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SUMRIO
SUMRIO ........................................................................................................ 2
NDICE DE TABELAS ..................................................................................... 6
NDICE DE FIGURAS ...................................................................................... 7
CAPTULO 1 .................................................................................................... 9
INTRODUO A BIOQUMICA....................................................................... 9
1.
CAPTULO 2 .................................................................................................. 15
BIOQUMICA DOS ALIMENTOS E SUA COMPOSIO ............................. 15
1.
2.
Monossacardeos ......................................................................................33
Dissacardeos............................................................................................ 35
Polissacardeos .........................................................................................37
Funo.......................................................................................................38
gua ..........................................................................................................43
2.7.2.
2.7.3.
2.7.4.
2.7.5.
2.7.6.
Cinza..........................................................................................................46
Carboidratos ..............................................................................................46
Protenas ...................................................................................................47
Vitaminas...................................................................................................49
Fibras.........................................................................................................51
CAPTULO 3 .................................................................................................. 54
REAES QUMICAS DE IMPORTNCIA ALIMENTAR............................. 54
1.
2.
3.
CAPTULO 4 .................................................................................................. 68
METABOLISMO CELULAR .......................................................................... 68
1.
2.
3.
4.
CAPTULO 5 .................................................................................................. 81
INTRODUO A ANLISE BIOQUMICA DE ALIMENTOS ........................ 81
1.
2.
3.
4.
5.
Escolha do mtodo....................................................................................85
Amostragem ..............................................................................................85
5.3.3.
5.3.4.
5.3.5.
5.3.6.
5.3.7.
Amostra .....................................................................................................89
Amostragem ..............................................................................................90
A amostra bruta .........................................................................................90
Amostra de solues homogneas de lquidos e gases...........................91
Amostragem de slidos particulados ........................................................91
Amostragem de metais e ligas ..................................................................92
Preparao de uma amostra de laboratrio e quateamento..................... 93
O nmero de amostras de laboratrio.......................................................94
Preparo da amostra de laboratrio de origem alimentar........................... 94
Preparo da amostra para anlise..............................................................94
Preservao da amostra ...........................................................................95
2.
3.
4.
5.
NDICE DE TABELAS
Tabela 1.1 Comprimento tpico das pontes de hidrognio.
12
19
30
44
46
47
50
56
62
64
89
90
101
118
119
124
125
139
NDICE DE FIGURAS
Figura 1.1 Energia versus distncia de contato:
12
14
16
21
22
23
25
26
28
31
43
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58
63
70
70
72
73
74
75
fagocitose.
76
78
Figura 4.9 Respirao: (a) anaebia formando lactato; (b) anaerbia formado etanol;
(c) aerbia formando CO2 e gua.
79
86
92
93
modelo.
107
114
Figura A-4 reas sob uma curva gaussiana para vrios valores z. (a) z= 1,28;(b) z=
1,64; (c) z= 1,96; (d) z=2,58
118
128
129
130
147
Captulo 1
Introduo a Bioqumica
1.
INTRODUO A BIOQUMICA
1.1.
BIOQUMICA E IMPORTNCIA
(2)
(3)
Estas observaes sugerem fortemente que todos os seres vivos em nosso planeta
tm un ancestral comum, e que os organismos modernos evoluiram deste ancestral para as
formas presentes. Alm disso, a bioqumica abriu um vasto campo para entender a origem
da vida desde quando Watson e Crick descobriram a forma de hlice dupla do ADN, pois, tal
fato revelou os segredos da clula e vislumbrou um novo mundo de insuspeitada
complexidade; formado por um arsenal de mquinas qumicas, constitudas de peas
finamente calibradas e interdependentes. Inclusive as numerosas descobertas da
bioqumica moderna, cada vez mais, tm contestado a famosa teoria da evoluo de
Darwin, ou seja, para que tal teoria da evoluo fosse verdade, deveria ter havido uma srie
de mutaes, todas e cada uma delas produzindo sua prpria maquinaria, o que resultaria
na complexidade que ora encontramos.
Tambm, a bioquimica moderna tem causado muita excitao e atividade, alm das
citadas, por outros motivos:
(1)
(2)
(3)
(4)
1.2.
F=K
q1.q2
r 2 .D
Sendo
K= constante de proporcionalidade;
r= distncia entre 2 tomos;
D= constante dieltrica.
Esta atrao mais forte no vcuo onde D igual a 1 e mais fraca em um meio com
gua onde D igual a 80.
As pontes de hidrognio so interaes fundamentalmente eletrostticas e
responsveis pela formao de bases especficas na dupla hlice de ADN. Nesse tipo de
ligao, o tomo de hidrognio compartilhado por dois outros tomos. O tomo em que o
hidrognio est mais fortemente ligado chamado de doador de hidrognio. a mais forte
das ligaes no-covalentes, altamente direcionadas, mas muito mais fraca que as
covalentes.
11
Obs.: O-H...O
Obs.: 2,70
Obs.: O-H...O
Obs.: 2,63
Obs.: O-H...N
Obs.: 2,88
Obs.: N-H...O
Obs.: 3,04
Obs.: N -H...O
Obs.: 2,93
Obs.: N-H...N
Obs.: 3,10
A ligao de Van der Waals trata-se uma fora atrativa inespecfica que entram em
ao quando dois tomos quaisquer esto de 3 a 4 A de distncia. So foras muito
pequenas. A energia e ligao cerca de 1 kcal/mol. A figura abaixo mostra a distncia de
contato que a distncia onde a atrao mxima. A uma distncia menor predominam as
foras de repulso, devido as camadas externas se sobrepor.
12
1.3.
EFEITO HIDROFBICO.
Tal efeito esta associado a interaes hidrofbicas que uma manifestao das
citadas propriedades da gua. Algumas molculas apolares no podem participar de pontes
de hidrognio ou de interaes inicas. Tais interaes no so to favorveis quanto as
interaes das molculas de gua entre si. As molculas de gua em contato com estas
molculas apolares formam jaulas ao redor dela, tornando-se melhor ordenadas que as
molculas de gua livre na soluo. Entretanto, quando duas destas molculas apolares se
juntam, algumas molculas de gua so liberadas (Figura 1.2).
13
1.5.
QUESTES PROPOSTAS
14
Captulo 2
1.
INTRODUO A BIOQUMICA
2.
15
2.1.
INTRODUO
A bioqumica fundamenta tal cincia com estudo da base molecular da vida, seus
processos vitais bem como as alteraes enzimticas que acontecem nos alimentos (veja
captulo 1). Portanto, este captulo foi organizado em seis sees. As cinco primeiras sees
sero dadas uma slida formao das principais macromolculas bioqumicas presentes nos
alimentos. Na ltima seo ser estudada a composio qumica dos alimentos.
2.2.
AMINOCIDOS
Aminocidos. So compostos que apresentam as funes amina (-NH2) e cido (COOH), podendo ou no aparecer outras funes e so constituintes das protenas.
Exemplos
17
pH = pKa + log
[A ]
[HA]
(2.1)
2.2.2. Eletroforese
o movimento de migrao de agrupamentos eletrizados para um eletrodo, numa
soluo. Quando as partculas coloidais so submetidas a campos eltricos, ocorre
migrao delas para determinado plo. A soluo torna-se mais opaca de um lado e mais
transparente nas proximidades do outro plo o fenmeno chamado eletroforese. Esta
tcnica permite separar partculas coloidais carregadas eletricamente, baseando-se na sua
diferente velocidade de migrao num campo eltrico. Segundo o sentido de migrao, falase em cataforese (em direo ao polo negativo) ou anaforese (em direo ao polo positivo).
Por exemplo, um Zwitterion positivo migrar para o ctodo (Figura 2.2) e Zwitterion negativo
tem comportamento contrrio.
20
(2.2)
Por exemplo, a glicina o pI= 5,94 decorrente de um pK1=2,34 e um pK2= 9,60. A
Figura 2.3 mostra a titulao da histidina e suas formas.
21
22
2.3.
PROTENAS
2.4.
ENZIMAS
27
29
30
2.5.
CARBOIDRATOS.
Estereoismeros. So tambm chamados de enantimeros ou enancimeros (ex: Lgliceraldedo e D-gliceraldedo). So molculas que so imagens no espelho uma da outra e
no so sobreponveis, nem por rotao nem por translao, mas com capacidade de
desviar a luz polarizada. Quando os ismeros no se sobrepem e nem so imagens
especulares uns dos outros so chamados de diasteroismeros.
32
2.5.1. Monossacardeos
So os carboidratos mais simples e incluem os acares de 3 a 7 tomos de C. O
monossacardeo mais simples o D-gliceraldedo que contm um centro assimtrico e
existe, portanto, como um par de enancimeros. A configurao D foi atribuda de uma
forma arbitrria estrutura abaixo.
Mais tarde, em 1951, pde-se verificar, por feliz coincidncia, que a atribuio
estava correta, ou seja, a escolha arbitrria coincidia com a configurao real: tanto o D-(+)gliceraldedo quanto D-(-)-gliceraldedo tm as frmulas moleculares acima proposta.
Projeo de Fischer. As projees de Fischer para acares so frequentemente
escritas de um modo simplificado, omitindo-se os C assimtricos e tambm os H a eles
ligados. Abaixo esto representados vrios monossacardeos segundo essa projeo.
34
2.5.2. Dissacardeos
Um dissacardeo um composto que pode ser hidrolisado a dois monossacardeos
ou duas molculas do mesmo monossacardeo. Os dissacardeos mais importantes so: a
sacarose, a maltose, a celobiose e a lactose.
Sacarose. Este dissacardeo obtido da cana-de-acar (Saccharum officinarum)
ou da beterraba (Beta vulgaris), o composto orgnico puro obtido em maior quantidade. O
fato de que a sacarose no sofre mutarrotao, no redutora e no da osazona. O nome
oficial da sacarose -D-glicopiranosil--D-frutofuranosdeo ou -D-frutofuranosil--Dglicopiranosdeo. A sua estrutura, determinada por degradao e estudos de Raio-X, tem
uma ligao glicosdica , (1 2), :
36
2.5.3. Polissacardeos
qualquer molcula que pode ser hidrolisada a um grande nmero de
monossacardeos. Se as molculas de monossacardeos obtidas por hidrlise so hexoses,
o polmero chamado hexosano. Os hexosanos mais importantes na natureza so: amido
e celulose.
As pentoses so polissacardeos naturais contendo polipentoses (C5H804)n
ocorrem em grande quantidade em certas matrias vegetais, tais com a pelcula da aveia e
a espiga do milho.
