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MtodosDiagnsticosdaInfecopeloHIV|MedicinaNET
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JANELAIMUNOLGICA
FATORESBIOLGICOSQUECAUSAM
RESULTADOSFALSOPOSITIVOSNAPESQUISA
DEANTICORPOSANTIHIV
DIAGNSTICOLABORATORIALDAINFECO
PELOHIV
DIAGNSTICODAINFECOPELOHIVPOR
TESTESRPIDOS
REFERNCIASBIBLIOGRFICAS
MtodosDiagnsticosdaInfecopelo
HIV
ltimareviso:04/06/2009
Comentriosdeassinantes:0
ANEXO1PORTARIAn59,DE28DEJANEIRO
DE2003
Procedimentosseqenciadosparadetecode
anticorposantiHIVemindivduoscomidadeacimade
doisanos.(*)
EtapaITriagemSorolgica
EtapaIIConfirmaoSorolgicapormeiodeum
segundoimunoensaioemparaleloaotestede
ImunofluorescnciaIndireta(IFI)paraoHIV1ouao
testedeImunoblotparaHIV.
EtapaIIIConfirmaoSorolgicapeloTesteWestern
Blot(WB)
Recomendaes
Observaes
ANEXO2PORTARIAN34/SVS/MS,DE28DE
JULHODE2005
ANEXO3PROCEDIMENTOSSEQENCIADOS
PARAREALIZAODODIAGNSTICODA
INFECOPELOHIVUTILIZANDOSETESTES
RPIDOSEMINDIVDUOSCOMIDADEACIMA
DE18(DEZOITO)MESES
Observaes:
SOBREOSDIREITOSAUTORAISDO
DOCUMENTO
Reproduzidode:
RecomendaesparaTerapiaAntiretroviralemAdultosInfectadospeloHIV
Sriemanuaisn27Edio2008[LinkLivreparaoDocumentoOriginal]
MinistriodaSade
SecretariadeVigilnciaemSade
ProgramaNacionaldeDSTeAids
Braslia/DF2008
MtodosDiagnsticosdaInfecopeloHIV
O diagnstico sorolgico da infeco pelo HIV baseado no desenvolvimento de
anticorposantiHIVapsaexposioaovrus.
Antes da realizao da testagem para o HIV, necessrio realizar aconselhamento
pr e psteste, fornecendo informaes acessveis sobre alguns aspectos tais como as
formas de transmisso, significados dos resultados dos exames, perodo de janela
imunolgica. necessrio sempre obter o consentimento do usurio ou de seu
responsvel.
OstestesparadetectaranticorposantiHIVpodemserclassificadoscomo:
Ensaiosdetriagem:desenvolvidosparadetectartodososindivduosinfectados,e
Ensaiosconfirmatrios,desenvolvidosparaidentificarosindivduosquenoesto
infectados,mastmresultadosreativosnosensaiosdetriagem(1).
Ostestesdetriagemsecaracterizamporseremmuitosensveis[1],enquantoostestes
confirmatrios so muito especficos[2]. Testes com alta sensibilidade produzem poucos
resultados falsonegativos, enquanto os testes com alta especificidade produzem poucos
resultadosfalsopositivos(1).
Os ensaios de triagem utilizados no Brasil so denominados Elisa e os ensaios
confirmatrios utilizados so: Imunofluorescncia indireta, Imunoblot e Western blot,
conformerecomendadonaPortaria59/GM/MS,de28dejaneirode2003(emanexo),onde
preconizadaarealizaodessestestes.
A metodologia de testagem utilizando testes rpidos est sendo implantada no pas
desde 2005, conforme o algoritmo disposto na Portaria 34/SVS/MS, de 28 de junho de
2005.
Alternativamente,paraaidentificaodainfecopeloHIVemcrianasnascidasde
messoropositivas,utilizamsetestesparaquantificaodacargaviraldoHIV1,emfuno
datransfernciapassivadeanticorpospelaplacenta.
