UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

Escuela Acadmico Profesional de Agronoma

UNC

D E C AJAM ARC A

U N IV E R S ID A D

N A C IO N A L

rarlavida ae nsa e

PROYECTO TESIS:

INFLUENCIA DEL EXPLANTE Y BALANCE HORMONAL PARA LA

INDUCCIN A ORGANOGNESIS DIRECTA DE VIOLETA DE LOS
ALPES (Cyclamen persicum Mill.)
PRESENTADO POR:

TESISTA: Elfer Neira Huamn

ASESOR: Dr. Segundo Berardo Escalante Zumaeta

Cajamarca Per
2014
I.

INTRODUCCIN
La Violeta de los Alpes (Cyclamen persicum) es una planta ornamental cultivada
en macetas de floracin invernal. Su importancia se debe a la belleza y colorido de
sus flores como as tambin por su largo periodo de floracin (Bobone 2013). Es
una planta con capacidad de adaptacin a ambientes frescos, dentro de oficinas
con buena ventilacin e iluminacin. Sus

caractersticas genticas la califican

como una planta de respuesta positiva a la micropropagacin.

La micropropagacin regenera plantas en virtud de la totipotencia celular a partir
de clulas de plantas seleccionadas. Hoy en da sabemos que cualquier planta
puede ser cultivada en condiciones In Vitro, siempre que haya desarrollado la
formula o metodologa o proceso correcto para su crecimiento. Para tal propsito,
es necesario colocar una porcin de un vegetal en un medio de cultivo adecuado y
en condiciones aspticas.
La produccin de plantas micropropagadas surge como una alternativa para la
obtencin de una descendencia elevada con calidad gentica y fitosanitaria, en un
corto plazo, constituyendo as un clon en el que todos los descendientes contienen
la misma informacin gentica de la planta madre, respondiendo de esta forma a
las exigencias de los productores (Pereira et al. 2004).
La informacin disponible sobre el clonaje In Vitro en Violeta de los Alpes, no es
satisfactoria, pues entre otros aspectos aun es necesario definir los balances
hormonales del medio de cultivo que favorezca una organognesis directa de los
explantes cultivados.
1.1.

Problema de investigacin

La micropropagacin de Violeta de los Alpes es limitada por la capacidad de

propagar por semilla botnica y vegetativa (cormos), tiempo de germinacin, la
susceptibilidad a enfermedades fungosas y la prdida de caracteres genticos
valorados (Bobone 2013). A su vez, la principal limitante de su micropropagacin
lo constituye la insuficiente informacin en la tcnica de cultivo de tejidos. Por lo
tanto hay la necesidad de sostener dicha investigacin, que aporte con la
1.2.

propagacin de plantas ornamentales muy solicitadas por el consumidor.

Formulacin del problema
Cmo influye el explante y balance hormonal para la induccin a organognesis
directa de Violeta de los Alpes?

1.3.

Objetivo de la investigacin
Determinar el balance hormonal en funcin al tipo de explante para la induccin a
organognesis directa de Violeta de los Alpes.

1.3.1. Objetivos especficos

Determinar el balance hormonal para la induccin a organognesis directa de

1.4.

Violeta de los Alpes, utilizando explantes de lmina foliar joven.

Determinar el balance hormonal para la induccin a organognesis directa de
Violeta de los Alpes, utilizando explantes de peciolo joven.
Hiptesis de la investigacin
Cuando la relacin hormonal auxina y citocinina es baja favorece la

induccin a organognesis directa de Violeta de los Alpes.

Los explantes obtenidos de tejido foliar son ms eficientes que los
obtenidos de sus peciolos en la induccin a organognesis directa de
Violeta de los Alpes.

II.

