PATOLOGA HUMANA

UNIDAD I: Salud y Enfermedad. Lesin y Muerte Celular.

Clase 4: Introduccin a la Histopatologa II
INTRODUCCIN A LA HISTOPATOLOGA II
Dra. Sonia Vsquez

Recordemos que el resultado de la biopsia es el

diagnstico histopatolgico -tejidos-, en cambio en el
estudio citolgico tendremos las caractersticas de las
clulas y para esto, se debe conseguir que la clula est
lo ms aislada posible. Microscpicamente se pueden
usar una serie de tinciones segn lo que se quiera
observar, puede ser la estructura de la clula, el ncleo
o el citoplasma de sta.

El estudio citolgico, es un mtodo bastante simple y

sencillo para el paciente, que no requiere ninguna
tcnica anestsica, provoca pocas molestias y es
bastante rpido, comparado con todo el procesamiento
que tiene una muestra de tejido. Para realizar este
frotis, necesitamos un portaobjetos, un estabilizante y
para tomar la muestra se usa un palito de helado o unos
cepillos especiales para obtener el frotis, con
estos ltimos se obtiene una mejor calidad de muestra
que con el palito de helado.
Para realizar la fijacin se utiliza alcohol al 95%, a
diferencia del frotis en el estudio histolgico en donde
se usa formalina tamponada al 10%.

Fijacin inmediata con alcohol al 95%, puede

tomarse con una jeringa el alcohol y depositarlo
en el portaobjetos.
Identificacin con el nombre del paciente y la
zona en la que fue tomada la muestra.
Envo al laboratorio con una descripcin de
la lesin e informacin clnica relevante.

El portaobjetos tiene una parte esmerilada -opaca- para

escribir el nombre del paciente, la zona en la que se
est tomando la muestra y si alcanza el nombre del
profesional que tom la muestra, es muy importante
que esto vaya escrito con lpiz de mina, ya que otro tipo
de lpiz se disolver cuando sea sumergido en el
alcohol. Entonces se enva al laboratorio, en donde hay
diferentes tipos de tinciones segn lo que se quiera
observar en la muestra, el ms utilizado es
hematoxilina-eosina o PAS, el cual es muy til para la
identificacin de hongos en la boca.
Veremos un ejemplo de esta paciente que presenta unas
lesiones blancas en la lengua, las cuales se desprenden
con el raspado y permiten fcilmente hacer el estudio
citolgico.

El frotis es un raspado de alguna zona o lesin para la

obtencin de clulas, por lo tanto el raspado no puede
ser muy suave, sino que debe ser con cierta presin.
En resumen, los pasos que hay que seguir para la toma
del frotis son los siguientes:

Limpieza de la zona en donde se har la

muestra.
Raspado con una paleta o cepillo, el cual
tambin se utiliza mucho en la deteccin
del cncer cervicouterino.
Extendido en el portaobjetos.

Jueves 27 de marzo

Odontologa 2014

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Luego se realizar el extendido de la muestra y
posteriormente la fijacin con alcohol al 95% y se
identifica la muestra, recuerden que la muestra de
biopsia o citolgicos son muestras nicas, por lo tanto
no pueden perderse bajo ninguna circunstancia.

En este caso se utiliz la tincin de PAS, lo que permite

ver ciertas estructuras caractersticas que llaman la
atencin, lo que habitualmente se ven son clulas y
bacterias propias de la boca, pero aqu llaman la
atencin otro tipo de estructuras que se ven en esta
paciente, por lo tanto esas lesiones blancas que
desprendan de la cavidad oral, correspondan a una
infeccin.

En este caso, una nia de 12 aos, tena un aumento de

volumen en una glndula salival submandibular, que
haba sido diagnosticado como un tumor, por lo que le
retiraran completamente la glndula. Antes de tomar la
biopsia se realiz una puncin para ver si haba algn
contenido y se obtuvo un lquido amarillento y
pegajoso, parecido a la saliva, debido a esto la nia tuvo
que hacerse una sialografa para observar las
estructuras que haban adentro, para esto se le inyect
un medio de contraste, luego de una semana cuando
estuvieron listos los resultados de la sialografa, la nia
ya no tena nada porque haba un taponamiento de la
glndula, el cual al inyectar al medio de contraste se
destap. Esta nia gracias a que se hizo estos exmenes
antes, evit una ciruga de extirpacin de la glndula,
por esto es que es muy importante que el paciente se
haga todos los exmenes necesarios antes de una
ciruga.

