ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE PLANTAS

(Sci)
ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE PLANTAS
(REVISTA CIENTFICA (2008)
de la Universidad Cientfica del Sur, Lima Per
Jorge Araujo Daz ; Ramss Salas Asencios)
RESUMEN
Se realiza una revisin de los principales compuestos con actividad antimicrobiana que se
pueden obtener a partir de extractos de plantas y derivados de ellas. Adems, se describen
las caractersticas y algunos resultados obtenidos a partir del uso de los dos principales
mtodos de evaluacin de la actividad antimicrobiana: el turbidimtrico y el ensayo por
difusin en placa.
Palabras clave: Actividad antimicrobiana, extractos de plantas, ensayo turbidimtrico, difusin
en placa.

INTRODUCCIN
Desde hace unos aos, el empleo de plantas medicinales y de productos derivados de las
mismas est aumentando de manera importante. Esto se debe a una serie de factores, entre
los cuales debemos destacar en muchos casos el conocimiento preciso de su composicin
qumica, y el hecho de que en la actualidad dicha utilizacin se fundamenta en numerosos
ensayos farmacolgicos in vivo como in vitro, as como en ensayos qumicos.
De esta forma, el uso de las especies vegetales medicinales que se ha venido haciendo en
forma emprica y basada en la tradicin tiene hoy una base cientfica.

Una planta medicinal es considerada como un complejo laboratorio de sntesis y

degradaciones en el que generalmente coexisten componentes con diversas estructuras
qumicas, y su efecto en muchas ocasiones se debe a varios de estos componentes. Adems
de los principios activos que son en su mayor parte metabolitos secundarios, en las plantas se
encuentran los metabolitos primarios y una serie de sustancias consideradas inertes con
funcin plstica.
La farmacopea peruana tiene muchas plantas con aplicaciones curativas. Diversos
investigadores han sealado que existen ms de 3,000 especies, por lo que la cantidad
abrumadora de medicinas originadas por este tipo de plantas debiera convencer a los
cientficos del valor y alcance de la investigacin etnobotnica, ecolgica, fitogeogrfica,
fitoqumica y farmacolgica, a fin de lograr su validacin cientfica.
El objetivo del presente trabajo es resaltar la importancia de las plantas como productoras de
compuestos antimicrobianos, presentando los principales componentes qumicos que se
pueden aislar con esta actividad, as como la principal metodologa para analizarla
experimentalmente.
I. PLANTAS ANTIMICROBIANAS
Aproximadamente, el 60% de la poblacin mundial utiliza plantas y productos derivados de
ellas en su medicacin. Estos productos naturales hoy en da son considerados como una de
las medicinas de gran importancia por su efectividad teraputica. De las 520 nuevas drogas
aprobadas entre 1983 y 1984, el 39% fueron productos naturales o derivados de productos
naturales, y el 60 a 80% de drogas antibacterianas y de anticancergenos son derivados de
productos naturales.
Por ejemplo, del desarrollo de drogas no proteicas se han obtenido derivados generados de
productos naturales como la sinvastatina, lovastatina, enalapril, ciprofloxacina y ciclosporina,
entre otros, y agentes anticancergenos como el taxol y docetaxol (Harvey, 2000).
Sin embargo, la actividad teraputica no slo se puede conseguir luego de procesos de
extraccin y purificacin de principios activos, sino directamente de la planta misma o de
algunos extractos relativamente simples de obtener. Por ejemplo, el jugo de arndano tiene
una accin de prevencin de las recurrencias sintomticas de infeccin al tracto urinario; el

consumo diario de 300 ml reduce la bacteriuria en mujeres post-menopusicas pero no en

nias con vejiga neurognica (Kontiokari y col., 2001).
En un estudio de accin inhibitoria de crecimiento antimicrobiano, se mostr que la asociacin
de extractos acuosos de 2 plantas, Erythroxilum novogranatense variedad truxillense Hoja de
Coca de Trujillo y Plantago major, presentaron sinergismo, comparado con el estudio
realizado por separado de cada uno de los extractos; se realizaron las determinaciones
fitoqumicas en muestras de ambas especies y los extractos acuosos fueron esterilizados
separadamente mediante filtros Milipore para realizar las determinaciones de accin inhibitoria
de crecimiento frente a bacterias y hongos, encontrndose una proporcin de asociacin para
los dos extractos acuosos empleados de 50:50, considerndose como ptimo para este
estudio (Bazalar y col., 1998).
Ocinum micranthum W., planta conocida como sanialbahaca, es utilizada para tratar
infecciones respiratorias en regiones amaznicas de Amrica del Sur, Mxico y el Caribe. Se
determin la composicin qumica del aceite esencial de las hojas de dicha planta, y tambin
se la enfrent a bacterias como Klebsiella pneumoniae, S. aureus, E. coli, Bacillus cereus,
Shigella sp., y hongos del gnero Aspergillus, confirmndose que dicho aceite puede ser
considerado como un buen agente antibacteriano y antifngico (Fuertes y col., 1997).
Los cidos ceantico y ceanotrico, provenientes de la planta Ceanothus americanus, han
demostrado efectos inhibidores del crecimiento de Streptococcus mutans, Actinomyces
viscosus, y Porphyromonas gingivalis; y los extractos etanlicos del propleo han mostrado
buena actividad antimicrobiana contra estos mismos microorganismos orales (Katsura y col.,
2001).
Los extractos crudos de Psoralea corylifolia, un rbol nativo de China, poseen actividades
reportadas antimutagnicas, antimicrobianas y de hormona juvenil de insectos; adems, un
extracto aceitoso en hexano obtenido a partir de sus semillas present actividad
antimicrobiana contra Staphylococcus aureus. Se ha considerado que el responsable de estas
actividades es el bakuchiol, un isoprenoide fenlico aislado de las semillas y hojas de esta
planta (Katsura y col., 2001).
Es comn el empleo de partes vegetales con la finalidad de obtener varios efectos
teraputicos y que han sido respaldados por estudios cientficos. Entre las variadas
aplicaciones teraputicas de los vegetales se incluye la accin antibacteriana. Los hallazgos