Amidos. So polmeros compostos de muitas unidades de glicose repetidas. Uma
forma de amido, a amilose, composta de cerca de 250-300 unidades de glicose em ligao
-1,4-dissacardicas. A enzima especfica que hidrolisa a amilose -amilase que uma
enzima endgena.
Celulose. o outro dos polmeros de glicose encontrado nas plantas. Este polmero
insolvel em gua tem funo estrutural nas plantas. A madeira tem cera de 50% de
celulose e as fibras do algodo so praticamente celulose pura. A celulose tem alta mass
molecular, cerca de 3000 unidades de glicose sem ramificao. O aspecto mais importante
da celulose a ligao (1-4) das unidades de glicose e isso fator determinante para o
ser humano porque no possu nenhuma enzima capaz de transformar a celulose em
glicose. A celulase a enzima que realiza tal transformao.
2.5.4. Funo
Os carboidratos so combustveis energticos de fcil mobilizao para os animais
e seres humanos para desenvolver suas atividades motoras. Representam 80% do total
calrico utilizado pela humanidade (75 - 80 % deste valor representado pelo amido). Nos
EUA, do total calrico, 46% representado pelos carboidratos (47% de amido e 52% pela
sacarose), 42% de lipdios e 12% de protenas. Como vimos, carboidratos necessitam ser
hidrolizados a CHO simples para serem absorvidos pelo organismo.
Fornece energia para ser transformada em trabalho no corpo e fornece calor para
regular temperatura corporal.
CHO so essenciais para a completa oxidao das gorduras do corpo. Se ausentes
h acmulo de cidos (acidose) provenientes do metabolismo intermedirio das gorduras,
sendo, portanto anticidos.
So economizadores de protenas. Se os CHO esto disponveis, o corpo no utiliza
as protenas como fonte de energia e elas sero aproveitadas para suas funes especficas
(+ nobres).
So utilizadas como alimentos (substrato) da flora microbiana sintetizadora de
diversas vitaminas.
So responsveis pela reao de escurecimento em muitos alimentos.
Propriedades
(polissacardeos).
reolgicas
na
maioria
dos
alimentos
de
origem
vegetal
2.6.
LIPDEOS.
Do grego lipos significa gordura. O termo lipdio no indica uma determinada funo
orgnica; de um modo bastante amplo, o termo lipdio engloba um grande nmero de
substncias gordurosas existentes tanto no reino vegetal como no animal, tais como:
triglicerdeos, cidos graxos, fosfolipdeos, vitaminas liposolveis, ceras, colesterol, etc. Na
prtica, os lipdios so substncias untuosas ao tato que deixam mancha translcida sobre o
papel, mancha de gordura. So insolveis em gua e solveis nos solventes orgnicos, tais
como: ter, clorofrmio, benzeno, etc. No corpo humano, os lipdeos funcionam como
combustvel metablico, como formas de reserva e transporte de energia e como
componentes estruturais das membranas celulares.
So produtos naturais de origem animal ou vegetal onde predominam steres de
cidos graxos superiores, onde steres resultam da reao de substituio nucleoflica de
um cido com um lcool.
39
40
2.6.2. Glicerdeos
Os leos e gorduras neutras tambm chamados de glicerdeos so teres de
glicerol com cidos graxos e podem apresentar basicamente trs formas:
1,2,3-propanotriol
A parte cida constituda de cidos graxos que nos sistemas biolgicos aparecem
geralmente entre 14 e 24 carbonos.
Triglicerdeos. Representam a maior parte dos leos e gorduras naturais. As
gorduras predominam steres de (glicerina + cidos graxos saturados) e nos leos
predominam steres de (glicerina + cidos graxos insaturados). Exemplo:
41
2.6.3. Fosfolipdeos
So tambm conhecidos como fosfatdeos ou fosftidos. Na constituio dos seus
steres participam: cidos graxos, glicerol, cido fosfrico e normalmente grupos
nitrogenados. As lecitinas so fosfolipdeos extradas da gema do ovo e do leo de soja e
possuem em sua estrutura uma colina:
CH3(CH2)16
O
C O CH2
O
CH3(CH2)7 CH CH (CH2)7 C O CH
O H2C O P O CH2CH2N+(CH3)3
O
Fosfatidil colina (ou, 1-palmitil-2-oleil-fosfatidil colina)
2.6.4. Ceras
So constitudas de steres de cidos graxos e lcoois superiores. Possuem alto
ponto de fuso e maior resistncia hidrlise que os triglicerdeos. Podem ser de origem
animal ou vegetal. Podem ser classificadas de acordo com o tipo de lcool que est
esterificado. As ceras verdadeiras so steres de cidos graxos e lcoois de cadeia linear e
alta massa molecular. Um exemplo o palmitato de cerila:
2.6.5. Glicolipdeos
Tambm so conhecidos como cerebrosdeos ou cerobrsidos.
cidos graxos, um grupo nitrogenado e um carboidrato.
CH3(CH2)12
CH2OH
HO
O
unidade da
galactose
H
OH
H
OH
C
C
H
H
C OH O
H C NH C
O CH2
42
(CH2)22CH3
Formados por
2.7.1. gua
A gua um nutriente absolutamente essencial, participando com 60 a 65 % do
corpo humano e da maioria dos animais. Nas frutas, o teor de gua pode ser superior a
70%. J em gros e sementes oleaginosas pode ser inferior a 20 % (Figura 2.1).
O teor de gua livre nos alimentos um dos fatores determinantes no shelf-life de
alimentos in natura e processados e, por outro lado, o principal adulterante dos alimentos,
por isso sua determinao de grande importncia. Alm disso, a gua apresenta vrias
funes, tais como: (1) o solvente universal, indispensvel aos processos metablicos; (2)
manuteno da temperatura corporal; (3) manuteno da presso osmtica dos fludos e do
volume das clulas; (4) participao como reagente de um grande nmero de reaes
metablicas.
43
44
Figura 2.10 Isotermas de adsoro de alguns alimentos a 20oC. FONTE: MOSSEL (1975).
45
2.7.2. Cinza
Cinza de um alimento o resduo inorgnico que permanece aps a queima da
matria orgnica que transformada em CO2, H2O e NO2. A cinza constituda
principalmente de: (1) grandes quantidades: K, Na, Ca e Mg; (2) pequenas quantidades: AI,
Fe, Cu, Mn e Zn; (3) traos: Ar, I, F e outros elementos.
A cinza obtida no necessariamente da mesma composio que a matria mineral
presente originalmente no alimento, pois pode haver perda por volatilizao ou alguma
interao entre os constituintes da amostra. Os elementos minerais se apresentam na cinza
sob a forma de xidos, sulfatos, fosfatos, silicatos e cloretos, dependendo das condies de
incinerao e da composio do alimento. Algumas mudanas podem ocorrer como
oxalatos de clcio podem ser transformados em carbonatos ou at em xidos. Portanto, a
composio da cinza vai depender da natureza do alimento e do mtodo de determinao
utilizado.
2.7.3. Carboidratos
Os carboidratos constituem cerca de 75% do peso seco de todas as plantas
terrestres e marinhas e esto presentes nos gros, verduras, hortalias, frutas e outras
partes de plantas consumidas pelo homem. Em base mida, nas frutas, os carboidratos
podem chegar at pouco mais de 20%, como o caso das bananas e menos de 10 % em
meles (Veja figura 2.1).
A composio de carboidratos, nos alimentos, dada em termos de carboidratos
totais e o seu valor calculado pela diferena, isto , a percentagem de gua, protena,
gordura e cinza subtrada de 100.
O amido e a sacarose so as principais fontes de carboidratos para o homem e os
vegetais ricos nesses carboidratos so os mais cultivadas. A sacarose, por exemplo, est
presente em pequenas quantidades na maior parte dos vegetais. Portanto sua ingesto em
maior nvel se d atravs de alimentos modificados, como o acar refinado (Tabela 2.4).
Os cereais contm pequenas quantidades de acares, pois a maior parte convertida em
amido. Este, por sua vez, o carboidrato mais comum utilizado pelos vegetais como reserva
de energia. Assim, o homem e os animais desenvolveram sistemas enzimticos para utilizlo como fonte de energia. As enzimas que desempenham tal papel so a -, -amilase e
glugoamilase (Rever item 2.5.3). As frutas maduras so doces devido transformao do
amido (reserva) em acares mais simples como a sacarose, frutose, etc. Os produtos de
origem animal contm menos carboidratos matabolizveis que outros alimentos. O
glicognio forma semelhante a amilopectina do amido e metabolizvel da mesma forma
que este.
Tabela 2.4 Contedo de carboidratos em alguns alimentos.
2.7.4. Protenas
As protenas so os maiores constituintes de toda clula viva, e cada uma delas, de
acordo com sua estrutura molecular, tem uma funo biolgica associada s atividades
vitais. Nos alimentos, alm da funo nutricional, as protenas tm propriedades
organolpticas e de textura. Alm diso, podem vir combinadas com lipdeos e carboidratos.
As protenas, como as gorduras e carboidratos, contm carbono (50 a 55%) ,
hidrognio (6 a 8%) e oxignio (20 a 24%). So as nicas macromolculas que contm ao
redor de 16% de nitrognio, juntamente com enxofre e algumas vezes outros elementos, tais
como fsforo, ferro e cobalto. A presena de nitrognio permite s protenas assumirem as
centenas de formas diferentes que caracterizam a vida.
As protenas contm quantidades variveis de N. Entretanto, os valores, para
protenas semelhantes, so aproximadamente iguais. Portanto o contedo de protenas nos
alimentos igual N multiplicado por 6,25 (100/16=fator). O mtodo mais utilizado para
determinar protena total o Kjeldhal que no permite distinguir entre N protico e o no
protico. A tabela 2.5 mostra a relao entre o teor de aminocidos totais essenciais (AET)
Tabela 2.5 Contedo de carboidratos em alguns alimentos.
.
48
2.7.5. Vitaminas
As vitaminas so compostos orgnicos essenciais para reaes metablicas
especficas que no podem ser sintetizados pelas clulas dos tecidos humanos a partir de
simples metablitos. Muitas agem como coenzimas ou como partes de enzimas
responsveis por promover reaes qumicas essenciais. Avitamina A e a niacina podem ser
formadas no organismo se seus precursores forem fornecidos. A vitamina K, a biotina, a
folacina e a vitamina B12 so produzidas por microrganismos no trato intestinal. A vitamina D
sintetizada a partir de um precursor do colesterol na pele sob exposio luz solar.