REVISION DE LITERATURA
2.1. Origen y caractersticas de la Violeta de los Alpes
La Violeta de los Alpes (Cyclamen persicum Mill.) es originaria de la regin este
del Mediterrneo (Bobone 2013). Es una especie que destaca por sus
caractersticas estticas, larga duracin y alto valor en el mercado.es una planta
muy hermosa, no slo por sus flores de diversos colores y gran duracin en
maceta, sino tambin por su follaje. Cada flor suele durar cuatro semanas sin
perder frescura y lozana, y la planta puede mantenerse floreciendo durante cuatro
meses (Espinoza et al. s.f).

2.2.

Clasificacin taxonmica1

Orden: Ericales
Familia: Primulaceae
Sub familia: Myrsinoideae
Gnero: Cyclamen
Especie: Cyclamen persicum MILL.
2.3.

Descripcin botnica

Las hojas, de margen aserrado, tienen forma acorazonada y presentan manchas

que forman dibujos en diferentes matices de verde o gris. Estn ubicadas sobre
una estructura de reserva considerada por algunos autores como un cormo y por
otros como un tubrculo. Este rgano de reserva puede tener entre 6 a 15 cm de
dimetro, es oscuro, redondo y aplastado. Los peciolos de las hojas y el
pednculo floral pueden superar los 20 cm. de longitud. Las flores pueden ser
perfumadas o no; la fragancia de las flores se ha perdido en muchos de los
cultivares. Hay plantas con flores blancas, rosas, salmn, rojas e incluso
marrones. Las flores son solitarias, hermafroditas y se sitan en el extremo del
pednculo. Poseen cinco ptalos, que pueden ser estriados o no. Es una planta
que florece abundantemente desde el otoo hasta la primavera. El fruto es una
capsula esfrica que tarda entre 4-5 meses en madurar (Bobone 2013).
2.4. Propagacin
La propagacin comercial se realiza exclusivamente por semillas; el rgano de
reserva (cormo) no se usa para la obtencin de plantas a nivel comercial, resulta
laboriosa y poco prctica, aunque suele usarse en jardinera domstica.
Para programas de mejoramiento gentico y para la produccin de hbridos puede
realizarse divisin de los cormos y multiplicacin in vitro (Bobone 2013, Espinoza
et al. s.f).
2.5.

Estado actual de la investigacin In Vitro en violetas

Meja (1994) propone que para la propagacin in vitro a partir de piezas de hojas
normales de violeta africana (Saintpaulia ionantha wendl), en medio Murashige y
1 Consultado 25 de Jul. 2014. Disponible en
http://es.wikipedia.org/wiki/Cyclamen_persicum

Skoog (MS) suplementado con fosfato de sodio, 170 mg/l; inositol, 100 mg/l;
tiamina, 0.4 mg/l; niacina, 0.4 mg/l; piridoxina, 0.4 mg/l; AIA, 2.0 mg/l; BPA, 0.08
mg/l; sucrosa, 30g; y agar 9 g, ajustado a un pH 5.7. As mismo tambin menciona
que para la micropropagacin

de violeta africana, a travs de secciones de

peciolo de hojas tiernas, en medio de cultivo MS suplementado con 2.5 % de

sucrosa, 0.8 % de agar, ANA (0.1 mg/l) y BPA (0.01 mg/l), ajustado a aun pH 5.8 y
a una temperatura de 25 C. La regeneracin se hace visiblemente notoria, a las 6
semanas y continua creciendo por varias semanas dando origen a plntulas de
tamao variable.
Estudios realizados por Espinoza et al. (2007) sobre micropropagacin de violeta
africana a partir de hojas, sembradas en el medio de cultivo compuesto por las
sales Murashige y Skoog MS (1962), sacarosa (30 g/l), mioinositol (100 mg/l),
tiamina (1.0 mg/) y las combinaciones de 6-BAP y ANA, como se muestra en la
tabla 1. El pH fue ajustado a 5.7 y solidificado con agar (6 g/l). Despus de 90
das, puedo observarse la formacin de brotes en el 100% de los explantes, en
todos los tratamientos; sin embargo, el nmero de brotes por explante manifest
diferencias altamente significativas entre los tratamientos, lo cual puede estar
atribuido a los efectos que produce el 6-BAP, el cual promueve la divisin celular y
estimula la diferenciacin de brotes.
Cuando no se emple reguladores del crecimiento en el medio de cultivo, se
obtuvo el menor nmero de brotes por explante en comparacin con los
tratamientos donde se utilizaron los mismos, destacndose los obtenidos con las
combinaciones de 0.5 y 1.0 mg/l de 6- bencilaminopurina (6- BAP) y 0.1 mg/l de
cido nalftalenactico (ANA).
Tabla 1: Efecto de diferentes combinaciones de 6-BAP y ANA en la multiplicacin
in vitro de Violeta Africana.
Tratamientos (mg/l)
6- BAP ANA

