Actividad de autoestudio.

Observacin de microorganismos tincin de Gram.

1. Que es una tincin
La tincin es el proceso por el cual las molculas de un colorante se adsorben
a una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las clulas de
los microorganismos poder realizar la observacin en microscopio ptico. Dado
que las bacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el
cual se encuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algn
tratamiento previo. De acuerdo a la reaccin que ocurre, existen diferentes
tipos de tincin.
2. Clasifique los tipos de tinciones y porque se clasifican de esa
manera.
Tincin simple:
Tincin diferencial:
Tincin especifica:
En este tipo de tincin el En este tipo de tincin el Este tipo de tincin se
colorante a utilizar solo colorante utilizado pone utiliza
va

morfologa

denotar

para

la de manifiesto diferencias estructura

celular: entre

tamao, arreglo y forma.

identificar
celulares

clulas especficas. Un ejemplo

bacterianas

entre d este tipo de tincin es

En este procedimiento partes de una misma la tincin selectiva de

se

utiliza

solo

un clula.

Separa

los esporas,

colorante. Puede ser de microorganismos

manera directa: tie a la observados de acuerdo
bacteria. Indirecta: tie a sus caractersticas.
el fondo no a la bacteria.
Se utiliza ms de un
tinte o bien ciertos
reactivos
complementarios para la
tincin.

capsula.

flagelos

3. Para que se utilizan cada una de las tcnicas mencionadas.

Los diferentes tipos de tinciones tiene un objetivo especifico, el uso de cada
una de ellas nos revelan datos que importantes de la estructura celular
bacteriana.
Tincin simple: solo se denota la morfologa celular: la forma, tamao,
agrupacin. En las tinciones simples se usa un nico colorante de carcter
bsico. Todas las clulas de la preparacin quedan teidas y se observan del
mismo color. Se realiza la fijacin, por calor, de la muestra al portaobjetos. Se
aade el colorante y se deja actuar el tiempo necesario para que se absorba.
Posteriormente se retira el exceso de colorante y la preparacin est lista para
ser observada.
Tincin diferencial: separa los microorganismos de acuerdo a sus
caractersticas morfolgicas. Las tinciones diferenciales se utilizan para
distinguir entre tipos de microorganismos. Se basan en el uso de dos
colorantes. Se realiza una tincin primaria, con la misma tcnica de la tincin
simple y posteriormente una tincin de contraste para teir las clulas que no
se hayan teido previamente. La tinciones diferenciales ms importantes son la
tincin de Gram y la tincin de cido-Alcohol Resistencia

Tincin especfica: es utilizada para la tincin especifica de elementos

celulares objetivos. Las tinciones especficas revelan estructuras celulares. Se
pueden teir selectivamente las esporas, los flagelos o las cpsulas.

4. Mencione los dos primeros pasos de la tincin a utilizarse en el

laboratorio y qu importancia tienen los resultados.
La tincin que se va a realizar en el laboratorio de microbiologa es la tincin de
Gram:Las dos primeros pasos a seguir son los siguientes:
Agregarle el colorante bsico durante 1 minuto y luego lavarlo con agua: el cual
tiene afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana.

Agregar el mordiente o lugol: el cual sirve como mordiente e impide la salida

del cristal violeta por la formacin de un complejo cristal violeta- yodo que
satura los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana.
Estos dos primeros pasos son importantes pues son los que harn la diferencia
en el resultado. Se diferenciaran las microorganismo en bacterias Gram
positivas y Gram negativas esto debido a las diferencias en la estructura celular
de las misma. El cristal violeta no saldr de las clulas Gram negativas al
momento de ser aplicado el alcohol acetona en cambio las clulas Gram
positivas s, es por esto que es necesario colorearlas con a safranina.
5. Mencione el orden de utilizacin de los reactivos de las tinciones a
utilizar y los tiempos.
En laboratorio la tincin que vamos a utilizar es la tincin de Gram, esta es
una tincin muy utilizada en los laboratorios de microbiologa por su
sencillez y economa y fue desarrollada por el cientfico dans Hans Cristian
Gram en el ao 1984. Es definida como una tincin diferencial, ya que
utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos:
bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas.
Los principios de la tincin de Gram estn basados en las caractersticas de
la pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades
determinantes a cada microorganismo. El orden de los reactivos es el
siguiente:
Pasos:
Colorante

Mtodos:
Violeta cristal.

