Fluorescencia

Coleccin de 47 minerales iluminados con luz ultravioleta, emitiendo luz visible de diversos colores
mediante el proceso de fluorescencia.

Peces marinos fluorescentes

La fluorescencia es un tipo particular de luminiscencia, que caracteriza a las sustancias

que son capaces de absorber energa en forma de radiaciones electromagnticas y luego
emitir parte de esa energa en forma de radiacin electromagntica de longitud de
onda diferente.1
La energa total emitida en forma de luz es siempre menor a la energa total absorbida y la
diferencia entre ambas es disipada en forma de calor. En la mayora de los casos la
longitud de onda emitida es mayor -y por lo tanto de menor energa- que la absorbida, sin
embargo, si la radiacin de excitacin es intensa, es posible para un electrn absorber
dos fotones; en esta absorcin bifotnica, la longitud de onda emitida es ms corta que la
absorbida, sin embargo en ambos casos la energa total emitida es menor que la energa
total absorbida.

En general las sustancias fluorescentes absorben energa en forma de radiacin

electromagntica de onda corta (p ej radiacin gamma, rayos x,UV, luz azul, etc), y luego
la emiten nuevamente a una longitud de onda ms larga, por ejemplo dentro del espectro
visible; los ejemplos ms notables de fluorescencia ocurren cuando la luz absorbida se
encuentra dentro del rango ultravioleta del espectro -invisible al ojo humano- y la luz
emitida se encuentra en la regin visible.
El mecanismo de fluorescencia tpico implica tres pasos secuenciales, llamados
respectivamente absorcin (1), disipacin no radiativa (2) y emisin (3).
El ciclo completo es muy breve, transcurre en tiempos del orden de losnanosegundos, por
lo que puede considerarse prcticamente instantneo. Es este tiempo tan corto lo que
diferencia a la fluorescencia de otro conocido fenmeno luminoso, la fosforescencia. El
mecanismo de fluorescencia tambin se encuentra muy relacionado con el proceso
dequimioluminiscencia.
Las sustancias que son capaces de emitir luz al ser excitadas por diferentes tipos de
radiacin se denominan fluorforos. Es posible obtener una amplia variedad de colores por
fluorescencia, dependiendo de la longitud de onda que emita el compuesto fluorescente.
El fenmeno de fluorescencia posee numerosas aplicaciones prcticas, entre las que se
encuentran por ejemplo anlisis en mineraloga, gemologa, sensores qumicos
(espectroscopia fluorescente), pigmentos y tintas, detectores biolgicos y lmparas
fluorescentes.
ndice
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1 Historia

2 Mecanismo
o

2.1 Consideraciones previas

2.2 Transiciones electrnicas

2.3 Espectros moleculares

2.4 Mecanismo bsico y diagrama de Jablonski

3 Ecuaciones
o

3.1 Fotoqumica

3.2 Rendimiento cuntico

3.3 Tiempo de vida

4 Reglas

5 Aplicaciones

5.1 Iluminacin

5.2 Qumica analtica

5.3 Bioqumica y medicina

5.4 Gemologa, mineraloga, geologa y ciencias forenses

5.5 Lquidos orgnicos

6 Vase tambin

7 Enlaces externos

8 Referencias

Historia[editar]

Matlalina, la sustancia fluorescente en la madera del rbol Eysenhardtia polystachya

Copa de Lignum nephriticumhecha de la madera del rbol de narra (Pterocarpus indicus), y un
frasco que contiene sus soluciones fluorescentes

Una temprana observacin de la fluorescencia fue descrita en 1560 porBernardino de

Sahagn y en 1565 porNicols Monardes en la infusin conocida como lignum
nephriticum (del latn, "madera renal"). Fue derivado de la madera de dos especies de
rboles,Pterocarpus indicus y Eysenhardtia polystachya.2 3 4 5 El compuesto qumico
responsable de esta fluorescencia es la matlalina, que es el producto de oxidacin de uno
de los flavonoides que se encuentran en esa madera. 2
En 1819, Edward D. Clarke6 y en 1822 Ren Just Hay7 describieron fluorescencia en las
fluoritas, en 1833 sir David Brewster describi el fenmeno en la clorofila 8 y en 1845
sir John Herschel hizo lo mismo con la quinina.9
En un artculo de 1852 sobre la "refrangibilidad " (cambio de longitud de onda) de la
luz, George Gabriel Stokes describi la facultad del fluorspar y del cristal de uranio para
cambiar la luz invisible ms all del extremo violeta del espectro visible en luz azul. Llam
a este fenmeno fluorescencia (fluorescence): Casi me inclino a acuar una palabra, y
llamo la apariencia fluorescencia, de fluor-spar [es decir, la fluorita], como el trmino
anlogo opalescencia se deriva del nombre de un mineral.10 El nombre fue derivado del
mineral fluorita (difluoruro de calcio), que en algunas muestras tiene rastros

