Universidad Nacional Agraria

la Molina
Facultad de Ciencias Exactas -

Informe:
Cromatografa

Departamento de Qumica

Integrantes:
Huillca Mora, Jharlens David 20140413
Callalli Crisanto, Ralph Brayans - 20140230
Gutirrez Alczar, Fernando Manuel - 20140241
Ramrez Melndez, Jean Franco - 20140366

Profesora: Qumica Melissa Rabanal

Da y Hora: Martes (11:00 am - 01:00 pm)

2014

[Escriba el ttulo del documento]

1.Aspecto Terico
La cromatografa es una tcnica que permite la separacin de los
componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos
contrapuestos.
a) Retencin. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla
por una fase estacionaria, que puede ser un slido o un lquido
anclado a un soporte slido.
b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la
mezcla por una fase mvil, que puede ser un lquido o un gas.
El fenmeno de migracin de los componentes de una mezcla a lo largo de
la fase estacionaria, impulsados por la fase mvil, recibe el nombre de
elucin. La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionara,
mientras que la mvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes
de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus
interacciones relativas con ambas fases.
Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se
distribuyan de modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria.
Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase
estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil; por el
contrario los componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria,
se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los
componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que
pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.

Tipos de Cromatografa
Segn la naturaleza de la fase estacionaria y de la fase mvil:
1. Cromatografa slido-lquido. La fase estacionaria es un slido
y la mvil un lquido.
2. Cromatografa lquido-lquido. La fase estacionaria es un
lquido anclado a un soporte slido.
3. Cromatografa lquido-gas. La fase estacionaria es un lquido
no voltil impregnado en un slido y la fase mvil es un gas.
4. Cromatografa slido-gas. La fase estacionaria es un slido y la
mvil un gas.

Segn el tipo de interaccin que se establece entre los

componentes de la mezcla y la fase mvil y estacionaria

Pgina

[Escriba el ttulo del documento]

1. Cromatografa de adsorcin. La fase estacionaria es un

slido polar capaz de adsorber a los componentes de la
mezcla mediante interacciones de tipo polar.

2. Cromatografa de particin. La separacin se basa en las

diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla
en las fases estacionaria y mvil, que son ambas lquidas.
3. Cromatografa de intercambio inico. La fase estacionaria es
un slido que lleva anclados grupos funcionales ionizables
cuya carga se puede intercambiar por aquellos iones
presentes en la fase mvil.
Para nuestros experimentos usaremos 3 tcnicas de cromatografa que se
explican a continuacin:

Cromatografa en Columna
Es el mtodo ms utilizado para la
separacin de compuestos orgnico a
escala preparativa. La fase estacionaria
se deposita en el interior de una columna
de vidrio que termina con una placa
porosa que impide su paso y en un
estrechamiento con una llave. La mezcla
se deposita sobre la parte superior de la
fase estacionaria mientras que la fase
mvil atraviesa el sistema. Los
compuestos van saliendo por separado
de la columna y se recogen en
fracciones, los ms polares quedan ms retenidos y para que salgan
generalmente hace falta aumentar la
Columna
polaridad del disolvente. El tiempo
necesario para eluir un compuesto de la
Cromatografa
columna se llama tiempo de retencin. El adsorbente ms utilizado
para cromatografa de columna es gel de slice.

Cromatografa en Capa Fina

La cromatografa en capa fina es una tcnica analtica rpida y

sencilla, muy utilizada en un laboratorio de Qumica Orgnica. Entre
otras cosas permite:

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o Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede

determinar as, por ejemplo, la efectividad de una etapa de
purificacin.
o Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa
podran ser idnticas. Si, por el contrario, corren distinto
entonces no son la misma sustancia.
o Realizar el seguimiento de una reaccin. Es posible estudiar
cmo desaparecen los reactivos y cmo aparecen los
productos finales o, lo que es lo mismo, saber cundo la
reaccin ha acabado.

