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Ejercicios
Certamen
1
Fundamentos
de
Ingeniera
Bioqumica
IWQ-250
2014-1
1.
La
velocidad
de
reaccin
de
una
catlisis
enzimtica
simple
es
descrita
por
la
ecuacin
de
Briggs-
Haldane:
a) Escriba
la
ecuacin.
Bajo
qu
condiciones
es
vlida
esta
ecuacin?
(Qu
suposiciones
se
hacen
para
su
obtencin?)
b) Cul
es
la
diferencia
de
esta
expresin
con
su
anloga
para
MIchaelis-Menten?
Cul
de
las
dos
es
ms
completa?
Examinando
la
Ecuacin:
c)
2.
3.
4.
5.
6.
Escriba
a
que
tiende
v
cuando
la
concentracin
de
sustrato
es
mucho
mayor
que
Km
para
este
sustrato.
d) Cul
es
la
velocidad
de
reaccin
cuando
la
concentracin
de
sustrato
es
igual
a
Km?
Una
reaccin
catalizada
por
una
enzima
tiene
una
velocidad
de
35
[mmol/mL-min]
cuando
la
-5
concentracin
de
sustrato
es
0,01
[M].
Si
Km
es
2x10
[M],
Cul
ser
la
velocidad
inicial
para
las
-3
-4
-4
-6
-6
siguientes
concentraciones
de
sustrato
en
[mol/L]:
3,5x10 ;
4x10 ;
2x10 ;
2x10 ;
1,2x10 ?
Usted
cree
que
ha
encontrado
un
nuevo
inhibidor
(I)
para
el
HIV-proteasa,
por
lo
que
lleva
a
cabo
unos
pocos
experimentos
para
caracterizar
su
comportamiento.
Los
resultados
indican
que
al
agregar
un
exceso
de
sustrato
sinttico
a
la
proteasa
en
presencia
del
inhibidor,
la
actividad
enzimtica
aumenta
pero
solo
hasta
un
50%
de
la
vmax
observada
en
ausencia
del
inhibidor.
Si
la
afinidad
de
la
enzima
por
el
sustrato
no
se
ve
afectada
Qu
tipo
de
inhibidor
es
(I)?
Fundamente.
Se
ha
obtenido
la
siguiente
expresin
cintica
para
la
reaccin
de
hidrolisis
de
maltosa
con
glucoamilasa:
15
=
45 + + 0,2 !
Donde
m
es
la
concentracin
molar
de
maltosa
y
v
la
velocidad
inicial
de
hidrolisis
de
maltosa.
Si
la
reaccin
es
inhibida
por
el
sustrato
(s)
y
KI
>>>
Km,
de
qu
tipo
de
inhibicin
se
trata?
Una
enzima
es
inhibida
en
forma
no
competitiva.
En
ausencia
de
inhibidor
se
han
obtenido
los
siguientes
resultados:
S
[mM]
0,23
1,00
1,73
2,10
[mol/mL-min]
40
120
161
175
Se
sabe
que
a
una
concentracin
de
inhibidor
de
35
[mM]
la
velocidad
mxima
es
125
[mol/mL-min].
Determinar
vmax,
Km
y
KI
para
la
reaccin
enzimtica.
Los
siguientes
resultados
de
velocidad
inicial
de
conversin
de
succinato
a
malato,
en
presencia
de
una
determinada
concentracin
de
malato
(que
se
sabe
es
la
nica
molcula,
presente
en
el
reactor
que
podra
actuar
como
inhibidor),
fueron
obtenidos
con
succinato
deshidrogenasa,
que
cataliza
la
reaccin:
S
en
[mM]
v
en
[mM/min]
Por
otro
lado,
con
un
preparado
de
succinato
deshidrogenasa
se
contact
una
solucin
de
100
[M]
de
succinato,
obtenindose
los
siguientes
resultados:
Tiempo
Malato
[min]
[mM]
20
25000
40
41000
60
50000
80
60000
100
62000
120
62000
150
62000
Si
se
sabe
que
la
afinidad
de
la
enzima
por
el
sustrato
se
ve
alterada
por
la
presencia
de
Malato,
se
pide
determinar
la
expresin
cintica
de
conversin
enzimtica
de
succinato
a
malato,
evaluando
todos
sus
parmetros
cinticos,
Qu
concentracin
de
malato
se
us
en
el
set
de
experimentos
correspondientes
al
grfico,
si
la
afinidad
de
la
enzima
por
el
sustrato
es
igual
a
la
del
inhibidor
por
la
molcula
correspondiente
en
la
reaccin?
