INMOVILIZACIN DE ENZIMAS

Proceso por el cual se restringe el movimiento de los enzimas, dando

lugar a una forma de los mismos insoluble en agua.
Dichos enzimas deben mantener su actividad cataltica.
En estos sistemas, los mecanismos difusionales cobran gran importancia
(transporte de reactivo-substrato y productos).
Ventaja
s
Permite uso en continuo del enzima.

Inconvenientes
El proceso de inmovilizacin puede afectar a
la actividad del enzima.

Simplifica las etapas de purificacin del

producto.
Permite reutilizacin del enzima en reactores
discontinuos.

Procesos limitados por factores difusionales.

Mayor concentracin del enzima.

Aumento de la complejidad del sistema.

Mayor rendimiento.
Mayores caudales de entrada/salida para el
mismo tamao de reactor.
Mayor estabilidad del enzima.
Resistencia a la desnaturalizacin.
Reduce el riesgo de contaminaciones
accidentales del proceso.
Adecuado para conversiones sencillas, una
sola etapa.
Menores costes de operacin.
Mayor control sobre la reaccin. Permite
mayor automatizacin del proceso.

Conversiones de varias etapas: preferible el

uso de clulas enteras.

ENZIMAS

AGENTE
PORTADOR

Propiedades
bioqumicas

Caracterstica
s qumicas

Cintica y
mecanismo

Propiedades
mecnicas

Mtodo de
inmovilizacin

Transferencia
de materia

Performance

Estabilidad

MTODOS DE INMOVILIZACIN DE
ENZIMAS

ADSORCIN
ENLACE COVALENTE
ENLACES CRUZADOS
ATRAPAMIENTO
MEMBRANAS

MTODOS DE INMOVILIZACIN DE
ENZIMAS

ADSORCIN

Para enzimas y clulas enteras.

El ms antiguo y sencillo (adsorcin de -D-fructofuranosidasa en Al(OH)3, Nelson

y Griffin, 1916)

Etapas:
o Contacto: solucin acuosa de enzimas-adsorbente
o tads
o lavado

Interacciones:
o Tipo inico
o Puentes hidrgeno
o Van der Waals

Proceso muy suave:

o La actividad del enzima se conserva
o Proceso reversible en funcin de las condiciones (T, pH)
o Estricto control de las condiciones de adsorcin.

Tcnicas de inmovilizacin por adsorcin:

o
o
o
o

Adsorcin esttica
Electrodeposicin
Proceso en reactor
Bao con agitacin

Gran variedad de soportes para la adsorcin (orgnicos/inorgnicos).

MTODOS DE INMOVILIZACIN DE
ENZIMAS
ENLACE COVALENTE

Adecuado para enzimas.

Formacin de enlaces covalentes entre enzima y soporte. Mucho ms

fuertes que el caso anterior.

Variedad de soportes:
o Naturales: celulosa, dextrano
o Sintticos: polmeros (poliacrilamida, poliestireno)
o Vidrio, materiales cermicos

La unin covalente debe afectar a grupos funcionales del enzima que no

intervengan en el proceso cataltico.

Etapas previas:
o Activacin del soporte (creacin de grupos funcionales adecuados
para su unin con los del enzima): activacin por bromuro de
ciangeno, carbodiimida, complejos de diazonio
o Vidrio y cermica (inorgnicos): recubrimiento superficial con
grupos funcionales orgnicos adecuados.

Puede haber prdida de actividad debida a:

o Participacin del centro activo del enzima en el enlace covalente
o Impedimentos estricos

MTODOS DE INMOVILIZACIN DE
ENZIMAS
ENLACES CRUZADOS

Formacin de agregados tridimensionales entrecruzados, insolubles en

disolucin acuosa. Se prescinde del soporte.

Enlace (bi-multi)covalente entre enzimas y reactivos bi-multifuncionales

(comerciales y baratos).

