DEPTO. DE CS.

BIOLGICAS Y QUMICAS
-------------------------------------------------------------------CURSO : LABORATORIO HISTOLOGIA HUMANA
CDIGO : DBIO1035

MANUAL DE TRABAJOS PRCTICOS

CAPITULO I :

HISTOLOGA BSICA

ESTA GUIA PERTENECE A ...........................................................................................

PROLOGO

El Manual de Trabajos Prcticos tiene por finalidad complementar el

curso terico de Histologa, con la realizacin de actividades experimentales que
han sido seleccionadas por los docentes.
Dicho manual constituye un material de apoyo para los alumnos de las
carreras de la Salud de la USS, dado que est complementado con una serie de
ilustraciones que han sido realizadas, adaptadas, modificadas y/o extradas por
la propia autora, desde distintos textos afines. Estas tienen por objetivo
entregar al alumno imgenes que clarifiquen ciertos aspectos morfolgicos de
estructuras, eventos o fenmenos biolgicos.
Este manual, dada su extensin se ha subdividido en dos tomos
correspondientes a los dos grandes captulos que abarca este curso:
I.
II.

Tomo : Histologa Bsica

Tomo : Histologa de Sistemas

Finalmente, es
importante destacar que el uso de este manual es
imprescindible durante el desarrollo del laboratorio y debe ser completado de
acuerdo a la realizacin de las actividades experimentales.

BIBLIOGRAFIA
1. CORMACK, D., Histologa de Ham. 9 Edit. Mxico 1990
2. LEESON, T., Texto Atlas de Histologa, Edit. Mc Graw - Hill Mxico 1992
3. BELIMANN, H., Histologa Veterinaria. Zaragoza 1980
4. BACKA W., Atlas Color de Histologa Edit.. Interamericana Bs.Aires ltima edicin
5. GARTNER, L y HIATT, J., Texto Atlas de Histologa, Edit. Mc Graw - Hill Mxico 2003
6. JUNQUEIRA L.C. y CORNEIRO J., Histologa Bsica, ltima Edit.Salvat Editores S.A. Barcelona Espaa
7. DI FIORE M., Diagnstico Histolgico y Atlas de Histologa Normal Edit., El Ateneo. Bs.
Aires, ltima edicin
8. FAWCETT D.W. , Tratado de Histologa, Edit. Interamericana Bs. Aires, ltima edicin
9. KRSTIC, R. Los tejidos del hombre y los animales, Edit Interamericana Bs. Aires, ltima
Edicin
10. KRSTIC, R. Human microscopic anatomy: an atlas for students of medicine and biology.
Berlin .

DIRECCIONES DE UTILIDAD EN INTERNET

www.vh.org/Providers/Textbooks/MicroscopicAnatomy/MicroscopicAnatomy.html
http://www-sci.lib.uci.edu/HSG/MedicalAnatomy.html
http://www.meddean.luc.edu
http://www.meddean.luc.edu/lumen/MedEd/Histo/frames/histo_frames.html
www.med.uiuc.edu/histo
www.icbl.ufg.br/histologia/incapa.htm
http://www.histol.chuvashia.com/atlas-en/content-en.htm
www.kumc.edu/instruction/medicine/anatomy/histoweb
http://escuela.med.puc.cl

TRABAJO PRACTICO N1

TECNICAS HISTOLGICAS
INTRODUCCIN
La Histologa se define literalmente como la ciencia que estudia los
tejidos, histricamente surge como una Anatoma Microscpica y es su principal
objetivo el anlisis de cada una de las diversas asociaciones celulares, sus
caractersticas, funciones y localizacin.
Biolgicamente un tejido se define como una agrupacin de clulas que son
morfolgicamente semejantes, derivan de una misma hoja embrionaria (ecto,
endo o mesoderma) y cumplen una funcin similar.
Dentro de sus propiedades se encuentran:

La capacidad de crecimiento y/o regeneracin

La capacidad de cultivo
La especificidad

De acuerdo con su forma y funcin todos los tejidos se subdividen en 4

familias:
1.
2.
3.
4.

