificada est formada por tres capas externas que envuelven las
estructuras internas; la capa pegajosa protege la pared celular rgida, que a su vez
cubre la membrana celular semipermeable. El flagelo es un medio de locomocin
y los pelos que se extienden por fuera de la cpsula ayudan a la bacteria a
sujetarse a las superficies. El material gentico est contenido en el ADN que
forma el nucleoide. Los ribosomas que flotan en el citoplasma intervienen en la
sntesis de protenas.
El material gentico de la clula bacteriana est formado por una hebra doble de
ADN circular (vase cidos nucleicos). Muchas bacterias poseen tambin
pequeas molculas de ADN circulares llamados plsmidos, que llevan
informacin gentica, pero, la mayora de las veces, no resultan esenciales en la
reproduccin. Muchos de estos plsmidos pueden transferirse de una bacteria a
otra mediante un mecanismo de intercambio gentico denominado conjugacin.
Otros mecanismos por los cuales la bacteria puede intercambiar informacin
gentica son la transduccin, en la que se transfiere ADN por virus bacterianos
(vase Bacterifago), y la transformacin, en la que el ADN pasa al interior de la
clula bacteriana directamente desde el medio.
Las clulas bacterianas se dividen por fisin; el material gentico se duplica y la
bacteria se alarga, se estrecha por la mitad y tiene lugar la divisin completa
formndose dos clulas hijas idnticas a la clula madre. As, al igual que ocurre
en los organismos superiores, una especie de bacteria origina al reproducirse slo
clulas de la misma especie. Algunas bacterias se dividen cada cierto tiempo
(entre 20 y 40 minutos). En condiciones favorables, si se dividen una vez cada 30
minutos, transcurridas 15 horas, una sola clula habr dado lugar a unos mil
millones de descendientes. Estas agrupaciones, llamadas colonias, son
observables a simple vista. En condiciones adversas, algunas bacterias pueden
formar esporas, que son formas en estado latente de la clula que permiten a sta
resistir las condiciones extremas de temperatura y humedad.
Clasificacin:
La clasificacin taxonmica ms utilizada divide a las bacterias en cuatro grandes
grupos segn las caractersticas de la pared celular. La divisin Gracilicutes
incluye a las bacterias con pared celular delgada del tipo Gram negativas; las
bacterias de la divisin Firmicutes tienen paredes celulares gruesas del tipo Gram
positivas; las de la Tenericutes carecen de pared celular y las de la cuarta divisin
Mendosicutes tienen paredes celulares poco comunes, formadas por materiales
distintos a los tpicos peptidoglucanos bacterianos. Entre las Mendosicutes se
encuentran las Arquebacterias, un grupo de organismos poco comunes, que
incluyen a las bacterias metanognicas, anaerobias estrictas, que producen
metano a partir de dixido de carbono e hidrgeno; las halobacterias, que
necesitan para su crecimiento concentraciones elevadas de sal, y las
termoacidfilas, que necesitan azufre y son muy termfilas. Se ha discutido sobre
la conveniencia de que las Arquebacterias se incluyeran en un reino aparte, ya
que estudios bioqumicos recientes han mostrado que son tan diferentes de las
otras bacterias como de los organismos eucariotas (con ncleo diferenciado
englobado en una membrana). Estos cuatro grandes grupos de bacterias se
https://sites.google.com/site/micr00rganism0salba/clasificacion-de-losmicroorganismos
-Cpsula: Capa gelatinosa de naturaleza glucoproteica, rodea por la parte externa
a algunas bacterias. Es una proteccin contra la accin de los anticuerpos y la
fagocitosis y evita la prdida de humedad. Las bacterias con cpsula son ms
virulentas (patgena).
-Pared celular: Es una envoltura rgida y fuerte que da forma a las clulas
bacterianas. Evita los posibles daos que producen cambios de presin osmtica.
Existen dos tipos:
-La Gram positiva: son ms gruesas y esta compuesta por una capa de
glucopeptidos.
-La Gram negativa: compuesta por dos capas, una de glucopeptidos rodeada de
una bicapa fosfolipdica, lipoprotenas y glucolipdica. Son ms resistentes a los
antibioticos.
Fuente:
https://sites.google.com/site/micr00rganism0salba/clasificacion-de-losmicroorganismos
https://sites.google.com/site/micr00rganism0salba/clasificacion-de-losmicroorganismos
https://sites.google.com/site/micr00rganism0salba/clasificacion-de-losmicroorganismos
5.3.