obtenidos del estudio de vegetales con potencial teraputico podrn servir como instrumento
de apoyo mdico-social para un mayor grupo poblacional, principalmente el ms carente,
estando tambin la industria farmacutica ms interesada en los conocimientos de esta rea
(De Paula y Martnez, 2000).
Nuevas fuentes de productos antimicrobianos, especialmente fuentes vegetales, estn siendo
investigadas. El pblico hoy en da tiene ms problemas con la sobreprescripcin y el mal uso
de antibiticos tradicionales. Adems, mucha gente est interesada en tener ms autonoma
sobre su cuidado mdico. Una multitud de componentes vegetales se encuentra fcilmente
disponible a travs de los comercializadores de plantas y productos naturales, tiendas
naturistas, con lo que la automedicacin con estas sustancias se hace cada vez ms comn.
El uso de extractos de plantas, como tambin de otras formas alternativas de tratamientos
mdicos, tom gran popularidad a finales de la dcada de 1990. En 1996 se report que las
ventas de medicinas botnicas se incrementaron en un 37% con respecto a 1995 (Cowan,
1999).
II. GRUPOS PRINCIPALES DE COMPONENTES ANTIMICROBIANOS DE LAS PLANTAS

Las plantas tienen una casi ilimitada habilidad de sintetizar sustancias aromticas, gran
cantidad de ellas son fenoles o sus derivados de oxgenos sustituidos. Muchos son
metabolitos secundarios de los cuales por lo menos 12000 han sido aislados, un nmero
estimado menor en un 10% del total.
En numerosos casos estas sustancias sirven como mecanismos de defensa de las plantas
contra la predacin por microorganismos, insectos y herbvoros. Algunos, tales como los
terpenoides, dan a las plantas sus olores; otros (quinonas y taninos) son responsables del
pigmento de las plantas. Muchos componentes son asimismo responsables del sabor de las
plantas (el terpenoide capsaicina en caso del aj), y algunas de las hierbas y especies usados
por los humanos para sazonar los alimentos producen compuestos medicinales tiles.
Los compuestos fitoqumicos antimicrobianos tiles pueden ser agrupados en varias
categoras, como las siguientes:

a. Fenoles y Polifenoles: El cido cafeico (Fig. 1) y el cinmico son representantes de estos

grupos, ambos con accin antimicrobiana, antiviral y antifngica. Tambin se pueden
mencionar a los fenoles simples y cidos fenlicos, catecoles y eugenoles (estos ltimos
considerados bacteriostticos).
La actividad antimicrobiana del catecol y del pirogallol est directamente relacionada con el
nmero de grupos hidroxilos que tiene el derivado fenlico. Tambin estn las quinonas (como
las antraquinonas con accin bactericida para Pseudomonas), flavones, flavonoides,
flavonoles y catequinas. Parte de los flavonoides inhiben in vitro el crecimiento de V. cholerae,
Streptococcus y otras bacterias. Los flavonoides tambin exhiben actividad antiviral; los
taninos presentan actividad astringente. Se considera que la accin de los fenoles y
polifenoles contra los microorganismos se debe a la inhibicin enzimtica posiblemente por
accin sobre los grupos sulfihidrilos de sus aminocidos de cistena o por medio de
reacciones ms inespecficas con protenas bacterianas.
Los compuestos fenlicos que poseen una cadena lateral a nivel de C3 en un bajo nivel de
oxidacin y que no contienen oxgeno, son clasificados como aceites esenciales y a veces se
citan como agentes antimicrobianos bacteriostticos contra hongos y bacterias (Cowan, 1999).
Katsura y col. (2001) purificaron bakuchiol a partir de semillas de Psoralea corylifolia y en
solucin con DMSO al 5%. El anlisis de la actividad antimicrobiana se realiz leyendo
absorbancias a 610 nm (turbidez) de cultivos microbianos incubados por 24 hrs. Para
determinar un posible crecimiento posterior al enfrentamiento con bakuchiol (conteo de clulas
viables), se tomaron alcuotas de estas muestras diluidas en presencia de Tween 80 (para
inactivar el bakuchiol) y se sembraron en placa, incubndose por 48 horas para leer Unidades
Formadoras de Colonias (UFC).
Hubo una inhibicin de crecimiento de S. mutans directamente proporcional a la concentracin
de bakuchiol, encontrndose una actividad bacteriosttica in vitro a una concentracin de 5
g/ml y una actividad bactericida in vitro a 20 g/ml. El efecto bactericida del bakuchiol fue
dependiente del tiempo y la produccin de glucanos insolubles en agua (principal factor de
virulencia para S. mutans) fue prcticamente inhibida.
Tambin se analiz la actividad antimicrobiana del bakuchiol contra diferentes especies de
bacterias, incluyendo Streptococcus mutans, S. sobrinus, Porphyromonas gingivalis,
Enterococcus faecalis, E. faecium, Lactobacillus acidophilus, L. plantarum, L. casei, S.