La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lmina

de plstico o aluminio que previamente ha sido recubierta de una fina
capa de adsorbente (fase estacionaria). Entonces, la lmina se coloca
en una cubeta cerrada que contiene uno o varios disolventes
mezclados (eluyente o fase mvil). A medida que la mezcla de
disolventes asciende por capilaridad a travs del adsorbente, se
produce un reparto diferencial de los productos presentes en la
muestra entre el disolvente y el adsorbente.

Cromatografa en Papel

Es la ms sencilla de las
tcnicas, pero slo nos dar
resultados cualitativos. El
mtodo se basa en un
mecanismo de reparto, y
consiste en depositar una
pequea cantidad de
muestra en el extremo de
una tira de papel de filtro,
que se deja evaporar. Luego
se introduce la tira en una
cubeta que contenga el
disolvente, de manera que ste fluya por la tira por capilaridad.
Cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al extremo, se
retira el papel y seca. Si el disolvente elegido fue adecuado y las
sustancias tienen color propio se vern las manchas de distinto color
separadas. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se
somete a procesos de revelado.
Hay varios factores de los cuales depende una cromatografa eficaz: la
eleccin del disolvente y la del papel de filtro.

Pgina

[Escriba el ttulo del documento]

2.Experimentacin
A.
Cromatografa en
Columna
En este experimento utilizaremos la
cromatografa en columna para separar
una mezcla de azul de metileno y
anaranjado de metilo.
1. Se disuelve el silicagel con ayuda del
etanol, y es puesto en la columna
cromatografica. Este nos servir en la
fase estacionaria

2. El silicagel se queda en la base de la columna y adems encima

de ella se pone una capa de etanol. Al finalizar este paso
aseguramos que no quede algn resto de silicagel en los bordes
de la columna.
3. Se adiciona la mezcla en la columna cromatografica y se puede
observar como inicia el proceso. La sustancia ms polar se queda
adherida al silicagel, a su vez la sustancia menos polar continua
su movimiento hacia abajo con el etanol.

Azul
Metileno

Anaranjado
Metilo

de

de

Pgina

B.

Cromatografa en Capa Fina

1. En una capa fina se sealan 2 puntos que sean

equidistantes de los bordes y entre s, que se
encuentren en una lnea de partida a 1 cm del
borde inferior; en uno de los puntos se siembra
con un tubo capilar unas 3 gotas de una mezcla
en el otro punto el azul de metilo.
.
2. Introducimos la capa fina en un recipiente que
contiene el solvente de desarrollo (propanolacetona-agua 4:1:1)

3. Despus de unos minutos se ve como se forman manchas,

una del
patrn que viene a ser el
azul de metileno y la
mezcla se ha dividido en 2
dejando 2 mezclas
diferentes.
4. Por la accin del solvente,
polar queda atrapada al
por la capa fina dejando

la sustancia menos
solvente y con el suben
una huella.

C.
Cromatografa sobre Papel
En una tira de papel marcamos una lnea recta
a 1.5 cm de un extremo con lpiz, doblamos la
tira de manera longitudinalmente quedando
dividida en 2 mitades. En cada mitad, y sobre
la lnea de partida sealamos lugar de siembra
en el punto medio. En uno de estos puntos y
con un tubo capilar depositamos 3 gotas de la
mezcla y en el otro punto 3 gotas de
anaranjado de metilo. Despus introducimos la
tira de papel en un tubo de ensayo que contiene el
solvente de desarrollo (propanol-acetona-agua
4:1:1).

Despus de varios minutos sacamos el papel filtro y

vemos como se han formado manchas como en la
cromatografa en capa fina.

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[Escriba el ttulo del documento]

Anaranjado
Metilo

de

Mezcla
dividida

3.Discusin
A.

Cromatografa en Columna
Se muestra como la mezcla se logra dividir en sus
respectivos componentes, el azul de metileno se queda
adherido al silicagel por ser ambos de polares y
ocasionando que el movimiento del azul de metileno en
el sistema sea muy bajo. Adems se ve que el
anaranjado de metilo contina su camino por el sistema
ya que al ser apolar no se ve afectado por el silicagel y
este no afecta su velocidad

B.

