Universidad Nacional

Autnoma
De Mxico

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Cromatografa
Extraccin y separacin de pigmentos vegetales

Laboratorio de Ciencia Bsica III

Gizeh Cecilia Rayn Picazo

Ma. Eugenia Ibarra Hernndez

23 Octubre 2011
3304

Grupo:

Resumen:
Objetivo:

Extraer el pigmento de un producto natural asignado por el profesor haciendo uso

de la tcnica mas adecuada.
Elegir mediante cromatografa en capa fina el eluyente o mezcla de eluyentes
ideales para separar los diferentes pigmentos de un producto natural por
cromatografa en columna
Separar por medio de cromatografa en columna los pigmentos vegetales
Verificar por cromatografa los pigmentos vegetales pigmentos por cromatografa en
columna
Utilizar reveladores fsicos y qumicos

La practica de cromatografa a aparte de ser laboriosa y cada vez interesante fue en cada
paso preocupante para nuestro equipo ya que el primer paso de la extraccin nos daba muy
poco pigmento tal vez tambin se debi al que se realizaron pocas extraccines asi el
volumen de nuestro pigmento no era igual que el de los dems, y tambin cada vez que se
quera utilizar este ya haba evaporado una considerable cantidad asi que caundo esto
pasaba agregbamos cloruro de metileno tal vez esto tambin pudo haber afectado nuestros
resultado en una mnima cantidad pero un factor, en cuanto nuestros resultados la
preparacin de las cromatoplacas, y cmaras de elucin y despus la realizacin de esta
encontramos cuatro disolventes que nos podran ayudar como el Tolueno, Etanol, Cloruro
de metileno y por ultimo el cual era el mas seguro el Acetato de etilo y uno mas el Metanol
pero al mezclarlos estos no nos daban los mejores resultados as con estas observaciones se
realizo la cromatografa en columna con un poco de problemas al prepararla pero mas que
nada aprendiendo, as esta adems de tardada por lo mismo que metamos disolvente no
muy polar agregando el Tolueno, despus Etanol, en este punto apareci el pigmento de la
espinaca que fue 1ml. Se empezaba a distinguir el amarillo del verde y en un momento el
amarillo bajo mas rpido pero la columna se vea fluorescente despus de esto se agrego el
acetato de etilo y as bajo mas rpido y se empez a recuperar los colores desde el amarillo
tenue hasta pasa a un verde claro, oscuro y uno mas claro, pero desafortunadamente esto no
fue lo mismo en la cromatografa en capa fina ya que ninguno de nuestros pigmentos que se
haban obtenido dio ese mismo color.

Introduccin:

Cuando queremos saber que compuestos estn formados en una sustancia o en un

compuesto utilizamos una tcnica llamada Cromatografia la cual nos puede auxiliar a
descubrir que sustancias hay pero no solo hay un solo tipo o solo podemos aplicar una solo
tipo de cromatografa, si no que esta depende de dos cosas ya que en el compuesto hay una
fase mvil y una estacionaria la cual nos determinara que tipo de cromatografia estamos
hablando. La fase estacionaria como lo dice su propio nombre es aquella que se queda
inmvil, que puede ser de estado solido o liquido, y la mvil puede ser gas o liquido, pero
claro los tipos de cromatografa a partir de qlo quees a son las fases pueden ser o son vairas
como la cromatografa de particin, cromatografa de intercambio ionico.
Ahora todos estos tipos de cromatografa se llevan a cabo en distintos medios y claro los
que se conocer como mayor frecuencia son la cromatografa en capa fina esta tcnica es
mas utilizada ya que es barata y fcil solo se utilizan placas de vidrio o lo que comnmente
se utiliza son los portaobjetos, ahora otra que conocemos es la cromatografa en columna
para las dos se utiliza eluyentes y adsorbentes para que estos acten sobre las sustancias
que se quieran separar.
Ahora en cuanto a la cromatografa en capa fina lo que suceder es que se pondr el
concentrado en las placas y mediante disolventes y eluyentes, los compuestos de este se
descompondrn en la placa ya que por medio de colores se pueda identificar sus
compuestos y con ayuda de reveladores podamos distinguirlos de mejor manera, ahora en la
cromatografa en columna se prepara de distinta forma una columna con eluyentes donde
pasara el concentrado y con tubos de ensayo se recolectaran los colores que vayan saliendo
y as se identificar.
Hay otra forma tambin que es la medicin del Rf, donde se mide el inicio del disolvente y
el inicio del concentrado y hasta donde acaban cada uno y tambin esta la medicin del Rx
pero esto es para sustancias estndar.
Esta tcnica se usa para varios campos como en fsica, biologa y sobre todo en la industria.

