Hojas Guía Bioquimica

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERA QUIMICA
GUIA DE LABORATORIO
BIOQUIMICA
Profesora: Dr. Magdalena

Diaz
Ayudante de Ctedra:
GUIA DE LABORATORIO:
Mara Jos Muoz Dvila

LABORATORIO DE BIOQUIMICA
BIOQUIMICA
MARIA JOSE MUOZ DAVILA
FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA


2014-20151. INTRODUCCIN
La bioqumica, anteriormente llamada de qumica biolgica o
fisiolgica, surgi a partir de las investigaciones de fisiologistas y
qumicos sobre compuestos y reacciones qumicas en seres
humanos y plantas el siglo XIX. El trmino bioqumica fue
propuesto por el qumico y mdico alemn Carl Neuberg (18771956) en 1903, aunque desde el siglo XIX grandes investigadores
como Wohler, Liebig, Pasteur y Claude Bernard estudiaran la
qumica de la vida sobre otras denominaciones.
Como primer instituto de investigacin estructurado y vuelto
nicamente para la qumica de la vida surgi en 1872, como
Instituto de Qumica Fisiolgica de la Universidad de Strasbourg
mientras que en 1880 la universidad norteamericana de Yale
estructuro los primeros cursos regulares de qumica fisiolgica.
Alrededor de 1899, cuando la universidad inglesa de Cambridge
cre el laboratorio de qumica dentro del departamento de
fisiologa, ayudado por Frederick Gowland Hopkins,primer profesor
de bioqumica de la Universidad de Cambridge, y tambin fundador
de la bioqumica inglesa.
La microbiologa por su parte es una ciencia relativamente reciente
con respecto a otras ramas de la biologa, y es el estudio de
microorganismos que desde comienza por el ao 1670 con la
invencin del microscopio por el cientfico Antoine Van
Leeuwenhoek, luego Luis Pasteur logra el mayor desarrollo y
reconocimiento de microorganismos como actores de una gran
diversidad de procesos.
Durante mucho tiempo los organismos causaron graves
enfermedades, pero desde la antigedad algunas especies
microbianas han sido utilizadas en procesos de produccin de
alimentos y actualmente se ha reconocido su importancia en
diversas reas de investigacin bsica, en la industria alimentaria,
ambiental y farmacutica.
Este manual est dirigido a estudiantes de ingeniera qumica que
inician su experiencia en el manejo de los microorganismos, y el
objetivo es que ustedes se inicien en el conocimiento de la biologa
bsica de los microorganismo, en sus caractersticas morfolgicas,
nutricionales de crecimiento, control y que adquieran las
habilidades necesarias para su manipulacin en el laboratorio.

No midas el xito por la cosecha de hoy. Mide el xito por las

semillas que plantas hoy.
Robert L. Stevenson
Quiero agradecer a la Ingeniera Lorena Villareal quien con sus
conocimientos se realiz este trabajo, y a los que fueron ayudantes
de ctedra de Biotecnologa quienes tambin aportaron con este
trabajo ao tras ao.
Ma. Jos Muoz Dvila
Quito-Ecuador
Octubre 2014
Tabla de Contenid

2. Generalidades
1 Manual de Redaccin
1
Estructura de un informe
Un informe debe contar con la siguiente estructura:
1 Ttulo
2 Resumen
3 Introduccin
4 Objetivos
5 Teora
6 Parte Experimental
a Materiales y Equipos
b Sustancias Empleadas
c Procedimiento
7 Procesamiento de Datos
a Datos Experimentales
b Mtodos de procesamiento de datos
c Clculos
d Resultados
8 Discusin
a Anlisis de la validez de mtodo
b Errores sistemticos y aleatorios
c Recomendaciones de mejoras de la experimentacin
9 Conclusiones
10 Referencias Bibliogrficas
11 Anexos
12 Cuestionario

2 Gua de Redaccin de los informes

1
Ttulo
Es la carta de presentacin del informe. Se utiliza para identificar y
diferenciar el trabajo prctico realizado de cualquier otro.
El ttulo debe considerar los siguientes aspectos:
Debe ser conciso, especfico.
Debe ser poco extenso (mejor recordacin)
Debe ser descriptivo
Se debe evitar que el ttulo comience
con:
Cuantificacin,
Determinacin, Experimentacin, Comprobacin, ya que esto le hace

redundante al trabajo prctico.
Se debe evitar colocar abreviaturas o cualquier cosa que no sea
evidente para el lector.
Ejemplo:
Determinacin del modelo matemtico de la viscosidad de la glicerina.
(Incorrecto)
Modelo matemtico para la viscosidad de la glicerina. (Correcto)
Introduccin
En esta seccin se hace una breve descripcin sobre el fundamento
terico del trabajo prctico a realizar.
Consiste de tres partes: el propsito, la importancia y el conocimiento
actual.
El propsito indica la razn o el por qu de la realizacin del trabajo
prctico.
La importancia indica la relevancia del trabajo prctico en una aplicacin
industrial.
El conocimiento actual hace referencia al fundamento terico aprendido
en clases.
Objetivos
Es lo que se piensa que se puede obtener, comprobar, analizar de los
ensayos.
Por ejemplo, en trabajos experimentales, los objetivos estn orientados a
comprobar interacciones de compuestos, fenmenos fsicos y qumicos.
6

Se debe evitar que el objetivo trate de alcanzar efectos que no se

pueden medir (entendimiento, aplicacin de conocimientos, etc.).
Teora
Est enfocada a dar una idea del fundamento terico base del
experimento a realizar. Es lo que sustenta, en este caso, lo que est
sujeto a comprobacin o determinacin.
La teora debe considerar los siguientes aspectos:
Debe ser concisa (fcil lectura, mejor entendimiento).
Debe explicar aspectos no tan evidentes para el lector y que se deben
conocer para comprender de una mejor forma el experimento.
Se debe evitar que la teora sea redundante sobre el tema.
Se debe evitar que la teora sea muy especfica.
Parte Experimental
Esta seccin est compuesta de 3 partes fundamentales:
Materiales y Equipos
Lista todos los elementos utilizados para que la prctica pueda llevarse a
cabo y reproducirse cuantas veces sea necesario por cualquier persona.
Sustancias Empleadas
Indica todo material qumico que se utiliz para que la prctica pueda
llevarse a cabo y reproducirse cuantas veces sea necesario por cualquier
persona.
Procedimiento
Es una secuencia de actividades realizadas que permiten ejecutar el
experimento mediante el uso de los materiales, equipos y sustancias
mencionadas anteriormente.
El procedimiento debe considerar los siguientes aspectos:
Debe estar redactado en voz pasiva refleja.
Debe permitir que la persona que quiere ejecutar el experimento
est en toda la capacidad de obtener los mismos resultados.
Debe ser claro y especfico.
7

