CENTRO UNIVERSITRIO DA GRANDE DOURADOS

HALISSON BARATELLI DOS SANTOS

DETERMINAO DE PROTENA BRUTA PELO MTODO

DE MICRO-KJELDAHL

Dourados-MS
2011

CENTRO UNIVERSITRIO DA GRANDE DOURADOS

HALISSON BARATELLI
DAIANE COLLI
RITA ESPNDOLA
VIVIANE ANDRADE
JUSLEI MARINHO
FABIANA DOS SANTOS
MARIA CLUDIA

202.183
202.174
202.341
202.202
202.204
202.223
202. 481

DETERMINAO DE PROTENA BRUTA PELO MTODO DE

MICRO-KJELDAHL

Trabalho apresentado ao Curso de Farmcia

da Faculdade de Cincias Biolgicas e da
Sade do Centro Universitrio da Grande
Dourados, na disciplina de Anlises
Bromatolgicas.
Prof: Mrcia Bin.

Dourados-MS
2011

1. INTRODUO

1.1 Determinao de Protena Bruta atravs do Mtodo de Kjeldahl.

A determinao muito importante para fazer a caracterizao nutricional e

determinar a atividade biolgica (unidades de atividade enzimtica/g de protena).
Protena Bruta envolve um grupo de substncias que tem como estrutura fundamental
o aminocido. As protenas possuem diferentes propriedades fsicas e qumicas, dessa forma
no tem solubilidade, reatividade, ponto de fuso e ebulio iguais. Devido a isso essas
caractersticas no podem ser tomadas como base para a anlise quantitativa, mas todas as
protenas tm em comum a presena de aminocidos que tem grupo amina (-NH).
O mtodo de Kjeldahl foi desenvolvido por Johann Kjeldahl em 1883, e consiste em
um mtodo de determinao indireta, pois no determina a quantidade de protena e sim o
nitrognio orgnico total. Esse processo inclui quatro passos que so:
Digesto: moagem de amostras slidas e homogeneizao. Digesto da amostra num
frasco de Kjeldahl por adio de cido sulfrico (H 2SO4) e um catalisador metlico (CuSO4)
que acelera o processo de oxidao da matria orgnica. Utiliza tambm o K2SO4 para
aumentar o ponto de ebulio do cido sulfrico (de 337C para mais de 400C), tornando a
digesto mais eficiente. O aquecimento da amostra com cido sulfrico para a digesto at
que o C e H sejam oxidados e o N da protena seja reduzido e transformado em sulfato de
amnia. Para digerir utilizado um aparelho chamado microdigestor de Kjeldahl.
Neutralizao e Destilao: esse passo se baseia na adio de NaOH concentrado e
aquece-se para a liberao da amnia dentro de um volume conhecido de uma soluo de
cido brico e indicador, formando borato de amnia. Isso feito num aparelho chamado
destilador de Nitrognio de Kjeldahl.
Titulao: o borato de amnia formado dosado com uma soluo cida (HCl ou
H2SO4) padronizada at o ponto de viragem ( utilizado indicadores de cor vermelho de metila
e verde de bromocresol).
Converso do teor de N total para o teor de protena: A maioria dos alimentos possui
em mdia 16% de nitrognio, dessa forma:
16g N _______ 100g protenas
1g N ________ Xg
Xg = 100/16 = 6,25

O teor de protena bruta de um alimento obtido pela multiplicao do teor de N total pelo fator de converso (6,25).
Mtodo de Kjeldahl apresenta as vantagens de ser aplicvel a todos os tipos de
alimentos; relativamente simples, no caro e preciso. Trata-se de um mtodo oficial para
a determinao de protenas e vem sendo modificado para anlise de microgramas de protena
(micro Kjeldhal). E desvantajoso por medir o nitrognio orgnico total, no apenas
nitrognio de protenas, por ser demorado, menos preciso que o mtodo do biureto e utiliza
reagentes corrosivos.

2.

OBJETIVOS

Esse trabalho tem como objetivo determinar o teor de protena bruta de amostra de
farinha de trigo obtida pela multiplicao do teor de Nitrognio total pelo fator de converso
do mtodo de Kjeldhal.

3.

