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3. MATERIALES
Agar MYP para B. cereus
Solucin de polimixina
Emulsin de yema de huevo al 10%
Cajas petri
Erlenmeyer
Tubos de ensayo
Morteros
Agua peptonada
Puntas estriles
Micropipetas
4. METODOLOGIA
1. Se funde el medio de base y se mantiene en un bao de agua regulado entre 45 C 2Cy se
aaden los otros componentes (Polimixina B, Emulsin de yema de huevo estril) mezclando
bien despus de cada adicin. Se mantiene el medio completo en un bao de agua a 45 C
2. Tomar 10g de muestra y macerarla. En caso que la muestra sea liquida tome 10mL
en una probeta estril.
Muestra
de 10g
90mL
H2O
Peptonada
9mL
H2O
Peptonada
Sembrar en
superficie 0.1mL
10-1
10-2
10-3
Incubar a 35C+/-2
durante 48 horas
c) Se recomienda examinar con atencin los elementos dudosos, empleando una lupa cuando sea
necesario, con el objeto de diferenciar las colonias de partculas extraas.
d) Las colonias invasoras deben ser consideradas como una sola colonia. Si menos de un cuarto de
la placa est invadida por dichas colonias, se cuentan las colonias de la parte no
afectada de la placa y se calcula el nmero correspondiente a la placa entera. Si est
invadido ms de un cuarto de la placa, se desecha el recuento.
6. EXPRESION DE RESULTADOS
Se redondea el resultado calculado con dos cifras significativas. Se toma como resultado
el nmero de unidades formadoras de colonias, UFC/ml o UFC/g de producto,
expresado como un nmero entre 1,0 y 9,9 multiplicado por 10 x donde x es la potencia
apropiada de 10.
Se calcula el nmero de N de colonias por mililitro o por gramo de producto,
dependiendo del caso, usando la siguiente ecuacin:
El nmero estimado de Bacillus cereus es por lo tanto: 1,1 x 104 expresados /g o /ml.
Ejemplo:
Un recuento directo de B. cereus a 30C 2 C dio los siguientes resultados:
- en la primera dilucin retenida (10-3): 63 y 80 colonias
- en la segunda dilucin retenida (10-4): 7 y 4 colonias.
Se sacaron los siguientes nmeros:
Para 63 colonias: 5 colonias, 4 de las cuales concordaban con los criterios, dando
a = 50
Para 80 colonias: 5 colonias, 3 de las cuales concordaban con los criterios, dando
a = 48
Para 7 colonias: 5 colonias, 4 de las cuales concordaban con los criterios, dando
a=6