Consideraciones (muestras tanto las histopatolgicas

como las citolgicas)
Adems del raspado, se puede obtener la muestra por
la tcnica PAAF (Puncin aspiracin con aguja fina), en
los casos en que sospechemos que hay cierto contenido
en la lesin, y sera difcil hacer un extendido de la
muestra.

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Observar desde el menor aumento al mayor

aumento, vemos primero lo que se ve con la
lupa, luego lo que se ve con el 10x en el
microscopio, el aumento menor da estructura
general o una orientacin.
Recorrido sistemtico de la muestra, toda la
muestra tiene que ser observada.
El tejido tiene conformacin tridimensional en
el plano, todas las estructuras son

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tridimensionales (depende de cmo pase el

corte del tejido vamos a ver las estructuras).
Tejidos bsicos que deberamos encontrar, el
tipo de clulas
La cantidad de sustancia intercelular
Los artefactos, podran quedar producto de la
confeccin de la muestra.

Hay que repasar las estructuras normales de la cavidad

oral para poder identificar las patologas.
Examinacin macroscpica:

Tejido vivo: examen clnico.

Cadver: autopsia.

Examinacin microscpica:

Tejido vivo: biopsia y muestra citolgica

Cadver: necropsia.

El material de estudio sern las biopsias y las muestras

citolgicas. Un factor muy importante en las biopsias es
que deben estar en un recipiente apropiado, debe ser
idealmente un envase de plstico, de boca ancha y
apropiado segn el volumen de la muestra. Recordar
tambin que la proporcin del fijador debe ser de 10 a
20 veces el volumen de la muestra. Otro factor
importante es la identificacin de la muestra, y el
formulario de solicitud de examen.

Fijacin

INTRODUCCIN A LA HISTOPATOLOGA
(LABORATORIO)
TM. Wendy Donoso
Lo que le voy a presentar hoy da es ver un poco que es
lo que pasa en el laboratorio. En ese sentido voy a ser
bien enftica en el rol que cumplen ustedes, la toma de
muestra y la fijacin. Hay muchas cosas que se puede
hacer en un laboratorio, tanto con un fin clnico, para
ayudar al paciente y en la parte de investigacin, previa
autorizacin del paciente y as aportar en el
conocimiento.
Cuando requerimos el anlisis de una biopsia o una
muestra citolgica, el propsito es obtener un
preparado observable al microscopio. Habitualmente se
trabaja con microscopa ptica para el diagnstico
clnico, aunque tambin podemos observar con
microscopia de fluorescencia y electrnica.
La toma del material y la fijacin son pasos ajenos al
laboratorio, se hacen antes, y la muestra debe ser
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representativa de la lesin, debe llegar en el fijador

adecuado, y se deben respetar sus tiempos, estos pasos
dependen de nosotros. Una vez que la muestra llega al
laboratorio, el patlogo hace una microscopia y
posteriormente se har un procesamiento histolgico si
es un tejido, o citolgico si son clulas.

Su propsito es mantener la estructura de la muestra, lo

ms similar posible, de acuerdo a como estaban en vida.
Una vez que se saca el tejido, ste deja de recibir
nutrientes como el oxgeno principalmente, se activan
enzimas y se degrada el tejido de manera interna, si
este proceso se contina en el tiempo llegamos a la
degradacin de la materia orgnica por bacterias y
microorganismos ambientales, lo que se llama
putrefaccin. La fijacin busca inhibir los procesos
autolticos. El proceso debe ser rpido, para que el
medio ambiente no influya sobre la muestra, por lo que
debemos tener a nuestro alcance todo el material que
necesitaremos para el proceso de fijacin de la muestra.
En el mbito odontolgico debemos tener mayor
cuidado con la manipulacin de la muestra, debido a
que sta es de pequeo tamao y la mayora de las
veces se saca la totalidad de sta por lo que se
convierte en una muestra nica. No puedo ir a buscar
otra muestra. Por ejemplo, al tomar un hemograma, si
es que a la persona que lo est tomando se le olvida
mezclar la sangre con el producto en el tiempo
adecuado, entonces la sangre coagula. En ste caso