Explantes

Explantes

con Brotes/explante

brotes (%)
100

1.8

sembrados
20

0.1

0.1

20

100

6.8

0.5
1.0

0.1
0.1

20
20

100
100

10.8
9.6

Fuente: Espinoza et al. (2007)

Hurtado y Merino (1991) sugieren que para el cultivo in vitro de secciones de hoja
de violeta africana se utilizaron hojas jvenes y peciolos en medio de cultivo MS
(1962), suplementadas

con fosfato de sodio (0.170 mg/l); sacarosa, (30 g/l);

tiamina, 0.4 mg/l; inositol, 100 mg/l; AIA, 0.1 mg/l; cinetina, 10mg/l; sulfato de
adenina, 80 g/l, y agar, 0.8%; pH 5.7; temperatura de 25C y fotoperiodo 16/8
horas de iluminacin (etapa I y II).
El

protocolo

desarrollado

en

el

Laboratorio

de

Cultivo

de

Tejidos

Micropropagacion El Zamorano (s.f) indica que para inducir organognesis

directa en porciones de hoja madura y peciolo de violeta africana en medio MS
suplementado con inositol, 100 mg/l; acido nicotnico, 0.25 mg/l; glicina, 1.0 mg/l;
tiamina, 0.05 mg/l y BPA, 0.5 mg/l; sacarosa 30 g; phytagel, 3.75g; ajustado a pH,
5.8; fotoperiodo de 16 horas luz; temperatura, 25C (etapa I). En la etapa II se
utilizara el mismo medio de cultivo que la etapa I, tiamina 0.4 mg/l; AIA, 1.0 mg/l
sin glicina, acido nicotnico y BPA.
Mosquera (s.f) estudi el desarrollo de organognesis directa en violeta africana
para la obtencin de brotes. La metodologa utilizada durante este estudio
consisti en tomar explantes de hoja de violeta africana, los cuales fueron
desinfectados con una solucin al 1% de detergente ms tres gotas de Tween
durante 20 minutos y una solucin de cloro al 0,5% ms 3 gotas de Tween durante
10 minutos. Para la siembra se utiliz medio MS enriquecido con: 0.8mg/l de
tiamina, 0.2mg/L de KIN, 2mg/L de AIA, 20g/L de azcar y 7.5g/L de agar.
Franco y Garca, citado por Badillo (2009) en su Manual de Laboratorio de Cultivo
de Tejidos plantea la micropropagacin de violeta africana a partir de pequeas
porciones de peciolo y tejido foliar, joven y sano. En medio de cultivo semi-slido
de MS (1962) complementado con cido nicotnico 0.5 mg, piridoxina 0.5 mg,
cido indolactico (AIA) 2.0 mg, 6-Bencil Aminopurina (BPA) 0.08 mg, sacarosa 30
g y agar 6.0 g. Ajustar el pH a 5.7.
Becerril (2008) seala que para la micropropagacin de Violeta Africana a partir de
hojas y peciolos en medio de cultivo MS (1962) al 100% ms modificaciones;
Fe/Na EDTA, 10 ml/l; inositol, 100 mg/l; tiamina, 0.5 mg/l; 6-BPA, 5 mg/l; ANA, 0.1