Se
debe
evitar
redactar
vivencias
personales
al
realizar
el
experimento. (colocar en el vaso de precipitacin pero tener cuidado

porque se me reg).
Procesamiento de Datos
Datos Experimentales
En esta parte se registran las mediciones obtenidas de las variables que
definen el experimento al ejecutar el procedimiento.
Tambin pueden existir datos adicionales como constantes, valores
tabulados, entre otros, que se requieren para poder realizar las siguientes
secciones del informe.
Mtodos de Procesamiento de Datos
En esta seccin se hace referencia a los mtodos utilizados para el
tratamiento de los datos experimentales obtenidos con el fin de
consolidar resultados.
Existen entre otros los siguientes mtodos de procesamiento de datos:
Mtodos Estadsticos (Promedios, Desviacin Estndar, Distribucin
Normal, etc.)
Mtodos de Clculo (Frmulas derivadas de la teora)
Mtodos Cualitativos (Observacin de propiedades fsicas)
Mtodos Cuantitativos (Cuantificacin de propiedades fsicas y qumicas)
Clculos
Con los datos obtenidos y el/los mtodo(s) escogido(s), se procede a
obtener resultados que permitirn definir si los objetivos se cumplieron o
no y por qu.
Resultados
En esta seccin se publican los resultados obtenidos por el
procesamiento de los datos obtenidos en la experimentacin.
Discusin
Esta es la parte fundamental del trabajo, aqu se debe tener en cuenta 3
aspectos:
8

Anlisis de la validez del mtodo utilizado

Se debe indicar si el mtodo utilizado para la experimentacin fue
adecuado o no para obtener los resultados esperados. En caso afirmativo
o negativo, se debe argumentar el porqu de cada decisin.
Errores sistemticos y aleatorios
Aqu se deben indicar los errores que se observaron en la realizacin de
la experimentacin y en qu grado afect a los resultados que se
obtuvieron, y en qu se evidenci dicha influencia.
Recomendaciones de Mejoras de la Experimentacin
La persona que realiz la prctica, basado en su experiencia puede
sugerir mejoras o cambios en la realizacin de la experimentacin.
Conclusiones
Basado en los resultados y la discusin, se analizan las relaciones, los
rangos, las tendencias, las contrastaciones, las semejanzas o las
diferencias entre los resultados obtenidos y lo esperado de la teora, y
otros experimentos u otras mediciones realizadas en la misma prctica.
Una buena conclusin debe considerar:
Explicar las observaciones realizadas de una forma concisa y
fundamentada en la teora.
Indicar las relaciones entre las variables o las tendencias de stas en
el fenmeno observado, cmo afectan, y cmo se evidencian las
variables en el fenmeno.
Se debe evitar concluir que se realizaron las actividades con xito, o
comentar errores, esto se debe hacer en la discusin.
Se debe evitar explicar tendencias basadas en el modelo matemtico
solamente, sino interpretar la influencia de esa tendencia en el
fenmeno.
Referencias Bibliogrficas
Debido a que se hace una consulta de literatura especializada para
redactar la teora y entender el fenmeno es de vital importancia colocar
9

las citas bibliogrficas y bibliografa en un informe. De lo contrario se

asume que todo lo que se redact es de su autora, lo que no es cierto y
por ende se est cometiendo una COPIA.
Cita Bibliogrfica
La cita bibliogrfica es una referencia que indica que se tom
textualmente o utiliz el sentido completo de un texto para incorporarlo
en el informe.
Una cita bibliogrfica consta de dos partes: La primera es la cita, que va
entre comillas en el texto del informe; y la segunda es la referencia
bibliogrfica que va ubicada en el apartado correspondiente.
Una referencia bibliogrfica correcta contiene toda la informacin que
ms pueda para permitir que la persona que desee pueda encontrar esta
informacin sin ninguna dificultad.
Una referencia bibliogrfica correcta tiene la siguiente estructura:
Nombre del Autor

Ttulo de la Obra
Si se trata de una traduccin
Edicin o Reimpresin
Editorial
Lugar de Impresin
Fecha de impresin
Pgina(s)
Ejemplo:
Perry, R., Greene D., Manual del Ingeniero Qumico, trad. del ingls,
Sptima Edicin, Editorial McGraw-Hill, Mxico, 2010, p.30.
Bibliografa
La bibliografa es el material que se utiliz para sustentar ideas propias
redactadas que se incorporan en el informe.
Estas no se redactan como citas, sino solo como referencias
bibliogrficas.
10

10
Resumen
El resumen es la parte final de la redaccin del informe, curiosamente
este se encuentra siempre al principio del mismo.
El resumen sirve para indicar a un lector a breves rasgos todos los puntos
que se trataron anteriormente en la realizacin del informe.
El tamao del resumen no debe tener menos de 80 palabras y no debe
exceder las 110 palabras.
Un resumen debe contener las siguientes partes:
Qu se hizo?
Se indica cual fue el objetivo primario de la experimentacin.
Se determin., Se realiz, Se comprob (Incorrecto)
Determinacin, Realizacin., Comprobacin (Correcto)
Cmo se hizo?
Se indica de forma resumida el procedimiento utilizado en la
experimentacin.
Qu se obtuvo?
Se indica que resultados de la experimentacin (que definen el propsito)
se obtuvieron.
Qu se concluye?
Se redacta una conclusin general del experimento, que permita
observar la validez del trabajo realizado (Si cumpli o no con los objetivos
y por qu).
11

12

3 Ponderacin
Resumen
3 ptos
Ttulo
Introduccin
Objetivos
Teora
2 ptos
Parte Experimental
Procedimiento escrito y detallado por el ayudante
Procesamiento de datos
Tabla de Datos, FUENTE.
Mtodo de procesamiento de Datos
Resultados
Discusin
5 ptos
Recomendaciones de las mejoras
Conclusiones
5 ptos
Referencias Bibliogrficas
Cuestionario
2 ptos
Anexos/Apreciacin
13
3 ptos

4 INDICACIONES GENERALES PARA PRESENTACIN DE

INFORMES DE BIOQUIMICA
1. Los informes se deben presentar por grupo la siguiente prctica (los
horarios de prcticas por lo general son cada 15 das, pero en algunos
casos se los realizara de acuerdo al horario que predisponga la Ingeniera.
2. Los informes se calificarn sobre 20 puntos y en la nota final tendrn un
valor de 4 puntos segn el Nuevo Reglamento de Evaluacin Estudiantil
de la UCE, asistir puntualmente al laboratorio se tomara en cuenta la
puntualidad en los informes.
3. Al inicio de cada prctica se les tomara una prueba del laboratorio que
realizaron, sobre 10 puntos los cuales sern promediados por cada
laboratorio entregado en grupo.
4. En el
a.
b.
c.
d.
resumen responder a las preguntas

Qu se hizo? Objetivos
Cmo se hizo? Procedimiento Resumido
Qu se obtuvo? Resultados
Qu se concluy? Conclusiones
5. Toda ecuacin o frmula debe estar numerada, as como las materiales y

equipos con su apreciacin y rangos y los reactivos con su frmula
molecular.
6. Los anexos debern ser fotografiados o si se desea graficar a mano.
7. Por favor cuidar la presentacin del informe.
8. Traer mandil, guantes, cofia, alcohol, fsforos y mascarilla individual (El
material ser calificado).
14