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puedo volver a llamar al paciente y tomar una nueva
muestra de sangre, pero en las biopsias no puedo hacer
eso. Sobre todo si es una muestra pequea.
Tipos de fijadores
-Mtodos fsicos: Interacta con las molculas de la
muestra. Tenemos:

Congelacin: Usualmente ocupadas en las

biopsias intraoperatorias, que van a ser
examinadas rpidamente. Lo que hace el doctor
es sacar la muestra desde el paciente, meterla
en un recipiente con hielo para mantener los
tejidos en ptimas condiciones y llevarlo as
hasta el lugar donde ser examinado.
Calor-microondas: Sirve para poder acelerar los
procesos. Por ejemplo, en una muestra fijada en
formalina se dice que el tiempo en que debe
estar la muestra en el fijador para que quede
fijada es de 6 horas. Ahora si eventualmente
nosotros quisiramos apurar un poco ese
proceso, para que baje a 4 horas podemos
someter esa muestra a calor. Alrededor de 37C
por 30-60 minutos. Ese es el sentido del calor
como fijador.

Los mtodos fsicos no son tan empleados en

histologa como los mtodos qumicos
-Mtodos Qumicos
De acuerdo a cmo interaccionan con las protenas
presentes en las clulas, nosotros los separamos por
mtodos coagulantes de las protenas y mtodos no
coagulantes de las protenas.
Mtodos coagulantes:
Dentro de los estos tenemos una serie de alcoholes,
como el etanol y el metanol. El etanol se usa
principalmente para fijar muestras citolgicas, no
tejidos, sino que clulas. Son buenos fijadores, pero
tienen muy mal poder de penetracin en la muestra;
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por lo tanto si nosotros pensamos en un tejido que es

mucho ms compacto, lo ms probable es que si lo
dejamos en alcohol vamos a fijar, pero slo la parte
externa, porque va a ser difcil que ingrese a la muestra,
y si ingresa va a generar alteraciones en la muestra de
tejido, y lo que nosotros queremos es que se mantenga
la morfologa. Muchas veces estos agentes, alcoholes y
cetonas, son agentes deshidratantes, retiran el agua de
la muestra, lo hacen muy rpidamente, es muy invasivo
con la muestra, entonces al ser un proceso muy rpido
genera una alteracin morfolgica. Es por esto que lo
dejamos para fijar solamente clulas aisladas y no
tejidos.
Mtodos no coagulantes:
Aqu encontramos la formalina, y tambin tenemos
otros como glutaraldehdo que se utiliza para
microscopa electrnica. La formalina proviene de un
gas que es el formaldehdo, que para que lo podamos
manipular es dejado en agua, la concentracin mxima
que alcanza el formaldehdo en agua es de un 37% a un
40%. Por ejemplo, si tengo 100 ml de agua y le agrego
formaldehdo en gas y lo dejo no voy a lograr que ms
de un 37%-40% de este formaldehdo gaseoso se mezcle
con la porcin de agua. Esto se conoce como formalina
absoluta. Para fijar los tejidos la concentracin
adecuada es del 10%, por lo que vamos a tomar una
porcin de esta formalina absoluta y la vamos a mezclar
con 9 partes de una solucin amortiguadora que est a
pH fisiolgico (7-7,2), como el tampn fosfato de sodio,
eso es lo que conocemos como formalina tamponada.
Que sea una solucin amortiguadora quiere decir que si
yo coloco algo que eventualmente pueda cambiar
mucho el pH en esta solucin amortiguadora la solucin
en general no va a modificar su pH; por ejemplo, si
tengo un pH 7 y agrego algo a pH 12 lo ms probable es
que vare el pH pero va a tratar de mantenerse en el
rango de pH 7.
La formalina absoluta no se diluye en agua, pues el
resultado sera una formalina con un pH demasiado

