Objetivo:

Observar el efector de la variacin de concentracin de enzima y sustrato sobre la

velocidad de reaccin. La actividad enzimtica se detectara colorimtricamente.
Antecedentes: La enzimas son protenas encargadas de catalizar reacciones en
el metabolismo disminuyendo la energa de activacin de las mismas provocando
un aumento en la velocidad de reaccin. Existen varios factores que afectan la
actividad enzimtica. Entre estos factores se encuentra la concentracin de
enzima sustrato. A mayor concentracin del sustrato, a una concentracin fija de
la enzima se obtiene la velocidad mxima la cual se alcanza cuando el 100% de
las enzimas presentes tienen sus sitios activos ocupados, y la velocidad disminuye
conforme el sustrato se transforma en producto. Por lo que se entiende que a
mayor concentracin de sustrato hay una mayor velocidad de reaccin con
respecto a una mayor concentracin de enzima.
La reaccin de la Ureasa

(NH2)2CO + H2O CO2 + 2NH3

Los productos finales de la reaccin son Dixido de carbono y amoniaco
Procedimiento:
Parte 1 Efecto de la concentracin del sustrato.

Se tomaron 6 tubos de ensaye de 15x150 y se numeraron.

Se agreg solucin de Urea 10% a cada tubo de la siguiente manera:
Tubo
1
0.5
mL
Tubo
2
1
mL
Tubo
3
2
mL
Tubo
4
3
mlL
Tubo 5 y 6 - 5 mL
Se agreg 4 gotas de cloruro de mercurio 1% al tubo 6 y agua destilada a
cada tubo de la siguiente manera:
Tubo 1 - 7.5 mL
Tubo 2 - 7 mL
Tubo 3 - 6 mL
Tubo 4 3 mL
Tubo 5 y 6 - 0.5ml
Se agit cada tubo suavemente y se colocaron en un bao de agua a 50C
durante 5 minutos.
Despus de los 5 minutos, se agregaron 0.5 ureasa 1% a cada tubo
mientras an estaban en el bao y se agitaron nuevamente. Se tom el
tiempo a partir de agregar la ureasa.

Se dejaron los tubos en el bao a 50C durante 30 minutos.

Al pasar los 30 minutos se agregaron 4 gotas de cloruro de mercurio 1% a
los tubos 1, 2, 3, 4 y 5 sin sacarlos de bao, despus se mezcl el
contenido y se sacaron del bao.
Despus se tomaron alcuotas de 5mL de cada tubo y se pasaron a un
matraz Erlenmeyer para ser titulado con HCl 0.1N y se utilizaron dos gotas
de rojo de metilo como indicador.
Se anotaron los volmenes gastado de HCl utilizado.

Parte 2 Efecto de la concentracin de la enzima en la velocidad de

reaccin.

Se tomaron 6 tubos de ensaye de 15x150 y se numeraron.

Se agreg 7.5 mL solucin de Urea 10% a cada tubo.
Se agreg 4 gotas de cloruro de mercurio 1% al tubo 5 y agua destilada a
cada tubo de la siguiente manera:
Tubo 1 0.9mL
Tubo 2 0.75 mL
Tubo 3 0.5 mL
Tubo 4
Tubo 5 y- 0.5ml
Se agit cada tubo suavemente y se colocaron en un bao de agua a 50C
durante 5 minutos.
Despus de los 5 minutos, se agreg ureasa 1% a cada tubo mientras an
estaban en el bao de la siguiente manera:
Tubo 1 0.1mL
Tubo 2 0.25 mL
Tubo 3 0.5 mL
Tubo 4 1mL
Tubo 5 y- 0.5ml
y se agitaron nuevamente. Se tom el tiempo a partir de agregar la ureasa.
Se dejaron los tubos en el bao a 50C durante 30 minutos.
Al pasar los 30 minutos se agregaron 4 gotas de cloruro de mercurio 1% a
los tubos 1,2,3 y 4 sin sacarlos de bao, despus se mezcl el contenido y
se sacaron del bao.
Despus se tomaron alcuotas de 5mL de cada tubo y se pasaron a un
matraz Erlenmeyer para ser titulado con HCl 0.1N y se utilizaron dos gotas
de rojo de metilo como indicador. (se comenz con el tubo 5 despus en
orden ascendente 1-4)
Se anotaron los volmenes gastado de HCl utilizado.

Resultados y observaciones:
Parte 1:
Tubo
1
2
3
4
5
6(Blanco)

mL HCl
0
0.1
0.1
0.1
0.1
0

mL HCl restando el blanco

-

mL HCl
0.5
0
0
0.5
0

mL HCl restando el blanco

-

Observaciones
El volumen
usado de HCl
es muy pequeo
lo que sugiere un
error en la
practica.

Parte 2:
Tubo
1
2
3
4
5(blanco
)

Observaciones
Lo mismo
ocurri en la
segunda parte

Discusin:
Debido al bajo volumen utilizado de HCl utilizado para titular cada tubo, se puede
deducir que hubo una muy baja concentracin de producto lo que nos lleva a que
la Urea o la Ureasa no se encontraban funcionales. Lo ms probable sea la
enzima la que no funciono, por lo que no ocurri la catlisis y no hubo formacin

de producto al cual titular, esto en base a que la enzima es ms propensa a

desnaturalizarse por los diferentes factores como pH o la temperatura.
Conclusin:
La prctica no fue exitosa debido a la Ureasa se encontraba inactiva, por lo que no
hubo catlisis ni formacin de producto, dando resultados muy diferentes a los
esperados.
Cuestionario:
1. Cul es el efecto de los metales en la accin de la Ureasa y por qu?
Actan como inhibidores ya que se unen de por enlaces covalentes al sitio activo,
causando un inhibicin irreversible, no solo en la ureasa si no en cualquier enzima.
2. De dnde se asla normalmente la Ureasa comercial?
Del carbamato de amonio el cual se deshidrata para formar urea

3. Cules son sus conclusiones finales de esta prctica?

La relacin enzima-sustrato es muy importante pues de ella depende la velocidad
mxima de reaccin, permitiendo que procesos que son vitales en nuestro
organismo se realicen de manera adecuada a la velocidad necesaria.
Bibliografa:
-Lehninger, Albert L. (2009). Principios de Bioqumica. Captulo 6: Enzimas.
5 Edicin. Ediciones Omega. Espaa. P. 183-233
-Enzimas
http://genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaII/enzimas.cfm
-Produccin Industrial de Urea
http://www.textoscientificos.com/quimica/urea/produccion