MATERIAIS E MTODOS

3.1

Material e reagentes

Tubos de digesto;

Bloco digestor;

Destilador de micro-kjeldahl;

Proveta de 10 e 50 ml;

Pipeta de 10 ml;

Erlenmeyer de 125 ml;

Bureta de 25 ou 50 ml;

Balana analtica;

Esptula;

Papel manteiga;

Pinas e estantes de madeira;

H2SO4 concentrado;

H2SO4 0,02N padronizado;

CuSO4 + K2SO4 ;

Indicador misto;

NaOH 50%;

H2BO3 2%.

3.2 Mtodos
3.2.1 Destilao e neutralizao

Ligou-se o aparelho verificando-se a voltagem da rede eltrica;

Abriu-se a torneira de gua para circulao no condensador;

Verificou-se o nvel de gua no balo de gerao de vapor: deve estar acima do

sensor, completar sempre ligando o boto de gua;

Girou-se o dial da resistncia at 7/8 para aquecimento da gua do gerador de

vapor e aguardou a fervura da mesma;

Diluiu a amostra que estava no tubo de digesto com 10

ml de gua destilada;

Desligou o aquecimento

Colocou o erlenmeyer de 125 ml, contendo 10 ml de H2BO3 2% com indicador

misto no suporte abaixo do condensador;

Conectou o tubo de protenas digeridas em seu local de encaixe;

Adicionou NaOH 50% no funil de soda localizado acima do equipamento (a

torneira deve estar fechada);

Abriu a torneira do dosador de soda lentamente adicionado o produto qt

neutralizar a amostra (forma cor azul escuro ou marrom escuro), gasta-se mais ou menos 15
ml para realizar;

Terminada a neutralizao, fechou a torneira do funil de soda e ligou o boto de

aquecimento. Percebeu-se pela mudana de cor ou formao de precipitado ao neutralizar;

Coletou cerca de 50 ml do destilado;

Retirou o erlenmeyer, desligou o aquecimento e retirou o tubo digestor

cuidadosamente, pois estava quente;

Limpou o sistema, conectando um tubo de digesto limpo contendo cerca de 20

ml de gua destilada, ligou o aquecimento e destilou durante 5 minutos;

Retirou o tubo de lavagem e deixou o aparelho pronto para nova destilao;

Terminada todas as anlises, procedeu-se a ltima destilao com gua

destilada, tendo cuidado de esgotar a soda do seu reservatrio e lavando-o tambm com gua
destilada
3.2.1 Titulao

rseo.

Preparou-se uma bureta com 50 ml de H2SO4 0,02N padronizado;

Titulou diretamente no erlenmeyer em que foi colocado o destilado;

O ponto final da titulao foi indicado pela mudana de cor da soluo para

Obs: utilizou-se o indicador misto em uma das anlises, onde constitudo de 5 gotas de
vermelho de metila (0,1 g% em lcool) e 3 gotas de verde de bromocresol (0,1g% em lcool).

4.

RESULTADOS E DISCUSSO
A determinao de protenas foi realizada pelo mtodo de Kjeldahl, no qual avaliou-se

o teor de nitrognio total de origem orgnica, utilizando-se 3.004 g de . Assim, todo o carbono
e hidrognio foram oxidados a gs carbnico e gua. O nitrognio da protena foi reduzido e
transformado em sulfato de amnio. Aps destilar toda a amostra digerida em meio bsico
por para a liberao da amnia. Obteve-se o resultado de 4.45% de protena total.
Calculo:
% protena = 5.1 x 0.019 x 0.014x 100 x 6.25 = 4.45%
0.2004
Segundo a ANVISA (1996), a protena da farinha no dever ser inferior a 7% na
base seca, considerando o valor de N = 5,7. Com base na referencia a protena citada, o
resultado encontrado na aula pratica foi inferior o da especificao.

5.

CONCLUSO

Foi possvel determinar a protena da farinha de trigo, pois de acordo com as normas
vigentes, as mesmas apresentaram teor de protena muito inferior ao esperado. Isso pode ter
ocorrido devido algum erro na analise.

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ANVISA. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. 2006. Legislao em Vigilncia
Sanitria. Disponvel em: <www.anvisa.gov.br/e-legis>. Acesso em: 10 mar. 2006.
BIN, M. C. Apostila de Bromatologia. Unigran Centro Universitrio da Grande Dourados,
2011.
PURGATTO, E. Disciplina de bromatologia: Anlise de protena. USP, So Paulo-SP, 2005.