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cido, aproximadamente de 2-3, y lo que nosotros
queremos es estudiar un tejido y tratar de mantener las
condiciones de cuando estaba vivo. Lo que ocurre es
que si colocamos un tejido en una formalina diluida en
agua se va a alterar la morfologa del tejido, y ms que
la morfologa del tejido se van a alterar muchas
protenas que seguramente sern necesarias para
posteriormente hacer un adecuado prediagnstico.
Cules son las cualidades de la formalina?
Fijacin, mantiene la condicin de la clula y el tejido. Es
un bactericida y fungicida, entonces tenemos una
muestra que no tiene mucho riesgo biolgico para
nosotros.
Cunto dura el efecto de la formalina?
La formalina en tejido se dice que debe estar un mnimo
de 6 horas, incluso de acuerdo a las caractersticas de la
muestra hay algunas que se fijan a las 12 horas, porque
depende mucho del espesor y de la consistencia de la
muestra. Por ejemplo una mucosa oral tendr la
misma consistencia que un hueso desmineralizado?
Pensando que tambin el hueso es un tejido conectivo
que est mineralizado, si nosotros a ese hueso le
quitamos la sangre, probablemente ese hueso demorar
ms en fijarse que la mucosa oral, pues es ms denso.
El proceso de fijacin en general, es un proceso
progresivo, es decir, si yo dejo una muestra en fijacin
durante un ao, no le va a pasar mucho y podr realizar
algunos tipos de tinciones convencionales, pero si quiero
realizar algn tipo de anlisis de protenas o de cidos
nucleicos, lo ms probable es que no pueda, ya que la
sobrefijacin altera a la muestra.
Volviendo a la formalina, tiene la capacidad de bloquear
la autlisis, tiene un efecto microbicida, induce
cambios en la composicin tisular, tiene un
consistencia que le permite entrar fcilmente entre los
tejidos, tambin precipita protenas, es un mtodo
coagulante y forma lo que se llaman puentes de
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metileno, formados por los grupos amino, de los

aminocidos que componen la protenas de los tejidos.
Tambin para fijar se pueden utilizar mezclas de
formalina con otros fijadores, ya que tienen una rpida
penetracin en los tejidos; a diferencia de los alcoholes,
es un proceso de fijacin reversible, es decir, cmo se
forman esos puentes cruzados, lo que es muy til, para
lograr realizar tinciones, rompiendo principalmente
estos puentes con el aumento de calor.
Relacin de la muestra con el volumen del fijador:
estos tiene que ser una relacin de 10 a 20 veces ms el
volumen del fijador que el de la muestra. Si nosotros
fijamos la muestra en un volumen apropiado, por un
tiempo apropiado, nosotros podemos incluso hacer
PCR, lo que es una reaccin en cadena de la polimerasa,
lo que tiene como propsito lograr amplificar algn gen
que codificar a la protena de inters.
Qu pasa cuando el tejido est fijado por otros
medios?
Tejido fijado por congelacin: si nosotros quisiramos
hacer una muestra de ADN de una muestra que estaba
congelada, lo resultados sern excelente, porque la
muestra estar intacta y se podr realizar la accin de
la polimerasa en cadena sin problemas.
Tejido fijado con formalina tamponada: el ADN ser
modificado, pero no es tanto el dao si quisiramos
hacer un PCR igual resultara.
Tejido con formalina tamponada por dos aos: lo ms
probable es que si yo quisiera hacer una extraccin de
ADN, va a estar fuertemente fragmentada y por lo tanto
no ser posible hacer un PCR.
Con todo lo
anteriormente dicho la formalina es muy buena, pero
siempre y cuando la muestra tenga un periodo mnimo
de fijacin de 6,8 o 12 horas, pero que tampoco se
exceda de las 36 horas, porque as se podr obtener una
correcta muestra, para luego empezar con el
procesamiento histolgico.

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La muestra despus de ser enviada al laboratorio es
recibida por el patlogo, donde hace una descripcin
macroscpica del tejido, donde se considera la forma
(cua, regular o irregular), el color (blanquecino,
oscuro), consistencia, por ejemplo un tercer molar la
consistencia ser dura o firme?, es una consistencia
dura, pero si es mucosa ser una consistencia firme.
Ahora, si es una lesin que se siente que hay contenido
dentro, como una glndula que no se rompi en el
momento que la extrajeron, que tiene un tapn en el
conducto de salida, lo ms probable es que cuando
llegue al laboratorio y uno la toque se sienta como con
residuos, y esto da las caractersticas fsicas, la
superficie tambin, si es lisa o rugosa y las dimensiones:
ancho, alto y largo.

Posteriormente llegar a la lmina histolgica que es lo

que se requiere para ser observada al microscopio.

Tejidos blandos y tejidos duros

Entonces el tejido para iniciar el procesamiento del

prototipo nosotros lo queremos primero es recibir el
tejido en un vaso plstico de boca ancha.