7.
Para
la
hidrlisis
enzimtica
de
sucrosa
(Suc
2Glu)
se
utiliza
la
enzima
invertasa.
Para
llevar
a
cabo
la
reaccin,
se
dispone
de
un
preparado
enzimtico
comercial
(PC),
el
cual,
segn
lo
expuesto
en
el
envase,
posee
una
actividad
especfica
de
200
[UI/mgPC].
Dado
que
el
preparado
ha
estado
almacenado
en
forma
descuidada
por
largo
tiempo,
se
requiere
ratificar
el
dato
de
actividad
especfica.
Para
esto
se
prepar
una
solucin
(slo
se
diluye)
de
muestra
enzimtica
(ME)
de
0,2
[mgPC/mL].
Se
tom
0,5
[mL]
de
la
muestra
previamente
preparada
y
se
mezcl
con
4
[mL]
de
una
solucin
de
sucrosa
de
50
[g/L].
Para
detener
la
reaccin
se
agreg
0,1
[mL]
de
un
reactivo
adecuado.
Se
tom
muestras
y
midi
la
absorbancia
A,
obtenindose
los
siguientes
resultados:
Tiempo
Absorbancia
a
dilucin
[1:10]
[min]
5
15
1,4628
2,5944
Asuma
= 1,38
8.
9.
!
!
!
!
, siendo C la concentracin.
Corresponde
la
actividad
declarada
a
la
real
actual?
Especifique
claramente
cada
paso
dado
para
llegar
a
su
resultado.
En
caso
de
no
ser
as,
determine
el
porcentaje
de
variacin.
La
hidrlisis
de
la
urea
por
ureasa
es
una
reaccin
que
an
no
se
comprende
completamente.
La
reaccin
muestra
inhibicin
de
algn
tipo.
Los
siguientes
son
datos
obtenidos
experimentalmente:
[S]
=
0,2
M
[S]
=
0,02
M
1/v
[I]
1/v
[I]
0,22
0,0000
0,80
0,0000
0,33
0,0012
1,02
0,0012
0,51
0,0027
1,50
0,0022
0,76
0,0044
1,83
0,0032
0,88
0,0061
2,04
0,0037
1,10
0,0080
2,72
0,0044
1,15
0,0093
3,15
0,0059
Donde
v
:
Velocidad
inicial
en
[mol/L
min]
[I]
:
Concentracin
de
Inhibidor
M
[S]
:
Concentracin
inicial
de
urea
M
a) Determine
la
constante
de
MIchaelis-Menten
(Km)
para
esta
reaccin.
b) Qu
tipo
de
inhibicin
es
esta?
Fundamente.
c) Basado
en
la
respuesta
b),
Cul
es
el
valor
de
KI?.
-3
Una
enzima
de
comportamiento
Michaeliano
simple
tiene
un
Km
de
10
M.
cuando
se
incuba
la
enzima
-6
con
una
[S0]
de
5x10
M,
el
80%
del
sustrato
reacciona
en
10
min.
a) Estime
la
mx
de
la
reaccin.
b) Estime
la
[S]
remanente
al
cabo
de
20
[min]
de
comenzada
la
reaccin.
c) Proponga
un
mtodo
para
estimar
la
[E0]
con
que
se
realiz
la
reaccin.
600
3,1
Ejercicios
Propuestos
1.
2.
Obtenga
las
expresiones
cinticas
para
la
velocidad
inicial
de
reaccin
en
funcin
de
la
concentracin
de
sustrato,
considerando
los
supuestos
de
Michaelis-Menten
y
Briggs-Haldane.
