Virologia: Es reconocida como una ciencia biolgica bsica.

Es
una rama de la microbiologa que se ocupa de los virus y de las
enfermedades virsicas.

VIRUS: La palabra virus deriva del latin y significa lquido venenoso,

ponzooso.
Es un agente infeccioso, potencialmente patgeno que contiene como
gnoma un solo tipo de cido nucleico, sea RNA o DNA, nunca ambos
a la vez, como los microorganismos.
Son considerados como parsitos intracelulares obligados.
Son bioqumicamente inertes, no contienen ribosoma ni otros
elementos, no se reproducen por divisin binaria como las clulas. Los
virus se replican, aprovechando a las clulas que estn
metabolizando activamente.
El primer descubrimiento de un virus se debe a Dimitri Iwanowski,
quin en 1892 seal que este agente produca la enfermedad del
mosaico en la planta del tabaco, en 1898 lo confirm el bacterilogo
holands Martinus Beijerinck, en el mismo ao Loeffer y Frosch
describieron el primer virus animal, el virus de la fiebre aftosa. Desde
entonces el estudio de los virus ha progresado constantemente como
consecuencia de los avances tcnicos de los investigadores donde el
invento del microscopio electrnico en 1931 por Ruska y Knoll fue una
de las ms importantes contribuciones para los conceptos actuales
sobre la morfologa de los virus.

I.Propiedades fisicas de los virus

a) Tamao:
Mientras que los microorganismos se miden en micra (), los virus
se miden en
nanmetros (nm)
Su medida oscila entre 15 a 350 nm
1 (micra)
= 1000 (milimicra)
1 (milimicra) = 1 nm (nanmetro)

b) Forma: La forma de los virus se estudia a travs de su simetria.

La simetra es la configuracin o forma que adopta la nucleocpside
del virus. Existen dos formas bien definidas de simetria viral, cbica y
helicoidal y una forma indefinida o compleja.

Simetria cbica o icosadrica constituye una cpside isomtrica,

corresponde a la disposicin icosadrica de las subunidades en una
cubierta cerrada, el icosaedro tiene 20 caras, c/u un tringulo
equiltero, 12 vrtices y ejes de simetra rotacional.
Simetra helicoidal constituye una cpside tubular, las subunidades
protenicas estn fijas de manera periodica al cido nucleico viral, con
lo que lo amplian en un espiral de una cubierta que contiene lipidos.
Simetra compleja o indefinida: Algunos virus poseen una
estructura compleja, es decir donde el tamao del ncleo es ms
grande que los dems, rodeados por una serie muy complicada de
membranas y sub-estructuras que contienen muchas enzimas y
proteinas, pero que no muestran ambos tipos de simetria. Algunas
particulas virales no presentan simetra cbica o helicoidal sino que
tienen combinacin de estructuras y adems complicadas.

c) Arquitectura o estructura del virus:

1 . De acuerdo a su estructura los virus se dividen en dos grandes
grupos:
Virus simples o desnudos: Este grupo de virus se componen de
cido nucleico rodeado de una fina capa protectora la cpside, y que
jtintos constituyen la nucleocpside, desprovista de envoltura, es
decir permanece sin proteccin, por la que se los denomina desnudos.
Virus con Envoltura o Cubierta: En este grupo de virus la
nucleocpside se halla protegida por una envoltura o cubierta que en
la mayora de los casos deriva de la membrana citoplasmtica de la
clula husped. Esta envoltura consta de una membrana interna
protenica especfica del virus, una doble capa de lpido que deriva de
la membrana plasmtica de la clula huesped y de una capa externa
de glucoprotena con proyecciones especficas del virus (peplmeros)
2. De acuerdo a su ACIDO NUCLEICO se dividen tambin en dos
grupos:

VIRUS RNA
Picornavirus
Reovirus
Arbovirus
Myxovirus

VIRUS DNA
Papovavirus
Adenovirus
Herpesvirus
Poxvirus

d) Partes esenciales constitutivas del virus

Virin es sinnimo de virus inmaduro, es decir la partcula viral
infectante a travs de su ncleo que consta de:
Acido Nucleico: ya sea RNA o DNA se encuentra encerrado en una
cubierta protenica, ordenada simtricamente denominada cpside, la
cual puede estar rodeada por una membrana que contiene lpidos
llamada envoltura.
Cpside: es la capa de protena que rodea al cido nucleico, est
formada de pequeas sub-unidades proticas llamadas unidades
estructurales o capsmeros. Nucleocpside: La cpside junto con el
cido nucleico encapsulado
Capsmeros: unidad morfolgica de la cpside representada por un
grupo de
Polipctidos.
Envoltura o cubierta: membrana que contiene lpidos y que
circunda a ciertas partculas virales. Se adquiere durante la
maduracin del virus por un proceso de gemacin a travs de una
membrana celular.

e) Mtodos de estudio de los virus

Existe tres mtodos principales de estudio de Ia actividad viral
Mtodo biolgico Mtodo fsico - Mtodo qumico

1. Mtodo biolgico: Se basa principalmente en eI cultivo de los

virus, pues algunos virus pueden multiplicarse con xito por
cualquiera de los tres mtodos, mientras que otros solamente crecen
en el hospedador animal natural. Los virus pueden cultivarse de tres
maneras:
*Inoculacin a animales de laboratorio:
Ventajas:
Ha sido el primer mtodo de cultivo de Ios virus y durante muchos
aos, el nico, y si bien actualmente se prefiere el empleo de huevos
embrionados todava se emplean con xito para estudios clnicos,
patolgicos, y para la produccin de sueros antivirales. En algunos
casos tambin pueden emplearse para el diagnstico al considerarse
3

