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- 1 - ESTRIFICATION:
Par un alcool en prsence dun acide fort:
R-CH-COOH + R-OH
NH2
Acide amin
H+
R-CH-COOR + H2O
NH2
Alcool
Esther
- 2 - AMIDIFICATION:
Formation d'amide: elle rsulte avec une amine.
Cette raction est importante si lamine provient dun autre
AA
elle conduit la liaison peptidique.
R-CH-COOH + NH2-R
NH2
Acide amin
R-CH-CO-NH-R + H2O
NH2
Amine
Amide
- 3 DCARBOXYLATION:
Donne naissance une amine, possible par voie:
R-CH2-NH2 + CO2
- 4 - FORMATION DE SEL:
Action dune base sur COOH:
R-CH-COOH + KOH
NH2
Acide amin
R-CH-COOK + H2O
NH2
Base
Sel
-1-
DSAMINATION:
R-CH-COOH + N2 + H2O
OH
Acide nitreux
Acide Alcool
-2-
ACTION DE LA NINHYDRINE:
H2N
O
H
CH-R
+ R-C
OH
O
NINHYDRINE
OH
HOOC
AA
O
HYDRINDANTINE
+ NH2 +CO2
O
Aldhyde
O H
O
OH
N +
OH
H
OH H
O
ammoniac O
+
hydrindantine
ninhydrine
+ 3H2O
OH
O
Pourpre de Ruhemann
-3-
RACTION DE
SANGER:
NO2
F +
NO2
H2N-R
NaHCO3
NH-R
NO2
FDNB
Driv N 2,4dinitrophnil
+ HF
-4-
RACTION DEDMAN:
R
OHC6H5 N = C = S + H2N-CH-COOH
R - CH - COOH
PITC
HN NH C6H5
H
R C ------ CO
S
(H+)
HN
N- C6H5
C
S
Phenyl-thiohydantoine
Driv N-Phnyl
Thiocarbamyl
-5- LA DANSYLATION :
Le Chlorure de Dancyl ragit trs facilement avec des
fonctions amines des AA pour donner des drivs
sulfonamides trs fluorescents donc facilement dlectables
mme dinfimes quantit AA.
Cette raction est 100 fois plus sensible que la raction de
Sanger .
CH3
CH3
CH3
CH3
N
N
- HCL
O S O
CL
Chlorure de dansyl
H
N-H
+ H-C-R
COOH
AA
O S 0
NH
R CH
COOH
Dansyl aminoacide
REMARQUE
Lintrt fondamental de ces quatre dernires
ractions rside en leur trs large utilisation dans
la dtermination de la structure primaire des
protines.
-6 - ACTION DE LA FLUORESCAMINE :
Elle ragit rapidement avec les AA permettant
lobtention de drivs extrmement fluorescents qui
permettent la dtection avec une grande sensibilit de
quantits de lordre de nanomole (n.mol).
Ces proprits chimiques sont trs utilises pour:
- les dosages des AA
- lanalyse squentielles des peptides
- la rvlation des AA en Chromatographie sur
couche mince .
O + R NH2
R-N
H2O
PH= 8-9
OH
O
fluorescamine
COOH
Compos trs fluorescent
PRINCIPE :
Premire tape :
filtration du mlange dAA analyser travers une rsine
constitue par des groupements sulfoniques (SO3-)
changeuse de cations on lui ajoute une solution acide (PH
= 2 ou 3) tous les AA sont sous formes de cations(charge + )
et donc se fixent sur la rsine
Nb: les AA basiques sont solidement lis et les AA acides le
sont moins.
Par augmentation du PH des tampons filtrs travers la
colonne la charge + des AA est progressivement neutralise
quand PH > Phi et leurs liaisons avec les groupements SO3- sont
rompus donc on lue le mlange (cest le faire migrer le long de la
colonne en faisant varier le PH et ainsi faire varier les charges des
AA et donc leur vitesse de migration)
Deuxime tape:
Analyse quantitative:
aprs addition de ninhydrine lfluent le mlange
circule travers un bain marie bouillant ou la raction
colore se dveloppe
La lecture se fait 570 nm et 440 nm pour les imino
acides
les mesures sont inscrites en continue sur enregistreur
( les AA sont identifis par la position de leur pic
dabsorption et leur quantit est donne par la surface
de ce pic).