mg/l; sacarosa, 30 g/l; agar, 8 g/l; pH, 5.7; temperatura, 22 +/- 2 C; fotoperiodo,
12 horas luz/8 de oscuridad (Etapa I). En la etapa II se utilizara el mismo medio de
cultivo que la etapa I; piridoxina, 2.0 mg/l; Ac. Nicotnico, 1.0 mg/l; glicina, 0.4 mg/l;
fosfato de sodio, 0.85 mg/l; 6-BPA, 1.0 mg/l: AIA, 0.5 mg/l. La etapa III, sin
reguladores de crecimiento.
Alzate (1994) ha demostrado un rpido mtodo de micropropagacin in vitro de
Violeta Africana a partir de segmentos de hoja y peciolo; en medio MS (1962)
enriquecido con 0.4 mg/l de tiamina, 0.1 g/l de inositol, 30 g de sacarosa y agar al
1 %, lo anterior a pH 5.7. El establecimiento (etapa I) se logr con AIA, 0.1 mg/l y
0.0 de BPA. El mejor tratamiento para multiplicacin y enraizamiento (etapa II y III)
fue en AIA, 0.3 mg/l y 0.0 BPA. Se observ la formacin de callos a los 20 das de
siembra (dds), y entre 55-65 dds se desarrollaron en promedio 80 a 150 plntulas
por callo. Los segmentos de peciolo no presentaron organognesis.
III.
MATERIALES Y MTODOS
3.1. Ubicacin geogrfica del trabajo de investigacin
La investigacin se llevar a cabo en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos
Vegetales de la Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional de
Cajamarca, ubicado a 2680 msnm, en las coordenadas 0710 06.35 S. y 78 29
42.70 W. Distrito, Provincia de Cajamarca y Regin Cajamarca
3.2. Materiales
3.2.1. Material biolgico
Una (1) maceta con una planta madre selecta de Violeta de los Alpes (Ciclamen
persicum Mill.) donadora de explantes procedente del Servicio Silvo Agropecuario
(SESA) de la Universidad Nacional de Cajamarca.
3.2.2. Material de campo.
Tijeras de podar, bolsas de polietileno, cmara digital y libreta de apuntes.
3.2.3. Materiales y equipos de laboratorio
Cmara de flujo laminar.
Balanza analtica.
Autoclave.
Potencimetro.
Rollo de algodn.
Bistur y pinzas de diseccin.
Medio de cultivo Murashige y Skoog MS (1962), suplementado (Tiamina,
mioinositol, sacarosa y agar).

Reguladores de crecimiento: cido Nalftalenactico (ANA),

Indolactico (AIA), 6-Bencil Aminopurina (BPA) y Agua de coco.

Antioxidante: cido ctrico.
Un matraz Erlenmeyer de 2L.
Un matraz Erlenmeyer de 1L.
Dos vasos de precipitados de 250 ml.
Dos pipetas de 1 ml.
Una piceta de 250 ml.
Un agitador de vidrio.
Cinco cajas de Petri.
Rollo de papel aluminio.
Reactivos: Etanol al 70%, Solucin de hipoclorito de sodio, blanqueador

cido

comercial (5.5 % de cloro libre) al 10 %, HCl 1.0 N, NaOH 1.0 N, 2.0 litros
de agua bidestilada estril.
3.3. Metodologa
3.3.1. Trabajo de campo
a. Seleccin de la planta madre.- Para seleccionar la planta madre se tendr

b.

en cuenta los siguientes aspectos.

Procedencia.
Caractersticas varietales: diseo de sus hojas y color de flor.
Preferencia en el mercado.
Pre-tratamiento conforme a un programa de fertilizacin.
Estado fitosanitario.
Adaptacin a las condiciones climticas de Cajamarca y
condiciones de invernadero.
Eleccin del tipo de explante: se utilizarn hojas jvenes (tiernas) de Violeta
de los Alpes sanos; tambin se utilizarn sus peciolos.

3.3.2. Trabajo de laboratorio

3.3.2.1. Preparacin del material vegetal
a. Desinfeccin2
Obtener varias hojas jvenes (tiernas) de Violeta de los Alpes con 2 a 3
cm de peciolo aproximadamente.