una respuesta clnica positiva o negativa ante la infeccin

experimental. Los animales de experimentacin ms utilizados son
ratones, cobayos, hmsters, conejos, urones, monos y pollos.
Desventajas:
Algunos inconvenientes del empleo de animales de experimentacin
son:
elevado costo en algunos casos
limitacin del espacio disponible para jaulas y materiales
infeccin cruzada entre anirnales
posible infeccin humana
existencia de virus latente o aberrante que pueden complicar Ia
interpretacn de la infeccin especfica
inmunidad producida por infeccin inaparente anterior a Ia
inoculacin del virus que investigamos.
* Inoculaciones en huevos embrionados: a partir de 1930 se
comenzaron a utilizar los huevos embrionados luego que Good
Pasture y colaboradores enfatizaron su valor potencial para la
multiplicacin viral. En Ios 20 siguientes aos fue el sistema ms
empleado, pero actualmente para algunos virus fue reemplazado por
los cultivos celulares. Los huevos embrionados pueden ser utilizados
para el diagnstico etiolgico por aislamiento directo, titulacin,
estudio y conservacin de cepas, deteccin y titulacin de
anticuerpos antivirales, produccin de antgenos produccin de
vacunas, etc. Son tambin muy irnportantes como suministro de
tejidos para realizacin de cultivos celulares. Los huevos utilizados
para estudios virolgicos deben ser obtenidos de aves sanas, libres de
infecciones bacterianas o virales. La presencia de virus endgeno
representa un peligro potencial porque pueden interferir en la
multiplicacin del agente inoculado o ser llevados con los sucesivos
pasajes junto con el virus que se trate de aislar .Antes de ser
inoculados, los huevos deben ser incubados durante el tiempo ptimo
para que el embrin, Ias cavidades extraembrionarias y sus
membranas posean eI tamao necesario segn la va de inoculacin a
emplear. El xito de la infeccin puede manifestarse con la muerte del
embrin, alteraciones macro y/o micro-patolgicas, cuerpos de
inclusion, depsitos de ureas, hemorragias sobre las membranas,
retraso del crecimiento embrionario, engrosarniento, edematizacin,
fibrosis de la mernbrana, etc.
Cultivos celulares: el cultivo de clulas es unas de las tcnicas
bsicas del Iaboratorio de virologa. Constituye el elemento
fundamental para la multiplicacin viral in vitro; ya que ofrece clulas
4

vivas rodeadas de un medio inanimado que provee el mximo de

condiciones favorables para Iograr infeccin y multiplicacin viral.
Las condiciones ptimas de cultivo varan en los diferentes tipos de
clulas, lo cual exige el conocimiento del sistema para asegurar
buenos resultados. Son muchas las variables a tener en cuenta y cada
una de ellas merece particular atencin segn el tipo de cultivo que
se realice y las clulas con que se trabaje: monocapa esttica,
monocapa en sistema roller, cultivos en suspensin, cultivos de alta
densidad (microcarriers) etc., siendo Ias ms importantes:
temperatura
Composicin del medio de cultivo
Ph
Concentracin de gases disueltos
Caractersticas del soporte inerte en el cual se propaga el cultivo.
Otros factores especficos

2. Mtodo flsico: los cientficos del principio de siglo saban que

existan seres vivos capaces de provocar enfermedades, y que estos
agentes eran ms pequeos que los objetos visibles con eI
microscopio ptico corriente. Sin embargo, a pesar de esta dificultad,
muchas de las propiedades fisicas de varios virus fueron
determinadas con notable exactitud.
El conocimiento sobre el tamao y morfologa de los virus ha
progresado a medida que se han descubierto y perfeccionado
instrumentos y tcnicas. Las tcnicas ms importantes son:
Filtracin: los experimentos de filtracin fueron empleados por
Jwanowski (1892) en su trabajo original que prob la existencia de un
virus. Emple filtros con poros que retenan las bacterias, pero que en
el filtrado se encontraba un agente infeceioso que haba pasado a
travs del filtro. Desde entonces se ha empleado esta tcnica para
separar la bacteria de los virus. Se emplean filtros de porosidades
diferentes y haciendo pasar los virus a travs de stos se determina
su tamao aproximado.
Existen varios tipos de filtros de acuerdo al fabricante de porcelana,
de barro de diatomeas, placas de asbesto y la membrana de colodin
y celulosa. El xito de Ia fltracin depende en gran parte del
conocimiento de las propiedades de los diversos filtros y de Ios virus
que van a ser filtrados.
Centrifugacin: la centrifugacin del material que contiene virus
puede hacerse con dos finalidades: para concentrar las partculas de
virus a fin de purificarlo para estudios detallados y para estudiar la
velocidad de sedimentacin, que es un dato para determinar el
tamao de los corpsculos elementales.
5

 Ultracentrjfugacin: es el mtodo ms utilizado que se basa en la

densidad, tamao y forma del virus. Los virus son concentrados
mediante su acumulacin en bolitas o esferas diminutas por
centrifugacin a alta velocidad. Se usa centrifugacin diferencial para
separar los virus de los constituyentes celulares. Los virus reunidos
resultante de Ia centrifugacin son obtenidos en la porcin superior o
mediante perforacin en el fondo del tubo de centrfuga.
Cromatografta: este mtodo consiste en separar los componentes
de tina mezcla compleja donde el flujo de un Iquido o un gas se cuela
a travs de una fase absorvente.
Microscopa electrnica: la microscopa electrnica es el mtodo
ms ampliamente utilizado para el clculo de la partcula viral.
Comparado con el microscopio ordinario el microscopio electrnico
utiliza electrones en lugar de rayos luminosos y el enfoque se realiza
mediante lentes electromagnticos en vez de lentes de cristal. Los
virus pueden ser observados en preparaciones hechas a partir de
extractos de tejidos en cortes ultra delgados de clulas infectados.

3. Mtodos qumicos: a travs de la utilizacin de agentes

qumicos se pueden aislar u observar cada uno de los constituyentes
virales. El cido nucleico se puede determinar por mtodo directo o
indirecto.
Mtodo directo: Ios cidos nucleicos de Ios virus se extraen por
fenol o sulfato sdico cada uno de los cuales desnaturaliza por
completo la protena, pero no ejerce efecto alguno sobre el RNA o
DNA. La determinacin del tipo del cido nucleico puede efectuarse
por anlisis de la composicin bsica, por hibridacin molecular, por
microscopa electrnica y por anlisis directo del azcar mediante el
empleo de valoracin clorimtrica de difenilamina.
Mtodo indirecto: se utilizan tambin varios mtodos para
determinar el cido nucleico viral, ellos son: tincin con naranja de
acridina, este colorante tiene afinidad por el cido nucleico segn el
color de la reaccin por microscopa de fluorescencia. El efecto DNA y
RNA de doble tira produce flourescencia verde-amarilla, eI DNA y RNA
de uria sola tira es de color rojo.

