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Resumen
El desarrollo de la prctica tiene como objetivo principal aplicar el mtodo de microkjeldahl
para la determinacin cuantitativa de nitrgeno y protena en una muestra del suplemento
vitamnico Soy Plus. Esto se realiz mediante el pesaje de una cantidad determinada de
muestra (0,0626 g), CuSO4-MgO (0,1783 g) y K2SO4 al 99% (2,0232 g) en el matraz
microkjeldahl, seguido por la adicin de 2,5 ml H 2SO4 concentrado, posteriormente esta
solucin se digesto hasta obtener una coloracin transparente-azul, este resultante se
trasvaso al equipo de microdestilacion y se adiciono 15 mL de solucin alcalina, el
amoniaco destilado se recibi en ~20 mL de solucin H 3BO3 al 4%, formando ion amonio y
ion borato, finalmente se titulo el ion borato con 30,7 mL HCl 0,02M. De esta forma,
mediante el volumen de titulante, se obtuvieron el porcentaje de nitrgeno (13.73%) y
protena (85,81%) de la muestra del suplemento vitamnico Soy Plus.
+ H 3 BO 3
HCl
+ H
H 2 BO 3
1 mmol HCl
HCl0,02 mmoles
30,7 mL
HCl
1 mL
(1)
++H
NH 42 BO 3
(2)
N H 3+ H 3 BO3
N 3+1 g
1 mmol
=8,596 x 1 03 g N
1000 mg
3+
N
14 mg
N 3+
1 mmol
1 mmol N H 3
1 mmol H 2 BO 3
1 mmol N H 3
0,614 mmoles H 2 BO 3
Para determinar el porcentaje de nitrgeno aplicamos la siguiente frmula:
A=
WA
100
W muestra
(3)
N=
8,596 x 1 0 g N
100=13,73
0,0626 g muestra
Proteina=%NF
(4)
Proteina=13,73 6,25=85,81
2. Discusin de Resultados
Dentro de la prctica se busc la determinacin del porcentaje de nitrgeno presente en
una muestra, por medio del mtodo de Kjeldahl; esta determinacin del nitrgeno se
realiza en alimentos, bebidas, carnes, cereales, fertilizantes, entre otros, para el clculo
del contenido en protena. Tambin se utiliza el mtodo Kjeldahl para la determinacin de
nitrgeno en aguas residuales, suelos y otras muestras.2
En esta tcnica se digieren las protenas y otros componentes orgnicos de los alimentos
en una mezcla con cido sulfrico concentrado en presencia de catalizadores en este
caso durante la prctica se utiliz CuSO 4-MgO ya que si se utiliza xidos de selenio o/y
N H 4 2 SO 4 + SO 2+ H 2 O
ncN H 2+ m H 2 SO 4 C O 2+
Protena
(5)
calor
N H 4 2 SO 4 +2 NaOH 2 N H 3 + N a 2 SO 4 +2 H 2 O
(6)
++ H 2 BO 3
N H 3+ H 3 BO3 N H 4
cido brico
(7)
in borato
La cuantificacin del nitrgeno amoniacal se realiza por medio de una volumetra acidobase usando un indicador mixto (rojo de metilo y verde de bromocresol). Se titula el ion
borato con acido clorhdrico estndar, sin que el exceso del acido brico interfiera, el acido
consumido en esta valoracin es equivalente al amoniaco obtenido y al contenido de
nitrgeno en la muestra.5
+ H 3 BO 3
+ H
H 2 BO 3
(8)
El resultado del anlisis representa el contenido de protena cruda del alimento ya que
segn la naturaleza del producto estudiado, una fraccin considerable del nitrgeno
procede de otros compuestos nitrogenados (bases pricas y pirimdicas, creatina y
creatinina, urea, amoniaco, etc.).6
Dentro de la prctica se utiliz una mayor cantidad de catalizador y el matraz de Kjeldahl
digesto por ms de 90 minutos, estos factores contribuyeron a una mejor mineralizacin y
por lo tanto a mayor extraccin de nitrgeno de la muestra.
Como factor de conversin de nitrgeno total a protena en la muestra tomamos 6,25 ya
que el suplemento vitamnico Soy Plus se basa en el aislado protenico de soja y de
acuerdo al Codex Alimetarius CODEX STAN 175-1989 los productos protenicos
vegetales preparados con granos de soja usan este factor para la determinacin de
protena cruda.
De acuerdo con esta norma el contenido protenico de los aislados protenicos de soja
debe ser del 90% o ms, este valor se calcula sobre la base de peso en seco excluidas
las vitaminas, minerales y aminocidos aadidos, as como los aditivos alimentarios.
Por lo tanto el porcentaje de protena cruda obtenido en la prctica (85,81%) se encuentra
por debajo del valor reglamentario, y es importante recordar que en este porcentaje se
encuentra incluido el contenido de nitrgeno de origen no proteico. Este defecto se puede
deber a perdidas del amoniaco por volatilizacin durante la etapa de digestin.