TEJIDO EPITELIAL
TEJIDO DE SOSTEN O CON SUSTANCIA INTERCELULAR
TEJIDO MUSCULAR
TEJIDO NERVIOSO

Para el estudio de los tejidos se requiere de elaboracin de preparaciones

histolgicas, las cuales han sido obtenidas a travs de un complejo procedimiento
que involucra una serie de etapas consecutivas.
Todas las clulas, salvo aquellas en que su citoplasma posee como
inclusiones sustancias o partculas coloreadas de origen endgeno (caroteno,
melanina, licopeno) o exgeno (carbn), son incoloras. Por este motivo, para poder
ser estudiadas con el microscopio ptico, ellas deben ser coloreadas o teidas.
Para esto, se aprovecha la afinidad qumica de los componentes estructurales de
la clula o los existentes en su citoplasma, con sustancias que poseen un color
caracterstico (colorantes) el que ser transmitido a la estructura en estudio,
cuando la reaccin qumica entre ambos se produzca.
Cuando se trata de estudiar clulas aisladas o disociadas, o bien tejidos
muy delgados, como es el caso de las pleuras, peritoneo, pericardio, meninges y
otras, el proceso de coloracin no tiene problemas. El problema se produce
cuando se quiere estudiar rganos o tejidos voluminosos, en donde por la
densidad celular, tanto la coloracin como la observacin de ellos ofrece gran
dificultad, sobre todo si se piensa, que la observacin al microscopio ptico se
basa en que lo observado debe ser transparente para que pueda ser atravesado
por el haz de luz, proveniente de la fuente luminosa.
La nica manera de poder estudiar los tejidos formados por una gran masa
de clulas, es cortarlos de un grosor tal (7 a 10 m), que queden transparentes,
logrndose as una excelente y clara observacin.
Como se dijo anteriormente, no slo basta que el tejido sea delgado, ya
que las clulas por ser incoloras, no podrn ser puestas en evidencia con claridad
basndose solamente en la diferente refringencia de sus estructuras. Esta
dificultad se elimina, tiendo las clulas con sustancias qumicas especficas.
Para lograr cortes muy delgados, los que posteriormente sern teidos, se
debe seguir todo un proceso. Este incluye los siguientes pasos:
1.- Fijacin y lavado del tejido
2.- Deshidratacin del tejido fijado
3.- Inclusin del tejido ya deshidratado
4.- Pegado de los cortes
5.- Desparafinaje e hidratacin de los cortes
6.- Coloracin
7.- Montaje definitivo

1. Fijacin y lavado del tejido

Al realizar el estudio de una clula o tejido, lo ms importante es que sus
estructuras se presenten ojal sin alteracin, es decir que stas estn y se
conserven lo ms prximo a lo real en que ellos estaban en la clula en el
momento de su muerte.

Normalmente esto es difcil ya que como consecuencia de la muerte

celular, las enzimas de las vacuolas intracitoplasmticas (lisosomas) se liberan y
esto provoca la autodestruccin o autolisis celular. Considerando este hecho, se
utiliza la fijacin del tejido o clula, para esto se usan compuestos qumicos
solos o asociados (soluciones o medios fijadores), los que tienen la particularidad
de penetrar rpidamente la membrana plasmtica y provocar, ya sea la
coagulacin de las protenas citoplasmticas o formar compuestos proteicos
complejos que se mantienen en la clula y por lo tanto ella dar una imagen muy
cercana a como estaba en el momento en que se sac del cuerpo del individuo.

2. Deshidratacin del tejido fijado

No debe olvidarse que para poder observar un tejido, l debe cortarse en
trozos tan delgados que dejen pasar la luz y por lo tanto las estructuras a
observar pueden verse por transparencia. La nica posibilidad de hacer cortes de
entre 1 a 10 m es utilizando un instrumento llamado micrtomo y la pieza a
cortar debe ser de una dureza tal, que no permita que sta vibre. Esto se alcanza
embebiendo el tejido en sustancias que le dan una consistencia caracterstica.
Entre estas sustancias se pueden mencionar: los plsticos y la parafina slida.
Como estas sustancias son muy apolares, y por lo tanto, insolubles en agua, la
nica posibilidad de que ellas penetren el tejido es eliminando el agua que stos
contienen. Dicho objetivo se logra, pasando el trozo de tejido por una batera
ascendente de alcoholes, es decir, desde un alcohol que tenga mucho agua hasta
uno que no contenga nada.
El alcohol (etlico o butlico) es un enrgico deshidratante, saca el agua de
donde ella est presente y como el tejido ya est fijado, el paso por estos
alcoholes no lo altera.
El tejido fijado no debe pasar directamente a alcoholes de 100 porque la
deshidratacin sera muy enrgica apareciendo en el tejido espacios, en lugares
donde ellos no existan en la realidad; si esto ocurre se habla de un artefacto
de tcnica.
Como la sustancia que da mayor consistencia a un tejido (parafina slida)
es poco soluble, se debe utilizar una sustancia qumica que intervenga como
eslabn entre el alcohol y la parafina, es decir, que sea muy soluble en ambos
compuestos. Entre estas sustancias podemos mencionar: el xilol, el benceno, el
tolueno. El paso del tejido ya deshidratado, por estos compuestos se llama
diafanizado. En este momento el tejido est totalmente deshidratado y
comnmente se observa que l ha tomado una mayor consistencia, hacindose
quebradizo.

