23/11/2014

Biossinalizao

Prof. Dr. Edson dos Anjos

Biossinalizao
A biossinalizao muito importante para todos os organismos vivos (unicelulares e
pluricelulares):
Unicelulares:
Monitoramento de pH externo (bactrias);
Fora osmtica;
Disponibilidade de alimento;
Deteco de oxignio e luz;
Presena de substncias qumicas nocivas;
Formao de esporos em um ambiente com escassez de
nutrientes;
Pluricelulares (clulas diferentes trocam sinais entre si):
Concentrao de ons e glicose nos fluidos extracelulares;
Atividades metablicas;
Localizao correta das clulas durante o desenvolvimento
(embrio).

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Transduo de Sinal
O sinais biolgicos representam informaes que so detectadas
por receptores especficos e convertidos em resposta celular
(processo qumico);
A converso de informao em alterao qumica chamada de
transduo de sinal;
Transdutores de sinal so extremamente especficos e sensveis;
A especificidade alcanada por uma complementaridade
molecular precisa entre as molculas sinalizadoras;

As foras intermoleculares esto envolvidas;

Em organismos multicelulares o grau de especificidade ainda
maior (clulas diferentes possuem receptores ainda mais
especficos)

Transduo de Sinal
3 fatores so responsveis pela alta sensibilidade da transduo de sinal:
1) A alta afinidade dos receptores para as molculas sinalizadoras;

2) A cooperatividade da interao
ligante-receptor;

3) A ampliao do sinal por cascatas enzimticas.

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Transduo de Sinal
A afinidade entre o sinal (ligante) e o receptor pode ser expressa na forma de
constante de dissociao (Kd), comumente 10-10 M ou menos, concentraes de
picomolares so detectadas pelos receptores;

Transduo de Sinal
A cooperatividade nas interaes receptor-ligante causa grandes alteraes na ativao
do receptor em resposta a pequenas alteraes na concentrao do ligante;

Exemplo de cooperatividade: Mudanas de conformao prximas ao heme pela ligao

do O2 desoxiemoglobina, estado T (baixa afinidade) e estado R (alta afinidade).

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Transduo de Sinal
A amplificao ocorre quando uma enzima associada a um receptor de sinal
ativada;
Essa enzima ativada
catalisa a ativao de
muitas molculas de uma
segunda enzima;

E depois essas ativam

muitas molculas de uma
terceira
enzima,
ocorrendo
ento
a
chamada
Cascata
Enzimtica;
Essas cascatas produzem amplificaes de vrias ordens de magnitude em
milissegundos.

Transduo de Sinal
Outra caracterstica importante a modularidade das protenas de
sinalizao;
Permite que a clula e combine um conjunto de molculas
sinalizadoras para a criao de complexos com diferentes
funes ou localizaes celulares;

Um exemplo comum a ligao de uma protena de

sinalizao modular a resduos fosforilados em outra
protena, essa interao pode ser regulada pela fosforilao
ou desfosforilao;

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Transduo de Sinal
Nas membranas existem ainda as Protenas de ancoragem:
So protenas que no tem atividade enzimtica;
Possuem afinidade por diversas enzimas que interagem em cascatas, fazendo
com que essas enzimas se aproximem;
Garante as interaes enzimticas em locais celulares e momentos especficos;
Das diferentes
protenas da
membrana
eritrocitria, existe
muitas protenas
de ancoragem
como a
Anquirina:
funciona como a
maior ponte para o
citoesqueleto
espectrinaactina

Trocador de ons

Transduo de Sinal
A sensibilidade dos sistemas receptores est sujeita
a modificaes;
Quando um sinal est presente continuamente,
ocorre a dessensibilizao do sistema receptor;
Quando o estimulo diminui o sistema torna-se
sensvel novamente (luz e ecurido);

Muita luz solar

Quarto escuro

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Transduo de Sinal
Uma ltima caracterstica notvel dos sistemas de transduo de sinal a integrao:
a capacidade de um sistema receber mltiplos
sinais e produzir uma resposta unificada;

Quando 2 sinais apresentam efeitos opostos, como a

concentrao de um segundo mensageiro (X) ou o
potencial de membrana (Vm), a regulao
consequncia da ativao integrada de ambos
receptores;
Essas diferentes rotas de sinalizao se comunicam
umas com as outras em diferentes nveis, gerando uma
complexa converso cruzada que mantm a
homeostase da clula ou do organismo.

Transduo de Sinal
Existem vrios tipos de sinais biolgicos (ordem de milhares);
Sendo que a maquinaria de transduo de todos esses sinais tem como base 10
tipos bsicos de componentes proteicos.