Tiempo:
Se tie por 1 min.

bsico:
Mordiente.

lugol

Ahora se lava con agua.

1 a 2 min. Se lava con

Decolorante:

Alcohol/acetona

agua.
15 seg,
decolora

el
de

violeta
las

se

clulas

Gram negativas. Se lava

Colorante
contraste:

Safranina o fusina

con agua.
De 1 a 2 min. Lavar con
agua y secar.

Estos so otros que encontr ms sencillos.

Cubrir frotis con tinte cristal violeta (1 minuto).
2. Enjuague con agua destilada para remover el exceso de tinte.
3. Cubrir frotis con Yodo (1 minuto).
4. Enjuague con agua destilada.
5. Enjuague la laminilla con alcohol etlico 95% (no exceder los 30 seg).
6. Enjuague la laminilla con agua destilada.
7. Cubrir frotis con tinte safranina (1 minuto).
8. Enjuague con agua destilada para remover el exceso de tinte.
9. Secar laminillas con papel bibulous para remover el exceso de agua
( Creo que solo es la de grama pero por si las moscas tambin aadir
esta.)
Tincin acido resistente:
Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos
grasos(cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que
les confieren la propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido,
despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cidoalcohol resistente.
El frotis se tie durante unos 5 min con Fucsina fenicada aplicando calor
suave. Lavar con agua. Decolorar con alcohol etlico 95% con un 3% de ClH
concentrado. Lavar y teir durante 30-60 seg con Azul de Metileno (color de
contraste). Lavar y secar.
6. Que es un colorante y que caractersticas tienen.
Un colorante se define como una sustancia capaz de dar color a clulas,
tejidos, Fibras, etctera. De acuerdo con su origen, se pueden dividir en:

colorantes naturales, los cuales son extrados de plantas o animales, y

colorantes artificiales, que

son

aquellos de

minerales procesados y

manipulados en el laboratorio.
Qumicamente, el colorante est constituido de un componente cromforo y un
auxcromo. El cromforo es todo grupo aislado, covalente e insaturado, que
tiene una absorcin caracterstica en la regin ultra- violeta o visible; dicho de
otra forma, es la capacidad que tiene la molcula para que sus electrones
absorban energa o luz visible, se exciten y emitan diversos colores de acuerdo
con la longitud de emitida como resultado del cambio en el nivel energtico.
Cabe mencionar que esta longitud de onda corresponde al rango de espectro
visible. .Los auxcromos son grupos funcionales o radicales que constituyen
una molcula y poseen carga parcial positiva; tienen la funcin de intensificar la
formacin de color mediante la accin de grupos de tomos no saturados; su
funcin es desplazar a los cromforos hacia longitudes de ondas largas para
aumentar la intensidad.
Es de esta manera que estn estructurados que los colorantes adquieren las
siguientes funciones:

Permiten hacer visibles los objetos transparentes y microscpicos.

Revelan su forma y su tamao.
Muestran la presencia de estructuras internas y externas.
Producen reacciones qumicas especficas.

7. por qu los colorantes tienen la capacidad de teir una muestra

Capacidad de teir:
Los colorantes suelen ser molculas orgnicas que presentan anillos
aromticos y que absorben la luz visible por efecto de los electrones asociados
a combinaciones de tomos llamados Cromforos.

8. Que le confiere a los colorantes la capacidad de unirse a los tejidos a

las clulas
Para que el colorante pueda teir un tejido ha de ser capaz de unirse a las
estructuras celulares. El elemento qumico que le confiere esta capacidad se
denomina grupo Auxocromo.

