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mayor frecuencia

Espectro Visible

menor frecuencia

longitud de onda (nm)

Violeta: 400-420 nm
Indigo: 420-440 nm
Azul: 440 -490 nm

Porqu algunas sustancias se ven

coloreadas (eg: clorofila) y otras se ven
blancas (aspirina)?

Verde: 490-570 nm
Amarillo: 570-585 nm Parte del espectro visible es absorbido y
otra parte reflejado (color
Naranja: 585-620 nm
complementario)
Rojo: 620-780 nm:

Colores complementarios:
Absorcin a 420-430 nm: se ve
amarillo
Absorcin a 500-520 nm: se ve
rojo.
Absorcin total: se ve negro
Reflexin total: se ve blanco

Todas las sustancias coloreadas tienen un sistema

de enlaces conjugados.
OH O

CH3
CO2H

HO

OH
OH O
cido carmnico

N
H

H
N

O
ndigo

O
O
H

crocetina

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En espectroscopa UV-Vis se irradia con luz de energa

suficiente como para provocar transiciones electrnicas,
es decir promover un electrn desde un orbital de baja
energa a uno vacante de alta energa

En UV- Vis la
energa solo
alcanza para
las
transiciones
n* y *
E

Bandas de absorcin originadas por diferentes transiciones

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Grupos cromforos: Aquellos grupos funcionales que

confieren a la molcula la capacidad de absorber en el
UV-VIS.

Los disolventes empleados y los radicales adyacentes a un

cromforo pueden tener influencia en la longitud de onda y en la
intensidad de absorcin.
En relacin con las modificaciones de las intensidades de absorcin
se definen los siguientes trminos: efecto hipercrmico (aumento
de la intensidad de la absorcin) y efecto hipocrmico (disminucin
de la intensidad de la absorcin).

Efecto hipercrmico

Efecto hipocrmico

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En relacin con las modificaciones en las longitudes de onda de

absorcin se definen los siguientes trminos: efecto batocrmico
(desplazamiento en la longitud de onda de absorcin hacia valores
ms grandes) y efecto hipsocrmico (disminucin en la longitud de
onda de absorcin hacia valores ms pequeos).
A

Efecto
batocrmico

Efecto hipsocrmico

Grupos auxcromos: Determinadas agrupaciones atmicas que por

s mismas no comunican color a la molcula que pertenecen, pero
son capaces de reforzar la accin de un cromforo.

Cuando una molcula contiene dos o ms grupos cromforos

pueden darse las siguientes posibilidades:
a) Si los cromforos estn separados por dos o ms enlaces sencillos se dice que estn aislados, y, en estos
casos, la absorcin es la suma de todos los grupos cromforos presentes. Ejemplo:
max (nm) max
CH3CH2CH2CH=CH2
184
10000
CH2=CHCH2CH2CH=CH2
185
20000
b) Cuando los cromforos estn conjugados, esto es, separados por un enlace sencillo, se produce un
desplazamiento batocrmico acompaado de un efecto hipercrmico.
max (nm) max
C=C
170
16000
C=CC=C
220
21000
C=CC=CC=C
260
35000
c) Cuando los cromforos estn unidos directamente, el espectro resultante normalmente es distinto del que
presentan ambos cromforos cuando estn aislados, ya que en realidad se forma un nuevo cromforo.
max (nm)
max
CH2=CH2
170
10000
CH2=C=CH2
225
500

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COMPONENTES BSICOS DE LOS INSTRUMENTOS

PARA MEDIDAS DE ABSORCIN MOLECULAR EN
EL UV-VISIBLE
FUENTE DE ENERGA RADIANTE
SELECTOR DE LONGITUD DE ONDA
CUBETAS (Muestra)
DETECTOR
DISPOSITIVO DE LECTURA

Instrumentacin bsica comparada en los mtodos espectroscpicos moleculares

Espectroscopa Vis-UV:

Espectroscopa IR:

Fluorescencia molecular:
(emisin)
Los tres componentes van juntos
como unidad de fuente y muestra

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FUENTE DE ENERGA RADIANTE

CONTINUA

ESTABLE
intensidad lumnica

INTENSA
lmpara de
Deuterio

300

500

lmpara de
Tungsteno

700

900

1100

longitud de onda (nm)

Fuentes de Energa
En absorcin molecular la muestra debe ser irradiada con energa luminosa,
procedente de una fuente. Dependiendo de la zona de trabajo, las propiedades
de la fuente son distintas. Las fuentes deben ser uniformes en intensidad.

Las fuentes de IR se
producen al paso de corriente
a travs de materiales
incandescentes:

ZrO2-xidos de itrio (400-20,000nm)

Cr-Ni (750-20,000 nm), SiC..etc

fuente de tungsteno (W)

lmpara de deuterio
(UV)

Se usa en VIS e IR prximo

produce luz en intervalos de 350-2200 nm
160- 380 nm

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SELECTOR DE LONGITUD DE ONDA

Su objetivo es descomponer la radiacin policromtica
en sus componentes.

DISEOS
FILTROS DE CORTE
FILTROS DE ABSORCIN
FILTROS DE INTERFERENCIA
*MONOCROMADORES DE PRISMA

*MONOCROMADORES DE RED

SELECCIN DE LA LONGITUD DE ONDA

CON MONOCROMADORES
COMPONENTES BSICOS

RENDIJAS DE ENTRADA Y DE SALIDA

ESPEJO COLIMADOR
ELEMENTO DISPERSANTE (PRISMA O RED)
ESPEJO O LENTE FOCALIZADOR
VENTANAS DE ENTRADA Y SALIDA

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MONOCROMADORES
espejo
focalizador

espejo
colimador

con red de
difraccin

2
1
rendija de
entrada

rendija de
salida

elemento
dispersante

con prisma

2
1
lente colimadora

lente focalizadora

CUBETAS
CARAS NORMALES A LA DIRECCIN DEL HAZ

IR

VIS-UV

ABSORCIN MNIMA A LA LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO

1.
2.
3.