As vitaminas se dividem em lipossolveis e hidrossolveis (tabela 2.6). As vitaminas
hidrossolveis so aquelas do complexo B, formada por B1 (tiamina), B2 (riboflavina),
vitaminas
B6
(piridoxina),
vitaminas
B12
(cianocobalamina),
cido
flico,
niacina(nicotinamida, antigamente vitamina PP) e cido pantotnico, da vitamina C (cido
ascrbico) e da biotina (antigamente vitamina H). As vitaminas lipossolveis Vitamina A
(retinol); vitamina D (calciferol); vitamina E (tocoferol); vitamina K (filoquinona).
O crescente interesse em relao demanda de nutrientes, entre eles as vitaminas,
e o consequente estabelecimento de padres nutricionais na dieta das populaes tm
aumentado devido as fortes evidncias demonstrando a estreita relao entre a dieta e as
doenas humanas.
Tal fato resultou em grandes investimentos governamentais e particulares, alm de
intensificar as atividades dos laboratrios de anlises, nos pases desenvolvidos.
A necessidade do conhecimento dos teores de vitaminas nos alimentos aumentou
ainda mais com a preocupao da declarao desses valores nos rtulos dos alimentos
comercializados, principalmente utilizando metodologias mais apropriadas.
Hoje, com o aumento do consumo de alimentos industrializados e a sua maior
diversidade, aliado a baixa estabilidade das vitaminas, surge a preocupao em adicionar
esses nutrientes aos alimentos como medida para recuperar as perdas decorrentes do
processamento, embora muitas vezes o enriquecimento, principalmente em novos produtos,
represente uma estratgia de marketing. A adio de vitaminas requer muita ateno, j que
algumas, quando ingeridas em nveis superiores ao requerido pelo organismo, podem
apresentar toxicidez.
Mtodos analticos que confirmem com segurana os teores de vitaminas em
alimentos so desejveis por organismos de fiscalizao, conferindo paralelamente
indstria possibilidade de melhor controle de processos tecnolgicos, e nutrio, para um
melhor planejamento diettico quando associado a informaes de biopotncia.
49
50
2.7.6. Fibras
So substncias componentes dos tecidos vegetais, que no constituem fonte de
energia, porque no podem ser hidrolizadas por enzimas do intestino humano. Uma
definio mais precisa de fibras no possvel porque as substncias no digerveis
incluem misturas complexas e heterogneas de substncias, no existindo ainda uma
concordncia acerca de qual parte da substncia constitui a fibra.
Quantitativamente, os principais integrantes das fibras da dieta derivam das paredes
celulares das plantas, os polissacardeos no-amilceos insolveis (celulose, hemicelulose,
lignina), outros fazem parte do material intercelular solveis (algumas hemiceluloses,
pectinas) e outros ainda so secretados pelos vegetais para desempenho de funes
especializadas (gomas e mucilagens).
Assim, como diferentes vitaminas exercem funes especficas em nosso
organismo, os vrios componentes das fibras alimentares produzem diferentes respostas
fisiolgicas que esto relacionadas s propriedades fsico-qumicas destes integrantes.
Como vimos anteriormente, a celulose composta de uma nica cadeia longa de
unidades de glicose unida por ligaes as quais as enzimas digestivas no conseguem
hidrolisar. A celulose est presente nas frutas (polpa e casca), nas hortalias (haste e
folhas), nos legumes e cereais. A hemicelulose difere estruturalmente da celulose porque
possui menos unidades de glicose. So utilizadas como laxante e na produo de alimentos
de baixas calorias, devido sua capacidade de produzir volumes e sensao de saciedade.
A Lignina um polmero de fenis e cidos encontrados na poro lenhosa de vegetais. As
pectinas so formadas por muitas unidades de cido galacturnico, absorvem gua e
formam gel, amplamente utilizada na indstria de alimentos. Encontrada em todos os
frutos. As gomas e mucilagens so semelhantes a pectina, exceto porque suas unidades
so formadas por ligaes de galactose e polissacardeos. Encontradas nas secrees de
vegetais ou sementes.
Fibra alimentar. a parte do alimento que lhe confere volume, ou seja, a que mais
resiste a ao dos sucos e enzimas digestivas, favorecendo, assim, os movimentos
peristlticos do intestino, devido ao aumento do volume da massa fecal pela reteno das
fezes. As fibras solveis, parcialmente fermentveis no intestino grosso, so particularmente
efetivas em promover alteraes benficas na microflora intestinal. Embora resistente s
enzimas do trato intestinal, ao passarem pelo intestino as fibras alimentares se expem s
enzimas produzidas por bactrias, as quais degradam seletivamente muitas das fraes que
integram as fibras. Tal processo de digesto denominado de fermentao, do qual
resultam diversos produtos, entre eles: cidos graxos de cadeia curta, CO2, H2, metano e
H2O. A extenso da fermentao depende da natureza das bactrias, do tempo de trnsito
ao longo do intestino grosso, da estrutura fsica e da composio qumica das fibras.
Atualmente usa-se o termo fibra diettica como a soma da lignina e dos polissacardeos da
dieta que no so digeridos pelas secrees digestivas humanas, diferindo da fibra bruta
que seria o resduo orgnico dos alimentos aps a eliminao da gua e dos lipdeos e
hidrlise quente com cidos e lcalis diludos.
Funo. Acredita-se que as fibras exeram suas funes atravs de sua capacidade
de hidratao e de aumentar o volume fecal e a velocidade de transito do bolo alimentar,
possuindo tambm capacidade de se complexar com outros constituintes da dieta, atravs
de vrios mecanismos, podendo arrastlos em maior quantidade na excreo
51
fecal. Desta forma, tanto nutriente essencial como substncias txicas podero ser
excretadas em maior ou menor quantidade, dependendo da qualidade e quantidade das
fibras presente na dieta. As pectinas e mucilagens, a hemicelulose tem maior capacidade de
ligar gua. A lignina relativamente apolar e muito menos higroscpica (no tem afinidade
com H2O) do que os demais componentes das fibras alimentares.
2.8.
QUESTES PROPOSTAS
Aminocidos e protenas
1.Escreva a frmula do mais simples amino-cido que possu carbono assimtrico. D o
nome oficial.
2. Que so amino-cidos essenciais? Quantos so ao todo?
3. O que um zwitterion?
4. O que uma ligao peptdica?
5. Que um grupo prosttico?
6. A serina em meio aquoso possu carter cido, bsico ou neutro? Justifique.
7. A forma helicoidal de uma protena corresponde a que tipo de estrutura?
8. A ligao peptdica determina o primeiro grau de estruturao das protenas, qual a fora
(ou ligao) que estabiliza a estruturao quaternria de uma protena?
9. Que tipos de protenas se conjugam com lipidios?
10. Existe diferena entre uma protena de origem vegetal de uma protena de origem
animal? Explique sua resposta?
11. Como a catalise de uma enzima insolvel?
12. Utilize um exemplo para usar a equao de Michaelis & Mentem.
13. Descreva o efeito da temperatura e do pH na atividade enzimtica. Utilize uma enzima
para explicar esses efeitos.
14. Qual a reao caracterstica das protenas em que a formao de cido pcrico?
15. (pesquisa) Demonstre a origem da equao de Henderson e Hasselbach.
16. (pesqisa) Como determina experimentalmente a constante de acidez de um composto
biologicamente ativo? Pode utilizar um exemplo.
17. (pesquisa) Que tecnicas utiliza para determinar o PM (massa molecular) de uma
protena alimentcia?
Carboidratos
18. Qual a diferena fundamental sob o ponto de vista qumico entre a glicose e a frutose?
19. D exemplo de dois compostos que sejam epmeros.
52
20. Por que a frutose que no possu grupo aldedo capaz de reduzir o licor de fehling?
21. Escreva a estrutura da -glicopiranose.
22. Qual o significado da letra D colocada antes de uma ose?
23. Explique o fenmeno da mutarrotao?
24. Qual o nmero total de ismeros pticos da glicose?
25. Descreva as reaes qumicas na determinao de carboidratos por Felhing
26. (pesqisa) possvel aumentar a solubilidade de hexosas? Como faria?
27. Que ligaes qumicas dos carboidratos alimentcios no so hidrolisadas pelas
enzimas? Explique mediante reao qumica.
28. (pesquisa) Como poderia desmetilar uma pectina?
Lipdeos
29. Qual a principal funo orgnica que caracteriza um lipdeo?
30. Qual a diferena estrutural entre um fosfatdeo e um glicerdeo?
31. Cite cidos graxos superiores que se encontram esterificdos na maioria dos glicerdeos.
35. Que lipdios alimenticios tem maior interesse a bioqumica de alimentos?
36. Compare a energia da combusto de um TG de cadeia curta com um TG de cadeia
longa saturada
37. Como um cido graxo Cis se pode converter em trans, explique mediante um
mecanismo de reao.
39. Qual a diferena entre um leo e uma gordura?
Captulo 3
1.
INTRODUO A BIOQUMICA
2.
3.
54
3.1.
HIDRLISE
A hidrlise dos acares nos alimentos est influenciada por diversos fatores, tais
como: pH, temperatura, configurao anomrica e tamanho do anel glicosdico. A hidrlise
dos carboidratos pode ser muito importante em certas tcnicas processamento e
conservao dos alimentos, podendo levar em certas ocasies a formao de cores
indesejveis e a incapacidade de formao de gis. A ligao glicosdica mais facilmente
destruda em meio cido do que em meio alcalino e segue o seguinte mecanismo:
55
80oC
90oC
-D-glicopiranosdeo de Me
2,82
13,8
76,1
-D-glicopiranosdeo de Me
6,01
15,4
141,0
DESIDRATAO E DEGRADAO
56
58
3.3.
ESCURECIMENTO ENZIMTICO
59
3.4.
ESCURECIMENTO NO ENZIMTICO
60
SAPONIFICAO
Trata-se da reao dos glicerdeos com NaOH ou KOH e est reao utilizada na
obteno do sabo comum. Utilizando-se NaOH obtm-se sabes slidos que tambm so
denominados sabes duros. Quando se utiliza KOH sabes lquidos ou pastosos e so
denominados de sabes moles. Exemplo:
61
IS
Manteiga
210-230
leo de algodo
190-200
leo de linhaa
180-195
leo de oliva
188-196
Toucinho
190-200
Aes dos sabes. A molcula de um sabo tem carter anftero, ou seja, ela
possui uma parte apolar (HIDPFOBA) que capaz de ligar-se a um lipdeo e possui
tambm uma extremidade polar (HIDRFILA) que capaz de dissolver a gua (Figura 3.5).
A sujeira impregnada no tecido, geralmente, um lipdeo e este insolvel na gua.
porque a gua polar e a gordura apolar.
HIDROGENAO
63
ndice de iodo (II). o nmero de gramas de iodo (I2) capaz de reagir com 100
gramas de leo ou gordura. O iodo capaz de romper as duplas ligaes atravs de uma
reao de halogenao. Exemplo
3.7.
