DEGRADACION DE HIDROCARBUROS AROMATICOS POR

BASIDIOMYCETES (Phanerochaete chrysosporium)

PAULA A. BLANCO. DIEGO GALEANO. ISABEL QUIROGA. LAURA HERRERA

Pontificia Universidad Javeriana. Facultad de ciencias. Microbiologa Industrial.
Bogota D.C. Noviembre 2006

INTRODUCCION
Hidrocarburos aromticos policclicos..
Basidiomycetes.
Generalidades de degradacin
Estudios reportados .

MECANISMO DE ACCIN DE Phanerochaete chrysosporium

Generalidades
Sistema de degradacin de la Lignina
Degradacin hidrocarburos aromticos policclicos..
Experimentos de campo.

INTRODUCCIN

Los hidrocarburos aromticos policclicos

(PAHs) son un grupo de compuestos
orgnicos (Hidrocarburos), que estn
conformados por molculas que contienen
dos o ms anillos aromticos de 6 carbonos
fusionados.
La mayora de los PAHs contienen
habitualmente
anillos
de
benceno
fusionados, sin embargo est presente la
existencia de PAHs basados en estas
estructuras que contienen grupos alquilo.
Los hidrocarburos aromticos pueden ser de
un solo anillo: benceno, tolueno,
etilbenceno y xileno (BTEX) o contener
varios anillos aromticos como en el caso
de naftaleno, antraceno, pireno y otros
muchos. [4]
Entre la gran variedad de microorganismos
tales como bacterias y hongos, que tienen la
capacidad de degradar hidrocarburos
aromticos policclicos. Uno de los tipos
de hongos que llevan a cabo estos procesos
de degradacin son los basidiomicetes,
considerados como hongos superiores;
entre los que se encuentran hongos
microscpicos (royas, caries y tizones),
parsitos de las plantas, con ciclos
biolgicos
muy
complejos,
y
macroscpicos las llamadas setas. [6]
HIDROCARBUROS AROMTICOS
POLICCLICOS

Existen ms de 100 grupos de PAHs

diferentes. Los PAHs se consideran
compuestos orgnicos persistentes (COPs),
por lo que pueden permanecer en
el medio ambiente durante largos periodos
de tiempo sin alterar sus propiedades
txicas. Las propiedades semivoltiles de
los PAHs les otorga gran movilidad.
Algunos de estos hidrocarburos poseen
propiedades cancergenas y/o mutagnicas.
Como caracterstica comn presentan una
baja solubilidad en agua, alta estabilidad
qumica, baja volatilidad, adems de ser la
mayora de ellos lipoflicos. [4]

La solubilidad en agua decrece segn

aumenta su peso molecular y el tamao de
la molcula, con el consiguiente aumento
del carcter lipoflico. La persistencia en el
medio tambin aumenta con el tamao. Por
su carcter lipoflico se pueden bioacumular
y concentrar en sedimentos y suelos en una
extensin que depender de su persistencia
en cada medio. Est comprobado que la
toxicidad aumenta al aumentar el peso
molecular y el carcter lipoflico del
compuesto.[14]
Los PAHs estn ampliamente distribuidos
en el ambiente; estn asociados a las
actividades humanas pues se forman
durante la combustin incompleta de
materiales orgnicos incluyendo carbn,
petrleo, gasolina, lea y basura. Tambin
se encuentran en el petrleo crudo, en el
alquitrn, creosota y asfalto junto con
algunos de sus derivados nitrados. [17]
El recorrido de los PAHs en el
medioambiente depende mucho de la forma
y modo en que se incorporan. Pueden
ingresar a las aguas superficiales a travs de
la atmsfera y de descargas o vertidos
directos. Tambin se detectan en aguas
freticas, como resultado de la migracin
directa de aguas superficiales contaminadas
o
como
consecuencia
de
suelos
contaminados. [9]
Los compuestos de mayor persistencia se
acumulan en plantas, peces e invertebrados
terrestres y acuticos.
Los mamferos pueden absorber los PAHs
por inhalacin, contacto drmico, o en
menor frecuencia por ingestin. Las plantas
pueden absorberlos a travs de las races en
suelos contaminados. Los PAHs de menor
peso molecular se absorben ms
rpidamente que los de mayor peso
molecular.
En sistemas acuticos, los PAHs crecen en
toxicidad segn incrementa su peso
molecular. Adems, la bioacumulacin
tiende a ser rpida.