Cromatografa en Capa Fina

Al retirar el papel del recipiente tenemos los siguientes resultados:

El azul de metileno deja mancha de 0.2 cm de largo a partir de la
lnea de partida y la mezcla deja dos machas una a la misma
distancia que el azul de metileno y otra amarilla de una distancia
de 3.8 cm.
La distancia que recorre el solvente de desarrollo es 3.85 cm.

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Utilizamos el azul de
metileno como patrn
y observamos que en
la mezcla hay una
mancha de color azul
igual que la del
patrn, decimos
entonces que en la
mezcla est en el azul
de metileno y que el
solvente de desarrollo
es el adecuando ya
que la dos manchas
azules estn a la
misma distancia del punto de partida.

C.Cromatografa sobre Papel

Retiramos el papel filtro del reciente y tenemos los siguientes resultados:
El anaranjado de metilo deja una mancha que recorre 3.2 cm del punto
de partida
La mezcla deja una macha de color azul y amarillo siendo esta ultima la
aparece al final con una distancia recorrida de 3.2 cm del punto de
partida y por ltimo el solvente de desarrollo recorre 3.3 cm del punto
de partida.
Como poder observar ha
dejado una macha amarilla a
la misma distancia que el
anaranjado de metilo y
decimos que la mezcla
contiene anaranjado de
metilo. Podemos decir
tambin por el experimento
anterior que la mezcla
contiene azul de metileno y
anaranjado de metilo siendo
el primero ms polar que el
segundo.

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[Escriba el ttulo del documento]

4.Conclusiones
Cromatografa en Columna
Este mtodo logro su cometido al poder separar la
mezcla en sus respectivos componentes por la
propiedad de polaridad entre las sustancias y los
solventes de la fase mvil y la fase estacionaria.
Ya para obtener las sustancias puras se procede con
una destilacin y queda la sustancia pura.

Cromatografa en Capa Fina

Este mtodo nos sirvi para comprobar la existencia de
la sustancia patrn en la mezcla, adems nos da
informacin adicional al ayudarnos a decidir al mejor
solvente de desarrollo. Este mtodo tambin es
utilizado para la identificacin de especies por su
Relacin de Frente que es caracterstico de cada
sustancia.

Cromatografa sobre Papel

Este mtodo cumpli su objetivo al verificar la
existencia de la sustancia patrn en la mezcla. Adems
la sustancia de desarrollo nos ayuda a verificar la
polaridad de la sustancia que queda adherida a ella.

5.Cuestionario
Cuestionario: Cromatografa en
Columna

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1.Qu utilidad tiene la cromatografa en

columna?
La cromatografa en columna es muy til para la separacin o
purificacin de sustancias o mezcla a travs de ciertas tcnicas y
mtodos muy eficientes; que luego permitirn tener un anlisis
claro.

2.Qu fenmenos fijos intervienen en una

columna cromatografica que utilice Silicagel
como fase fija?
Los fenmenos fsicos presentes son la adsorcin y desorcin; la
adsorcin consiste en que las molculas de una sustancia
(adsorbato) se adhieren en la superficie de un slido finamente
dividido, este es el adsorbente (Silicagel); en cambio la desorcin, es
la separacin de las molculas adsorbidas en la superficie del slido.

3. Cules son las principales diferencias entre un

HPCL y una columna cromatografica simple?
Las principales diferencias entre el HPCL y la columna cromatografa
simple, derivan en que las columnas de HPCL el solvente o fase
mvil circulan con gran dificultad (por su empaquetamiento mucho
ms compacto o duro), por lo que debe ser impulsado a alta presin
mediante bombas de presin. Las columnas suelen estar construidas
en materiales muy fuertes como el acero inoxidable.
Adems, para lograr la mxima eficiencia de los solventes usados en
HPCL deben tener un mayor grado de pureza y el eluyente al salir
de la columna pasa a travs de un detector para monitorear la
presencia del material.