JANELAIMUNOLGICA
AnticorposespecficoscontraoHIVcomeamaserproduzidosapsocontgio.No
entanto,otempoexatoparaseuaparecimentodependedevriosfatores,relacionadosao
hospedeiro e ao agente viral, dentre outros. Esses anticorpos podem estar presentes em
nveisbaixosduranteainfecorecentetodavia,ensaiosmaisatuaisincluindoosensaios
de terceira gerao do tipo sandwich podem detectar anticorpos nas primeiras trs a
quatrosemanasapsainfeco(1).
De acordo com Fiebig et al(2), o perodo de janela imunolgica para deteco de
anticorpos em um ensaio imunoenzimtico que detecte anticorpos da classe IgM de 22
dias,paraadetecodeantgenop24,deaproximadamente17diasedetecodeRNA
HIV, de 12 dias aps o perodo de eclipse. Esse perodo caracterizado por marcadores
viraisindetectveisemamostrasdesangue,podendoduraratsetediasapsaexposio
viral.
Operodototalparaadetecodeanticorpos,isto,ajanelaimunolgica,asoma
doperododeeclipse(setedias)edoperododedetecodeanticorposantiHIVdaclasse
IgM (22 dias), ou seja, em mdia 29 dias, j que em torno de 90% das infeces so
detectadasnesseperodo.OsanticorposantiHIVsodetectadosmaisprecocementenos
testesElisa(EIA)doquenostestesWesternblot(WB),emfunodeosEIAseremmais
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sensveisqueosWB.EssaarazopelaqualaPortarian59/GM/MSdeterminaque,em
umaamostracomresultadoreagentenoEIAenegativoouindeterminadonoWB,devese
investigar a soroconverso no indivduo, coletandose uma nova amostra 30 dias aps a
coletadaprimeiraamostraerealizandotodosostestespreconizadosnareferidaportaria.
Os ensaios de 4 gerao que detectam o antgeno p24 e anticorpos antiHIV
podemreduziroperododejanelaimunolgica.Noentanto,importanteinvestigar,queem
caso de reatividade nesses testes, se a mesma inerente presena de anticorpos
realizandose os testes confirmatrios, uma vez que o diagnstico da infeco pelo HIV
baseiasenasoroconversocompleta.
O Ministrio da Sade recomenda que o teste antiHIV seja realizado 60 dias aps
umapossvelinfeco.
Artritereumatide
Doenas autoimunes, como lupus eritematoso sistmico, doenas do tecido
conectivoeesclerodermia
Colangiteesclerosanteprimria
Terapiacominterferonempacienteshemodialisados
SndromedeStevensJohnson
Anticorpoantimicrossomal
AnticorposHLA(classeIeII)
Infecoviralaguda
AquisiopassivadeanticorposantiHIV(demeparafilho)
Neoplasiasmalignas
Outrasretroviroses
Mltiplastransfusesdesangue
Anticorpoantimsculoliso.
Observaes:
Os laboratrios podem optar pela realizao da Etapa II ou Etapa III, para
confirmaosorolgicadasamostras.
Em alguns casos como, por exemplo, em resultados discordantes entre dois
mtodosdiferentes,almdaEtapaII,necessriorealizaraEtapaIII.
Diante de um resultado positivo, aps a etapa de confirmao sorolgica, os
laboratrios devem solicitar uma nova amostra do paciente, a fim de confirmar o
seuestadosorolgico.
Diantedeumresultadoreagenteouinconclusivonoprimeiroimunoensaio(Elisa)e
negativo ou indeterminado no Western blot, devese observar a necessidade da
realizaodeinvestigaodasoroconversooupesquisadeantiHIV2.
Todos os conjuntos de diagnstico utilizados para a realizao do diagnstico
laboratorialdainfecopeloHIVdevemsercapazesdedetectarantiHIV1eanti
HIV2,almdeterregistronoMinistriodaSade.
Figura1:FluxogramaparadetecodeanticorposantiHIVemindivduoscomidade
acimadedoisanos(recomendadoacimade18meses).