f) Efectos de los agentes flsicos sobre Ios virus

Calor y fro: hay gran variabilidad en la termoestabilidad de los
diferentes virus, es decir difieren en su totalidad al calor. Los virus
icosadricos (cbicos), como el reovirus, povavirus, papovavirus,
adenovirus, poxvirus tienden a ser estables y pierden poca
infectividad despus de varias horas a 37C y se pueden conservar a
4 C por algunos meses. Los virus cubiertos o envueltos son mucho
ms termolbiles (que se alteran o descomponen fcilmente por el
6

calor) y su ttulo disminuye con rapidz a 37C y a 57C no viven ms

de una hora como el mixovirus, virus tumorales, etc.
La infectividad de los virus generalmente se destruye por
calentamiento de 50C a 60C durante 3Omin.
Los virus pueden ser preservados por almacenamiento a
temperaturas de subcongelacin, y algunos pueden resistir la
liofilizacin y ser conservados eri estado seco a 4C e incluso a
temperatura de laboratorio. Los virus encapsulados tienden a perder
infecciosidad despus de un almacenamiento prolongado aun a - 90
C y son particularmente sensibles a la congelacin y descongelacin
repetidas.
La inactivacin a temperatura ambiente se debera a la accin de
enzirnas (ej. proteasas bacterianas) que daan la superficie viral a
temperaturas superores, el principal papel corresponde a la
desnaturalizacin de las protenas
La inactivacin por calor: hmedo y seco. El calor hmedo comprende
la esterilizacin por ebullicin directa y la otra por autoclave bajo
presin de vapor de agua a 121C por 15 a 20 minutos e incluso
hasta 30, es el mejor por su poder de penetracin. El calor seco
mediante el horno seco de Pasteur con una temperatura de 180 a
200C por dos horas como mnimo.
Radiaciones: todos los virus son inactivados por radiaciones
ionizantes, especialmente rayos X y gamma y radiaciones no
ionizantes como las ultravioletas. La reduccin de la infecciosidad de
los virus es directamente proporcional a la energa recibida (por el
cido nucleico). Los rayos X inactivan virus porque producen ruptura
en la cadena de los cidos nucleicos. Los rayos ultravioleta lesionan
los cidos nucieicos causando formacin de dmeros entre molculas
y por ende se impide la multiplicacin.
Ph: los virus son generalmente estable entre valores de Ph 5,0 y
9,0. Algunos virus como los enterovirus son resistentes a las
condiciones cidas. Todos los virus se destruyen en condiciones
alcalinas

II. Propiedades quimicas de los virus

Composicin-funcin cidos nucleicos: Ios virus contienen una
sola clase de cido nucleico ya sea DNA o RNA, que codifica Ia
informacin gentica necesaria del virus, el gnoma puede ser de una
sola tira o de doble tira circular o lineal, segmentado o no. El nmero
de tiras, el tipo de cido nucleico y el peso molecular constituyen las
principales caractersticas usadas para la clasificacin de los virus en
familia Todos los virus de DNA poseen doble tira de cido nucleico,
excepto eI grupo de parvovirus que tiene una sola. Todos Ios virus de
7

RNA son de tira nica excepto el grupo de reovirus en el cual es

doble.
El cido nucleico infeccioso aislado de los viriones pueden ser
hidrolizados por nucleasas, pero la partcula viral intacta es insensible
a tal tratamiento. Por otra parte el antisuero viral no neutraliza el
cido nucleico.
Protenas: eI principal constituyente del virin, la protena
representa el 50 a 70 % aproximadamente, lo cual incluye protenas
estructurales y enzimas. Casi todas las protenas del virin son
especficas del virus y las no estructurales especficas del virus
desempean un papel durante la multiplicacin viral.
Las proteinas estructurales de los virus desempean varias funciones
importantes. Su finalidad principal es facilitar la transferencia del
cido nucleico viral de una clula husped a otra. Sirven para
proteger al gnoma viral contra la inactivacin por las nucleasas,
participan en la adhesin de Ia partctila viral a una clula sensible y
proporcionan la simetra estructural de la partcula viral, adems
establecen las caractersticas antignicas del virus.
Glucoprotenas: el carbohidrato es la parte prineipal de la
glucoprotena en las cubiertas virales, por otra parte las
glucoprotenas actuan como determinantes antignicos importantes a
los cuales se dirige a menudo la inmunidad del husped. En coiitraste
con los lpidos de Ias membranas virales que se derivan de la clula
husped las giucoprotenas de la cubierta estn codificadas por virus.
Enzimas: algunos virus poseen enzirnas ( que son protenas) dentro
de los viriones. Las enzimas se encuentran en cantidades muy
pequeas, y probablemente carecen de importancia para la
estructura de las partculas virales; sin einbargo, son indispensables
para iniciar el cicio de replicacin viral cuando el virin entra en la
clula husped.
Lpidos virales: mltiples virus contienen envolttLras de lpidos como
parte de su estructura. El lpido se adquiere cuando la nucleocside
viral experimenta gemacin a travs de una membrana celular
durante la maduracin.
La composicin especfica fosfolpida de la ctibierta de un virin se
determina por eI tipo particular de rnembrana celular que participa en
el proceso de gemacin

b) Efecto de los agentes qumicos sobre los virus

Sensibilidad
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Al ter: puede distinguir a los virus que poseen una cubierta rica en
Ipidos, de los que no Ia poseen. Algunos virus son inactivados por el
ter otros son resstentes, mientras que otros varan en su
sensibilidad.
A detergentes: los detergentes no inicos como el triton x-100
solubilizan a los constituyentes Lpidos de las membranas virales, las
protenas virales de las mismas quedan liberadas (desnaturalizadas).
Los detergentes aninicos, como dodecilsulfato de sodio, solubilizan
las cubiertas virales; adems, desintegran las cpside en polipptidos
separados.
Formaldehdo: destruye Ia infectividad viral al reaccionar con el cido
nucleco. Los virus que tienen gnomas de una sola tira quedan
inactivadas con mucha mayor facilidad que los que tienen doble,
adems ejerce efectos adversos mnimos sobre la antigenicidad de
las protenas por lo tanto se utilizan a menudo para producir vacunas
de virus inactivados. Entre Ios desinfectantes que demuestran mayor
eficacia de inactivacin destacan agentes oxidantes corno perxidos
de hidrgeno, permanganato de potasio e hipoclorito sdico. Las
soluciones desinfectantes estndar de compuiestos de amonio
cuaternario, fenol, cresol y las de yodo orgnico no son tan eficaces,
excepto contra unos pocos virus.
Antibiticos y agentes antibacterianos: carecen de efectos en los
virus, sin embargo se disponen de algunos frmacos antivirales como
la acidotimidina, la didesoxilinosina, el aciclovir, danciclovir,
vdarabina y otros que han demostrado cierta actividad antivral con
ciertas condiciones.