Microorganismos Extremofilos
La palabra extremfilo proviene del griego filo, que significa afecto o amor. Es
decir, el significado de extremfilo es "amante" de las condiciones extremas.
Estas condiciones extremas, fuera de las comnmente llamadas normales,
podramos resumirlas en:
1. Temperaturas muy elevadas (44 121 C) o bajas (-2, 20C)
2. Alta salinidad (NaCl 2-5M)
3. Alta alcalinidad (pH arriba de 8) y/o alta acidez (pH menor de 4)
Existen varias clases de extremfilos y se clasifican atendiendo al ambiente en el
que viven.
Figura # 5.6 Clasificacin de microorganismos extremofilos
Termfilos
Estos organismos tienen un crecimiento ptimo en temperaturas situadas entre los
70-80C. Sus hbitats comunes son las fuentes termales volcnicas terrestres,
termales submarinas, etc. La adaptacin de estos organismos es debido a la alta
estabilidad trmica de sus enzimas.
Ejemplos:
1. Bacterias Thermus acuaticus: crecen a T mayores de 70C
2. Sulfolobus acidocaldarius: crece a partir de 85C
3. Pyrolobus fumarii: temperatura ptima de crecimiento es de 105C.
Psicrfilos
Estos organismos presentan un desarrollo ptimo a bajas temperaturas. (Desde
los 20C hasta los -5C). Las protenas poseen unas caractersticas que hacen
que pierdan su rigidez y ganen flexibilidad en su estructura para la realizacin de
sus funciones catalticas en las condiciones de bajas temperaturas. Las
membranas contienen mayor proporcin de cidos grasos no saturados,
permitiendo as que su fluidez y capacidad de transporte se mantenga bajo
condiciones muy fras.
Ejemplos:
- Bacterias gram negativas: Moraxella, Psychrobacter, Polaribacter, Moritella,
Vibrio y Pseudomonas.
- Bacterias gran positivas: Arthrobacter, Bacillus y Micrococcus.
- Arqueas: Methanogenium, Methanococcoides y Halorubrum.
- Hongos y levaduras: Penicillium, Cladosporium, Cndida y Cryptococcus
Alcalfilos
Son organismos que viven en ambientes con pH por encima de 9. Sus hbitats
son muy bsicos, como lagos sdicos y suelos muy carbonatados. Estos
organismos necesitan aislar el interior de la clula del medio alcalino exterior, ya
que algunas molculas especialmente las hechas de ARN se rompen a pH
superior a 8.
Ejemplos:
Halfilos
Se refiere a los organismos que habitan en medios con presencia abundante de
sales. Sus hbitats son zonas litorales, salinas y lagunas salobres. En organismos
normales, la sal hace que mueran por deshidratacin debido a la smosis. Si el
entorno es salino, con mucha concentracin de sales, el agua del interior de las
clulas tiende a salir hacia su exterior. Es decir, se desecan y mueren. Uno de los
mecanismos que han desarrollado, es el de albergar en el interior de sus tejidos,
concentraciones de un soluto compatible a las sales (como cido
polihidroxibutrico o PHB) mayores que en el exterior. As el agua penetra por
smosis. La mayora de estos halfilos pertenecen al dominio Archaea.
Ejemplos:
Gnero Halobacterium, que viven en entornos como el Mar Muerto, como la
Haloarcula marismortui.
Acidfilos
Organismos que viven en medios con pH menor de 5. Para soportar el bajo pH,
estos organismos emplean una gama de mecanismos, como una superficie de
membrana cargada positivamente, una alta capacidad reguladora interna y
sistemas nicos de transporte.