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Cliquenaimagemparaampliar
Cliquenaimagemparaampliar
LEGENDA:
Teste1ETeste2=Imunoensaio
IFI=ImunofluorescnciaIndireta
IB=IMUNOBLOT
IC=INCONCLUSIVO
I=INDETERMINADO
()=NOREAGENTE
(+)=REAGENTE
Cliquenaimagemparaampliar
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REFERNCIASBIBLIOGRFICAS
1.ConstantineN.HIVAntibodyAssays.HIVInSiteKnowledgeBaseChapter.
2.FiebigEW,WrightDJ,RawalBD,GarretPE,SchumacherRT,PeddadaL,Heldebrant
C,SmithR,ConradA,KleinmanSH,BuschMP.DynamicsofHIVviremiaandantibody
seroconversion in plasma donors implications for diagnosis and staging of primary HIV
infection.AIDS2003,1718711879.
3.Branson,BM.RapidtestsforHIVAntibody.AIDSRev20002:7683.
4. World Health Organization. Rapid HIV tests: guidelines for use in HIV testing and
counselingservicesinresourceconstrainedsettings.Geneva,2004.
5.FerreiraJrOC,FerreiraC,RiedelM,WidolinMRV,BarbosaJniorA.FortheHIVRapid
TestStudyGroup.EvaluationofrapidtestsforantiHIVdetectioninBrazil.AIDS 2005,
19(suppl4):S70S75.
6.DiagnsticosorolgicodainfecopeloHIVTestesdetriagemBraslia:Ministrioda
Sade, Programa Nacional de Doenas Sexualmente Transmissveis e AIDS, 1997.
(SrieTELELAB).
7.________PortariaN.59,28dejaneirode2003.DirioOficialdaUnio.Braslia,30de
janeirode2003.
8.________Portarian.34,de28dejulhodejulhode2005.DirioOficialdaUnio.Braslia,
29dejulhode2005.Seo1,p7778.
EtapaITriagemSorolgica
TodososlaboratriosquerealizamtestesparadetecodeanticorposantiHIVpara
o diagnstico laboratorial devero adotar, obrigatoriamente, a realizao de um
imunoensaio, nesta primeira etapa de testes de qualquer amostra de soro ou plasma. O
imunoensaioutilizadonopoderserdeavaliaorpida(testerpido)edeversercapaz
dedetectaranticorposantiHIV1eantiHIV2.
A)asamostrasnoreagentes,teroseuresultadodefinidocomoAmostraNegativa
paraHIV
B)asamostrasreagentesouinconclusivasdevemsersubmetidas:
B.1)aosegundoimunoensaioemparaleloaotestedeImunofluorescnciaIndireta
paraHIV1ouaotestedeImunoblotparaHIV.Osegundoimunoensaiodever
ter princpio metodolgico e/ou antgenos distintos do primeiro imunoensaio
utilizado.
B.2)diretamenteaotestedeWesternblot.
Asetapassubseqentes,IIeIII,destinamseconfirmaododiagnsticosorolgico.
EtapaIIConfirmaoSorolgicapormeiodeumsegundoimunoensaio
emparaleloaotestedeImunofluorescnciaIndireta(IFI)paraoHIV1ou
aotestedeImunoblotparaHIV.
O Ministrio da Sade colocar disposio dos laboratrios pblicos o ensaio
confirmatriodeImunofluorescnciaIndireta.
OslaboratriosquenodispuseremdestetestedeverorealizarotestedeImunoblot
ouotestedeWesternblot.
Para interpretao do teste de Imunoblot devero ser observados os critrios
adotadospelofabricantedoconjuntodediagnstico.
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EtapaIIIConfirmaoSorolgicapeloTesteWesternBlot(WB)
Para interpretao do teste Western blot, devero ser observados os seguintes
critrios:
Amostranoreagente:ausnciadebandas
Amostrareagente:presenade,nomnimo,2(duas)bandasdentreas:gp160/120
gp41p24.