La adsorcin de PAHs en suelo es

directamente proporcional al contenido de
materia orgnica y al mayor peso molecular
del PAHs e inversamente proporcional al
tamao de las partculas del suelo.

En la figura 1, se presenta la estructura

qumica
de
algunos
hidrocarburos
policclicos aromticos [19].

Figura 1. Esquema estructural de algunos hidrocarburos aromticos policclicos.

La principal va de degradacin de estos
compuestos incluye procesos qumicos,
fotolticos o metablicos asociados a
microorganismos. En algunos casos se dan
conjuntamente ms de una, dependiendo de
condicionantes como la temperatura, el
oxgeno y microorganismos disponibles
.Entre los procesos qumicos se incluyen los
tratamientos de cloracin y ozonizacin del

agua, entre los fotolticos la accin conjunta

de oxgeno y luz solar.
La aceleracin del proceso de degradacin
de los PAHs puede ser logrado mediante la
manipulacin de los sustratos del
microambiente, tales como la adicin de
nutrientes, el aumento del estatus aerbico,
la introduccin de un inoculo microbiano o
aumento de la viabilidad del PAH. [17].
BASIDIOMYCETES

Los basidiomycetes son una clase de

hongos con aparato vegetativo formado por
hifas tabicadas o anastomosadas y
caracterizadas por sus esporas de origen
sexual en el exterior de las clulas madres,

que reciben el nombre de basidios, y el de

basidisporas las esporas por ellas
formadas. [12]
Estos revisten importancia por su actividad
saprbica
como
descomponedores,

principalmente de la sustancia leosa

(celulosa y lignina). Una gran mayora de
las especies viven en rboles muertos en pie
o en el suelo, sobre ramas cadas, sobre
tocones, entre la hojarasca, sobre madera
estacionada o en obra, u otros productos
maderables. Tambin pueden actuar como
verdaderos
patgenos,
provocando
enfermedades
en
rboles
vivos,
debilitndolos y matndolos. Aunque la
prdida econmica provocada por estos
hongos es considerable, tambin su papel
benfico es inmenso al reciclar la materia
orgnica para finalmente enriquecer el
suelo. [6]
GENERALIDADES DE DEGRADACIN

Gran parte de los estudios de

biodegradacion se han centrado en bacterias
por la facilidad que ofrecen para estudiar
sus vas metablicas y llevar a cabo
construcciones genticas que permitan
degradar especficamente determinados
compuestos contaminantes, la capacidad de
los hongos para transformar una gran
variedad de compuestos orgnicos y
llevarlos hasta compuestos mas simples
ofrece un potencial indiscutible para su
utilizacin en procesos de tratamiento de
contaminaciones. Ese potencial radica
fundamentalmente en las caractersticas de
su sistema enzimtico y en su vigoroso
crecimiento que les permite, a travs del
desarrollo de su micelio, colonizar
diferentes tipos de sustratos y acceder a los
compuestos
que
constituyen
las
contaminaciones ms frecuentes de los
suelos. [9]
El elevado valor de la relacin
superficie/volumen celular de los hongos
filamentosos les convierte en eficaces
degradadores en determinados nichos como
los suelos contaminados. Por otra parte, los
hongos tienen una capacidad muy notable
para acumular metales pesados como
cadmio, cobre, mercurio, plomo y zinc, lo
que est demostrado por los aislamientos
realizados en minas de cobre, zinc o plomo.
[2]