5 Bibliografa Recomendada
La bibliografa es importante para que los estudiantes consulten y tengan
una amplia visin de lo aprendido en clases reforzando y consultando
frecuentemente la informacin actual de la materia; para as mantener una
dinmica con la tecnologa de hoy en da. Los libros que se exponen son
actualizables, es decir, pueden existir ediciones ms recientes que ustedes
pueden consultar.
CHEFTEL, Jean-Claude; CHEFTEL, Henri; Introduccin a la Bioqumica y

tecnologa de los alimentos, Vol. 1, Editorial ACRIBIA, 1992, pp.333.
HERNANDEZ, Alicia; Microbiologa Industrial, Colaboradores Ileana

Alfaro y Ronald Arrieta, Editorial Universidad Estatal a Distancia EUNED,
2003, pp. 266.
CARPENTER, Philip L.; Microbiologa, 4ta Edicin, Editorial

Interamericana, Mxico, 1979, pp. 519.
DORAN, Pauline M.; Principios de Ingeniera de los Bioprocesos, Editorial

ACRIBIA, Espaa, 1998, pp. 468.
SCRAGG, Alan; Biotecnologa para Ingenieros, Sistemas biolgicos en

procesos tecnolgicos, Editorial LIMUSA Noriega Editores, Mxico, 2000,
pp.410.
RITTMANN, Bruce E. McCarty, Perry L.;Biotecnologa del Medio

Ambiente, Principios y aplicaciones, Ed. McGrawHill, 2007, pp. 745.
ADRIAN, Jean, POTUS, Jacques, FRANGNE, Rgine; La Science

Alimentaire de a z, Lavoisier Tec&Doc, 2da Edicin, 1995, pp 479.
BADUI, Salvador; Qumica de los Alimentos, Cuarta Edicin, Pearson

Addison Wesley, Mxico, pp. 716.
WARD P. Owen; Biotecnologa de la Fermentacin, Editorial ACRIBIA,

Espaa, 1989, pp. 274.
EWEINS, Juana, ERGAS, Sarina, SCHROEDER, Edward D.; Principios de

Biorrecuperacin; Ejemplar 2; Ed. McGrawHill, 1999, pp. 235.
15

SANCHEZ, Pineda de las Infantas; Procesos de Elaboracin de Alimentos

y Bebidas; AMV Ediciones Mundi.Prensa, Universidad de Crdoba;
Primera Edicin, 2003, pp. 518.
AUDESIRK, Teresa, A. Gerald; BYERRS E. Bruce; Biologa, La vida en la

Tierra; Sexta Edicin, Prentice Hall, Universidad en Colorado, en Denver.
ORGANIZACIN MUNDIAL DE SALUD,Manual de Bioseguridad en el

Laboratorio, 3er Ed., Ginebra, 2005.
16

3. REGISTRO E INFORMACION COMPLEMENTARIA DE

LABORATORIO
Prctica 1: EQUIPOS Y SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
INTRODUCCION
La Bioseguridad es el conjunto de mecanismos y medidas preventivas que

permiten proteger a las personas frente a riesgos producidos por agentes
biolgicos, fsicos, qumicos y mecnicos. Este laboratorio hace referencia a los
peligros relativos que entraan los microorganismos infecciosos, clasificados por
grupos de riesgo (grupos de riesgo 1, 2, 3 y 4 (OMS)). Esta clasificacin por grupos
de riesgo se utilizar exclusivamente para el trabajo de laboratorio.
1. OBJETIVOS
1.1.
Conocer los equipos de laboratorio y su funcionamiento.
1.2.
Determinar los principios de seguridad que deben seguirse dentro
del laboratorio.
2. TEORIA
2.1.
Bioseguridad
2.1.1.
Definicin
2.1.2.
Principios de bioseguridad
2.1.3.
Niveles de bioseguridad
2.1.4.
Elementos de proteccin personal
2.2.
Equipos de laboratorio
2.2.1.
Autoclave
2.2.2.
Estufa MEMMERT
2.2.3.
Bao Mara MEMMERT
2.2.4.
Fermentador
3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1.
3.1.1.
Autoclave
3.1.2.
Estufa
3.1.3.
Bao Mara
3.1.4.
Ph metro
3.1.5.
Fermentador
3.2.
Sustancias y Reactivos
3.2.1.
Agua Destilada
3.2.2.
Soluciones Buffer
3.3.
Procedimiento
3.3.1.
PARTE A: Autoclave
CARGA DE DEPSITO DE AGUA:
17

3.3.1.1.El nivel del agua debe estar como mximo a 2cm de la base
de la vlvula de seguridad.
3.3.1.2.La carga del agua del autoclave es de 350ml debe ser
incrementada por el frente del autoclave.
3.3.1.3.Sus laterales y tapa trasera deben estar despejados como
mnimo 25mm para su correcta ventilacin.
3.3.1.4.El agua deber ser agua destilada o estril para evitar
problemas de corrosin en el equipo.
PREPARACIN DE LOS ELEMENTOS A ESTERILIZAR:
3.3.1.5.El material debe estar lavado, seco y libre de toda materia
orgnica. El empaque puede ser: Papel poroso, tela o
polipropileno.
3.3.1.6.El tamao y la densidad de los paquetes deber ser tal que
permita una penetracin uniforme y completa del vapor, con un
apreciable margen de seguridad, en un tiempo promedio de 30
minutos a una temperatura de 121C.
3.3.2.
PARTE B: Estufa.
3.3.2.1.Mantener conectado el equipo a un tomacorriente estndar
de 110V
3.3.2.2.Encender el equipo presionando el PULSADOR GIRATORIO
3.3.2.3.Fijar la temperatura de operacin presionando la tecla SET y
PULSADOR GIRATORIO hasta que la pantalla indique la
temperatura deseada.
3.3.2.4.Dejar de presionar la tecla
SET, girar EL PULSADOR
GIRATORIO hacia la izquierda hasta que titile el indicador del
tiempo
3.3.2.5.Para fijar el tiempo, mantener presionada la tecla SET y girar
EL PULSADOR GIRATORIO hasta que la pantalla indique el tiempo
deseado
3.3.2.6.Abrir la puerta metlica de la estufa halando la perilla negra
delantera
3.3.2.7.Colocar el material a esterilizar dentro del equipo sobre las
bandejas
3.3.2.8.No colocar las bandejas pegadas a la pared del fondo de la
incubadora, dejar un espacio de 1cm para que el aire circule
fcilmente
3.3.2.9.Cerrar la puerta asegurndo la con la perilla delantera
3.3.2.10.
Abrir o cerrar el paso de aire moviendo a la izquierda o
a la derecha LA REGLETA DE AIRE ubicado junto al PULSADOR
GIRATORIO
3.3.3.
PARTE C: MEDIDOR DE PH DE MESA HI2211