9. Clasifique los colorantes por origen, por grupo o por incorporacin.

De acuerdo con su origen, se pueden dividir en: colorantes Naturales,
los cuales son extrados de plantas o animales, y colorantes artificiales,
que son aquellos de minerales procesados y manipulados en el
laboratorio.
Segn los Grupos Auxocrmos y Apetencia Tisular.
Colorantes cidos: como por ejemplo la eosina, colorante cargado en
forma negativa, se une a componentes celulares cargados
positivamente. Estos componentes cargados positivamente se
denominan acidfilos, porque tienen afinidad por los colorantes cidos.
Por ejemplo, estos colorantes se unen a grupos aminos de las protenas.
Estas protenas pueden pertenecer al citoesqueleto de la clula o
hallarse en la matriz extracelular. Debido al elevado contenido de
protenas del citoplasma la eosina es un excelente colorante
citoplasmtico. La eosina se une tambin a las membranas plasmticas,
sin embargo, se desconoce la naturaleza qumica de esta unin. Las
clulas que presentan un gran desarrollo de membranas (muchas
mitocondrias, mucho retculo endoplasmtico liso, etc.) son sumamente
acidfilas, o sea, se tien intensamente con la eosina.
Colorantes bsicos: como por ejemplo el azul de metileno, colorante
cargado positivamente, se une a componentes celulares cargados
negativamente. Estos componentes cargados negativamente se
denominan basfilos, porque tienen afinidad por los colorantes bsicos.
Por ejemplo, estos colorantes se unen al ncleo y ciertas regiones del
citoplasma.
Como caso particular, la hematoxilina no tiene carga, para teir un tejido
se la une a un mordiente que junto a la hematoxilina forman una laca. La
laca es bsica y por lo tanto se une a cargas negativas de la clula o
matriz extracelular.
Colorantes neutros: son colorantes en los que la porcin cida y la
bsica colorean. Tien las partes bsicas de una clula de un color y las
partes cidas de otro. Tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro.
Ej. el eosinato de azul de metileno.
Colorantes indiferentes: tien aquellas estructuras o sustancias que
los disuelven ms fcilmente que el lquido en que estn preparados. Un
ejemplo es el colorante sudan, un colorante de lpidos.

Segn el grupo cromforo

Colorantes nitrados
Colorantes azoicos
Colorantes quinoides
Colorantes derivados del dibenzopirano
Ptalocianinas

Segn su incorporacin:
Colorantes vitales: aquellos q son captados nicamente por celulas vivas.
Colorantes de exclusin: Solo son incorporados por celulas muertas presentes
en cultivo. Se basa en que la membrana de las celulas muertas no es capaz de
funcionar como barrera de entrada para ese colorante.

10. Como se unen los colorantes a los sustratos o muestras

MECANISMOS DE UNIN Tincin-Sustrato
Relaciones electrostticas Acido-Base
Enlaces coordinados, mordientes y quelantes: Aumentan la reactividad
del tejido estableciendo una interaccin tejido colorante.
Enlaces covalentes Isiotiocianatos - Sustrato
Puentes de hidrgeno Colorante-sustrato en soluciones no acuosas
Interacciones hidrfobas en la disolucin diferencial: coloraciones de
lpidos Fuerzas de Van der Waals
Impregnaciones El colorante forma agregados metlicos insolubles que
quedan retenidos en el tejido gracias a la malla molecular creada en el
proceso de fijacin.
11. Clasifique los colorantes de las tinciones de la prctica
12. Como est formado el lugol para Gram y cul es la funcin de sus
componentes

El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI

(yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales estn presente para
solubilizar el yodo, y actan de mordiente, haciendo que el cristal violeta
se fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana. El I2
entra en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa
con el cristal violeta.
El mordiente es cualquier sustancia que forma compuestos insolubles
con colorantes y determina su fijacin en las bacterias.
13. Cmo se ponen de manifiesto las diferentes bacterias en la tincin
de Gram?
Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana, como
para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana,
considerndose bacterias gram positivas a las que se visualizan de color
morado, y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o
grosella.
14. Factores que alteran los resultados de las tinciones
1. Edad de la bacteria.
2. Errores del operador.
3. Uso de antibiticos
15. Qu importancia tiene la tincin de gran en la taxonoma bacteriana
Una tcnica de coloracin y la ms conocida es la tincin de Gram. Sobre la
base de la tincin de gran, las bacterias se clasifican en dos grupos: gram
positivos y gram negativos.
Las bacterias Gram positiva y Gram negativas tien de forma distinta debido a
las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La pared
de la clula bacteriana sirve para definir su tamao y su forma al organismo
as como para prevenir la lisis osmtica.
16. Para explicar el mecanismo de la tincin de gram se han propuesto
varias hiptesis fundadas en la naturaleza qumica de las paredes
celulares de los microorganismos. POR SUBGRUPO DE SEMINARIO