Desde otra perspectiva, analizando de acuerdo a la tabla de informacin nutricional del
suplemento vitamnico Soy Plus, por cada 33 g de muestra hay 9 g de protena aislada de
soja o 18% del valor diario. Aplicando la formula (3):
9 g PAS
100=27,27
33 g soy plus
4. Solucin a preguntas
1. Cules pueden ser los objetivos de la cuantificacin de nitrgeno en los sistemas
biolgicos destinados al consumo humano y animal?7
R//La cuantificacin del nitrgeno es fundamental ello se debe a que las protenas
constituyen el principal componente de las sustancias nitrogenadas, ellas ocupan una
posicin de primea importancia en las producciones agroalimentarias por que condicionan
las propiedades funcionales de numerosos usuarios aunque, paradjicamente, se
cuantifican de manera indirecta y aproximada porque primeramente se debe realizar la
estimacin de la cantidad de protena a partir del nitrgeno contenido en la muestra.
2. Cmo se obtiene el factor de conversin de nitrgeno en protena y de que depende?8
R// El contenido de nitrgeno se convierte en protena bruta considerando que la totalidad
del nitrgeno esta en forma proteica. La conversin del nitrgeno en protena se realiza
multiplicando por un coeficiente basado en el porcentaje de nitrgeno en la protena.
Depende de la relacin peso a peso del nitrgeno contenido en la protena y la protena.
7. Explique claramente por que la titulacin final se realiza con HCl y no con NaOH?15
R// En la prctica se utiliza la modificacin del mtodo que se realiza con acido brico y
una solucin estndar de HCl; se obtiene de la destilacin en el mtodo de Kjeldahl
H2BO3-, que es la base conjugada del acido brico, y debe titularse con un cido fuerte
capaz de disociarse completamente para obtener resultados ptimos y directos para la
determinacin del nitrgeno.
8. Si el amoniaco proveniente de 1.50 g de muestra que contiene 8,5%p/p de N, se recibe
en HCl 0,1 M Cul debe ser el mnimo volumen del cido a utilizarse para garantizar que
el anlisis es correcto.
R//El volumen necesario para garantizar el anlisis es 91,07 mL HCl.
W A=
1 mmol
1,5 g muestra8,5 g N
=0,1275 g N
100 g muestra
N 3+1 mmol H 2 B O3
=9,10 mmol es H 2 B O3
1 mmolN H 3
N 3 +1mmol NH 3
14 mg
N 3+
1 mmol
3+
1000mg
3+
N
1g
0,1275 g N
H +1 mL HCl
=91,07 mL HCl
0,1 mmolHCl
H +
1mmol HCl
1 mmoles H 2 B O3
1 mmol
9,10 mmoles H 2 B O3
1 mmol
5. Bibliografa
(1), (8) FRITZ, J. S; SCHENK, G. H. Qumica Analtica Cuantitativa. 3a ed. Editorial Limusa, Mxico, 1986,
pp.230, 232.
[1] OMS, FAO; CODEX ALIMENTARIUS Cereales, Legumbres, Leguminosas y Productos Protenicos
Vegetales. 1a ed. Recurso Digital, Roma, 2007, pp.98-99. CODEX STAN 175-1989.
[2] SKOOG, D.; WEST, D.; HOLLER, F. Qumica Analtica. 6a ed. McGraw Hill, Mxico, D.F., 1995, pp.
219,220.
[3] AYRES, G. H. Anlisis Qumico Cuantitativo. 2a ed. Oxford, Mxico, D.F., 1968, pp. 342.
[4] ADRIAN, J.; POTUS, J.; POIFFAIT, A.; DAUVILLIER, P. Anlisis Nutricional de los Alimentos. 1a ed. Editorial
Acribia, Espaa, 1968, pp. 42.
[5] FRITZ, J. S; SCHENK, G. H. Qumica Analtica Cuantitativa. 3a ed. Editorial Limusa, Mxico, 1986, pp.
230,232.
[6], [7], [12] ADRIAN, J.; POTUS, J.; POIFFAIT, A.; DAUVILLIER, P. Anlisis Nutricional de los Alimentos. 1a ed.
Editorial Acribia, Espaa, 1968, pp. 41.
[8], [9], [11] ADRIAN, J.; POTUS, J.; POIFFAIT, A.; DAUVILLIER, P. Anlisis Nutricional de los Alimentos. 1a
ed. Editorial Acribia, Espaa, 1968, pp. 43,44.
[10] OMS, FAO; CODEX ALIMENTARIUS Programa de Etiquetado de Alimentos. 1 a ed. Recurso Digital, 2001,
pp.33. CAC/GL 2-1985.
[13] CHVEZ, M.M. Composicin de Alimentos. 2a ed. McGraw Hill, Mxico, 2010, pp. 315.
[14] ADRIAN, J.; POTUS, J.; POIFFAIT, A.; DAUVILLIER, P. Anlisis Nutricional de los Alimentos. 1a ed.
Editorial Acribia, Espaa, 1968, pp. 44,46.
[15] FRITZ, J. S; SCHENK, G. H. Qumica Analtica Cuantitativa. 3a ed. Editorial Limusa, Mxico, 1986, pp.
232.