CROMATOGRAFIA

La cromatografa es una tcnica de separacin extraordinariamente verstil que

presenta distintas variantes. En toda separacin cromatogrfica hay dos fases
(slida, lquida o gas) una mvil y otra estacionaria, que se mueven una con
respecto de la otra manteniendo un contacto ntimo. La muestra se introduce en la
fase mvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase
estacionaria y la mvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un
tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la
separacin. Si un componente est la mayor parte del tiempo en la fase mvil el
producto se mueve rpidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la
fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho ms lenta.

tipo

fase estacionaria

fase mvil

lquido-slido

slido inerte como gel de

slice o almina

disolventes

resina cambiadora

soluciones
acuosas

lquido adsorbido en un
soporte slido

lquido

pelcula de lquido
adsorbida sobre un soporte
slido

gas

intercambio
inico
lquidolquido

gas-lquido

La ms utilizada en qumica orgnica es cromatografa lquido-slido en sus dos

variantes: cromatografa en columna (CC) y cromatografa de capa fina (TLC)

Cromatografa lquido-slido (columna)

Se emplea para la separacin de mezclas o purificacin de sustancias a escala
preparativa. Como fase estacionaria se usa, generalmente, gel de slice o almina
dentro de una columna como las que se pueden ver en la figuras. La eleccin del
disolvente es crucial para una buena separacin. Dicho disolvente pasa a travs de
la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicacin de presin
(cromatografa flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente y
se rellena la columna poniendo en el fondo de sta un poco de algodn o lana de
vidrio, para evitar que la slica o la almina queden retenidas en la columna y d el
disolvente se enrasada hasta el nivel del soporte. A continuacin se introduce la
muestra por la parte superior de la columna y se eluye con el disolvente elegido,
recogindose por lo general en tubos de ensayo, matraces Erlenmeyer o frascos.

El orden aproximado de elucin de compuestos es aproximadamente el que se

indica y la polaridad de los disolventes es el que se indica:

Cromatografa lquido-slido (capa fina TLC)

La tcnica de cromatografa en capa fina (TLC) es una de las ms comunes
empleadas en un laboratorio de Qumica Orgnica. Entre oras cosas permite:
*Determinar el grado de pureza de un compuesto
*Comparar muestras
*Realizar el seguimiento de una reaccin
*Controlar el contenido de las fracciones obtenidas en cromatografa de columna
La cromatografa en capa fina usa como fase estacionaria un slido como gel de
slice a almina conteniendo algn material que hace que se mantenga la fase
estacionaria sobre un soporte tal y como placas de vidrio, aluminio e incluso
materiales plsticos. Las placas pueden prepararse en el laboratorio o adquirirse en
el mercado.
Para realizar una cromatografa en columna se procede de la siguiente manera:
1) Preparar o cortar, en su caso, una placa de tamao adecuado.

2) Disolver una pequea cantidad de la muestra y, mediante un capilar de vidrio,

pinchar en la parte inferior de la placa a cierta distancia del borde.

3) Introducir la placa en un recipiente con el disolvente adecuado. Dicho recipiente

debe presentar una atmsfera saturada en el vapor del disolvente por lo que se
pone trozo de papel de filtro en la parte posterior y disponer de un sistema de
cierre.

4. Cerrar el recipiente y dejar que el lquido ascienda por capilaridad.

5) Revelar la placa para poner de manifiesto donde se encuentran los puntos.

6) Determinar las posiciones relativas de los puntos mediante el clculo del Rf