CENTRIFUGACION

*La centrifugacin es un mtodo por el cual se pueden separar slidos

de lquidos de diferente densidad mediante una fuerza giratoria. La
fuerza centrfuga es provista por una mquina llamada centrfugadora, la
cual imprime a la mezcla un movimiento de rotacin que origina
una fuerza que produce la sedimentacin de los slidos o de las
partculas de mayor densidad.
Los componentes ms densos de la mezcla se desplazan fuera del eje de
rotacin de la centrfuga, mientras que los componentes menos densos
de la mezcla se desplazan hacia el eje de rotacin
La fuerza centrfuga es la que se ejerce sobre un cuerpo cuando ste
gira alrededor de un eje. Esta fuerza, cuya magnitud es directamente a
la masa del cuerpo, el radio de giro y la velocidad de giro (o angular), es
perpendicular al eje y tiende a alejar el cuerpo del mismo.
La fuerza centrfuga puede acelerar el proceso de sedimentacin de
partculas que tienen tendencia a hacerlo espontneamente (densidad
superior a la del lquido), o en aquellas que tienden a flotar (densidad
inferior a la del lquido).
magnitud:Fc = m x w2 x r (m, masa del cuerpo; w, velocidad angular; r,
radio de giro)

Tipos de centrifugacion
La centrifugacin preparativa se utiliza para separar partculas segn la
velocidad de sedimentacin (centrifugacin diferencial), la masa
(centrifugacin zonal) o la densidad (centrifugacin isopcnica). En el
primer caso se obtiene un lquido sobrenadante y un materioal
sedimentado. En los otros dos casos las patculas se distribuyen en
fracciones de diferentes densidades de un fluido lquido (centrifugacin
mediante un gradiente de densidades).
Las partculas se pueden separar en funcin de la velocidad de
sedimentacin (centrifugacin diferencial), la masa (centrifugacin

zonal) o la densidad (centrifugacin isopcnica). La centrifugacin zonal

y la centrifugacin isopcnica constituyen ejemplos de centrifugacin
mediante un gradiente de densidades.

Hay diferentes tipos de centrfugas segn el rango de velocidades de

giro:

A. Centrfugas de baja velocidad, de sobremesa o clnicas. De

pequeo tamao y sin refrigeracin. Alcanzan una velocidad
mxima de 5000 rpm. Son tiles para la separacin de
partculas grandes como clulas o precipitados de sales
insolubles.
Las centrfugas micrfugas son una variante de las anteriores
que permiten llegar a velocidades de ms de 10.000 rpm, Los
volmenes de trabajo son muy pequeos. Son tiles en el
campo de la biologa molecular.
B. Centrfugas de alta velocidad. Alcanzan velocidades de entre
18.000 y 25.000 rpm. Son refrigeradas y algunas tienen sistema
de vaco para evitar el calentamiento del rotor a causa del
rozamiento con el aire. Son tiles en la separacin de fracciones

celulares, pero insuficientes para la separacin de ribosomas, virus

o macromolculas en general.
C. Ultracentrfugas. Superan las 50.000 rpm, por lo que tienen
sistemas auxiliares de refrigeracin i de alto vaco. Hay
ultracentrfugas analticas que permiten la obtencin de datos
precisos de propiedades de sedimentacin (coeficientes de
sedimentacin, pesos moleculares), y preparativas, tiles para
aislar partculas de bajo coeficiente de sedimentacin
(microsomas, virus, macromolculas).

Centrifugacin diferencial: Es el proceso que tiene como resultado la

obtencin de un sobrenadante y un material sedimentado.
Centrifugacin mediante un gradiente de densidades:
Este tipo de centrifugacin es un proceso mediante el cual las partculas
se distribuyen en fracciones de diferentes densidades de un fluido
lquido.
El mtodo es un poco ms elaborado que la centrifugacin diferencial,
no obstante presenta ventajas que compensan el trabajo aadido. La
tcnica permite la separacin de varios o todos los componentes de la
muestra y la realizacin de medidas analticas. El mtodo de gradiente
de densidades implica la utilizacin de un soporte fluido cuya densidad
aumenta desde la zona superior a la inferior. El gradiente se consigue
con un soluto preferiblemente de baja masa molecular, de tal manera
que la muestra a analizar pueda ser suspendida en la solucin
resultante.
Hay dos variantes de este mtodo, la centrifugacin zonal y la
centrifugacin isopcnica:
Centrifugacin isopcnica: Partculas con el mismo coeficiente de
sedimentacin se separan al usar medios de diferente densidad. Se usa
para la separacin de ADN con mucha frecuencia.
Centrifugacin zonal:
Las partculas se separan por la diferencia en la velocidad de
sedimentacin a causa de la diferencia de masa de cada una. La

