COOMBS INDIRETO

PRINCPIO DO TESTE

A prova de Coombs indireto atualmente chamada de pesquisa de

anticorpos irregulares (PAI). Esta prova avalia a presena de
anticorpos irregulares circulantes no soro de doadores de sangue,
receptores, gestantes, pacientes com suspeita de anemia hemoltica
por presena de anticorpos, entre outros.
O teste antiglobulina humano baseia-se na aglutinao de hemcias
sensibilizadas previamente com anticorpos humanos ou fraes do
complemento atravs do anti-soro AGH (SORO DE COOMBS).

AMOSTRA

No necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para

a coleta das amostras de sangue. Para melhores resultados utilizar,
de preferncia, amostras recentemente colhidas ou em conformidade
com os critrios locais de aceitao de amostras. As amostras de
sangue podem ser colhidas com ou sem a adio de anticoagulantes.

COMPONENTES DO KIT
Conservar entre 2-8C.
- Soro anti-IgG (soro de Coombs)
O produto fornecido em frascos de 10 ml acompanhados de contagotas. Cada gota equivale a 50l.

MATERIAIS
-

Tubos de vidro
Pipetas Pasteur
Banho-Maria a 37C
Centrfuga
Salina Isotnica.

PROCEDIMENTO DO TESTE
Este teste utilizado na pesquisa de anticorpos bloqueadores
(incompletos), os quais se fixam as hemcias in vitro, mas no as
aglutinam. Para que a reao seja observada necessrio a adio do
Soro Anti-IgG (SORO DE COOMBS) ao teste.
O teste de Coombs Indireto realizado em pesquisas de anticorpos
bloqueadores, pesquisa de antgenos (usando o soro classificador
apropriado) e provas de compatibilidade, desde que tais reaes no
dependam do complemento para sua deteco.
1 Colocar em tubo de ensaio uma gota de suspenso de hemcias
a 5% escolhidas para o teste (geralmente O positivo),
previamente preparadas em soluo fisiolgica.
2 Adicionar duas gotas de soro a ser utilizado no teste.
3 Acrescentar 2 gotas de albumina bovina a 22%.
4 Incubar o tubo em Banho-Maria durante 15-30 minutos a 37 C.

5 Preparar tambm os controles positivo e negativo**

6 Lavar as hemcias do tubo por trs vezes em soluo
fisiolgica, secando as bordas do tubo a ltima lavagem para
retirar toda soluo.
7 Acrescentar duas gotas de Soro Anti-IgG (SORO DE COOMBS).
Misturar bem.
8 Centrifugar a 3.400 r.p.m. por 15 segundos ou a 1.000 r.p.m.
por 1 minuto.
9 Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presena ou no de
aglutinao.
**Controle positivo e controle negativo para o teste de
Coombs Indireto
1 Na execuo do teste de Coombs Indireto de primordial
importncia realizar em paralelo os controles Positivo e
Negativo.
2 Colocar em 2 tubos de ensaio uma gota de suspenso a 5% de
hemcias O Rh Positivo, previamente preparadas em soluo
fisiolgica. Identific-los.
3 Adicionar ao tubo Controle Negativo uma gota de soluo
fisiolgica e ao Controle Positivo uma gota de reagente Anti-D.
4 Executar o mesmo procedimento tcnico descrito para o teste
de Coombs Indireto a partir do item n 3.

RESULTADOS
Positivo (presena de aglutinao): Presena de anticorpos livres no
soro do paciente, os quais correspondem a um ou mais antgenos
presentes nas hemcias usadas no teste.

LIMITAES

I
Resultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer:
1 Quando as hemcias no forem apropriadamente lavadas ou
globulinas humanas estiverem presentes na vidraria, resultando
numa neutralizao das antiglobulinas humanas.
2 Quando os anticorpos se eluem das hemcias durante
incubao inadequada, no permitindo uma apropriada
sensibilizao dos glbulos.
3 Quando hemcias e/ou reagente no so adequadamente
conservados na temperatura indicada, perdendo sua
reatividade.
4 Quando o Soro Anti-IgG (SORO DE COOMBS) foi omitido durante
o teste
II
Resultados FALSO-POSITIVO podem ocorrer:
1 Quando hemcias do teste de Coombs Direto Positivo so
usados durante o procedimento tcnico do teste de Coombs
Indireto.
2 Quando so utilizadas Amostras de sangue contaminado.

3 Quando foi realizada uma centrifugao excessiva.

4 Quando o soro, as hemcias e Soro anti-IgG (SORO DE
COOMBS) estiverem excessivamente frios, detectando a
presena de aglutininas frias.