PROPAGAO DE ORQUDEAS POR SEMENTES

C o a r a c M. F r a n c o

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BREVE HISTRICO
Nas raizes das orquidceas vivem fungos chamados, de um modo
geral, "mycorrhiza". Parecem viver em simbiose com a planta. Penetrando nas raizes, no vo alem do cortex. A funo deles - ainda obscura. Todavia, parece que favorecem a nutrio da planta e, talvez,
por ao de seus enzimas, tornem assimilveis s orqudeas muitos compostos que de outro modo no seriam aproveitados.
Bernard ( 1 ) , observando que era prtica geral entre os floricultores
semear sementes de orqudeas no prprio substrato onde cresciam as
plantas mes, achou que deveria existir alguma relao entre a germinao e os "mycorrhiza". Julgou aquele autor que esses fungos se
associavam aos embries das sementes e trabalhou no sentido de esclarecer esta questo. Isolou fungos de vrios gneros de orquidceas,
identificando-os como pertencendo ao gnero Rhizotonia. Trs "strains"
foram isolados : de Cattleya, de Phalonopsls e de Odontoglossurn. Com
o fim de verificar se o fungo poderia promover a germinao das sementes
dessas espcies de orqudeas fez o seguinte : cpsulas foram lavadas
em lcool, flambadas e, a seguir, as sementes foram retiradas com cuidado, acepticamente. Como meio de cultura, Bernard usou um extrato
aquoso de "salep" rizomas de uma orqudea do gnero Ophrys. Este
extrato assim obtido continha amido, pentosanas, traos de protenas,
sais minerais e traos de acares. Com estas experincias ele pode
fazer as seguintes e interessantes observaes : quando sementes acpticas de Cattleya eram semeadas nesse meio, elas cresciam at cerca de
0,5 mm e, ento, o seu desenvolvimento paralisava. A germinao
prosseguia quando o fungo isolado de Cattleya era posto junto s sementes. Notou tambm especificidade de fungo em relao planta
da qual ele fora isolado. Assim, o fungo de Odontoglossum s agia
em Odontoglossum, e no em espcies de outros gneros. Bernard
explicou dizendo que o fungo digeria o amido do embrio. O acar
formado elevava a presso osmtica, o que atuava como estmulo germinao.
Burgeff ( 2 ) , estudando tambm o assunto e usando soluo nutritiva com amido, observou que no havia germinao sem "mycorrhiza".
Tambm atribuiu a germinao formao de acar.
Knudson ( 6 ) , partindo da hiptese de que a ao do fungo sobre o
meio de cultura poderia favorecer a germinao, ao invs de uma ao
direta dele sobre o embrio, semeou sementes de orqudeas sobre um
meio de cultura constituido de agar e soluo nutritiva. A germinao

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apenas se iniciava, mas logo se tornava estacionria, a-pesar-de serem

todos os fatores a ela favorveis. Juntando acar ao meio de cultura,
o desenvolvimento se dava a ponto de obter "seedlings" aps 3 meses
de semeao. Tomou, ento, aquele autor uma srie de bales com
soluo nutritiva, agar e amido, e, em alguns deles, plantou o fungo.
Nestes ltimos a germinao se deu, enquanto nos primeiros no se
processou. Isto indicava que o fungo digeria o amido, e que o embrio
utilizava os acares ento formados para a sua nutrio.
Para melhor isto provar, Knudson fez o seguinte : tomou frascos
com meio de cultura, fez o plantio do fungo, deixando-o que se desenvolvesse at certo ponto, quando ento o matou por esterilizao. As
sementes semeadas neste meio germinaram, ao passo que as semeadas
em frascos com o mesmo meio de cultura e tratadas do mesmo modo,
porem, sem o fungo, no germinaram.
Analisando o meio, constatou que o fungo, de-fato, havia digerido
a matria orgnica e, assim, fornecido ao embrio acares assimilveis.
Ficou assim provado que o papel do fungo era o de desdobrar o amido
do meio de cultura em acares, e que, havendo matria orgnica diretamente assimilvel pelo embrio, a presena do fungo desnecessria.
Knudson conseguiu o florescimento de orqudeas em meio assimbitico, 6 anos aps a semeadura.
Na natureza, naturalmente, o papel do fungo semelhante, isto ,
desdobra a matria orgnica do substrato cujos produtos solveis e assimilveis so aproveitados pelo embrio.
AS SEMENTES
As sementes das orqudeas so muito pequenas ; to pequenas
que uma s cpsula, de Cattleya, por exemplo, pode conter mais de meio
milho delas. Devido a esse pequeno tamanho, assemelham-se a um
p muito fino, no interior do fruto. O embrio no interior de um tegumento transparente de tipo indiferenciado, porem as clulas da regio
basal so maiores do que as da apical. Na base encontra-se um delicado
suspensor.
A dificuldade da germinao das sementes de orqudeas pelos
mtodos usuais devida no somente ao seu reduzido tamanho, mas,
principalmente, ao fato de trazerem reservas nutritivas em quantidades
insignificantes.
O poder germinativo das sementes, quando guardadas em ambiente
comum, no se conserva por muito mais de um ano. Com a seguinte