18

MEDICIN DE PH
3.3.3.1.Realizar las conexiones de alimentacin, electrodo y sonda.
3.3.3.2.Calibrar el electrodo y el instrumento antes de tomar
mediciones.
3.3.3.3.Lavar el electrodo con agua destilada.
3.3.3.4.Sumergir el electrodo y la sonda en la muestra, esperar a que
el electrodo se estabilice (valor constante)
3.3.3.5.El pH y temperatura se mostrarn en el LCD
3.3.3.6.Si la lectura de pH est fuera de rango, el LCD mostrar ----.
3.3.3.7.Para mediciones sucesivas, lavar el electrodo con agua
destilada.
3.3.3.8.Para finalizar su uso, lavar el electrodo cuidadosamente y
colocarlo en el frasco correspondiente.
3.3.4.
PARTE D: MicroscopioCX21FSI
3.3.4.1.El objeto que queremos observar se coloca en un vidrio
transparente que llamamos portaobjetos, y lo cubrimos con otro
vidrio ms fino que llamamos cubreobjetos.
3.3.4.2.Una vez conocido el funcionamiento de las partes del
microscopio debes saber que el aumento que nos ofrece un
microscopio se obtiene con la combinacin del objetivo y del
ocular. Por ejemplo, si tenemos un ocular de 15x i un objetivo de
40, el aumento obtenido es de: 40 x 15 = 600 aumentos.
3.3.4.3.El enfoque del objeto se realiza con el tornillo macromtrico,
y despus se afina con el tornillo micromtrico, hasta conseguir
una visin perfecta.
3.3.4.4.Una vez enfocado el objeto, se pasa al objetivo
inmediatamente superior, hasta obtener el aumento deseado.
Cada vez que cambies de objetivo cuida de no tocar la
preparacin, el vidrio se puede romper.
3.3.4.5.La luminosidad para observar la muestra la puedes regular
moviendo el diafragma hasta conseguir la ms adecuada para
cada caso. Como unidad de medida, en microscopia se utiliza la
micra (). Su equivalencia es: 1 = 1/1000 mm ; por tanto, 1 mm
= 1000 .
Nota: Redactarprocedimientos para Brixmetro, balanza
analtica y el bao Mara.
NOTAS IMPORTANTES
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
19

________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
_________________________
4. CONCLUSIONES
5. RECOMENDACIONES
6. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
6.1.
Citas bibliogrficas
6.2.
Bibliografa
7. ANEXOS
7.1.
Reporte fotogrfico de los Diagramas de los Equipos, (con
especificaciones)
20

Prctica 2: OBSERVACIN DE CLULAS EUCARIOTAS Y

PROCARIOTAS
INTRODUCCION
De los 3.800 millones de aos que la vida lleva existiendo sobre la Tierra, la
historia completa de la humanidad, desde la vida en las cavernas hasta el
moderno departamento de nuestros das, representa bastante menos del
uno por ciento de todo este tiempo, realmente es un perodo insignificante.
Durante los primeros dos mil millones de aos los nicos habitantes de la
Tierra fueron exclusivamente las bacterias.
En realidad, tan importantes son estos microorganismos bacterianos, y tan
importante es su evolucin, que la divisin fundamental de los seres vivos
en la Tierra no es la tradicionalmente supuesta entre plantas y animales,
sino entre procariotas y eucariotas.
1. OBJETIVOS
1.1. Identificacin de la clula procariota y eucariota en los diferentes
materiales vegetales y animales.
1.2. Diferenciar entre las clulas procariotas y eucariotas.
1.3. Conocer la estructura celular que presentan las clulas procariotas
y eucariotas.
2. TEORIA
2.1. Clulas procariotas
2.1.1.
Qu son?
2.1.2.
Escribir sus caractersticas
2.1.3.
Estructura
2.1.3.1. Identificar por medio de un grfico los organelos
citoplasmticos
2.1.3.2. Describir cada organelo y la funcin respectiva
2.2. Clulas eucariotas
2.2.1.
Qu son?
2.2.2.
Escribir sus caractersticas
2.2.3.
Estructura
2.2.3.1. Identificar por medio de un grfico los organelos
citoplasmticos
2.2.3.2. Describir cada organelo y la funcin respectiva
3.1. Materiales y Equipos
3.1.1.
3 Cubre y Porta Objetos
3.1.2.
Material de Diseccin
3.1.3.
Microscopio
3.2. Sustancias y reactivos
21

3.2.1.
3.2.2.
3.2.3.
3.2.4.
3.2.5.
Agua Destilada
Yogurt
Cebolla
Corcho
Alcohol
3.3. Procedimiento
PARTE A: CELULAS PROCARIOTAS
3.3.1.
Depositar una gota de yogurt en el borde de un portaobjetos
limpio.
3.3.2.
Seguidamente, con un portaobjetos de borde esmerilado, se
hace un frotis.
3.3.3.
El porta con el que se hace la extensin debe deslizarse bien
colocado y lo ms perfectamente aplicado en su borde contra el
otro porta sobre el que se efecta la extensin, solo debe pasarse
una vez de forma continua e ininterrumpida.
3.3.4.
Estas extensiones o frotis deben secarse al aire lo ms
rpidamente posible.
3.3.5.
Colocar sobre la muestra un cubre objetos.
3.3.6.
Colocar el microscopio ptico y observar las celulares
presentes.
PARTE B: CELULAS EUCARIOTAS
3.3.7.
Tomar una muestras de la cebolla cortando una capas muy
delgadas
3.3.8.
Colocar en el portaobjetos y aadir una gota de agua y
3.3.9.
Cubrir la muestra con un cubreobjetos.
3.3.10. Colocar en el microscopio y observar.
3.3.11. Repetir los pasos anteriores para la muestra con el corcho.
PARTE A: CELULAS -----------(Colocar en funcin de la explicacin
que se dar en la prctica)
3.3.12. Depositar una gota de sangre en el borde de un portaobjetos
limpio.
3.3.13. Seguidamente, con un porta de borde esmerilado, se hace
un frotis o extensin de la sangre.
3.3.14. El porta con el que se hace la extensin debe deslizarse bien
colocado y lo ms perfectamente aplicado en su borde contra el
otro porta sobre el que se efecta la extensin, solo debe pasarse
una vez de forma continua e ininterrumpida.
3.3.15. Estas extensiones o frotis deben secarse al aire lo ms
rpidamente posible. La desecacin se facilita con movimientos
22

en forma de abanico, nunca soplando o por el calor. La rpida

desecacin evita la deformacin de los glbulos.
3.3.16. Cubrir la muestra con un cubre objetos.
3.3.17. Colocar el microscopio ptico y observar las celulares
presentes en esta muestra.
4. PROCESAMIENTO DE DATOS
4.1. Mtodo de procesamiento de datos
La metodologa usada es la cualitativa que nos permitir comprobar
mediante la observacin las caractersticas de las clulas eucariotas y
procariotas.
4.1.1.
Observaciones (En funcin de las partes del procedimiento)

Tabla 4.1.1-1
Observaciones Experimentales
Nomenclatura
Observacin
NOTAS IMPORTANTES
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
_________________________
5. DISCUSIN (mnimo 10 lneas)
6. CONCLUSIONES (mnimo 4)
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
7.1. Citas Bibliogrficas
7.2. Bibliografa
8. ANEXOS
8.1. Diagrama del equipo
8.2. Reporte de lo observado (Dibujar )
9. CUESTIONARIO
23

9.1. Elaborar un cuadro comparativo entre clula procariota y eucariota

y dar 5 ejemplos e indicar en donde se encuentran.
9.2. Los cilios y flagelos son clulas? si lo son identifique el tipo de
clulas.
24