sanguis, S. salivarius, Actinomyces viscosus, generando diversos valores del MIC que van
desde 1.0 hasta 4.0 g/ml y una concentracin esterilizante entre los 5.0 hasta los 20.0 g/ml.
b. Quinonas: Son anillos aromticos con dos sustituciones cetnicas. Se encuentran en
amplia distribucin en la naturaleza y son altamente reactivos en reacciones de xidoreduccin. Producen radicales libres y generan complejos irreversibles con aminocidos
nucleoflicos de las protenas, generando su inactivacin.
El rango de la actividad antimicrobiana de las quinonas es amplio, actuando posiblemente
sobre las adhesinas expuestas en la superficie de las bacterias, sobre los polipptidos de la
pared celular y sobre las enzimas unidas a membranas (Cowan, 1999). Por ejemplo, una
antraquinona proveniente de Cassia italica, un rbol de Paquistn, tiene accin bacteriosttica
sobre Bacillus anthracis, Corynebacterium pseudodiphthericum y Pseudomonas aeruginosa, y
tiene accin bactericida sobre Pseudomonas pseudomalliae. La Hipericina (Fig. 2) es una
antraquinona extrada de Hypericum perforatum que ha sido descrita como un antidepresivo,
pero tiene tambin actividades antimicrobianas.
Plantas de la familia Borragincea se han caracterizado por producir naftoquinonas en sus
races, las cuales han sido utilizadas en numerosas culturas indgenas como colorantes en
cosmticos y alimentos, y para aplicaciones medicinales por su actividad antitumoral,
antiinflamatoria y antimicrobiana (Brigham y col., 1999).
c. Flavonas, flavonoides y flavonoles: Son estructuras fenlicas que contienen un solo
grupo carbonilo. Estos compuestos son sintetizados por las plantas en respuesta a la infeccin
antimicrobiana, y su actividad sobre las bacterias probablemente se deba a su capacidad de
generar complejos con protenas extracelulares y protenas solubles, as como una actividad
sobre la pared celular muy similar a la de las quinonas. Los flavonoides lipoflicos pueden
perturbar la integridad estructural de la membrana celular (Fuertes y col., 1997).
Las catequinas derivados de los flavonoides, han sido estudiadas como los compuestos que
generan la actividad antimicrobiana in vitro en el t verde, sobre Vibrio cholerae O1,
Streptococcus mutans y Shigella, principalmente. Las catequinas tienen una actividad
inactivadora sobre la toxina de Vibrio cholerae e inhibe las glicosil transferasas en S. mutans.
Ratas de laboratorio que recibieron en su dieta 0.1 % de catequinas del t, redujeron en un
40% la presencia de caries inducida (Cowan, 1999).

d. Taninos: Conforman un grupo de sustancias fenlicas polimricas capaces de precipitar

gelatina en solucin, una propiedad conocida como astringente. Estn divididas en dos
grupos: hidrolizables y condensados. Los taninos hidrolizables estn basados en el cido
glico, usualmente como steres mltiples con la D-glucosa, mientras que los taninos
condensados ms importantes (a veces llamadas proantocianidinas) son derivados de
monmeros flavonoides.
Se ha considerado que los taninos, en muchas bebidas como el t verde y el vino, tienen
actividades reforzadoras de la salud (estimulacin de la actividad fagocitaria, actividad
antitumoral mediada por el hospedero y un amplio rango de actividad antiinfecciosa). En las
plantas, los taninos tienen una accin inhibitoria del crecimiento de insectos y perturban la
digestin de rumiantes. Se cree que la actividad antimicrobiana de estos compuestos se debe
a su interaccin sobre las adhesinas, protenas de la pared celular, y a su capacidad de unirse
a polisacridos (Cowan, 1999).
Las plantas de las especies de Vaccinium contienen taninos condensados llamados
proantocianidinas. Estas sustancias son compuestos fenlicos estables que pueden prevenir
la expresin de las fimbrias P de E. coli dentro de sus actividades antibacterianas, y adems
tienen actividades antivirales, antiadherentes o antioxidantes (Kontiokari y col., 2001).
e. Cumarinas: Son compuestos de los cuales se conoce muy bien su accin antitrombtica,
antiinflamatoria y vasodilatadora. Un gran ejemplo de estos compuestos es la warfarina (Fig.
4), usada como un anticoagulante oral y como un rodenticida. Se ha visto que tiene accin
antiviral, asimismo, otras cumarinas tienen actividad antimicrobiana sobre Candida albicans en
trabajos in vivo en conejos.
Estos trabajos fueron realizados en vista de las crnicas que, en 1954, indicaban el uso de
cumarinas en lavados vaginales para el tratamiento de candidiasis en mujeres gestantes. Sin
embargo, su uso interno es discutido por sus efectos contraceptivos en animales (Cowan,
1999).
f. Terpenoides y aceites esenciales: Los terpenos o terpenoides son activos contra
bacterias, virus, hongos y protozoarios. Se ha reportado que los terpenoides actan contra
Listeria monocytogenes. Se cree que esta actividad antimicrobiana se debe a una
perturbacin de la estructura de la membrana celular por su naturaleza lipoflica. La capsaicina
(Fig. 5) tiene actividad bactericida sobre Helicobacter pylori; aunque tiene un poder muy