REALICEN EN CARTULINA O PAPELOGRAFO LA PARED CELULAR DE

BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS Y ALCOHOL ACIDO
RESISTENTE
Descripcin de la tincin de GRAM:
Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien, primero con una
solucin de cristal violeta (otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y son
lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las
clulas, tanto las grampositivas como las gramnegativas, estn teidas de azul.
El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de yodo-yoduro potsico.
El ingrediente activo es aqu el I2; el KI simplemente hace soluble el I2 en
agua. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el
cristal

violeta.

De

nuevo

tanto

las

clulas

grampositivas

como

las

gramnegativas se encuentran en la misma situacin.

Se lleva a cabo despus la decoloracin, usando una mezcla de alcoholacetona, sustancias en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos
organismos

(grampositivos)

no

se

decoloran,

mientras

que

otros

(gramnegativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esos dos tipos de

clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin; esta resistencia se
debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias gram-negativas,
la mezcla de alcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve la membrana
exterior de la pared de la clula (y tambin puede daar la membrana
citoplsmica a la que se une peptidoglicano). La delgada capa de
peptidoglicano es incapaz de retener el de complejo cristal violeta-yodo y la
clula se decolora. Las clulas grampositivas, a causa de sus paredes
celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son
permeables al disolvente, provocando que el de complejo cristal violeta-yodo
quede atrapado dentro de la pared celular. Despus de la decoloracin las
clulas grampositivas son todava azules, pero las gramnegativas son
incoloras.
Para poner de manifiesto las clulas gramnegativas se utiliza una coloracin de
contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la

fucsina

bsica.

Despus de

la

coloracin

de

contraste

las

clulas

gramnegativas son rojas, mientras que las grampositivas permanecen azules.

17. EXPLIQUE CUAL ES LA DIFERENCIA EN LA DECOLORACION ENTRE
BACTERIAS

GRAM

POSITIVAS,

GRAM

NEGATIVAS

ALCOHOL

RESISTENTES
La diferencia esencial entre esos dos tipos de clulas est por tanto en su
resistencia a la decoloracin; esta resistencia se debe probablemente al hecho
de que en el caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de alcohol/acetona
es un solvente lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la clula
(y tambin puede daar la membrana citoplsmica a la que se une
peptidoglicano). La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de retener el de
complejo cristal violeta-yodo y la clula se decolora. Las clulas grampositivas,
a causa de sus paredes celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y
menos lpido), no son permeables al disolvente, provocando que el de complejo
cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular.
Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos
(cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les
confieren la propiedad de resistir la decoloracn con alcohol-cido, despus de
la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol
resistente.
18. Qu precauciones debemos de tomar para obtener buenos
resultados en las tinciones a realizar en el laboratorio?
En general, el proceso seguido en todas las tinciones conlleva las siguientes
etapas: extensin, fijacin, tratamiento con colorantes y observacin.
Extensin: Se realiza sobre un portaobjetos que ha de estar totalmente limpio.
Si la muestra es lquida se hace directamente y, si es slida, hay que
resuspenderla previamente en una gota de H2O.
Fijacin: Tiene por objeto adherir la muestra al portaobjetos y desnaturalizar las
protenas para facilitar la accin del colorante. Normalmente se realiza con
calor, pasando la muestra repetidamente a 10 cm de la llama del mechero.

Tincin: Se realiza aadiendo los colorantes sobre los microorganismos

sometidos a los procesos anteriores.