Amostra indeterminada: qualquer outro padro de bandas diferente dos descritos
anteriormente.
A)AsamostrasnegativasteroseuresultadodefinidocomoAmostraNegativapara
HIV1epoderosersubmetidasinvestigaodesoroconversooupesquisade
anticorposantiHIV2.
B) Amostras positivas no teste Western blot tero seu resultado definido como
Amostra Positiva para HIV1. obrigatria a coleta de uma segunda amostra
pararepetiraEtapaIvisandoaconfirmarapositividadedaprimeiraamostra.
C) As amostras indeterminadas tero seu resultado definido como Amostra
Indeterminada para HIV1 e podero ser submetidas investigao de
soroconversooupesquisadeanticorposantiHIV2.
Recomendaes
Investigaodesoroconverso
Para investigao de anticorpos, recomendase proceder coleta de uma segunda
amostra30diasapsaemissodoresultadodaprimeiraamostraerepetiroconjuntode
procedimentosseqenciadosdescritosnestaPortaria.Podemsertambmutilizadosoutros
testes baseados na deteco de antgenos ou de cido nuclico. O resultado definitivo da
infecodeveserbaseadonasoroconversocompleta.
InvestigaodeHIV2
Aps a realizao de todas as etapas obrigatrias e tambm recomendadas para a
detecodeanticorposantiHIV1,emamostrascomresultadoindeterminado,recomenda
serealizarainvestigaodeHIV2quandoosdadosepidemiolgicosforemsugestivosde
infecoporestevrusouseosdadosclnicosforemcompatveiscomainfecoHIV/aids.
Observaes
1) As amostras com resultado definido como positivo devero ter o resultado da
primeira amostra liberado com a ressalva, por escrito, de que se trata de um
resultadoparcialequesomenteserconsideradocomodefinitivoapsaanliseda
segundaamostra.
2) Para amostras com resultado definido como positivo ser obrigatrio proceder
coleta de uma segunda amostra e repetir a etapa de triagem sorolgica descrita
acima,paraconfirmarapositividadedaprimeiraamostra,preferencialmenteemum
intervalodeat30diasapsaemissodoresultadoreferenteprimeiraamostra.
Caso o resultado do teste dessa segunda amostra seja noreagente ou
inconclusivo,deverosercumpridastodasasetapasdoconjuntodeprocedimentos
seqenciados. Em caso de resultados conclusivos discordantes na primeira e
segundaamostra,deversercoletadaumaterceiraamostraerealizadostodosos
testesparaaconclusododiagnstico.
3)Semprequeosresultadosdasegundaamostraforemdiferentesdosobtidoscoma
primeira amostra, ser preciso considerar a possibilidade de ter havido troca de
amostrasoualgumerroinerenteaosprocedimentosderealizaodostestes.
4) O laboratrio que emitiu o primeiro laudo dever realizar a anlise da segunda
amostra para a confirmao da positividade da primeira amostra. No caso de
recusaporpartedapessoaaqueserefereoprimeirolaudoempermitiracoletada
segunda amostra, dever a mesma firmar Termo de Responsabilidade indicando
osmotivosdarecusa.
5)AdetecodeanticorposantiHIVemcrianascomidadeinferioradoisanosno
caracteriza infeco devido transferncia dos anticorpos maternos antiHIV
atravs da placenta, sendo necessria a realizao de outros testes
complementaresparaaconfirmaododiagnstico.
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6) Devero constar dos laudos laboratoriais do diagnstico sorolgico da infeco
peloHIV:
asmetodologiaseosantgenosviraisutilizadosemcadaimunoensaio,e
a seguinte informao: O Diagnstico Sorolgico da infeco pelo HIV somente
poderserconfirmadoapsaanlisedenomnimo02(duas)amostrasdesangue
coletadasemmomentosdiferentes.
(*) Essa portaria ser republicada em virtude da alterao quanto idade para
aplicaododiagnsticousandoanticorposantiHIV,quepassaaconsideraraidadeacima
de18mesesaoinvsde2anos.