Prctica 3: DETERMINACION DE REDUCTASAS EN LA LECHE Y EL

AGUA
INTRODUCCION
En la leche debe hacerse distincin entre la Reductasa generada por los
microorganismos presentes y cuya actividad aumenta a medida que stos
aumentan, por lo que sirve para controlar el estado higinico y de
conservacin de la leche, cuya actividad se utiliza para controlar el
tratamiento trmico (pasteurizacin, esterilizacin) a que se ha sometido la
leche. El anlisis alimenticio determina la calidad de la leche comercial y sus
derivados elaborados en una industria lctea, con el objetivo de determinar
la calidad de leches sospechosas o con tcnicas rutinarias de control.
1. OBJETIVOS
1.1.
Evaluar la cantidad de bacterias y por ende la calidad de
conservacin de la leche.
1.2.
Valorar el descenso de potencial redox visualmente utilizando azul
de metileno.
1.3.
Evaluar la calidad del agua potable y agua de pozo.
2. TEORIA
2.1.
Actividad Reductora de los microorganismos
2.1.1. Bacterias Reductivas
2.1.2. Caractersticas
2.1.3. Condiciones ptimas de crecimiento
2.2.
Calidad de la leche
2.2.1. Parmetros
3.1.
3.1.1. 2 tubos de ensayo con tapa
3.1.2. Pipetas o goteros
3.1.3. Bao Trmico o bao mara
3.2.
3.2.1.
3.2.2.
3.2.3.
3.2.4.
Agua destilada
Azul de metileno
Leche cruda
Leche pasteurizada
3.3.
Procedimiento
PARTE A: Determinacin de reductasas en la leche
25

3.3.1. En 2 tubos de ensayo verter 10 ml de leche en el primero leche

UHT entera.
3.3.2. En el segundo tubo verter 10 ml de cruda.
3.3.3. Adicionar 1 ml de azul de metileno en cada tubo de ensayo.
3.3.4. Evitar el contacto de la punta de la pipeta con la muestra en el
momento de adicionar el azul de metileno.
3.3.5. Cerrar el tubo de ensayo y agitar suavemente para homogenizar la
mezcla, sin que toque la tapa de tubo.
3.3.6. Llevar los tubos de ensayo a bao termosttico a 38 C, el nivel del
bao debe sobrepasar el nivel de la muestra del tubo.
3.3.7. Cuantificar el tiempo de decoloracin.
Precaucin: Evite mojar el costado del tubo con la leche.
Evitar en el bao termosttico la luz solar y mantener lo
estable la temperatura.
PARTE B: Determinacin de reductasas en el agua
3.3.8. En 2 tubos de ensayo verter 10 ml de agua en el primero agua
potable.
3.3.9. En el segundo tubo verter 10 ml de agua de pozo.
3.3.10. Adicionar 1 ml de azul de metileno en cada tubo de ensayo.
3.3.11. Evitar el contacto de la punta de la pipeta con la muestra en el
momento de adicionar el azul de metileno.
3.3.12. Cerrar el tubo de ensayo y agitar suavemente para homogenizar la
mezcla, sin que toque la tapa de tubo.
3.3.13. Llevar los tubos de ensayo a bao termosttico a 38 C, el nivel del
bao debe sobrepasar el nivel de la muestra del tubo.
3.3.14. Cuantificar el tiempo de decoloracin.
4.1.
Datos experimentales
Tabla 4.1-1
Datos Experimentales
Muestra
Leche UHT
Leche Cruda
Agua potable
Agua de pozo
Tiempo, h.
4.1.1. Datos Adicionales

Tabla 4.1.1-1
Calidad de la leche
Calidad de
Tiempo de
26

la leche
conservacin de la
leche
Muy mala
20 minutos
Mala
20 minutos a 2 horas
Mediana
2 horas a 5 horas
Primera
5
Fuente: BUENA Seal lab.
Tabla 4.1.1-2
Calidad de la leche
Tram, min
No. Bacterias/ ml
30 min
20 30 millones
30 min 2
4-20 millones
horas
2- 6 horas
0,5 4 millones
6 horas
500,000
Fuente: TRAM
4.2.
Mtodo de procesamiento de datos
La metodologa utilizada fue cualitativa, mediante observacin podemos

identificar la calidad de la leche.
4.3.
Resultados
Tabla 4.4-1
Resultados Finales
MUESTRA
CALIDAD
TIEMPO DE
DECOLORACION
, min
NOTAS IMPORTANTES
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
_________________________
27

5. DISCUSIN (mnimo 10 lneas)

6. CONCLUSIONES (mnimo 4)
7. BIBLIOGRAFA
7.1.
Citas bibliogrficas
7.2.
Bibliografa
8. ANEXOS
8.1.
Diagrama del Equipo
8.2.
Resultados
9. CUESTIONARIO
9.1.
Averiguar la tabla internacional TRAM en trminos de UFC o
unidades formadoras de colonias.
28

Prctica 4: TINCIN GRAM

INTRODUCCION
La tincin Gram es una tcnica diferencial comnmente empleada en el
diagnstico microbiolgico, fue descubierta por Hans Christian Gram en
1884. Es una de las tinciones diferenciales ms utilizadas en bacteriologa,
que clasifican los cultivos bacterianos en menos de 24 horas en Gram
Positivas y Gram negativas. Las tinciones permiten observar estructuras
especializadas como endosporas de Bacillus y Clostridium, determinantes
para su clasifiacin taxonmica. Es por eso que algunas especies son
microorganismos patgenos de gran toxicidad, su deteccin en
microbiologa alimentaria y mdica adquiere gran inters.
1. OBJETIVOS
1.1.
Conocer tcnicas de reconocimiento de bacterias
1.2.
Realizar una tincin simple y diferenciada de bacterias procedentes
de distintas muestras naturales
1.3.
Familiarizarse con los materiales y equipos del laboratorio
2. TEORIA
2.1.
Tincin Simple
2.2.
Tincin Diferenciada
2.3.
Frotis
2.4.
Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas
3.1.
Fundamento del mtodo
Se aplica un disolvente del colorante primaria que no tiene efecto sobre el
grupo de microorganismos que lo retienen firmemente, pero lo elimina de
aquellos que no son capaces de retenerlo, quedando por lo tanto
completamente coloreados. (Mordiente)
3.2.
3.2.1.
3.2.2.
3.2.3.
3.2.4.
3.2.5.
3.2.6.
3.2.7.
Asa de Siembra
Lmpara de Alcohol
Microscopio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Gotero
Piceta
3.3.
3.3.1.
3.3.2.
3.3.3.
Sustancias y reactivos
Alcohol Etlico
C2H5OH
Agua Destilada
H2O
Muestra Bacteriana de lquida (Yogurt)
29