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tcnica, porem, o poder germinativo pode ser preservado por varios anos:
Colhida a cpsula antes de sua deiscncia na planta, posta em envelope,
onde deve ficar at que se abra e a maior parte das sementes saiam do
fruto. Ento, retiram-se as que restarem no interior da cpsula, deixando-as secar ao ar, por vrios dias, embrulhadas em papel de filtro ou em
outro papel sem goma e bem permevel. Depois disto, as sementes so
colocadas em um pequeno tubo de vidro, fechado com tampo de algodo.
Este tubo ento colocado em um dissecador com cloreto de clcio
anhidro, que deve ser conservado dentro de um refrigerador a cerca
de 10C.
Deve-se evitar, tanto quanto possivel, que as sementes fiquem expostas ao ar sem que estejam em um envelope ou sob outra qualquer proteo. Assim se procede para que no acumulem poeira ou esporos
de fungos, que, mais tarde, podero prejudicar o trabalho.
O fruto, logo depois de colhido, deve tambm ser limpo por fora ;
h mesmo quem o flambe.
MEIO PARA A GERMINAO
Empregamos o mesmo meio descrito por Knudson, j citado, e que
consta do seguinte :
1,0 gr
0,25
0,25
0,05
0,5
20,0
15,0
1000 cc,
Este meio aquecido at completa fuso do agar e aps certo resfriamento ; porem, antes de se solidificar, acerta-se o pH para um valor
entre 4 , 4 5,0. Para isto, emprega-se uma soluo diluida de cido
sulfrico ou clordrico, que adicionada aos poucos. Isto feito, distribue-se o meio em frascos de Erlemeyer ou outro que se preste bem de
modo a ficar, em cada um, uma camada de 1,5 a 2 , 0 cm de meio nutritivo. Estes frascos so ento tapados com algodo e aquecidos duas
vezes a 1 0 0 C , durante 15 minutos, com intervalo de 2 4 horas. Aps
o resfriamento, esto prontos para ser usados. .

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Esse processo pareceu-nos melhor que o da esterilizao a 120C,.

porque, estando o pH do meio prximo a 4 , 5 , o agar hidrolizado quando
aquecido a 120C. e no mais se solidifica.
Ao lado dos bales Erlemeyer, preparamos tubos de cultura de
22 x 3,5 cm contendo o mesmo meio. Nesses tubos, os embries se
apresentavam bastante clorticos e as plantinhas no se desenvolviam,
bem. Determinamos ento o pH do meio nos Erlemeyers e nos tubos,,
antes e depois de esterilizados.
Eis os resultados :

pH
antes da
esterilizao

pH
depois da
esterilizao

Diferena

Erlemeyer de vidro "Jena"

4,66

4,58

0,08

Erlemeyer de vidro "lena"

4,66

4,61

0,05

Tubos de vidro ordinrio

4,66

6,53

1,87

Tubos de vidro ordinrio

4,66

5,97

1,31

O vidro desprendia, pois, bases durante a esterilizao e assim elevava demasiadamente o pH. A anlise espetrogrfica do vidro de que
eram feitos os tubos revelou o seguinte (*) : grande quantidade de sdio,
silcio e magnsio; quantidade regular de clcio, alumnio, boro e
chumbo; traos acentuados de mangans e traos de cobre, brio,
ferro., estanho, titnio e arsnio. E possivel que traos dos elementos
altamente txicos contidos no vidro se desprendessem no meio de cultura
e tambm prejudicassem as plantinhas.
SEMEAO OU PLANTIO
Para a esterilizao das sementes, usamos o mtodo de Wilson ( 8 ) ,
do hipoclorito, j usado tambm por Knudson, alis, o nico talvez que
tem sido empregado com sucesso para esse fim. Consta este mtodo
do seguinte : 10 gr de hipoclorito de clcio so misturadas com 140 c c

(*) Esta anlise devemos gentileza do dr. O. Bergstrom Loureno, do Instituto de

Pesquisas Tecnolgicas de So Paulo.