Por medio de la una extraccin solido- liquido se tomaran muestras de los pigmentos de la
espinaca y haciendo uso de la tcnica de cromatografa en capa fina y en columna se
determinaran los pigmentos caroteno (rosa), xantofilia (amarillo), clorofila a, clorofila b.
(verde).

Material:
1 Matraz Erlenmeyer
1 Matraz Bola
1 Vidrio de Reloj
Algodn
1 Embudo Butcher
2 Soportes Universales
Pinzas de tres dedos con nuez
1 Refrigerante recto
2 Clips verdes
1 Embudo de cuello largo
1 Embudo de decantacin
1 Aro de metal
1 Bandeja de plstico
Mangueras
Papel Filtro
28 Portaobjetos
Aprox. 12 Tubos capilares
Papel aluminio
12 Frascos de vidrio (Gerber)
1 Bureta de 25ml.
1 Pinzas para Bureta
Vasos de precipitado 25ml. 100ml. 150ml.
Frascos de color mbar
Frascos de plstico para residuos
11 Pipetas de 10ml.
Jeringa o Perilla de succin
20 Tubos de ensayo

Instrumento:

Tijeras
Esptula
Agitador
Mechero de Bunsen o Encendedor
Gradilla

Equipo:
Parilla de calentamiento
Balanza analtica
Rota vapor
Restato
Recirculador
Lmpara de Luz Ultravioleta

Regla

Reactivos:

5g. Espinaca
Sulfato de Sodio
Hielo
Agua
Sal Na Cl
Gel de slice para capa fina y columna
Agua destilada
Hexano
Ciclo hexano
Benceno
Tolueno
Cloroformo
Cloruro de metileno
Acetato de etilo
Acetona
Etanol
Metanol
Cloruro de metileno

Procedimiento:
Extraccin

Se cortaron unas hojas de espinaca con ayuda de las tijeras y se pesaron 5g. de esta se
colocaron en un matraz aadiendo 10ml. De etanol del 95% calentndose a ebullicin
durante 5 minutos procurando que el disolvente no se evaporara tanto.
Se filtro la mezcla caliente a travs de un embudo Buchner sin el vacio se limpio todo el
matraz sin dejar ninguna muestra y que se dejara una pequea masa semislida as con la
esptula se comprimi.
Pasndolo a un matraz Erlenmeyer el extracto, la masa semislida se volvi a pasar al
matraz inicial y ah se le volva agregar 10ml. De cloruro de metileno calentndolo a reflujo
durante 3 o 4 minutos con suavidad.
Nuevamente se filtro este reflujo y se aadi al otro filtrado anterior, as se hicieron de dos
a tres extracciones aadiendo mas cloruro de metileno.
En un embudo de decantacin se aadieron unos mililitros de solucin saturada de cloruro
de sodio y se agito de la forma como indicaba la tcnica.
Se coloco un embudo debajo del decantacin ponindole un algodn (1cm) con sulfato de
sodio anhidro se agrego la solucin salmonera con el extracto y decanto.

Esta solucin se guardo en un frasco

Concentracin en el Rota vapor

Se realizo una destilacin en el rota vapor para la concentracin de los pigmentos.

Se monto el aparato y se comenz el debido procedimiento as hasta ver el concentrado del
pigmento y con la temperatura debida.