Fcil preparacin

Alta especificidad (condiciones ptimas varan segn cada caso),

ensayos prueba-error en laboratorio.

INCLUSIN O ATRAPAMIENTO

Mayoritariamente para clulas. Poco usado para enzimas (baja

retencin).
Inclusin del enzima en una matriz tridimensional, quedando atrapado.
La matriz se forma en presencia del enzima.
Se debe permitir la difusin de substrato/productos.
Uso de polmeros sintticos o geles de origen natural.

MTODOS DE INMOVILIZACIN DE
ENZIMAS
MEMBRANAS

Retencin del encima en un espacio limitado por una membrana

semipermeable.
o Microencapsulacin
o Membranas preformadas

a) Microencapsulacin

Partculas esfricas de pequeo tamao.

El enzima queda incluido en suspensin dentro de las esferas.

Ventaja: se consigue una suspensin en medio lquido (buena difusin)

Procedimiento:
o Formacin de emulsin en
orgnico[monmero] + enzima)
o Polimerizacin de la emulsin

disolucin

acuosa

(lquido

Puede hacerse tambin para fibras polimricas.

b) Membranas preformadas

Membrana impermeable a
las
enzimas y
permeable
a
substrato/producto.
Fibras huecas: Reactor cilndrico con enzimas retenidos en membranas.

VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LOS MTODOS DE

INMOVILIZACIN DE ENZIMAS
MTODO

VENTAJAS

INCONVENIENTES

Los centros activos permanecen

inalterados.

Posible desorcin de enzimas

por cambios en pH,
temperatura
Mtodos no especficos para
cada reaccin/enzima

ADSORCIN

ENLACE COVALENTE

ENTRECRUZAMIENTO

No se requieren reactivos y las

etapas de activacin son
sencillas
Mtodo sencillo y econmico.
Estabilidad del enzima. No se
desliga.
Mtodo muy flexible, segn se
elija el agente portador y mtodo
de enlace.

Enzima muy estable,

fuertemente enlazado.
Puede usarse en combinacin
con la adsorcin para prevenir
prdida de catalizador.
Simplicidad.
Posibilidad de uso simultneo de
varios enzimas.

MEMBRANAS

Uso de membranas selectivas:

control de sustratos/productos
en mezclas.
Proteccin del enzima ante
inhibicin, envenenamiento
No hay prdidas.
Adecuado para sustratos de alto
peso molecular, buen contacto
enzima-sustrato: altas
conversiones.

Mtodo caro y complicado.

La actividad puede reducirse si
los reactivos usados son txicos
para el enzima.
Los centros activos pueden
modificarse/daarse durante el
proceso.
Puede daar los centros activos.
Puede haber problemas
difusionales que limiten el
rendimiento.
Prdida de enzima durante
preparacin.
Problemas difusionales debidos a
la membrana.
Posible inactivacin de enzimas,
sometidos a fuerzas de cizalla
elevadas.
Mal funcionamiento a bajas
concentraciones de sustrato
(adsorcin de ste en la
membrana)
Estricto control del tiempo de
residencia para sustratos de bajo
peso molecular.

ELECCIN DEL MTODO DE INMOVILIZACIN DE ENZIMAS

CARACTERSTICAS

ADSORCIN

ENL.
COVALENTE

ENTRECRUZAMIENTO

MEMBRANAS

Simple

Difcil

Intermedia

Difcil

Dbil

Fuerte

Fuerte

Intermedia

Intermedia

Alta

Baja

Baja

Posible

Rara

Imposible

Imposible

Baja

Alta

Intermedia

Intermedia

Baja

Alta

Alta

Alta

APLICABILIDAD

Si

No

No

Si

PROTECCIN FRENTE A
ATAQUE MICROBIANO

No

No

Posible

Si

PREPARACIN
FUERZA DE UNIN
ACTIVIDAD ENZIMTICA
REGENERACIN
SOPORTE
COSTE

DEL

ESTABILIDAD