Ejemplos:
Otros grupos:
1. Anhidrobiticos o xerfilos: Viven en ausencia de agua o son capaces
de resistir la desecacin viviendo con muy poca. Ejemplo: Selaginella
lepidophylla
Fuente:
http://www.pomif.com/pages/practicas/bacteriologia/aislamiento/_img/_introduccion
/image002/!
http://www.astrofisicayfisica.com/2013/05/clasificacion-de-los-extremofilos-curso.html
5.6.2. Polihidroxialcanoatos
Polihidroxialcanoatos (PHAs) son una familia de polisteres compuestos
principalmente de cidos hidroxialcanoicos acumulados en forma de granulos
intracelulares acumulados en forma de grnulos, que pueden representar hasta el
80% de la masa celular figura # 5.2. Los cuales sirven como fuente de carbono y
enegia y equivalentes reductores. Son producidas bajo condiciones
desbalanceadas de cultivo, decir con exceso en la fuente carbono y limitacin en
los elementos esenciales (Nitrgeno N, Azufre S, Oxigeno O, Fosforo P, Magnesio
Mg)
Sao Paulo-Brasil, Noviembre 2008, Efecto del gen FafH1 en la produccion de PHA
conteniendo monmeros insaturados por Pseudomonas Putida, Diego Armando
Castello Franco
9
5.7.
fabricante
Biolog , Inc Microlog
BioMerieux Vick GNI +
API BIoreieux 20 y NFT
BBL Crystal
Nmero
de
especies
aerobias en la
base de datos
501
104
180
105
Nmero de
pruebas
usado para
la deteccin
95
29
20
28
Metodo
molecular
72%
100%
89%
10
Lectura
OmniLog
Contnua
Plus
OmniLog Lectura
Combo
Contnua
System
Lectura
OmniLog Contnua
GEN
IIILectura Puntual
Microstation
GEN III MLx
11
Microbial identification state of sciencia performance with unmatched power & versatily
Biolog Inc 21124 Cabot blvd, Hayward, CA USA (www.biolog.com)
6. MATERIALES Y REACTIVOS
6.1.
EQUIPOS
Autoclave
Cmara de flujo laminar
Balanza analtica
Phmetro Orin
Refrigerador 4C
Micro pipetas gilson de 20-200 L
Cmara fotografa
6.2. MATERIALES DE LABORATORIO
Asa vidrio
Cajas Petri 100*20mm
Vasos de precipitado
Pipetas mecanica reguladas para tips
Tips de 20-200 L
Asa de vidrio
Asas plsticas esterilizadas
Micro tubos (tubos Eppendorf)
Tubos falcn
Microplacas Biolog de Identificacin
Gradillas para microtubos de ensayo
Algodn
Gasa
Papel toalla
Papel higinico
Guantes desechables
Guantes trmicos
Esptula
Envases para pesar
Bolsas plsticas
Papel aluminio
Para film
Marcador de vidrio
Cmara fotogrfica
6.3. REACTIVOS
ACIDO SULFURICO H2SO4
NaCl
MgSO4*7H2O
CaCl2*2H2O
KCl
NaBr
Peptona
Extracto de levadura
Glucosa
Agar
K2HPO4
NH4Cl
FeSO4*7H2O
GLUCOSA
GLUTAMATO DE SODIO
AGUA DESTILADA
SALES MARINAS
Alcohol al 70%
7. METOLOGIA
7.1. PREPARACION DE MEDIO DE CULTIVO
El medio de cultivo para el crecimiento de microorganismos halfilos, esta
detallado en la tabla:
Tabla # 1. Medio HM
COMPUESTO
NaCl
MgSO4*7H2O
CaCl2*2H2O
KCl
NaBr
Peptona
Extracto
de
levadura
Glucosa
Agar( solo para
medio solido)
%(w/v)
4,5
0,025
0,009
0,05
0,006
0,5
1
0,1
2
Para Un Volumen Vt
Se procede al clculo segn la formula
w
V [ml ]
(
v)
=
t
W compuesto
100
Compuesto
NaCl
MgSO4*7H2O
K2HPO4
NH4Cl
FeSO4*7H2O
GLUCOSA
GLUTAMATO
SODIO
%(W/V)
5
0,5
0,22
0,4
0,005
2,5
DE
0,2
Para Un Volumen Vt
Se procede al clculo segn la formula
w
V [ml ]
(
v)
=
t
W compuesto
100
Una vez que han crecido los microorganismos el medio se torna de un color
conciso y lechoso lo cual nos indica un crecimiento positivo de la cepa
seleccionada en el medio HM2 (figura # 11)
9. RESULTADOS
9.1. Crecimiento y Aislamiento de microrganismos
9.1.1. Muestra: Laguna de Palpani
Cultivo de microorganismos
Hubo considerable respuesta por parte de la flora epifita de esta seccin
aportando un crecimiento considerable