4. Cul es el factor que hace que la HPCL sea mucho

ms eficiente que una columna cromatogrfica
simple?
El factor que hace que la HPCL sea mucho ms eficiente se debe a que
la fase estacionaria est formada de partculas esfricas muy pequeas
y de tamao uniforme. Usndose micro esferas con un tamao de 5 a
10 micrones.

5. Estamos operando una columna cromatogrfica

usando como adsorbente Silicagel y casi todos los
compuestos se han eluido, excepto un compuesto
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[Escriba el ttulo del documento]

que no es eluido con este solvente Qu cambios

introducira para poder eluirlo?
Los cambios introducira para poder eluirlo seria: Cambiar de
adsorbente; porque generalmente la mezcla de dos o tres
adsorbentes de distinta polaridad resultan ms eficientes que
absorbentes puros.

6. Cmo es posible trabajar con unas sustancias

incoloras en una columna cromatogrfica, si no es
posible localizar las sustancias dentro de una
columna?
Para hacer posible esto de se realiza el anlisis del eluato por
cromatografa en capa fina o sobre papel. Como este proceso es
largo suele recibirse el eluato en muchos matraces o tubos de
ensayo de volmenes similares, anotndose en cada uno un nmero
o cogidos que indique su orden de salida de la columna utilizando un
colector de fracciones el proceso se vuelve casi automtico.
Luego se juntan las fracciones que tienen igual o similar contenido y
se elimina o recupera el solvente (por destilacin o usando un rota
vapor) obtenindose el residuo de cada fraccin.
Posteriormente se pueden aplicar otros procesos de purificacin
(cristalizacin, destilacin, etc.) o de identificacin de sustancias
(puntos de ebullicin, espectro IR, etc.)

7. Qu tipo de cromatografa utilizara para eliminar

las sales minerales que estn contaminando una
muestra de cafena?
El tipo de cromatografa que utilizara para eliminar las sales minerales
que estn contaminando una muestra de cafena seria la
cromatografa en capa fina.

8. Qu es un colector de fracciones y cul es su

principal utilidad?
La cromatografa en columna consta de tres etapas: llenado de
columna, aplicacin de muestras y elusin. Durante la tercera etapa,
que es la elusin se procura que las primeras porciones del solvente
sirvan para lavar las paredes de la columna y que toda la muestra sea
adsorbida por la fase fija.
Cuando se hace un anlisis generalmente por cromatografa en capa
fina o sobre papel, este suele ser un proceso muy lento y suele recibir

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10

el solvente en muchos matraces que indican su orden de salida de la

columna. Es en esta parte que se usa el colector de fracciones para
llevar el proceso de forma automtica aprovechando la mayor cantidad
de tiempo posible.

9. Qu diferencias encuentras entre la cromatografa

de gases y la cromatografa de columna?

Criterio
Fase fija
Fase mvil
Fenmeno fsico
predominante y
estado fsico
Complejidad
relativa
Eficiencia
relativa
Costo relativo
Automatizacin

C. de Columna
Lquido
Slido

C. de Gases
Lquido o slido
Gas portador o
carrier

Adsorcin y
particin
Simple

Particin
Complejo

Menor

Mayor

Barato
Casi automtica

Costoso
Automtica

Qu son Resinas de Intercambio inico y

cul es su utilidad?

10.

Las resinas sintticas de intercambio inico son sustancias insolubles

de elevado peso molecular, que tienen grupos inicos
(intercambiables) en una molcula. Estas tienen una matriz
polimrica reticulada por la accin de un agente entrecruzante con
grupos inorgnicos que actan como grupos funcionales. Son los
materiales ms habituales en las aplicaciones de intercambio inico
en la industria. Generalmente son derivados de la celulosa o resinas
sintticas, pudiendo ser de dos tipos: Catinicas y aninicas.

