Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra

Mestrado Integrado em Medicina

Biologia Celular e Molecular II

O LISOSSOMA E A DOENA DE GAUCHER

Filipe Santos Leal, aluno n 2013138160, MIM

2014/2015

NDICE

Introduo, pgina 2

O Lisossoma, pgina 3

Doena de Gaucher, pgina 5

Sintomas, pgina 6

Diagnstico, pgina 6

Tratamento, pgina 7

Aconselhamento Gentico, pgina 9

Concluso, pgina 9

Fontes de Referncia, pgina 10

INTRODUO

Os lisossomas so organelos celulares intervenientes em processos digestivos

intracelulares e, para isso, contm no seu interior, enzimas cidas. Quando os lisossomas
no funcionam corretamente ou h um dfice dessas enzimas, comeam a surgir doenas
de depsito lisossmico, sendo a mais conhecida, a doena de Gaucher.
Descrita pela primeira vez em 1882 pelo mdico francs, Phillipe Gaucher, a doena de
Gaucher, consiste numa perturbao metablica hereditria rara que resulta na
acumulao anormal de alguns tipos de lpidos no bao, no fgado, na medula ssea e nos
pulmes e, em alguns casos, no sistema nervoso, devido deficincia ou falta de uma
enzima chamada glicocerebrosidase ou (beta-glicosidase), que est envolvida na quebra
e no metabolismo de um tipo especfico de lpidos, os glicocerebrosdeos.
Assim, atravs deste trabalho, realizado no mbito da disciplina de Biologia Celular e
Molecular, aprofundarei o tema sobre a doena de Gaucher, procurando responder a
certas questes como: Como causada a doena de Gaucher e como que esta est
relacionada com os lisossomas?, Quais so os sintomas? ou Como feito o
diagnstico e o tratamento?.
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OS LISOSSOMAS

Os lisossomas so organelos celulares que se encontram presentes em praticamente todas

as clulas eucariticas. No seu interior contm cerca de 40/50 enzimas hidrolticas que
catalisam reaes de hidrlise e esto otimizadas para atuar num ambiente cido (ph de
4.8), garantido por uma bomba de protes que bombeia ies H+ para o lmen deste
organelo, com consumo de ATP.
Em termos estruturais os lisossomas so corpos geralmente esfricos de dimenses
variveis, delimitados por uma membrana lipoproteca cuja face interna revestida por
hidratos de carbono, que impedem que o lisossoma ingira a sua prpria membrana, e
protege o resto da clula das enzimas hidrolticas ou digestivas contidas no seu interior.
Os lisossomas so fabricados no aparelho de Golgi, por germinao de vesculas cobertas
por clatrina da rede trans, e as vrias enzimas digestivas que esto presentes no seu
interior so produzidas no retculo endoplasmtico rugoso sendo, posteriormente,
transportadas para o complexo de Golgi e distribudas pelos lisossomas. As hidrolases
lisossmicas, que podem ser proteases (degradam protenas), nucleases (degradam DNA
e RNA), glicosidases (degradam glcidos) ou lipases (degradam lpidos), por exemplo,
so glicoprotenas que possuem na sua estrutura uma manose-6-fosfato. As membranas
das cisternas golgianas possuem, por sua vez, na face interna, recetores que identificam a
manose, e que fixam as hidrolases referidas. S aps esta operao, que ocorre a
formao de vesculas lisossmicas. Estas, porm, no possuem ainda a acidez necessria
ao pleno funcionamento das enzimas, sendo por isso designadas por pr-lisossomas. A
aquisio da acidez um processo posterior formao da vescula lisossmica,
resultando do bombeamento de protes (H+) para o interior do pr-lisossoma, realizado
por bombas protnicas intrnsecas membrana lisossmica, como j foi dito
anteriormente. Aps esta fase de "maturao", o lisossoma est apto para intervir nos
processos de digesto celular, designando-se por lisossoma primrio.
Os lisossomas primrios descarregam a sua carga enzimtica em vacolos de endocitose
(endossomas, no caso de heterofagia) ou em vacolos de autofagia. O processo de
digesto decorre a partir da fuso de um ou mais lisossomas com os referidos vacolos e,
consequentemente, a mistura das enzimas lisossmicas com as substncias captadas. Ao
fundirem-se os lisossomas primrios com a vescula portadora dos materiais a digerir,
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forma-se uma nova estrutura, designada por lisossoma secundrio. Neste, as hidrolases
atuam diretamente sobre os substratos e, posteriormente, as pequenas molculas
resultantes da digesto so assimiladas atravs da membrana, pelo citosol. Pelo contrrio,
os materiais no digerveis constituem um corpo residual, sendo eliminado por exocitose
Em termos funcionais os lisossomas atuam como sistema de eliminao da clula,
digerindo protenas complexas, hidratos de carbono, lpidos e outras macromolculas em
compostos mais simples, que voltam novamente para o citoplasma atravs de protenas
glicosiladas, integradas na sua membrana. Atravs dos lisossomas so digeridos resduos
celulares, clulas mortas ou material extracelular, como micrbios invasores, intervindo
assim em processos de fagocitose, endocitose e de autofagia. Alm disso, os lisossomas
esto envolvidos em processos de reparao da membrana plasmtica e na morte celular
programada (autlise).
As hidrlises promovidas pelos lisossomas so, na maioria dos casos, endocelulares,
referindo-se quer digesto de materiais exgenos (heterofagia), quer a materiais
prprios da clula (autofagia).
A heterofagia constitui um dos mecanismos celulares de captao de matria, quando esta
se encontra em condies fsicas (volume, por exemplo) incompatveis com os
mecanismos de transporte transmembranar.
Em alguns casos, a heterofagia processa-se no exterior da clula. As hidrolases
lisossmicas atuam no exterior, sendo libertadas por exocitose, um processo que ocorre,
por exemplo, na remodelao dos tecidos sseo e cartilagneo ou nos fungos. As
pequenas molculas resultantes da digesto so, em seguida, absorvidas pela clula, com
recurso aos mecanismos habituais de transporte transmembranar.
A autofagia constitui uma das funes principais dos lisossomas. As estruturas
envelhecidas ou desajustadas das necessidades so eliminadas e os seus componentes so
recuperados e utilizados na sntese de novas molculas ou na produo de novas
estruturas.
O anmalo funcionamento dos lisossomas ou a falta de enzimas digestivas, devido a
causas genticas ou invases parasitrias, impede a normal degradao de substratos,
resultando em doenas de depsito lisossmico, como o caso da doena de Gaucher.