3. Inclusin del tejido

El tejido ya deshidratado y diafanizado debe ser endurecido para poder
ser cortado a grosores de 1 a 10m. Entre las sustancias utilizadas para
endurecer (incluir) el tejido se pueden mencionar: resinas naturales o sintticas
y parafina slida.

Para esto se sumerge el tejido en este compuesto fundido y se mantiene

en l por varias horas, de modo que se de tiempo suficiente para que l se
introduzca en el tejido, atraviese la membrana celular y forme un todo con la
clula. Se obtiene as un molde que contiene una masa slida formada por el
tejido y la sustancia endurecedora que lo ha penetrado totalmente.
4. Corte del tejido
En esta etapa se hace uso de un aparato (micrtomo) formado por una
cuchilla fija por la cual pasa el tejido endurecido cada vez que se gira una
manivela. Con cada vuelta de la manivela el tejido se acerca a la cuchilla un
nmero dado de micrones para as obtener un corte del grosor deseado.
El hecho de trabajar con cortes en dos dimensiones genera dificultades en
el estudio del tejido. Dado que se desconocern parmetros tales como forma,
tamao o volumen de la muestra estudiada. Por lo tanto se hace necesaria la
interpretacin de los cortes. Esto implica tener que imaginar la estructura
tridimensional de los rganos estudiados bidimensionalmente.
Analice los esquemas que a continuacin se presentan.

ESQUEMAS QUE ILUSTRAN DIFERENTES PROBLEMAS

EN LA IDENTIFICACION DE CORTES DE ACUERDO CON
LOS PLANOS DE SECCIONAMIENTO

1.- Diferentes planos de corte de un

huevo

2.- Diferentes planos de corte de una

naranja.

3.- Diferentes planos de corte de un

cable con hilos aislados

4.- Diferentes planos de corte

de un tubo curvo.

5.- El dibujo de la parte inferior muestra cmo se visualizan en un corte un grupo

de clulas de dimensiones regulares.

6.- Diferentes planos de corte

de un tubo recto

5. Pegado de los cortes

Para poder colorear y observar los tejidos ya cortados, stos deben ser
pegados en portaobjetos muy limpios a travs de sustancias adhesivas (solucin
acuosa de albmina) y posteriormente deben ser estirados y secados.

6. Desparafinaje e hidratacin de los cortes

A pesar de que los cortes de tejido son muy delgados, no es posible
distinguir las estructuras celulares ya que el tejido y las clulas estn embebidos
en parafina, lo que dificulta cualquier observacin. Adems, como se mencion
anteriormente, las clulas son transparentes, de modo que aunque se elimine la
parafina las estructuras internas no podrn ponerse en evidencia salvo que ellas
sean previamente coloreadas. Basndose en estos hechos se debe continuar

10

procesando el tejido ya pegado para eliminar la parafina que lo embebe lo cual se

realiza con xilol y luego se rehidrata el tejido ya que los colorantes que se usan
son solubles en agua. Para realizar esto ltimo se hace uso de una batera de
alcoholes de graduacin descendente (desde un alcohol que no contenga agua,
hasta uno que tenga mucha agua y finalmente poder enjuagar la muestra slo en
agua.
7. Coloracin o Tincin
La coloracin de los tejidos o clulas se basa en la propiedad que tienen
algunas soluciones coloreadas (colorantes o tinturas) de asociarse selectivamente
a ciertas estructuras celulares, tindolas. Se las utiliza en histologa para que
los detalles estructurales se hagan evidentes, fcilmente visibles y resalten en
medio del resto de las estructuras que permanecen incoloras o que sern teidas
posteriormente de un color diferente. De este modo, el estudio de un tejido o
clulas se realiza mediante el anlisis cromtico de las diferentes estructuras
que conforman la preparacin. Por lo tanto, para que un colorante resulte til en
histologa, es indispensable que tia difusamente y que no tia con igual
intensidad todas las estructuras celulares.
El colorante deber fijarse con determinada especificidad sobre
determinados elementos del citoplasma o del ncleo. Las estructuras coloreadas
sern aquellas que tienen la propiedad de absorber de manera selectiva los rayos
luminosos de una determinada longitud de onda y que transmitan por
transparencia o difusin las radiaciones complementarias no absorbidas. En
histologa se considera que una estructura se ha teido cuando el tejido no se
destie con un lavado efectuado en el mismo solvente empleado para preparar la
solucin de ese colorante. Se admite y se explica este hecho porque en la tincin
el colorante se combina ntimamente con la sustancia coloreable. Esto se debe a
la presencia de agrupaciones moleculares bsicas o cidas de los colorantes
originando sales insolubles.
Ehrlich, divide los colorantes en cidos, bsicos y neutros.
a.- Los colorantes cidos son sales cuya base es incolora y el cido es coloreado.
As por ejemplo, en la eosina o eosinato de sodio, la propiedad colorante es
debida al cido eosnico y no a la base, sodio, que es incolora.
b.- Los colorantes bsicos poseen la base coloreada y el cido incoloro. Por
ejemplo, el azul de metileno, que es un clorhidrato de azul de metileno, el poder
colorante es debido al compuesto bsico: azul de metileno (tetrametiltionina) y
no al cido clorhdrico que es incoloro.
c.- en los colorantes neutros, tanto el cido como la base que intervienen son
coloreados. Por ejemplo, el eosinato de azul de metileno.
Los colorantes cidos tienen una afinidad especial por el citoplasma por lo
que se les llama tambin colorantes citoplasmticos, ejemplo: eosina, floxina,
eritrocina, etc. y a las estructuras que se tien se les llama estructuras
acidfilas