3.3.4. Violeta de Genciana

3.3.5. Safranina
3.3.6. Lugol
3.4.
C25H30ClN3
C20H19ClN4
KI
Procedimiento
PARTE A: FIJACIN
3.4.1. Lavar meticulosamente con agua y jabn un portaobjetos. Aplicar
alcohol y secar
3.4.2. Esterilizar el asa bacteriana en la llama de un mechero hasta que la
punta se torne incandescente
3.4.3. En la mitad del portaobjetos, colocar una pequea gota de agua
destilada. Con el asa fra transferir una pequea cantidad de muestra
al portaobjetos y mezclar con el agua, extenderla bien de manera que
se forma una pelcula delgada sobre la superficie disponible
Nota: Cuando se toma la muestra a partir de un cultivo lquido no es
necesario poner la gota de agua en el portaobjetos
3.4.4. Secar la preparacin al aire con movimientos horizontales leves
3.4.5. Fijar la preparacin pasando brevemente el porta (con la muestra
hacia arriba) cuatro o cinco veces por la llama. No debe calentarse
demasiado
3.4.6. Proceder a la tincin
PARTE A: TINCIN
3.4.7. Se agrega a la muestra bacteriana una gota de violeta de genciana
(colorante) durante dos minutos.
3.4.8. Se enjuaga con agua destilada.
3.4.9. Se agrega dos gotas de lugol (mordiente) por 2 minutos.
3.4.10. Se decolora con Acetona (decolorante)
3.4.11. Se enjuaga con agua destilada
3.4.12. Se agrega una gota de Safranina (colorante de contraste)
3.4.13. Se seca suavemente.
4.1.
El mtodo usado es la observacin, la metodologa utilizada es la
cualitativa ya que nos permite describir morfolgicamente a las bacterias
Gram positivas y negativas.
4.2.
Observaciones
Tabla 4.2-1
Procedimien
to
Observacin
30

Tabla 4.2-2
Descripcin Morfolgica de la muestra observada
Observacin
NOTAS IMPORTANTES
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
_________________________
5. DISCUSIN
6. CONCLUSIONES (Mnimo 4)
7.1.
Citas Bibliogrficas
7.2.
Bibliografa
8. ANEXOS
8.1.
Diagrama del equipo
8.2.
Reporte fotogrfico de bacterias observadas
8.3.
Grfico de Bacterias gram positivas y gram negativas
9. CUESTIONARIO
9.1.
Con qu finalidad se fija la muestra de microorganismos en el
portaobjetos
9.2.
Describa cual es la funcin en la tincin de cada uno de los
colorantes, mordiente y decolorante utilizado en la prctica.
9.3.
Que caractersticas hacen que una bacteria sean gram positiva o
gram negativa
9.4.
Realice un cuadro con 5 bacterias gram positivas y 5 gram
negativas junto con la enfermedad que producen.
9.5.
Enliste bacterias gram positivas y gram negativas que sean
utilizadas en la industria, especifique el producto.
31

Prctica 5: MTODOS DE DESTRUCCIN TRMICA

INTRODUCCION
La aplicacin de un tratamiento trmico a alimentos viene condicionada por
la necesidad de reducir la flora microbiana presente en los alimentos, evitar
las alteraciones producidas por los microorganismos no patgenos, aplicar
el grado de calentamiento/enfriamiento adecuado a cada alimento en
cuestin esto con el objetivo de destruir los microorganismos que puedan
afectar a la salud del consumidor o alterare el alimento, es por eso que
existen diferentes mtodos de destruccin trmica como pasterizacin,
esterilizacin, escalado, coccin entre otros.
1. OBJETIVOS
1.1.
Adiestrar al estudiante acerca de mtodos de destruccin trmica
en alimentos
1.2.
Comprar los resultados obtenidos entre los diferentes mtodos de
destruccin trmica
2. TEORIA
2.1.
Destruccin Trmica (Concepto y composicin)
2.2.
Mtodos de Destruccin Trmica de Microorganismos
2.3.
Autoclave
2.4.
Biodegradacin de Alimentos
3.1.
3.1.1. Autoclave
3.1.2. Reverbero
3.1.3. Recipientes de vidrio termo resistentes
3.1.4. Termmetro
3.1.5. Olla de acero inoxidable con tapa
3.1.6. Vasos de precipitacin
3.2.
Sustancias y reactivos
3.2.1. Jugo natural (naranja, maracuy, naranjilla)
3.2.2. Agua destilada
3.3.
Procedimiento
3.3.1. Esterilizar el material a utilizarse previamente con agua hervida.
3.3.2. Preparar la muestra a esterilizar de acuerdo a las concentraciones y
especificaciones realizadas (jugo).
3.3.3. Sealar las muestras en cada recipiente con AUTOCLAVADO y
PASTEURIZADO
3.3.4. Colocar un volumen similar de la muestra en cada recipiente (2),
considerar que de cada ambiente de destruccin trmica
32

(Autoclavado y Pasteurizado) deben existir al menos dos recipientes

por cada grupo.
3.3.5. Colocar en el autoclave las muestras marcadas con Autoclavado y
dejarlos por 20 minutos.
3.3.6. Dejar enfriar las muestras y probar el jugo.
3.3.7. A la parte restante de jugo, calentarlo hasta una temperatura de 70
C por lo mnimo 5 minutos.
3.3.8. Envasarlos en los otros recipientes, dejar un momento cubiertos los
recientes con la tapa hasta que el vapor remueva el aire y cerrar.
3.3.9. En un recipiente con hielo, enfriarlos lentamente, con precaucin
de que no exista un choque trmico.
3.3.10.
Despus de transcurrido el tiempo, degustar cada muestra.
4.1.
La metodologa utilizada es la cualitativa, ya que interpreta y compara la
realidad de la teora con la prctica, y diferenciar la pasterizacin con la
esterilizacin.
4.1. Datos experimentales
Tabla 4.1-1
Datos Iniciales Muestra
MUESTRA
CANTIDAD,
L
CONCENTRACIN
DESCRIPCION
Olor:
Color:
Sabor:
4.2.
Observaciones
Tabla 4.2-1
Mtodo de
Destruccin
Trmica
4.3.
Observacin
Resultados
Tabla 4.3-1
Datos Finales Muestra
MUESTRA
Numero de
Muestras
Vol. mL
33
DESCRIPCION

AUTOCLAVAD
O
Olor:
Color:
Sabor:
Olor:
Color:
Sabor:
PASTEURIZAD
O
NOTAS IMPORTANTES
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
_________________________
5. DISCUSIN
6. CONCLUSIONES
7.1.
Citas Bibliogrficas
7.2.
Bibliografa
8. ANEXOS
8.1.
Diagrama del equipo
8.2.
Reporte fotogrfico de muestras antes y despus
9. CUESTIONARIO
9.1.
Es lo mismo esterilizacin y pasteurizacin? Fundamente su
respuesta
9.2.
Qu tipo de mtodo de esterilizacin es el uso del Autoclave?
9.3.
Por qu se enlata a los alimentos? Cul es el fundamento del
enlatado?
34