DOENA DE GAUCHER
A doena de Gaucher (DG), descrita pela primeira vez pelo mdico francs Philippe
Charles Ernest Gaucher, em 1882, consiste no erro inato do metabolismo de maior
frequncia no grupo das doenas de depsito lisossmico, tratando-se de uma doena
autossmica recessiva, clinicamente heterognea e progressiva, e definida pela presena
de dois alelos mutantes para o gene da beta-glicosidase cida (BGA) localizado na regio
q21 do cromossoma 1. Assim, para um casal de heterozigotos portadores de uma mutao
no gene BGA, o risco de terem um descendente doente de 25%.
A deficincia de atividade da BGA, uma hidrlase cida, leva ao depsito de grandes
quantidades de glicocerebrosdeos um glicolipdo no interior dos lisossomas do
sistema retculo-endotelial, principalmente no bao, fgado, medula ssea, sistema
nervoso central, pulmo e gnglios linfticos. Devido acumulao do substrato glicocerebrosdeo (ou glicosilceramida) - os macrfagos so impedidos de realizar as suas
funes, ficam pesados, gordos, cheios do glicocerebrosdeo no digerido e passam a
ser chamados de clulas de Gaucher. Embora a funo exata destas clulas na patognese
da doena ainda permanea desconhecida, pensa-se que elas segregam fatores que
induzem uma resposta inflamatria crnica e fazem a ligao entre a acumulao do
contedo lisossomal e as diversas manifestaes clnicas. Estas dependem do grau de
deficincia da enzima, existindo trs tipos de DG, que diferem quanto presena e
progresso de complicaes neurolgicas e aos sintomas que podem aparecer:
Tipo I o tipo mais comum e afeta 90% dos doentes e tem uma incidncia de um
para cada 40.000 a 60.000 nados vivos (NV), sendo mais frequente entre judeus
Ashkenazi. Trata-se de uma forma no neuroptica, afetando sobretudo adultos,
e caracteriza-se por hepatoesplenomegalia (fgado e bao aumentados), anemia,
trombocitopenia, leucopenia e leses sseas.
Tipo II a forma neuroptica aguda, extremamente rara. Afeta crianas com 45 meses, independentemente da etnia, e apresenta um quadro neurolgico grave e
fulminante, com morte nos primeiros dois anos de vida devido ao
comprometimento pulmonar. Tem uma incidncia de um para cada 100.000 NV;
Tipo III a forma neuroptica crnica ou subaguda, afeta crianas e
adolescentes e caracteriza-se por um quadro neurolgico menos grave que o Tipo
II, tendo uma incidncia de 1 para cada 50.000 a 100.000 NV. A esperana mdia
de vida atinge a segunda ou terceira dcadas de vida.
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SINTOMAS

Como podemos ver atrs, consoante o tipo, a DG manifesta-se de diferentes formas. Na