Cromatografa en capa fina:

Se procuro que el disolvente no se hubiera diluido, al pasar esto se agrego algunas gotas de
cloruro de metileno.
Se realizo el procedimiento de el preparado de las placas con su respectivo orden.
Colocando gel de slice aproximadamente 35g. de esta sustancia y aplico a los portaobjetos
cuidadosamente midiendo 1cm. Esto para que quedara un espacio para su manejo.
Se dejaron secar ya aplicada la gel de manera uniforme as mantenindolas verticalmente
para su uso ya secas.
De la sustancia o el concentrado se extrajo con una micro pipeta anteriormente realizada
con un tubo capilar y un encendedor, se coloco una gota aproximadamente de 1-2mm.
Esta placa se coloco verticalmente en un ngulo de 80 en una cmara cromatografica o
cmara de elucin previamente preparada, conteniendo el disolvente que se quera
experimentar o comprobar, en esta misma tenia un papel filtro pero dejando una lnea para
ver la placa al introducirla, se tenia que tener cuidado de que el disolvente no tocara la
mancha del concentrado.
Se tapaba el frasco y se observaba la ascensin del disolvente hasta alcanzar la lnea
marcada anteriormente y sacndola y marcando donde llego el disolvente asi se dejo secar.
Se observo la placa y mientras estaba en la cmara de elucin se observaba las manchas
coloridas o se examinaron con LUV. U otro revelador
En el ultimo paso se midieron el inicio y final de las manchas para calcular el Rf. Y
visualizar el pigmento que contena.
Cromatografa en columna

Se sujeto la columna se coloca en un pinza de Mohr

Se puso una bola de algodn en la parte inferior de esta
Se agrego una capa de 3 cm de sal
Se pesaron 10 g. de almina y se mezclaron con Hexano y se vertieron en la columna y se
dejaba que el liquido saliera

Esta tenia que llenarse con una velocidad uniforme y que no se secara
Se saco el exceso de disolvente hasta que quedo la alumna pero dejandoun pco de
disolvente
Ya lista se verti 1ml. Del pigmento sobre la columna y se dejo que bajara agregndole mas
disolvente o la mezcla de disolventes,
Se tomaron los que son los eluidos incoloros y se reuni los mas concentrados en los tubos
Diagrama de Bloques

5g. de Espinaca con

10m. de etanol

Rotavapor

Cromatografi en
Capa Fina

Calentar a ebullcion y
filtrar

Realizar una
decantacion con
NaCl. saturada y anh.
NaS

Se elige el disolvente
y mezcla de
disolventes

Reflujo con cloruro

de metileno

Filtrar y realizar 3
veces reflujo seguido
de otra filtracion y
agregar cloruro de
metileno en cada una

Cromatografia en
columna

Se recolectan los
pigmentos en lso
tubos de ensayo

Se realiza una
segunda
Cromatografia en
Capa fina

Se obsservan y
anotan todos los
resultados y cambios

Resultados:
Hexano:

Ciclo hexano

Benceno

7min.

13min.

12min.

Rf =

0.5
=0.076
6.5

Rf =

0.8
=0. 1230
6.5

Rf =

5.3
=0.815
6.5

Tolueno

Cloroformo

Cloruro de metileno

10min

9min.

6min.

Rf =

5.4
=0.8571
6.3

5
Rf = =0.833
6

Rf =

Acetato de etilo

Acetona

Etanol

7min.

6min.

6min.