Mtodo de dilucin
Se realizaron diluciones de 10 -5 10-6 10-7 pero no se observaron resultados de
adaptacin al medio solido HM
9.1.2. Muestra: Laguna de Coruto
Cultivo de microorganismos
Hubo considerable respuesta por parte de la flora epifita de esta seccin
aportando un crecimiento considerable
Mtodo de dilucin
Se realizaron diluciones de 10 -6 10-7 se observ aporte y adaptacin por parte de
los microorganismo
Seleccin de microorganismos
Se procedi a la seleccin cualitativa de microorganismos por caractersticas
morfolgicas
Replicacin de microorganismos
No se realiz la replicacin de estas especies
9.1.3. Muestra: Laguna Kollpa
Cultivo de microorganismos
Hubo una respuesta satisfactoria por parte de la flora epifita de esta seccin
aportando un crecimiento considerable
Mtodo de dilucin
Se realizaron diluciones de 10 -6 10-7 se observ aporte y adaptacin por parte de
los microorganismo, adquirindose las colonias bien separadas en la dilucin 10 -6
Seleccin de microorganismos
Se procedi a la seleccin cualitativa de microorganismos por caractersticas
morfolgicas
Replicacin de microorganismos
Se procedi a la numeracin de colonias y cultivo de las mismas en medio HM
solido aislados
9.1.4. Muestra: Laguna hedionda
Cultivo de microorganismos
Para una primera instancia el medio se coloro obscuro se procedio a realizar una
vez mas el cultivo
Para una segunda instancia hubo una respuesta satisfactoria por parte de la flora
epifita de esta seccin aportando un crecimiento considerable
Mtodo de dilucin
Se realizaron diluciones de 10 -6 10-7 se observ aporte y adaptacin por parte de
los microorganismo, adquirindose las colonias bien separadas en la dilucin 10 -6
Seleccin de microorganismos
Se procedi a la seleccin cualitativa de microorganismos por caractersticas
morfolgicas
Replicacin de microorganismos
Se procedi a la numeracin de colonias y cultivo de las mismas en medio HM
solido aislado
9.2. Produccin de plstico biodegradable
9.2.1. Muestra: Laguna kollpa 2 (agua) cepa N5
Replicacin de microorganismos
Se realiz el paso de microorganismos del medio solido HM al medio lquido HM
se llev a 200 rpm durante 30 hrs no se obtuvo respuesta de crecimiento por parte
de esta especie
Morfologa
Lisa
Contorno regular
Colonias pequeas
Convexa
Su color es Crema Claro
Brillosa
Morfologa
Lisa
Contorno regular
Convexa
Su color es crema claro
Brillosa
9.2.3.
9.2.4.
9.2.5.
9.2.6.
9.2.7.
9.2.8.
Figura # 9.3.
9.2.9.
9.2.10. Morfologa
Formacin de una colonia enorme
Crecimiento Rpido
Semi Lisa Aterciopelada
Plana
Su color es blanco
Opaca
9.2.11.
9.2.12.
9.2.13.
9.2.14.
Figura # 9.4.Laguna hedionda 2 (suelo) cepa N2 toma
microscopio
9.2.15.
9.2.16. Laguna hedionda 2 (suelo) cepa N6
9.2.17.
9.2.18. Replicacin de microorganismos
9.2.19. Se realiz el paso de microorganismos del medio solido HM al medio
lquido HM2 se llev a 200 rpm durante 30 hrs no se obtuvo respuesta
de crecimiento por parte de esta especie
9.2.20.
9.2.21. Morfologa
Lisa
Contorno Regular
Convexa
Color crema suave
Brillosa
9.2.22.
9.2.23.
9.2.24.
9.2.25.
9.2.26.
9.2.27.
9.2.28.
9.2.29.
9.2.30.
9.2.31.
9.2.32.
9.2.33.
9.2.34. Laguna hedionda 2 (suelo) Cepa 5
9.2.35.
9.2.36. Replicacin de microorganismos
9.2.37. Se realiz el paso de microorganismos del medio solido HM al medio
lquido HM2 se llev a 200 rpm durante 30 hrs, se obtuvo respuesta
satisfactoria de crecimiento por parte de esta especie, el medio claro se
torn un color lechoso
9.2.38.
9.2.39. Morfologia
Rugosa
Contorno irregular
Planas
Su color es Blanco
Opaca
9.2.40.
9.2.41.
9.2.42.