de europio bivalente, que sirve como activador fluorescente emitiendo luz azul. En un
experimento clave utiliz un prisma para aislar la radiacin ultravioleta de la luz solar y
observ la luz azul emitida por una solucin de etanol de quinina expuesto por ella. 11

Mecanismo[editar]
Consideraciones previas[editar]
Para entender el mecanismo subyacente al proceso de fluorescencia es necesario primero
repasar el concepto deorbital atmico y de orbital molecular.
Los electrones en un tomo se organizan ocupando diferentes orbitales, esto es, regiones
en el espacio en torno al ncleo donde existe una cierta probabilidad de encontrarlos.
Existen orbitales de baja energa y orbitales de alta energa. Los electrones prefieren
ocupar primero, y siempre que sea posible, los orbitales de menor energa que se
encuentren desocupados. Sin embargo esto no significa que no puedan ocupar
transitoriamente orbitales de mayor energa.

Transiciones electrnicas[editar]
Para mover un electrn de un orbital de baja energa a un orbital de mayor energa es
necesario cubrir esa diferencia de energa con un aporte externo (es casi como llevar un
cuerpo de un lugar bajo a un lugar con cierta altura, con la diferencia de que a escala
atmica la diferencia de energa entre orbitales se encuentra cuantizada). Para cada tipo
de tomo la diferencia de energa entre dos orbitales dados es constante y los electrones
se pueden mover entre esos orbitales nicamente ganando o perdiendo esa cantidad fija
de energa. Este proceso se conoce como transicin electrnica. En el caso de tratarse de
tomos nicos esto provoca que cada tipo de tomo posea lneas de absorcin ylneas de
emisin muy caractersticas, es decir que sea capaz de absorber o emitir energa en forma
de cuantos de luz a determinadas longitudes de onda correspondientes a cada uno de los
procesos de salto de los electrones entre orbitales de diferente energa. En el caso de
tomos nicos las lneas espectrales son muy precisas y definidas porque las transiciones
entre diferentes orbitales poseen diferencias de energa muy marcadas y precisas.

Espectros moleculares[editar]
Cuando los tomos se combinan para formar molculas, sus orbitales atmicos
desaparecen, combinndose para formar orbitales moleculares. Los electrones ahora
pueden ocupar regiones de probabilidad en torno a varios ncleos. La combinacin de
orbitales atmicos se produce en forma lineal, esto significa por ejemplo que si se
combinan dos tomos, cada uno de los cuales posee cuatro orbitales atmicos, la
molcula poseer como resultado ocho orbitales moleculares. Estos orbitales moleculares
poseern energas intermedias a las de los orbitales atmicos que se combinaron para
formarlos. La situacin se va tornando ms compleja cuantos ms tomos posea una
molcula. Como consecuencia molculas relativamente simples poseen un nmero muy
elevado de orbitales moleculares entre los cuales se pueden producir transiciones
electrnicas. Es por eso que las molculas poseen bandas de emisin y absorcin y no
lneas. Estas bandas se encuentran formadas por la superposicin de una gran cantidad
de lneas correspondientes a cada una de las transiciones posibles entre diferentes
orbitales dentro de la molcula. Y para complicar an ms la situacin, hay que considerar
que las molculas no son rgidas, sino que se trata de estructuras dinmicas que estn
sometidas a deformaciones estructurales, debidas por ejemplo a vibraciones trmicas o a
rotaciones de determinadas partes de la molcula. Cuando se altera la forma de una
molcula, tambin se altera la forma de los orbitales moleculares que la forman y como
consecuencia se altera la energa de los mismos. Las deformaciones estructurales
provocan ligeras diferencias entre las energas de diferentes orbitales que hacen que se
modifiquen las energas de transicin electrnica entre ellas. Finalmente cabe considerar
que en una molcula en estado basal, muchos de los electrones se encuentran en estado
singlete, es decir, se encuentran complementados por otro electrn dentro del mismo
orbital con un espn antiparalelo. Una transicin electrnica tpica, implica que un electrn

en estado singlete, salta a un orbital de mayor energa adquiriendo un estado

doblete donde su espn no se encuentra complementado por otro antiparalelo. Pero
pueden ocurrir otro tipo de transiciones, en la cual dos electrones en estado doblete,
pueden ser promovidos a dos orbitales degenerados (de igual energa) adquiriendo
unestado triplete en el cual sus espines son paralelos. Las transiciones de espn, tambin
pueden absorber y emitir energa en forma de luz.