irritante sobre la mucosa gstrica, se ha demostrado que afecta el sistema nervioso, el

cardiovascular y el digestivo. Se ha sugerido que la capsaicina tambin podra incrementar el
crecimiento de Candida albicans.
El cido betulnico es un triterpenoide que muestra actividad inhibitoria del virus VIH. El
petalostemumol presenta una actividad excelente contra Bacillus subtilis y Staphylococcus
aureus, aunque tiene una menor actividad sobre bacterias Gram negativas y Candida
albicans. Por otro lado, los terpenos previenen la formacin de lceras gstricas y disminuyen
la severidad de las lceras existentes, aunque no se sabe a ciencia cierta si esta actividad se
debe o no a su accin antimicrobiana (Cowan, 1999).
g. Alcaloides: Los Glicoalcaloides de especies de Solanum podran ser tiles contra la
infeccin por VIH y tambin contra las infecciones intestinales relacionadas con el SIDA. Otros
alcaloides tienen efecto contra parsitos como Giardia y Entamoeba. La berberina (Fig. 6) es
un alcaloide representativo por su actividad potencialmente efectiva contra Tripanosoma y
Plasmodium. Se ha descrito que tiene actividad microbicida (por ejemplo, sobre Giardia y
Entamoeba), pero se cree que su accin antidiarreica probablemente se deba a sus efectos
sobre el tiempo de trnsito del bolo alimenticio en el intestino delgado (Cowan, 1999).
h. Lectinas y Polipptidos: La actividad antimicrobiana de los pptidos fue descrita por
primera vez en 1942. Tienen a veces grupos con carga positiva y contienen enlaces disulfuro
entre residuos de cistena. Su mecanismo de accin principalmente se explica como la
formacin de canales inicos en la membrana del microorganismo o la inhibicin competitiva
de la adhesin de protenas a los receptores polisacridos del hospedero. Un reciente inters
se ha enfocado en estudiar la actividad antiVIH de pptidos y lectinas. Las tioninas son
pptidos txicos para levaduras y bacterias Gram positivas y Gram negativas, como por
ejemplo las Fabatinas que inhiben el crecimiento de Pseudomonas, E. coli, Enterococcus, etc.
Los pptidos cclicos son pequeos en tamao y nmero de aminocidos (por lo general
menos de 15 aminocidos) y son sintetizados por bacterias y plantas. Tambin se han
encontrado pptidos grandes cclicos unidos por los extremos de 29 a 31 aminocidos en
plantas de la familia Rubiaceae (caf).
Estos pptidos contienen seis residuos de cistena que pueden ser alineados y comparten un
45% de homologa de secuencia (Fig. 7). Entre ellos se tiene a la circulina A y B del rbol

tropical africano Chassalia parviflora, la ciclopsicotride de la planta tropical de Sudamrica

Psychotria longipes, y la kalata de la planta africana Oldenlandia affinis (Tam y col., 1999).
Estos pptidos macrocclicos tienen tambin en comn un tipo inhibidor de motivo estructural
nudo de cistena, el cual contiene un patrn de enlaces disulfuro entre los residuos de cistena
I-IV, II-V, y III-VI. Estos motivos estructurales, junto con una estructura de hoja beta con tres
cadenas, tambin han sido hallados en toxinas peptdicas e inhibidores de proteasas de
diversos orgenes.
Las circulinas A y B fueron descubiertas durante un programa de pruebas de actividad antiVIH de diversos compuestos, al igual que la kalata y la ciclopsicotride en pruebas de nuevas
sustancias antibiticas. Aunque la kalata present accin uterotnica y la ciclopsicotride
present inhibicin de la unin de la neurotensina a su receptor, no se sabe mucho de la
funcin que cumplen estos pptidos en las plantas. La kalata mostr una fuerte actividad
antimicrobiana contra bacterias Gram positivas, particularmente S. aureus (MIC 0.26 M),
mientras que su actividad fue moderada contra Gram negativas del gnero Klebsiella y
hongos del gnero Candida. La circulina A tuvo una actividad similar a la kalata, pero mostr
una accin ms potente contra S. aureus (MIC 0.19 M), aunque no tuvo actividad contra
Micrococcus luteus.
Estos pptidos macrocclicos son diferentes a las defensinas vegetales de cadena abierta, que
son de mayor tamao. Los macrocclicos son ms pequeos, compactos y rgidos en cuanto a
estructura (Friedrich y col., 1999).

III. OTRAS ACTIVIDADES ANTIMICROBIANAS

Recientemente, investigaciones qumicas llevadas a cabo sobre algas marinas (rodofitas o
algas rojas, feofitas o algas pardas, clorofitas o algas verdes, cianofitas o cianobacterias, y
dinoflagelados) han demostrado que estos organismos producen una amplia variedad de
metabolitos secundarios biolgicamente activos, con estructuras moleculares nicas, no
encontradas en otros organismos, los cuales han mostrado ser capaces de inhibir el
crecimiento de ciertas bacterias, virus y hongos.