El procedimiento para trabajar en tejido duro no es el

mismo que si yo quiero trabajar en una mucosa por
ejemplo. Cuando trabajo en un tejido duro tengo que
realizar la descalcificacin, que consiste en retirar las
sales presentes en la muestra.
Tenemos que llegar a hacer un taco de parafina.

Aqu tenemos una foto de una radiografa y podemos

observar que an hay partes mineralizadas, tiene que
quedar completamente sin minerales.
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Como vamos a ver, cuando uno inicia un estudio
histolgico lo primero que hace es la tincin
hematoxilina-eosina. En algunos casos, sobre todo para
el diagnstico clnico, no le permite al patlogo decir
frente a qu tejido se encuentra, sobre todo cuando
estamos frente a tumores y ah requiere otro tipo de
tinciones, que vayan directamente a protenas
especificas dentro de la muestra, ahora cuando
nosotros tenemos que llegar a ese punto, la verdad es
que es importante, si es un tejido mineralizado, saber si
tenemos cidos porque lo ms probable es que las
protenas que estn presentes estn muy deterioradas
y no las podamos teir.
Una vez que la muestra ya est desmineralizada
tenemos que confeccionar el bloque de parafina que
nos permita cortarla despus, para ello debemos
considerar que la parafina es un hidrocarburo. Para ello
debemos seguir un procedimiento que es largo pero
que nos permite tomar la muestra en condiciones
adecuadas. La parafina es solo para cortar la muestra.
Recordemos que nosotros somos un organismo que
tenemos gran porcentaje de agua y la parafina es
insoluble en el agua. Si sacamos un tejido ese tejido
tambin va a tener mucha agua, lo vamos a colocar en
un fijador que es acuoso y por lo tanto si nosotros
queremos que este tejido quede repleto de parafina
debemos retirar esa agua y generar una instancia para
que luego en esos sitios donde haba agua queden
llenos del medio de soporte que es la parafina, para
esto vamos a hacer un proceso de deshidratacin.
Procesamiento histolgico.
El procesamiento histolgico es muy largo y consta de
seis etapas: deshidratacin, aclaramiento, inclusin,
corte, tincin y montaje. Nosotros lo podemos hacer de
forma manual en un frasquito similar al de conserva.
Ponemos la muestra y vamos cambiando de solvente, o
si no se puede hacer a travs de un equipo similar al
que tenemos en el laboratorio.
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Primero vamos a deshidratar la muestra para ello, esto

ser de forma paulatina, no podemos de buenas a
primeras porque puede cambiar la morfologa y la
sometemos a concentraciones crecientes de alcohol,
primero a un bao de alcohol al 70% lo dejamos 1 hora
1 hora y media aproximadamente en el recipiente y
cambiamos posteriormente la muestra a otro que tiene
mayor concentracin de alcohol y menos concentracin
de agua, luego de nuevo a otro que tenga ms alcohol y
menos agua para finalmente llegar a uno que tenga
solamente alcohol.

En este tejido en el que inicialmente haba agua quedo

inmerso en alcohol pero el alcohol no es 100% afn con
el medio de soporte que es la parafina, entonces
tenemos que ponerlo en un medio que sea amigable
con el alcohol y con la parafina y luego empieza el
procesamiento que es el aclaramiento.
El aclaramiento consiste en colocar el tejido en otro
solvente orgnico que sea afn tanto con el alcohol
como con la parafina, generalmente se utiliza el xilol o
xileno. Existen otros medios aclarantes, como el

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benceno, cloroformo, tolueno, pero son demasiados
txicos. (El xileno es el menos txico de todos).
Luego viene la etapa de inclusin, en esta se somete la
muestra a baos de parafina, que es el medio de
soporte para el tejido en estudio.
La parafina es un
hidrocarburo, o sea un
derivado del petrleo,
que
tiene
la
caracterstica de ser
slido a temperatura
ambiente,
este
hidrocarburo se funde
aproximadamente a
56C.

Ahora la muestra se debe colocar en el porta objetos,

por lo que se debe realizar un proceso antes. La cinta se
deposita en un bao de Flotacin, el cual es

termorregulado, tiene una temperatura aprox. de

40C, lo que permite obtener cortes bien estirados.