Prctica 6: CONTEO DE MESOFILOS, LEVADURAS Y MOHOS EN
ALIMENTOS
INTRODUCCION
Existen diferentes mtodo para cuantificar el nmero o peso (biomasa) de
clulas microbianas en un cultivo; los mtodos pueden ser directos e
indirectos. Entre los directos se pueden mencionar a la determinacin de
peso seco y el recuento de clulas en cmara de Neubauer. Entre los
mtodos indirectos, uno de los ms usados es la medicin de la turbidez de
los cultivos en un espectofotmetro, que es relativamente rpida y se basa
en la capacidad de las clulas en dispersar la luz que incide sobre ellas. La
tcnica aplicada dar una estimacin aproximada del nmero total de
microorganismo, dependiendo del medio de cultivo utilizado.
1. OBJETIVOS
1.1.
Conocer la calidad microbiolgica de la leche cruda y harinas
utilizando el mtodo de conteo de UFC.
1.2.
Familiarizar al estudiante con mtodos de microbiologa para el
anlisis de productos lcteos.
1.3.
Comparar el resultado obtenido con normas nacionales y brindar
criterio de calidad.
2. TEORIA
2.1.
Mesfilos
2.1.1.
Caractersticas y Descripcin morfolgica (imgenes de
mesfilos)
2.2.
Mohos y Levaduras
2.2.1.
mohos y levaduras)
2.3.
Recuento total de mohos y levaduras en alimentos
2.3.1.
Descripcin del proceso
2.3.2.
Alcance (productos alimenticios a los cuales se les puede
hacer este anlisis)
2.4.
Papel Petrifilm
2.4.1.
Mtodo de Conteo
2.5.
Coliformes
2.5.1.
mohos y levaduras)
3.1.
3.1.1.
5 Tubos de ensayo
3.1.2.
Pipeta
3.1.3.
Petrifilm
35

3.1.4.
3.1.5.
3.1.6.
Cajas Petri
Estufa
Membretes
3.2.
3.2.1.
Agua peptonada
3.2.2.
Agua destilada
3.2.3.
Leche
3.2.4.
Harina
3.3.
Procedimiento
3.3.1.
PARTE A: PREPARACIN DE MEDIO Y DILUCIONES
3.3.1.1. A la muestra de leche se toma 10 mL y se las diluye en 90 mL
de agua peptonada
3.3.1.2. De esta dilucin se toma 0,1 mL y se adiciona en una caja
petri (considerar que todo el material debi estar previamente
esterilizado PETRI FILM).
3.3.1.3. Realizar las diluciones para cada caja de Petri film, como
muestra la figura 2. Hacer cerca del reverbero para mantener un
ambiente asptico.
3.3.1.4. De la preparacin anterior, se toma 1 mL y se lo adiciona en 9
mL de agua peptonada, repitiendo el mismo proceso una tercera
vez ms.
3.3.1.5. Colocar la muestra en el petrifilm para mohos y levaduras,
mesofilos, y escherichacoli.
3.3.2.
RECUENTO DE MESFILOS, MOHOS Y LEVADURAS (De
acuerdo con la explicacin)
36

Fuente: PEREZ M., AQUIAHUATI M. Manual de Prcticas de laboratorio de

microbiologa general, Universidad Autonoma Metropolitana, Unidad
Iztapalapa, pp. 68
3.3.2.1. Dejar absorber el lquido durante 10 min. Incubar las cajas en
forma invertida a 35C durante 24-48 horas para bacterias y
levaduras y de 5-7 das para hongos filamentosos.
3.3.2.2. Hacer la cuenta de las colonias de las placas, seleccionando
la dilucin donde el nmero de colonias sea entre 30 y 300.
3.3.2.3. Contar las colonias segn la imagen anterior, utilizando un
hoja de papel milimetrado.
3.3.2.4. Si la inoculacin fue por duplicado o triplicado, se calcula el
nmero promedio de colonias por dilucin y este nmero se
multiplicar por el inverso de la dilucin *10 (por ajuste de
volumen inoculado) para obtener el nmero total de unidades
formadoras de colonias UFC /ml en la muestra original.
PEREZ M., FUETE: AQUIAHUATI M. Manual de Prcticas de laboratorio de

microbiologa general, Universidad Autonoma Metropolitana, Unidad
Iztapalapa, pp. 69
4.1. Datos Experimentales
Tabla 4.1-1
Caractersticas del producto analizado
37

Muestra:
N de diluciones
Tabla 4.1-2
Recuento de UFC
Muestra
Dilucin
UFC contadas
Leche
Harinas
4.1.1.
Datos Adicionales
Tabla 4.1.1-1
Clasificacin de la leche cruda de acuerdo a la cantidad de
microorganismos, NORMA INEN PARA LECHE CRUDA
Tabla 4.1.1-2
Clasificacin de la leche cruda de acuerdo a la cantidad de
microorganismos, NORMA INEN PARA CEREALES, HARINAS U
ALIEMNTOS
4.2.
Mtodo de Procesamiento de Datos
La metodoga utilizada es la cualitativa y cuantitativa, usamos el mtodo
de observacin y el de conteo de microorganismo con la cmara
Neubauer, el mtodo de clculo de UFC (unidades formadoras de colonia).
4.3.
Observaciones de muestras
Tabla 4.3-1
Muestra
4.4.
Observacin
Clculos
4.4.1.
Clculo de UFC/mL
38

UFC
=N decoloniascontadasxFDplaca
mLmuestra
Ec . 4.4 .11
En donde FD= Factor de Dilucin (Determinar de acuerdo a cada placa),
Realizar un clculo modelo
4.5.
Resultados
Tabla 4.5-1
Recuento de UFC
Muestra
Dilucin
UFC/mL muestra REAL
Leche
Harinas
NOTAS IMPORTANTES
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
_________________________
5. DISCUSIN
6. CONCLUSIONES
7. BIBLIOGRAFA
7.1. Citas bibliogrficas
7.2. Bibliografa
8. ANEXOS
8.1. Fotografas de las cajas petr con sus diluciones
9. CUESTIONARIO
9.1. Dar a conocer un laboratorio ubicado en Quito que realiza este tipo
de anlisis mediante conteo de UFC y su ubicacin.
9.2. Dar el nombre de un medio de cultivo en el cual crezcan los
microorganismos denominado coliformes.
39

40

Prctica 7: EFECTO DEL PH Y LA TEMPERATURA EN EL

CRECIMIENTO MICROBIANO
INTRODUCCION
Los microorganismos son seres vivos que tienen como todo ser vivo sus
condiciones ptimas de vida, es por eso que el ambiente en donde se
desenvuelven es importante para que ellos crezcan y se multiplique, a pesar
de ser pequeos y los primeros habitantes del planeta son delicados en
cuanto a determinado microorganismo, y son susceptibles a diferentes
factores como la temperatura, presiones, humedad, ph, disponibilidad de
nutrientes, presencia de productos txicos, las interacciones microbianas
entres especies. Por ejemplo: Las condiciones para una fermentacin
alcohlica es: temperatura: 15 -20 C, pH: 4 a 4,5, concentracin de
azcares: 10-18%, el microorganismo se llama Saccharomyces cerevisiae.
1. OBJETIVOS
1.1.
Conocer el efecto de PH y de la temperatura como parmetros de
control del crecimiento microbiano.
1.2.
Comprender la importancia de los factores fisicoqumicos en la
seccin de poblaciones microbianas en los diferentes ambientes en el
que se encuentran
1.3.
Reconocer los mecanismos de adaptacin a nivel celular y
metablico que han desarrollado.
2. TEORIA
2.1.
Qu es un factor de medio?
2.2.
Cules son los factores del medio a los que estn
expuestos los microorganismos?
2.3.
Qu es temperatura ptima de crecimiento para
microorganismos?
2.4.
Clasificacin de microorganismos en funcin a la
temperatura ptima de crecimiento
2.5.
Clasificacin de microorganismos de acuerdo al nivel de
acides o alcalinidad.
2.6.
Cmo afecta el pH en la velocidad de crecimiento de
microorganismos?
3. PARTE
3.1.
3.1.1.
3.1.2.
3.1.3.
3.1.4.
3.1.5.
EXPERIMENTAL
3 Cajas Petri
Termmetro
PH metro
3 Tubos de ensayo
Estufa
41