ACTIVIDAD LIGNINOLTICA

Los basidiomicetos que descomponen la

madera han sido categorizados en dos
grupos, los hongos de la podredumbre
blanca y la caf, de acuerdo a su capacidad
para degradar la lignina de compuestos de
madera. Los hongos blancos son capaces de
degradar lignina produciendo una zona
coloreada alrededor del micelio en placas
de agar que contienen taninos u otros
sustratos fenolitos. La coloracin es
causada por fenol oxidasas secretadas
extracelularmente; mientras que los hongos
cafs no pueden llevar a cabo la
degradacin de la lignina y por lo tanto no
producen dicha coloracin. Sin embargo
estos basidiomicetes son conocidos como
responsables de numerosos decaimientos de
paredes celulares de la madera, ya que
digieren componentes celulolticos sin
remocin de lignina. [11]
Entre los basidiomicetos que causan la
podredumbre blanca de la madera, se
encuentran
las
especies
con
las
caractersticas ms adecuadas para ser
utilizadas
en
diferentes
procesos
biotecnolgicos,
incluidos
los
de
biodescontaminacin. [6]
Los hongos ligninolticos ms eficaces se
encuentran entre los basidiomicetos. Para
ello, cuentan con una batera de enzimas
extracelulares, oxidasas y peroxidasas, que
contribuyen, en determinadas condiciones,
a despolimerizar la compleja estructura de
la lignina para posibilitar el ataque de los
polisacridos
que constituyen una
importante fuente de energa. [5]
La complejidad estructural de la lignina,
hace que estas enzimas se caractericen por
unos mecanismos de accin no especficos
que oxidan los anillos aromticos que
constituyen dicho polimero. Las enzimas
que participan en este proceso son: lignina
peroxidasa (LiP, E.C. 1.11.1.14), peroxidasa
dependiente de Mn (MnP, E.C. 11.1.13) y

lacasa, una fenoloxidasa que contiene

principalmente cobre. [13]

GENERALIDADES

Existen otras enzimas asociadas con las

anteriores en la degradacin de lignina de
una manera indirecta: glioxal oxidasa (E.C.
1.2.3.5) y superxido dismutasa (E.C.
1.15.1.1) que producen H2O2 [6]

Phanerochaete chrysosporium es un hongo

basidiomycete termfilo de la podredumbre
blanca puede ser encontrado en bosques
templados de Norteamrica, Europa e Irn.
[7]

La inespecificidad qumica y la intensa

actividad oxidante de estas enzimas les
otorga una considerable capacidad de
degradar diferentes compuestos orgnicos
entre
los
que
se
encuentran
fundamentalmente:
pesticidas,
hidrocarburos aromticos (benzo _-pireno,
fenantreno, pireno, etc.) compuestos
orgnicos clorados (pentaclorofenoles,
cloroanilinas,
ifenilos policlorados)
azocolorantes, etc. [14]

Esta especie es el representante mejor

estudiado de este tipo de hongos
degradadores de la lignina de la madera que
adems ha despertado gran inters por
degradar una alta cantidad de agentes de
polucin. La habilidad para descomponer
este tipo de compuestos ha sido mostrada
por ser dependiente de un sistema de
degradacin de lignina que es expresado
bajo limitadas condiciones nutricionales
(nitrgeno, carbono o azufre). Sin embargo
el nitrgeno no es un gran limitante, dado
los bajos niveles de nitrgeno presentes en
la madera [18].

ESTUDIOS REPORTADOS

Se han publicado diversos trabajos de los

que se concluye la gran diversidad de
basidiomicetos con capacidad de degradar
hidrocarburos aromticos policclicos tales
como Tyromyces palustris, Gloeophyllum
trabeum, Stropharia coronilla oxida
benzopireno mediante la enzima manganasa
peroxidasa [15] ,Trametes versicolor oxida
PAHs por la accin de lacasas [6] ,
Phanerochaete chrysosporium, por la
oxidacin de antraceno y pireno mediante
las enzimas lignina peroxidasa y manganasa
peroxidasa. [18], Pleorotus ostreatus
degrada
benzoantraceno,
criseno,
benzofluorantreno,
benzopireno,
dibenzoantraceno y benzoperileno a travs
de enzimas como lacasa y peroxidasa
dependiente de manganeso. [1]
MECANISMO