En cuanto a la actividad antibitica de las microalgas, se pueden nombrar algunos de estos

compuestos que ya han sido identificados: cido acrlico obtenido en la microalga
Phaeocystis, cido .-linolnico en los extractos metanlicos de Spirulina platensis,
Chlorococcum, Dunaliella primolecta, amfidinol 2, hidroxilpolieno en el extracto del
dinoflagelado Amphidinium klebsii. Las microalgas, y ms especficamente las cianobacterias
(algas azul-verdosas), constituyen una importante fuente de compuestos antivirales.
Un estudio reciente de 600 especies de cianofitas mostraron que cerca del 10% de los
extractos probados tuvieron actividad contra el virus Herpes simplex tipo 2 (VHS-2) y contra el
virus de inmunodeficiencia tipo 1 (VIH-1). Entre los compuestos responsables de esta
actividad se puede nombrar a una molcula similar a la clorofila (feofrbido) aislada de
Dunaliella primolecta, a un sulfolpido obtenido de Lyngbya lagerheimii y a una protena de
bajo peso molecular (cianovirn) aislada de Nostoc ellipsosporum.
Un grupo de cientficos japoneses aisl de Spirulina platensis un polisacrido sulfatado, el
calcio-spiruln, que present actividad contra el VHS-1 y el VIH-1. La actividad antiviral de
esta molcula fue comparada con un sulfatodextrano mostrando una actividad superior. El
calcio-spiruln inhibe la replicacin del virus, creando una perturbacin en las interacciones
inicas entre las membranas glicoprotecas del virus y los fosfolpidos presentes en las
membranas de la clula del husped, inhibiendo as la fusin celular de ambos. Asimismo, el
calcio-spiruln mostr un tiempo de vida media en la sangre de ratn significativamente ms
largo (150 minutos) que el sulfatodextrano (30 minutos). Los resultados de este estudio son
prometedores. El calcio-spiruln presenta todas las caractersticas necesarias de un buen
antiviral: no estimula la replicacin del virus, tiene actividad a bajas concentraciones, posee
elevado tiempo de vida media en la sangre y tiene poca actividad anticoagulante. Aunado a
esto, la tecnologa del cultivo del gnero Spirulina est totalmente desarrollada, por lo que el
abastecimiento de materia prima no presenta problema.
Queda, sin embargo, la puesta a punto de los procedimientos de extraccin a nivel industrial
de este principio activo. Un ejemplo de esto ltimo lo tenemos en los trabajos realizados
desde 1996 por un grupo de investigadores italo-franceses sobre la variacin estacional de la
actividad de los extractos de Schizymenia dubyi contra el virus VIH-1. Esta macroalga es una
alga roja colectada en las costas de Sicilia cuya particularidad es la de poseer un elevado
contenido de cido gulurnico, un tipo de cido no propio de las algas rojas. Esta alga
contiene efectivamente un polisacrido denominado glucorono-galacto-sulfato, responsable de
la actividad antiviral. Esta actividad disminuye en ciertas pocas del ao (otoo-invierno) y

llega al mximo de abril a julio, con la correspondiente disminucin en el contenido de

galactosa y sulfatos en el polisacrido (Freile, 2001).

IV. APROXIMACIONES EXPERIMENTALES

Existen sustancias generalmente de origen natural cuya efectividad biolgica no puede ser
determinada por sus propiedades qumicas o fisicoqumicas. En ese caso, para evaluar su
actividad, se emplean mtodos de dosificacin biolgica. En estos se compara
cuantitativamente el efecto de una muestra sobre un sistema biolgico con el efecto producido
por una preparacin estndar en las mismas condiciones. Se obtiene as un valor de potencia
relativo a un estndar de referencia.
Los dos mtodos ms comnmente usados para evaluacin de actividad antimicrobiana son:
a) Mtodo turbidimtrico o ensayo en tubo:
Se basa en la incubacin de un medio de cultivo lquido inoculado con un microorganismo
sensible al antibitico en presencia de una concentracin conocida del agente antimicrobiano.
Luego de un tiempo adecuado se detiene el crecimiento y se evala el mismo por medidas
turbidimtricas. El uso de un espectrofotmetro o un fotocolormetro para medir los cambios
de densidad ptica en base a la mayor o menor turbidez producida por el crecimiento
microbiano, evita la posible subjetividad de lecturas en una escala nefelomtrica de
McFarland. La base cuantitativa del ensayo es la relacin entre la concentracin del antibitico
y la densidad ptica del medio de cultivo en donde hubo crecimiento microbiano.
En los estudios de actividad antibacteriana de propleo, para hallar la Concentracin Mnima
Bactericida (CMB), Ota y col. (1998) trabajaron a partir del liofilizado de dicha sustancia, el
cual se suspendi en una solucin hidroalcohlica con una concentracin final de 50 mg/ml;
de esta suspensin se dispensaron, en diferentes tubos, volmenes de 0.1, 0.2, 0.3 hasta 1.0
ml y se complet a 5 ml con el medio de cultivo, obteniendo as concentraciones de propleo
desde 1 mg/ml hasta 10 mg/ml; luego se procedi a agregar a cada tubo 0.1 ml de inculo
bacteriano y se incub a 37C por 24 horas. Como la adicin del propleo ocasiona una
turbiedad en el medio de cultivo, no fue posible observar el crecimiento bacteriano, por lo que
de cada tubo se extrajo 0.1 ml y se sembr en tubos con caldo de cultivo puro que se

incubaron a 37 C por 24 horas para observar si hubo crecimiento microbiano. Se concluy