FluxogramadaPortaria59(verFigura1).
ANEXO2PORTARIAN34/SVS/MS,DE28DEJULHO
DE2005
Regulamenta o uso de testes rpidos para diagnstico da infeco pelo HIV em
situaesespeciais.
O SECRETRIO DE VIGILNCIA EM SUDE, no uso das atribuies que lhe
confereoArt.36doDecreton.4.726,de9dejunhode2003,econsiderando:
Que o conhecimento do status sorolgico da infeco pelo HIV e a precocidade do
diagnsticotornapossvelaadoodemedidasquepossibilitamainterrupodacadeiade
transmisso,almdepermitirumaatenoadequadaparaosindivduosinfectados
Que, em alguns locais do pas, h a ausncia de uma rede de laboratrios que
permitaumatendimentoeficienteeintegraldademandadetestesantiHIVexistente
QueoMinistriodaSadepromoveuumaavaliaodousodostestesrpidos,que
validouoseuusoparaodiagnsticodainfecopeloHIVe
Anecessidadedebuscaralternativasparaaampliaodoacessoaodiagnsticoda
infeco pelo HIV, em atendimento aos princpios da eqidade e da integralidade da
assistncia, bem como da universalidade de acesso aos servios de sade do Sistema
nicodeSade,resolve:
Art.1Regulamentararealizaodetestesrpidosparadiagnsticodeinfecopelo
HIV em servios de sade e maternidades, como estratgia de ampliao do acesso ao
diagnsticodainfecopeloHIV.
Art.2OdiagnsticodainfecopeloHIVpoderserrealizadoemserviosdesade
localizadosemreasdedifcilacessoematernidades,emparturientesquenotenhamsido
testadasparaoantiHIVnoprnatal.
Pargrafonico.Nosdemaiscasosemquehajanecessidadedaimplantaodessa
estratgia, de acordo com a definio da Secretaria de Vigilncia em Sade SVS/MS,
utilizarseoostestesrpidosparadetecodeanticorposantiHIV.
Art.3Oprocedimentoderealizaodostestesrpidossomentepoderserfeitode
acordo com normatizao definida pela SVS/MS, a partir do resultado do estudo de
avaliaodosreferidostestes,conformedispostonoAnexodestaPortaria.
Pargrafonico.OsprocedimentosseqenciadosdequetrataoAnexodestaPortaria
somente podero ser aplicados em servios de sade e de acordo com cronograma de
implantaoestabelecidopelaSVS/MS.
Art. 4 Os testes rpidos para o diagnstico da infeco pelo HIV sero realizados
exclusivamenteporprofissionaisdesadecapacitados,segundoprogramadetreinamentoa
serdefinidopelaSVS/MS.
Art. 5 O diagnstico da infeco pelo HIV utilizandose testes rpidos somente
poderserutilizadoemindivduoscomidadeacimade18(dezoito)meses.
Art. 6 Todos os laboratrios pblicos, privados e conveniados que realizam testes
para deteco de anticorpos antiHIV devero seguir, obrigatoriamente, o disposto na
Portarian59/GM,de28dejaneirode2003.
Art. 7 As instituies privadas podero realizar os testes rpidos com recursos
prprios,desdeque:
I.AdquiramostestesdefinidospelaSVS/MS
II. Desenvolvamprogramadetreinamentoparaarealizaodostestesrpidos,que
deversersubmetidoparaapreciaoeaprovaodaSVS/MSe
III.AtendamaodispostonoAnexodestaPortaria.
Art.8OMinistriodaSade,pormeiodaSVS,responsabilizarsepelaaquisioe
distribuiodostestesrpidosaosserviosdesadeematernidadespblicas,ondeachar
pertinenteaaplicaodestes.
1OstestesrpidosdeverosersubmetidosaumaanlisedecontrolenoInstituto
NacionaldeControledeQualidadeemSadeINCQS/FIOCRUZ,antesdaconclusodo
processolicitatrioparaasuaaquisio.