La parafina debe estar fundida para incorporarse al

tejido. El tejido internamente esta relleno de parafina, y
adems se necesita hacer un cubo/bloque para ser
colocado en el micrtomo.
Para hacer el bloque de parafina se ocupan las barras
Leuckart, en este espacio se coloca la muestra orientada
hacia abajo, de forma que abajo quedar plano (donde
se encuentra la muestra) y arriba se formar una
concavidad.
Posterior a esto, se realiza el corte con el micrtomo.
Hay dos tipos de Micrtomo: deslizante y rotatorio.
Se coloca la muestra y van saliendo rebanas de la
muestra de 4-5 m. Una vez que se realiza un corte,
aparece el otro adosado, a causa de su delgado grosor,
formndose una cinta, en donde vamos a tener hartos
cortes de la muestra.

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Imagen: Extendido de las muestras

Teniendo la muestra en el portaobjetos se realizan
una serie de pasos antes de la tincin, debido a que
los colorantes son acuosos, y la parafina no es afn
al agua. Por esto, se realiza un proceso de
desparafinacin en el que se calienta la muestra en
una estufa, de forma de derretir la parafina, luego
se somete a baos sucesivos de Xileno. Ahora se
somete a eliminar el xileno y se comienza a
hidratar la muestra paulatinamente, desde alcohol
100, 95, 90, 70. Ahora la muestra se encuentra
preparada para ser teida.

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Las muestras en parafina se pueden guardar por

aos, y se conservan tal cual.
No se va a modificar ni mover la muestra, porque ya
est hecho el proceso de fijacin. En la muestra
citolgica va a existir el frotis de tipo convencional, que
es el que vamos a ver en el laboratorio, donde se extrae
muestra con una esptula en el caso que sea ms slida
y si es lquida se realiza un proceso diferente (por ej.
Puncin con aguja fina). Entonces, la fijacin citolgica
se realiza con etanol al 95%, tambin se utiliza el cito
spray que es hecho a base de alcohol. Pero, qu pasa
cuando tenemos un contenido lquido (queratina),
aplicamos el fijador etanol en la proporcin es 1/3 de
fijador de acuerdo a la cantidad de volumen de agua.
Por ejemplo, si tomamos 6 mL de contenido lquido le
vamos a agregar 2 mL de fijador. Este fijador puede ser
formalina tamponada al 10% o con alcohol al 95% y
llevamos el frotis al laboratorio.
Las tinciones son muchas y variadas, se pueden realizar
siempre y cuando se haya tomado bien la muestra (que
se haya aplicado el fijador apropiado y esperado el
tiempo suficiente de fijacin). Se utilizan con un fin
explicativo y para identificar elementos. Los colorantes
son sustancias qumicas que poseen, de acuerdo a sus
caractersticas, si precipitan en colorantes bsicos o
cidos o colorantes catinicos o aninicos.
Generalmente estos colorantes cuando los aplicamos en
solucin una parte de ellas se disocia en sus iones
correspondientes y, de acuerdo al in que tenga la
capacidad de colorear (citocromforo) es lo que se va a
precipitar. Si la solucin est cargada positivamente le
vamos a llamar colorante catinico o bsico. Que est
cargado en solucin acuosa significa que va a poder
interactuar con molculas que tengan en solucin su
carga opuesta. Llamaremos basfilas a las sustancias
que pueden captar en negatividad, por ejemplo, la
hematoxilina. Por su parte hay colorantes que son
cidos, es decir, que estn cargados negativamente, que
la parte negativa en solucin es la capaz de colorear,
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son colorantes aninicos y se van a unir a aquellos que

tenga su carga opuesta. Estas estructuras se van a
denominar acidfilas como la eosina.
En general, los colorantes son sustancias qumicas
complejas. La hematoxilina es un colorante que
proviene de una leguminosa, este colorante natural por
s solo no tiene la capacidad de teir y debe ser
modificado qumicamente para que pueda teir. Debe
ser oxidado a un compuesto llamada hematena y la
hematena es quien tiene la capacidad de teir tejidos.
La hematena asociada con una solucin mordiente (la
que firma el colorante) forma lo que se llama hemates,
que est cargada positivamente en solucin y tiene
actividad por los grupos fosfatos que estn en el ADN,
por eso la hematoxilina tie. Y por su parte tenemos
tambin la eosina, que es un colorante complejo en
solucin est cargada negativamente y finalmente es
eso lo que da la cualidad de poder unirse a estructuras
con su carga opuesto, como protenas que hay en el
citoplasma.