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II

de gua ; agita-se por alguns momentos e iltra-se. Este filtrado um

lquido, rico em cloro, com o qual as sementes devem ser tratadas. Estas
so postas em um tubo de ensaio que dever conter at 3/4 da sua capacidade com aquele lquido filtrado. Fecha-se o tubo muito bem com
uma rolha de borracha e agita-se. Aps 15 minutos de agitao, podese comear a semeao nos irascos. No preciso apressar o trabalho,
uma vez que a permanncia das sementes na soluo esterilizante, mesmo
de vrias horas, no causa mal.
A semeao feita, de preferncia, dentro de uma cmara acptica,
construida de vidro, onde somente os braos do operador teem ingresso
por meio de duas pequenas aberturas tendo cada uma delas uma cortina
de pano em sua frente. Estas cortinas, bem como toda a cmara internamente, devem estar muito bem molhadas com uma soluo de sublimado
corrosivo a 1 % o antes do incio do trabalho. A cmara aqui descrita
a que possumos e que se tem mostrado muito eficaz.
Com. o auxlio de uma ala de platina, as sementes so tiradas do
tubo e espalhadas superfcie do meio nutritivo. Esse fio flambado
cada vez de ser usado. A quantidade de sementes aderidas de uma s
vez volta do fio de platina ou, quando muito, duas pores destas, so
suficientes para cada frasco. Quando so levadas sementes em excesso
a um mesmo frasco, as plantinhas se desenvolvem mal e o seu transplante
muito dificultado.
Os frascos, aps o plantio, recebem, protegendo o tampo de algodo, um pequeno tubo de vidro, de tamanho adequado, invertido sobre
o seu gargalo. Isto necessrio para se evitar o acmulo de poeira no
algodo e para prevenir contaminao.
As contaminaes, quando tardias, nem sempre matam as plantinhas.
Foi-nos possivel aproveitar as plantinhas de vrios frascos contaminados.
O desenvolvimento do embrio e, posteriormente, das plantinhas
varia bastante com o gnero, com o ambiente e, principalmente, com a
temperatura.
Algumas semanas aps, o embrio se toma esfrico, verde, devido
formao de clorofila, e visivel a olho nu. Da epiderme crescem pelos
absorventes. Mais tarde veem-se formar as primeiras folhas e a raiz
primria.
Quando a raiz atinge 3 a 5 mm as plantinhas devem ser transplantadas. Para Cattleya isto se verifica 4 a 6 meses aps a semeao.

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TRANSPLANTE DOS BALES PARA VASOS

Esta a operao mais crtica para a vida das mudinhas. Ambientadas ao meio todo especial dos bales, com atmosfera saturada e sem
nenhuma corrente de ar, e t c , passando a viver em vaso, em substrato
e ambiente bem diverso daquele, as mudinhas reagem, por vezes, mal.
Usamos para o transplante, vasinhos de barro, de forma cnica,
com cerca de 8 cm de dimetro na boca por 8 cm de profundidade.
O tamanho dos vasos, entretanto, no importa. Pode ser outro. Estes
vasos se enchem do seguinte modo : no fundo, vo pequenos cascalhos ;
sobre estes, uma camada de sphagnum grosseiro tomando a maior
parte do vaso, de modo a faltar apenas 1 cm para o seu completo enchimento. Finalmente, vai uma camada de sphagnum muito bem moido(*).
Tanto a primeira como a segunda camada de sphagnum
devem
sofrer ligeira compresso. O sphagnum deve ser molhado antes de
ser colocado nos vasos, pois, do contrrio, a primeira rega ser difcil e
imperfeita.
As plantinhas so retiradas dos bales por meio de um pedao de
arame de grossura adequada, tendo uma ala na extremidade. Fisgase uma plantinha de cada vez, e esta deve ser lavada em gua para se
eliminar o agar aderido. Sobre o sphagnum
no vaso, faz-se um pequeno
orifcio com o arame, colocando-se nele a raiz da plantinha. Chega-se
bem o sphagnum ao seu redor.
Nos vasos, cujas dimenses foram dadas acima, colocam-se mais ou
menos 5 0 plantinhas. Toca, assim, aproximadamente, 1 c m para cada
uma. Os vasinhos so a seguir cobertos com um cristalizador de vidro.
Com o auxlio de calos de madeira, a-fim-de que as plantinhas, paulatinamente, se adaptem ao ambiente da estufa, levantam-se, aos poucos,
os cristalizadores. Ao cabo de 3 0 dias, as plantinhas estaro em ambiente igual ao da estufa.
2