METODO DE ESTUDO Y CARACTERIZACION DEL

VIRUS
Para el estudio de los virus se requiere de una buena cantidad de
virus para lo eual se debe en primer lugar cultivar y replicar in vitro.
Para lograr este objetivo bsicamente consideraremos tres mtodos
de estudio esenciales que son mtodo biolgico, fisico-qumico y
serolgico.
Mtodo Biolgico: se basa principalmente en el cultivo de virus a
travs de clulas vivas. Estos pueden desarrollarse y multiplicarse en
animales, huevos embrionados y en cultivo de clulas.
Multiplicacin viral en animales de laboratorio:
El uso de animales receptivos fue eI primer mtodo utilizado para la
multiplicacin viral. Los animales de experirnentacin ms utilizados
son ios ratones, hnsters, cobayos, conejos, urones y pollos y algunos
otros animales grandes como perros, ovinos, caprinos, equinos,
9

bovinos y monos.Dentro de estos aniinales de laboratorio los ms

utilizados son los ratones, hnsters y cobayos y de preferencia los
ratones blancos; estos son criados exclusivamente para uso de
laboratorio y mantenidos en condiciones estril en locales especiales
llamados Bioterios los cuales estn ubicados aislados del laboratorio.
Los funcionarios afectados al bioterio al entrar en el laboratorio deben
cambiarse de ropa y a la salida se baan y se cambian de ropa de
calle nuevamente esto es con el fin de evitar la introduccin o salida
de microorganismos al local.
La ventaja de estos ratones blancos es que inmecliatamente despus
del parto, horas despus entran en celo lo cual lo habilita de vuelta a
la reproduccin (prez-cria). Los ratones son en su mayora
utilizados en su perodo de lactancia hasta los 2 1 das de edad.
EI bioterio debe tener suficiente espacio, buena ventilacin, piso y
pared azulejado para fcil lavado y desinfeccin. Los animales deben
estar perfectamente dentificados, aquellos que mueran dentro de las
24 - 48 horas post inoculacin son descartados debido a que se
consideran muertes inespecficas, sea producto de la inoculacin, de
la va empleada o contaminacin bacteriana, etc.
Los inoculados deben observarse diariamente para detectar toda
sintomatologia posible, los que mueren deben ser necropsiados (si
hay lesiones en la necropsias se recoger el material infectado) y los
sobrevivientes al fnal deben ser sacrificados autoclavados o
incinerados en hornos crematorios.
Las vas de inoculacin a utilizar depender del virus a ser estudiado
y su posible histotropismo, se puede realizar el inculo por va
subcutnea (SC), iritramuscular (IM), endovenosa (EV), intracardiaca
(lCa), intraperitoneal (IP), intranasal (IN) e intracerebral (ICe).
Para la investigacin de algunas enfermedades se relacionar con el
animal a emplearse eI volumen del inculo y la va a ser utilizada. Ej.
enfermedades neurotrpicas , rabia, influenza, enfermedades
vesiculares de los animales domsticos, etc., se emplean ratones
lactantes va ICe y un volumen de 0,01 ml en cobayas lactantes y de
0,05 ml en cobayas adultas.
El cultivo viral en animales (hospedador experimental) se basa en las
inoculaciones de pasajes sucesivos, hasta obtener Ia infeccin, lo que
signifca que se ha conseguido Ia multiplicacin viral.
Los animaies de Iaboraiorio pueden ser utilizados para
Produccin de vacunas:
Control de vacunas (inocuidad y potencia)
Titulacin de virus (nivel de virus en suero)
Seroneutralizacin (dosage del nivel de anticuerpo en suero)
10

Para investigaciones varias (para conocer otras cepas sobre el mismo

virus)
Multiplicacin viral en huevos embrionados
Los huevos embrionados pueden ser utilizados para .Ia multiplicacin
viral para eI diagnstico etiolgico de enfermedades por aislamiento
directo, titulacin, estudio y conservacin de cepas, deteccin y
titulacin de anticuerpos antivirales, produiccin de antigenos
diagnsticos y produccin de vacunas.
Los huevos a ser utilizados para estudios virolgicos deben ser
obtenidos de aves sanas, embrionados en tiempo ptimo de 10 a 12
das de incubacin.
Los virus que se inoculan en huevos embrionados multiplcan en
clulas de tejidos y rganos de los embriones y en la clula de las
membranas extraembrionarias.
La va de inoculacin a seleccionar depender de la afnidad del virus
(tropismo) por el tipo de clula constittiyente del embrin, sus
membranas endo, meso y ectodermo. Ej. los mixovirus y
paramixovirus tienen afinidad por la cavidad alantoidea
( endodermo).
Los rabdovirus y togavirus por sacovitelino (endo y mesodermo)
Los herpevinis y poxvirus por la membrana corioalantoidea
(ectodermo).
l xito de la infeccin puede manisfestarse con Ia muerte del
embrin, con Ia serie de alteraciones patolgicas, hemorragia sobre la
membrana y otros. La inoculacin: a travs de la cmara cle aire
hacia eI extremo achatado del huevo, una tijera mediante se retira la
cscara y se inocula a cavidad o membrana elegida de acuerdo al
virus a ser estudiada (membrana corioalantoidea, cavidad alantoidea,
cavidad amnitica y saco vitelino).
Estos virus inoculados en los embriones de huevos multiplican en las
clulas de los tejidos y rganos de los embriones y en Ias clulas
extraembrionarias. Cuando se realiza la extraccin en el tiernpo
adecuado, los fludos infectados y membranas proveen una gran
cantidad de material viral, relativamente libre de protenas extraas
Multiplicacin viral en clulas cultivadas
Si bien conocemos que el cultivo de clulas es una de Ias tcnicas
bsicas actual de laboratorio de virologa, ya que ofrece clulas vivas
rodeadas de un medio inanimado que provee el mximo de
condiciones favorables para lograr la infeccin y multiplicacin viral.
Constituye el elemento fundamental para la multip1icacn in vitro.
La inoculacin del virus se realizar bien en el momento de sembrar
la clula o una vez formada Ia monocapa, ya que despus de
dispersada la clula tiene un perodo de refactariedad a la infeccin.
11