2 Extraido de Daniel Hurtado. Cultivo de tejidos vegetales. pag.152

Se colocar las hojas dentro de un vaso de precipitados, lavar

con agua corriente y jabonosa al 1%, tratando de lavar

cuidadosamente el haz y envs.

Se enjuagar directamente bajo el chorro de agua de la llave

durante 10 min.
Higienizar la cmara de flujo laminar y el espacio donde va

trabajar con Ethanol.

Se manipular las hojas con las pinzas no con las manos.
Separando los peciolos de las lminas y colocarlos en un

beaker.
Inmersin de los explantes en alcohol etlico al 70% durante

30 segundos.
Inmersin en solucin de hipoclorito de sodio al 0.5% (solucin

desinfectante) durante 15 min.

Luego Transferir el beaker con las hojas y los peciolos en la
solucin desinfectante a la cmara de flujo laminar. Vaciar la

solucin desinfectante en otro recipiente.

Finalmente enjuagar cinco veces con

agua

destilada

esterilizada, tratando de eliminar los residuos de hipoclorito.

b. Preparacin del explante
Para la lmina foliar se colocar la hoja de violeta de los Alpes en una
caja Petri estril y se eliminar todo el margen de la hoja junto con el
peciolo; en esta zona se corta una seccin en forma de tringulo, donde
incluya tejido de ambas partes. Posteriormente se eliminar la
nervadura central. Se corta la lmina en secciones de

0,5 cm

cuadrados.
Para los peciolos se eliminarn las porciones daadas y se cortar

cilindros de 2 mm de ancho.
3.2.2.2. Preparacin del medio de cultivo
a. Se preparar un litro de medio de cultivo semi-slido de Murashige y Skoog
(1962) a una concentracin de 0.5X, complementarlo con mioinositol, (100
mg/l); tiamina, (1.0 mg/l); sacarosa, (30 g/l); cido ctrico, (100mg/l) y las
combinaciones de cido Naftalenacetico, (ANA) y 6-bencil Aminopurina (6-

BPA) como se muestra en la tabla N.3 de tratamientos. Ajustar el pH a 5.7

y solidificado con agar 10 g/l.
Tabla N 2. Pasos para preparar medio MS (X1)
Solucin
pesar para 1
L

Solucin A

Sales minerales y

1
2
3
4
5
6
7
8

vitaminas
(NH )NO3
KNO3
CaCl2.2HO
KH2PO4
H3BO3
MnSO4.H2O
ZnSO4.7H2O
KI
Na2MoO4.2H2
O

9
1
CuSO4.5H2O
0

CoCl2.6H2O
11
1
Solucin B
2 MgSO4.7H2O
1
3 Na2EDTA
1
Solucin C
4 FeSO4.7H2O
1
Solucin D
5 myo- Inositol
1
Solucin E
6 Tiamina HCl
Fuente: Meja (1988).
Elaboracin propia

Concentracin
X10(mg/l
)
X1 (mg/l) X1 (g/l)
16500
1650
1,65
19000
1900
1,9
4400
440
0,44
1700
170
0,17
62
6,2
0,0062
109
10,9
0,0109
86
8,6
0,0086
8,2
0,82 0,00082
2,5

0,25

0,25

0,025

0,25

0,025

0,00025
0,00002
5
0,00002
5

7400

740

0,74

745

74,5

0,0745

557

55,7

0,0557

1000

100

0,1

10

0,001

b. Se agregar al medio de cultivo 100 ml/l de agua de coco.

c. Se fundir el agar en calor y verter 4 ml por tubo, tapar con doble tapa de
papel aluminio y sujete con una liga o con tapa de plstico. Esterilizar en
autoclave a 15 libras de presin y 121C durante 15 min.
3.2.2.3. Cultivo in vitro
a. Fase I: periodo de establecimiento del explante
La preparacin, desinfeccin y siembra de los explantes se realizara
dentro de la cmara de flujo laminar de aire.