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Receptores
Os sistemas de transduo de sinal so classificados de acordo com o tipos de receptor
(6 principais):

1) -adrenrgico (adrenalina);
2) Fator de crescimento da epiderme (EGFR);
3) cGMP (ativa cinases);
4) Receptor de acetilcolina;
5) Integrinas;
6) Hormnios esterides

Receptores (Protena G)
1) Receptores associados a protenas G e segundos mensageiros
Esses receptores so chamados de GPCR (G proteincoupled receptors);
So receptores associados a um membro da famlia
de protenas de ligao a nucleotdeos de guanosina
(protenas G);
Existem 3
transduo:

componentes

essenciais

para

esta

Um receptor de membrana plasmtica (helicoidal);

Uma protena G, ativada (ligada GTP) e desativada
(ligada a GDP);
Uma enzima efetora (ou canal inico), regulada pela
protena G ativada, produzindo um 2 mensageiro;
Os ligantes mais comuns so: hormnios, fatores de crescimento, atuam tambm como
receptores olfativos e gustativos.

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Receptores (Protena G)

Sistema -adrenrgico

O sistema -adrenrgico um tipo de receptor associado

a protenas G e segundos mensageiros;
A adrenalina o ligante dos receptores do sistema adrenrgico que atua por meio do segundo mensageiro
cAMP;
Os receptores adrenrgicos so de 4 tipos
bsicos: 1, 2, 1 e 2;
So definidos pelas afinidades e respostas a um
grupo de agonistas e antagonistas;
Agonistas: so anlogos estruturais que se ligam
a um receptor e mimetizam o efeito normal do
ligante
Antagonistas: so anlogos que se ligam ao
receptor sem disparar o efeito normal (bloqueam
o efeito do ligante biolgico)

Receptores (Protena G)
Os receptores -adrenrgicos mais comuns so encontrados no msculo, fgado e tecido
adiposo, onde os receptores 1 e 2 atuam pelo mesmo tipo de mecanismo:
A adenilil-ciclase regulada por
uma protena G estimulatria (Gs );
Uma protena G inibitria (Gi)
tambm pode se ligar;
A PKA (protenas-cinase A)
quando fosforilada (ativa) iniciao
o processo de mobilizao de
glicognio (msculo e fgado)

Protenas RGS
(reguladores
de sinalizao
por protenas
G)

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Receptores (Protena G)
Como funciona a PKA?

A AKAP uma protena de ancoragem para a

cinase A (PKA);
A subunidade cataltica da PKA s fica
disponvel depois que se ligam as molculas
de cAMP;
Assim ocorre a fosforilao de outras por AP

Receptores (Protena G)
A transduo de sinal pela adenilil-ciclase
envolve vrias etapas que amplificam o sinal
hormonal original;
As numeraes mostradas so meramente
ilustrativas, mas acredita-se a adrenalina ative
cerca centenas de protenas G;

2 cAMP
ativam 1 PKA

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Receptores (Protena G)
Para ser funcional, um sistema de transduo de sinal deve ser desligado aps o
trmino do estimulo hormonal;
O
receptor
adrenergico
dessensibilizado pela fosforilao e
pela associao com arrestina:
Existem duas protenas que
realizam a mediao desse sistema :
Cinase do receptor -adrenrgico
(ARK): fosforila alguns resduos
de Ser do receptor no domnio
intracelular;
E a arrestina (arr): se liga ao
domnio fosforilado do receptor,
impedindo a ligao da protenas G
e provoca o sequestro do receptor
por endocitose.

Receptores (Protena G)
O cAMP age como segundo
mensageiro para muitas molculas
reguladoras:
O cAMP age como segundo
mensageiro para muitas molculas
reguladoras:
Cortropina: secreo do cortisol;
Dopamina: neurotransmissor;
Histamina:
substncia
vasodilatadora (imunolgica);
Hormnio luteinizante: secreo de
progesterona e testosterona;
Hormnio Paratireoide: [Ca2+];
Somastatina: modula a secreo de
insuluna e glucagon;

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Receptores (Protena G)
O diacilglicerol, inositol-trifosfato e
Ca2+ tm funes relacionadas com
segundos mensageiros;
Fosfolipase C (PLC) especfica para o
fosfolipdeo de membrana fosfatidilinositol-4,5-bifosfato (PIP2);
A PLC produz diacilglicerol e IP3
(inositol trifosfato) a parir de PIP2 ;
O IP3 se liga a canais de Ca2+ no RE,
abrindo-os;
IP3

A [Ca2+] aumenta no citosol ativando

preotena-cinase C (PKC) juntamente
com o diacilglicerol;

Receptores (Protena G)
Alguns sinais (hormnios) que agem atravs da PKC, IP3 e Ca2+

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Receptores (Tirosina-Cinase)
2) Receptores Tirosina-Cinases
Os receptores tirosina-cinases (RTK, de
receptor tyrosine kinases) transduzem os
sinais extracelulares por um mecanismo
diferente dos GPCR;
Possuem

um

domnio

externo

de

interao com o ligante e um domnio

interno

(protena-cinase)

resduos

de

Tyr

que

em

fosforila

protenas-alvo

especficas.

Receptores
(Tirosina-Cinase)
A cascata de reaes de fosforilao
desencadeada

pela

estimulao

do

receptor de insulina um exemplo do

mecanismo dos receptores RTK;
O INSR o receptor proteico da
insulina, que quando ativado (insulina)
se autofosforila (Tyr) utilizando ATP;
Essa autofosforilao expe o stio
ativo

que

pode

fosforilar

outras

protenas (Tyr).