DG tipo 1 no neuroptica os sintomas podem variar de leves a graves, sendo que os
pacientes podem at permanecer assintomticos at serem diagnosticados, de forma
inesperada na idade adulta, embora a maior parte apresente sempre

algumas

manifestaes clnicas. Assim, os sintomas mais comuns so: fadiga (devido anemia),
sangramentos nasais (por causa da reduo do nmero de plaquetas), dores nos ossos e
fraturas espontneas (provocadas pelas anormalidades sseas), cirrose, fibrose e
desconforto abdominal (devido a hepatoesplenomeglia).
Nos outros tipos, uma vez afetado o sistema nervoso, os doentes apresentam vrias
anomalias neurolgicas desde a infncia, que podem incluir hipertonia, mltiplas crises
epilticas, convulses e atraso mental. No caso da DG tipo 3 as alteraes neurolgicas
so menos graves e mais lentas do que no tipo 2.

DIAGNSTICO

O diagnstico da doena de Gaucher pode ser feito em qualquer idade, sendo o mtodo
mais preciso para diagnosticar a dosagem da atividade da enzima -glicosidase nos
leuccitos, a partir de uma amostra de sangue, ou nos fibroblastos, a partir de um
fragmento de pele do brao. Nos pacientes com Doena de Gaucher, o nvel de atividade
da enzima fica 30% abaixo do normal pelo que a determinao da atividade enzimtica
essencial para o diagnstico da doena e, consequentemente, para o tratamento. Neste
teste, adicionado soluo um substrato artificial que assume o papel dos
glicoesfingolpidos. Se no houver uma interao suficiente com o substrato, significa
que a atividade da beta-glicosidase muito baixa, pelo que de suspeitar que estejamos
perante um caso de DG.
Quando h incerteza em relao ao diagnstico, ou para descartar mais rapidamente uma
doena que possa ser grave, pode ser indicada uma bipsia da medula ssea, ou
mielograma, para identificar clulas de Gaucher. Apesar de dar os resultados mais
rapidamente, este exame mais invasivo e doloroso, sendo feito atravs da colheita de
sangue da medula ssea, a partir do esterno ou da crista ilaca.

O diagnstico molecular, executado atravs da tcnica de reao em cadeia de polimerase

em tempo real, pode ser til na identificao de portadores (heterozigotos no-doentes) e
no diagnstico pr-natal, alm de ter uma certa importncia no prognstico. Assim,
possvel identificar a mutao, cuja alterao estrutural que provoca na enzima a impede
de funcionar normalmente, envolvida no gene codificante da GBA. As mais frequentes
so a N370S, L44P, 84GG, IVS2+1, 55del. No caso da N370S, a asparagina substituda
pela serina, causando o tipo 1 da doena de Gaucher. A ausncia desta mutao pode ser
um indicativo de evoluo para um quadro neurolgico grave, associado aos tipos 2 e 3
desta doena. Na mutao L444P, d-se uma substituio da leucina por prolina no
aminocido nmero 444 da enzima -glucosidase, provocando as neuropatias (tipos 2 ou
3).

TRATAMENTO
At aos anos 90, o tratamento e a terapia para a doena de Gaucher do Tipo 1 era apenas
de controlo sintomtico, envolvendo terapias de reduo da dor, transfuses sanguneas,
cirurgia ortopdica para ossos e articulaes, e esplenectomia (remoo do bao). Embora
muitas dessas medidas ainda hoje sejam tomadas, atualmente as duas principais
abordagens para aa doena de Gaucher do Tipo 1 so a terapia de reposio enzimtica
(TRE) e terapia de reduo de substrato (TRS), terapias tambm usadas noutras doenas
de depsito lisossmico. Embora no constituam a cura total da doena, estas terapias
tm bons resultados no controlo das manifestaes clnicas.
O objetivo da TRE fornecer a quantidade apropriada de enzima para permitir que
os restos celulares sejam processados. Dessa forma, a terapia de reposio enzimtica
funciona como uma substituio da enzima deficiente ou ausente no paciente. A enzima
substituta, inicialmente extrada a partir de placenta humana e substituda em 1994 pela
forma recombinante (imiglucerase) dada ao paciente atravs de infuso intravenosa
(normalmente a cada 2 semanas) e quebra o substrato, o glicocerebrosdeo. Na ltima
dcada, a TRE tornou-se o tratamento padro para doena de Gaucher do tipo 1, sendo
geralmente bem tolerada, capaz de reverter a acumulao de substrato e produzindo
melhorias na qualidade de vida dos doentes. Com a TRE, os componentes de restos
celulares menores podem ser removidos das clulas por processos naturais. No entanto,