Mecanismo bsico y diagrama de Jablonski[editar]

Un diagrama de Jablonski es bsicamente una representacin simplificada de los niveles
electrnicos (orbitales) de una molcula y de las posibles transiciones electrnicas que se
pueden dar entre estos niveles. En un diagrama de Jablonski se agrupan verticalmente los
estados electrnicos de acuerdo a su energa y horizontalmente de acuerdo a
su multiplicidad de espn. Las transiciones radiativas se representan con lneas rectas y las
no radiativas con lneas onduladas. A continuacin se presenta un diagrama de Jablonski
modificado para representar una molcula hipottica que posee un nivel electrnico basal
(S0) dos niveles electrnicos de alta energa (S1 y S2) y un nivel de dos orbitales
degenerados con espines paralelos (triplete T1) cada uno de estos niveles con varios
subniveles vibracionales debidos a las deformaciones trmicas de la molcula (Vb). En el
eje vertical se ubica la energa relativa de cada nivel electrnico, y en el eje horizontal
hemos considerado al tiempo y no a la multiplicidad de espn. Las flechas verticales
representan absorciones y emisiones de energa en forma de fotones y las flechas
diagonales implican disipacin de energa por medios no radiativos (en forma de calor).

La situacin aqu representada comienza por la promocin de un electrn que se

encontraba en estado basal S0 a un nivel electrnico de alta energa S2 en un estado
vibracional alto (la lnea Vb ms alta de todas). Esta promocin se produce cuando la
molcula absorbe energa, en general en forma de un cuanto de luz (fotn). Este electrn
en un estado electrnico excitado vibracionalmente alto puede ceder parte de su energa
en forma de vibraciones que se transmiten al resto de la molcula (flecha amarilla diagonal
rotulada como NR). Esta energa aumenta la amplitud de las vibraciones de la molcula,
energa que es finalmente disipada cuando la molcula choca con otras molculas
cedindola en forma de calor.
El electrn puede ir cayendo como en una escalera entre diferentes estados vibracionales
cediendo en cada escaln parte de su energa en forma de calor, que aumenta las
vibraciones de la molcula. Tambin puede hacerlo cediendo toda su energa de golpe,
cayendo a un nivel inferior y emitiendo gran parte de la energa en forma de un nico
cuanto de luz (situacin representada por la primera flecha verde vertical).
Aunque en teora sera posible que el electrn cayera desde el estado vibracional alto al
estado basal S0, en la prctica esto no ocurre, pues la molcula rpidamente transfiere

parte de la energa absorbida a otros orbitales por medio de un mecanismo

de reconversin energtica interna, un proceso que ocurre usualmente en tiempos muy
cortos del orden de 10-15 segundos, por lo que resulta virtualmente imposible para el
electrn ceder nuevamente el total de la energa que recibi y como consecuencia la luz
emitida es siempre de menor energa y mayor longitud de onda que la recibida. A medida
que el tiempo se prolonga, mayor es la cantidad de energa que se pierde por procesos no
radiativos y mayor es la longitud de onda de la luz emitida. Eventualmente todos los
electrones en estados excitados caen hasta el estado basal ya sea emitiendo luz (FE) o
perdiendo energa por procesos no radiativos (NR) estos procesos se producen en la
fluorescencia en tiempos de hasta 10-9 segundos.
En algunas molculas sin embargo, existen orbitales degenerados con energas muy
similares a las de los niveles excitados. En estas molculas puede ocurrir que un electrn
con alta energa ceda parte de su energa a un electrn en estado basal para formar dos
electrones desapareados en dos orbitales degenerados (estado triplete) de energa
intermedia. El estado triplete es metaestable y puede existir por tiempos enormemente
largos si se lo compara con las transiciones entre estados dobletes; en el primer caso los
tiempos de decaimiento usualmente van desde las centsimas de segundo hasta las
horas. Cuando los electrones en estado triplete aparean sus espines ceden esa energa de
apareamiento en forma de luz, produciendo el fenmeno de fosforescencia.
La relajacin de un estado S1 tambin puede ocurrir a travs de una interaccin con una
segunda molcula mediante lo que se conoce como desactivacin (quenching
fluorescente) de la fluorescencia, en este caso la molcula excitada cede su energa a otra
y esta ltima la disipa en forma de calor. El oxgeno molecular (O2), por ejemplo, es muy
eficiente desactivando la fluorescencia de otras molculas debido a su inusual estado
triplete fundamental.
Finalmente algunas molculas que se excitan a travs de la absorcin de luz o por medio
de un proceso diferente (P. ej. a causa de una reaccin qumica) pueden transferir esta
energa a una segunda molcula sensibilizada por un mecanismo de paso intersistema
entre molculas. A travs de este mecanismo la segunda molcula es conducida a un
estado de excitacin electrnica y es finalmente esta ltima la que va a emitir
fluorescencia. En estos casos las diferencias de energa entre la radiacin excitadora y la
emitida son excepcionalmente grandes. Este mecanismo se utiliza por ejemplo en
los contadores de centelleo lquidos para producir luz visible a partir de radiaciones
nucleares de alta energa.