Para aislar la mayora de los virus (hisopado de sangre, trozo de

tejido, etc.) es procesada convenientemente y se inocula en las
clulas elegidas por su susceptibilidad y propagadas
convenientemente (cultivo de suspensin, monocapa esttica o
sistema roller).
Aunque cada virus puede ser capaz de infectar y replicar en varios
sistemas celulares, un cultivo celular en especial puede ser ms
sensible qtie otros (permisividad celular).
Este es un detalle a tener en cuenta pues de otra manera se puede
deteminar falsos negativos.
En eI proceso de multiplicacin viral el lquido nutritivo empleado para
el crecimiento de las clulas se sustituye posteriormente por otro
lquido nutritivo que contenga virus. Tras un perodo de incubacin
aparecen reas de clulas necrticas, como resultado del crecimiento
del virus en la misma.
Efecto del virus sobre las clulas cultivadas
La infeccin de la clula del husped por virus, causa alteraciones
metablicas y citolgicas (sntesis macromolecular y cambios
bioqumicos en Ias clulas).
En Ia primera se produce una inhibicin de su metabilismo y corno
resultado culrnina con el desprendimiento celular y muerte ( sin
efectos citopticos - sin dao celtilar).
En la segunda el efecto citoptico (ECP) donde ocurre cambios
bioqumicos en las clulas infectadas susceptibles al virus y que en
muchos casos se produce ECP y muerte de la clula.
Los tipos de efectos citopatognicos bsicos son:
Efecto ltico (desprendimiento celular)
Vacuolizacin (agujero en Ia clula: citoplasma o nuc1eo)
Agregacin celular
Cuerpos de inclusin: son masas de partculas virales, restos de
clulas, bacterias, componentes qumicos, etc. ubicados en el nuc1eo
o citoplasma de Ia clula).
Sincitios: son fusiones de clulas entre s debido a la infeccin por
alteracin de la membrana celular.

Mtodos: fsico, qumico y serolgico en el estudio

del virus
Los mtodos fsico y qumicos juntos han proporcionado valiosos
aportes en el estudio y caracterizacin del virus (tamao, forma, tipo
y estructura).
Las principales tcnicas fsico-qumica son:
U!tracentrifugacin: este es el mtodo ms usado basado en la
determinacin de la forma, tamao y densidad del virus. La centrfuga
12

es el aparato utilizado en la tcnica de ultracentrifugacin a una

velocidad entre los 45.000 a 65.000 rpm. y refrigerada a una
temperatura de - 30 a -35C (bajo cero) a fin de mantener la
viabilidad del virus.
Aglutinacin e inhibicin: el trmino aglutinacin se usa
frecuentemente para la identificacin de ciertos virus y en la
comprobacin de los anticuerpos correspondientes (de ese virus).
La hemoaglutinacin ( HA) se refiere a la capacidad qtie presentan
muchos virus de aglutinar los glbulos rojos de distintas especies
animales.
La capacidad de hemoaglutinacin refleja el hecho de que algunos
eritrocitos posean receptores para ciertos componentes de ia
superficies de las partculas
virales que funcionan como proteinas de adherencia a ias clulas.Ej.
ortomixovirus y paramixovirus.
Las reaciones de inhibicin de la aglutinacin (HI) son mtodos
adecuados para determinar Ia presencia de anticuerpos especfficos
en el suero de Ios individuos enfermos o convalecientes, es decir que
ciertos virus aglutinados a los eritrocitos y qtie rpidamente los
anticuerpos contra el virus inhiben la reacin (HI).
Los virus hemoaglutinantes(HA) poseen en algunos casos solamente
una enzima llamada hemoaglutinina mediante la cual se unen a los
glbulos rojos a travs de un fenmeno conocido como
hemoaglutinacin ( in vitro).
Algunos virus HA adems de la hemoaglutinina contiene otra segunda
enzima, Ia neuraminidasa, sta enzima es activada a 37 oc
temperatura de estufa produciendo una separacin del glbulo rojo
de los virus durante el proceso de la hemoaglutinacin. Este
fenmeno es denominado ELUCION viral.
Precipitacin: consiste en la deteccin de anticuerpos precipitantes
(precipitinas) a travs de reacciones de antgenos con anticuerpos y
que son muy especficas.
Un antgeno reaccionar slo con el anticuerpo estimulado por
antgeno de su propia clase. Ej. Tenemos la prueba de inmunodifusin
en agar para el diagnstico de la anemia infecciosa equina.Cabe
destacar adems que en el suero podemos encontrar tres tipos de
anticuerpos: NEUTRALJZANTES, FIJADOR D COMPLEMENTO) Y
PRECIPITA NTES.
Fijacin de Complemento: es una tcnica de diagnstico de
enfermedades para detectar anticuerpos fijadores de complementos
largamente usados para detectar el virus de la fiebre aftosa. Los virus
13