atualmente a TRE no soluciona condies ou sintomas relacionados com o sistema

nervoso central, caractersticos dos tipos 2/3 da doena de Gaucher.
O objetivo da TRS, terapia destinada aos doentes com DG tipo 1 para os quais a TRE no
uma opo, minimizar a quantidade de produo e acumulao de substrato nas
clulas, envolvendo a administrao oral de uma pequena molcula que inibe a primeira
etapa de formao do substrato. Como resultado, as clulas tero menos
glicocerebrosdeo que precisa de ser quebrado, e mesmo que a deficincia na atividade
da enzima glicocerebrosidase permanea, ela ainda capaz de lidar com a pequena
quantidade de substrato produzido nas clulas quebrar o que j est armazenado. Dessa
forma, a terapia de reduo de substrato funciona por meio da reduo de restos celulares
o que significa que, mesmo se os pacientes apresentarem deficincia da enzima que
destri os restos celulares, a enzima produzida pelos pacientes tem mais capacidade de
impedir a acumulao dos restos celulares com a TRS.
Infelizmente, para o tipo 2 da doena de Gaucher no existem tratamentos. No entanto,
experimentalmente, esto a ser feitos tratamentos com chaperones, protenas que tm por
funo principal assistir e promover o enrolamento adequado de cadeias polipeptdicas.
Esta terapia baseia-se na capacidade dos chaperones promoverem a conformao das
protenas na forma funcional e ativarem assim as enzimas que degradam o
glicocerebrosdeo. uma terapia relativamente importante, pois os chaperones podem
alcanar o crebro, atravessando a Barreira Hematoenceflica, logo poder ser um
tratamento para os tipos 2 e 3 da doena.
Atualmente, a investigao dedica-se tambm terapia gentica como uma rea que pode
levar cura da doena de Gaucher. Acredita-se que a terapia gentica envolver a
introduo de genes normais da glicocerebrosidase em clulas de um indivduo afetado,
fazendo com que produzissem quantidades suficientes de glicocerebrosidase, levando
cura total.
O transplante de medula ssea pode ser tambm uma forma de minimizar a progresso
dos danos no sistema nervoso, no entanto, devido aos riscos de mortalidade e morbidade,
no muito recomendado. Por fim, h evidncias de que nos tipos neuropticos da DG,
a esplenectomia completa ou parcial est associada a um aumento da gravidade da
progresso das anomalias neurolgicas e sseas, assim como um aumento do risco de
infeo, no sendo tambm recomendvel.
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ACONSELHAMENTO GENTICO

Como j foi dito, a doena de Gaucher uma doena autossmica recessiva causada pela
presena de dois alelos mutantes codificadores do gene da glicocerebrosidase no
cromossoma 1. As caractersticas clnicas e a progresso desta doena monogentica
podem variar consideravelmente entre os pacientes com o mesmo gentipo, dada a
influncia dos fatores epigenticos.
Em cada gestao, cada portador tem uma probabilidade de 50% de transmitir um gene
que sofreu mutao, logo, quando ambos os pais so portadores, h uma probabilidade de
25% de que a criana ter a doena de Gaucher e 25% de possibilidade de que no ser
afetada nem ser um portador.
Desta forma, as pessoas com risco de serem portadoras podem considerar o
aconselhamento gentico e avaliao do DNA da famlia, embora o conhecimento do
status de portador possa afetar as escolhas de reproduo e auxiliar nas decises sobre
exames e orientao familiar. Entre as pessoas de risco esto familiares em primeiro grau
de pacientes com a doena de Gaucher, descendentes de judeus asquenazes e indivduos
com sintomas associados a esta doena.

CONCLUSO
Chegado ao fim deste trabalho posso concluir que a doena de Gaucher engloba um
conjunto de sinais e sintomas que vo desde a forma letal perinatal at doena
praticamente assintomtica. De um modo convencional, pode ser dividida em trs tipos
clnicos, com base na ausncia (tipo 1) ou na presena e gravidade de envolvimento do
sistema nervoso central (tipos 2 e 3). O tipo 1 a forma mais frequente, no apresenta
comprometimento do sistema nervoso central e os eventuais sintomas neurolgicos
observados so secundrios a complicaes sistmicas da doena. tambm o nico tipo
para o qual existe um tratamento eficaz, embora no cure totalmente. Por sua vez, a
mutao N370S a mais frequente e est relacionada com o tipo 1 enquanto que o alelo
L444P em homozigose sugere letalidade precoce.
Por fim, podemos concluir que o estudo do gentipo auxilia no suporte clnico e
necessrio para o aconselhamento gentico.
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FONTES DE REFERNCIA
Todas as fontes foram consultadas, pela ltima vez, a 22 de fevereiro de 2015:
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