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FACULTAD DE CIENCIAS
GUA LABORATORIO BIOLOGA DE ORGANISMOS
PRCTICA 3
REINOS EUBACTERIA y ARCHAEBACTERIA
Dominio
Bacteria
Dominio
Arquea
Dominio
Eukarya
Demostrativa A
Demostrativa B
Demostrativa C
Organizacin:
Tipo:
Organizacin:
Tipo:
Organizacin:
Tipo:
En las bacterias GRAM (+), la afinidad hacia el colorante azul violeta est dada por la
presencia de una capa gruesa de peptidoglicano en la pared celular bacteriana; en
contraste, la ausencia de tincin de las bacterias GRAM (-) con el azul violeta, es
causada por la presencia de una capa de peptidoglicano ms delgada en la pared
celular bacteriana (que no es capaz de retener el colorante despus de los lavados).
Para determinar con precisin si las bacterias que se estn estudiando son GRAM (-)
se utiliza una coloracin secundaria aplicando fucsina para generar un contraste y as
poder verlas de color rojo-rosado.
A continuacin ustedes deducirn a partir de tincin de Gram, si las cepas bacterianas
1 y 2 son Gram (+) y/o Gram (-). En seguida se muestran los pasos que deben seguir
para realizar la tincin de Gram:
Procedimiento en Laboratorio Tincin de GRAM
1. Limpie la zona de trabajo para evitar contaminar los medios con agentes
biolgicos externos.
2. Encienda el mechero (IMPORTANTE: primero abra la llave del gas y luego gire
en contra de las manecillas del reloj la llave de paso del gas que est en la base
del mechero. PRECAUCIN: ABRIR PARCIALENTE).
3. Abra la caja de petri cerca del mechero.
4. Exponga la punta de un asa redonda a la llama del mechero. Antes de tomar la
muestra, debe enterrar la punta del asa en el medio de cultivo cerca a las
paredes de la caja para enfriarla. Luego tome una muestra de UNA COLONIA
del cultivo suministrado con el asa.
5. En la superficie de una lmina ponga una gota de agua. Frote esta seccin de la
lmina con la punta del asa para distribuir la muestra de clulas bacterianas en
la parte central.
6. Exponga por un breve periodo de tiempo la lmina al fuego del mechero, varias
veces hasta que la muestra se seque. Utilice unas pinzas de madera para
sostener la lmina.
7. Deje enfriar el preparado por 1 minuto y a continuacin agregue azul violeta.
8. Un minuto despus lave con agua la lmina y adicione lugol a la muestra por 2
minutos.
9. Lave con alcohol-acetona la muestra por 30 segundos.
10. Agregue fucsina y deje actuar durante 15 segundos.
GRAM +
GRAM -
Cepa
1
Cepa
2
b. Dibuje lo observado y comntelo. Adems dibuje un esquema de la membrana y
pared en cada caso:
Muestra
Muestra
Esquema
Esquema
GRAM NEGATIVA
GRAM POSITIVA
ANTIBIOGRAMAS
Un antibiograma es una prueba microbiolgica que se utiliza para estudiar la
capacidad que tiene una sustancia para inhibir el crecimiento de bacterias sembradas
en un medio conocido. Esta tcnica es informativa, ya que a partir de la presencia o
ausencia de anillos de inhibicin y las diferencias de longitud del radio entre los
controles y el compuesto evaluado, permite la cuantificacin del efecto inhibitorio que
posiblemente tendr la sustancia cuando se la agreguemos a la bacteria.
En esta parte, ustedes probarn la capacidad de inhibicin de cuatro sustancias (agua,
alcohol antisptico, hipoclorito y solucin jabn-agua) sobre dos cepas bacterianas,
utilizando como medio de cultivo agar Mller-Hinton. A continuacin se detallan los
pasos
que
deben
seguir
para
realizar
esta
actividad:
Hiptesis nula:
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Variable independiente:
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Variable dependiente:
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Anabaena
Segn los preparados observados. Cules son las formas celulares bsicas de las
cianobacterias?
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Consulte sobre la teora simbitica propuesta por Lynn Margulis. Con base en dicha
teora, Cul sera el origen de las mitocondrias? Cul sera el origen de los
cloroplastos?
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