3.1.6. Pipetas
3.2.
3.2.1.
3.2.2.
3.2.3.
3.2.4.
3.2.5.
Medio de Cultivo PDA
Agar nutritivo
HCI 1.0 M
NaOH 1.0 M.
Agua Destilada
3.3.
Procedimiento
3.3.1. PARTE A: efecto de temperatura
3.3.1.1.
En tres cajas de Petri con PDA divididas en dos secciones,
inocular 0.1 mL. de la suspensin de esporas de hongos y mesofilos
de la leche en cada seccin.
3.3.1.2.
Incubar una caja de Petri a 10C, otra a 20C y la ltima a
45C en forma invertida durante 72 horas y hacer las
observaciones macroscpicas.
3.3.1.3.
En 3 tubos de caldo micro inoculacin ajustado a pH 7.0,
inocular dos con cada una de las cepas bacterianas.
3.3.1.4.
Incubar un tubo en refrigeradora a 10 C, y en la estufa otro
a 30 C y el ltimo a 45 C durante 24-48 horas. Contar UFC.
3.3.2. PARTE B: Efecto de pH
3.3.2.1.
Preparar
unas series de cuatro tubos de caldo de
microinoculacin ajustados a 3 diferentes valores de pH (5.0, 7.0 y
9.0) con solucin de HCI 1.0 M o NaOH 1.0 M.
3.3.2.2.
Inocular 0.1 mL. de cada una de las cepas bacterianas en Ia
serie de seis tubos de caldo microinoculacin ajustados a diferentes
pH con amortiguador y sin amortiguador, dejando uno sin inocular
como testigo.
3.3.2.3.
Incubar los tubos a 35 C durante 24-48 horas y contar UFC.
3.3.2.4.
Inocular tres cajas de Petri con medio PDA ajustado a tres pH
diferentes con cada una de las cepas de hongos.
3.3.2.5.
Incubar las cajas de Petri a 35 C durante 72-96 horas y hacer
observaciones macroscopicas.
4.1.
Mtodo de procesamiento de Datos
El mtodo utilizado es la observacin y la experimentacin con el objetivo
de que comparen como afecta al microorganismo las diferentes
condiciones de temperatura y pH. La metodologa es la cualitativa y
cuantitativa en el momento realizar el conteo microbiano.
4.2.
Resultados
Reportar los resultados en las tablas de acuerdo at siguiente convenio: no hay

42

crecimiento (-), crece un poco (+), mayor crecimiento (++), crecimiento

abundante (++).
Tabla 4.2-1
Resultados efecto de pH en placas
pH
UFC (mohos)
UFC (mesofilos de la
leche)
5
7
9
Tabla 4.2-2
Resultados efecto de pH en tubos de ensayo
pH
UFC (mohos)
leche)
5
7
9
Tabla 4.2-3
Resultados efecto de Temperatura en placas
Temperatura
UFC (mohos)
leche)
Tamb.
50 C
2 C
Tabla 4.2-4
Resultados efecto de Temperatura en tubos de ensayo
Temperatura
UFC (mohos)
leche)
Tamb.
50 C
2 C
NOTAS IMPORTANTES
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
43

________________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________
_________________________
5. DISCUSIN
6. CONCLUSIONES
7. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
7.1.
Citas bibliogrficas
7.2.
Bibliografa
8. ANEXOS
8.1.
Reporte fotogrfico
9. CUESTIONARIO
9.1.
Cules son las temperaturas cardinales y como se clasifican los
microorganismos de acuerdo a su temperatura optima de crecimiento
(nicamente los utilizados en la prctica de laboratorio)?
9.2.
Cmo influyo el pH en el crecimiento de hongos?
9.3.
Qu es un medio de cultivo amortiguado?
9.4.
Explique brevemente cuales son los mecanismos celulares que los
microorganismos termailos extremos y psicrailos han desarrollado para
adaptarse a condiciones extremas de temperatura y pH?
9.5.
Explique la relacin que existe entre condiciones ptimas de
crecimiento en el laboratorio y las condiciones del hbitat de origen de las
poblaciones microbianas.
44

Hojas Guía Bioquimica

Uploaded by

Document Information

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Hojas Guía Bioquimica

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERA QUIMICA

Profesora: Dr. Magdalena

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

MARIA JOSE MUOZ DAVILA

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

No midas el xito por la cosecha de hoy. Mide el xito por las

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

2 Gua de Redaccin de los informes

Determinacin, Experimentacin, Comprobacin, ya que esto le hace

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

Se debe evitar que el objetivo trate de alcanzar efectos que no se

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

experimento. (colocar en el vaso de precipitacin pero tener cuidado

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

Anlisis de la validez del mtodo utilizado

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

las citas bibliogrficas y bibliografa en un informe. De lo contrario se

Nombre del Autor

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

4 INDICACIONES GENERALES PARA PRESENTACIN DE

resumen responder a las preguntas

5. Toda ecuacin o frmula debe estar numerada, as como las materiales y

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

CHEFTEL, Jean-Claude; CHEFTEL, Henri; Introduccin a la Bioqumica y

HERNANDEZ, Alicia; Microbiologa Industrial, Colaboradores Ileana

CARPENTER, Philip L.; Microbiologa, 4ta Edicin, Editorial

DORAN, Pauline M.; Principios de Ingeniera de los Bioprocesos, Editorial

SCRAGG, Alan; Biotecnologa para Ingenieros, Sistemas biolgicos en

RITTMANN, Bruce E. McCarty, Perry L.;Biotecnologa del Medio

ADRIAN, Jean, POTUS, Jacques, FRANGNE, Rgine; La Science

BADUI, Salvador; Qumica de los Alimentos, Cuarta Edicin, Pearson

WARD P. Owen; Biotecnologa de la Fermentacin, Editorial ACRIBIA,

EWEINS, Juana, ERGAS, Sarina, SCHROEDER, Edward D.; Principios de

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

SANCHEZ, Pineda de las Infantas; Procesos de Elaboracin de Alimentos

AUDESIRK, Teresa, A. Gerald; BYERRS E. Bruce; Biologa, La vida en la

ORGANIZACIN MUNDIAL DE SALUD,Manual de Bioseguridad en el

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

3. REGISTRO E INFORMACION COMPLEMENTARIA DE

La Bioseguridad es el conjunto de mecanismos y medidas preventivas que

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

PARTE C: MEDIDOR DE PH DE MESA HI2211

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

Prctica 2: OBSERVACIN DE CLULAS EUCARIOTAS Y

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

en forma de abanico, nunca soplando o por el calor. La rpida

Observaciones (En funcin de las partes del procedimiento)

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

9.1. Elaborar un cuadro comparativo entre clula procariota y eucariota

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

Prctica 3: DETERMINACION DE REDUCTASAS EN LA LECHE Y EL

PARTE A: Determinacin de reductasas en la leche

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

3.3.1. En 2 tubos de ensayo verter 10 ml de leche en el primero leche