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Receptores (Tirosina-Cinase)
Quando o INSR autofosforilado um
de seus alvos o substrato de receptor de
insulina-1 (IRS-1, de insulin receptor
substrate-1);
Grb2 (protena adaptadora sem
atividade enzimtica), cuja funo
aproximar 2 protenas (IRS-1 e a Sos);
Sos uma protena que se liga a Ras
(da famlia de protenas G pequenas),
ativada por GTP;
Ras ativa uma protena-cinase (Raf-1)
que fosforila a protena-cinase MEK e
depois essa fosofrila a ERK;
Por fim a ERK ativada entra no ncleo
e fosforila fatores de transcrio (Elk1,
modula a transcrio de 100 genes, fator
de crescimento e diviso celular)

Receptores (Tirosina-Cinase)
O fosfolipdeo de membrana PIP3, fosfatidilinositol-3,4,5-trifosfato (no confundir com
IP3) age em uma ramificao da sinalizao da insulina;

PIP3
(3,4,5)

IP3
(1,4,5)

IP3

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Receptores (Guanilil-Ciclases)
3) Receptores Guanilil-Ciclases
As guanilil-ciclases so enzimas receptoras que, quando
ativadas,

convertem

GTP

no

segundo

mensageiro:

monofosfato cclico de 3,5-guanosina (GMP cclico,

cGMP);

Muitas das aes do cGMP em animais so mediadas pela protena-cinase dependente

de cGMP, chamada de protena-cinase G (PKG), ela fosforila resduos de Ser e Thr em
protenas-alvo.

Receptores (Guanilil-Ciclases)
Existem 2 tipos de guanilil-ciclases que participam da transduo de sinal:
1)
A
guanilil-ciclase
renal
(homodmero) que ativada pelo
hormnio peptdico fator natriurtico
atrial (ANF);
ANF liberado pelas clulas do trio
cardaco (corao est estirado pelo
aumento volume sanguneo);
[cGMP] causa um aumento na
excreo de renal Na+ e gua, reduz o
volume sanguneo.
2) O outro receptor uma enzima que contm heme e ativado por xido ntrico (NO)
intracelular, presente no msculo liso do corao e nos vasos sanguneos.

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Receptores (Guanilil-Ciclases)
O NO produzido a partir da arginina pela enzima NO-sintase dependente de Ca+

O Sildenafil age inibindo uma

das 3 diferentes isoformas da
cGMP-PDE (fosfodiesterase);
Sildenafil (Viagra)

Ereo

Receptores (Canais Inicos)

4) Canais Inicos Controlados por Portes
Os canais inicos so a base da sinalizao
eltrica nas clulas excitveis, pois provocam
uma alterao no potencial da membrana;
A excitabilidade de clulas sensoriais de
neuronais e micitos so dependentes de canais
inicos (controlam o movimento de ons como
Na+, K+, Ca2+ e Cl-);
A Na+K+-ATPase eletrognica: cria um
desequilbrio de cargas por transportar 3Na+
para cada 2K+ que entram (membrana
polarizada);
A entrada de um ction (Na+) ou de um
nion (Cl-) despolariza a membrana (Vm~ 0);
Inversamente, a sada de K+ hiperpolariza a
membrana (Vm torna-se mais negativo).

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Receptores (Canais Inicos)

Os canais inicos controlados por
produzem os potenciais de ao neuronais;

voltagem

Existem 3 canais inicos controlados por voltagem

nos neurnios: canais de Na+; canais de K+ e canais de
Ca2+;
Inicialmente a membrana do neurnio pr-sinptico
esta polarizada e depois ocorre a entrada de Na+ que
inicia a despolarizao, desencadeando a entrada de
Ca+ tambm;
K+ liberado e repolariza a membrana;
O resultante aumento na [Ca2+] interno provoca a
liberao por exocitose do neurotransmissor
acetilcolina para dentro da fenda sinptica;
A acetilcolina ativa canais que de Na+ e Ca+ no
neurnio ps-sinptico, despolarizando a clula;

Receptores (Adeso)

5) Receptores de Adeso

A integrinas so protenas da membrana plasmtica que controlam a adeso de clulas

umas s outras e matriz celular;
Transmitem sinais em
ambas direes e todas
possuem uma subunidade
e ;
Atuam
no
desenvolvimento
embrionrio,
coagulao
sangunea,
funcionamento
das clulas imunolgicas,
diferenciao
celular,
crescimento e metstase
tumoral
Os ligantes extracelulares que interagem so colgeno, fibrinognio e fibronectina;

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Receptores (Nuclear)
6) Receptores Nucleares
Os hormnios esteroides, o cido retinoico (retinoide) e os hormnios da tireoide atuam
no ncleo e alteram a expresso gnica;
O ligante se liga a um
receptor proteico que interage
com sequncias reguladoras
especficas no DNA (HRE);
A
especificidade
da
interao esteroide-receptor
explorada
pelo
frmaco
tamoxifeno (combate o cncer
de mama), antagonista de
estrognio,
compete
pelo
receptor de estrognio;

Tamoxifeno

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