Ecuaciones[editar]
Fotoqumica[editar]
En resumen la fluorescencia ocurre cuando una molcula, tomo o nanoestructura vuelve
a su estado fundamentaldespus de haber sido excitada electrnicamente.
Excitacin:
Fluorescencia (emisin) :

Aqu,
es un trmino genrico para la energa del fotn con h = constante de Planck y
donde = frecuencia de la luz. (Las frecuencias especficas de la luz excitadora y emitida
son dependientes en cada sistema en particular.)
El estado S0 se llama estado fundamental de la molcula fluorescente y S1 es su primer
estado electrnico excitado.
Adems de estos estados electrnicos, que corresponden a la ubicacin de los electrones
de enlace de la molcula en diferentes orbitales moleculares, existen diferentes estados

vibracionales para estos orbitales moleculares, estos estados vibracionales corresponden

a las oscilaciones que experimentan los tomos que forman la molcula en torno a los
enlaces.
Los estados vibracionales altos pueden disipar energa en forma de calor, aumentando las
vibraciones de las molculas vecinas.
Una molcula en estado de excitacin electrnica, S1, puede adquirir un estado de menor
energa por diferentes mecanismos. Puede por ejemplo sufrir un 'decaimiento no radiativo'
en el cual la mayor parte de la energa de excitacin es disipada como calor (vibraciones)
hacia el disolvente. Las molculas orgnicas excitadas tambin pueden relajarse mediante
conversin a un estado triplete entregando energa a otro orbital molecular para obtener al
final dos orbitales con energas intermedias, finalmente alguno de estos orbitales se relaja
emitiendo un cuanto de luz, porfosforescencia o mediante un segundo paso no radiativo de
decaimiento.

Rendimiento cuntico[editar]
El rendimiento cuntico de un proceso de fluorescencia es una manera de interpretar
la eficacia del mecanismo.
Se define como la proporcin entre el nmero de fotones emitidos y el de fotones
absorbidos.

El mximo rendimiento cuntico de fluorescencia es por lo tanto 1 (100%); esto significa

que cada fotn absorbido resulta en un fotn emitido. Sin embargo compuestos con
rendimientos cunticos de 0,10 se consideran an bastante fluorescentes.
Otra forma de definir el rendimiento cuntico de un mecanismo de fluorescencia es
mediante las tasas a las cuales decae el estado de excitacin:

donde
es la tasa de emisin espontnea de radiacin y
tasas de decaimiento.

es la suma de todas las

Otras tasas de decaimiento del estado de excitacin se deben a mecanismos diferentes a

la emisin de fotones y con frecuencia se llaman, por lo tanto, tasas no-radiativas.
Entre estas ltimas podemos incluir: desactivacin por colisin dinmica, interaccin de
campo cercano dipolo-dipolo (o transferencia de energa de resonancia), conversin
interna y paso de intersistema. Por lo tanto, si la tasa de decaimiento de cualquier va
cambia, esto afecta tanto al tiempo de vida del estado excitado, como al rendimiento
cuntico de la fluorescencia.
El rendimiento cuntico de fluorescencia se mide comparndolo con un patrn; la sal
sulfato de quinina disuelta en cido sulfrico es un patrn comn para la medicin de
fluorescencia.