DE

ACCIN

Phanerochaete chrysosporium

DE

SISTEMA DE DEGRADACIN DE LA
LIGNINA

Este sistema comprende una serie de

enzimas extracelulares entre las que se
encuentran
celobiohidrolasas,
endoglucanasas, -glucosidasas, glioxal
oxidasa,
xilanasas,
xilosidasas,
galactosidasa,
piranose
2-oxidasa,
superoxido dismutasas , manosa -6fosfatasas
y
principalmente
lignin
peroxidasas (lignin peroxidasas (LiP),
manganeso
peroxidases
(MnP)),
comnmente conocidas como ligninasas
[16], que son capaces de catalizar la
depolimerizacin oxidativa inicial del
polmero de lignina en CO2 y H20 en
cultivos puros [18]; esta reaccin se da por
el clivaje del grupo propilo del polmero
entre el C y C.. [3]

Figura 2. Esquema de la degradacin oxidativa inicial del polmero de Lignina.

Las peroxidasas de P. chrysosporium son
tiles en la bioremediacin de una amplia
variedad de subproductos orgnicos
incluyendo: tintes textiles, polietileno,
pesticidas y herbicidas, dinamita, PAHs, y
aceites [9]. Ha sido demostrado que el sitio
de clivaje y la apertura del anillo aromtico
ocurren simultneamente, y adems slo es
degradada
durante
el
metabolismo
secundario (idiofase). Por lo anterior, a este
sistema se ha atribuido que las ligninasas
sean capaces tambin de catalizar la
oxidacin inicial de un gran nmero de
xenobiticos persistentes en el medio
ambiente.
DEGRADACIN
HIDROCARBUROS
AROMATICOS POLICICLICOS

Estudios realizados por Hammel, K y

colaboradores quienes investigaron el
metabolismo del Antraceno en P.
chrysosporium [7], en donde encontraron
que la principal ruta de degradacin
procede va quinona a cido folico y se
fundamenta en la hiptesis de que la LiP
(lignin peroxidasa) cataliza el primer paso
de degradacin del antraceno en este hongo
ligninolitico.[3]

Figura 3. Reacciones conocidas

metabolismo del antraceno en

del

P.

chrysosporium.
Es importante aclarar que algunos
agentes de polucin aromticos son
resistentes al ataque de la LiP, pero son
sin embargo degradados por este
basidiomycete. Dentro de este grupo se
encuentra
el
fenantreno,
cuyo
mecanismo era desconocido hasta que
Hammel, K y su grupo de
investigadores quienes demostraron la
presencia de cido difnico como un
producto de la oxidacin del fenantreno
posiblemente por la va de la 9,10
quinona. [8]
Estudios subsecuentes, han mostrado
que la oxidacin del fenantreno a cido
difnico es una consecuencia de la
lpido peroxidacin mediada por
enzimas con actividad peroxidasa
(MnPs- Manganeso peroxidasa). Sin
embargo este mecanismo no esta
completamente comprobado, y se
continan realizando estudios, dada la
importancia de la aplicacin de este
hongo a nivel ambiental. [10]

Figura 4. Oxidacin del fenantreno por P.

chrysosporium. El intermediario de la
quinona no esta completamente
probado.

Figura 5. Esquema del diseo del

reactor RBC. 1. Tanque de aguas negras
que contienen PAH. 2. tanque efluyente
de aguas negras. 3. Condensador de aire.
4. Reactor RBC. 5. Motor elctrico. 6.
Filtro de aire. 7. Metro de corriente de
aire. 8. Bomba de aire. 9. Bao de agua
reciclado.
CONCLUSIONES

EXPERIMENTOS DE CAMPO

Zhongming, Z y Jeffrey O. en su
estudio de remocin de hidrocarburos
aromticos policclicos de suelo
mediante la actividad oxidativa de P.
chrysosporium, utilizaron un reactor
(RBC- Rotating Biological Contactor
Reactor) con clulas inmovilizadas de
este basidiomycete inoculadas en tanque
de aguas negras que contienen
hidrocarburos aromticos policclicos
[18].