Rf =

5.2
=0.8
6.5

Metanol
6min.
Rf =

2
=0.3125
6.4

Rf =

5
=0.793
6.3

Rf =

5.4
=0.8571
6.3

4.2
=0.7924
5.3

Anlisis de Resultados:
En primer lugar nuestra cromatografa en capa fina a pesar de lo que fue la mnima cantidad
del pigmento de la espinaca pudimos desarrollar toda la practica con la cantidad que
extrajimos, ahora en la cromatografa en capa fina como se puede ver en las imgenes el
disolvente que mas nos favoreca para elegirlo era el acetato de etilo esto por que es el que
mas corri los colores desde un amarillo verde, corriendo amarillos, y luego verdes, esto
nos daba una buena idea de que tenamos dos colores y que este disolvente los pudo
separar, el otro que tambin era convincente el cloruro de metileno ya que igual separaba
los verdes y amarillos aunque el Etanol era una buena eleccin solo que solamente separaba
los verdes y no tanto los amarillos, asi que tambin se eligio el Metanol esto con la ayuda
de la profesora, despus de las observaciones que tenamos de las pruebas se realizo la
mezcla de dos compuestos y en total dos mezclas de disolventes una de Metanol mas
Cloruro de metileno 1:4, otra de Acetato de etilo mas Etanol 4:1, pero estas no daban una
buena separacin de colores simplemente se llevaban el pigmento asi que se decidi
realizar las mismas mezclas solo que la concentracin invertirla Etanol mas Acetato de etilo
1:4 y Metanol mas Cloruro de metileno 4:1 asi estas dieron un mejor resultado pero sin
embargo no tan convincente como la prueba de los disolventes puros asi que se decidi
proseguir a la cromatografa en columna asi al prepararla y quitarle el aire que se quedaba
en la sal y en la gel para que esta fuera uniforme se decidi poner el pigmento agregar
Tolueno sin embargo este no bajaba decidi poner Etanol el pigmento empez a bajar un
amarillo exactamente este sigui bajando pero en un momento se desapareci y este
empez a verse flourescente pensando que nuestra columna estaba mal, vimos que si era un
flourescente asi que decidimos tomar una muestra de este asi esperando que bajara mas, no
pasaba nada, y con le tiempo sobre nosotros se decidi agregar el disolvente que mas nos
quedaba el Acetato de etilo se verti y no tardo tnato en que empez a separarse un amarillo
y apareci luego el verde bajo y se tomaron las dems muestras como desde un verde limn
a uno oscuro hasta un verde tenue.
Asi con nuestras muestras de pigmentos proseguimos a preparar las cromatoplacas, y con la
curiosidad de el tubo que contena un fluorescente se observo bajo la lmpara de luz
ultravioleta y si este era fluorescente, as sin explicacin de que lo causo, decidimos hacer
una cromatografa de este pero desafortunadamente este no apareca nada ni debajo de
nuestra lmpara, tal vez el tiempo que se quedo ya que duraron las muestras cuatro das y
esto nos afecto ya que algunas muestras se haban secado, tal vez un factor por el cual al
realizar las 13 cromatografas en capa fina, ninguna nos dio un corrido de algn verde o
amarillo.

Todos los resultados pudieron habernos dado una idea errnea por el factor de el tiempo
que se tardo en realizar la practica, las condiciones de que se quedaban y los disolventes se
evaporaban como era su naturaleza y mas le damos una razn a la cantidad de pigmento
que resulto.
Conclusiones:
Para la practica de cromatografa podemos concluir que la hiptesis no fue acertada para
nuestro equipo y nuestra experimentacin solo pudimos comprobar que estaban presentes
los pigmentos por los colores que obtuvimos en la cromatografa en columna, el verde de la
clorofila y el amarillo de la xantofilia, adems de eso sirvi de mucho realizarla para
conocer la tcnica por que en cuanto a la eleccin del disolvente fue muy certera.
Sugerencias:
En realidad no hay muchas sugerencias ya que la practica se lleva tiempo pero mas es el
tiempo que el alumno se tarda al ser su primera experiencia con esta tcnica, podra ser mas
rpida con el asunto de la columna ya que tambin nos sirvi mucho como realizar una
columna pero podra estar presente la columna ya echa pro algn motivo no se haya
realizado de manera correcta y haya influido.
Bibliografa:

.
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Fieser L.F. Experimentos de Quimica Organica. Espaa: Espaa Reverte 1967.
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