Tiempo de vida[editar]
El tiempo de vida de la fluorescencia depende bsicamente del tiempo promedio que
permanece la molcula en su estado de excitacin antes de emitir un fotn.
La fluorescencia tpicamente sigue una cintica de primer orden:

donde

es la concentracin de molculas en estado de excitacin en el tiempo

,
es la concentracin inicial y
vida de la fluorescencia.

es la tasa de decaimiento o el inverso del tiempo de

Este es un ejemplo de decaimiento exponencial. Varios procesos radiativos y no radiativos

pueden despoblar el estado excitado. En ese caso, la tasa de decaimiento total es la suma
de todas las tasas:

donde
y

es la tasa de decaimiento global,

la tasa de decaimiento no radiativo.

es la tasa de decaimiento radiativo

La ecuacin es muy similar a una reaccin qumica de primer orden en la cual la tasa
constante de primer orden es la suma de todas las tasas (un modelo cintico paralelo). Si
la tasa de emisin espontnea, o cualquiera de las otras tasas, son rpidas el tiempo de
vida es corto.
Para compuestos fluorescentes que emitan fotones con energas desde el UV hasta el
infrarrojo cercano, los tiempos tpicos de decaimiento del estado excitado se encuentran
entre 0.5 a 20 nanosegundos. El tiempo de vida de un fluorforo es un parmetro
importante para las aplicaciones prcticas de la fluorescencia tales como la transferencia
de energa de resonancia.

Reglas[editar]
Existen algunas reglas para predecir los comportamientos de la fluorescencia. La Regla de
Kasha, por ejemplo, dicta que el rendimiento cuntico de luminiscencia es independiente
de la longitud de onda de la radiacin.
Esto no es siempre cierto y se contradice a menudo en muchas molculas simples. Una
declaracin un tanto ms confiable, aunque an con excepciones, podra ser que el
espectro de fluorescencia muestra muy poca dependencia con la longitud de onda de la
radiacin.
El diagrama de Jablonski describe la mayor parte del mecanismo de relajacin para las
molculas en estado excitado.

Aplicaciones[editar]
Existen muchos compuestos naturales y sintticos que exhiben fluorescencia, y tienen un
sinnmero de aplicaciones prcticas, desde la simple decoracin fluorescente hasta
aplicaciones en qumica analtica tales como FPIA. En la naturaleza hay mltiples ejemplos
de organismos que utilizan la fluorescencia y en especial la quimioluminiscencia para
atraer alimento o pareja, o bien para espantar a los depredadores.

Iluminacin[editar]

Pintura y plstico fluorescentes iluminados por luz Ultravioleta. (artista: Beo Beyond)

El comn tubo fluorescente depende de la fluorescencia. Dentro del tubo de vidrio hay un
vaco parcial y una pequea cantidad de mercurio. Una descarga elctrica en el tubo
causa que los tomos de mercurio emitan luz. La luz emitida se encuentra en el
rango ultravioleta (UV), y es por lo tanto invisible para nuestros ojos; pero el tubo se
encuentra revestido con una capa de un material fluorescente llamado fsforo, el cual
absorbe la luz ultravioleta y la reemite en el espectro visible. La iluminacin fluorescente es
energticamente mucho ms eficiente que la tecnologa incandescente, pero
el espectro producido puede hacer que ciertos colores no parezcan naturales, esto es as
porque el espectro de emisin no es continuo, sino que se encuentra formado por un
limitado nmero de longitudes de onda (lneas de emisin).
A mediados de los aos 1990, ya era tecnologa comn el LED de luz blanca, este tipo de
LED funciona a travs de un proceso similar. Tpicamente, en estos dispositivos el
semiconductor emisor produce luz en la parte azul del espectro, la cual choca con un
compuesto fluorescente depositado en el chip; y este fluorescente emite en la regin verde
y roja del espectro. La combinacin de la luz azul que pasa a travs del fluorescente y la
luz emitida por el mismo produce una luz casi blanca.
La Lmpara fluorescente compacta (CFL) funciona de la misma forma que cualquier tubo
fluorescente tpica y con ventajas. Es utilizada para reemplazar lmparas incandescentes
en muchas aplicaciones. Producen un cuarto del calor por lumen emitido que los bombillos
incandescentes y duran hasta cinco veces ms. Estas lmparas contienen mercurio y
deben ser manejadas y dispuestas con cuidado. Las desventajas de que estas lmparas
tengan un balastro es que no encajan adecuadamente en todos los aparatos de luz. Todas
las lmparas fluorescentes tienen un retraso significativo al momento de ser encendidas
comparadas con las lmparas incandescentes, una desventaja en algunas aplicaciones.
Adicionalmente, la tecnologa que les permite ser usadas tambin reduce
significativamente su vida til y su fiabilidad en aplicaciones de luz crepuscular, por
ejemplo al utilizarlas con los famosos atenuadores odimmers.