Imagen: Tincin con tcnica de Hematoxilina-Eosina.

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heridas, donde se ve un aumento en las clulas
colgenas (estas se coloreaban de azul).

Por ejemplo, ac tenemos la tincin llamada PAS

(tincin del cido peridico-de Schiff). Esta es especial
para poner en evidencia mucosustancias, o sea,
sustancias con hidratos de carbono, como por ejemplo
un citolgico de una paciente en donde el cido
peridico-de Schiff se une a las mucosustancias
presentes en las paredes de la levadura.
En muchas ocasiones, sobre todo en la parte
histopatolgica, las lesiones no son fcilmente
distinguibles y tampoco cul es el tejido presente,
entonces nos ayudamos de otro tipo de coloraciones
que nos tien de manera diferencial distintos tipos de
tejidos.

Otro ejemplo son las glndulas de la lengua, teidas con

hematoxilina- eosina, donde se distinguen glndulas
serosas de las mucosas, las glndulas mucosas como
son mucosustancias por lo tanto no se tien con HM,
para teirlas usamos el cido peridico-de Schiff.
Ahora qu pasa si estoy en un caso real con un paciente
que presenta una neoplasia, tomamos una muestra de
clulas y en ellas no aparece nada. Teimos con todas
los mtodos que tenemos, pero Cmo diferenciamos
un linfocito de otro? No lo podemos hacer. Entonces lo
que podemos decir es que es un tumor
morfolgicamente indiferenciado de clulas epiteliales.

Cortes sacados del mismo tejido no son iguales,

slo pueden ser representativos del otro.

Este diagnstico es muy ambiguo para

tratamiento al paciente.

dictarle el

Por ejemplo, tenemos cortes de hgados sometido a un

experimento donde se vea qu capa fibrosa le causaba
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INMUNOHISTOQUMICA
La inmunohistoqumica es lo que nos permite estudiar
protenas dentro del tejido, las que estudiamos con la
utilizacin de anticuerpos. Entonces en el laboratorio, lo
que se hace es crear un anticuerpo para obtener
protenas especficas de la muestra, luego realizamos
reacciones antgenoanticuerpo, este anticuerpo tiene
que estar marcado con un colorante para su
identificacin en un microscopio.
El cmo va a estar coloreado este anticuerpo, va a
depender de la cantidad de protena que yo ponga, si la
cantidad que pongo en tejido es baja, yo puedo ocupar
directamente un anticuerpo que ya este marcado, ahora
si la protena esta en baja concentracin, lo ms
probable, es que esta unin sea baja, sea tengo la
protena en el tejido y tengo el anticuerpo, pero
necesito algo que me amplifique mucho ms la seal,
algo que tenga harto color para que lo pueda ver,
entonces ocupo un sistema el cual me amplifique la
seal. Esto va a ser lo que me va a dar el color de la
reaccin.

Por ejemplo, ac si tengo un anticuerpo, con esta

ampolleta voy a ver menos que si tengo esta misma
unin pero con hartas ampolletas, entonces de eso va a
depender el sistema que voy a ocupar. La imagen
corresponde a un anticuerpo policlonal y uno
monoclonal, respectivamente.
Siempre creando anticuerpos especficos para la
protena.
Jueves 27 de marzo

Finalmente al hacer un estudio citolgico, este

determin que esas muestras eran melanomas y ambas
se vean aparentemente diferentes, descubrieron que
eran melanomas, pero lo descubrieron mucho tiempo
despus. Lo bueno de mantener las muestras en
formalina, es que se puede guardar la muestra durante
muchos aos, recoger la muestra nuevamente y
revisarla.
Ahora, cul es la caracterstica o qu es lo que tienen
de particular
los
tumores morfolgicamente
indiferenciados, cuando hay una lesin maligna, porque
todo el ciclo celular tiene un ritmo, que permite que la
clula nazca, se desarrolle, se diferencie y realice su
funcin? Cuando hay una proliferacin maligna, este
proceso est alterado y adems de estar alterado es
muy rpido, entonces la clula nace, no alcanza a
desarrollarse ni a realizar su funcin y solamente son
clulas inmaduras las que empiezan aumentar en
cantidad en la lesin, entonces como no alcanzan a
diferenciarse, yo las voy a ver siempre inmaduras, como
las veo tan inmaduras, no alcanc a ver si tena
caractersticas de epitelio, de tejido conectivo, de tejido
nervioso, porque al final son siempre clulas inmaduras
las que se van a estar reproduciendo, esa es la
caracterstica de una neoplasia maligna o de un cncer,
que las clulas que se reproducen son indiferenciadas,
son inmaduras.
Cuando el patlogo se encuentra con algo que no puede
diferenciar morfolgicamente, no puede decir qu es,
quiere decir que esas lesiones que son indiferenciadas.
Cuando las clulas estn muy inmaduras y a pesar de
que no presentan caractersticas de su condicin final,
mantienen total o parcialmente protenas del lugar
donde pertenecen; por ejemplo, los epitelios tienen
citoqueratinas, a diferencia del tejido conectivo, que
posee otras protenas que se llaman vimentina.
Entonces cuando tengo una clula indiferenciada, le
busco citoqueratinas y no tiene, quiere decir que no
tiene origen epitelial; pero si yo le busco vimentina y si