Lipdeo
II
Manteiga
25 50
leo de amendoim
85 90
leo de linhaa
170 200
leo de baleia
110 150
Sebo bovino
30 50
leo de oliva
120-130
RANCIFICAO
O oxignio singlete reage diretamente com as ligaes duplas por adio formando
hidroperxidos diferentes dos que se observam na ausncia de luz e de sensibilizadores, e
que por degradao posterior originam aldedos, lcoois e hidrocarbonetos. A reao abaixo
exemplifica a fotoxidao:
Como pode ser observado, a autoxidaco dos lipdios est associada reao do
oxignio com cidos graxos insaturados e ocorre em trs etapas:
65
Iniciao ocorre a formao dos radicais livres do cido graxo devido retirada de
um hidrognio do carbono allico na molcula do cido graxo, em condies favorecidas por
luz e calor.
Propagao os radicais livres que so prontamente susceptveis ao ataque do
oxignio atmosfrico, so convertidos em outros radicais, aparecendo os produtos primrios
de oxidao (perxidos e hidroperxidos) cuja estrutura depende da natureza dos cidos
graxos presentes. Os radicais livres formados atuam como propagadores da reao,
resultando em um processo autocataltico.
Trmino dois radicais combinam-se, com a formao de produtos estveis
(produtos secundrios de oxidao) obtidos por ciso e rearranjo dos perxidos (epxidos,
compostos volteis e no volteis).
Para evitar a autoxidao de leos e gorduras h a necessidade de diminuir a
incidncia de todos os fatores que a favorecem, mantendo ao mnimo os nveis de energia
(temperatura e luz) que so responsveis pelo desencadeamento do processo de formao
de radicais livres. Tambm evitando a presena de traos de metais no leo, evitando ao
mximo o contato com oxignio e bloqueando a formao de radicais livres por meio de
antioxidantes, os quais, em pequenas quantidades, atuam interferindo nos processos de
oxidao de lipdios.
ndice de perxido (IP). Os perxidos formados na autoxidao so estimados
atravs da habilidade libertar o iodo do iodeto de potssio em soluo de cido actico
glacial. O ndice de perxido traduz esta medida e expresso em termos de miliequivalentes
de oxignio, por 100g de gordura.
3.8.
QUESTES PROPOSTAS
66
67
Captulo 4
Metabolismo Celular
1.
INTRODUO A BIOQUMICA
2.
3.
4.
METABOLISMO CELULAR
68
4.1.
INTRODUO
69
4.2.
COMPOSIO DA CLULA
71
4.3.
LOCALIZAO DO METABOLISMO
74
75
Figura 4.7
fagocitose.
de pinocitose e
METABOLISMO CELULAR
76
A hidrlise do ATP gera muita energia e uma molcula de ADP que tambm
energtica:
77
78
Figura 4.9 Respirao: (a) anaebia formando lactato; (b) anaerbia formado etanol; (c)
aerbia formando CO2 e gua.
4.5.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
QUESTES PROPOSTAS
O que so ribossomos e qual sua funo?
Qual o produto dos ribossomos do RER e qual seu destino?
Qual a substncia fabricada no REL?
Qual a funo dos lisossomos nem clulas que se alimentam por fagocitose?
O que autofagia e quando necessria?
Qual a principal diferena entre respirao e combusto?
Escreva a frmula geral da respirao e de onde vem a energia liberada nesse
processo?
Qual a funo da molcula de NADH?
Como se chama a segunda etapa da respirao aerbia? Onde ocorre?
Defina fermentao?
Qual o papel do oxignio na cadeia respiratria?
Qual a principal diferena entre uma clula animal e vegetal?Procarionte e
eucarionte?
Onde fica localizado o DNA e qual a sua funo?
Que tipo de alimento comea ser digerido na boca, que enzima participa da sua
digesto e que glndula a produz?
Quais so as enzimas produzidas pelo pncreas e da digesto de que alimentos
participam?
79
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
80
Captulo 5
1.
INTRODUO A BIOQUMICA
2.
3.
4.
METABOLISMO CELULAR
5.
INTRODUO
ALIMENTOS
ANLISE
81
BIOQUMICA
DE
82
5.2.
MARCHA DA ANLISE
84
Seleo do mtodo
Obteno da amostra
Processamento da amostra
A
amostra
solvel?
No
Realizao da
dissoluo
qumica
Sim
Mudana da
forma qumica
No
Propriedade
mensurvel?
Sim
87
C A = kX
(5-1)
Os resultados de uma anlise quantitativa somente podero ter o valor que dela se
espera na medida em que a poro do material submetida ao processo analtico
representar, com suficiente exatido, a composio mdia do material em estudo. A
quantidade de material tornada para a execuo da anlise relativamente pequena em
comparao com a totalidade do material em estudo, Portanto importante considerar os
seguintes fatores para tirar uma
amostragem:
88
Tamanho da amostra
100 mg ou mais
10-100 mg
1-10 mg
0,1-1,0mg
<0,1 mg
89
Nvel de analito
Majoritrio
1 a 100%
Minoritrio
0,01(100 ppm) a 1%
Constituinte-trao
<0,01%
Trao
Ultratrao
< ppb
N = p.(1 p ).(
d A .d B 2 PA PB 2
) (
)
r .P
d2
(5-2)
91
Identificar a populao
a ser analisada
Coletar aleatoriamente N
partculas (Equao 2-1) para
gerar uma amostra bruta
Reduzir o tamanho das
partculas e homogeneizar a
amostra bruta
No
Coletar aleatoriamente N
partculas
A
amostra tem
o tamanho adequado
para o
laboratrio?
Estocar a amostra de
laboratrio
Remover pores da amostra
para anlise no laboratrio
93
N =
t 2 .s a2
2
X r
(5-3)
de umidade, protena bruta e matria mineral, alimentos secos devem ser modos at passar
numa peneira de 20 mesh. Para ensaios que envolvem extrao de amostras midas, elas
devem ser modas at passar numa peneira de 40 mesh.
O preparo da amostra por desintegrao pode ser feito de trs maneiras:
a) Desintegrao mecnica: para amostras secas, utiliza-se moagem em moinho
tipo Wiley (martelo) ou similar. Para amostras midas, usa-se moedores do tipo para carnes
ou liquidificadores.
b) Desintegrao enzimtica: E til em amostras vegetais, com o uso de celulases.
Protease e carboidratases so teis para solubilizar componentes de alto peso molecular
(protenas e polissacardeos) em vrios alimentos.
c) Desintegrao qumica: Vrios agentes qumicos (uria, piridina, detergentes
sintticos, etc.)
tambm podem ser usados na disperso ou solubilizao dos componentes dos
alimentos.
5.4.11. Preservao da amostra
O ideal seria analisar as amostras frescas o mais rpido possvel. Mas nem sempre
isto possvel e, portanto, devem existir maneiras de preserv-las.
a) Inativao Enzimtica: Serve para preservar o estado original dos componentes
de um material vivo. Esse tipo de tratamento depende do tamanho, consistncia e
composio dos alimentos, enzimas presentes e as determinaes analticas que se
pretende.
b) Diminuio das Mudanas Lipdicas: Os mtodos tradicionais de preparo de
amostras podem afetar a composio dos extratos lipdicos. Portanto, deve-se resfriar a
amostra rapidamente antes da extrao ou congelar, se for estocar.
c) Controle de Ataque Oxidativo: A fim de reduzir as alteraes oxidativas,
recomenda-se a preservao a baixa temperatura (N lquido), para a maioria dos alimentos.
d) Controle do ataque microbiolgico: Para reduzir ou eliminar o ataque microbiano,
pode-se utilizar vrios mtodos: congelamento, secagem, o uso de conservantes, ou a
combinao de qualquer um dos trs. A escolha da melhor maneira de preservao vai
depender de: natureza do alimento, tipo de contaminao possvel, perodo e condies de
estocagem e tipo de anlise
5.5.
95
Titulo da Prtica
Objetivo
Concentrao de Solues
Anlise volumtrica de AR
Extrao
enzima
caracterizao
de
96
5.7.
LEGISLAO ESPECFICA
(em construo)
BIBLIOGRAFIA
LIVROS CONSULTADOS:
ALLINGER, N. L., CAVA M. P., JOHNSON C. R., LEBEL, N. A., STEVENS C. L. Qumica
orgnica. 2.ed. Rio de Janeiro : Guanabara Dois, 1978, p. 658 -660.
BERG, J.; TYMOCZKO, J.; STRYER, L Bioqumica. 6.ed. Rio de Janeiro: Guanabara &
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BOBBIO, F.O.; BOBBIO, P.A. Introduo Qumica de Alimentos. So Paulo:Livraria
Varela, 1992. 2ed, 223p.
CECCHI, H.M. Fundamentos Tericos
Campinas:UNICAMP, 2003. 2ed., 207p.
Prticos
em
Anlise
de
Alimentos.
CHAMPE, P. C.; HARVEY, R. A. Bioqumica; ilustrada. 2.ed. Porto Alegre: Artes Mdicas,
1997, p. 187-191.
FENNEMA, O. R. Qumica de los alimentos. 2.ed. Zaragoza: Editorial Acribia, 1993.
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RIBEIRO, E.P.; SERAVALLI, E.A.G. Qumica de Alimentos. So Paulo: Edgar Blcher,
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peach puree. Journal of Food Engineering, v. 39, p.161-166, 1999.
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99
Apndice - A
100
1.
1.1.
1.2.
(A-1)
P = m. g
Exemplo A-1 Suponha que voc tenha subido em uma balana e visto que o valor
de sua massa m=60 kg. Qual o valor de seu peso em N e kgf? Resposta= 600 N ou
60 kgf.
1.3.
O MOL E MILIMOL
Soluo:
(a)
= 6,022x10 23 tomos x
12,01 uma
1,66x10 24 gramas
x
= 12 g
1 tomo mol
1uma
(b)
1.4.
Hbz
HBz
1 mol HBz
= 0,0164 mol HBz
122,1 g HBz
1 mmol
= (2.000 mg HBz)x
= 16,4 mmol HBz
122,1 mg HBz
= (2,00 g HBz)x
m
V
(A-2)
Partes por milho (ppm) e partes por bilho (ppb). 1 ppm=1,00 mg/L e 1ppb=
1,00g/L
m
V
m
C =
V
C
=
ppm
ppb
soluto
(mg )
soluo
soluto
(A-3)
( L)
(g)
( L)
soluo
.10
(A-4)
ppm
m
m
soluto
(g)
soluo
(g)
.10
(A-5)
m
m
v/v = V
V
m/v = m
V
m/m =
soluto
.100%
(A-6)
soluo
soluto
(A-7)
.100%
soluo
soluto
(A-8)
.100%
soluo
mol ( soluto )
C = n L( soluo)
n
X
(A-9)
pX = log[ X ]
(A-10)
+
2.