Qumica analtica[editar]
La fluorescencia puede ser detectada con un monocromador para encontrar emisiones
tpicas de compuestos presentes en una cromatografa lquida de alta eficacia. Adems,
permite visualizar las manchas producidas por unaTLC si los compuestos o los reactivos
de reveladores son fluorescentes.
La fluorescencia es ms efectiva cuando hay una gran proporcin de tomos en los niveles
bajos de energa en unadistribucin de Boltzmann. Existe entonces una mayor
probabilidad que los tomos con energa baja sean excitados y liberen a su vez fotones,
permitiendo as un anlisis ms eficiente.
Las huellas dactilares pueden visualizarse con compuestos fluorescentes como
la ninhidrina.
Vanse tambin: Fluormetro y Espectrofluorimetra.

Bioqumica y medicina[editar]
Las biomolculas pueden marcarse con un grupo qumico fluorescente (fluorocromo)
mediante una reaccin qumica simple, lo cual permite una deteccin sensible y
cuantitativa de la molcula. Algunos ejemplos:

La microscopa de fluorescencia de tejidos, clulas o estructuras subcelulares se

consigue marcando el anticuerpo con un fluorocromo y permitiendo que aqul
encuentre su antgeno correspondiente presente en la muestra. Al marcar varios
anticuerpos con diferentes fluorocromos se puede lograr la visualizacin de mltiples
objetivos dentro de una misma imagen.

Secuenciacin automtica de ADN por el mtodo de terminacin de la cadena:

cada uno de los cuatro ddNTP se encuentra marcado con un fluorocromo especfico,
de tal forma que se generan cadenas de diferente longitud que al ser sometidas a una
fuente de UV se puede determinar la base nitrogenada terminal de cada cadena
debido a la longitud de onda emitida caracterstica de cada fluorocromo.

Electroforesis en gel de agarosa teido con bromuro de etidio. El bromuro de etidio se intercala en el
ADN y fluoresce naranja cuando se expone a luz UV.

Deteccin de ADN: el compuesto bromuro de etidio, libre de cambiar su

conformacin en disolucin, tiene poca fluorescencia. La fluorescencia del bromuro de
etidio se aumenta enormemente cuando se une al ADN, de tal forma que este
compuesto es muy til para visualizar la localizacin de fragmentos de ADN en el
mtodo de electroforesis en geles de agarosa. El bromuro de etidio puede ser txico,
por tanto una alternativa ms segura es teir con SYBR Green.

Microarreglos

Inmunologa: los sitios de unin de un anticuerpo a un espcimen microscpico por

ejemplo, pueden ser vistos, e incluso cuantificados, empleando la fluorescencia si se le
ha unido previamente un grupo qumico fluorescente al anticuerpo especfico (IFI).

La fluorescencia ha sido empleada para el estudio de la estructura y conformacin

del ADN, as mismo como de protenas, con tcnicas como latransferencia de energa
de resonancia, la cual mide distancias a nivel de angstroms. Lo anterior es
especialmente importante en complejos de biomolculas mltiples.

Es utilizada en (Citometra) de flujo para identificar diferentes receptores en las

clulas estudiadas, marcando estas clulas con anticuerpos especficos conjugados a
un fluorescente.