Cuestionario: Cromatografa en Capa

Fina y sobre Papel.
1. Qu entiende por Rx?
La relacin respecto a un patrn o Rx, es la relacin que existe entre el

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[Escriba el ttulo del documento]

desplazamiento de una sustancia, con respecto a otra patrn (qumicamente

similar a la muestra).

2. Cules son las diferencias entre la C.C.F. y la de

papel?
Cromatografa en capa fina
Permite el uso de absorbentes
eficientes, los que se aplican
formando una capa delgada y
uniforme que se adhiere sobre
la superficie de un soporte
inerte rgido por el uso de un
agente aglomerante o por las
propias cualidades del
material.
El espesor de la capa
adsorbente vara entre 0,1 y 2
mm.
Las sustancias se depositan
en solucin en la base de la
plancha, la que se coloca
verticalmente en la Cuba
cromatografa que contiene el
solvente escogido.
Cuando este llega a la altura
deseada, se saca el
cromatograma, se seca, se
revela y se determina el Rf o
Rx de cada sustancia.

Cromatografa sobre papel

Utiliza el papel filtro como
soporte inerte de la fase fija
que puede ser el agua u otro
lquido.
La muestra se siembra cerca
del borde inferior del papel
filtro.
Luego de que la siembra esta
seca se sumerge el extremo
del papel en un recipiente,
hermticamente sellado, que
contiene el solvente de
desarrollo, ste asciende por
capilaridad y los componentes
de la muestra se van
desplazando a diferente
velocidad del lugar en que
fueron sembrados.
La identificacin de los
distintos componentes de la
mezcla se hace por
comparacin con sustancias
patrn o midiendo su
desplazamiento respecto al de
la fase mvil.

3. Cite algunas de las aplicaciones de la cromatografa en su

especialidad (Forestal).
-

rgano oficial de difusin cientfica de la Universidad Nacional de la

Amazona Peruana (UNAP)
Conocimiento Amaznico
Obtencin del colorante de Dioscorea trifida (sachapapa morada)
Por atomizacin y Liofilizacin de Myrciaria dubia HBK McVaugh
(camu camu).

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En este experimento se han aplicado cromatografa de gas como uno de los

primeros pasos y de mucha utilidad en el campo de la nutricin y la calidad
de los alimentos.
Disponible:
http://www.unapiquitos.edu.pe/descargas/archivos/CONOCIMIENTvol.%202.pdf

Universidad de Valencia Espaa

Utilizacin de Pirolisis con Cromatografa de Gases y Espectrometra
de Masas (Py-GC/MS) para el estudio de la composicin qumica de la
materia orgnica de un suelo mediterrneo sometido a diferentes
temperaturas.
Los incendios forestales se pueden considerar como una de las principales
alteraciones de los suelos y la vegetacin de la cuenca del Mediterrneo.
Uno de los principales efectos de los incendios forestales en las propiedades
del suelo es la alteracin de la materia orgnica, afectando tanto a su
contenido como a su composicin. El estudio de los cambios en la
composicin de la SOM ha avanzado sustancialmente gracias a la utilizacin
de tcnicas tales como la resonancia magntica nuclear, la pirolisis con
cromatografa de gases y espectrometra de masas, la hidrlisis y metilacin
asistida trmicamente, etc.
Disponible:
file:///C:/Users/Mega/Downloads/utilizacion_pirolisis_cromatografia.pdf

4. Interprete los valores de Rf 0,05; 0,6 y 0,98.

El valor de Rf es una constante usada para intentar la identificacin de un
compuesto ya que el desplazamiento de una sustancia con respecto al
desplazamiento del disolvente es constante y caracterstico de ella.
Rf = Distancia recorrida por la sustancia
Distancia recorrida por el disolvente
Los 3 valores pueden ser interpretados como 3 diferentes sustancias de las
cuales, la 1era (Rf=0,05) tiene un desplazamiento menor, la 2da (Rf=0,6) un
desplazamiento algo ms amplio, y la 3era (0,98) un desplazamiento mayor a
las dems.
Recordar que estos valores no bastan para determinar cierta sustancia sino
que se debe hacer un estudio ms amplio.