Se colocar uno de los explantes de hoja en un tubo con medio. Repita

para los otros tubos provistos.

Se colocar uno de los explantes de peciolo en un tubo con medio.

Repita para los otros tubos provistos.

Se sembrar los explantes con la superficie abaxial (envs) en

contacto con el medio de cultivo (Gonzales, 2006).

Despus de sembrar los explantes, se tapar el frasco con papel
aluminio, sujetndolo con ligas a la boca del frasco; se levantan las
puntas del papel aluminio hacia la boca del frasco con la finalidad de no

interferir la luminosidad.
Se incubar los tubos con los explantes en cmara de cultivo en

condiciones de oscuridad por una semana.

Luego se incubar los tubos con los explantes en cmara de cultivo en
condiciones de fotoperiodo de 16 horas luz, por 8 horas de oscuridad, a

temperatura de 25 +/- 2C, humedad relativa de 80-90% 3.

Se observar cada tercer da el desarrollo del cultivo. Anotar los
cambios en la apariencia de los explantes (stress oxidativo). separar los

frascos con explantes necrosados

15 das despus de la siembra (dds) se evaluara contaminacin;
separar los frascos con explantes contaminados y registrar si se trata

de contaminacin bacteriana o fngica.

b. Fase II: Multiplicacin (Obtencin de callos y/ o embrioides), el material
vegetal tiende a multiplicarse y mantenerse bajo condiciones de cultivo in
vitro durante un tiempo prolongado 2 a 3 meses. Se renovar el medio de
cultivo cada 10 a 15 das.
c. Fase III: Enraizamiento y crecimiento.- Medio de cultivo

Murashige y

Skoog MS (1962) sin reguladores de crecimiento.

d. Fase IV: Aclimatacin; transferencia de las plantitas clnales a tierra o
sustrato mezcla en maceta o terrinas bajo condiciones controladas, en un
3.2.2.4.

invernculo.
Factores, niveles y tratamientos en estudio

La literatura afirma el uso de dos de reguladores de crecimiento; auxinas y

citocininas como promotores de embriognesis somtica en Violeta Africana.
3 Tomado de Daniel Hurtado (1991) y Espinoza Reyes, A, et al., (2007).

Por tanto, para la micropropagacin clonal de Violeta de los Alpes (Cyclamen

persiccum Mill.) se ha tomado como punto de partida el protocolo sugerido por
Espinoza et at. (2007).
a. Factor E: Explante (peciolo y hojas jvenes)
e1
= lamina foliar (hoja).
e2

= peciolo.

b. Tipo y concentracin de reguladores de crecimiento (mg/l)

r0
= sin reguladores de crecimiento.
r1

= 0.1 ANA 0.25 BPA.

r2

= 0.1 ANA 0.50 BPA.

r3

= 0.1 ANA 1.0 BPA.

c. Tratamientos hormonales en estudio (fase I y II)

Se utilizara un diseo completamente randomizado bajo arreglo factorial 2
4; con ocho (8) tratamientos, tres (3) repeticiones y 10 unidades
experimentales por tratamiento.

Tratamientos s

Tabla N 3: tratamientos.
MS 0.5X (1962) suplementado + Balance hormonal (mg/l).
Fase I
Fase II
Fase III
Establecimiento
Multiplicacin
Crecimiento

Clave

T 0 Lamina foliar + Sin reguladores de crecimiento.

e 1 r 0

T 1 Lamina foliar + 0.1 ANA 0.25 BPA.

e 1 r 1

T 2 Lamina foliar + 0.1 ANA 0.50 BPA.

e 1 r 2

T 3 Lamina foliar + 0.1 ANA 1.0 BPA.

e 1 r 3

T 4 Peciolo + Sin reguladores de crecimiento.

e 2 r 0

T 5 Peciolo + 0.1 ANA 0.25 BPA.

e 2 r 1

T 6 Peciolo + 0.1 ANA 0.50 BPA.

e 2 r 2

T 7 Peciolo + 0.1 ANA 1.0 BPA.

e 2 r 3

Fuente: elaboracin propia.