La Protena Verde Fluorescente (GFP), de la medusa Aequorea victoria, se ha

convertido en una herramienta de investigacin muy importante. GFP y otras protenas

relacionadas son usadas como reporteros de un sin nmero de eventos biolgicos

incluyendo aquellos de localizacin subcelular. Los niveles de expresin gnica son
medidos en algunas ocasiones uniendo el gen de produccin de GFP con el gen de
inters.
Tambin, diversas molculas biolgicas tienen fluorescencia intrnseca y por tanto, pueden
ser empleadas sin necesidad de unirlas a una etiqueta qumica. Algunas veces, esta
fluorescencia intrnseca cambia cuando la molcula se encuentra en un ambiente
especfico, de tal forma que la distribucin o el ligamiento de la molcula pueden ser
medidos. La bilirrubina, por ejemplo, es altamente fluorescente cuando se une a la
albmina srica en un sitio especfico. La protoporfirina zinc, la cual se encuentra en las
clulas sanguneas cuando la produccin del grupo hemo es inhibido por la existencia de
plomo o la ausencia de hierro en la sangre, tiene una fuerte fluorescencia y puede ser, por
tanto, empleada para detectar estos problemas.
El nmero de aplicaciones de la fluorescencia ha ido creciendo en el campo de la
biomedicina, la biologa y en otras ciencias relacionadas. Los mtodos de anlisis en estos
campos tambin han ido aumentando: FPIA, FLIM,
FLI, FLIP,CALI, FLIE, FRET, FRAP, FCS, PFRAP, smFRET, FRIPS, SHRIMP o TIRF.
Muchas de estas tcnicas se basan en los microscopios de fluorescencia. Los
microscopios utilizan fuentes de luz de alta intensidad, usualmente lmparas de mercurio o
xenn, LEDs, o lseres, para generar fluorescencia en las muestras bajo observacin.
Posteriormente, los filtros pticos separan la luz excitada de la fluorescencia emitida, para
permitir que sea detectada a simple vista, empleando una cmara o utilizando algn otro
detector de luz como espectrgrafos, etc. Muchas investigaciones se estn llevando a
cabo para mejorar ya sea el desempeo de estos microscopios, las sondas fluorescentes
usadas, y las aplicaciones de las mismas. De inters particular son los microscopios
confocales, los cuales utilizan un poro para lograr secciones pticas, proporcionando una
vista cuantitativa y en 3D de la muestra.

Gemologa, mineraloga, geologa y ciencias forenses [editar]

Las gemas, los minerales, las fibras y muchos otros materiales que pueden ser
encontrados en medicina forense, pueden tener una fluorescencia distintiva o pueden
fluorecer diferente bajo luz ultravioleta de onda corta, de onda larga, o rayos X: Muchos
tipos de calcita y mbar presentarn fluorescencia bajo luz ultravioleta de onda corta. Los
rubes, las esmeraldas y el diamante Hope exhiben fluorescencia roja bajo luz UV de onda
corta; los diamantes tambin emiten luz bajo rayos X.
El petrleo emite fluorescencia en un rango de colores, desde el marrn mate para aceites
pesados y alquitrn hasta el amarillento y blanco azulado para los aceites muy livianos y
condensados. Este fenmeno es usado en perforaciones hechas para la exploracin de
petrleo permitiendo identificar pequeas cantidades de crudo en las perforaciones y en
los poros de las muestras.

Lquidos orgnicos[editar]
Los lquidos orgnicos, como las mezclas de antraceno en benceno o tolueno, emiten
fluorescencia bajo la accin de radiacin UV o rayos gamma. Los tiempos de decaimiento
de esta fluorescencia se encuentran en el orden de los nanosegundos ya que la duracin
de la luz depende del tiempo de vida de los estados excitados del material fluorescente, en
este caso antraceno.

Vase tambin[editar]

Lmpara fluorescente

Luz negra

Espectroscopa fluorescente

Fosforescencia

Fluorescencia de rayos X

Enlaces externos[editar]

Introduccin a la fluorescencia (en ingls).

The database of fluorescent dyes.

Principios de base de la espectroscopia de fluorescencia.

Fluorescence Applications.

http://jobinyvon.com/SiteResources/Data/Templates/1divisional.asp?
DocID=514&v1ID=&lang=

Interactive Fluorescence Dye and Filter Database.

ISS Fluorescence Lifetime Standards Tables.

ISS Fluorescence Probes Data Tables.

The Fluorescence Foundation.

Fluorophores.org The database of fluorescent dyes.

Jablonski diagram.

Fluorescence on Scienceworld.

Basic Concepts in Fluorescence.

Scorpion detection using UV LEDs.

Immunofluorescence Protocol.

An example of use of fluorescence in generating cellular images .

Difference between flourescence and glow in the dark.

More examples how the fluorescence can be used.

Fluorescence in digital Photography.

The Influence of Fluorescence in the World of Art.

Fluorescence control by Photonic Crystals - ICMM.

The Fluorescent Mineral Society.

Fluorescence in Practice.