9.2.43. Figura # 9.6. Laguna hedionda 2 (suelo) Cepa 5 toma microscopio
9.2.44.
9.2.45.
9.2.46. Centrifugacin y secado
9.2.47. Se realiz la sedimentacin de la biomasa, su procedente secado
9.2.48.
9.2.49. Hidrolisis
9.2.50. 10 mg de muestra seca se diluyo en 10ml de H2SO4, se llev a la
estufa a 100C durante y se realizaron diluciones con H2SO4 a 1/10,
1/100, 1/1000 para su posterior medicin
9.2.51.
9.2.52. Seleccin de microorganismos capaces de producir PHB
9.2.53. En el espectrofotmetro se realiz un barrido desde 200nm a 400nm,
siendo la presencia de plstico cuando la elevacin de la curva o pico se
extiende en 235nm la grfica que pudimos observar fue la siguiente:
9.2.54.
9.2.55.
9.2.56. Donde observamos que se form un pico aproximadamente a 235nm
con una absorbancia de 0,712
9.2.57. TEST DE IDENTIFICACIN DE BACTERIAS GRAMNEGATIVAS
GN2
9.2.58.
9.2.59.
9.2.60. Figura # 9.7. Pigmentacin de microplacas BIOLOG GN2 de
bacterias de la laguna hedionda 2 (suelo) cepa5
9.2.61.
9.2.62.
9.2.65.
10.
CONCLUSIONES
10.1.1.
1. Se logr aislar algunos microorganismos de laguna kollpa y se procedi a
su respectiva numeracin, pero una vez realizadas el anlisis de produccin
de plsticos se pudo evidenciar que ninguno de los microorganismos
separados fueron capaces de producir plsticos
2. Se trabajaron con una serie de microrganismo extrados de lagunas como
ser laguna palpani, laguna de coruto, laguna kollpa, laguna bush salina,
laguna hedionda, donde se encontr un cepa de microorganismo capaces
3.
10.1.2.
10.1.3.
4. La cepa 5 de la laguna hedionda 2 (Suelo) productora de plstico
biodegradable tiene una morfologa especialmente caracterstica con
respecto a las dems cepas la cual es Rugosa de Contorno irregular Planas
y opaca a diferencia de las dems cepas que son lisas brillosas y de
contorno regular
10.1.4.
5. Mediante la prueba de identificacin de bacterias gramnegativas Biolog
GN2 en microplacas cualitativamente podemos observar que las bacteria
identificada en la prueba metabolica es de carcter gram positiva por la
cantidad de With positivos adems que el patrn de respuesta genera
algunos resultados sobre las carateristicas de optimo crecimiento de la
bacteria como:
PH ligeramente acido.
Concentraciones altas de NaCl.
Azucares importantes como: Cyclodextrin, Adotinol, D-fructuosa, D-glucosa,
Minositol, D-meliblose, L-Rhamnose, Sorbitol, Sucrose.
Contenidos altos de hexosa (fosfatos)
No suele ser Reductor.
cidos carboxlicos importantes como: L-Histidina, Acido Urocanico,
Inosine, 2,3-Butadeniol, Fenilalina, L-Prolina, Glycerol.
10.1.5.
10.1.6.
11.RECOMENDACIONES
11.1.1.
11.1.2.
12. BIBLIOGRAFIA
12.1.1.
12.1.2. Leonor Carrillo.2003. Microbiologa Agrcola
12.1.3.
12.1.4. Diego Armando castillo Franco, Pontifica Universidad JAVARIANA,
Nov. 2008, Efecto del gen FafH1 en la produccin de PHA conteniendo
monmeros insaturados por Pseudomas putida
12.1.5.
12.1.6. 5.8* Edicion Brock: biologa de los microorganismos, Michael T
Madigan, John M, Martino,Jack Parker
12.1.7.
12.1.8.Universidad de Granada, 2006, artculo cientfico, Tcnicas de cultivo.
Aislamiento. Obtencin de cultivos puros
12.1.9.
12.1.10.Universidad nacional de
Colombia, 2008, articulo, bacterias
productoras de polihidroxicalcanoatos (PHA) como una alternativa para
la remocin de carga organica de aguas residuales
12.1.11.
12.1.12.Comparison of Phenotypic and Genotypic Techniques of Identification
of Unusual Aerobic Pathogenic Gram Negative Bacilli. Y.W. Tang, N.M.