y clulas tienen receptores y una afinidad entre ellos que induce a la

fijacin. La falta de receptor es la causa de la resistencia de algunas
clulas a la infeccin por ciertos virus.
Sedimentacin: consiste en la velocidad de sedimentar un virus en
un medio de suspensin y conscuentemente se puede utilizar la
sedimentacin de un virus en la ultracentrifugacin tcnica
consistente en centrifugar a velocidad elevada con lo que se puede
determinar el tamao y la forma del virus.
Microscopa electrnica: el uso del microscopio electrnico es
importante como instrumento de investigacin y no se emplea en el
diagnstico habitual de los virus. Su valor fundamental se basa en Ia
determinacin del tamaio y forma de los virus, lo que significa su
aporte considerable en el estudio de los mismos. Mediante la
utilizacin de productos conjugados y anticuerpos especficos
Microscopa de Fluorescencia: es una tcnica de Iaboratorio que
sirve para detectar indirectamente la presencia del virus en clulas o
tejidos infectados
marcados con sustancias fluorescentes (ISOCIONATO DE
FLUORESCEINA), sta coloracin es vista a travs del rnicroscopio
electrnico con Iuz azul o ultravioleta y en donde se puede detectar la
presencia del virus en la muestra.
La seroproteccin: aunque no sea estrictamente serolgica, se
aplica al estudio e identiticacin de aquellos virus que pueden
emplearse para producir una vacuna satisfactoria. Este procedirniento
se emplea tambin en Ia contrastacin de muchos sueros y vacunas
comerciales.
La prueba de proteccin comprende la inmunizacin activa o pasiva
de un animal, seguida de la inoculacin con virus violento.
Seroneutralizacin: las reacciones de neutralizacin se utilizan para
el estudio del virus sea con la sero-neutralizacin (SN) y la virusneutralizacin (VN).
En la seroneutralizacin se ernplea virus conocido, al que se nade
suero problema. Si existe en eI suero anticuerpos que se
correspondan con eI virus, ste resulta neutralizado o pierde su poder
infectante.
Suero problerna
Virus Conocido 0,1 mI.
Puro Dl. 1/5 1/25 1/125 1/625 1/3125
14

A estufa a 37C x 30 min.

Se inocula a 10 ratones c/cada dilucin de suero + virus va
intracraneal, luego observar x 14 das a los animales inoculados,
contar a partir del 5 da cuntos rnueren y cuntos sobreviven y se
opta por la dilucin de suero que protegi al 50%
PURO MUERTOS SOBREVIVIENTES /oM %S
Dil 1:5 0 10 0% 100%
Dil 1:25 8 20% 80%
Dil 1:125 3 5 30% 70%
Dil 1:625 5 5 50% 5O%
Dil 1:3125 9 1 90% 1O%
En Ia Virusneutralizacn o Titulacin Vira (lo opuesto a Ia
Seronetitralizacin) es una tcnica laboratorial que permite
determinar la dilucin del virus que mate al 50% de los animales
inoculados (I)L50%). Las reacciones de neutralizacin viral es similar
a la Seroneutralizacin salvo que eI suero es conocido y el virus no.
Suero conocido
Virus puro
puro Dil. 1115 1/25 1/125 1/ 625 1/1325
Epidemiologa
La supervivencia interepidmica de los virus es un problema
interesante para los epidemilogos, puesto que Ios virus en general
no sobreviven mucho tiempo fuera del hospedador animal. Se deduce
que la supervivencia interepidemica de los virus depende
primordialmente de las infecciones inaparentes de los animales
portadores.
En Ias virosis agudas generalizadas es frecuente que el virus se
elimine en la fase aguda de la enfermedad o durante la convalecencia
un virus vive por meses o aos, sin embargo en algunos casos la
eliminacin cesa inmediatamente.
Por lo general los anticuerpos del suero impiden la eliminacin del
virus dentro del organismo, aunque en ocasin coexisten en la sangre
virus y anticuerpo.

INFECTIVIDAD VIRAL

Los

virus solo se multiplican en

clulas vivientes.

RELACIN =VIRUS / CLULA:

Se establece desde que el virus penetra e infecta a una

clula husped hasta la eliminacin de la progenie viral.
15

Necesitamos conocer el mecanismo de la multiplicacin viral

entender como los virus entran y salen de las clulas,

Como las matan ,

en que
estadios
quimioteraputicos.

A veces el virus: no se adhiere a la clula (clulas no

permisivas), por lo tanto no hay cambios visibles.

Otras veces el virus: se adhiere a la clula (clulas

permisivas), penetran en la clula pero sta no permite que el
virus comande su genoma, por lo tanto el virus es eliminado.

O a veces el virus: penetra, sintetiza su genoma, se integra al

genoma celular dividindose la clula sin alteraciones visibles.

Otras veces el virus: llega a dominar el genoma celular,

sintetiza sus componentes y termina en progenie viral, al
cual nos referiremos al hablar de
multiplicacin
viral.

Resumiendo, decimos que la relacin virus-clula depende

tanto del virus como de la clula husped.

transforman al estado
son susceptibles a agentes

maligno y

REPLICACIN VIRAL:

La clula husped debe proporcionar la energa y la maquinaria

necesaria para la sntesis de las protenas virales y del cido
nucleico.

Los virus han desarrollado diversas estrategias para lograr la

multiplicacin en las clulas husped parasitadas por ellos.
Aunque los detalles varan de un grupo a otro el patrn general
de los ciclos de replicacin es semejante.
El mecanismo de la replicacin de los Virus tanto DNA y/o RNA
difieren notablemente unos de otros
Los pasos o fases de tal replicacin para ambos grupos son
similares.

La infeccin de las clulas susceptibles de un virus en muchos

casos culmina en la multiplicacin con descendencia
subsiguiente de dichos virus.
INFECTIVIDAD VIRAL
Por mediacin de sitios receptores
16

Ciertas clulas tienen espinas en su superficie considerados

receptores
Todos los Virus tanto desnudos o envueltos, tiene en la
superficie externa los llamados sitios de adherencias
Ciertas clulas tienen espinas en su superficie considerados
receptores
Los sitios receptores y una afinidad entre ellos (virus y clulas)
facilita la fijacin del virus a la clula.
Es el primer paso para la infeccin viral.
Sin mediacin de sitios receptores:
Algunos tipos de clulas carecen del sitio de recepcin y es la
razn por la cual las clulas resisten a la infeccin por los virus

Fases de la Replicacin Viral.