2.1.
MDIA E MEDIANA:
A mdia de dois ou mais resultados o valor mdio obtido a partir deles, ou seja,
obtido pela diviso da soma das rplicas de medidas pelo nmero de medidas do conjunto:
N
x=
i =1
(A-11)
x=
Mediana =
2.2.
19,6 + 19,8
= 19,7 ppm
2
E =x x
i
104
xi xV
.100%
xV
(A-13)
19,8 20,0
100% = 1%
20
EXATIDO:
PRECISO:
2.5.
DESVIO ABSOLUTO:
a diferena entre um resultado obtido e a mdia aritmtica de vrias medies.
xi
(A-14)
Dados
Desvio(d)
3,87
0,03
3,95
0,05
3,89
0,01
Mdia=
3,90
105
2.6.
Figura A-1. Ilustrao da exatido e preciso usando a distribuio de dardos como modelo.
106
2.7.
Figura A-2. Erro absoluto na determinao de nitrognio por micro-Kjeldahl. Cada ponto
representa o erro associado a uma nica determinao. Cada linha vertical rotulada (xi
xV) representa o desvio mdio absoluto do conjunto de dados, do valor verdadeiro.
Fonte: SKOOG et al. (2006)
107
A Figura A-2 sugere que as anlises qumicas so afetadas por pelo menos dois
tipos de erros. Um tipo, chamado erro aleatrio (ou indeterminado), faz que os dados se
distribuam de forma mais ou menos simtrica em torno do valor mdio. Veja novamente a
Figura A-5 e observe que a disperso dos dados, e conseqentemente o erro aleatrio, para
os analistas 1 e 3 so significativamente inferiores, quando comparados com os dos
analistas 2 e 4. Em geral, o erro aleatrio de uma medida refletido por sua preciso.
Os erros aleatrios, ou Indeterminados, afetam a preciso dos resultados.
Um segundo tipo de erro, denominado erro sistemtico (ou determinado), faz que
a mdia de um conjunto de dados seja diferente do valor aceito. Por exemplo, a mdia dos
resultados mostrados no Exemplo 1-5 tem um erro sistemtico de cerca de 0,2 ppm de
Fe. Os resultados dos analistas 1 e 2, na Figura A-2, tm erros sistemticos pequenos, mas
os dados dos analistas 3 e 4 revelam erros sistemticos de cerca de 0,7% e 1,2% para
o nitrognio. Geralmente, os erros sistemticos presentes em uma srie de rplicas de
medidas fazem que os resultados sejam muito baixos ou muito altos. Um exemplo de um
erro sistemtico a perda despercebida do analito durante o aquecimento de uma amostra.
Os erros sistemticos, ou determinados, afetam a exatido dos resultados.
Um terceiro tipo de erro o erro grosseiro. Os erros grosseiros diferem dos erros
indeterminado e determinado. Ocorrem, normalmente, apenas de forma ocasional, so
freqentemente grandes e podem causar resultados tanto altos quanto baixos. Esses erros
so, com freqncia, resultados de erros humanos. Por exemplo, se uma parte de um
precipitado for perdida antes da pesagem, os resultados analticos sero mais baixos. Tocar
um pesa-filtro com os dedos quando sua massa vazia j foi determinada far a leitura da
massa de um slido pesado no frasco contaminado ser mais alta. Os erros grosseiros levam
ocorrncia de valores anmalos, resultados que diferem marcadamente de todos os
outros dados de um conjunto de rplicas de medidas. No h evidncia da ocorrncia de
erro grosseiro na Figura A-2.
Um valor anmalo um resultado ocasional que ocorre em uma sriede
rplicas de medidas, que difere significativamente do restante dos resultados.
2.8.
Existem trs tipos de erros sistemticos: (1) Erros instrumentais causados pelo
comportamento no ideal de um instrumento, por calibraes falhas ou pelo uso de
condies inadequadas. (2) Erros de mtodo surgem do comportamento qumico ou
fsico no ideal de sistemas analticos. (3) Erros pessoais resultam da falta de cuidado,
falta de ateno ou limitaes pessoais do analista.
As maneiras de reconhecer e ajustar o erro sistemtico de um mtodo so: (a)
anlise de uma amostra padro; (b) anlise independente; (c) determinao de um branco e
(d) variao do tamanho da amostra.
3.
x=
(A-15)
i =1
x
i =1
3.2.
DESVIO
AMOSTRA (S):
(A-16)
N
DA
POPULAO(),
QUANTIDADE
(Z),
DESVIO
PADRO
DA
(xi )2
(A-17)
i =1
z=
(x )
(A-18)
s=
_ 2
(x x)
i
(A-19)
i =1
N 1
_
N
( xi)
N
2 i=1
(
)
x
i
N
s = i =1
N 1
(A-20)
110
3.3.
N1
S=
3.4.
N2
N3
(x x ) + (x x ) + (x
i
i =1
j =1
k =1
x3 ) 2 + ...
N1 + N 2 + N 3 + ... Nt
(A-21)
DPR = s r =
(A-22)
x
O coeficiente de variao, CV, o desvio padro relativo em termos porcentuais.
CV =
s
_
100%
(A-23)
x
Exemplo A-6 Os seguintes resultados foram obtidos para rplicas da determinao de
chumbo em uma amostra de sangue: 0,752; 0,756; 0,752; 0,751 e 0,760 ppm de Pb.
Calcule: (a) a mdia, (b) o desvio padro, (c) a varincia, (d) DPR, (e) CV para esse
conjunto de dados. Resposta: 0,754 ppm Pb; s=0,004 ppm de Pb; s2=1,4x10-5; DPR=5,0
ppmil; CV=0,5%. Resolver no Excel e na Calculadora.
111
(a) x =
x
i =1
3,771
= 0,7542 0,754ppm Pb
5
x i (3,771)2 14,220441
=
(b)
=
= 2,8440882
N
5
5
0,038
x1.000 ppmil= 5,0 ppmil
0,754
0,0038
(e) CV =
x100%= 0,50%
0,754
(d) DPR =
Glicoses
Mdia, mg/L
1.100,3
Desvio
Padro
16,8
996,2
798,8
771,9
1.182,80
1.086,80
2.950,86
17,2
16,5
22,2
s comb =
6.907,89
= 18,58 19 mg/L
24 4
Observe que o valor combinado uma estimativa melhor de do que qualquer valor
individual de s mostrado na ltima coluna.
112
3.5.
Exemplo
adio e subtrao:
y=a+b-c
multiplicao e diviso:
y=axb/c
Exponenciao:
y=ax
Logaritmo
y=log(a)
Antilogaritmo
Desvio padro
Equao
s +s +s
= (
Sa 2
S
S
) + ( b ) 2 + .( c ) 2
a
b
c
= x( sa )
y
a
y
= 0,434 .( s a )
y
a
Y=antilog(a)
= 2,303 .( s a )
(A-24)
(A-25)
(A-26)
(A-27)
(A-28)
s
4.
0,02
0,03
0,05
ALGARISMOS SIGNIFICATIVOS
113
4.1.
4.2.
24 x 4,52
= 1,08
100,0
24 x 4,02
= 0,965
100,0
Pela regra prtica, a primeira resposta deveria ser arredondada para 1,1 e a
segunda para 0,96. Se, entretanto, considerarmos uma incerteza unitria no ltimo dgito de
cada nmero presente no primeiro cociente, as incertezas relativas associadas a cada um
desses nmeros so 1/24, 1/452 e 1/1.000. Como a primeira incerteza relativa muito maior
que as outras duas, a incerteza relativa no resultado tambm 1/24, a incerteza absoluta
ento se torna
1,08 x
1
= 0,045 0,04
24
0,965 x
1
= 0,040 0,04
24
4.3.
ARREDONDAMENTO DE DADOS
5.
INTERVALOS DE CONFIANA
C para = x
z.
(A-29)
117
Tabela A-2
de z
Nvel de confiana, %
50
68
80
90
95
99
99,7
99,9
z
0,67
1,00
1,28
1,64
1,96
2,58
3,00
3,29
IC para = x
ts
N
(A-30)
5.2.
TESTE DE HIPTESE
z=
Teste estatstico
x o
(A-31)
x o
z=
s
N
(A-32)
Se z zcrit ou se z - zcrit
Se t tcrit ou se t - tcrit
> o rejeitar Ho
Se z zcrit
Se t tcrit
< o rejeitar Ho
Se z - zcrit
Se t - tcrit
z=
x o
27,7 30,8
= 3,26
5,2
30
tambm que como z-2,58, rejeitamos Ho ao nvel de confiana de 99%. Para se estimar a
probabilidade de se obter um valor mdio = 30,8 kcal/mol, precisamos encontrar a
probabilidade de obter o valor de z de 3,26. A partir da Tabela A-2, a probabilidade de se
obter um valor z to grande devido a erros aleatrios apenas de 0,2%. Tudo isso nos leva
a concluir que a mdia obtida pelos estudantes realmente diferente da mdia descrita na
literatura e no apenas o resultado de erros aleatrios.
x1 x2
t=
N1 + N 2
s
N1 N 2
(A-33)
Exemplo 1-14 Dois barris de vinho analisados ao seu teor de lcool para se
determinar se eles eram provenientes de fontes distintas. Com base em seis anlises, o teor
mdio do primeiro barril foi estabelecido como 12,61% de etanol. Quatro anlise do segundo
barril forneceram uma mdia de 12,53% de lcool. As dez anlises geraram um desvio
padro combinado scomb de 0,070%. Os dados indicam diferena entre os vinhos?
Soluo:
A hiptese nula Ho: 1 =2; e a alternativa Ha: 1 2. Nestas condies, o valor
de t calculado atravs da Equao (1-34):
_
x1 x2
12,61 12,53
t=
=
= 1,771
N1 + N 2
6+4
s
0,07
N1 N 2
6 x4
O valor crtico de t para 10-2=8 graus de liberdade, em um nvel de confiana de
95%, de 2,31. Como 1,771 < 2,31, aceitamos a hiptese nula em um nvel de confiana de
95% e conclumos que no h diferena no teor de lcool dos vinhos. A probabilidade de se
ter um valor de t de 1,771 pode ser calculada usando a funo DISTT() do Excel e
DISTT(1,771,8,2)=0,11. Desta forma existe 10% de chance de que poderamos ter um erro
dessa dimenso devido a um erro aleatrio.