5.- Introducira algn cambio cuando se tiene un Rf de

Pgina

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[Escriba el ttulo del documento]

0,05, Por qu?

El Rf de 0.05 si Introducira algn cambio, porque esta distancia es muy
pequeo para utilizarla como identificacin de un compuesto. Y aun si fuera
ms grande el valor tampoco bastara para identificar la sustancia; porque en
las condiciones experimentales influyen variables como: la concentracin de
la muestra, saturacin de la cmara, temperatura, etc. Estas influyen
considerablemente en el Rf.

6.- Explique algn mtodo para localizar las bandas de

adsorcin cuando se trabaja con sustancias incoloras en
una columna cromatogrfica.
Es un tipo de cromatografa de particin que utiliza papel de filtro (fibras de
celulosa) como soporte inerte de la fase fija que puede ser el agua que,
normalmente, contiene otro lquido con el que se ha impregnado el papel
filtro.
Las separaciones se realizan por participacin de las sustancias entre la fase
acuosa (estacionaria) y la fase orgnica (mvil) que fluye por el papel por
gravedad y/o capilaridad. La muestra a analizar o separar se siembra (en
solucin) cerca del borde inferior de la tira de papel. Luego de secar o
evaporar el solvente de siembra, se sumerge este extremo de papel de un
recipiente (cuba cromatogrfica), hermticamente cerrado, que contiene el
solvente de desarrollo, ste asciende por capilaridad (cromatografa
ascendente) y los componentes de la muestra se van desplazando a diferente
velocidad del lugar en que fueron sembrados.
Cuando el solvente llega a la altura adecuada, se saca el cromatograma y se
seca. La identificacin de los distintos componentes de la muestra se hace
por comparacin con sustancias patrn o midiendo su desplazamiento
respecto al de la fase mvil (Rf) pudiendo ser necesario el uso de un
revelador.
El disolvente tambin puede desplazarse en sentid contrario (de arriba hacia
abajo), desde una cubeta colocada en la parte superior de la cuba
(cromatografa descendente) o desde el centro de un papel circular hacia los
bordes de ste (cromatografa circular).
La cromatografa sobre papel es una valiosa herramienta en todos los campos
de la qumica pero, el solo hecho de que todas las separaciones se hacen
sobre celulosa le impone una gran limitacin tcnica ya que esta no siempre
es satisfactoria para todos los casos. Es particularmente til en la separacin
de compuestos muy polares (como azcares, aminocidos, etc.). Otro
inconveniente es que slo se puede trabajar con pequeas cantidades de
muestra, por lo que su principal utilidad es con fines analticos.

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7. Qu es la electroforesis y cul es su principal

aplicacin en los compuestos biolgicos?
La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas (protenas o
cidos nucleicos) sobre la base de su tamao molecular y carga elctrica. Los
cidos nucleicos ya disponen de una carga elctrica negativa, que los dirigir
al polo positivo, mientras que las protenas se cargan con sustancias como el
SDS (detergente) que incorpora cargas negativas de una manera dependiente
del peso molecular.
Para la separacin se usa un gel de agarosa o poliacrilamida (fibras cruzadas,
como una malla). Al poner la mezcla de molculas y aplicar un campo
elctrico, stas se movern y debern ir pasando por la malla, por la que las
pequeas se movern mejor, ms rpidamente. As, las ms pequeas
avanzarn ms y las ms grandes quedarn cerca del lugar de partida. La
principal aplicacin de la electroforesis capilar es para la determinacin de
residuos de antibiticos.

6.Bibliografa
http://ocw.uv.es/ocw-formaciopermanent/2011-1-35_Manual.pdf
http://www.uam.es/docencia/jppid/documento
s/practicas/actuales/guion-p6.pdf
http://ocw.uv.es/ocw-formaciopermanent/2011-1-35_Manual.pdf

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