Fase 1 Fijacin o adsorcin:
Constituye la primera
etapa de
infeccin viral
Los virus poseen en su superficie los llamados sitios de
adherencia
Las clulas poseen los llamados sitios receptores y una
afinidad entre ellos inducen su fijacin.
La presencia o ausencia de receptores desempea una funcin
determinante de primer orden en el tropismo celular y la
patogenia viral; (ejemplo, el poliovirus fija solo en las clulas
del sistema nervioso central.
En virus desnudos la cpside proteica son las estructuras para
la fijacin
Los virus con envoltura la glucoprotena de esta cubierta
participa en la fijacin.
Fase

2 - Penetracin:
Despus de la fijacin, la partcula viral entra en la clula.
Esta etapa se conoce como penetracin viropexia o fagocitosis.
La penetracin de un virus en el interior de una clula
susceptible depende de la temperatura, (ptima 37 C)
La estructura del Virus que penetra en el citoplasma husped
es la nucleocpside viral para ambos grupos de virus (desnudos
y envueltos).
La viropexia o englobamiento del virus por fagocitosis del
virus ,es el mecanismo predominante de la penetracin viral en
animales,
Mientras que la fusin ocurre probablemente ms a menudo en
los virus provistos de envoltura.
17

Fase 3 - Escape o salida

Es la liberacin del ac. nucleico viral dentro delcitoplasma de la
celula
Despus de la adsorcin tanto la cpside proteica y la envoltura
viral se alteran y termina
con disolucin a
su entrada en el
citoplasma celular.
Lo que realmente libera al cido nucleico dentro de la clula es
la accin de enzimas celulares ( de la clula infectada).
La liberacin del cido
nucleico puede ocurrir en la
membrana celular, en el citoplasma o en el ncleo
Los virus DNA son de replicacin intranclear ( Ej. Hepatitis).
Por el contrario los RNA Virus son de replicacin
citoplsmica (V. Rbico).
Fase 4 Eclipse Viral
Esta fase es conocida como la desaparicin de
los
viriones
infecciosos que no pueden
ser
ya identificados en el
interior de la clula
Durante este perodo ocurre una serie compleja de
acontecimientos bosintticos ( mensaje enzima RNA
mensajeros de la clula y ataca al virus)
Este perodo de eclipse se refiere al tiempo transcurrido entre
la desaparicin de los viriones infecciosos y la aparicin de
nuevas partculas virales de la descendencia en las clulas
infectadas.
El perodo o fase eclipse incluye la transcripcin, translacin,
replicacin o reproduccin del cido nucleico viral, reunin y
maduracin de los nuevos virus, ensamble o unin finalmente.
Fase 5 Liberacin
Se produce la liberacin de miles de virus nuevos en el
lquido extracelular; estas nuevas partculas virales estn de
nuevo listos para iniciar un nuevo ciclo de replicacin viral
Los gnomas virales recin sintetizados y los polipptidos de la
cpside se ensamblan para formar los virus descendientes.
Estos virus se renen en el interior de estructuras citoplsmicas
a travs de los cuales los nuevos viriones son expulsados
continuamente.
Los pequeos virus de RNA o DNA son liberados primariamente
por extrusin (por empuje)
En la mayora de los casos brota la yema desde la membrana
citoplsmica
INFECTIVIDAD VIRAL
18

Se refiere al mecanismo de infeccin producida o

causada por los virus DNA Y RNA

Virus de DNA:
La transcripcin de DNA viral por transcriptasa celular
ocurre casi en todos
los virus DNA
En todos los virus DNA la replicacin o reproduccin del
cido nucleico viral (NA) ocurre en el ncleo.
En la mayora de los virus ocurre una reunin escalonada de los
componentes.
Despus de la reunin viral, los viriones del ncleo
emigran al
citoplasma como un proceso de maduracin y son
expulsados.

Virus de RNA:

La transcripcin en virus de RNA es diferente de la descripta

para los virus de DNA.
El gnoma RNA no utiliza la transcriptasa celular para su
transcripcin.
El gnoma de los virus de RNA con estructuracin en tira
positiva contiene el mensaje y acta directamente como mRNA
sin necesidad de transcripcin
El virus RNA con gnoma de estructuracin en tira negativa es
portador de transcriptasa asociada al virin para la
transcripcin de su genoma RNA a mRNA.(mensajero RNA)
La reproduccin o rplica , reunin y maduracin de RNA viral
ocurre en el citoplasma de la clula.

Tipos de infeccin

Tpicamente una infeccin viral produce una respuesta

inmunitaria dirigida contra uno o ms antgenos virales.
Se produce como consecuencia de la infeccin viral,
desarrollo
de
anticuerpos celulares y humorales.
El dosage de stos anticuerpos pueden ser usados para
diagnosticar una infeccin viral.
Para establecer el diagnstico de una infeccin viral se debe
demostrar serolgicamente por elevacin del ttulo de
anticuerpos contra el virus causal.
O mediante la demostracin del agente causal (por
aislamiento e identificacin)
El perodo de incubacin es el tiempo transcurrido entre
la infeccin y la primera manifestacin de signos
clnicos.

19

Durante el mismo el virus se disemina a diversos tejidos y

rganos de manera escalonada antes de alcanzar los rganos
blancos.
AGUDA
INAPARENTE
INFECCIN CRNICA
LATENTE
LENTA
CONGENITA
INFECCIN AGUDA
Es una infeccin con un perodo de incubacin corta, definida
en das.
Se manifiesta con los sntomas clsicos de la enfermedad de
que se trate.
El agente causal siempre es demostrable. Ej: enfermedades
como AIE, aftosa, rabia, etc.

INFECCIN INAPARENTE
Son infecciones con cortsimo perodo de incubacin.
En la mayoria de los casos pasan desapercibidos
Son asintomticos
O no hay tiempo para observar ninguna sintomatologia.
INFECCIN CRNICA
Es una infeccin persistente que sigue un curso prolongado y
a menudo irregular.
En muchos casos comienza como infeccin aguda en el cual el
virus tambin es demostrable. Ej: AIE
En muchos casos la enfermedad
clnica esta ausente
o de lo contrario
est
asociado con
disturbios inmunopatolgicos.
INFECCIN LATENTE
La infeccin latente es un padecimiento tambin persistente
en el cual el virus es activado con intermitencia
Resulta en multiplicacin viral rpida y manifestacin
recidivante de
la enfermedad. Ej: herpesvirus
INFECCIN LENTA
Es una infeccin persistente con largo perodo de
incubacin, que a menudo dura aos.
Seguido de una enfermedad lentamente progresiva que
generalmente es mortal. Ej., la leucemia,la AIE, el sida.
INFECCIN CONGENITA
Son infecciones que se establecen durante la preez.
20

Puede causar muerte del feto o la formacin de defectos

congnitos
El virus es al parecer transferido al feto cuando existe viremia
en la madre.
Estas lesiones generalmente son irreversibles. Ej: IBR,
Leptospira, Diarrea Viral Bovina, otros.