Erro nos Testes de Hiptese. Um erro do tipo I ocorre quando Ho rejeitada,
embora seja verdadeira. Em algumas reas da cincia, um erro do tipo I chamado falso
negativo. Um erro tipo II ocorre quando Ho aceita e, an realidade, falsa. Algumas vezes
essa situao denominada falso positivo.
121
Apndice - B
122
PRTICA N 1
CONCENTRAO DE SOLUES
OBJETIVOS:
Determinar a concentrao acar em solues atravs de trs tcnicas
diferentes: (1) refratmetria; (2) atravs de balo volumtrico; e (3) utilizando
densmetro ou aermetro de Baum.
Determinar o erro relativo, preciso e a exatido dos mtodos utilizados.
FUNDAMENTOS:
Encontram-se no anexo da apostila
MATERIAL:
Densmetro ou aermetro de Baum escala de 0 a 20 oB
Banho termostatizado
Pipetas graduadas
Algodo
Papel macio
Balo volumtrico
sacarose p.a
Acar
MTODO:
Preparo da soluo de acar a 27,5% m/m
Pesar 355 gramas (m2) de gua;
Pesar 135 gramas (m1) de acar em copo bquer de 200 mL;
Determinar a concentrao em %m/m (p/p) da soluo atravs da frmula abaixo:
%m / m =
m1
100%
m1 + m2
Determinar o erro relativo (ER) para cada mtodo atravs da frmula abaixo:
ER =
xi xV
100 %
xV
sendo:
xi o valor encontrado e xV o valor real ou aceito como verdadeiro.
Todos seus clculos devem ser colocados na tabela B1 .
Tabela B1. Resultados.
Grupo
m1
(g)
m2
(g)
m/m
(%)
Mtodo (1)
Brix
ER
(%)
(%)
Mtodo (2)
Brix
ER
(%)
(%)
Mtodo (3)
o
Brix
ER
(%)
(%)
T
( C)
o
1
2
3
Mtodos: (1) refratmetria; (2) balo volumtrico; (3) densmetro.
.
QUESTES PROPOSTAS
1. Utilizando os resultados de seus colegas, pode-se dizer que os resultados encontrados
so precisos e exatos? Por qu?
2. Partindo de 5 litros de uma soluo a 65 % (xarope), quantos litros voc prepararia de
soluo a 33 % (calda)?
3. Qual o % m/v da soluo de acar preparada em sala de aula?
4. Identifique os tipos de erros encontrados nos dados experimentais?
124
PRTICA N 2
DETERMINAO DE CINZAS NOS ALIMENTOS
FUNDAMENTOS:
A determinao dos constituintes minerais nos alimentos pode ser dividida em duas
classes: (1) Determinao da cinza total; (2) Determinao dos componentes individuais da
cinza.
A determinao de cinza total utilizada como indicativo de vrias propriedades,
tais como:
a) Largamente aceito como ndice de refinao para acares e farinhas. Nos
acares, uma cinza muito alta dificultar a cristalizao e descolorizao. Na farinha, a
quantidade de cinza influir na extrao.
b) Nveis adequados de cinza total so um indicativo das propriedades funcionais de
alguns produtos alimentcios, por exemplo, a gelatina. Em gelias de frutas e doces em
massa, a cinza determinada para estimar o contedo de frutas.
c) um parmetro til para verificao do valor nutricional de alguns alimentos e
raes. Alto nvel de cinza insolvel em cido indica a presena de areia.
J os componentes individuais da cinza podem ser divididos naqueles que so:
a) indispensveis para o metabolismo normal e geralmente constituem os elementos
da dieta essencial;
b) aqueles que no tm nenhuma funo conhecida ou at podem ser prejudiciais
sade. Estes ltimos podem aparecer do solo, provenientes da pulverizao das plantas
com agrotxicos ou como resduos de processos industriais. Alguns resduos metlicos
podem ter efeitos txicos como Pb e Hg. A oxidao do cido ascrbico (vitamina C) e a
estabilidade de sucos de fruta so afetadas por Cu. Alguns componentes minerais podem
aumentar e outros impedir a fermentao de produtos fermentados.
Alm destas duas classes de determinao de cinzas, outros trs tipos so tambm
importantes para a caracterizao da pureza e adulterao de amostras:
Cinza solvel e insolvel em gua: o mtodo bastante utilizado para a
determinao da quantidade de frutas em gelias e conservas.
Alcalinidade da cinza: as cinzas de produtos de frutas e vegetais so alcalinas,
enquanto de produtos crneos e certos cereais so cidas. A alcalinidade das cinzas e
devido presena de sais de cidos fracos como o ctrico, tartrico e mlico, que na
incinerao so convertidos nos carbonatos correspondentes. Esta tcnica utilizada para
verificar adulterao em alimentos de origem vegetal ou animal.
Cinza insolvel em cido: esta determinao importante para a verificao da
adio de matria mineral em alimentos como sujeira e areia em temperos, talco em
confeitos e sujeira em frutas.
126
OBJETIVOS:
Determinar cinza seca de uma amostra de leite em p.
MATERIAL:
Dessecador;
Mufla;
Cadinho de platina ou porcelana;
Balana analtica
Vidraria comum de laboratrio
MTODO:
Pesar amostra (cerca de 5 g) num cadinho de platina ou porcelana, o qual deve ter
sido previamente incinerado, esfriado e tarado. Depois o conjunto deve ser incinerado numa
mufla, inicialmente a temperatura mais baixa e depois a 500- 600 C. A mufla o
equipamento utilizado para incinerar a matria orgnica da amostra, uma espcie de forno
que alcana altas temperaturas. Quando a cinza estiver pronta, isto , no restar nenhum
resduo preto de matria orgnica, o conjunto retirado da mufla, colocado num
dessecador para esfriar e pesado quando atingir a temperatura ambiente. A diferena entre
o peso do conjunto e o peso do cadinho vazio d a quantidade de cinza na amostra.
Temperaturas de incinerao na mufla:
525 C: frutas e produtos de frutas, carne e produtos crneos, acar e produtos
aucarados e produtos de vegetais.
550 C: produtos de cereais, produtos lcteos (com exceo da manteiga, que
utiliza 500 C), peixes e produtos marinhos, temperos e condimentos e vinho.
600 C: gros e rao.
Tempo de incinerao:
O tempo difcil de especificar, pois varia com o produto e com o mtodo. Existe
especificao somente para gros e rao, que de duas horas. Para os demais produtos,
a carbonizao est terminada quando o material se toma completamente branco ou cinza,
e o peso da cinza fica constante. Isto costuma levar muitas horas. Quando o tempo est
muito prolongado, talvez pela formao de uma matria mineral fundida, o resduo deve ser
molhado, seco e reaquecido, at que aparea uma cinza branca. Quando o tempo de
anlise muito longo, podemos acelerar o processo com adio de: glicerina, lcool,
oxidantes qumicos.
127
PRTICA N 3
PREPARO DO ACAR INVERTIDO
OBJETIVOS:
Testar diferentes formulaes para hidrlise da sacarose e acompanhar a reao
por polarometria.
Determinar o teor de acar em cada formulao atravs do refratmetro.
FUNDAMENTOS:
O acar invertido uma mistura equimolar de D-glicose e D-frutose obtido pela
hidrlise da sacarose. A reao pode ser catalisada por cidos ou pela invertase. A
sacarose um dissacardeo e a D-glicose e D-frutose so monossacardeos, (ALLINGER,
1978).
Sacarose
D-glicose
D-frutose
A figura 2B mostra uma substncia opticamente ativa, por exemplo, uma soluo
de sacarose, capaz de desviar a luz polarizada. O desvio medido pelo prisma mvel que
girado de certo ngulo para podermos ver novamente a luz com mxima intensidade. A
leitura do ngulo o desvio da luz polarizada e quando esse desvio para direita (no
sentido horrio) dizemos que a substncia dextrgera e convencionamos por d ou (+). Se
o desvio para esquerda (no sentido anti-horrio) dizemos que a substncia levgera: l ou
(-).
[]=
rotao especfica______________
comprimento do tubo (dm) x concentrao(g/mL)
PE em soluo
PE em forma cristalina
-D-Frutose
100-175
180
-D-Glicose
40-79
74
-D-Glicose
<-D-Glicose
82
Sacarose
100
100
130
MATERIAL
Polarmetro e refratmetro.
Banho termostatizado
Pipetas graduadas
Algodo
Papel macio
Etanol
Sacarose p.a
cido ctrico p.a
cido clordrico p.a
cido tartrico p.a
Bicarbonato de sdio p.a
MTODO
CALIBRAO DO POLARMETRO
Calibrar o polarmetro Jena usando gua destilada, antes de encher o tubo de 2
dm, verifique se a lmpada de sdio est suficientemente aquecida (ligar o
instrumento aproximadamente 15 minutos antes do uso) e que a interfase dos
campos iluminado e escuro fique no zero das escalas, do contrrio estimar este
erro.
Encher o tubo de 2dm com gua destilada at que se sobre passe a borda
superior evitando dessa forma a presena de bolhas de ar quando se coloca o
vidro na tampa.
Faa a rotao necessria para encontrar a interfase de mudana dos campos
de escuro para claro e vice-versa. No ponto exato desta interfase efetua-se a
leitura na escala de graus positivos ou negativos.
Anote a temperatura.
Repetir no mnimo trs vezes, essa leitura.
O desvio padro destas leituras no deve ser superior a 5%.
Esta leitura corrigir as suas demais leituras.
P1
P2
Glicose
Sacarose
Formulaes
P1
P2
P3
Brix(i) Brix(f)
T (OC)
Observaes
1
2
3
4
5
QUESTES PROPOSTAS
1. Por que o acar invertido tem poder edulcorante maior que a sacarose?
2. O que uma substncia opticamente ativa?
3. Cite algumas aplicaes do acar invertido?
4. Qual a vantagem de uma hidrlise enzimtica em relao a hidrlise cida?
5. A hidrlise do acar invertido preparado na indstria foi utilizando catlise cida. Por
que foi utilizado um cido como catalisador e no uma base?
6. Seria possvel acontecer uma inverso da sacarose durante a quimificao j que o suco
gstrico rico em HCl?
133
PRTICA N 4
ANLISE VOLUMTRICA DE ACARES REDUTORES
OBJETIVOS:
Determinar AR de diferentes formulaes de acar invertido (Prtica 1) e seu
rendimento;
Determinar os slidos solveis e AR de uma amostra de suco de fruta.