muestra se coloca encima de un gradiente de densidad preformado. Por

la fuerza centrfuga las partculas sedimentan a distinta velocidad a
travs del gradiente de densidad segn su masa. Se debe tener en
cuenta el tiempo de centrifugacin ya que si se excede, todas las
molculas podran sedimentar en el fondo.
Aplicaciones
La centrifugacin se utiliza para separar partculas en suspensin en el
seno de un lquido o partculas en disolucin, siendo ste el caso donde
se encuentran ms aplicaciones. As, se utiliza habitualmente
en biologaya que permite separar clulas, orgnulos subcelulares o
macromolculas.
(a) Purificacin de protenas solubles por centrifugacin diferencial a
partir de tejido heptico
(b) Aislamiento de orgnulos subcelulares por centrifugacin diferencial

Utillaje y material
Independientemente del tipo de centrifugacin que se vaya a utilizar, el
elemento bsico necesario es la centrfuga. Una centrfuga consta de un
motor, un rotor adaptado especialmente para poner tubos de muestra y
un compartimento donde est alojado el motor para aislarlo del exterior.
Cuando la velocidad de giro es muy elevada, este compartimento es
totalmente estanco y se refrigera para poder trabajar al vaco y evitar el
calentamiento del rotor. Por otro lado, este recinto suele estar blindado
para evitar accidentes en caso de rotura del rotor

Rotor: Es la pieza que gira impulsada por el motor y sobre la cual se

coloca la muestra. Han de ser materiales ligeros y resistentes a altas
velocidades de giro. Los mejores son de titanio y fibra de carbono ya que
son ligeros y resistentes. Hay diferentes tipos de rotores:
1. Oscilantes, flotantes o basculantes. El adaptador del tubo est unido
al brazo del rotor por su parte superior, pero no est fijo a l. Durante la
centrifugacin, los tubos pierden la verticalidad a causa de la fuerza
centrfuga y se sitan perpendiculares al eje de rotacin. Se utilizan para
separaciones ms precisas ya que la fuerza centrfuga se ejerce en la
direccin de la longitud del tubo. Se pueden separar partculas
esencialmente en funcin de su densidad utilizando gradientes de
densidad en un disolvente (isopcnicos).
2. De ngulo fijo. El adaptador del tubo tiene una cierta inclinacin
respecto al eje de giro. Se utilizan para las separaciones ms simples
(clulas, orgnulos celulares, membranas, protenas ms o menos
agregadas segn los casos), sobre todo en separaciones secuenciales a
velocidades de rotacin crecientes.
3. Verticales. Rotores macizos con compartimentos esculpidos paralelos
al eje.
Tubos: Estan hechos de materiales inertes que no interaccionan con los
componentes de la muestra y resistentes a la deformacin a altas
velocidades. La eleccin depende del tipo de rotor, tipo de muestra,
volumen y tipo de fraccionamiento. Pueden ser de vidrio (hasta 25.000
g) o de materiales polmericos como el polipropileno o los
policarbonatos.

Montaje
Slo se requiere que la centrfuga est sobre una base slida exenta de
vibraciones y en un espacio suficientemente amplio para que pueda ser
manipulada sin problemas.

Equipos para centrifugacion

La centrifugacin en el laboratorio se realiza por medio de un aparato
llamado centrfuga, en el cual se colocan tubos de ensayo que contienen
la mezcla; la centrfuga gira con tal velocidad que separa el slido y lo
deposita en el fondo del tubo. Luego se efecta una filtracin o una

decantacin. Este procedimiento, es muy til cuando el slido que est

disuelto en el lquido es muy fino y no sedimenta.

Procedimiento
a) Colocar el tubo de muestra (suspensin o disolucin) en uno de los
receptculos
del
rotor.
b) Compensar el tubo de muestra colocando en el receptculo
diametralmente opuesto otro tubo con un volumen de lquido de
peso
idntico
al
de
la
muestra.
c) Cerrar hermticamente el compartimento del rotor y poner en
funcionamiento la centrfuga. Una vez acabada la centrifugacin
(normalmente las centrfugas tienen un temporizador que
desconecta automticamente el motor una vez transcurrido el
tiempo programado), esperar a que se detenga el rotor para abrir

la tapa del compartimento donde est alojado y sacar el tubo de

muestra y el de compensacin.