MICROSCOPIA: El microscopio es un instrumento ptico que amplifica la

imagen de un objeto pequeo. Es el instrumento que ms se usa en los
laboratorios que estudian los microorganismos.
Tincin adecuada
En su forma ms simple, el verdadero proceso de tincin puede implicar la
inmersin de la muestra (antes o despus de la fijacin y el montaje) en la
solucin colorante, seguido del aclarado que es un lavado para eliminar el
exceso de colorante y la observacin. Muchos tintes, sin embargo, requieren
del uso de un mordiente, esto es, un compuesto qumico que reacciona con el
colorante para formar un precipitado coloreado insoluble. Cuando la solucin
de colorante en exceso se elimina durante el aclarado, la tincin mordentada
permanece.
La mayora de los colorantes utilizados en microscopa se encuentran
disponibles como colorantes certificados. Esto significa que los colorantes
ofrecidos por el fabricante han sido evaluados por un organismo independiente,
la Biological Stain Commission, y que este organismo ha determinado que el
producto

ofrecido

cumple

excede

ciertos

estndares

de

pureza,

concentracin de sustancia colorante y desempeo en las tcnicas de tincin

empleadas.

Estos

revista Biotechnic

estndares
&

son

publicados

Histochemistry. Muchos

detalladamente

colorantes

en

presentan

la
una

composicin diferente entre diferentes fabricantes. La utilizacin de colorantes

certificados elimina una fuente de resultados inesperados.
19. Defina lo que es un frotis
Un frotis es un mecanismo cientfico que consiste en el extendido de
una gota en la superficie de un portaobjetos o de un cubreobjetos, con
el fin de analizarla posteriormente.
20. Cul es la finalidad de fijar las muestras biolgicas en el porta
objeto???????

Se fija el frotis por calor o por agentes qumicos. Con las siguientes
finalidades:
- Se evita la deformacin de las clulas con el colorante.
- Para posicionar las estructuras internas y externas de la clula
Adems
se
mata
al
microorganismo.
- Preserva la morfologa general pero no las estructuras internas.
-Protege la subestructura fina y la morfologa de los microorganismos
delicados de mayor tamao
21. Por qu es necesario utilizar el aceite de inmersin para la
observacin de los microorganismos
La mayor resolucin ganada a travs del uso de aceite de inmersin
habilita a los usuarios a enfocar objetos muy pequeos que no se
resolvera usando objetivos secos. Los objetivos de aceite inmersin son
usados para la observacin objetivos muy pequeos, como las bacterias
individuales y aplicaciones de alta resolucin, como el TIRF y las
aplicaciones de fluorescencia confocal
22. Qu funcin tiene el yodo en la tincin de Gram
El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin
acuosa con el cristal violeta. El lugol es un compuesto formado por yodo
en equilibrio con yoduro de potasio, el cual est presente para
solubilizar el yodo, y acta de mordiente, haciendo que el cristal violeta
se fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana.
23. Menciona cinco bacterias gran positivas / Gram negativa y la
enfermedad que produce
Gram positivas
1- Bacillus anthrasis causante del Antrax,
2Clostridium, perfringens, causante de enteritis necrosante y
gangrena,
3- Clostridium tetani, causante del ttanos,
4- Clostridium botulini, causante del Botulismo,
5- Corynebacterium pyogenes, causante de abscesos hepticos,
6- Lactobacillus acidofillus, usados en la fabricacin de yogurt y quesos,
7- Listeria monocytogenes, causante de la Listeriosis,
8- Staphylococcus aureius causante de amigdalitis, atritis y muchas
otras infecciones y
9- Streptococcus epidermidis causante de fornculos, acn y abscesos
cutneos.
Gram negativas
1- la gonorrea (Neisseria gonorrhoeae),
2- meningitis (Neisseria meningitidis) y
3- sntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros.
4- Los bacilos Gram-negativos incluyen un gran nmero de
especies. Algunos de ellos causan principalmente enfermedades
respiratorias (Hemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae ,