FUNDAMENTOS:
Os acares redutores so aqueles que possuem em sua molcula um grupo
aldedo ou cetnico livre e que so facilmente oxidveis. Somente so redutores aqueles
glicdeos que tem a oxidrila do carbono anmero livre. A ao redutora desses carboidratos,
geralmente monossacardeos, caracterizada pela sua capacidade de reduzir ons
metlicos Cu2+ e Ag2+ em soluo alcalina.
Alguns dissacardios, como a sacarose, alm dos polissacarfdios, como o amido,
em seu estado naturall no so redutores; entretanto, podem ser considerados
potencialmente redutores, porque, cindindo-se as ligaes que comprometem os grupos de
carter redutor, por hidrlise cida ou enzimtica, obtm-se monmeros, acares
redutores.
O mesmo ocorre com o cido algnico (existente nas algas), que, por hidrlise cida,
origina molculas de cido manurnico, o qual tambm agente redutor.
O teor de acar dosado em produto carboidratado sem sofrer hidrlise recebe o
nome de acar redutor (AR), sendo normalmente expresso em % de glicose (P/P: g de
glicose em 100 g do produto). Quando se pratica a hidrlise, obtm-se o teor de acares
redutores totais (ART), igualmente expresso como % de glicose.
Os acares no redutores so obtidos pela diferena entre os acares redutores
totais e os acares redutores (ART - AR) e so expressos como % de sacarose, amido,
cido algnico, etc., dependendo da matria prima em anlise.
O mtodo volumtrico comumente mais usado o mtodo de Eynon-Lane, que
utiliza as solues reagentes de Fehling, modificadas por Soxhlet, as quais consistem de
duas solues; urna de CuSO4. e outra de tartrato duplo de Na e K (sal de Rochelle) em
soluo alcalina, Estas solues, quando misturadas em partes iguais, formam um
complexo de cor azul intenso de cupro-tartrato de Na e K, o qual pela ao de um agente
redutor, forma um precipitado vermelho de xido cuproso, Cu20. Assim, os metais, quando
reduzidos, passam de um estado de valncia superior para outro, inferior. Nesses casos, as
reaes so acompanhadas de variao de cor ou formao de precipitado.
MATERIAL:
Sol. de Fehling A e B
Sol. de Ferrocianeto de K a 15%
Sol. de acetato ou sulfato de Zn a 30%
Vidraria comum de laborattio
Soluo padro de glicose 5% m/v
MTODO:
DETERMINAO DE SLIDOS SOLVEIS
Obter o suco de sua amostra, aps, medir o oBrix e a densidade, anotar temp. e
expressar como %SS.
QUESTES PROPOSTAS:
135
1. Baseado nos seus resultados obtidos nessa prtica, qual o rendimento da sua prtica 1?
2. Por que a frutose um acar redutor j que os grupos cetnicos no reduzem o licor de
Fehling?
3. Por que a sacarose no redutora?
4. Qual o significado dos slidos solveis?
5. Como voc proporia uma marcha analtica para determinar os acares redutores totais e
os no redutores na sua formulao (prtica 1) ?
6. Por que a determinao dos acares redutores volumtrica?
7. Qual a finalidade da soluo a 5% m/v de glicose?
136
PRTICA N 5
ANLISE DE LEOS E GORDURAS
OBJETIVOS:
Determinar os principais parmetros de qualidade em leos: cor, acidez livre,
ndice de saponificao, ndice de iodo e insaponificveis;
Comparar tais parmetros para diferentes amostras de leos vegetais.
CONSIDERAES:
Os mtodos utilizados para caracterizar os leos vegetais e gorduras animais esto
baseados na AOCS, 1980 e VILLAVECCHIA, 1937.
MATERIAS E MTODOS:
IDENTIFICAO DA AMOSTRA
Amostra
Data da Compra
Marca
Lote
UMIDADE E VOLTEIS
Definio: Este mtodo determina a umidade e alguns outros materiais volteis na
amostra nas condies citadas abaixo.
Aplicao: Aplicvel em geral para leos gorduras e, incluindo emulses.
Procedimento: Em um pesa-filtro de alumnio, cadinho de porcelana ou copo bquer
devidamente tarado com um pequeno basto de vidro em seu interior, usar de 8 a 10 g de
amostra. Aquecer uma chapa eltrica (chama) na temperatura de 110o C por um perodo de
30 minutos, agitando levemente e com cuidado, com o basto - com tempo espaado - de
acordo com umidade aparente.
Levar a estufa a 110o C - 115o C por um perodo de 30 a 60 minutos.
%Umidade e volateis =
(P1- P2)
x100 %
P.A
Sendo:
Tara = peso do pesa filtro em gramas;
P1= peso do pesa filtro mais amostra em gramas;
P2= peso do pesa filtro com amostra j sem umidade e volteis em gramas;
Peso da amostra = P1- tara em gramas.
Amostra
Data
Tara
P1
P2
Peso
Amostra
Umidade
volteis
Cor
Anlise dimensional:
ml NaOHx
138
Amostra (g)
56,4+ 0,2
28,2+0,2
7,05+0,05
7,05+0,05
3,525+0,001
mL lcool
50
50
75
100
100
NaOH (N)
0,1
0,1
0,25
0,25 a 1
1,0
FONTE: AOCS,1980
Amostra
Data
Peso da
Amostra (g)
Volume de
NaOH (mL)
Acidez
Livre (%)
Insaponifi cavel =
Clculos:
Tara = peso do copo bquer previamente tarado em gramas;
PR= resduo - tara do bquer em gramas;
AGR= peso de cidos graxos no resduo da amostra
AGR= mL de NaOH x N x 0,282
Insaponifi cavel =
(PR - AGR)x100
P.A
Insaponificavel(c/branco) =
Amostra
Data
Tara
P.A (g)
P.A
PR (g)
AGR (g)
Insaponificvel
NDICE DE SAPONIFICAO
Definio: O ndice de saponificao, tambm designado ndice de Koettsdorfer
(nome do autor do mtodo) o nmero de miligramas de hidrxido de potssio necessrios
para neutralizar os cidos graxos livres e saponificar os steres contidos em 4 g de gordura,
leo vegetal ou voltil, cera, resina, blsamo e demais substncias de composio similar.
Portanto, este ndice representa a quantidade de hidrxido de potssio representada
em dcimos por cento, necessrios para neutralizar todos os cidos graxos, tanto livres
como combinados, contidos em uma substncia. O ndice de Saponificao tambm acusa
as alteraes de uma amostra, por
adio de matrias insaponificveis,
leos minerais, etc..
140
Preparao da amostra.
Instrumentao necessria:
Erlenmeyer de 250 mL;
Tubo de refluxo de ar;
Banho de areia;
Pipeta de 25 mL;
Bureta de 25 ou 50 mL.
Reagentes:
Soluo alcolica de potassa custica (0,5N) meio normal
cido clordrico (0,5N) meio normal
Soluo de fenolftalena
Procedimento: Em um balo de 250 mL pesar 1 a 3 g de amostra; adicionar 25 cm3
de soluo alcolica de potssio, tomando cuidado para que por ocasio do esvaziamento
da pipeta, sempre vertam as mesmas gotas finais em todas as provas.
Coloca-se em refluxo , agitando de vez em quando, at completar o perodo de 30
minutos. Retira-se do refluxo, colocam-se 8 a 10 gotas de soluo de fenolftalena e titula-se
o excesso de potssio livre com cido clordrico (0,5N).
Simultaneamente, efetua-se uma prova branca colocando-se 25 cm de potassa
alcolica, sem adicionar da gordura e proceder-se da idntica maneira.
A diferena entre a quantidade do cido clordrico (0,5N) com a prova branca,
deduzida e tem-se a quantidade de potassa necessria para a saponificao completa da
matria graxa. Multiplicando-se por 28,05 e dividindo-se pelo peso da amostra obtm-se o
ndice de saponificao.
Clculos:
I.S =
(PB - PR)x28,05
P.A
Sendo:
PB = prova branca em mL
PR = prova real em mL
P.A = peso da amostra em gramas
Amostra
Data
P.A
(g)
PB
(mL)
141
PR
(mL)
IS
QUESTES PROPOSTAS
1. Qual o significado fsico-qumico e a importncia das seguintes anlises:
(a) acidez acidez
(b) umidade e volteis
(c) ndice de saponificao
(d) insaponificveis
2. Qual a concluso que voc chegou de seus resultados?
3. Como voc determinaria ou prepararia em laboratrio:
(a) O grau de saturao do leo de oliva e do sebo?
(b) Qual apresenta maior grau de saturao?
(c) Qual a relao do grau de saturao com o fato do sebo der uma gordura e o azeite ser
um leo?
(d) A rancidez do leo de oliva e do sebo?
(e) Qual a relao da rancidez com o grau de saturao? E por qu?
(f) Um litro de uma soluo aquosa de NaOH a 1,ON? a mesma coisa que 1,O L de
soluo aquosa a 1,0 M?
(g) Uma soluo aquosa de NaOH a 0,1N a partir da soluo preparada na letra (f)?
100 mL de soluo alcolica de NaOH a 0,5N?
4. Por que o leo de oliva virgem verde e o refinado levemente amarelo?
5. A partir do ndice de saponificao determinado em suas anlises, determine:
(a) A massa molecular (MM) e o teor de glicerol do leo de oliva e do sebo industrial?
(b) Qual dos dois apresentou maior teor de glicerol?
(c) Quantidade de soda castica para saponificar 1tonelada de sebo?
6. Sob o aspecto nutricional, responda:
(a) O valor energtico de 1grama de sebo maior, menor ou igual a 1grama de leo?
(b) Quem so mais energticos os lipdeos, carboidratos ou as protenas?
(c) Quais os principais cidos graxos encontrados no leo de oliva e no sebo industrial e sua
importncia nutricional?
(d) Como se d a digesto dos leos em nosso organismo?
(e) Por que se recomenda utilizar na
animais?
7. Com respeito ao colesterol:
(a) Qual a sua funo orgnica?
(b) Quais os tipos de colesterol?
(c) Qual a sua relao com os insaponificveis presentes nos leos vegetais?
8. Hoje no mercado existem diversas marcas e tipos de leos vegetais. Baseado nos seus
conhecimentos adquiridos em sala de aula qual o leo que apresenta melhor caractersticas
nutricionais para ser consumido e por qu?
143
PRTICA N 6
EXTRAO DE LEOS E GORDURAS POR SOXHLET
FUNDAMENTOS:
Extrao da amostra seca, finamente dividida, colocada em extrator com
condensador a refluxo, mediante ter anidro ou ter de petrleo, at esgotamento completo.
Evaporao do solvente e secagem do extrato etreo, seguida de pesagem at peso
constante.