que el propleo presenta actividad antibacteriana in vitro siguiendo este orden de sensibilidad:
Streptococcus mutans > Lactobacillus sp. > Sthaphylococcus aureus > Sthaphylococcus
epidermidis.
En un trabajo de pptidos antimicrobianos, el MIC de cada pptido fue determinado por el uso
de un ensayo de dilucin en caldo del mtodo de Amsterdam modificado. Diluciones seriadas
de cada pptido fueron preparadas con cido actico 0.01% en microplacas de 96 pocillos.
Cada pocillo fue inoculado con 0.1 ml del organismo de prueba en Caldo MH a una
concentracin final de 2 x 104 a 105 UFC/mL (Friedrich y col., 1999). Este procedimiento
permite cuantificar el MIC o concentracin mnima inhibitoria como la primera dilucin del
extracto en la cual el crecimiento se inhibe despus de un perodo de incubacin
(generalmente 18 horas a 37 C), y a la concentracin mnima bactericida como la primera
dilucin en la cual ya no se detecta presencia de bacterias (Araujo y col., 2004).
b) Mtodo de difusin en placa:
Se basa en la difusin radial de una solucin de extracto o de antibitico desde un reservorio a
travs de una capa de agar que ha sido inoculada con un microorganismo sensible al
antibitico. Se confrontan diferentes medidas de la sustancia a ensayar en placas con medios
de cultivo slido inoculado con microorganismos adecuados. Las placas se incuban para
permitir el desarrollo del microorganismo. Durante la incubacin, el antibitico difunde desde
su reservorio (que puede ser un disco de papel filtro, un pozo excavado en el mismo medio de
cultivo con inculo bacteriano, o pequeos cilindros colocados en la superficie del medio)
mientras la poblacin microbiana aumenta por divisin celular. La respuesta obtenida es una
zona clara o halo de inhibicin del crecimiento bacteriano en torno a los reservorios El lmite
de la zona de inhibicin se forma cuando se alcanza la concentracin crtica del antibitico, es
decir, la mnima concentracin que inhibe el crecimiento de la poblacin microbiana presente.
Los halos de inhibicin se miden con la mayor precisin posible: se utiliza regla, vernier un
sistema de ampliacin de imagen y proyeccin sobre una pantalla. La base cuantitativa del
ensayo es la relacin entre el dimetro de la zona de inhibicin y la concentracin del
antibitico. La determinacin de sensibilidad por difusin en agar es habitualmente suficiente;
sin embargo, en ciertas situaciones se recomienda la determinacin del MIC por mtodos
turbidimtricos (Harvey, 2000).

El gradiente de concentracin es inversamente proporcional a la distancia de la fuente y

depende del volumen de la sustancia en ella, y el crecimiento de microorganismos depende
de la poblacin inicial y de la velocidad de crecimiento.
Estudios con Rubus urticaefolius mora, utilizada en Centro y Sur Amrica para el tratamiento
de afecciones de la cavidad oral, demostraron una gran accin antibacteriana al efectuar
extractos hidroalcohlicos, en especial del fruto. El mtodo empleado para la determinacin de
la actividad fue el de Difusin en Agar con orificios. La extraccin consisti en macerar
separadamente hojas, tallo y frutos en solucin hidroalcohlica al 70% durante 5 das a
temperatura ambiente, y luego se elimin el alcohol por evaporacin (De Paula y Martnez,
2000).
Para un estudio de actividad antibacteriana y antifngica de flavonoides y alcaloides de
Lupinus ballianus c.p. smith jera, se obtuvieron extractos etanlicos de las hojas desecadas,
de las cuales se extrajeron los principios activos mediante cromatografa. La determinacin de
la actividad antimicrobiana de flavonoides y alcaloides se realiz mediante el mtodo de
excavacin en placa-cultivo utilizando el medio TSA y los microorganismos S. aureus, Bacillus
cereus, Micrococcus luteus y Klebsiella pneumonae, adems del hongo Aspergillus nger
(Fuertes y col., 1997).
Mbwambo y col. (2007) trabajaron con extractos de raz y tronco de Terminalia brownii. La
prueba se realiz con el mtodo de difusin en disco, usando extractos con solventes de
diferente polaridad, yendo desde el ter de petrleo hasta agua. El resultado fue una nula
actividad antimicrobiana en los extractos obtenidos con los solventes menos polares (ter de
petrleo), y una actividad antimicrobiana incrementada en intensidad y nmero de especies
bacterianas susceptibles conforme aumenta la polaridad del solvente. Lo ms notorio de este
trabajo es que el extracto acuoso mostr la mayor actividad antimicrobiana de todos los
dems extractos, pero una menor accin toxignica en bioensayos usando camarones de mar
(los extractos acuosos son los ms frecuentemente usados por los curanderos y naturistas).
Se usaron discos de papel filtro (Whatman N1) de 5 mm de dimetro, impregnado con
extractos crudos (5 g/disco) o antibiticos estndar (10 mg/ml de gentamicina) o
antimicticos (20 g/disco de clotrimazol), usando TSA o Sabouraud glucosado segn el caso.
La incubacin se realiz a 37C por 24 horas. Se hace cada prueba por triplicado tanto para
los extractos y los estndares, se toman promedio. Los reportes se realizan usando las
medias de las zonas de inhibicin (dimetros de inhibicin menos dimetro del disco de papel,