Legionella
pneumophila,
Pseudomonas
aeruginosa),
enfermedades urinarias (Escherichia coli, Proteus mirabilis,
Enterobacter cloacae, Serratia marcescens) y enfermedades
gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella enteritidis,
Salmonella typhi)
24-Cules son las fuentes de errores ms comunes de error en la
tincin de gran
Los peores obstculos de la Tincin, que impiden conseguir el resultado
perseguido, son los errores del tcnico. Para evitarlos hay que elegir
bien los reactivos y ser muy cuidadosos al ejecutar la tcnica. A
continuacin describimos algunas de las fuentes de error: Impurezas en
los reactivos de Tincin.
Lavados excesivos generan errores en la coloracin.
Fijar frotis sobre la llama del mechero en excesivo hace que la
muestra se queme.
Concentracin inadecuada de los reactivos de tincin.
pH inadecuado.
El colorante se fija a la clula por mecanismos fsico-qumicos,
que se alteran si el Ph no es el apropiado.
Los colorantes pueden ser cidos, bsicos o neutros.
Tiempo de Tincin incorrecto.
Temperatura suficiente.
25-A qu se debe el distinto comportamiento de las bacterias segn
sean Gram+ o Gram-?
El distinto comportamiento en la Tincin se piensa que es debido a las
diferentes capas superficiales o paredes de las dos bacterias (Tipos de
Clulas).
Esto se debe a la diferencia en su pared celular y bsicamente hay
dos causas diferentes:
A la cantidad de fosfolipidos que tienen la gram negativas es
mayor que las gram positivas.
A los peptidoglicanos, que es mayor en las gram positivas que en
las gram negativas.
26-Para qu se necesita el aceite de inmersin?
El aceite de inmersin tiene un indice de refraccin similar al del vidrio
(1,5 aprox.) y con el se elimina casi completamente los rayos de la luz y
aumenta en gran cantidad la eficacia del uso del microscopio.
Al ofrecer un ndice de refraccin similar al del vidrio, el objeto aparece
como "incluido en el vidrio del objetivo" eliminando el efecto reflector del
vidrio exterior del. Eso permite lograr mucho mayores aumentos con
menor distorsin esfrica, menor aberracin cromtica y mayor
luminosidad o "abertura de pupila". se utiliza para el objetivo de 100X.
27-Que es la tincin de zeihl nelssen y la Kinyoum

Tincin de ziehl neelsen (BAAR): es una tcnica de tincin diferencial

rpida y econmica, usada para la identificacin de microorganismos
patgenos, como M. tuberculosis o el gnero Apicomplexa (coccidios
intestinales) entre otros.
Fundamento: La propiedad que presentan algunas bacterias de resistir
la decoloracin con cidos fuertes despus de ser coloreadas con
solucin de fucsina caliente, permite reunirlas bajo la denominacin
general de bacterias cidoresistentes o cido-alcohol resistentes.
La cido-alcohol resistencia es la capacidad de incorporar ciertos
colorantes y retenerlos despus de someterlos a la accin de cidos y
alcohol y est determinada por la presencia en la pared celular de los
cidos miclicos que son cidos grasos de cadenas ramificadas de alto
peso molecular (60 a 70 tomos de carbono). Las micobacterias son
bacilos cido-alcohol resistentes, cortos, ligeramente
curvos.
El gnero Mycobacterium, incluido en esta clasificacin, comprende
especies patgenas para el hombre, animales y especies saprfitas.
El grado de cido-alcohol resistencia es variable entre las especies de
este gnero y est relacionado muchas veces con las condiciones
culturales, no pudiendo utilizarse esta diferencia para distinguirlos entre
s.
Los bacilos cido-alcohol resistentes (BAAR) se observan de color rojo
al ser coloreados con los colorantes para Ziehl Neelsen, mientras que
otros
grmenes y clulas toman distintos tonos de azul debido al azul de
metileno que se utiliza como colorante de contraste.
La coloracin de Ziehl Neelsen consituye una tcnica sencilla rpida y
econmica, de baja sensibilidad pero es una valiosa herramienta para
detectar los casos de tuberculosis pulmonar
Tincin de la Kinyoum: es otro mtodo utilizado para la tincin de
microorganismos resistentes a los cidos. Es similar a la tincin de ZiehlNeelsen, con la diferencia principal de que no se calienta la diapositiva.
Bajo el microscopio, los organismos manchados aparecern de color
azul. El procedimiento para aplicar tincin de Kinyoun es el siguiente: 1.
Cubre las diapositivas con carbolfucsina Kinyoun durante 5 minutos y
enjugalas con agua hasta que salga clara. 2. Cubre las diapositivas con
cido-alcohol - 3 por ciento de HCl en etanol - durante 3 minutos y
enjuaga con agua hasta que salga clara. 3. Cubre las diapositivas con
colorante azul de metileno durante 3 minutos y enjuaga suavemente con
agua hasta que salga clara. 4. Deja que se sequen al aire antes de
verlas.
28-Cual es los componentes de la pared celular de las bacterias
alcohol acido resistente.
Qumicamente, esta pared celular consiste en un esqueleto formado por dos
tipos de polmeros, unidos covalentemente entre s:

 un peptidoglucano especial (la diferencia ms importante es que en

vez de N-acetil murmico existe N-glucolil-murmico);
un arabinogalactano de gran peso molecular.
Ambos polmeros se encuentran enlazados a travs de fosfodister
entre una unidad de murmico y una de las arabinosas. Pero a su
vez, este esqueleto se une covalentemente a los cidos miclicos.
Los cidos miclicos son -hidroxicidos grasos ramificados en a , cuya
longitud de cadena es grande (desde C78 a C91 en Mycobacterium). Estn
unidos al esqueleto de la P.C. de forma uniforme, a travs de enlaces con
los -OH en 5 de las unidades de arabinosa.
Por lo tanto, el esqueleto de la P.C. de estas bacterias consiste en:
peptidoglucano---arabinogalactano---cidos miclicos.
Pero aparte de este esqueleto complejo, la P.C. de las bacterias cidoalcohol resistentes exhibe una variedad de lpidos:
1)

Glucolpidos:

a)
Micolatos de trehalosa: dos unidades de trehalosa unidas entre s
por enlace a (11), y en donde los grupos 6 y 6 estn unidos con cidos
miclicos. Constituyen el llamado factor de crecimiento en cuerdas, debido
a que son responsables de la agregacin de los individuos bacterianos en
forma de cuerdas.
b)
Sulfolpidos de trehalosa: estn localizados en la periferia de la P.C.,
y parecen ser impartantes factores de virulencia. En Mycobacterium
tuberculosis (el bacilo de la tuberculosis) estos sulfolpidos de trehalosa
funcionan como evasinas, es decir, facilitan el que la bacteria escape a la
accin de los macrfagos inhibiendo la fusin del fagosoma con el lisosoma,
lo cual puede explicar el hecho de que estosmicroorganismos tengan xito
como parsitos intracelulares.
c)
Micsidos: Localizados en la periferia, consisten en la unin por
enlace ster entre cidos miclicos y azcares (incluyendo cidos urnicos,
desoxiosas, aminozcares, etc.).
2)
Ceras: Unin de cidos miclicos con ftioceroles (alcoholes
ramificados de alto peso molecular: C30 - C34).
El alto contenido en lpidos confiere una serie de propiedades a estas
bacterias (aparte de la cido-alcohol resistencia ya citada):
aspecto y consistencia crea de sus colonias;
crecen formando grumos en medios lquidos;

 gran impermeabilidad de la P.C., que a su vez condiciona una gran

resistencia a la desecacin y gran resistencia a sustancias
antibacterianas (detergentes, oxidantes, cidos, bases, etc).

Bibliografia :
http://www.britanialab.com/productos/183_inserto_es.pdf
http://www.ehowenespanol.com/tres-tipos-tincion-acidoresistenteinfo_242576/
http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/05pared.htm#_Toc5339826
6
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnolo
gia/practico4.pdf
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnolo
gia/practico4.pdf
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/pra
ctico4.pdf

http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/curso/UNI_0
2/u2c1s3.htm
http://academic.uprm.edu/~lrios/3725/Ejercicio4.pdf