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PATOLOGA HUMANA
UNIDAD I: Salud y Enfermedad. Lesin y Muerte Celular.
Clase 4: Introduccin a la Histopatologa II
tiene, confirmo que era una clula para formar tejido
conectivo. As puedo verificar qu tipo de clula es, a
pesar de que morfolgicamente no lo tenga claro; con
el hecho de encontrar ciertas protenas, yo puedo decir
qu tipo de tejido es.

as saber que est ocurriendo una alta proliferacin

celular, debido a que se encuentra teido de caf.

En el caso de una neoplasia, donde no existe una

estructura morfolgica clara, por lo que no se puede
establecer una clasificacin histolgica, el clnico no
tiene las herramientas para decir qu es.
En resumen: las clulas normales, podemos
diferenciarlas rpidamente segn el tejido al cual
pertenecen, debido a que presentan caractersticas
especficas, pero cuando nos encontramos frente a una
clula cancergena o maligna, debemos recurrir a otro
mtodo de bsqueda para saber a qu tipo de tejido
pertenece, esto lo hacemos mediante la bsqueda de
ciertas protenas caractersticas de cada tejido.

Lo mismo ac, nosotros podemos usar cloroformo para

pesquisar irregularidades dentro de la muestra y
diferenciar una patologa.

Los calcinomas, sarcomas, miosarcomas y tubos

neurales, todos tienen caractersticas especiales de
diferenciacin,
hay
filamentos
intermedios
caractersticos en cada uno de ellos, por ejemplo:

Calcinoma: proviene del tejido epitelial y lo que

lo caracteriza, es la presencia de filamentos de
queratina.
Sarcoma: proviene del tejido mesenquimtico y
lo que lo caracteriza, es la presencia de
filamentos de vimentina.

Algo similar ocurre para los tumores musculares y

neurales.
Hay una protena caracterstica que est presente en el
sitio celular y que es la Ki 67, ahora si en la amgdala
humana sabemos que en condiciones normales se
encuentra una alta proliferacin celular en los tejidos,
en los centro germinativos, nosotros podemos poner en
evidencia estos centros germinativos ocupando este
marcador para saber dnde hay un centro germinativo y

Jueves 27 de marzo

En esta imagen por ejemplo hay epitelio, queratinocitos

y aqu tambin hay epitelio, entonces en los penfigoides
lo caracterstico que se altera son autoanticuerpos para
desmosomas, que marcan el lmite entre el tejido
epitelial y el tejido conectivo en la capa basal. Nosotros
al poner en evidencia los anticuerpos presentes ac,
ponemos en evidencia patrones.
Por ejemplo cuando tenemos alterado un anticuerpo
unido a desmosomas, nosotros decimos que tenemos
un patrn. Ahora una vez que la muestra est teida,

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nosotros le colocamos un medio de montaje a la
muestra y lo tapamos con un cubreobjetos, eso tiene
como propsito mejorar el ndice de refraccin de la
muestra. Solo como manera de resumen comentar que
cuando ustedes tomen biopsias el proceso va a ser
largo, ustedes van a tomar la biopsia la van a fijar, se va
a hacer la macroscpia, el procesamiento histolgico, el
montaje y la observacin, mientras que cuando tienen
muestras citodiagnsticos, van a realizar el frotis, lo van
a fijar y lo van a observar, sea es un proceso mucho
ms corto.

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