o sea 5 mm). El ndice de actividad (IA) se calcula como la media de la zona de inhibicin del
extracto entre la media de la zona de inhibicin producida por la droga estndar.
Estudios en aceites esenciales han demostrado actividad antibacteriana. En la UNMSM se
extrajeron los aceites esenciales de tres plantas: Tagetes pusilla, Senecio tephrosiodes y
Lepechinia meyenii, utilizando bacterias Grampositivas como S. aureus y Gramnegativas
como Salmonella typhi, S. typhimurium, V. cholerae. Los aceites fueron extrados por arrastre
de vapor, y la actividad antimicrobiana fue llevada a cabo mediante el mtodo modificado del
cromatograma, realizndose las lecturas por medio de los halos de inhibicin de los discos
impregnados con el aceite. Los resultados mostraron accin antibacteriana frente a las
bacterias evaluadas (Morales, 1996).
La alicina (allyl 2-propeno tiosulfinato) se produce durante la molienda de los dientes de ajo.
Su formacin depende de la enzima aliinasa presente en las clulas de la cscara sobre la
aliina de las clulas del mesfilo. La destilacin al vapor de machacados de ajo durante la
produccin del aceite grlico, usado con fines teraputicos, producen metil y alil
sulfoderivados de la alicina. Se ha considerado que la alicina es la responsable de la actividad
antimicrobiana de los homogenizados de dientes de ajo (y del aceite grlico) sobre
Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Helicobacter pylori. Se us la tcnica de difusin
radial en placa usando agar TSA, con una incubacin de 48 horas a 37 C. Las placas,
previamente al uso de los extractos, fueron preparadas conteniendo el cultivo bacteriano y
fueron dejadas en reposo dentro de un extractor de aire seco a fin de evitar la prdida de
actividad del ajo por volatilizacin. Adems, este trabajo ha demostrado que al enfrentar el
aceite grlico con el cultivo bacteriano se debe tener en cuenta la naturaleza hidrofbica del
aceite, por lo que estudios anteriores no mostraron actividad antibacteriana (Ross y col.,
2001).
En Cuba se estudi la actividad antimicrobiana de diferentes concentraciones de un extracto
fluido (etanol 80%) de hojas de copal Schinus terebinthifolius. Se utilizaron cepas ATCC de
microorganismos que incluyen a Staphylococcus aureus como Gram-positivas y Escherichia
coli y Pseudomonas aeruginosa como Gram-negativas, y la levadura Candida albicans. El
mtodo utilizado fue el de excavacin en placa y difusin en agar para adicionar los extractos.
El inculo de microorganismos precultivados en medio lquido permiti un crecimiento en
csped en el agar con una concentracin de 108 cel/mL. Las placas se incubaron a 37C
durante 24 horas, y luego se evaluaron los resultados mediante la lectura en milmetros del

dimetro del halo de inhibicin de crecimiento. Los resultados obtenidos mostraron que aun a
la menor concentracin (1%) se aprecia inhibicin del crecimiento de todo microorganismo y la
respuesta es incrementada gradualmente con la concentracin hasta el 80% (Martnez y col.,
2000).
Los resultados de un trabajo sobre actividad antibacteriana de propleos argentinos
demostraron la influencia de la vegetacin en la composicin qumica y, como consecuencia
de ello, en la actividad biolgica; es decir, la composicin de los propleos vara de acuerdo a
su origen botnico y fitogeogrfico. El objetivo de este estudio fue determinar la validez del
uso popular de propleos como agentes antibiticos. Para dicho ensayo, se obtuvo un
extracto etanlico de propleos en el cual se embebieron discos de papel Whatman N 4 (5
ml) y luego se colocaron en placas con agar MH conteniendo la suspensin bacteriana
apropiada. Los discos contenan cantidades variables del extracto de propleo; las placas se
incubaron a 37C por 24 horas, y se probaron cepas de bacterias como S. aureus,
Streptococcus pyogenes, Enterococcus faecalis, K. pneumoniae, P. aeruginosa, E. coli, entre
otras. Los resultados se interpretaron por los halos de inhibicin de crecimiento bacteriano, y
el MIC se determin con un software basado en la ecuacin de Michaelis-Menten. Se observ
que todos los propleos mostraron actividad antimicrobiana sobre las bacterias Grampositivas y no sobre las Gram-negativas (Ota y col., 1998).
Para obtener un ensayo de accin bactericida, Friedrich y col. (1999) tomaron por toda la
noche un cultivo de E. coli y lo diluyeron hasta 10-2 en caldo MH fresco, dejndolo crecer
hasta la fase logartmica (D.O600 0.6) o estacionaria (D.O600 de 2) para luego diluirlo en
medio fresco, produciendo una concentracin de trabajo de 108 cel/mL. Los pptidos o
antibiticos a ensayar fueron adicionados a 4 veces sus MICs, y estas suspensiones fueron
incubadas a 37C despus de la adicin del pptido. Las muestras fueron removidas a
intervalos regulares, diluidas y plaqueadas sobre placas de agar MH para obtener un conteo
viable.
La investigacin de tioglicsidos en plantas del gnero Tropaeolum demostr que dichos
metabolitos poseen actividad antimicrobiana y antifngica. Para determinar la actividad
antimicrobiana, se aplic la tcnica de dilucin en placas de Agar, con diferentes
concentraciones del extracto etanlico puro obtenido de hojas, flores y frutos de Tropaeolum
majus (los extractos contienen el tioglicsido y sus productos de hidrlisis determinados
mediante cromatografa y la formacin de derivados). Las pruebas antibacterianas se
efectuaron con cepas de S. aureus, E. coli, Bacillus subtilis, Klebsiella pneumonae y Proteus

vulgaris. Para comprobar la actividad antifngica, se hicieron pruebas cualitativas utilizando la

tcnica de difusin en placas de agar, y en tubos para determinar la concentracin mnima
inhibitoria.
Se utilizaron cepas de hongos dermatofitos y Candida albicans. Se concluy que los extractos
etanlicos y acuosos de hojas, flores y frutos tienen un metabolito secundario (mayor en
frutos) que se agrupa dentro de los glicsidos. Las hojas, flores y frutos presentaron actividad
antimicrobiana y antifngica (Cumpa y col., 1991).