BIBLIOGRAFA

1. BALDRIAN, P. WIESCHE, C. JIRI,

G. NERUD, F. ZADRAZIL, F.
2000. Influence of cadmium and
mercury on activities of ligninolytic
enzymes
and
degradation
of
polycyclic aromatic hydrocarbons by
Pleurotus ostreatus in soil. Applied
and Environmental Microbiology.
Vol. 66, No. 6.
2. BARR, D. 1994. Mechanims white rot
fungi use to degradate pollutans. Crit. Rev.
Environ. Sci. Technol. 28:78A-87A.
3. BUMPUS, J. 1989. Biodegradation of
Polycyclic Aromatic Hydrocarbons by
Phanerochaete chrysosporium. Applied and
Environmental Microbiology.
4. CASTAO, G. ERRICO, A. MALATS,
N. KOGEVINAS, M. 2004. Biomarkers of
exposure
to
polycyclic
aromatic
hydrocarbons
from environmental air
pollution. Occupational and Environmental
Medicine. 61:e12
5. CULLEN, D. 1997. Recent advances on
the molecular genetics of ligninolytic
fungi. J Biotech. 53: 273-289.
6. FIELD, J. JONG, E. COSTA, G.
BONT, M. 1992. Biodegradation of
polycyclic aromatic hydrocarbons by new
isolates of white rot fungi. Applied and
Environmental Microbiology. Vol. 58. No.
7.
7. GERALD J. MILESKI, J. BUMPUS,
M. JUREK, AND STEVEN D. 1998.
Biodegradation of Pentachlorophenol by
the White Rot Fungus Phanerochaete
chrysosporium. Applied and Environmental
Microbiology.
8. GOLD, M. ALIC, M. 1993. Molecular
Biology
of
the
Lignin-Degrading
Basidiomycete
Phanerochaete
chrysosporium.
Microbiological Rewievs.

9. HAMMEL, K. 1995. Mechanisms for

Polycyclic Aromatic Hydrocarbon
Degradation by Ligninolytic Fungi.
Environmental Health Perspectives
Vol. 103
10. HAMMEL, K. KALYANARAMAN,
B. KENT, T.
1986.
Oxidation of
polycyclic aromatic hydrocarbons and
dibenzo (p)- dioxins by Phanerochaete
chrysosporium Ligninase. Journal of
biological chemistry . v. 261, No. 36.
11. KAMADA, F. ABE, S. HIRATSUKA,
N. WARIISHI, H. TANAKA, H. 2002.
Mineralization of aromatic compounds by
brown- rot basidiomycetes- mechanisms
involved in initial attack on the aromatic
ring. Journal of society for general
microbiology. 148.
12. MADIGAN, M. MARTINKO, J.
PARKER,J. 2003. Brock. Biologa
de los microorganismos. Editorial
Pearson. Dcima edicin.
13. PERZ , J. MUOZ, J. DE LA
RUBIA, T. MARTINEZ, J. 2002.
Biodegradation
and
Biological
Treatments
of
cellulose,
hemicellulose and
lignin: an
overview. Int Microbiol 5: 53-63.
14.

SIENRA, M. PRNDEZ, M.
ROMERO, R. 2002. Metodologa
para la extraccin, fraccionamiento
y cuantificacin de hidrocarburos
aromticos policclicos presentes
en material particulado urbano.
Boletn de la Sociedad Chilena de
Qumica. v.47 n.4.

15.

STEFFEN, K. HATAKKA, A.
HOFRICHTER,
M.
2003.
Degradation of benzo (a) pyrene by
the litter- decomposing basidomycete
Stropharia coronilla: role
of
Manganese peroxidase. Applied and
Environmental Microbiology. Vol.
49, No. 7.

16. VALLI, K. WARIISHI, H. GOLD,

M.
1992. Degradation of 2,7dichlorodibenzo-p-dioxin by the lignindegrading basidiomycete Phanerochaete
chrysosporium. J Bacteriology. 174: 2131
2137
17.
XU, R. OBBARD, J. 2004.
Biodegradation of polycyclic aromatic
hydrocarbons in oil- contaminated beach
sediments
treated
whit
nutrient
amendments. Journal of Environmental
Quality. 33: 861-867
18. ZHONGMING, Z. OBBARD, P.
2002. Polycyclic Aromatic Removal From
soil by surfactant solubilization and
Phanerochaete chrysosporium oxidation.
Journal. Environmental Quality. 31: 18421847

Selected non - heterocyclic

polycyclic aromatic hydrocarbons.
World health organization. OMS. 1998.
19.