11

Los colorantes bsicos, en cambio, se fijan sobre la cromatina nuclear,

llamndoseles por lo tanto, colorantes nucleares y a las estructuras que se
tien con estos colorantes se les llama estructuras basfilas, como por ejemplo
de estos colorantes se pueden mencionar: la hematoxilina, el azul de metileno, el
azul de toluidina, etc.
Despus de la coloracin se procede a realizar una deshidratacin con una
batera de alcoholes ascendente y un diafanizado con el fin de proceder al
montaje definitivo.

8. Montaje definitivo
Para dejar una preparacin permanente y definitiva, se coloca sobre el
tejido ya diafanizado, una gota de blsamo de Canad o de Permount (sustancia
adhesiva) y se cubre con un cubreobjeto muy limpio y se deja secar.

OBJETIVOS
1.- Describir una preparacin histolgica de acuerdo a parmetros definidos.
2.- Identificar diferentes tipos de tinciones histolgicas.
3.- Identificar cmo se colorean las estructuras celulares y/o tejidos con
distintas tinciones.
4.- Valorar el uso de las tinciones para el anlisis y diagnstico histolgico.
5.- Identificar planos de corte
6.- Interpretar diferentes tipos de corte

ACTIVIDADES
1. TINCIONES
A. Observe atentamente el set de imgenes que se le entregar.
B. Reconozca en cada uno de ellos la tcnica utilizada. Fundamente en base a los
colores observados.
C. Distinga el tipo de corte
D. Identifique el aumento utilizado.

12

I.

1. Tcnica

: ..

Fundamentacin .
...
2. Corte

: . Aumento ..

II.

1. Tcnica

: ..

Fundamentacin ...
....
2.

Corte

: . Aumento ..

13

III.

1.

Tcnica

: ..

Fundamentacin ...
....
2.

Corte

: . Aumento ..

IV.

1.

Tcnica

: ..

Fundamentacin ...
....
2.

Corte

: Aumento ..

14

V.

1.

Tcnica

: ..

Fundamentacin ...
....
2.

Corte

: Aumento ..

VI.

1.

Tcnica

: ..

Fundamentacin ...
......
2.

Corte

: .... Aumento ..

15

2. CORTE
A. Realice en plasticina un esquema tridimensional de los siguientes tipos
celulares :

Fibra muscular estriada esqueltica

Fibra muscular lisa
Enterocito
Hepatocito
Neurona motora
Neurona ganglionar

NOTA: Para realizar el esquema debe conocer previamente las formas de dichas
clulas
B.
C.
D.
E.

Represente el citoplasma y ncleo en colores diferentes

Utilizando un cuchillo, corte en 3 planos diferentes.
Dibuje la clula y sus planos de corte
Dibuje la imagen bidimensional de los planos de corte obtenidos

1. Fibra muscular estriada esqueltica

Esquema tridimensional y planos de cortes

Corte bidimensional

1.

2.

3.

2. Fibras muscular lisa

Esquema tridimensional y planos de cortes

Corte bidimensional

1.

2.

3.

16

3. Enterocito
Esquema tridimensional y planos de cortes

Corte bidimensional

1.

2.

3.
4. Hepatocito
Esquema tridimensional y planos de cortes

Corte bidimensional

1.

2.

3.
5. Neurona motora
Esquema tridimensional y planos de cortes

Corte bidimensional

1.

2.

3.
6. Neurona ganglionar
Esquema tridimensional y planos de cortes

Corte bidimensional

1.

2.