3.2.2.5.

Parmetros a evaluar
formacin de callos y brotes.
Nmero de brotes por explante.
Coloracin de brotes.
oxidacin y contaminacin.

Tabla N 4. Distribucin de las unidades experimentales y evaluacin de tratamientos.

a) Explantes de lmina foliar
T0
01

02

03

04

05

06

07

08

09

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

T1
31

32

33

34

35

36

37

38

39

40

41

42

43

44

45

46

47

48

49

50

51

52

53

54

61

62

63

64

65

66

67

68

69

70

71

72

73

74

75

76

77

78

79

80

81

82

83

84

91

92

93

94

95

96

97

98

99

100

101

102

103

104

105

106

107

108

109

110

111

112

113

114

25

26

27

55

56

57

85

86

87

115

116

117

28

29

30

58

59

60

88

89

90

118

119

120

T2

T3

T0

T1

T2

T3

b) Explantes de peciolo
T4
121

122

123

124

125

126

127

128

129

130

131

132

133

134

135

136

137

138

139

140

141

142

143

144

T5
151

152

153

154

155

156

157

158

159

160

161

162

163

164

165

166

167

168

169

170

171

172

173

174

181

182

183

184

185

186

187

188

189

190

191

192

193

194

195

196

197

198

199

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208

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238

239

230

3.3.3. Fase de gabinete

Presentacin de resultados y anlisis de los datos de la presente investigacin se
reportaran en tablas y fotografas ayudndose del programa estadstico SAS; a
travs de tablas estadsticas de Anlisis de Varianza de Diseo Completamente al
Azar (ANOVA) y comparaciones mltiples prueba de Duncan y la prueba de Tukey.
Durante el tiempo que dure la presente investigacin, el escrito del contenido de la
libro Tesis, se realizar peridicamente, dando nfasis a los resultados de
comprobacin obtenidos por cada tratamiento y fase de cultivo In Vitro.
IV.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

lzate Marn, A.L; Montaez Cvalles, G.1994. Multiplicacin Vitro de violeta

africana (Saintpaulia

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http://es.scribd.com/doc/128651650/Informe-3-Cultivo-in-Vitro-de-Violeta-Africana
V.

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
Actividades a realizarse

2014
Jun

Seleccin de la planta madre

Adquisicin de materiales
Preparacin de medio de cultivo
Esterilizacin de materiales.
Instalacin del experimento
Evaluacin de resultados
Redaccin de la tesis
VI.

Jul
x

Agost

Sept

Oct

Nov

x
x

x
x

x
x
x
x

PRESUPUESTO ANALTICO
Descripcin

Unidad de

Cantidad

Costo S/.

medida.
Material vegetal
Material bibliogrfico y
Fotocopias
Internet
Material de impresin
Materiales diversos
Material de escritorio
Material de campo.
Material de laboratorio
Mano de obra

Maceta
Unidad
Mes
Unidad
Diario
Sub total
Imprevistos (6%)
TOTAL

Unitario

Total

1
100

10.00
0.10

10.00
10.00

4
400
45

25.00
0.20
25.00

100.00
80.00
50.00
50.00
25.00
100.00
1125.00
1550.00
93.00
1643.00

Financiamiento: Los gastos correspondientes a materiales y equipos de

laboratorio, sern asumidos por el Laboratorio de Biotecnologa vegetal de la
Universidad Nacional de Cajamarca y por el tesista.

PROYECTO TESIS:

INFLUENCIA DEL EXPLANTE Y BALANCE HORMONAL PARA LA

INDUCCIN A ORGANOGNESIS DIRECTA DE VIOLETA DE LOS
ALPES (Cyclamen persicum Mill.)


Elfer Neira Huamn.
TESISTA

Dr. Segundo Berardo Escalante Zumaeta.

ASESOR

Ing. Manuel Malpica Rodrguez.

COLABORADOR

Ing. Luis Dvila Estela

COORDINADOR CIEA