OBJETIVOS:
Determinar o teor de leo em diferentes amostras de oleaginosas utilizando o
mtodo soxhlet.
MATERIAL:
ter etilico anidro ou ter de petrleo sem resduo de
evaporao, com ponto de ebtiliio entre 35 e 38oC e que destila
cerca de 95% a 54oC.
Nota.
MTODO:
Pegue uma amostra e moa se necessrio em uma cpsula.
Prepare um cartucho de alumnio, pondo uma mecha de algodo no fundo.
Pese 10g de amostra, enrole-a num papel filtro e ponha tudo no cartucho e
coloque mais um algodo para tampar o cartucho.
Tare um balo de extrao (P1) de 250 mL e adicione 125 mL de solvente.
Ponha o cartucho no intermedirio, concete ao condensador e ao balo e ponha
em refluxo por 3 horas. O solvente condensado deve cair no centro do cartucho
razo de no mnimo 150 gotas por minuto.
QUESTES
P2 - P1x 100
Pesoamostra
PROPOSTAS
145
PRTICA N 7
DOSAGEM DE PROTENAS POR KIELDAHL
FUNDAMENTOS:
O mtodo foi proposto por Kjeldahl na Dinamarca em 1883, quando estudava
protena em gros. O mtodo original sofreu vrias modificaes, mas continua sendo ainda
o mais utilizado na determinao de protena.
Este mtodo determina N orgnico total, isto , o N protico e no protico orgnico.
Porm, na maioria dos alimentos, o N no protico representa muito pouco no total. A razo
entre o nitrognio medido e a protena estimada depende do tipo de amostra e de outros
fatores.
Por exemplo, no trigo esta razo afetada pela variedade, condies de crescimento
e quantidade e tipo de fertilizante utilizado. Para converter o nitrognio medido para
protena, devemos multiplicar o contedo de nitrognio por um fator arbitrrio, que
representa um fator mdio para o material em estudo, que 5,7 para trigo e 6,25 para
alimentos em geral.
O procedimento do mtodo baseia-se no aquecimento da amostra com cido
sulfrico para digesto at que o carbono e hidrognio sejam oxidados. O nitrognio da
protena reduzido e transformado em sulfato de amnia. Adiciona-se NaOH concentrado e
aquece-se para a liberao da amnia dentro de um volume conhecido de urna soluo de
cido brico, formando borato de amnia. O borato de amnia formado dosado com uma
soluo cida (HCI) padronizada. Existe uma segunda maneira de recolher a amnia, em
urna soluo cida (H2S04 padro) em excesso, e depois titular o cido que no reagiu com
a amnia, com uma soluo bsica padronizada (NaOH). Esta segunda maneira tem a
desvantagem de necessitar de duas solues padronizadas e tambm de fazer a
determinao indiretamente.
Reaes envolvidas na anlise
Digesto com H2S04, K2S04 e catalisador metlico.
OBJETIVOS:
Determinar o teor protena em uma amostra de soja.
MATERIAL:
Selenio em p.
suprimindo-se o calor que gera o vapor em G, este balo esfria e causa vcuo, o
qual suga o contedo, agora livre da amnia, de A, para o balo R, sem que haja
necessidade de desconectar a aparelhagem toda, que fica pronta para receber
novo material digerido (nova amostra).
MTODO:
Pesar em papel de filtro de cinza desprezvel 3 g de sulfato de potssio anidro,
0,03 g de selnio em p e 0,5 g da amostra; fechar o papel e introduzir no balo
Kjeldahl A - (Fig. 1).
Adicionar 20 ml de H2 S04 conc. e fazer a digesto, em capela, mantendo o balo
inclinado a cerca 60~ iniciar com fogo lento, virando o balo vrias vazes no
incio, Depois que o digerido ficou claro (1 a 2 horas), marcar mais 30 minutos,
para completar a digesto.
Esfriar e levar, quantitativamente, a balo volumtrico de 100 ml, lavando o
balo A com pequenas. quantidades de gua destilada; completar os 100 ml
com gua.
Pipetar 25 ml do balo volumtrico (peso da amostra 4) para o balo B do
aparelho destilador, previamente montado, juntando um pouco de gua
destilada. Conectar o balo ao conjunto, bem vedado.
Colocar, em Erlenmeyer de 250 ml (E), 20 ml de cido brico a 4% em peso e
algumas gotas de indicador misto, O Erlenmeyer deve ser colocado em suporte
de altura graduvel. A extremidade do condensador E deve ficar, sempre,
mergulhada na soluo receptora do destilado.
Adicionar no funil C, 20 ml de NaOH a 40% em peso.
Verificar se as conexes esto t~das bem adaptadas e ligar a gua do
condensador E.
Acender o gs. Quando a ebulio estiver uniforme e o vapor borbulhar no balo
B, deixar escorrer, aos poucos, a soluo de NaOH a 40%, contida no funil C, ou
diretamente, atravs de alimentador (quando existe) inserido no dedo frio D,
para dentro do balo B em ebulio. Pelo incio da passagem da amnia, o
indicador no receptor F mudar de colorao.
Recolher o destilado a 3/4 do volume d Erlenmeyer receptor, mais ou menos.
No final da destilao h ebulio mais violente no balo B, quando se pode
interromper o processo.
Para finalizar a destilao, proceder da seguinte maneira:
a) baixar o Erlenmeyer E com o destilado;
b) desconectar a parte superior do condensador E do conjunto;
c) lavar, com pouca gua destilada, a parte superior do condensador,
recolhendo o llquid no Erlenmeyer;
d) fechar o gs; (quando se usa gerador de vapor, Figura 5B, fechar a
vlvula de segurana P e esperar que, por esfriamento de G o lquido
de A seja aspirado para R, sendo, aps, recolhido para o copo B);
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QUESTES
PROPOSTAS
1. Por que usado o cido sulfrico conc. e quente na digestb da protena? Poderia, por
exemplo, ser utilizada a hidrlise alcalina ou a enzimtica?
2. Na hidrlise cida h destruicto de alguns aminocidos. Quais? Isto tem importncia
quanto aos resultados?
3. De que forma exercer-se- ia a influncia de diferentes catalizadores, que podem ser
usados na digestco, em lugar do selnio? Como V. verificaria os resultados?
4. Que precipitantes poderia ser usado para separar Nproteico do no proteico? Por qu?
5. Qual o gas de cheiro acre que emana durante a digestco com H2S04 conc. e quente?
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PRTICA N 8
DOSAGEM DE PROTENAS POR BIURETO
FUNDAMENTOS:
O mtodo por biureto foi proposto por Riegler em 1914, baseado na observao de
que substncias contendo duas ou mais ligaes peptdicas formam um complexo de cor
roxa com sais de cobre em solues alcalinas. A intensidade da cor formada proporcional
quantidade de protena, e a medida feita num colormetro.
Este mtodo tem as seguintes vantagens:
Ser bastante especfico por no apresentar problemas de interferentes.
simples, rpido e barato.
Por envolver uma reao com a ligao peptdica, o mtodo determina protena,
ao contrrio do mtodo de Kjeldahl que determina N total.
Porm ele tem duas desvantagens que so:
A necessidade de uma curva de calibrao tomada com um padro conhecido
de protena, por exemplo, uma protena determinada por Kjeldahl.
A cor formada no complexo no idntica para todas as protenas, porm os
desvios causados so menores do que em outros mtodos colorimtricos.
OBJETIVOS:
Determinar o teor protena em uma amostra de soja a partir de uma curva padro
BSA.
MATERIAL:
Reativo de Biureto: dissolver 1,500 g de CuSO4 e 6,00 g de Tartarato duplo de
Na e K em
MTODO:
Preparar curva-padro com a BSA: na faixa de concentrao de 0 - 2 - 4 - 6 - 8 10 mg.
A cada alquota de 1,0 mL de cada soluo padro adiciona-se 1,0 mL de gua
e 3 mL do reagente de Biureto.
Efetuar as leituras de %T a 540 nm
%T
0
2
4
6
8
Preparar um teste quantitativo de sua amostra: retirar 0,5 mL de sua amostra e
adicionar 1,5 mL de gua e 3 mL de biureto, agitar, esperar 5 min. e efetuar a
leitura de %T a 540 nm.
Calibrar seu instrumento com gua seguido de seu branco para depois efetuar a
leitura de sua amostra.
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PRTICA N 9
EXTRAO E CARACTERIZAO DE UMA ENZIMA
FUNDAMENTOS:
A soja, uma leguminosa de grande valor nutricional, contm a enzima urease que
catalisa o desdobramento da uria em NH3 e CO2 desenvolvendo um sabor desagradvel no
produto alimentcio quando esta no inativada corretamente.
Utilizando o princpio da sua natureza protica, esta enzima pode ser extrada
mediante sistema de solventes hidroflicos de constante dieltrica intermediria, de modo a
evitar a contaminao com outros componentes do gro.
Em meio aquoso a hidrlise da uria favorecida em pH da neutralidade, nesse
meio a formao de carbonato de amnio indica o grau de avano da reao.
A determinao da atividade uresica da soja importante porque se constitui um
teste simples e rpido na avaliao da eficincia do processamento desta leguminosa,
devido a que a urease apresenta resistncia trmica semelhante aos fatores antinutricionais
presentes no gros de soja. Farinhas com alto grau de atividade uresica so pobres no
valor nutritivo.
OBJETIVOS:
Determinar o teor protena em uma amostra de soja a partir de uma curva padro
BSA.
Determinar o melhor meio para a extrao da Urease da soja;
Demonstrar a natureza protica de uma enzima;
Determinar quantitativamente a concentrao da enzima;
Caracterizao bioqumica qualitativa e quantitativa da enzima;
Determinar a atividade enzimtica, usando mtodo oficial.
MATERIAL:
Reativo de Biureto: dissolver 1,500 g de CuSO4 e 6,00 g de Tartarato duplo de
Na e K em
MTODO:
EXTRAO
Pesar 5,00 g de farinha de soja, colocar em erlenm. de 125 cc
Adicionar 50 mL de soln. de glicerol
Agitar manualmente por 5 min. vagarosamente
Deixar 24 h em refrigerao
Filtrar em tecido e depois em papel de filtro rpido
OBS: Testar extrao com Tampo fosfato pH 7,0, com gua destilada e com
glicerol 50%, usando uma relao soluto/solvente de 1/10.
Adicionar 1,0 mL de HNO3 p.a com cuidado pelas paredes do tubo de ensaio
Agitar vagarosamente
Observar cor e comparar com branco de tampo fosfato sem uria 0,001 M pH
7,0, 0,2 mL de extrato, 0,8 mL de gua, 0,2 mL de indicador, 37C por 5 min.
Agitar vagarosamente
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