Vidrio ordinario o slice (VIS).

Slice fundida o cuarzo (UV).
NaCl, NaI, etc (IR).

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DETECTORES
Al final la luz seleccionada tiene que ser detectada y cuantificada.
*Esto se consigue con el empleo de detectores cuyo cometido es convertir
la respuesta del instrumento en una seal medible.
*Dependiendo del tipo de luz con el que se trabaja existen distintos tipos
de detectores:

variado

variable
Termistores

En espectroscopia IR se puede acoplar

al detector un procesador de transformada
de Fourier (FTIR).

FOTOTUBO

REQUISITOS DE LOS DETECTORES

DEBEN RESPONDER A
LONGITUDES DE ONDA

UN

AMPLIO

RANGO

DE

DEBEN DAR RESPUESTA RPIDA

DEBEN SER SENSIBLES A BAJOS NIVELES DE RADIACIN
DEBEN PRODUCIR
AMPLIFICABLE

SEAL

ELCTRICA

FACLMENTE

DEBEN TENER BAJO NIVEL DE RUIDO

LA SEAL DEBE SER PROPORCIONAL A LA POTENCIA
RADIANTE

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FOTOTUBOS Y FOTOMULTIPLICADORES
Estn basados en el efecto fotoelctrico, en el que la incidencia de un
haz fotnico sobre un metal es capaz de generar energa elctrica

FOTOTUBO

En el caso de los fotomultiplicadores, la seal se amplifica mediante

el uso de dinodos en serie.

DETECTOR
TUBO FOTOMULTIPLICADOR
Cada dinodo se conecta a
una fuente externa de 90 V
generando en el colector
una avalancha de 106 a 107
electrones por cada fotn
incidente para el caso de un
tubo fotomultiplicador de 9
dinodos

colector

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En la actualidad es el detector espectrofotomtrico mas utilizado

En la actualidad es el detector espectrofotomtrico mas utilizado
acoplado a un sistema cromatogrfico lquido
acoplado a un sistema cromatogrfico lquido

Procesador de seal y lectura

Es el ltimo componente bsico de instrumentacin

Todo espectrofotmetro ha de disponer de:

1. Sistema de amplificacin propia que produzca una seal medible
2. Un sistema procesador de la seal, que permita eliminar, promediar
datos, proporcionar salida de lectura, dirigir la salida de la seal..etc
3. Una salida de la seal: digital,registrador..etc
4. Tener cierta capacidad de procesar nmeros /FTIR

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Espectrofotmetros
Pueden ser :
1 Monohaz o haz simple

2 Espectrofotmetro de doble haz

Se puede desdoblar el haz a intervalos regulares con la ayuda de un choper

La mitad de la luz atraviesa la muestra y la otra un blanco
La absorbancia medida tiene en cuenta la ratio de absorcin muestra/blanco
y permite corregir las desviaciones en el detector y en la fuente de salida
La velocidad de cambio del chopper es una limitacin a la que puede
seleccionar el instrumento.

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3 Espectrofotmetros IR
Son de dos tipos:
1) Dispersivos (descansan en un sistema monocromador y de barrido para
producir el espectro).
2) Transformada de Fourier (usan una combinacin de interferencias
constructivas y destructivas junto con la transformada para producir
el espectro).
Dispersivos
fuente

muestra

monocromador

detector

generalmente son de doble haz

el monocromador precede a la muestra

Infrarrojo con transformadade Fourier

Fundamento:

A un tiempo fijo se pasan muchas a travs de la celda y se

registra la seal.
Con cada barrido, cualquier puede atravesar la celda muchas veces.
Se obtiene as el interferograma:

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Aplicaciones analticas
La espectrofotometra de absorcin molecular se puede aplicar tanto
al anlisis cualititativo como cuantitativo.
Anlisis cualitativo: los espectros de la muestra se han de comparar con
los correspondientes a estndares con el fin de identificar las bandas de
absorcin coincidentes. Este tipo de anlisis es mas frecuente en UV e IR
para identificar compuestos orgnicos y mas rara vez se utiliza el Vis.
Anlisis cuantitativo: est basado en la ley de Beer-Lambert en el intervalo
de concentraciones de cumplimiento de la ley. Se establece la curva de
calibrado usando estndares y la absorbancia de la muestra de concentracin
desconocida se remite a la curva ( a veces basta con un solo estndar).
Procedimiento:
En espectrofotometra Vis., el analito se suele incorporar a una especie
compleja que presente bandas de absorcin intensas.
La seleccin de la a la que se mide la absorbancia, puede contribuir
a incrementar la selectividad de la medida (si absorbe slo el analito)
Siempre que sea posible se debe medir la absorbancia a max
Es una tcnica rutinaria y especialmente sensible en fluorescencia.

APLICACIONES ANALTICAS
AMPLIO CAMPO DE APLICACIONES
(anlisis orgnico e inorgnico)

ALTA SENSIBILIDAD
BUENA SELECTIVIDAD
BUENA PRECISIN

FACILIDAD OPERATIVA
APLICACIN A ESPECIES NO ABSORBENTES
(FORMACIN DE COMPLEJOS)

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