2Aaquisioserefetivadaapsatender:
a)aprovaodoINCQS/FIOCRUZe
b)registronoMinistriodaSade.
Art.9EstaPortariaentraemvigornadatadesuapublicao.
JarbasBarbosadaSilvaJnior
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HIVUTILIZANDOSETESTESRPIDOSEMINDIVDUOS
COMIDADEACIMADE18(DEZOITO)MESES
ComoobjetivoderealizarodiagnsticodainfecopeloHIV,utilizandoseostestes
rpidos,exigidoocumprimentorigorosodosprocedimentosseqenciadosdeacordocom
oseguintealgoritmo:
Todos os conjuntos de diagnstico utilizados devero estar obrigatoriamente
registradosnoMinistriodaSadeedeverotersidosubmetidosaumaanlisedecontrole.
Osserviosdesadequerealizamtestesrpidosparaodiagnsticodainfecopelo
HIVdeveroadotar,obrigatoriamente,arealizaodedoistestesT1eT2emparalelo,
nesta primeira etapa de testes de qualquer amostra de sangue total, soro ou plasma. Os
dois primeiros imunoensaios devero apresentar valores de sensibilidade de 100% na
anlisedecontroleaserrealizadanoINCQS/FIOCRUZ.
a) Asamostrasnegativasnosdoistestesrpidosteroseuresultadodefinidocomo
AmostranegativaparaHIV
b) Asamostrasqueapresentaremresultadospositivosnosdoistestesrpidostero
seuresultadodefinidocomoAmostrapositivaparaHIV
Emcasoderesultadosdiscordantesnosdoisprimeirosensaios,aamostradeverser
submetidaaumterceirotesterpidoT3,quedeverapresentarvalorigualousuperiora
99,5%deespecificidadenaanlisedecontroleaserrealizadanoINCQS.
a)Quandooterceirotesteapresentarresultadopositivo,aamostraserconsiderada
positivaparaHIV
b)Quandooterceirotesteapresentarresultadonegativo,aamostraserconsiderada
negativa para o HIV. Nesse caso, recomendase proceder coleta de uma
segunda amostra, 30 dias aps a emisso do resultado da primeira amostra e
repetirtodooconjuntodeprocedimentosseqenciados.
Observaes:
1)AdetecodeanticorposantiHIVemcrianascomidadeinferiora18mesesno
caracteriza infeco, devido transferncia dos anticorpos maternos antiHIV
atravs da placenta, sendo necessria a realizao de outros testes
complementaresparaaconfirmaododiagnstico.
2)DeveroconstardoslaudosdodiagnsticodainfecopeloHIVonomedoensaio
easmetodologiasdecadaconjuntodediagnstico.
3) Todos os conjuntos de diagnstico devero ser capazes de detectar anticorpos
antiHIV1eantiHIV2.
SOBREOSDIREITOSAUTORAISDODOCUMENTO
Constanodocumento:
Todos os direitos reservados. permitida a reproduo parcial ou total desta obra,
desdequecitadaafonteequenosejaparavendaouqualquerfimcomercial.
OobjetivodositeMedicinaNeteseuseditoresdivulgaresteimportantedocumento.
Estareproduopermanecerabertaparanoassinantesindefinidamente.
[1]Sensibilidadecapacidadedeumtesteemidentificarosindivduosverdadeiramentepositivosouasua
capacidade em detectar antgenos ou anticorpos na amostra, mesmo quando presentes em pequenas
quantidades.
[2]Especificidadecapacidadedeumtesteemidentificarosindivduosverdadeiramentenegativosouasua
capacidade de caracterizar amostras noreagentes nas quais antgenos ou anticorpos no esto
presentes.
[3]Valorpreditivonegativoaproporodeindivduoscomresultadonegativoquenoestoinfectados.
Valorpreditivopositivoaproporodeindivduoscomresultadopositivoqueestoinfectados.
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