TRANSPLANTES SUCESSIVOS E TRATOS

Nos vasinhos, as plantas permanecem at gue o seu desenvolvimento possa ser comprometido pela falta de espao. No nosso caso,
trabalhando com Cattleya, elas permaneceram pouco mais de 6 meses.
Ento, foram transplantadas para outros vasos maiores, apropriados
para orqudeas, largos, rasos e com orifcios nos lados. As figuras
(*) O operrio que executava este servio preferia moer o sphagnum entre as mos.
Estando bem seco, pode ser reduzido a p com extrema facilidade. Um sphagnum
bem moido, facilita o transplante.

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II

n.s 1 e 2 mostram um desses vasos com as plantas. Aos 2 anos, foram

transplantadas para vasos idnticos, contendo 3 plantinhas cada um.
Estes vasos foram enchidos com pedaos de xaxim tendo uma camada
de sphagnum na superfcie.
Quanto aos tratos culturais, so pequenos. As regas, logo aps
o primeiro transplante, devem ser frequentes, para se conservar o substrato e o ambiente bem midos.
Deve-se, aos poucos, rarear as regas at que estejam as plantas
bem adaptadas aos vasos, quando se faro regas abundantes, seguidas
de um perodo suficientemente longo para que o substrato se torne seco.
Regas contnuas prejudicam muito as raizes pela falta de arejamento.
Tambm favorecem o desenvolvimento de larvas de certas moscas, qua
causam prejuzos enormes, roendo as plantinhas. A gua das regas
deve ser a de chuva. Na falta desta, a dos rios, crregos ou nascentes.
Nunca se deve empregar a gua do abastecimento das cidades, muito
embora no seja clorada. A gua por ns usada foi a de chuva, captada
em um reservatrio especial.
SUMMARY
Knudson's asymbiotic method and medium for germination of orchid seeds were used
with success.
Heating this medium at 100C twice for 15 minutes with an interval of 2 4 hours was
found to be better than to sterilize just once at 120C. This procedure avoids the hydrolysis of the agar.
The poor quality of the glass from which some test tubes were made raised the pH
tabove 5.9 and this was apparently the cause of poor developmen of the seedlings.
Also some toxic elements given off by the glass diffusing thru the medium might havo
impaired somewhat the results obtained in the experiment.
L I T E R A T U R A CITADA
1.

B e r n a r d , N. L'evolution dans la symbiose. L'Orchides et leur champignons com

mensaux. Ann. Sci. Nat. Bot. 9:1-96, 1 9 0 9 .
2. Burgeff, H. Em Die Wurzelpilze der Orchideen, ihre Kultur und ihr Leben in der
Pflanze, Jena, 1 9 0 9 .
3. Hoehne, F . C. Em Album de Orquidceas Brasileiras e o Orquidrio do Estado
de So Paulo. Publ. Secr. Agr. Estado de So Paulo, pg. 1-264, il., 1 9 3 0 .
4. K n u d s o n , L . Nonsymbiotic germination of orchid seeds. Bot. Gaz. 73:1-25, 1 9 2 2 .
5. K n u d s o n , L . Further observations on nonsymbiotic germination of orchid seeds.
Botl. Gaz. 77:212-219, 1924.
6.
K n u d s o n , L . Physiological study of the symbiotic germination o orchid seeds.
Bot. Gaz. 79:345-379, 1 9 2 5 .
7. Knudson, L. Flower production by orchid grown non-symbiotically, Bot. Gaz
89; 192-299; Ilustr. 1930.
8. W h i t e , E . A. Em American Orchid Culture. 2. edio, pg. 1-256, il., New York,
De La Mare Co., 1 9 3 9 .
9.
Wilson, J . K . Calcium hypochlorite as a seed sterilizer. Amer. Jour. Bot.
2:420-427, 1 9 1 5 .

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Fig. 2

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