Laboratory for Fluorescence Dynamics.

"A nano-history of fluorescence", lecture by David Jameson .

Exitation and emmision spectra of various fluorescent dyes .

Manawatu Microscopy.

Tcnica para la observacin de la fluorescencia de organismos marinos (en ingls).

Historia e investigacin cientfica del significado biolgico de la bio-fluorescencia

marina (en ingls y alemn).

Referencias[editar]
1.

Volver arriba Principles Of Instrumental Analysis F. James Holler, Douglas A.

Skoog & Stanley R. Crouch 2006

2.

Saltar a:a b Acua, A. Ulises; Amat-Guerri, Francisco; Morcillo, Purificacin; Liras,

Marta; Rodrguez, Benjamn (2009). "Structure and Formation of the Fluorescent
Compound of Lignum nephriticum". Organic Letters 11 (14): 30203023.
doi:10.1021/ol901022g. PMID 19586062. Available on-line at: Chinese Academy of Science
Available on-line at: Chinese Academy of Science.

3.

Volver arriba Safford, William Edwin (1916). Lignum nephriticum. Annual report
of the Board of Regents of the Smithsonian Institution. Washington: Government Printing
Office. p. 271298.

4.

Volver arriba Valeur, B.; Berberan-Santos, M. R. N. (2011). "A Brief History of

Fluorescence and Phosphorescence before the Emergence of Quantum Theory". Journal of
Chemical Education 88 (6): 731

5.

Volver arriba The Fluorescence of Lignum nephriticum: A Flash Back to the Past
and a Simple Demonstration of Natural Substance Fluorescence.

6.

Volver arriba Edward Daniel Clarke (1819) "Account of a newly discovered variety
of green fluor spar, of very uncommon beauty, and with remarkable properties of colour and
phosphorescence," The Annals of Philosophy, 14 : 34 - 36; from page 35: "The finer crystals
are perfectly transparent. Their colour by transmitted light is an intense emerald green; but
by reflected light, the colour is a deep sapphire blue; ".

7.

Volver arriba Hay merely repeats Clarke's observation regarding the colors of the
specimen of fluorite which he (Clarke) had examined: Hay, Trait de Minralogie, 2nd ed.
(Paris, France: Bachelier and Huzard, 1822), vol. 1, page 512. Fluorite is called "chaux
fluate" by Hay. From page 512: "... violette par rflection, et verdtre par transparence au
Derbyshire." ([the color of fluorite is] violet by reflection, and greenish by transmission in
[specimens from] Derbyshire.)

8.

Volver arriba David Brewster (1834) "On the colours of natural

bodies," Transactions of the Royal Society of Edinburgh 12 : 538-545; on page 542,
Brewster mentions that when white light passes through an alcoholic solution of chlorophyll,
red light is reflected from it.

9.

Volver arriba Vase:

* Herschel, John (1845a) "On a case of superficial colour presented by a homogeneous
liquid internally colourless,"Philosophical Transactions of the Royal Society of London, 135 :
143-145; see page 145.
* Herschel, John (1845b) "On the epiplic dispersion of light, being a supplement to a paper
entitled, "On a case of superficial colour presented by a homogeneous liquid internally
colourless" ," Philosophical Transactions of the Royal Society of London, 135 : 147-153.

10.

Volver arriba "I am almost inclined to coin a word, and call the
appearance fluorescence, from fluor-spar [i.e., fluorite], as the analogous
term opalescence is derived from the name of a mineral." Stokes, G. G. (1852). On the
Change of Refrangibility of Light. Philosophical Transactions of the Royal Society of
London 142: 463562. doi:10.1098/rstl.1852.0022. From page 479, footnote: "I am almost
inclined to coin a word, and call the appearance fluorescence, from fluor-spar, as the
analogous term opalescence is derived from the name of a mineral."

11.

Volver arriba Stokes (1852), pages 472-473. In a footnote on page 473, Stokes
acknowledges that in 1843, Edmond Becquerel had observed that quinine acid sulfate
strongly absorbs ultraviolet radiation (i.e., solar radiation beyond Fraunhofer's H band in the
solar spectrum). See: Edmond Becquerel (1843) "Des effets produits sur les corps par les
rayons solaires" (On the effects produced on substances by solar rays), Comptes
rendus, 17 : 882-884; on page 883, Becquerel cites quinine acid sulfate ("sulfate acide de
quinine") as strongly absorbing ultraviolet light.