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1. ARAUJO, J.; CRDOVA, B.; RODRGUEZ, M.; SALAS, R. 2004. Cuantificacin de la
actividad antimicrobiana de Caesalpinia spinosa contra Staphylococcus aureus. Resmenes
del III Congreso Peruano de Plantas Medicinales y Fitoterapia.
2. BAZALAR, D.; CHOQUESILLO, F.; MILLA, H.; HERRERA, O.; FELIX, M. 1998. Accin
inhibitoria de crecimiento de la asociacin de los extractos acuosos de Erythroxilum
novogranatense var. Truxyllense y Plantago major frente a bacterias y hongos. Ciencia e
Investigacin. 1 (2). 24 30.
3. BRIGHAM, L.A.; MICHAELS, P.J.; FLORES, H.E. 1999. Cell-specific production and
antimicrobial activity of naphthoquinones in roots of Lithospermum erythrorhizon. Plant
Physiology. 119: 417 428.
4. COWAN, M. 1999. Plant Products as antimicrobial agents. Clinical Microbiological Reviews.
12(4): 564 582.
5. CUMPA, N; GUERRA, M; VEJAR, V; FUENTES, C. 1991. Avances en la investigacin de
tioglicsidos en plantas del gnero Tropaeolum, actividad antibacteriana y antifngica. Boletn
de la Sociedad Qumica del Per.
6. DE PAULA, J.; MARTNEZ, A. 2000. Accin antibacteriana de extractos hidroalcohlicos de
Rubus urticaefolius. Rev. Cubana Plant. Med. 5(1): 26-9.

7. FREILE, Y. 2001. Algas en la botica. Avance y Perspectiva. 20: 283 292.

8. FRIEDRICH, C.; SCOTT, M.; KARUNARATNE, N.; YAN, H.; HANCOCK, R. 1999. Saltresistant alpha-helical cationic antimicrobial peptides. Antimicrobial agents and chemotherapy.
42 (8): 1542-1548.
9.FUERTES, C.; ROQUE, M.; TRISTAN, M. 1997. Flavonoides y alcaloides de Lupinus
ballianus con actividad antibacteriana y antifngica. Instituto de Microbiologa UNMSM.
10. HARVEY, A. 2000. Strategies for Discovering Drugs from Previously Unexplored Natural
Products. Drug Discovery. 5(7). Review.
11. KATSURA, H.; TSUKIYAMA, R.; SUZUKI, A.; KOBAYASHI, M. 2001. In vitro antimicrobial
activities of bakuchiol against oral microorganisms. Antimicrobial agents and chemotherapy. 45
(11): 30093013.
12. KONTIOKARI, T.; SUNDQVIST, K.A.J.; NUUTINEN, M.; POKKA, T.; KOSKELA, M.;
UHARI, M. 2001. Randomised trial of cranberrylingonberry juice and Lactobacillus GG drink for
the prevention of urinary tract infections in women. British Medical Journal. 322 (30): 1 5.
13. MARTINEZ, M; LOPEZ, M; MOREJON, Z y RUBALCABA, Y. 2000. Actividad
antimicrobiana de un extracto fludo al 80% de Schinus terebinthifolius raddi copal. Rev.
Cubana Plant. Med. 5(1): 23-25.
14. MBWAMBO, Z.H.; MOSHI, M.J.; MASIMBA, P.J.; KAPINGU, M.C.; NONDO, R.S. 2007.
Antimicrobial activity and brine shrimp toxicity of extracts of Terminalia brownii roots and stem.
BMC Complementary and Alternative Medicine. 2007, 7:9.
15. MORALES, L. 1996. Estudio in vitro de la actividad antimicrobiana de aceites esenciales
de tres plantas del Per. Tesis para optar el grado de bilogo. UNMSM.
16. OTA, C.; MUZETTI, P.; SCHIMIDIT, C.; TSUNEZI, M. 1998. Actividade da prpolis sobre
bacterias isoladas da cavidade bucal. LECTA, Braganca Paulista. 16 (1). 73-77.
17. ROSS, Z.M.; OGARA, E.A.; HILL, D.J.; SLEIGHTHOLME, H.V.; MASLIN, D.J. 2001.
Antimicrobial properties of garlic oil against human enteric bacteria: evaluation of

methodologies and comparisons with garlic oil sulfides and garlic powder. Applied and
environmental microbiology. 67 (1): 475480.
18. TAM, J.P.; LU, Y.A.; YANG, J.L.; CHIU, K.W. 1999. An unusual structural motif of
antimicrobial peptides containing end-to-end macrocycle and cystine-knot disulfides. Proc.
Natl. Acad. Sci. USA. 96: 89138918.