VIRUS ONCOGENICOS

Aproximadamente cerca de 150 de los ms de 600 virus

conocidos tienen potencial de producir tumores ya sean
benignos o malignos.
Tumor: es un crecimiento incontrolable de clulas permanentes
o temporales.
Puede ser generalizado o metastsico culminando con la
muerte del animal (tumor maligno)
Puede permanecer localizado y finalmente regresar (tumor
benigno)
Estos virus tienen la capacidad de iniciar en los animales la
proliferacin de clulas que conduce al desarrollo del tumor.
El cncer como un fenmeno
se origina en una sola clula
Una vez alterada la clula poseen nuevas propiedades
anormales que son trasmitidos genticamente a sus
descendientes.

VIRUS ONCOGENICOS DNA Y RNA

Tanto los virus DNA Y RNA tienen la capacidad de causar este
cambio en el funcionamiento celular
VIRUS ONCOGENICOS RNA
Entre los virus RNA el potencial oncognico est restringido a
un
solo grupo (retrovirus)
VIRUS ONCOGENICOS DNA
Mientras que por lo menos cuatro de los seis grupos de virus
DNA tienen capacidad oncognica (papovavirus adenovirus
poxvirus y herpesvirus).
VIRUS ONCOGENICOS RNA
Los virus oncognicos RNA son los agentes etiolgicos de
las leucemias y sarcomas en un gran nmero de especie
animal.
VIRUS ONCOGENICOS DNA
De entre los 4 grupos de virus oncognicos DNA, los
herpesvirus causan tumores malignos en su husped natural.
VIRUS ONCOGENICOS RNA
21

El grupo RNA oncognicos virus causan tumores malignos

en el husped directamente (leucovirus)
VIRUS ONCOGENICOS
El fenmeno central del sistema (tumor modelo) es la
trasformacin celular.
VIRUS ONCOGENICOS DNA
Grupo DNA oncognicos :Papovavirus adenovirus poxvirus y
herpesvirus
Varios virus DNA inducen tumores , mientras que otros forman
tumores en laboratorio.
Los papilomavirus, los nicos que causan tumor natural
(papiloma) en su husped original.
Varios adenovirus son oncgenos en condiciones de laboratorio
(tumor maligno in Vitro).
El poxvirus suele producir tumores benignos, pero si
maligno in Vitro (el mixoma del conejo).
De los 4 grupos de virus oncognicos DNA, los
herpesvirus causan tumores malignos en su Husped natural.
Hay 5 diferentes herpesvirus asociados con cnceres naturales
en el hombre y animal.
Enfermedad de Marek de las aves (osteoma).
Carcinoma: Lucke de la rana (del rion).
Virus de Epstein-Barr, virus causal de la mononucleosis humana
H. Saimir leucemia linftica mortal de mono - ardilla.
El herpes virus tipo 2 ligado al carcinoma cervical humano
(del tero).
Otras posibles relaciones o conexiones entre Herpes Virus y
cncer humano.
Con el carcinoma cervical de la mujer tiene una fuerte
relacin con el virus tipo 2 por los anticuerpos antivirales
encontrados.
Con el Cncer de naso farngeo: asociacin serolgica por
Anticuerpos encontrados entre el virus Epstein-Barr y el
cncer nasofarngeo humano.
En resumen est claro que los herpes virus oncognicos entran
en una permanente asociacin con los leucocitos de una gran
variedad de animales y que resulta en una pequea produccin
de virus pero s, en una gran proliferacin de clulas
transformadas.

PROPIEDADES GENERALES DE LOS VIRUS

PRODUCTORES DE TUMORES.

Los resultados de las investigaciones realizadas sobre las

transformaciones celulares in Vitro
22

Indican que el cncer se origina como un fenmeno que ocurre

en una sola clula.
Una vez alterada posee nuevas propiedades anormales que son
transmitidas genticamente a las clulas hijas.
Como consecuencia de ste fenmeno se observan 2
resultados en los animales:
1. Las clulas alteradas invaden los tejidos vecinos y producen
metstasis a distancia en otros rganos y tejidos, dando como
resultado la muerte del husped.
2. El husped controla las clulas alteradas a travs de
mecanismos inmunitarios
tanto humorales como celulares
(no avanza).
FORMAS DE RECONOCER LA TRANSFORMACION CELULAR
1.Aumento del metabolismo y la multiplicacin celular (in Vitro).
2.Cambio en la apariencia celular o de su disposicin en el cultivo de
clulas, el cambio se debe a la prdida de inhibicin de contacto.
La prueba de ms valor de la transformacin oncognica de
un sistema in Vitro, consiste en demostrar la
capacidad de producir tumor cuando se inocula en el husped
animal apropiado.
TRANSFORMACION CELULAR
No todas las veces esto es posible y se deber usar como
criterios de transformacin celular los siguientes factores:
a) El ms notable de entre estos factores es la prdida de la
capacidad de inhibicin de contacto.
b) Cambios en la absorbencia celular
c) Aumento de la velocidad de crecimiento
d) Aumento en la movilidad celular.
e) Adquisicin de nuevos antgenos.
VIRUS DE TUMORES HUMANOS
Hay clara evidencia de que el cncer mamario del ratn es
la consecuencia de una compleja interaccin entre el virus
por un lado y factores genticos por otra.
Investigaciones sobre cncer mamario humano indican que
puede ser de la misma etiologa que el ratn.
Esto se basa en dos hechos:
1- La ocurrencia familiar del cncer mamario de las mujeres
sugieren que la enfermedad en s o la susceptibilidad a ella es
trasmitida genticamente.
2-La leche humana de la persona afectada contiene partculas
virales que son morfolgicamente similares a los del tumor mamario
del ratn.

23

Finalmente no se sabe si los virus DNA y RNA oncognicos

inducen la formacin de tumores por el mismo mecanismo de
accin.
A pesar de que hay alguna evidencia que sugiere que ellos
convierten clulas normales en malignos por un mismo
mecanismo.
La biologa de los dos grupos es extremadamente diferente a
los posibles factores de cncer. Asi tenemos:
1- El hbito de fumar que predispone considerablemente a las vas
respiratorias superiores al cncer.
El consumo exagerado de bebidas alcohlicas (cirrosis heptica)
3- Factores hereditarios.
4- Factores nutricionales Inhalacin emanadas de productos
qumicos, y de plantas
de usinas nucleares, golpes, ect.

Conclusin

"No hay una causa definida

24

25