Realice
este
ejercicio
para
todos
los
casos
de
inhibicin.
Durante
un
test
de
la
cintica
de
una
reaccin
catalizada
por
enzimas,
se
registraron
los
siguientes
datos:
3.
a) Determine
la
constante
de
Michaelis-Menten
de
la
reaccin
sin
inhibidor
presentada
a
30
[C]
y
a
49,6
[C]
b) Determine
la
velocidad
mxima
de
reaccin
sin
inhibidor
a
30
[C]
y
a
una
concentracin
de
enzima
de
1,6
[g/L]
c) Determine
KI
para
la
inhibicin
a
30
[C]
y
decida
qu
tipo
de
inhibidor
fue
usado
en
la
reaccin.
4
-4
La
enzima
ATPasa
tiene
un
peso
molecular
de
5x10
[Da],
un
valor
de
Km
de
10
M
y
un
valor
para
k2
de
-4
10
[molculas
ATP/molculas
Enzima
min]
a
37[C].
La
reaccin
catalizada
es
la
siguiente:
Que
tambin
puede
ser
representada
por:
!"#$%$
!!
+ !
!!
4.
5.
6.
cruda
(conteniendo
la
enzima)
son
aadidos
a
1
[mL]
de
mezcla
de
reaccin
conteniendo
ATP
a
0,02
M,
e
incubados
a
37
[C].
Luego
de
12
horas
de
finalizada
la
reaccin
(es
decir,
a
t
),
se
encontr
que
la
concentracin
de
fosfato
inorgnico
(Pi)
fue
de
0,002
M,
la
que
inicialmente
era
cero.
Qu
fraccin
de
preparacin
cruda
de
protena
era
la
enzima?
Ayuda:
Considere
[S]>>Km
Los
siguientes
datos
fueron
obtenidos
de
la
oxidacin
enzimtica
de
fenol
por
fenol
oxidasa
a
diferentes
concentraciones
de
fenol:
a) Qu
tipo
de
inhibicin
es
sta?
b) Determine
las
constantes
mx,
Km
y
KI
c) Determine
la
velocidad
de
oxidacin
a
[S]
=
70
[mg/L]
La
decarboxilacin
de
glioxalato
(S)
por
la
mitocondria
es
inhibida
por
malonato
(I).
Usando
los
siguientes
datos
obtenidos
en
experimentos
en
un
reactor
batch,
determine
lo
siguiente:
a) Qu
tipo
de
inhibicin
es
sta?
b) Determine
las
constantes
mx,
K'm,
y
KI.
Se
disea
un
mtodo
para
determinar
la
actividad
de
una
enzima.
Para
esto
se
incuban
0.6
mL
de
muestra
con
0.6
mL
de
celobiosa,
deteniendo
la
reaccin
con
0.2
mL
de
Na2CO3,
se
sabe
que
la
reaccin
es:
celobiosa
2
glucosa
(PM
180
g/mol).
La
muestra
se
obtiene
al
diluir
1
mL
de
caldo
en
13
mL
de
H2O.
Para
determinar
la
velocidad
de
reaccin
se
realizaron
experimentos
de
espectrometra
a
tres
diluciones,
midindose
la
Absorbancia
a
distintos
tiempos.
Determine
la
actividad
especfica
de
la
enzima
(UI).
1:5
1:10
1:15
0
5
10
15
20
25
-
0,2655
0,57
0,69
0,78
0,825
-
0,165
0,3375
0,48
0,585
0,675
-
0,1163
0,2325
0,345
0,4695
0,57
I
=
1
cm
de
celda
A
=
L**C
C
[g/L]
t
[min]
[UI]
=
moles
de
S
/
seg
7.
8.
[S]
M
0,027
0,015012
0,005697
0,001404
0,000243
Si
la
materia
prima
a
procesar
contiene
una
[S0]
de
1M,
cunto
tiempo
se
requiere
para
transformar
el
50%
de
ste.
Explique
claramente
todos
los
supuestos
y/o
simplificaciones
realizadas
para
resolver
el
problema.